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Klebsiella pneumoniae is an important pathogen associated with hospital-acquired pneumonia (HAP). Bacterial pneumonia is characterized by a harmful inflammatory response with a massive influx of neutrophils, production of cytokines and chemokines, and consequent tissue damage and dysfunction. Targeted therapies to block neutrophil migration to avoid tissue damage while keeping the antimicrobial properties of tissue remains a challenge in the field. Here we tested the effect of the anti-inflammatory properties of the chemokine fragment CXCL9(74-103) in pneumonia induced by Klebsiella pneumoniae in mice. Mice were infected by intratracheal injection of Klebsiella pneumoniae and 6 h after infection were treated systemically with CXCL9(74-103). The recruitment of leukocytes, levels of cytokines and chemokines, colony-forming units (CFU), and lung function were evaluated. The treatment with CXCL9(74-103) decreased neutrophil migration to the airways and the production of the cytokine interleukin-1β (IL-1β) without affecting bacterial control. In addition, the therapeutic treatment improved lung function in infected mice. Our results indicated that the treatment with CXCL9(74-103) reduced inflammation and improved lung function in Klebsiella pneumoniae-induced pneumonia. ispartof: INTERNATIONAL JOURNAL OF MOLECULAR SCIENCES vol:23 issue:11 ispartof: location:Switzerland status: published

Bradykinin (BK) is an endogenous peptide involved in vascular permeability and inflammation. It has opposite effects (inducing hyperalgesia or antinociception) when administered directly in the central nervous system. The aim of this study was to evaluate whether BK may also present this dual effect when injected peripherally in a PGEMale Swiss and C57BL/6 knockout mice for BBradykinin (20, 40 and 80 ng/paw) produced dose-dependent peripheral antinociception against PGEThe present study is the first to demonstrate BK-induced antinociception in peripheral tissues against PGE

Bradykinin (BK-(1-9)) is an endogenous nonapeptide involved in multiple physiological and pathological processes. Peptide fragments of bradykinin are believed to be biologically inactive. We have now tested the two major peptide fragments of bradykinin in human and animals.BK peptides were quantified by MS in male rats. NO release was quantified from human, mouse and rat cells loaded with DAF-FM. Rat aortic rings were used to measure vascular reactivity. Changes in BP and HR were measured in conscious male rats. To evaluate pro-inflammatory effects both vascular permeability and nociception were measured in adult mice.BK-(1-7) and BK-(1-5) are produced in vivo from BK-(1-9). Both peptides induced NO production in all cell types tested. However, unlike BK-(1-9), NO production elicited by BK-(1-7) or BK-(1-5) was not inhibited by BBK-(1-7) and BK-(1-5) are endogenous peptides present in plasma. BK-related peptide fragments show biological activity, not mediated by B

In the continuing search for novel antibiotics, antimicrobial peptides are promising molecules, due to different mechanisms of action compared to classic antibiotics and to their selectivity for interaction with microorganism cells rather than with mammalian cells. Previously, our research group has isolated the antimicrobial peptide LyeTx I from the venom of the spider Lycosa erythrognatha. Here, we proposed to synthesize three novel shortened derivatives from LyeTx I (LyeTx I mn; LyeTx I mnΔK; LyeTx I mnΔKAc) and to evaluate their toxicity and biological activity as potential antimicrobial agents. Peptides were synthetized by Fmoc strategy and circular dichroism analysis was performed, showing that the three novel shortened derivatives may present membranolytic activity, like the original LyeTx I, once they folded as an alpha helix in 2.2.2-trifluorethanol and sodium dodecyl sulfate. In vitro assays revealed that the shortened derivative LyeTx I mnΔK presents the best score between antimicrobial (↓ MIC) and hemolytic (↑ EC(50)) activities among the synthetized shortened derivatives, and LUHMES cell-based NeuriTox test showed that it is less neurotoxic than the original LyeTx I (EC(50) [LyeTx I mnΔK] ⋙ EC(50) [LyeTx I]). In vivo data, obtained in a mouse model of septic arthritis induced by Staphylococcus aureus, showed that LyeTx I mnΔK is able to reduce infection, as demonstrated by bacterial recovery assay (∼10-fold reduction) and scintigraphic imaging (less technetium-99m labeled-Ceftizoxime uptake by infectious site). Infection reduction led to inflammatory process and pain decreases, as shown by immune cells recruitment reduction and threshold nociception increment, when compared to positive control group. Therefore, among the three shortened peptide derivatives, LyeTx I mnΔK is the best candidate as antimicrobial agent, due to its smaller amino acid sequence and toxicity, and its greater biological activity.

Rheumatoid arthritis(RA) is a debilitating chronic inflammatory disease. Suppressors of Cytokine Signaling(SOCS) proteins regulate homeostasis and pathogenesis in several diseases. The intersection between RA pathophysiology and SOCS2 is unclear. Herein, we investigated the roles of SOCS2 during the development of an experimental antigen-induced arthritis(AIA). In wild type mice, joint SOCS2 expression was reduced during AIA development. At the peak of inflammation, SOCS2-/- mice presented with reduced numbers of infiltrated cells in their joints. At the late phase of AIA, however, exhibited increased adhesion/infiltration of neutrophils, macrophages, CD4+-T cells, CD4+CD8+-T cells, and CD4-CD8--T cells associated with elevated IL-17 and IFN-γ levels, joint damage, proteoglycan loss, and nociception. SOCS2 deficiency resulted in lower numbers of apoptotic neutrophils and reduced efferocytosis. The present study demonstrated the vital role of SOCS2 during the development and resolution of an experimental RA model. Hence, this protein may be a novel therapeutic target for this disorder.

Staphylococcus aureus is the main cause of septic arthritis in humans, a disease associated with high morbidity and mortality. Inflammation triggered in response to infection is fundamental to control bacterial growth but may cause permanent tissue damage. Here, we evaluated the role of Lipoxin A

