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Gastritis is a nonspecific term that literally means inflammation of the stomach and can be used to describe symptoms related to the stomach, endoscopic findings of the gastric mucosa or histological changes characterized by infiltration of inflammatory cells of the epithelium, such as polymorphonuclear cells (PMNs). With proper nutrition, the nutrients absorbed can treat gastritis, promote digestion, heal or relieve burning in the most vulnerable stomachs. The objective was to evaluate the incidence of gastritis in bariatric patients and the importance of nutritional therapy with functional foods in the recovery of the gastric mucosa and in the improvement of the quality of life. A bibliographic review was carried out based on the virtual libraries SciELO (Scientific Electronic Library Online), Pubmed (National Library of Medicine), government sectors such as MS (Ministry of Health), WHO (World Health Organization, scientific journals and books), with exploratory qualitative approach based on the authors' experience available in the scientific literature. The study shows that Helicobacter pylori infection occurs in 24-67% of bariatric patients. Upper digestive endoscopy (UGE) is used to investigate this bacterium in the preoperative period due to its high incidence and possible association with pathological abnormalities in the stomach. Nutritional therapy as well as caloric distribution adjusted to the patient's needs aims to normalize nutritional status and promote healing. In addition, it has been observed that a balanced diet is essential for the treatment of gastritis, as functional foods can prevent, treat and even alleviate the symptoms associated with the disease. However, there are few innovative works on functional nutritional therapy; therefore, further research is needed specifically addressing diet therapy for the treatment of gastritis. Gastritis es un término inespecífico que literalmente significa inflamación del estómago y puede usarse para describir síntomas relacionados con el estómago, hallazgos endoscópicos de la mucosa gástrica o cambios histológicos caracterizados por la infiltración de células inflamatorias del epitelio, como las células polimorfonucleares (PMN). . Con una nutrición adecuada, los nutrientes absorbidos pueden tratar la gastritis, promover la digestión, curar o aliviar el ardor en los estómagos más vulnerables. El objetivo fue evaluar la incidencia de gastritis en pacientes bariátricos y la importancia de la terapia nutricional con alimentos funcionales en la recuperación de la mucosa gástrica y en la mejora de la calidad de vida. Se realizó una revisión bibliográfica en base a las bibliotecas virtuales SciELO (Scientific Electronic Library Online), Pubmed (Biblioteca Nacional de Medicina), sectores gubernamentales como MS (Ministerio de Salud), OMS (Organización Mundial de la Salud, revistas científicas y libros), con abordaje cualitativo exploratorio basado en la experiencia de los autores disponible en la literatura científica. El estudio muestra que la infección por Helicobacter pylori ocurre en el 24-67% de los pacientes bariátricos. La endoscopia digestiva alta (UGE) se utiliza para investigar esta bacteria en el período preoperatorio debido a su alta incidencia y posible asociación con anomalías patológicas en el estómago. La terapia nutricional así como la distribución calórica ajustada a las necesidades del paciente tiene como objetivo normalizar el estado nutricional y favorecer la cicatrización. Además, se ha observado que una dieta equilibrada es fundamental para el tratamiento de la gastritis, ya que los alimentos funcionales pueden prevenir, tratar e incluso paliar los síntomas asociados a la enfermedad. Sin embargo, existen pocos trabajos innovadores sobre terapia nutricional funcional; por lo tanto, se necesita más investigación que aborde específicamente la terapia dietética para el tratamiento de la gastritis. Gastrite é um termo inespecífico que significa literalmente inflamação do estômago e pode ser usado para descrever sintomas relacionados ao estômago, achados endoscópicos da mucosa gástrica ou alterações histológicas caracterizadas por infiltração de células inflamatórias do epitélio, como as células polimorfonucleares (PMNs). Com uma alimentação adequada, os nutrientes absorvidos podem tratar a gastrite, promover a digestão, curar ou aliviar a queimação nos estômagos mais vulneráveis. Objetivou-se avaliar a incidência de gastrite em pacientes bariátricos e a importância da terapia nutricional com alimentos funcionais na recuperação da mucosa gástrica e na melhoria da qualidade de vida. Realizou-se uma revisão bibliográfica fundamentada pelas bibliotecas virtuais SciELO (Scientific Eletronic Library Online), Pubmed (National Library of Medicine), setores governamentais como MS (Ministério da Saúde), OMS (Organização Mundial da Saúde, revistas científicas e livros), com enfoque qualitativo exploratório a partir da experiência dos autores disponível na literatura científica. O estudo mostra que a infecção por Helicobacter pylori ocorre em 24-67% dos pacientes bariátricos. A endoscopia digestiva alta (EDA) é utilizada para investigar essa bactéria no pré-operatório devido à sua alta incidência e possível associação com anormalidades patológicas no estômago. A terapia nutricional bem como a distribuição calórica ajustada às necessidades do paciente tem como objetivo normalizar o estado nutricional e promover a cicatrização. Além disso, observou-se que uma dieta balanceada é essencial para o tratamento de gastrite, pois os alimentos funcionais podem prevenir, tratar e até aliviar os sintomas associados à doença. No entanto, existem poucos trabalhos sobre terapia nutricional funcional inovadores; portanto, outras pesquisas são necessárias abordando especificamente a dietoterapia para o tratamento da gastrite.

