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Esta Tesis Doctoral se centra en el diseño, síntesis, caracterización y evaluación biológica de nanoantibióticos basados en nanopartículas mesoporosas de sílice (MSNs) para el tratamiento de la infección bacteriana ósea como una alternativa prometedora frente a las terapias actuales.La infección ósea es una enfermedad grave que presenta serias implicaciones clínicas y socioeconómicas. Una de las dificultades para conseguir un tratamiento eficaz frente a esta patología radica en la presencia de bacterias formando biofilms, lo cual compromete el tratamiento antibiótico y requiere de tratamientos quirúrgicos y farmacológicos muy agresivos que pueden afectar la calidad de vida del paciente. Además, el uso incorrecto de los antibióticos durante el tratamiento favorece la aparición de bacterias multiresistentes. Por ello, es necesario desarrollar nuevas alternativas para el tratamiento eficiente y local de la infección ósea capaces de solventar las limitaciones presentes en los tratamientos convencionales..., This PhD Thesis focuses on the design, synthesis, characterization and biological evaluation of nanoantibiotics based on mesoporous silica nanoparticles (MSNs) for the treatment of bacterial bone infection as a promising alternative to current therapies. Bone infection is a serious disease that has serious clinical and socioeconomic implications. One of the difficulties in achieving effective treatment for this pathology lies in the presence of bacteria forming biofilms, which compromises antibiotic treatment and requires very aggressive surgical and pharmacological treatments that can affect the patient's quality of life. In addition, the incorrect use of antibiotics during treatment favors the appearance of multiresistant bacteria. Therefore, it is necessary to develop new alternatives for the efficient and local treatment of bone infection capable of solving the limitations present in conventional treatments...

La enfermedad pulmonar crónica es la principal causa de morbilidad y mortalidad en pacientes con fibrosis quística (FQ). Las bacterias se establecen en los pulmones de los pacientes con FQ formando biofilms polimicrobianos, estructuras agregadas de microorganismos con una alta tolerancia frente al tratamiento antimicrobiano. Pseudomonas aeruginosa es la especie más prevalente en estos pacientes. Sin embargo, la microbiota del ecosistema pulmonar también puede estar compuesta por otros microorganismos, entre los que se encuentran las Micobacterias No Tuberculosas (MNT), que se adquieren mayoritariamente a partir de reservorios ambientales. Mycobacterium abscessus es un microorganismo que causa infección pulmonar en FQ cuya incidencia está aumentando globalmente. Algunos estudios sugieren que la terapia con antimicrobianos, a los que estos pacientes se exponen desde la infancia, podría favorecer la colonización pulmonar por M. abscessus dada su resistencia intrínseca a antibióticos. El tratamiento de la enfermedad pulmonar por M. abscessus se basa en la combinación de diferentes antimicrobianos, cuya elección está guiada por el antibiograma del aislado. Sin embargo, la tasa de fallo terapéutico y la recurrencia es alta, sugiriendo una falta de correlación in vitro-in vivo. En este trabajo tratamos de determinar si la incorporación de factores del microambiente del huésped, como células epiteliales de pulmón, y microorganismos con los que M. abscessus comparte nicho, como P. aeruginosa, pueden modificar la sensibilidad a antimicrobianos de M. abscessus. Además, también pretendemos evaluar si el tratamiento antimicrobiano frente a otros patógenos frecuentemente coaislados con M. abscessus, como P. aeruginosa, podría aumentar la supervivencia de M. abscessus en un biofilm dual...