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Introdução: O canabidiol (CBD) é o segundo componente farmacologicamente ativo de maior quantidade presente nas variedades da planta Cannabis sp. Diferentemente do THC, o principal componente psicotomimético responsável pelos sinais comumente observados em pessoas que fazem o uso recreativo da Canabis, o CBD não apresenta efeitos psicotomiméticos e recentemente vem recebendo grande interesse por parte da comunidade científica devido ao seu potencial como um agente farmacológico no tratamento da ansiedade e de distúrbios do sono. Além disso, sabe-se que o canabidiol apresenta um grande potencial anti-inflamatório, podendo ser utilizado para o tratamento de algumas dores de origem inflamatória. Nesse contexto, sabe-se do potencial do canabidiol como um agente analgésico, mas pouco se sabe sobre sua eficiência no tratamento da dor neuropática, uma dor de difícil tratamento cujos impactos provocam grandes prejuízos para a qualidade de vida de pacientes que sofrem dessa condição. Além disso, os tratamentos disponíveis para a dor neuropática são limitados e nem sempre trazem ao paciente um alívio completo da sensação dolorosa. Por esse motivo, novas abordagens farmacológicas são necessárias para melhorar o tratamento a esses pacientes. Objetivo: O presente trabalho tem como objetivo avaliar a hipótese do mecanismo analgésico do canabidiol administrado sistemicamente, e de forma crônica, para o tratamento da dor neuropática e determinar quais são os mecanismos endógenos envolvidos com essa analgesia. Métodos: A dor neuropática foi induzida pela constrição do nervo ciático e o limiar nociceptivo foi medido através do teste de compressão da pata em camundongos. O canabidiol foi administrado pela via intraperitoneal durante 10 dias consecutivos, a partir do 11º dia após a cirurgia, e todas as demais drogas foram administradas no 21º dia após a cirurgia de constrição do nervo ciático pela via intraplantar, com exceção das drogas utilizadas no teste de avaliação da coordenação motora que também foram administradas por via intraperitoneal. Para a avaliação dos níveis proteicos de canais para potássio sensíveis ao ATP na pata dos camundongos, foi utilizada a técnica de western blot. Resultados: A cirurgia de constrição do nervo ciático foi eficiente para induzir a neuropatia e o CBD provocou antinocicepção de maneira dose-dependente, apresentando um efeito máximo na maior dose de 20 mg/Kg. Tal dose não é capaz de causar sedação ou ataxia, uma vez que os animais tiveram o mesmo tempo de permanência na haste giratória do teste de RotaRod que animais injetados com salina. Todos os experimentos farmacológicos subsequentes foram realizados no 21º dia após a cirurgia (ao final de 10 dias consecutivos de tratamento diário com CBD na maior dose de 20 mg/Kg). O NAN-190 e o SB366791, antagonistas seletivos dos receptores 5-HT1A e TRPV1, respectivamente, reverteram o efeito antinociceptivo induzido pelo CBD. De forma semelhante, o AM251 e o AM630, antagonistas seletivos dos receptores CB1 e CB2 canabinoides, respectivamente, também reverteram a antinocicepção provocada por 20 mg/Kg de CBD. Paralelamente, a inibição da recaptação de endocanabinoides e das hidrólises de anandamida e 2-AG usando o VDM11, MAFP e o JZL184, respectivamente, foi capaz de potencializar a antinocicepção produzida por uma dose intermediária de 2 mg/Kg de CBD. Os antagonistas seletivos de receptores µ e δ opioides, CTOP e naltrindole, respectivamente, reverteram a antinocicepção causada pelo CBD, porém o Nor-BNI, antagonista seletivo de receptores κ opioides, não provocou alteração na antinocicepção induzida pelo CBD. A inibição da hidrólise de peptídeos opioides endógenos com a bestatina também foi capaz de potencializar o efeito antinociceptivo de uma dose intermediária de CBD. Partindo para a avaliação da via intracelular no efeito antinociceptivo do CBD, a inibição da PI3Kγ com o AS605240 reverteu de forma dose-dependente a antinocicepção induzida pelo CBD. Em seguida, a inibição não seletiva das enzimas óxido nítrico sintase com o L-NOarg, bem como a inibição seletiva da enzima NOSn, usando o L-NPA, reverteu de forma dose dependente a antinocicepção induzida pelo CBD. Porém, a inibição seletiva das enzimas NOSi e NOSe, usando o L-NIL e o L-NIO, respectivamente, não alterou a antinocicepção induzida pelo CBD. De forma interessante, a inibição da produção de GMPc usando o ODQ, inibidor seletivo de guanilato ciclase solúvel, não alterou a antinocicepção mediada pelo CBD, porém o bloqueio seletivo de canais para K+ sensíveis ao ATP, usando a glibenclamida, reverteu de forma dose dependente a antinocicepção induzida pelo CBD. Conclusão: O canabidiol apresenta um efeito antinociceptivo frente a dor neuropática quando administrado sistemicamente e este efeito é mediado pela ativação de receptores canabinoides, opioides, pela via PI3Kγ/NOS/NO/KATP nos tecidos periféricos. Apoio financeiro: CNPq e CAPES. Introduction: Cannabidiol (CBD) is the second most abundant pharmacologically active component present in the Cannabis sp. Unlike THC, the main psychoactive component responsible for the signs commonly observed in people who make recreational use of Cannabis, CBD has no psychotomimetic effects and has recently received significant interest from the scientific community due to its potential as a pharmacological agent in the treatment of anxiety and sleep disorders. In addition, it is known that cannabidiol has n excellent anti-inflammatory potential and can be used to treat some types of inflammatory pain. In this context, the potential of cannabidiol as an analgesic agent is known, but little is known about its efficiency in the treatment of neuropathic pain, a difficult-to-treat pain which greatly impacts the quality of life of patients suffering from this condition. In addition, the treatments available for neuropathic pain are limited and do not always bring complete relief from the painful sensation. For this reason, new pharmacological approaches are needed to improve treatment for these patients. Aim: The present study aims to evaluate the analgesic mechanism of cannabidiol administered systemically for the acute treatment of neuropathic pain and determine the endogenous mechanisms involved with this analgesia. Methods: Neuropathic pain was induced by sciatic nerve constriction surgery, and the nociceptive threshold was measured using the paw compression test in mice. Cannabidiol was administered intraperitoneally, and all other drugs were administered intraplantar, apart from drugs used in the motor coordination assessment test. Results: Sciatic nerve constriction surgery efficiently induced neuropathy, and CBD caused dose-dependent antinociception and had a maximum effect at the highest dose of 20 mg/kg. Such a dose is not capable of causing sedation or ataxia since the animals spent similar times on the RotaRod test as animals injected with saline. NAN-190 and SB366791, selective antagonists of 5-HT1A and TRPV1 receptors, respectively, reversed the antinociceptive effect induced by CBD. Similarly, AM251 and AM630, selective cannabinoid CB1 and CB2 receptor antagonists, respectively, also reversed antinociception caused by 20 mg/kg of CBD. Parallel to that, the inhibition of hydrolysis and reuptake of anandamide and 2-AG using MAFP, VDM11, and JZL184, respectively, potentiated the antinociception produced by an intermediate dose of 2 mg/kg of CBD. The selective µ and δ opioid receptor antagonists, CTOP and naltrindole, respectively, reversed the antinociception caused by CBD. However, Nor-BNI, a selective κ opioid receptor antagonist, did not cause alteration in CBD-induced antinociception. Hydrolysis inhibition of endogenous opioid peptides with bestatin also potentiates the antinociceptive effect of an intermediate dose of CBD. After assessing the intracellular pathway in the antinociceptive effect of CBD, the inhibition of PI3Kγ with AS605240 reversed the CBD-induced antinociception in a dose-dependent manner. The non-selective inhibition of nitric oxide synthase enzymes with L-NOarg, as well as the selective inhibition of nNOS enzymes using L-NPA, reversed the dose-dependent antinociception induced by CBD. However, the selective inhibition of iNOS and eNOS, using L-NIL and L-NIO, respectively, did not alter CBD-induced antinociception. Interestingly, the inhibition of cGMP production using ODQ, a selective soluble guanylate cyclase inhibitor, did not alter CBD-mediated antinociception, but selective blocking of ATP-sensitive K+ channels, using glibenclamide, dose-dependently reversed CBD-induced antinociception. Conclusion: Cannabidiol has an antinociceptive effect when administered systemically and this effect is mediated by the activation of cannabinoid and opioid receptors and via the PI3Kγ/NOS/NO/KATP pathway in peripheral tissues. Financial support: CNPq and CAPES.

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior INCT – Instituto nacional de ciência e tecnologia (Antigo Instituto do Milênio) FAPESP - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo A malária é uma doença causada pelo Plasmodium spp e afeta milhões de pessoas todos os anos. A resposta imune exacerbada do hospedeiro desencadeia grande produção de citocinas inflamatórias, como IL-1β e TNFα, contribuindo para o aparecimento dos sintomas da doença. Durante a malária murina, embora haja ativação de caspase-11, a via não canônica de ativação do inflamassoma parece não contribuir para a patogênese da doença, enquanto a caspase-1 desempenha papel importante na produção de IL-1β. Nossos resultados mostram que há ativação de caspase-8 em monócitos do baço de camundongos infectados e a caspase-8 participa da produção de IL-1β e TNFα. Além disso, camundongos Ripk3/Casp8-/- são parcialmente resistentes ao modelo de infecção e desafio com LPS e à malária cerebral experimental, enquanto os camundongos Ripk3/Casp8/1/11-/- e Ripk3/Casp8/Gsdmd-/- são altamente em ambos os modelos. Esses resultados demonstram um papel complementar da caspase-8, porém independente à função do inflamassoma, para mediar a patogênese da malária. Além disso, pacientes infectados por P. falciparum ou P. vivax possuem GSDMD ativa e ativação de caspase-4 e -8 em monócitos. Assim, esse trabalho sugere a importância da caspase-8 durante a malária e seu potencial como possível alvo de intervenção terapêutica. Malaria is a disease caused by Plasmodium spp. parasites which affects millions of people every year. Exacerbated immune response by the host triggers a large production of inflammatory cytokines such as IL-1β and TNFα, contributing to the symptoms of the disease. During mouse malaria, although there is caspase-11 activation, the non-canonical pathway of inflammasome does not seem to contribute to the pathogenesis of the disease, whereas caspase-1 plays an important role on IL-1β production. Caspase-8 is cleaved in splenic monocytes from infected mice and caspase-8 participates in IL-1β and TNFα production. Moreover, Ripk3/Casp8-/- mice are partially resistant to infection followed by LPS challenge and experimental cerebral malaria and Ripk3/Casp8/1/11-/- e Ripk3/Casp8/Gsdmd-/- mice highly resistant in both models. These results demonstrate a complementary, but independent, role of caspase-8 and inflammasomes in mediating malaria pathogenesis. Besides, P. vivax and P. falciparum infected patients display active GSDMD, caspase-4 and caspase-8 in monocytes. In conclusion, the present work suggests the importance of caspase-8 during malaria and its potential role as a possible therapeutical target.

