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Uma das funções das células-tronco mesenquimais da medula óssea é a manutenção do nicho hematopoiético, exercendo ação cooperativa com as células-tronco hematopoiéticas na manutenção da homeostase sanguínea. No entanto, nos casos de leucemias, suspeita-se que ocorram alterações funcionais nas células-tronco mesenquimais da medula óssea, que passam a assumir um papel permissivo ao desenvolvimento, manutenção e até mesmo nas recidivas das leucemias. Estudamos a interação entre as células leucêmicas K562 (sensível a quimioterápicos) e K562-Lucena (resistente a quimioterápicos) em coculturas com as células-tronco mesenquimais de medula óssea, provenientes de pacientes acometidos pela leucemia mieloide aguda (CTM-LMA) e de doadores saudáveis (CTM-HMO), sendo avaliados parâmetros relativos à proliferação, viabilidade, morte celular, produção de citocinas, expressão de proteínas ABC, alterações na expressão de ciclinas e no ciclo celular. Observamos que o secretoma das CTM-HMO foi capaz de promover a diminuição da proliferação das células leucêmicas (K562 e K562-Lucena), associada à diminuição da viabilidade dessas células com aumento dos índices de apoptose, necrose e ativação de caspases 3/7, bem como promover alterações na produção de citocinas e expressão de proteínas ABC, além de alterações na expressão de ciclinas D1 e D2 e no ciclo celular. No entanto, o secretoma das CTM-LMA não foi capaz de promover os mesmos resultados, demonstrando que essas células perdem a capacidade de combater as leucemias, tornando-se permissivas a sua progressão. O secretoma das CTM-HMO, portanto, pode ser explorado como um adjuvante no tratamento das leucemias, uma vez que exerce ação nas células leucêmicas sensíveis e resistentes ao tratamento convencional One function of bone marrow mesenchymal stem cells is the maintenance of the hematopoietic niche, exerting a cooperative action with the hematopoietic stem cells in the maintenance of blood homeostasis. However, in leukemia course, it is suspected that there are functional alterations in the bone marrow mesenchymal stem cells, which start to assume a permissive role in the development, maintenance and even relapse of leukemias. We studied the interaction between K562 (chemotherapeutic-sensitive) and K562-Lucena (chemotherapeutic-resistant) leukemic cells in cocultures with bone marrow mesenchymal stem cells derived from patients affected by acute myeloid leukemia (MSC-AML) and from healthy donors (MSC-HBM), being evaluated parameters related to proliferation, viability, cell death, production of cytokines, expression of ABC proteins, alterations in the expression of cyclins and in the cell cycle. We observed that the MSC-HBM secretome was able to promotes a decrease in the proliferation of leukemic cells (K562 and K562-Lucena), associated with a decrease in the viability of these cells with increases in the rates of apoptosis, necrosis and activation of caspases 3/7, as well as promote alterations in the production of cytokines and expression of ABC proteins, in addition to alterations in the expression of cyclins D1 and D2 and in the cell cycle. However, the secretome of MSC-AML was not able to promote the same results, demonstrating that these cells lose the ability of combat leukemias, making their progression permissive. The secretome of MSC-HBM, therefore, can be explored as an adjuvant in the treatment of leukemias, since it exerts action on leukemic cells that are sensitive and resistant to conventional treatment

Mesenchymal stem cells have the ability to differentiate into several cell types when exposed to determined substances, including oxysterols. Oxysterols are cholesterol products derived from its auto-oxidation by reactive species or from enzymatic action. They are present in the body in low quantities under physiological conditions and exhibit several physiological and pharmacological actions according to both the types of oxysterol and tissue. Some of them are cytotoxic while others have been shown to promote cell differentiation through the action on several different receptors, such as nuclear LXR receptors and Smoothened receptor ligands. Here, we review the main pathways by which oxysterols have been associated with cell differentiation and death of mesenchymal stem cells.