La enfermedad pulmonar crónica es la principal causa de morbilidad y mortalidad en pacientes con fibrosis quística (FQ). Las bacterias se establecen en los pulmones de los pacientes con FQ formando biofilms polimicrobianos, estructuras agregadas de microorganismos con una alta tolerancia frente al tratamiento antimicrobiano. Pseudomonas aeruginosa es la especie más prevalente en estos pacientes. Sin embargo, la microbiota del ecosistema pulmonar también puede estar compuesta por otros microorganismos, entre los que se encuentran las Micobacterias No Tuberculosas (MNT), que se adquieren mayoritariamente a partir de reservorios ambientales. Mycobacterium abscessus es un microorganismo que causa infección pulmonar en FQ cuya incidencia está aumentando globalmente. Algunos estudios sugieren que la terapia con antimicrobianos, a los que estos pacientes se exponen desde la infancia, podría favorecer la colonización pulmonar por M. abscessus dada su resistencia intrínseca a antibióticos. El tratamiento de la enfermedad pulmonar por M. abscessus se basa en la combinación de diferentes antimicrobianos, cuya elección está guiada por el antibiograma del aislado. Sin embargo, la tasa de fallo terapéutico y la recurrencia es alta, sugiriendo una falta de correlación in vitro-in vivo. En este trabajo tratamos de determinar si la incorporación de factores del microambiente del huésped, como células epiteliales de pulmón, y microorganismos con los que M. abscessus comparte nicho, como P. aeruginosa, pueden modificar la sensibilidad a antimicrobianos de M. abscessus. Además, también pretendemos evaluar si el tratamiento antimicrobiano frente a otros patógenos frecuentemente coaislados con M. abscessus, como P. aeruginosa, podría aumentar la supervivencia de M. abscessus en un biofilm dual..., Chronic lung infection is the main cause of morbidity and mortality in cystic fibrosis (CF) patients. Bacteria in the CF lung are arranged as polymicrobial biofilms, which are aggregated structures of sessile microorganisms highly tolerant to antimicrobial therapy. Pseudomonas aeruginosa is the most prevalent species causing acute and chronic respiratory infection among CF patients. However, the CF lung microbiota also comprises other microorganisms, such as Non- Tuberculous Mycobacteria (NTM), which are presumed to be acquired from environmental reservoirs. Mycobacterium abscessus is a microorganism that can cause biofilm-related pulmonary infections in patients with preexisting lung disease and is increasingly being isolated from respiratory samples of CF patients. Some studies suggest that antimicrobial therapy, to which CF patients are exposed since childhood, may favor the colonization of the lung environment by M. abscessus, given its intrinsic resistance to antibiotics. The treatment against M. abscessus lung disease is based on a multidrug regimen guided by the in vitro susceptibility testing results of the isolates. However, the rates of therapeutic failure and recurrence are high, suggesting a poor correlation between the in vitro result and the in vivo outcome. This study aims to determine if the incorporation of factors that mimic the host microenvironment, such as lung epithelial cells, and microorganisms that share niche with M. abscessus, such as P. aeruginosa, can influence M. abscessus response to antimicrobial treatment. Furthermore, we aim to evaluate if the treatment directed at other classic pathogens often co-isolated with M. abscessus, like P. aeruginosa, could give an adaptive advantage to M. abscessus...

Las micobacterias no pigmentadas de crecimiento rápido (MNPCR) son un grupo de patógenos oportunistas, ubicuos en la naturaleza y cada vez más reconocidos como causa de infección. Pueden causar un amplio espectro de infecciones en humanos (infección del tracto respiratorio, de piel y tejidos blandos o asociada a cuerpos extraños). Las tres especies más importantes, en cuanto a su relevancia clínica, son Mycobacterium abscessus, Mycobacterium chelonae y Mycobacterium fortuitum, llegando a representar el 90 por ciento de las infecciones por MNPCR.Las MNPCR tienen fenotipos de colonias rugosos y lisos cuando se cultivan in vitro. Algunos estudios han encontrado una correlación significativa entre la morfología de colonia y la virulencia, siendo las variantes de colonia rugosa más virulentas que las de colonia lisa. Uno de los objetivos de este trabajo fue evaluar la capacidad invasiva y la virulencia de M. abscessus, M. chelonae y M. fortuitum según su fenotipo de colonia liso o rugoso, utilizando un modelo celular con macrófagos y un modelo experimental con larvas de Galleria mellonella...

Las micobacterias no pigmentadas de crecimiento rápido (MNPCR) son un grupo de patógenos oportunistas, ubicuos en la naturaleza y cada vez más reconocidos como causa de infección. Pueden causar un amplio espectro de infecciones en humanos (infección del tracto respiratorio, de piel y tejidos blandos o asociada a cuerpos extraños). Las tres especies más importantes, en cuanto a su relevancia clínica, son Mycobacterium abscessus, Mycobacterium chelonae y Mycobacterium fortuitum, llegando a representar el 90 por ciento de las infecciones por MNPCR.Las MNPCR tienen fenotipos de colonias rugosos y lisos cuando se cultivan in vitro. Algunos estudios han encontrado una correlación significativa entre la morfología de colonia y la virulencia, siendo las variantes de colonia rugosa más virulentas que las de colonia lisa. Uno de los objetivos de este trabajo fue evaluar la capacidad invasiva y la virulencia de M. abscessus, M. chelonae y M. fortuitum según su fenotipo de colonia liso o rugoso, utilizando un modelo celular con macrófagos y un modelo experimental con larvas de Galleria mellonella...