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Acetaminofeno (APAP) é um anti-inflamatório não esteroidal seguro em doses terapêuticas, no entanto, a sobredose desse fármaco leva ao desenvolvimento de lesão hepática aguda devido a morte de hepatócitos por necrose oncótica. APAP é um dos principais fármacos que levam a insuficiência hepática aguda em países desenvolvidos, contribuindo para milhares de casos clínicos que requerem transplante de fígado. A morte dos hepatócitos por necrose, gera um estímulo inflamatório estéril e neutrófilos são rapidamente recrutados para o local. Devido ao seu potencial de causar dano tecidual colateral, o neutrófilo é classicamente visto como uma célula instável que pode amplificar a lesão hepática induzida por APAP. No entanto, nos últimos anos, diversos trabalhos têm demonstrado que neutrófilos podem participar da resolução da inflamação. Objetivo: Avaliar a dinâmica e alterações transcricionais em neutrófilos no fígado, medula óssea e sangue durante as fases de lesão e reparo do tecido hepático após insulto por APAP, bem como o comportamento desses leucócitos no local da lesão, correlacionando esses achados com o potencial papel dos neutrófilos na resolução da inflamação. Delineamento experimental: A lesão hepática aguda foi induzida por sobredose de APAP (600mg/Kg), por via oral, em camundongos C57BL/6 fêmeas. Avaliamos alterações no perfil transcricional, sobrevivência, bem como a dinâmica do neutrófilo no tecido hepático, medula óssea e na circulação. Por microscopia confocal intravital, avaliamos a localização exata e o comportamento desses leucócitos na lesão. Resultados e conclusão: Nós demonstramos que neutrófilos permanecem viáveis por longos períodos após a lesão hepática, patrulham avidamente hepatócitos mortos e aumentam a expressão de genes pró-resolutivos, incluindo Tgf-β, Il1r2 e Fpr2. Ainda, demonstramos que a transferência adotiva de neutrófilos resolutivos, extraídos do fígado 72 horas após o desafio com APAP, para animais nos estágios iniciais da lesão (6 horas após APAP), reduziu de forma significativa a lesão hepática. Portanto, fornecemos novas evidências de que os neutrófilos podem ter participação ativa na resolução da inflamação e, consequentemente, no reparo tecidual. Acetaminophen (APAP) is a non-steroidal anti-inflammatory drug safe when used in therapeutical dosage. However, overdosage of this drug causes hepatocytes death by oncotic necrosis. APAP overdosage is the leading cause of acute liver failure in developed countries, contributing for millions of liver transplant cases. Hepatocytes death by necrosis culminates in the release of damage-associated molecular patterns into tissue, triggering inflammatory response and the consequent recruitment of neutrophils into the liver. Due its potential to cause collateral damage, neutrophil is classically perceived as an unstable cell, which are responsible to amplify APAP-induced liver injury. However, liver tissue repair is coincident with the maintenance of neutrophils at the inflammatory site during all stages of tissue repair. Objective: To evaluate neutrophil dynamics and transcriptional changes at liver, bone marrow and peripheral blood during all phases of APAP-induced liver injury and tissue repair, as well as to evaluate neutrophil behavior at necrotic sites, stressing out the potential role of neutrophils in resolution of inflammation and tissue repair. Experimental design: APAP-induced liver injury was performed by the administration of 600 mg/Kg of APAP, oral route, in female C57BL/6. We assessed neutrophil transcriptional changes, survival and its dynamics at necrotic liver, bone marrow and peripheral blood. Using intravital microscopy, we evaluated the neutrophil behavior within necrotic sites. Results and conclusion: We found that neutrophils remained viable during longer periods following liver damage, because they avidly patrolled necrotic areas and up-regulated proresolutive genes, including Tgfb, Il1r2, and Fpr2. Adoptive transference of resolutive neutrophils harvested from livers at 72 h after injury to mice at the initial phases of injury (6 h after APAP) significantly rescued organ injury. Thus, we provide novel insights on the role of neutrophils not only in the injury amplification, but also in the resolution phases of inflammation.

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior O transtorno por uso de álcool é uma doença crônica e progressiva, debilitante e multifatorial. É caracterizado pela busca compulsiva por etanol e perda de controle em relação ao seu consumo. O consumo de etanol na população mundial é enorme e tem sido relacionado com uma maior susceptibilidade a infecções pulmonares, embora os mecanismos associados não são conhecidos. Além disso, dados sobre a relação entre o consumo de etanol e infecções fúngicas são escassos. O objetivo desse trabalho foi estudar os mecanismos envolvidos na interação patógeno-hospedeiro durante infecção pulmonar por Aspergillus fumigatus em hospedeiro consumista crônico de etanol. Camundongos C57BL/6 foram tratados com uma solução de etanol (20% v/v) ou receberam apenas água (controles) por 12 semanas e depois infectados, via intranasal, com o fungo. O lavado broncoalveolar, sangue e pulmões foram coletados. A infecção por A. fumigatus em animais sem nenhum tratamento, induziu uma resposta inflamatória robusta, caracterizada por produção de TNF-α, IL-1β, CXCL1, CCL2 e IL-17 e pelo recrutamento de neutrófilos, macrófagos e linfócitos na fase inicial da infecção. Essa infecção tem caráter auto limitante, já que na sua fase tardia apresentou resolução espontânea, com a produção de IL-10 e TGF-β, redução do infiltrado inflamatório e aumento de apoptose e eferocitose. Após infecção por A. fumigatus, os camundongos consumistas de etanol apresentaram maior mortalidade associada à maior carga fúngica. O consumo de etanol causou falha na ativação, rolamento, adesão e migração de neutrófilos para o foco inflamatório. Os neutrófilos circulantes de animais que consumiram cronicamente etanol apresentaram menor expressão do receptor de quimiocinas CXCR2, o que explica a falha na migração dessa célula. Os neutrófilos de animais expostos cronicamente ao etanol também apresentam defeitos nas funções de fagocitose, produção de ROS e depuração fúngica. O consumo crônico de etanol causou diminuição do recrutamento de células e de citocinas e quimiocinas como TNF-α, IL-1β, CXCL1, CXCL2, CCL2, IL-17, IL-10 e TGF-β, importantes para coordenar a resposta inflamatória em fases mais tardias da infecção por A. fumigatus, o que culminou no aumento no tempo de resolução da resposta inflamatória. In vitro, neutrófilos expostos ao etanol apresentaram fenótipos semelhantes ao modelo in vivo, com menor quimiotaxia, menor capacidade fagocítica e menor internalização do receptor CXCR2. Além disso, resultados preliminares demonstraram maior expressão de pERK após estímulo com CXCL1 nos neutrófilos expostas ao etanol. O consumo de etanol foi também um fator crucial para a perturbação de populações bacterianas intestinais importantes, como o aumento do número de enterobactérias e diminuição da quantidade bactérias ácido lácticas. Tomados em conjunto, os resultados mostraram que consumo crônico e a exposição ao etanol altera a resposta inflamatória e é prejudicial a importantes funções dos neutrófilos, causando maior susceptibilidade à infecção por A. fumigatus.

O succinato é um ácido dicarboxílico intermediário do ciclo de Krebs que desempenha uma função importante no metabolismo energético celular. Além de suas funções metabólicas, o succinato também realiza diversas funções ao interagir com seu receptor de membrana denominado Sucnr1, o qual é expresso em diversos tipos celulares. No sistema imune, foi demostrado que o Sucnr1 é principalmente expresso em células dendríticas (DCs), sendo envolvido com a ativação e migração destas células. Tendo em vista que as DCs são primordiais para o desenvolvimento e manutenção do processo inflamatório na psoríase e, consequentemente em seu modelo experimental, postulamos que a expressão do Sucnr1 por DCs imaturas induz a ativação e migração destas para linfonodos drenantes (dLNs) onde induzem células produtoras de IL-17, as quais ativam queratinócitos e amplificam o processo inflamatório na pele provocando lesões e cronicidade da doença. Desta forma, propomos investigar o papel do Sucnr1 no contexto de psoríase, se o receptor contribui para severidade e de que forma atua na doença. Acreditamos que na pele psoriática a expressão do Sucnr1 por DCs induz a migração destas para dLNs onde induzem populações de células produtoras de IL- 17. Primeiro verificamos que o Sucnr1 é positivamente modulado no modelo experimental de psoríase, depois induzimos psoríase em camundongos C57BL/6 (WT) e nocauteados para Sucnr1 (SUCNR1-/-), nos quais observamos redução de aspectos clínicos, histológicos e inflamatórios na pele de animais SUCNR1-/-. Em seguida investigamos a expressão do Sucnr1 por DCs e demais leucócitos e verificamos que demais leucócitos apresentam mais expressão do receptor do que DCs. Avaliamos então a expressão do Sucnr1 por células de origem hematopoiética e células de origem não-hematopoiética e verificamos que células de origem não-hematopoiética apresentam elevada expressão do Sucnr1. Para avaliar se a expressão do Sucnr1 por células de origem não-hematopoiética ou de origem hematopoiética é biologicamente mais relevante na psoríase experimental, realizamos um ensaio quimera e constatamos que quando as células de origem não-hematopoiéticas expressam o receptor, a psoríase se desenvolve independente de os leucócitos expressarem ou não o Sucnr1. Observamos que tanto o Sucnr1 quanto o Sucnr1 são expressos por queratinócitos. Quando tratamos animais com um creme 3% de succinato, estes desenvolveram aumento na espessura da pele. Os queratinócitos, células residentes da epiderme, apresentam elevada expressão de Sucnr1 na pele psoriática e o receptor contribui para manutenção do processo inflamatório. Succinate is a dicarboxylic acid intermediary of Krebs cycle that plays an important role in cellular energetic metabolism. Besides its metabolic functions, succinato also performs different functions in binding with its membrane receptor called Sucnr1, which is expressed in different cell types. In the immune system, it has been demonstrated that Sucnr1 is mainly expressed by Dendritic Cells (DCs), it is involved with its activation and migration. As DCs are primordial to the development and maintenance of the inflammatory process in Psoriasis and therefore its experimental model, we postulate that Sucnr1 expression by immature DCs induces their activation and migration to draining lymph nodes (dLNs) where they induce producing IL-17 cells, which activate keratinocytes and amplified the skin inflammatory process causing lesions and the chronicity of the disease. We propose to investigate Sucnr1 role in Psoriasis context if the receptor contributes to the severity and which way it operates in the disease. We believe that in psoriatic skin Sucnr1 expression by DCs induces its migration to dLNs where they induce producing IL-17 populations. First, we verified that Sucnr1 is positively modulated in psoriasis experimental model. After we induced psoriasis in mice C57BL/6 (WT) and knockout to Sucnr1 (SUCNR1-/-), in which we observed reduction in clinical, histological and inflammatory aspects of the skin in SUCNR1-/- mice. We investigated Sucnr1 expression by DCs and other leucocytes in the skin and we saw that other leucocytes express more Sucnr1 than DCs. We then investigated Sucnr1 expression by cells of hematopoietic origin or nonhematopoietic origin and we observed that cells of nonhematopoietic origin express more Sucnr1. To evaluate if its expression by cells of nonhematopoietic or hematopoietic origin is biological more relevant in experimental psoriasis, we performed a chimera essay and observed that mice that had resident skin cells expressing the receptor developed psoriasis normally regardless of their leucocytes express or not Sucnr1. Observed that Sucnr1 and Sucnr1 are expressed by keratinocytes. When we treated animals with 3% succinate cream, they present increased thickness of their skin. Keratinocytes, skin resident cells, highly express Sucnr1 in psoriatic skin and the receptor contribute to the maintenance of the inflammatory process.