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Trabalho Final do Mestrado Integrado em Medicina apresentado à Faculdade de Medicina Gastrointestinal functional disease refers to those gastroenterological entities that don’t have a well known pathophysiology and in which there is a dearth of clear definitions and objective markers of disease. Often the definition of said disease is based on sintomatologic criteria, leading to subjectiveness and lack of uniformity in the scientific discussion. These uncertainties produce difficulties in the interpretation of investigation data. Without agreement on what defines the disease it becomes hard to perform epidemiologic screenings. Notwithstanding, it is possible to recognize, in clinical context, that this is a significantly prevalent group of diseases. A lack of knowledge of the pathophysiological processes precludes further optimization of the therapeutic approach, resulting in unsatisfactory treatment. Indeed, frequently behavioral interventions are not effective enough and pharmacological therapy likewise, with the addition of possible side effects. Surgical options have a higher degree of invasiveness, risks and anatomical impact. The purpose of this work is to investigate the place of bioelectric neuromodulation in this context, as a therapeutic alternative. Increasingly the importance of the gut-brain axis is appreciated in the pathophysiology of functional gastrointestinal disease. This axis can more accurately be exploited for therapeutic effect by bioelectric neuromodulation. This treatment can intervene on different biological levels, changing motility, sphincter control, endocrinological systems and even inflammation. It is also safer than other treatment modalities, with fewer adverse effects and a reversible action. Different stimulation parameters, forms of application with more or less invasiveness and different effects accordingly make this a very versatile therapeutic option. More and more studies have tried to unveil the physiological mechanisms by which bioelectric neuromodulation operates. However, this knowledge is incomplete. Results on the efficacy of this treatment have varied significantly between studies. The very nature of functional disease is more prone to the occurrence of placebo effects, raising doubt on the conclusions of studies. It can be hard to do double-blinded trials, which produce stronger scientific evidence, because investigators usually need to participate in technical aspects of the stimulation, and patients are often able to tell when they are part of the treatment group because they can feel the stimulation. Methodological differences between studies, such has different stimulation parameters, and small sample sizes in a great deal of the studies, can also bring weaknesses to the scientific evidence. Nevertheless, it has been possible to achieve positive results in some diseases, with approval of bioelectrical neuromodulation treatments in gastroparesis and fecal incontinence. O grupo das doenças gastrointestinais funcionais inclui patologias do foro gastroenterológico que não têm uma fisiopatologia clara e bem definida, o que leva a uma ausência de marcadores objetivos de doença e de uma definição indubitável e efetivamente estabelecida. Muitas vezes a definição é feita com base em critérios relativos a sinais clínicos e sintomas, o que pode ser subjetivo, e nem sempre é uniformemente aceite pela comunidade científica. Estas incertezas produzem algumas dificuldades na interpretação destas doenças. Sem definições bem estabelecidas surgem complicações na determinação exata dos dados epidemiológicos. Ainda assim, no contexto clínico é possível reconhecer que se trata de doenças bastante prevalentes. Sendo a fisiopatologia insuficientemente conhecida, não há umaintervenção terapêutica otimizada, e como tal muitos dos tratamentos resultam em respostas insatisfatórias ou em doença recalcitrante. Efetivamente, muitas vezes as intervenções comportamentais acabam por não ser suficientes, terapias medicamentosas podem não ser satisfatoriamente eficazes e apresentar efeitos adversos, e opções cirúrgicas apresentam