La implantación de una prótesis en el organismo puede desencadenar una infección que, aunque poco frecuente, puede tener consecuencias devastadoras (1-3). Una integración exitosa de un implante en el organismo requiere tanto la correcta integración tisular como la ausencia de infección, así como una respuesta inflamatoria limitada (4, 5). El destino de la superficie de un biomaterial puede conceptualizarse como una carrera por dicha superficie: una competición entre la integración de las células tisulares y la adhesión bacteriana a la misma. Si las células del tejido ganan la carrera, ocupan la superficie, que se vuelve menos vulnerable para su colonización. Si, por el contrario, las bacterias vencen, el área del implante se cubre rápidamente por una biopelícula que impide la integración de los tejidos (5-7).Con el fin de prevenir este tipo de infecciones, se han estudiado numerosas modificaciones y recubrimientos antibacterianos de los biomateriales (8-10). El desarrollo y la utilización de un método sencillo y reproducible que permita el estudio de las propiedades antibacterianas y de osteointegración de un biomaterial de forma simultánea supone un paso adelante en la aproximación al fenómeno que tiene lugar in vivo..., The implantation of a biomaterial can trigger an infection that, although rare, may have devastating consequences (1-3). Successful implant integration needs both tissue integration and lack of infection, as well as a limited inflammatory response (4, 5). The fate of a biomaterial surface can be conceptualized as a race for that surface: a contest between tissue cells, fighting for integration, and bacterial adhesion. If tissue cells win, then they occupy the surface, which turns less available for colonization. If, on the otherside, bacteria win, implant surface gets rapidly covered by a biofilm that prevents tissue integration (5-7). Aiming to prevent biomaterial-associated infections, surface modifications and antibacterial coatings have been studied (8-10). Developing and using a simple and reproducible model that enables the study of biomaterial antibacterial and osseointegration properties entails a step forward towards the in vivo situation...

La implantación de una prótesis en el organismo puede desencadenar una infección que, aunque poco frecuente, puede tener consecuencias devastadoras (1-3). Una integración exitosa de un implante en el organismo requiere tanto la correcta integración tisular como la ausencia de infección, así como una respuesta inflamatoria limitada (4, 5). El destino de la superficie de un biomaterial puede conceptualizarse como una carrera por dicha superficie: una competición entre la integración de las células tisulares y la adhesión bacteriana a la misma. Si las células del tejido ganan la carrera, ocupan la superficie, que se vuelve menos vulnerable para su colonización. Si, por el contrario, las bacterias vencen, el área del implante se cubre rápidamente por una biopelícula que impide la integración de los tejidos (5-7).Con el fin de prevenir este tipo de infecciones, se han estudiado numerosas modificaciones y recubrimientos antibacterianos de los biomateriales (8-10). El desarrollo y la utilización de un método sencillo y reproducible que permita el estudio de las propiedades antibacterianas y de osteointegración de un biomaterial de forma simultánea supone un paso adelante en la aproximación al fenómeno que tiene lugar in vivo...

La sonicación para el diagnóstico de infecciones asociadas al uso de implantes es una técnica útil, si bien en infección del sitio quirúrgico tras implantación de tubo de drenaje abdominal no se dispone en la actualidad de diagnóstico microbiológico basado en el procesamiento del drenaje. Hipótesis: • La recuperación de bacterias viables mediante sonicación es tiempo-dependiente. • La sonicación de las prótesis articulares aumenta la sensibilidad manteniendo la especificidad para el diagnóstico de IP. • La sonicación de espaciadores proporciona información útil sobre el pronóstico y diagnóstico de la infección. • La sonicación de tubos de drenaje representa un método útil de diagnóstico y un marcador del pronóstico de la infección del sitio quirúrgico. Objetivos: • Determinar in vitro el tiempo óptimo de exposición a ultrasonidos para la recuperación del mayor número posible de bacterias viables. • Evaluar la eficacia de una PCR múltiple y del cultivo a partir del sonicado de la prótesis para el diagnóstico de IP. • Analizar la utilidad del cultivo de espaciadores sonicados para el diagnóstico y pronóstico de esta infección. • Evaluar la utilidad del cultivo de tubos de drenaje abdominales sonicados para el diagnóstico y pronóstico de infección del sitio quirúrgico..., Sonication for the diagnosis of implant related infections is a useful technique, although in surgical site infection (SSI) there is currently no microbiological diagnosis based on the processing of the bioimplant. Hypothesis: • Recovery of viable bacteria through sonication is time dependent. • Prosthesis sonication increases sensitivity while maintaining good specificity for the diagnosis of Prosthetic Joint Infection (PJI). • Sonication of spacers provides useful information about prognosis and diagnosis of infection. • Sonication of abdominal drains is a useful method for the diagnosis of SSI and a good marker of prognosis. Objectives: • To determine, using an in vitro study, the optimal time of exposure to ultrasound waves to release the maximum number of viable bacteria. • To evaluate a multiplex PCR technique and the culture performed from the sonicate fluid of prostheses, for the diagnosis of PJI. • To evaluate the usefulness of sonicate fluid culture of spacers for the diagnosis and prognosis of infection. • To evaluate the usefulness of sonicate fluid culture of abdominal drains for the diagnosis and prognosis of SSI...