A artrite reumatoide (AR) é uma doença autoimune que tem como um dos principais sintomas a dor articular. Durante o processo inflamatório, nociceptores são ativados por mediadores nociceptivos, como por exemplo a prostaglandina E2 e via IL-1?. É conhecido o papel fundamental dos neutrófilos na liberação de estímulos nociceptivos, entretanto, não é conhecido o papel das neutrophil extracellular traps liberadas por esses neutrófilos em doenças autoimunes como a artrite, na gênese da dor articular. Nossos resultados demonstraram que animais com artrite induzida por antígeno (AIA) possuem um aumento de NETs relacionado com o aumento da expressão gênica de Pad4, enzima fundamental para a geração de NETs. A degradação dessas NETs através de DNase é capaz de reduzir parâmetros da doença, como o edema, hiperplasia da sinóvia, infiltrado celular, e a hipernocicepção, apesar de não haver alteração na migração dos neutrófilos para as articulações. A partir disso, nossos resultados seguintes demonstraram que as NETs são capazes de induzir hipernocicepção em camundongos e que essa queda no limiar mecânico pode ocorrer devido aumento da expressão de COX-2, o que possivelmente leva a uma ativação de prostaglandinas. Além disso, ocorre aumento da concentração de citocinas pró- inflamatórias, possivelmente via ativação de receptores Toll-4 pelo reconhecimento das histonas dessas NETs. Ademais, pacientes com AR possuem aumento de NETs nos líquidos sinoviais e neutrófilos mais propensos a produzirem NETs, as quais têm relação com o aumento da escala de dor nesses pacientes. Deste modo, podemos propor um novo alvo para o tratamento de dor articular. Rheumatoid arthritis (RA) is an autoimmune disease that has as one of the main joint symptoms. During the inflammatory process, nociceptors are activated by nociceptive media, such as prostaglandin E2 and via IL-1?. The role of neutrophils in the release of nociceptive stimuli is known, however, the role of neutrophil extracellular traps released by these neutrophils in autoimmune diseases as an arthritis in the origin of joint pain is not known. Our results demonstrated that animals with antigen-induced arthritis (AIA) have an increase in NETs related to the increase in Pad4 gene expression, a fundamental enzyme for the generation of NETs. Degradation of these NETs through DNase can reduce disease levels such as edema, synovial hyperplasia, cellular infiltrate and hypernociception, although there is no change in neutrophils to joints. From this, our results demonstrated as NETs are able to induce hypernociception in mice and that probably no mechanical mechanism limit may occur the increased expression of COX-2, or leading to prostaglandin. In addition, there is an increased concentration of proinflammatory cytokines, possibly via activation of Toll-4 receptors by recognizing the histories of these NETs. In addition, RA patients have increased NETs at synovial and neutrophil levels more likely to produce NETs, as they are related to increasing patient scale. In this mode we can propose a new target for the treatment of joint pain.

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior A gota é uma doença inflamatória causada pela deposição de cristais de urato monossódico (MSU) nas articulações. O ataque agudo da gota começa pelo reconhecimento dos cristais de MSU por células residentes articulares induzindo uma resposta inflamatória local, desencadeada pela ativação do inflamassoma NLRP3 e liberação de IL-1β. A sinalização provocada pela ligação da IL-1β ao seu receptor promove a produção de agentes quimioatraentes, resultando no recrutamento de neutrófilos que intensificam o processo inflamatório nas fases iniciais da resposta. Ang-(1-7) é um peptídeo do sistema renina-angiotensina que atualmente vem se destacando por suas funções no controle da resposta inflamatória. Dentre suas ações estão a redução do nível de várias citocinas e quimiocinas, o que leva a uma redução do acúmulo de células na cavidade articular, além da indução apoptose de neutrófilos e sua eferocitose em modelos de artrite. O objetivo deste trabalho foi avaliar o papel da Ang-(1-7) na inflamação aguda da gota. Os resultados apresentados mostram que a Ang-(1-7) reduz a produção de mediadores inflamatórios e o acúmulo de neutrófilos na articulação submetida a injeção intra-articular de cristais de MSU em camundongos, enquanto o tratamento com o A-779, inibidor do receptor seletivo da Ang-(1-7), demonstrou o papel da Ang-(1-7) endógena no controle do recrutamento de neutrófilos. A Ang-(1-7) também reduziu a produção de IL-1β e TNF em macrófagos peritoneais in vitro. Ainda, foi demonstrado que a Ang-(1-7) age diretamente nos neutrófilos reduzindo a adesão celular in vivo e migração desses leucócitos sob diferentes estímulos quimiotáticos, tanto in vivo quanto in vitro. Assim, a Ang-(1-7) apresentou um papel anti-inflamatório na artrite gotosa, sugerindo uma possível estratégica terapêutica para o tratamento da inflamação articular aguda induzida pela deposição de cristais MSU. Gout is an inflammatory disease caused by the deposition of monosodium urate crystals (MSU) in the joints. The acute attack of gout begins with the recognition of MSU crystals by resident joint cells inducing a local inflammatory response triggered by the activation of the NLRP3 inflammasome and release of IL-1β. The binding of IL- 1β to its receptor promotes the production of chemoatracting agents, resulting in the recruitment of neutrophils that intensify the inflammatory process in the initial phases of the response. Ang-(1-7) is a peptide from the renin-angiotensin system that is currently highlighted for its functions in controlling the inflammatory response. Among its actions are reducing the level of various cytokines and chemokines that leads to a reduction or increase of cells in the joint cavity, in addition to the induction of neutrophil apoptosis and its efferocytosis in arthritis models. The aim of this work was to evaluate the role of Ang-(1-7) in an acute inflammation of gout. To do that, mice were submitted to intra-articular injection of MSU crystals and treated or not with A-779, a selective inhibitor of Ang-(1-7) receptor. The results show that Ang-(1-7) reduces the production of inflammatory mediators and the accumulation of neutrophils in the joint in mice, while treatment with A-779 demonstrated the role of endogenous Ang-(1-7) in controlling the recruitment of neutrophils. Ang-(1-7) also reduced the production of IL- 1β and TNF-α in peritoneal macrophages in vitro. Results also show that Ang-(1-7) acts directly on neutrophils, reducing cell adhesion in vivo and migration of these leukocytes under different chemotactic stimuli, both in vivo and in vitro. Thus, Ang-(1- 7) has an anti-inflammatory role in gouty arthritis, suggesting a possible therapeutic strategy for the treatment of acute joint inflammation induced by the deposition of MSU crystals.