elevado grau de invasão e alteração anatómica, o que acarreta mais riscos. O objetivo deste trabalho é avaliar a utilidade da neuromodulação bioelétrica neste contexto, como alternativa terapêutica. É reconhecido o envolvimento do eixo que permite a comunicação do sistema nervoso com o sistema gastrointestinal na fisiopatologia destas entidades, pelo que esta via pode ser melhor explorada com a neuromodulação. Com este tratamento é possível atuar a diferentes níveis, como por exemplo a nível da motilidade, do controlo de esfíncteres, do sistema hormonal ou da inflamação. Esta técnica constitui também uma opção mais segura, pois geralmente tem poucos efeitos adversos e uma ação que é reversível. A versatilidade desta intervenção é também uma vantagem, já que podem ser escolhidos diferentes parâmetros de estimulação e modalidades de aplicação, mais ou menos invasivas, permitindo atingir diferentes efeitos conforme pretendido.O conhecimento dos mecanismos fisiológicos pelos quais a neuromodulação elétrica opera é ainda incompleto. O grau de evidência acerca da sua eficácia tem variado significativamente conforme os estudos. A própria índole funcional das patologias em questão proporciona a que se verifiquem efeitos placebo, que podem mascarar ineficácias. Não é fácil realizar estudos duplamente cegos, que têm maior credibilidade científica, devido ao facto de os investigadores terem de participar em aspetos técnicos como a decisão dos parâmetros de estimulação e da aplicação do estímulo a utilizar, para além de muitas das vezes os doentes serem capazes sentir a estimulação. Diferenças metodológicas entre estudos, como a utilização de diferentes parâmetros, e a utilização de amostras de pequena dimensão em grande parte dos estudos, também podem gerar desconfiança quanto a potenciais resultados positivos. Ainda assim, alguns estudos têm permitido a aprovação de técnicas de neuromodulação para o tratamento de algumas doenças gastrointestinais, como é o caso da gastroparesia e da incontinência fecal.

We report a case of a 63-year-old-man presenting with chronic diarrhea and weight loss while on olmesartan treatment for hypertension. Investigation showed multiple nutritional deficiencies associated with diffuse intestinal villous atrophy. Serologies for celiac disease were negative and other causes of villous atrophy were excluded. Olmesartan as a precipitant agent was suspected and withdrawn. Clinical improvement occurred in days with no need for other therapeutic measures. Follow-up at three months showed clinical remission and almost complete recovery of intestinal atrophy. Olmesartan is an angiotensin receptor blocker commonly prescribed for the management of hypertension. Spruelike enteropathy associated with this drug is a recently described entity with few cases reported. It presents with chronic diarrhea and intestinal villous atrophy and should be included in its differential diagnosis. This case intends to alert clinicians for the possibility of this event in a patient on treatment with this drug. Apresentamos o caso de um homem de 63 anos com diarreia crónica e perda ponderal. Apresentava hipertensão arterial tratada com olmesartan. A investigac¸ão complementar mostrou múltiplos défices nutricionais associados a atrofia vilositária intestinal difusa. As serologias de doença celíaca foram negativas e outras causas de atrofia vilositária foram excluídas. Suspeitou-se do olmesartan como agente precipitante, sendo este suspenso. Observou-se melhoria clínica em dias, sem necessidade de outras medidas terapêuticas. No seguimento, aos 3 meses, constatou-se remissão clínica e recuperação quase completa da atrofia intestinal. O olmesartan é um bloqueador dos recetores da angiotensina, geralmente prescrito no tratamento da hipertensão. A enteropatia ‘‘spruelike’’ associada a este fármaco é uma entidade recentemente descrita, com poucos casos reportados. Manifesta-se por diarreia crónica associada a atrofia vilositária intestinal, devendo ser incluída no seu diagnóstico diferencial. Com este caso pretende-se alertar os clínicos para a possibilidade deste evento em doentes sob tratamento com este fármaco.