La sonicación para el diagnóstico de infecciones asociadas al uso de implantes es una técnica útil, si bien en infección del sitio quirúrgico tras implantación de tubo de drenaje abdominal no se dispone en la actualidad de diagnóstico microbiológico basado en el procesamiento del drenaje. Hipótesis: • La recuperación de bacterias viables mediante sonicación es tiempo-dependiente. • La sonicación de las prótesis articulares aumenta la sensibilidad manteniendo la especificidad para el diagnóstico de IP. • La sonicación de espaciadores proporciona información útil sobre el pronóstico y diagnóstico de la infección. • La sonicación de tubos de drenaje representa un método útil de diagnóstico y un marcador del pronóstico de la infección del sitio quirúrgico. Objetivos: • Determinar in vitro el tiempo óptimo de exposición a ultrasonidos para la recuperación del mayor número posible de bacterias viables. • Evaluar la eficacia de una PCR múltiple y del cultivo a partir del sonicado de la prótesis para el diagnóstico de IP. • Analizar la utilidad del cultivo de espaciadores sonicados para el diagnóstico y pronóstico de esta infección. • Evaluar la utilidad del cultivo de tubos de drenaje abdominales sonicados para el diagnóstico y pronóstico de infección del sitio quirúrgico...

Las infecciones producidas por micobacterias no pigmentadas de crecimiento rápido (MNPCR) se han visto incrementadas en los últimos años, especialmente debido a la gran ubicuidad en la naturaleza de dichos microorganismos, a su alta resistencia a antibióticos y desinfectantes, al empleo de medicinas alternativas y a su capacidad de formar biopelículas. Pueden causar un amplio espectro de infecciones en humanos (infección del tracto respiratorio, de piel y tejidos blandos, o asociada a la presencia de cuerpos extraños). Entre los patógenos humanos habituales se encuentran M. abscessus, M. chelonae y M. fortuitum, los cuales están distribuidos ampliamente por todo el mundo y llegan a representar aproximadamente el 90 por ciento de las infecciones por micobacterias de crecimiento rápido. En el tratamiento de infecciones causadas por MNPCR se emplean preferentemente los macrólidos, las quinolonas y amicacina, aunque no existen estudios en relación con el uso de agentes antibiopelícula en biopelículas formadas por micobacterias. En este trabajo estudiamos la sensibilidad in vitro de siete especies tipo de MNPCR (M. abscessus, M. chelonae, M. fortuitum, M. mageritense, M. mucogenicum, M. peregrinum y M. smegmatis) frente a amicacina, ciprofloxacino y claritromicina en células planctónicas (CMI) y en biopelículas (CMEB), la sensibilidad in vitro frente agentes antibiopelícula (Tween 80 y NAC) solos y en combinación de antibióticos en células planctónicas (CMI) y en biopelículas (CMEB), y las características fenotípicas (velocidad de crecimiento, superficie cubierta, porcentaje de bacterias vivas,muertas y autofluorescencia) mediante microscopía confocal láser de barrido Leica DM IRB (CLSM) usando placas sin recubrimiento e hidrofóbicas de 2x4 pocillos y las tinciones fluorescentes Nile Red y Live Dead BackLight. Mediante CLSM detectamos la presencia de autofluorescencia azul en todas las cepas estudiadas (tanto dentro de las células micobacterianas como en la matriz extrac