A dor crônica representa um crescente problema de saúde pública a nível mundial, afeta cerca de 30% dos adultos em todo o mundo. É frequentemente debilitante, intensa, constante e muitas vezes resistente à maioria das terapias disponíveis no mercado atual. Dentre os tipos de dor crônica que apresentam grande importância clínica, está a dor neuropática, foco do nosso estudo. Interações neuro-imunes são essenciais para o desenvolvimento e a manutenção da dor neuropática. Nesse contexto, destacam-se células do sistema imune inato, como neutrófilos, primeiras células a responderem a uma lesão no nervo periférico. Uma vez ativadas, desempenham um importante papel na sensibilização do neurônio aferente primário. Para sua ativação são necessários receptores de reconhecimento padrão (PRRs), importantes sensores inatos, que distinguem estruturas microbianas conservadas, referidas como padrões moleculares associados à patógenos (PAMPs) e substâncias endógenas liberadas durante processos de lesão celular, denominadas padrões moleculares associados à lesão (DAMPs). Dentre esses receptores, destacam-se os TLRs (receptores do tipo Toll). Em um cenário de lesão neuronal, DAMPs mitocondriais são liberados na circulação, como exemplo, temos o DNA mitocondrial, que é amplamente liberado por células nervosas lesionadas e ativa receptores Toll-like 9 (TLR9) por conter em seu genoma repetições de ODN-CpG. Foi demonstrado neste trabalho que, o receptor TLR9 tem envolvimento na hipersensibilidade nociceptiva neuropática, causada por lesão mecânica do nervo periférico, induzida pelo modelo experimental de PSNL. Há aumento da expressão de TLR9 no local da lesão no primeiro dia após indução do modelo, principalmente em neutrófilos. A sinalização do receptor TLR9 resulta tanto no recrutamento de leucócitos, majoritariamente neutrófilos e macrófagos, quanto na liberação de citocinas pró inflamatórias, capazes de sensibilizar o neurônio aferente primário. Essa sensibilização periférica contínua pode acarretar em plasticidade neuronal na via nociceptiva, levando à amplificação do sinal doloroso e cronificação da dor. Os dados obtidos demonstram que a sinalização de TLR9 é crucial para o desenvolvimento da dor crônica neuropática, tendo seu papel demonstrado no sistema nervoso periférico, caracterizando um potencial alvo terapêutico para o tratamento da dor Chronic pain represents a growing public health problem worldwide, affecting about 30% of adults. It is often debilitating, intense, constant and frequently resistant to most of the therapies available today. Among the types of chronic pain that present great clinical importance is neuropathic pain, focus of our study. Neuroimmune interactions are essential for the development and maintenance of neuropathic pain. In this context, cells of the innate immune system, such as neutrophils, are the first cells to respond to a peripheral nerve lesion. Once activated, they play an important role in sensitizing the primary afferent neuron. Pattern recognition receptors (PRRs) are required for this cells activation. PRRs are important innate sensors, that distinguish conserved microbial structures, referred as pathogen-associated molecular patterns (PAMPs) and endogenous substances released during cellular injury processes, called molecular patterns associated with injury (DAMPs). Among these receptors, the TLRs (Toll-like receptors) stand out. In a scenario of neuronal injury, mitochondrial DAMPs are released into the circulation, for example, mitochondrial DNA which is widely released by injured nerve cells and activates Toll-like receptors 9 (TLR9) by containing in its genome repeats of ODN-CpG. It has been demonstrated here that TLR9 is involved in neuropathic nociceptive hypersensitivity, caused by mechanical injury of peripheral nerve, induced by the experimental model of PSNL. There is increased TLR9 expression at the lesion site on the first day after induction of the model, mainly on neutrophils. TLR9 signaling results in both the recruitment of leukocytes, mostly neutrophils and macrophages, and the release of proinflammatory cytokines capable of sensitizing the primary afferent neuron. This continuous peripheral sensitization can lead to neuronal plasticity in the nociceptive pathway, leading to amplification of the pain signal and chronification of pain. The data obtained demonstrate that TLR9 signaling is crucial for the development of chronic neuropathic pain, and its role is demonstrated in the peripheral nervous system, characterizing a potential therapeutic target for the treatment of pain

A psoríase (Ps) é uma doença inflamatória crônica-imunomediada da pele, caracterizada por proliferação acentuada e diferenciação anormal de queratinócitos e aumento do infiltrado de células inflamatórias na derme. S100A9 é um alarmina que é produzida por queratinócitos e células mielóides em condições inflamatórias. No entanto, o papel desta molécula no desenvolvimento e manutenção da resposta inflamatória da Ps permanece desconhecida. Nesso objeitvo foi investigar o papel de S100A9 no desenvolvimento da psoríase. Análises de bioinformática de um banco de dados disponível on-line contendo valores de expressão de gênica de humanos mostrou que a expressão de S100A9 está aumentada pele lesionada de pacientes com Ps. Esses dados foram confirmados por imunofluorescência e Western blot onde foi observado um aumento na expressão de S100A9 na pele lesionada de pacientes com Ps, em comparação com amostras de pele não lesionada desses mesmo pacientes. Estes níveis de S100A9 foram positivamente correlacionados com a expressão de queratina-17, um marcador de ativação de queratinócitos. Para investigar o papel do S100A9 no desenvolvimento de Ps, autilizamos o modelo de Ps induzido por aplicação tópica de imiquimode (IMQ) nas costas de de camundongos WT, S100A9 - / - ou camundonos previamente tratados com paquinimod (10mg / kg, vo ), um quelante de S100A9. A exposição ao IMQ induziu o aumento da expresão gênica de S100a9 e proteica de forma rápida e dependente do tempo na pele e nos linfonodos drenantes da pele, e esse aumento permaneceu elevado até o final do experimento (6º dia). Notavelmente, a inflamação, e espessura da pele foram significativamente reduzidas em camundongos tratados com PAQ ou camundongos S100A9 -/- em comparação com camundongos WT. Os parâmetros histológicos confirmam a redução da espessura da epiderme, mostrada por seções histológicas coradas com HE. Para determinar quais células produtoras de S100A9 contribuem para o desenvolvimento de Ps, realizamos uma quimera e mostramos que ambos os queratinócitos e células mieloides são importantes para a produção de s100a9 e contribuem para o desenvolvimento da psoríase. No entanto os queratinócitos parecem ser mais importantes no aumento da espessua e na lesão da pele. Além disso, a expressão de Il23, na pele de animais S100A9 -/- ou tratados com PAQ foi reduzida, o que poderia explicar a redução das linfócitos T gamma-delta IL-17 nos linfonodos desses mesmos camundongos. Nosso trabalho mostrou que o alarmina S100A9 desempenha um papel importante no desenvolvimento da psoríase. Assim, S100A9 poderia ser uma estratégia futura para o tratamento farmacológico da psoríase. Além disso essa proteína poderia ser usada como marcador da atividade da doença Psoriasis (Ps) is an immune-mediated chronic inflammatory skin disease, characterized by accentuated proliferation and abnormal differentiation of keratinocytes and infiltration of inflammatory cells in the dermis. S100A9 is an alarmin that is produced by keratinocytes and myeloid cells in inflammatory conditions. However, the role of this molecule in the development and maintenance of the inflammatory response in Ps remains not well understood. Herein, we investigated the role of S100A9 in the development of psoriasis. Bioinformatical analysis of an online database containing human gene expression information showed that the s100a9 is overexpressed in lesional skin from Ps patients. These data were confirmed by immunofluorescence and western blot that showed an overexpression of s100a9 in the lesional skin from Ps patients compared with paired samples of nonlesional psoriatic skin. These levels of s100a9 were positively correlated with the expression of keratin-17, a keratinocyte activation marker. To investigate the role of S100A9 in the development of Ps, psoriasis-like skin inflammation was induced by topical application of imiquimod (IMQ) on the back skin of S100A9-deficient mice (S100A9-/-) or paquinimod (10mg/kg, v.o) pretreated mice. IMQ exposure induced s100a9 mRNA and S100A9 protein expression in a rapid and time-dependent manner in the skin and lymph node of mice and remained elevated until the end of the experiment (6th day). Notably, inflammation, assessed by epidermal thickness measurement and H&E-stained histological sections, was significantly reduced in S100A9-/- or paquinimod treated-mice compared with wild-type (WT) control mice. To determine which S100A9- producing cell contributes to the Ps development we performed a chimera and showed that both keratinocytes and myeloid cells are important for the production of s100a9 and contribute to the development of psoriasis. However keratinocytes seems to be most important to development of lesion skin. Moreover, the expression of IL-23, in the skin, was reduced, which might explain the reduction of IL-17-producing gamma-delta T cells in the lymph nodes of S100A9-/- or paquinimod-treated mice. We showed that the alarmin S100a9 plays an important role in the development of psoriasis. Thus, targeting S100A9 could be a future strategy for pharmacological treatment of psoriasis and this protein can be used as a marker of disease activity.