As doenças inflamatórias intestinais incluem a doença de Crohn, que se manifesta maioritariamente ao nível do íleo e do cólon, mas também pode provocar alterações em qualquer região do trato gastrointestinal. Pessoas com este tipo de patologias possuem maior risco de carências nutricionais devido a várias razões relacionadas com a doença e com o próprio tratamento. Assim, o objetivo primário da alimentação é restaurar e manter o estado nutricional do indivíduo. Para tal utilizam-se alimentos, suplementos alimentares, e a nutrição entérica e parentérica. A dieta oral e os outros meios de suporte nutricional podem ser alterados durante as fases características da Doença de Crohn. O presente trabalho tem como objetivo rever as evidências mais recentes acerca do suporte nutricional na doença de Crohn e elaborar uma pequena reflexão sobre estas. Através desta reflexão, concluiu-se que a educação alimentar é fundamental para alertar os doentes em relação à variedade de alimentos que dispõem e que podem consumir, caso os tolerem, de forma a evitar as dietas extremamente restritas indicadas no passado, que contribuíam para maior frustração dos doentes e consequentemente menor qualidade de vida. A nutrição entérica é o tratamento de primeira linha para a indução da remissão da doença em fase ativa em crianças, sendo que também apresenta benefícios na remissão da doença em adultos. Por sua vez, a nutrição parentérica apenas é recomendada quando a nutrição entérica é contraindicada. Inflammatory bowel diseases include Crohn’s disease, which manifests mostly in the ileum and colon, but can also cause changes in any region of the gastrointestinal tract. People with this type of disease have a higher risk of nutritional deficiencies due to a number of reasons related to the disease and the treatment itself. Thus, the primary purpose of feeding is to restore and maintain the nutritional status of the individual by using foods, dietary supplements, and enteral and parenteral nutrition. Oral nutrition and other nutritional support means may be changed during the characteristic phases of Crohn’s Disease. This study aims to review the most recent evidence related to Crohn’s disease and to elaborate a summarised reflection on these. Through this reflection, it was concluded that food education is fundamental to warn patients regarding the variety of foods they are able to consume, if they tolerate them, in order to avoid the extremely restricted diets indicated in the past, which contributed to a greater frustration of patients and consequently lower quality of life. Enteral nutrition is the first-line treatment for the induction of remission of the disease in the active phase in children, and it also has benefits in the remission of the disease in adults. In turn, parenteral nutrition is only recommended when Enteral Nutrition is contraindicated.

Introdução e Objetivos A obstrução gastroduodenal maligna em doentes com tumores avançados causa morbilidade significativa. A colocação de próteses metálicas auto-expansíveis é um procedimento endoscópico paliativo alternativo à cirurgia, eficaz, com baixa taxa de complicações e menor morbilidade associada. O sucesso clínico pode ser avaliado pelo Gastric Outlet Obstruction Score (GOOS) e está descrito como sendo >60%. O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia do procedimento, a prevalência de reestenose e a sobrevida. Material Estudo retrospetivo em doentes consecutivos com obstrução gastroduodenal maligna submetidos a colocação de prótese metálica auto-expansível não coberta entre Janeiro/2012 e Dezembro/2016. Avaliou-se