Influenza, também conhecida como gripe, é uma doença infecciosa viral que acomete um grande número de indivíduos anualmente, sendo responsável por um elevado número de internações e óbitos. O agente etiológico é o Myxovirus influenzae, vírus envelopado, de RNA de fita simples e polaridade negativa. A vacinação é a forma mais eficaz de se prevenir a infecção pelo vírus, no entanto, a capacidade produtiva dessa vacina não é suficiente para a vacinação da totalidade da população mundial, principalmente em casos de pandemia. Esse projeto teve por objetivo desenvolver uma vacina influenza (fragmentada e inativada) adjuvada, visando aumentar a capacidade produtiva dessa vacina no Instituto Butantan, que hoje é estimada em aproximadamente 40 milhões de doses por campanha. A utilização de adjuvantes na formulação da vacina influenza é capaz de produzir a mesma resposta imunológica protetora contra esse vírus, utilizando uma quantidade menor dos antígenos vacinais, aumentando a capacidade de produção da vacina em até quatro vezes. Foram estudadas 23 formulações adjuvantes utilizando o esqualeno como referência (formulação similar ao MF59®, adjuvante desenvolvido pela Novartis), vitaminas lipossolúveis (vitaminas A, D e E), vitamina B2 (vitamina hidrossolúvel), MPLA (monofosforil lipídio A, produzido pelo Instituto Butantan como subproduto da vacina pertussis low) e gel de hidróxido de alumínio. Para tanto, foram avaliadas a resposta imune conferida a camundongos BALB/c após imunização com diferentes formulações de vacina influenza (fragmentada e inativada) adjuvada e a existência, ou não, de toxicidade induzida pelas formulações vacinais estudadas. As formulações vacinais mais promissoras farão parte das formulações candidatas para realizações de ensaios clínicos. Os animais foram imunizados por via intraperitoneal com as formulações vacinais e foram colhidas amostras de sangue para ensaios sorológicos (inibição de hemaglutinação e ELISA) e células esplênicas para avaliação celular (dosagem de citocinas por citometria de fluxo: IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17 TNF-α e INF-γ). Além disso, em um dos experimentos avaliou-se a formação de memória imunológica contra influenza, parâmetro importante em se pensando em uma vacina. Os três primeiros experimentos foram uma triagem a partir da qual selecionaram-se as melhores formulações que foram testadas no último experimento. Nele foram avaliados além da indução de resposta imune a toxicidade e a memória imunológica. Todas as 23 formulações estudadas induziram resposta minimamente protetora nos animais, com exceção da formulação contendo apenas MPLA como adjuvante. As formulações que se mostraram mais promissoras continham além do gel de AI(OH)3 MPLA de B. pertussis ou vitamina B2. Isso sem considerar o tocoferol (vitamina E), que embora tenha apresentado bons resultados acabou preterido em decorrência de sua potencial relação com casos de narcolepsia descritos na literatura. O teste de memória foi capaz de demonstrar que essas formulações produzem resposta de memória imunológica duradoura. Assim, tem-se resultados promissores para novos estudos pré-clínicos e clínicos com a vacina influenza (fragmentada e inativada) sazonal (trivalente). Influenza, also known as flu, is a viral infectious disease that infects a large number of people annually, being responsible by large morbidity and mortality rates. The etiologic agent is the Myxovirus influenzae, an enveloped virus with single-stranded RNA and negative polarity. Vaccination is the best way to prevent the virus infection; however, the production capacity of this vaccine is not sufficient to vaccinate the entire world population, especially in cases of pandemics. This project aimed to develop an adjuvanted influenza vaccine (split and inactivated), increasing the productive capacity of this vaccine in Instituto Butantan, which is estimated in approximately 40 million of doses by campaign. Influenza vaccines formulated with adjuvants can produce the same protective immunological response against the virus using less amount of antigen increasing the production capacity of this vaccine up to four times. Twenty-three adjuvants containing fat-soluble vitamins (vitamins A, D and E), vitamin B2 (water-soluble vitamin), MPLA (monophosphoryl lipid A, produced by Instituto Butantan as a byproduct of pertussis low vaccine production) and aluminum hydroxide gel were studied. An adjuvant similar to MF59® (Novartis adjuvant) containing squalene was used as control. The immune response elicited in BALB/c mice after immunization with the different formulations of the influenza vaccine and the existence or not of toxicity induced by the vaccines formulations were studied. The most promising formulation will be part of the candidate formulations of clinicai trials. The animais received the vaccine formulations intraperitoneally and at specific days blood samples were taken to serological tests (hemagglutination inhibition and ELISA). At the end, they were euthanized to collect the spleens and splenic cells were cultivated to evaluate cytokines by flow cytometry: IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17 TNF-α and INF-γ. Furthermore, in one experiment the immunological memory against influenza was evaluated, an important parameter to vaccines. The most promising formulations contained besides to alum either B. pertussis MPLA or B2 vitamin. Tocopherol (vitamin E) presented good results too, however it has a potential relationship with reported cases of narcolepsy. The memory test was able to demonstrate that these formulations induced long lasting immune memory response. Thus, these are promising results for new pre-clinical and clinical trials with seasonal trivalent influenza vaccine (split and inactivated).