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Outra Agência A artrite séptica é uma doença articular causada por um microrganismo. Diversos vírus, fungos e bactérias podem causar tal doença, mas Staphylococcus aureus é o principal causador, devido aos seus inúmeros fatores de virulência e de evasão do sistema imune. A manifestação clássica de artrite séptica inclui dor intensa, mesmo em repouso, edema, aumento da temperatura no local e redução da mobilidade da articulação. A presença de microrganismos desencadeia uma resposta inflamatória na articulação que cria condições para a chegada de células como os neutrófilos, importantes para o controle de microrganismos. Os receptores da porção Fc de anticorpos desempenham papel importante em doenças infecciosas, desencadeando cascatas pró e anti-inflamatórias, com liberação de diversas citocinas, auxiliando no controle da doença e da inflamação gerada. O objetivo deste trabalho foi avaliar o papel dos receptores FcγRIIb e FcγRIII no controle bacteriano e na resposta inflamatória articular após a infecção por Staphylococcus aureus em camundongos. Para isto, animais deficientes para estes receptores foram infectados com S. aureus e a resposta inflamatória desencadeada foi comparada à de animais selvagens. Os animais FcγRIIb-/- apresentaram pico de acúmulo de leucócitos antecipado e redução da carga bacteriana na cavidade articular, associado a um aumento de apoptose de neutrófilos e maior expressão de CXCR2. Ainda, animais FcγRIIb-/- tem uma maior quantidade da citocina IL-1 na articulação já no primeiro dia de infecção em relação aos animais selvagens. Dados similares foram obtidos em cultura de macrófagos estimulados com S. aureus. Essa maior inflamação articular nos animais FcγRIIb-/- no início da resposta pode ser devido à uma maior sinalização por receptores FcγR estimulatórios, uma vez que há um aumento da molécula Syk em macrófagos deficientes para FcγRIIb. Por outro lado, os animais FcγRIII-/- apresentaram aumento no acúmulo de leucócitos e de carga bacteriana em tempos mais tardios de infecção, associado ao aumento da expressão de PD1 em linfócitos, um marcador de exaustão clonal. Conclui-se, portanto, que os receptores FcγR participam ativamente da inflamação articular causada por S. aureus, sendo que a ausência do FcγRIIb, receptor inibitório, potencializa a resposta inflamatória nos primeiros momentos de infecção, facilitando uma melhor eliminação da bactéria. Essa resposta pode ocorrer em função do receptor estimulatório FcγRIII, uma vez que sua ausência prejudica o controle bacteriano articular, mantendo uma inflamação intensa e persistente, possivelmente alterando as funções de linfócitos específicos. Septic arthritis is an articular disease caused by a microorganism. Several viruses, fungi and bacteria can cause this disease, but Staphylococcus aureus is the most common cause, due to its numerous virulence factors and to its ability to evade the immune system. The classic manifestation of septic arthritis includes severe pain, even at rest, edema, increased temperature on site and reduced mobility of the joint. Microorganisms trigger an inflammatory response in the joint that creates the conditions for the recruitment of cells such neutrophils that are granulocytes specialized in the control of microorganisms. Receptors for the Fc portion of immunoglobulin play an important role triggering pro and anti-inflammatory cascades with the release of many cytokines, in order to control the disease and the inflammation. This study aimed to evaluate the role of FcγRIIb and FcγRIII in the bacterial clearance and the inflammatory response in the experimental model of septic arthritis. To this end, mice deficient for these receptors were infected with S. aureus and compared to wild type animals at times determined by preliminary experiments. FcγRIIb-/- animals had an anticipated leukocyte accumulation peak and a reduction of the bacterial load in the joint cavity, associated with increased neutrophil apoptosis and CXCR2 expression. Furthermore, FcγRIIb-/- animals had a greater amount of IL-1 cytokine in the joint on the first day of infection in relation to wild animals. Similar data were obtained on culture of macrophages stimulated with S. aureus. Such increased joint inflammation in the FcγRIIb-/- animals at the beginning of the response may be due to increased signaling by stimulatory FcγR receptors, since there is an increase in the Syk molecule in FcγRIIb deficient macrophages. On the other hand, the animals FcγRIII-/- showed an increase in leukocyte accumulation and bacterial load at later times of infection associated with increased expression of PD1, an exhaust clonal marker. It is concluded, therefore, that FcγR receptors are very important in S. aureus induced septic arthritis, and the absence of the inhibitory receptor FcγRIIb potentiates the inflammatory response in the first moments of infection, facilitating a better elimination of the bacteria. This response may occur as a function of the FcγRIII stimulatory receptor, since its absence impairs the bacterial joint control, maintaining an intense and persistent inflammation, possibly altering the functions of specific lymphocytes.

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Staphylococcus aureus is the main pathogen associated with septic arthritis. Upon infection, neutrophils are quickly recruited to the joint by different chemoattractants, such as chemokines and leukotriene B4 (LTB4). Although their excessive accumulation is associated with intense pain and permanent articular damage, neutrophils have an important function in controlling bacterial burden. This work aimed to study the role of chemokines and the enzyme 5-lipoxygenase (5-LO) in the control of infection, hypernociception, and tissue damage in S. aureus-induced septic arthritis in mice. The blockade of the chemokine receptors CXCR1/2 from the beginning of infection decreased neutrophil accumulation in S. aureus-infected joint, contributing to the reduction of articular damage and hypernociception, although it increased the bacterial load. CXCR1/2 was important for the killing of S. aureus by purified human neutrophils. The later start of the treatment did not increase the bacterial load, but only transiently decreased hypernociception and did not improved tissue damage. Using another strategy, we blocked the chemokine binding to glycosaminoglycans (GAGs) by intravenously injection of CXCL9 (74-103). Although this treatment decreased neutrophil accumulation in peptidoglycan- and S. aureus-infected joints, during infection it was not effective to reduce articular damage and hypernociception and increased the bacterial load. In another set of experiments, 5-lipoxygenase (LO)-/- mice had a reduced neutrophil accumulation, joint damage, hypernociception, and bacterial load 7 days after S. aureus injection compared to wild type (WT) mice. At day 4, there were increased numbers of activated cluster of differentiation 11c (CD11c)+ cells and T lymphocytes in the joint and draining lymph node of 5-LO-/- compared to WT mice. At this time point, there was an increase of lipoxin A4 (LXA4)/LTB4 ratio in the joint, two byproducts from 5-LO activity. The blockade of the LXA4 surface receptor, ALX/formyl peptide receptor (FPR)2, in WT mice decreased the bacterial load in infected joints. Corroborating, the injection of LXA4 in 5-LO-/- mice increased the number of recovered bacteria. Interestingly, LXA4-treated human dendritic cells decreased chemotaxis under CCL21 stimulation. In conclusion, the blockade of CXCR1/2, chemokine-GAG binding and LXA4 activity could be useful for the improvement of current treatment of S. aureus-induced arthritis by different mechanisms, but commonly by decreasing neutrophil recruitment.

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior A inflamação é um processo fisiológico do organismo desencadeado por dano tecidual infeccioso ou estéril e tem o propósito crucial de restaurar a homeostase do tecido. No entanto, uma inflamação não resolvida pode levar ao dano tecidual e dar origem a doenças inflamatórias crônicas associadas à perda de função dos órgãos. Sendo assim é evidente que a resolução da inflamação é o principal processo que ocorre durante uma resposta inflamatória aguda associada ao retorno à homeostase. Met é um proto-oncogene envolvido na via de sinalização intracelular de crescimento, proliferação e sobrevivência celular. Ele codifica o receptor do fator de crescimento de hepatócitos (HGFR), presente na membrana de diferentes tipos celulares é importante na proliferação, sobrevivência e migração celular. Porém, a sua participação na resolução da inflamação ainda não foi estudada. Aqui, avaliamos o papel de MET na sobrevida celular utilizando dois modelos de inflamação em camundongos. O primeiro modelo utilizado foi a pleurisia induzida por LPS. Os camundongos foram desafiados com 250 ng/cavidade de LPS. Após 6 horas do desafio com LPS, momento no qual a inflamação já está estabelecida, foi feito o tratamento com o inibidor de MET, PF-04217903. As células foram recuperadas da cavidade pleural 4 horas após o tratamento com a droga. O tratamento com PF-04217903 diminui o número de neutrófilos na cavidade pleural sem afetar o número de células mononucleares. Essa diminuição do número de neutrófilos foi acompanhada por um aumento do número de neutrófilos apotóticos e eferocitose. O segundo modelo utilizado foi o de gota aguda induzida por cristais de urato monossódico (MSU). Os camundongos foram injetados com 100 μg de MSU na articulação tibiofemoral. Inicialmente, verificamos que a cinética de expressão de MET em neutrófilos está correlacionada com o acúmulo dessas células na cavidade periarticular. O tratamento com PF-04217903 foi feito 6 horas após a injeção com MSU, momento no qual a inflamação já está estabelecida. Quatro horas após o tratamento, houve uma redução do número de neutrófilos e um aumento de células apoptóticas em relação aos animais não tratados. Além disso, demonstramos que a inibição de MET foi capaz de reduzir o limiar de hipernocicepção. Avaliamos também o efeito de PF-04217903 na sobrevida de neutrófilos humanos in vitro. Os neutrófilos incubados com o inibidor de MET aumentou a porcentagem de células apoptóticas em relação aos neutrófilos não tratados. Assim, esses resultados demonstram que MET tem uma função muito importante na manutenção da sobrevida de neutrófilos e que a inibição da atividade desse receptor pode induzir apoptose de neutrófilos contribuindo para a resolução da resposta inflamatória aguda. Inflammation is a salutary host reaction to infectious or sterile tissue damage and has the crucial purpose of restoring tissue homeostasis. However, an unresolved inflammation can lead to tissue damage and give rise to chronic inflammatory diseases associated to loss of organs function. Thus, it is now evident that the resolution of inflammation is the main process that occurs during an acute inflammatory response associated to return to homeostasis. Met is a proto-oncogene involved in the intracellular signaling pathway for cell growth, proliferation and survival. It codify the hepatocyte growth factor receptor (HGFR or Met) present on the membrane of different cell types is important in cell proliferation, survival and migration. However, its participation in the resolution of inflammation has not been studied. Here, we evaluated the role of MET in neutrophil survival using two models of inflammation in mice: the pleurisy induced by LPS and gout. Firstly, mice were challenged with 250 ng/cavity of LPS. Six hour after LPS challenge the mice was treated with the MET inhibitor, PF-04217903. Cells were recovered from the pleural cavity 4 hours after treatment with the drug. Treatment with PF-04217903 decreased the number of neutrophils in the pleural cavity without affecting the number of mononuclear cells. This decrease in the number of neutrophils was accompanied by an increase in number of apoptotic neutrophils and efferocytosis. The second model used was the acute gout induced by crystals of monosodium urate (MSU). The mice were injected with 100 μg MSU at the tibiofemoral joint. Initially, we verified that the kinetics of MET expression in neutrophils paralleled with the accumulation of these cells in the joint cavity. The treatment of mice with PF-04217903, at the peak of inflammation, also reduced the number of neutrophil associated with increased apoptotic neutrophil in articular cavity. In addition, we demonstrated that the inhibition of MET was able to reduce the threshold of hypernociception. We also evaluated the effect of PF-04217903 on survival of human neutrophils in vitro. PF-04217903 induced apoptosis in human neutrophil. Thus, these results demonstrated that MET has a important role in the maintenance of neutrophil survival and that inhibition of the activity of this receptor can induce neutrophil apoptosis, contributing to the resolution of acute inflammatory response.