o sucesso técnico e a sobrevida e considerou-se sucesso clínico se GOOS≥1. Análise estatística realizada com IBM ® SPSS ® Statistics V24. Sumário dos Resultados Incluíram-se 31 doentes, 58% do sexo masculino, com média de idade de 71±14 anos. Os tipos de tumores mais frequentes foram adenocarcinoma gástrico (52%, n=16) e pancreático (32%, n=10). As localizações mais frequentes de obstrução foram o piloro (55%, n=17) e o bulbo (26%, n=8). O sucesso técnico foi de 100%, não tendo ocorrido complicações relacionadas com o procedimento. A eficácia clínica foi 94% (GOOS≥1). 71% dos doentes tiveram score GOOS≥2, ou seja, tolerância a dieta mole ou geral. O tempo médio até ao início da dieta oral após o procedimento foi de 34,9 horas. O tempo médio de internamento foi de 20±10 dias. Em 6 doentes (19%) houve reestenose, resolvida com a colocação bem sucedida de 2ª prótese. Em nenhum desses casos houve necessidade de intervenção cirúrgica. A sobrevida média após o procedimento foi de 56± 69 dias. Conclusões Na nossa série concluímos que a colocação de prótese metálica auto-expansível é um método paliativo seguro e eficaz na obstrução gastroduodenal maligna, permitindo alimentação por via oral na maioria dos doentes (94% com score GOOS ≥1), com uma taxa de reestenose relativamente baixa e tratada endoscopicamente. N/A

Trabalho Final de Mestrado Integrado, Ciências Farmacêuticas, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia, 2017 Submitted by Repositório FFUL (repositorio@ff.ul.pt) on 2018-12-20T11:56:45Z No. of bitstreams: 1 MICF_Ana_Patricia_Gomes.pdf: 1021610 bytes, checksum: abe4d90ecca505b0f17a831725eb2ca7 (MD5) Made available in DSpace on 2018-12-20T12:34:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MICF_Ana_Patricia_Gomes.pdf: 1021610 bytes, checksum: abe4d90ecca505b0f17a831725eb2ca7 (MD5) Previous issue date: 2017-11-24

Sarcoidosis involving the digestive tract is very rare and requires a strict differential diagnosis with other systemic granulomatous diseases. We present a case of multisystemic granulomatosis involving the stomach and colon, causing initial digestive symptoms. Pulmonary nodules, pleural effusion, ascites, hepatomegaly, splenomegaly, and mesenteric as well as retroperitoneal and axillary lymphadenopathy were subsequently identified. The reticulo-endothelial expression, the hypercalcemia and, above all, a rapid and complete resolution after corticosteroids supported the hypothesis of sarcoidosis involving the digestive tract. A brief review of digestive tract involvement in sarcoidosis and of the distinctive features of sarcoidosis with gastrointestinal involvement and Crohn’s disease with a rare form of pleuropulmonary involvement is presented. A sarcoidose com envolvimento do tubo digestivo é rara e exige um rigoroso diagnóstico diferencial com outras doenças granulomatosas sistémicas. Os autores apresentam um caso de granulomatose multissistémica com envolvimento do estômago e cólon, motivando sintomatologia digestiva exuberante inaugural. Subsequentemente, foram identificados nódulos pulmonares, derrame pleural, ascite, hepatoesplenomegália e adenopatias mesentéricas, retroperitoneais e axilares. A expressão reticulo-endotelial, a hipercalcémia e, sobretudo, a rápida e total resolução do quadro após corticoterapia sustentaram a hipótese de sarcoidose com envolvimento do tubo digestivo. Procede-se a uma breve revisão do envolvimento do tubo digestivo na sarcoidose e dos critérios distintivos entre sarcoidose com envolvimento gastrointestinal e doença de Crohn associada a uma forma rara de envolvimento pulmonar.