Partiendo de la hipótesis de que la incorporación de plata en la superficie de aleaciones de titanio empleadas en la fabricación de implantes disminuiría la adherencia bacteriana y la viabilidad de las bacterias adheridas, el objetivo de esta tesis ha sido comparar diferentes ti-pos de incorporación de plata para detectar cual de estas modificaciones es la que produce mejores resultados desde el punto de vista de prevención de la infección. Hemos comparado cinco modificaciones con plata. Para ello hemos empleado dos cepas de colección de Staphylococcus spp. y doce cepas clínicas de Staphylococcus spp. aisladas de pacientes diagnosticados de infección protésica. Todas las modificaciones presentaban alguna ventaja con respecto a la aleación de titanio. En una de ellas se combinan las propiedades antimicrobianas de plata y cobre. En otras dos se combinan las propiedades mecánicas del Diamond Like Carbon (DLC) o la zirconita con las propiedades antimicrobianas de la plata. Y en las dos últimas se busca un efecto antimicrobiano más prolongado, a través del efecto catalítico de la plata sobre el óxido de titanio y la implantación iónica de plata empleando la menor cantidad posible de plata. Nuestros resultados mostraron que todas las cepas bacterianas estudiadas presentaron una menor adherencia bacteriana para los materiales modificados con respecto a la aleación de titanio. La combinación de cobre y plata y la modificación que incorpora plata de forma iónica son las que presentaron una menor adherencia bacteriana. Por otro lado una menor concentración de plata en combinación con el óxido de titanio consiguió una mayor disminución en la adherencia bacteriana y la implantación iónica de plata por encima de 5x1016Ag no produjo diferencias significativas en la adherencia bacteriana. La combinación de plata y DLC fue la modificación que presentó un mayor efecto bactericida. Existió una amplia variabilidad en el comportamiento de las distintas cepas clínicas en relación con la

Las infecciones producidas por micobacterias no pigmentadas de crecimiento rápido (MNPCR) se han visto incrementadas en los últimos años, especialmente debido a la gran ubicuidad en la naturaleza de dichos microorganismos, a su alta resistencia a antibióticos y desinfectantes, al empleo de medicinas alternativas y a su capacidad de formar biopelículas. Pueden causar un amplio espectro de infecciones en humanos (infección del tracto respiratorio, de piel y tejidos blandos, o asociada a la presencia de cuerpos extraños). Entre los patógenos humanos habituales se encuentran M. abscessus, M. chelonae y M. fortuitum, los cuales están distribuidos ampliamente por todo el mundo y llegan a representar aproximadamente el 90 por ciento de las infecciones por micobacterias de crecimiento rápido. En el tratamiento de infecciones causadas por MNPCR se emplean preferentemente los macrólidos, las quinolonas y amicacina, aunque no existen estudios en relación con el uso de agentes antibiopelícula en biopelículas formadas por micobacterias. En este trabajo estudiamos la sensibilidad in vitro de siete especies tipo de MNPCR (M. abscessus, M. chelonae, M. fortuitum, M. mageritense, M. mucogenicum, M. peregrinum y M. smegmatis) frente a amicacina, ciprofloxacino y claritromicina en células planctónicas (CMI) y en biopelículas (CMEB), la sensibilidad in vitro frente agentes antibiopelícula (Tween 80 y NAC) solos y en combinación de antibióticos en células planctónicas (CMI) y en biopelículas (CMEB), y las características fenotípicas (velocidad de crecimiento, superficie cubierta, porcentaje de bacterias vivas,muertas y autofluorescencia) mediante microscopía confocal láser de barrido Leica DM IRB (CLSM) usando placas sin recubrimiento e hidrofóbicas de 2x4 pocillos y las tinciones fluorescentes Nile Red y Live Dead BackLight. Mediante CLSM detectamos la presencia de autofluorescencia azul en todas las cepas estudiadas (tanto dentro de las células micobacterianas como en la matriz extrac