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior A dicotomia TH1/TH2 que tanto elucida os modelos de resistência e suscetibilidade nas infecções por Leishmania major não é aplicável à infecção por L. amazonensis. Nesta infecção observam-se respostas imunológicas mistas, sem efetivamente polarizar para nenhum perfil conhecido, diferenciando os paradigmas envolvidos na suscetibilidade e na resistência a parasitos. O TNF é uma citocina pleiotrópica, atua na mediação da inflamação, desenvolvimento e homeostasia do tecido linfóide, destruição da matriz extracelular, e tantas outras. A atuação do TNF se dá via dois receptores, TNFR1 e TNFR2, ambos desencadeiam a resposta inflamatória, mas exclusivamente através do TNFR1 o TNF auxilia na regulação e supressão desta reposta através da apoptose via caspase 8/3. Assim, nosso trabalho visou a identificação do papel do TNFR1 no curso de infecção e desenvolvimento das lesões cutâneas em camundongos infectados por L. amazonensis. Nossos dados revelaram a importância do TNFR1 no controle da lesão, embora não no controle parasitário. Este controle se mostrou mais eficaz no modelo de infecção subcutâneo, onde além de promover o controle da lesão, foi importante para manutenção tecidual do órgão infectado, possivelmente pela contínua produção de IL-10. Ainda, na fase aguda da infecção, atua no recrutamento de células mielóides e linfócitos para o sítio de infecção e, na fase crônica, regula o recrutamento celular, apenas na via subcutânea. A apoptose via TNFR1 foi inibida durante a infecção intradérmica por L. amazonensis, sendo utilizada uma via alternativa, porém que, segundo nossos dados, parece ser inibida pela sinalização pró-inflamatória do TNFR1, uma vez que a apoptose foi menor nos camundongos selvagens. Em conclusão, nossos dados sugerem o envolvimento do TNFR1 na resistência à infecção por L. amazonensis, pois foi observado atuando tanto na promoção da inflamação como na sua regulação. Esta regulação é crucial para a manutenção do órgão acometido, parece estar relacionada com a produção ininterrupta de IL-10, observada principalmente na infecção subcutânea. As diferentes vias de infecção evoluem para diferentes tipos de resposta, parece que na via intradérmica a falta de controle das células necróticas está associada à perda massiva de tecido, enquanto que na via subcutânea o controle do recrutamento celular está envolvido com a manutenção do órgão infectado. The Th1/Th2 paradigm that explains most models of infection with Leishmania major does not apply to the experimental models of infection with L. amazonensis. In this latter model, mixed immunological responses rather than polarization are observed, in contrast with the Th1/Th2 paradigm of resistance and susceptibility. TNF is a pleiotropic cytokine that mediates inflammation, lymphoid tissue development and homeostasis, extracellular matrix destruction, among other functions. TNF binds to two receptors, TNFR1 and TNFR2. Both receptors trigger inflammatory responses but only by binding to TNFR1 TNF mediates regulation or supression of inflammation, through induction of apoptosis via caspase 8/3. Hence, our work aimed at the identification of the role of TNFR1 the mouse model of infection with L. amazonensis. Our data reveal the importance of TNFR1 in the control of lesion development, but not on the control of parasite replication. This control was more efficient in the subcutaneous model of infection where, in addition to promoting lesion control, TNFR1 was importante in the maintainance of tissue homeostasis, probably due to IL-10 production. Furthermore, in the accute phase of the subcutaneous infection, TNFR1 mediated recruitment of mieloid cells and lymphocytes to the site of infection and, in the chronic phase, regulated cell recruitment. TNFR1-mediated apoptosis was inhibited during intradermic infection by L. amazonensis, and an alternative pathway was in play. However, our data indicate that apoptosis seems to be inhibited by the pro-inflammatory signaling through TNFR1, since apoptosis was lesser in wild-type mice. In conclusion, our data suggest the involvement of TNFR1 in resistance to L. amazonensis. This conclusion is supported by the fact that TNFR1 acts both in the promotion and in the regulation of inflammation. Regulation is crucial for preservation of the infected tissue, and seems to be related to continuous production of IL-10, observed mainly in the subcutaneous infection. The two different routes of infection evolve into diferente types of responses: the intradermic route the lack of control of necrosis is associated to massive tissue loss, while the subcutaneous route control of cell recruitment preserves the affected tissue.

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior FAPESP - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo Outra Agência Objetivo: Avaliar o valor prognóstico de marcadores relacionados à ativação de macrófagos (CCL-2, IL-1 e netrina-1) em pacientes com Síndrome Coronariana Aguda (SCA) incluídos no estudo Estratégia de Registro de Insuficiência Coronariana (ERICO). Métodos: Determinou-se a concentração de CCL-2, IL-1 e Netrina-1 por ELISA, em amostras de soro de 803 pacientes. Realizou-se coleta de dados sobre fatores de risco cardiovascular, antecedentes de insuficiência cardíaca e exames bioquímicos. A população foi caracterizada e o valor prognóstico dos marcadores foi avaliado no acompanhamento de um ano e dois anos. As análises foram conduzidas considerando a mediana de concentração de cada marcador na admissão para obtenção dos grupos CCL-2 baixa e alta, IL-1 baixa e alta e netrina-1 baixa e alta. Resultados: A mediana de idade observada foi de 63 anos, sendo 58,5% dos pacientes do sexo masculino e IAMSST o subtipo de SCA predominante (41,5%). HAS, dislipidemias, Diabetes Mellitus, tabagismo atual e ICO prévia apresentaram frequências de 75,5%, 47,1%, 37,9%, 28,1% e 24,4%, respectivamente. A mediana de IMC foi de 26,8 kg/m2. Os pacientes apresentaram elevada glicemia (124,5 mg/dL), além de baixos níveis de HDL (37,0 mg/dL) e altos níveis de LDL (101,0 mg/dL). Os valores medianos dos níveis de CCL-2, IL-1 e netrina-1 na admissão foram 100,9 pg/mL, 14,3 pg/mL e 44,8 pg/mL, respectivamente. O tempo médio de acompanhamento dos pacientes foi de 2,6 anos. Os níveis de CCL-2 não foram associados ao prognóstico em um ano, no entanto pacientes com níveis mais baixos da quimiocina apresentaram pior prognóstico em dois anos, com aumento do risco de óbito por IAM ou novo IAM não-fatal mesmo após ajuste por fatores de risco cardiovascular e medicamentos. Os níveis de IL-1 não foram associados ao prognóstico em um ano e dois anos. O nível de netrina-1 13 acima da mediana foi associado a pior prognóstico em um ano e dois anos (óbito por todas as causas), no entanto a associação não foi observada após ajuste do modelo. Conclusão: Níveis reduzidos de CCL-2 e níveis elevados de netrina-1 foram associados a pior prognóstico. Acredita-se que a menor concentração de CCL-2 possa promover recrutamento insuficiente de monócitos para a cicatrização do infarto. Esse é o primeiro estudo a avaliar o valor prognóstico de netrina-1 em pacientes com SCA. Objective: Evaluate the prognostic value of some markers related to activation of macrophages (CCL-2, IL-1 and netrin-1) in patients with Acute Coronary Syndrome (ACS) included in the Strategy of Registry of Acute Coronary Syndrome study (ERICO). Methods: We determined the concentration of CCL-2, IL-1 and netrin-1 by ELISA in serum samples of 803 patients. Data collection was conducted on cardiovascular risk factors, heart failure history and biochemical tests. The population was characterized and the prognostic value of markers was assessed at one-year and two-year follow-up. Analysis was conducted considering the median concentration of each marker to obtain the low and high CCL-2 groups, low and high IL-1 and low and high netrin-1. Results: The median age was 63 years. 58.5% of patients were men and 41.5% had NSTEMI. Hypertension, dyslipidemia, diabetes mellitus, current smoking, and previous heart failure presented frequencies of 75.5%, 47.1%, 37.9%, 28.1% and 24.4%, respectively. The median BMI was 26.8 kg/m2. We observed high blood glucose (124.5 mg/dL), low HDL (37.0 mg/dL) and high LDL (101.0 mg/dL) levels. The median concentration of CCL-2, IL-1 and netrin-1 were 100.9 pg/mL, 14.3 pg/mL, 44.8 pg/mL, respectively. The mean follow-up was 2.6 years. CCL-2 levels were not associated with prognosis in one-year follow-up. However, patients with lower CCL-2 levels had a worse prognosis in two-years follow-up with an increased risk of myocardial infarction mortality or new nonfatal myocardial infarction, even after adjusting for cardiovascular risk factors and medication. IL-1 levels were not associated with prognosis in one year and two-year follow-up. Netrin-1 above the median was associated with worse prognosis in one year and two-year follow-up (all-cause mortality), but the association was not observed after model adjustment. Conclusion: Lower CCL-2 levels and higher netrin-1 levels were associated with poor prognosis. We believe that lower concentration of CCL-2 can impair monocyte recruitment for myocardial infarction healing. This is the first study to evaluate the prognostic value of netrin-1 in patients with ACS.