Partiendo de la hipótesis de que la incorporación de plata en la superficie de aleaciones de titanio empleadas en la fabricación de implantes disminuiría la adherencia bacteriana y la viabilidad de las bacterias adheridas, el objetivo de esta tesis ha sido comparar diferentes ti-pos de incorporación de plata para detectar cual de estas modificaciones es la que produce mejores resultados desde el punto de vista de prevención de la infección. Hemos comparado cinco modificaciones con plata. Para ello hemos empleado dos cepas de colección de Staphylococcus spp. y doce cepas clínicas de Staphylococcus spp. aisladas de pacientes diagnosticados de infección protésica. Todas las modificaciones presentaban alguna ventaja con respecto a la aleación de titanio. En una de ellas se combinan las propiedades antimicrobianas de plata y cobre. En otras dos se combinan las propiedades mecánicas del Diamond Like Carbon (DLC) o la zirconita con las propiedades antimicrobianas de la plata. Y en las dos últimas se busca un efecto antimicrobiano más prolongado, a través del efecto catalítico de la plata sobre el óxido de titanio y la implantación iónica de plata empleando la menor cantidad posible de plata. Nuestros resultados mostraron que todas las cepas bacterianas estudiadas presentaron una menor adherencia bacteriana para los materiales modificados con respecto a la aleación de titanio. La combinación de cobre y plata y la modificación que incorpora plata de forma iónica son las que presentaron una menor adherencia bacteriana. Por otro lado una menor concentración de plata en combinación con el óxido de titanio consiguió una mayor disminución en la adherencia bacteriana y la implantación iónica de plata por encima de 5x1016Ag no produjo diferencias significativas en la adherencia bacteriana. La combinación de plata y DLC fue la modificación que presentó un mayor efecto bactericida. Existió una amplia variabilidad en el comportamiento de las distintas cepas clínicas en relación con la

Las micobacterias no pigmentadas de crecimiento rápido (MNPCR) son patógenos humanos conocidos. A pesar de ello, los estudios realizados para determinar las razones por las cuales estas Bacteria ambientales pueden ser patógenas, son escasos. Así mismo, se desconocen gran cantidad de hechos relacionados con las infecciones producidas por estos microorganismos, como son los mecanismos de resistencia antimicrobiana. Se sabe que hay una serie de factores de riesgo como pueden ser la presencia de cuerpos extraños o la realización de algún proceso quirúrgico anterior. Teniendo en cuenta lo anteriormente expuesto, la hipótesis de este trabajo es: las MNPCR forman biopelículas, y esta capacidad está relacionada con la patogenia de las mismas y su resistencia antimicrobiana. Por tanto, los objetivos del presente estudio son: 1. Evaluación del significado clínico de los distintos aislamientos de MNPCR y determinación de la relación entre las cepas procedentes de distintos pacientes. 2. Estudio de sensibilidad in vitro de los aislamientos, tanto clínicos como de colección de las MNPCR, mediante la técnica de referencia de microdilución en caldo. 3. Caracterización, tanto en cepas clínicas como de colección, de mecanismos de resistencia a macrólidos, lincosamidas, tetraciclicas y fluorquinolonas descritos en MNPCR. 4. Estudio de adherencia, formación de biopelículas, movilidad, fenotipo y su relación con el significado clínico de las MNPCR. 5. Evaluación de la penetración de los antibióticos amicacina, claritromicina y ciprofloxacino en las biopelículas desarrolladas por las MNPCR.

Las micobacterias no pigmentadas de crecimiento rápido (MNPCR) son patógenos humanos conocidos. A pesar de ello, los estudios realizados para determinar las razones por las cuales estas Bacteria ambientales pueden ser patógenas, son escasos. Así mismo, se desconocen gran cantidad de hechos relacionados con las infecciones producidas por estos microorganismos, como son los mecanismos de resistencia antimicrobiana. Se sabe que hay una serie de factores de riesgo como pueden ser la presencia de cuerpos extraños o la realización de algún proceso quirúrgico anterior. Teniendo en cuenta lo anteriormente expuesto, la hipótesis de este trabajo es: las MNPCR forman biopelículas, y esta capacidad está relacionada con la patogenia de las mismas y su resistencia antimicrobiana. Por tanto, los objetivos del presente estudio son: 1. Evaluación del significado clínico de los distintos aislamientos de MNPCR y determinación de la relación entre las cepas procedentes de distintos pacientes. 2. Estudio de sensibilidad in vitro de los aislamientos, tanto clínicos como de colección de las MNPCR, mediante la técnica de referencia de microdilución en caldo. 3. Caracterización, tanto en cepas clínicas como de colección, de mecanismos de resistencia a macrólidos, lincosamidas, tetraciclicas y fluorquinolonas descritos en MNPCR. 4. Estudio de adherencia, formación de biopelículas, movilidad, fenotipo y su relación con el significado clínico de las MNPCR. 5. Evaluación de la penetración de los antibióticos amicacina, claritromicina y ciprofloxacino en las biopelículas desarrolladas por las MNPCR.