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Leishmania são parasitos protozoários transmitidos em sua forma promastigota para hospedeiros vertebrados pelo inseto vetor durante o repasto sanguíneo. No hospedeiro mamífero, amastigotas replicam no interior de macrófagos e infectam células, levando à amplificação da infecção. Embora a transferência de amastigotas para células sadias seja um passo crucial na evolução da infecção, ainda não é completamente compreendida. Neste trabalho, infecções por L. amazonensis e L. guyanensis em macrófagos de BALB/c e C57BL/6 foram comparadas e a morte celular do macrófago investigada. Como já sabido, infecções em camundongos levam a diferentes progressões da doença. L. amazonensis causa infecção crônica em ambas as linhagens murinas (ainda que menos grave em C57BL/6), enquanto que a infecção por L. guyanensis é controlada nessas linhagens. In vitro, a infecção em macrófagos por L. amazonensis é persistente, enquanto o crescimento de L. guyanensis é controlado pela célula hospedeira em ambas as linhagens. L. amazonensis induz in vitro apoptose em macrófagos tanto de C57BL/6 quanto de BALB/c, caracterizada pela exposição de fosfatidilserina (PS), clivagem internucleossômica do DNA, e consequente hipodiploidia. Nenhum destes sinais é observado em macrófagos infectados com L. guyanensis, que aparentemente morrem por necrose, como indicado pelo aumento de células positivas para iodeto de propídeo (PI), mas não para Anexina V. Apoptose de macrófagos induzida por L. amazonensis se dá pela ativação das caspases 3, 8 e 9, em ambas as linhagens. Considerando estas duas espécies de Leishmania e as duas linhagens de camundongos, a apoptose de macrófagos induzida nos momentos iniciais de infecção está associada com uma infecção crônica, independente da sua gravidade. Macrófagos saudáveis foram observados fagocitando células infectadas com L. amazonensis, o que, até então, não tinha sido verificado, podendo ser uma forma de propagação da amastigota, levando à amplificação da infecção. Leishmania are protozoan parasites transmitted by the insect vector during blood meal to the vertebrate host as promastigotes. In the mammal host, amastigotes replicate inside macrophages and are transmitted to healthy cells, amplifying the infection. Although transfer of amastigotes from infected to healthy cells is a crucial step that may shape the outcome of the infection, it is not fully understood. In the present work, L. amazonensis and L. guyanensis infection in C57BL/6 and BALB/c macrophages were compared and macrophages death was investigated. As previously shown, infection of mice results in distinct outcomes: L. amazonensis causes a chronic infection in both strains of mice (although milder in C57BL/6), whereas L. guyanensis infection is controlled by the strains. In vitro, infection is persistent in L. amazonensis-infected macrophages whereas L. guyanensis growth is controlled by host cells from both strains of mice. L. amazonensis induces apoptosis of both C57BL/6 and BALB/c macrophages in vitro, characterized by phosphatidylserine (PS) exposure, DNA cleavage into nucleosomal size fragments, and consequent hypodiploidy. None of these signs were seen in macrophages infected with L. guyanensis, which seem to die through necrosis, as indicated by increased propidium iodide (PI)-, but not Annexin V-, positive cells. L. amazonensis-induced macrophage apoptosis was through activation of caspases-3, -8 and -9, in both strains of mice. Considering these two species of Leishmania and strains of mice, macrophage apoptosis, induced at the initial moments of infection, is associated with chronic infection, regardless of its severity. Healthy macrophages were observed phagocytizing L. amazonensis-infected cells, which had not been verified so far, and could be a way of amastigote spreading, leading to the amplification of infection.

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior A mucosite induzida no trato gastrointestinal pelo tratamento antineoplásico constitui um importante, dose limitante e dispendioso efeito colateral da quimioterapia e radioterapia, podendo acarretar na interrupção e/ou postergação do tratamento. A microbiota presente no trato gastrointestinal está envolvida em várias doenças inflamatórias intestinais, entretanto não se sabe seu papel no desenvolvimento da mucosite. O objetivo deste trabalho foi avaliar o papel da microbiota no desenvolvimento da mucosite intestinal induzida pelo quimioterápico 5-fluorouracil (5-FU). O tratamento com 5-FU em animais convencionais (CV) resultou em inflamação e dano intestinal. A fim de avaliar o papel da microbiota na mucosite utilizamos animais isentos de germes (GF) e tratados com coquetel de antibióticos para a depleção da microbiota (AB). A ausência da microbiota, em ambos modelos, foi associada a menor inflamação e preservação do tecido intestinal após tratamento com 5-FU. O dano tecidual induzido pelo 5-FU nos animais CV foi associado ao aumento do número de enterobactérias e de Escherichia coli nas fezes. A prevenção do aumento de enterobactérias, através do tratamento com ciprofloxacino, preveniu o dano tecidual induzido pelo 5-FU nos animais CV. A colonização dos animais GF com a microbiota total ou a monocolonização com E. coli foram eficientes em reverter o fenótipo protetor desses animais após tratamento com 5-FU e promover a inflamação e dano tecidual. Animais GF apresentam aumento da concentração basal de corticosterona e a monocolonização com E. coli reduziu a concentração desse hormônio durante a mucosite. Nossos dados demonstram que ausência da microbiota protege os animais dos danos induzidos pelo 5-FU. Em animais convencionais o aumento de enterobactérias e E. coli exacerba o dano tecidual induzido pelo 5-FU. O aumento de E. coli pode inibir o aumento de corticosterona e exacerbar os efeitos do quimioterápico. Antineoplasic-induced mucositis in gatrointestinal tract is an important and costly dose-limiting side effect of chemotherapy and radiotherapy and may result in disruption and/or delay of treatment. The microbiota present in the gastrointestinal tract is involved in several inflammatory bowel diseases, however its role in mucositis development is not known. The aim of this study was to investigate the role of the microbiota in the development and severity of 5-fluorouracil (5-FU) chemotherapy-induced mucositis. Conventional mice (CV) treated with 5-FU showed intestinal inflammation and tissue damage. In order to assess the role of the microbiota in mucositis we use germ-free mice (GF) and mice treated with an antibiotics cocktail for microbial depletion (AB). Absence of microbiota in both models was associated with reduced inflammation and gut tissue preservation after 5-FU treatment. 5-FU-induced tissue damage in CV mice was associated with increased content of enterobacteria and E. coli in the feces. Prevention of enterobacteria increase in CV mice by ciprofloxacin treatment prevented 5-FU-induced tissue damage. Colonization with whole microbiota or E. coli monocolonization of GF mice were effective in reversing the protective phenotype of these animals after 5-FU treatment promoting inflammation and tissue damage. GF animals showed increased basal corticosterone concentration and monocolonization with E. coli reduced the concentration of this hormone after mucositis induction. Our data demonstrate that microbiota absence protects the mice from 5-FU-induced damage. Increase of enterobacteria and E. coli in CV mice exacerbate 5-FU-induced tissue damage. E. coli increase can inhibit the corticosterone increase and exacerbate chemotherapy effects.

Paracoccidioides brasilensis é um dos agentes etiológicos da paracoccidioidomise, micose sistêmica endêmica da América Latina e de maior prevalência no Brasil. A patogênese da PCM é dependente de múltiplos fatores, sendo estes relacionados tanto ao fungo quanto ao hospedeiro. Além disso, uma importante participação da resposta inflamatória na patogênese da PCM tem sido bem descrita. A melanina é sabidamente um fator de virulência encontrado em diversos patógenos de plantas e animais e já foi demonstrado que P. brasiliensis a produz. Sendo assim, torna-se importante entender quais os fatores associados ao fungo são responsáveis pela interação com o hospedeiro. Neste estudo, foram investigadas alterações na resposta imunológica da PCM experimental induzida por de P. brasiliensis. Os dados obtidos mostraram que após a infecção intratraqueal com leveduras de P. brasiliensis melanizadas houve alterações no recrutamento de leucócitos, na produção de mediadores inflamatórios e na proliferação fúngica presente no pulmão, em relação à infecção com leveduras não melanizadas. Além disso, houve disseminação do fungo melanizado para o fígado. Ensaios in vitro mostraram uma redução da atividade fagocítica de macrófagos infectados com leveduras melanizadas, assim como uma menor produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) e nitrogênio (RNS). Provavelmente, a redução de ROS e RNS possibilitou o aumento no índice de proliferação no interior de macrófagos, visualizado após a infecção com P. brasiliensis melanizado. Objetivando um estudo mais profundo da influência da melanização do fungo no reconhecimento e recrutamento celular, foi padronizado um modelo de infecção intra-plantar com P. brasiliensis Os resultados mostraram uma maior carga fúngica associada ao aumento no edema na pata e ao maior recrutamento de células inflamatórias. Assim, esse trabalho mostrou que a melanização do fungo Paraccocidioides brasiliensis é um importante fator de virulência, conferindo uma proteção para o fungo e desencadeando alterações na resposta imune do hospedeiro, o que influencia de maneira significativa os sinais de progressão da PCM.