Introduction: The use of self-expandable metal stents (SEMS) for the treatment of postoperative leaks of the upper gastrointestinal tract is already established. However, there are discrepancies between the relatively small caliber of the esophageal stents available and the postsurgical luminal size, which may determine an inadequate juxtaposition. As colonic stents have a bigger diameter, they might be more adequate. Additionally, stents with a larger diameter might have a lower risk of migration. Materials and Methods: The aim of this study was to evaluate the efficacy and complications associated with the use of colonic fully covered SEMS (FSEMS) in the treatment of postoperative leaks in critical patients. All patients with postoperative leaks of the upper gastrointestinal tract treated with colonic stents (Hanarostent® CCI) between 2010 and 2013 were retrospectively included. Results: Four patients with postoperative leaks were treated with colonic SEMS. The underlying surgeries were a gastric bypass, an esophagogastrectomy for Boerhaave syndrome, a primary repair of esophagopleural fistula due to Boerhaave syndrome, and an esophagectomy due to esophageal cancer. The leaks were detected on average 17 days after the initial surgery. All patients needed admission to a critical care unit after index surgery. Stent placement was technically feasible in all patients. The median residence time of the stents was 7 weeks, and no complications were verified when they were removed. There were no cases of stent migration. The treatment was successful in all patients, with complete healing of the leaks. Discussion and Conclusions: The placement of colonic FSEMS seems to be successful and safe in the treatment of postoperative leaks of the upper gastrointestinal tract. Introdução: A utilização de próteses metálicas auto-expansíveis (SEMS) para o tratamento de fístulas e deiscências cirúrgicas do trato gastrointestinal alto está já estabelecida. No entanto, há discrepâncias entre o calibre relativamente pequeno das próteses esofágicas disponíveis e o diâmetro luminal pós-cirúrgico, o que pode determinar uma justaposição inadequada. Visto que as próteses destinadas ao cólon têm um maior calibre, estas poderão ser mais adequadas nestas situações. Adicionalmente, as próteses com maior diâmetro poderão ter um risco mais baixo de migração. Materiais e Métodos: O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia e complicações associadas ao uso de SEMS do cólon totalmente cobertas (FSEM) no tratamento das fístulas/deiscências cirúrgicas em doentes críticos. Todos os doentes com fístulas/deiscências cirúrgicas do trato digestivo alto tratados com próteses do cólon (Hanarostent® CCI) entre 2010 e 2013 foram incluídos retrospetivamente. Resultados: Quatro doentes com as caraterísticas referidas foram tratados com próteses do cólon. As cirurgias subjacentes foram um bypass gástrico, uma esogagogastrectomia para síndroma de Boerhaave , uma rafia de uma fístula esofagopleural secundária a síndrome de Boerhaave e uma esofagectomia para cancro esofágico. As fístulas/deiscências foram detetadas em média 17 dias após a cirurgia inicial. Todos os doentes necessitaram de admissão numa unidade de cuidados intensivos após a cirurgia índice. A colocação da prótese foi tecnicamente bem-sucedida em todos os doentes. O tempo mediano de permanência da prótese foi 7 semanas, não se registando complicações na altura da sua remoção. Não ocorreu migração da prótese em nenhum doente. O tratamento foi eficaz em todos os doentes, com cicatrização completa das fístulas/deiscências. Discussão e Conclusões: A colocação de FSEMS do colon é uma opção terapêutica segura e eficaz nos doentes com fístulas/deiscências cirúrgicas do trato gastrointestinal superior.

We report a case of a 63-year-old-man presenting with chronic diarrhea and weight loss while on olmesartan treatment for hypertension. Investigation showed multiple nutritional deficiencies associated with diffuse intestinal villous atrophy. Serologies for celiac disease were negative and other causes of villous atrophy were excluded. Olmesartan as a precipitant agent was suspected and withdrawn. Clinical improvement occurred in days with no need for other therapeutic measures. Follow-up at three months showed clinical remission and almost complete recovery of intestinal atrophy. Olmesartan is an angiotensin receptor blocker commonly prescribed for the management of hypertension. Spruelike enteropathy associated with this drug is a recently described entity with few cases reported. It presents with chronic diarrhea and intestinal villous atrophy and should be included in its differential diagnosis. This case intends to alert clinicians for the possibility of this event in a patient on treatment with this drug. Apresentamos o caso de um homem de 63 anos com diarreia crónica e perda ponderal. Apresentava hipertensão arterial tratada com olmesartan. A investigação complementar mostrou múltiplos défices nutricionais associados a atrofia vilositária intestinal difusa. As serologias de doença celíaca foram negativas e outras causas de atrofia vilositária foram excluídas. Suspeitou-se do olmesartan como agente precipitante, sendo este suspenso. Observou-se melhoria clínica em dias, sem necessidade de outras medidas terapêuticas. No seguimento, aos 3 meses, constatou-se remissão clínica e recuperação quase completa da atrofia intestinal. O olmesartan é um bloqueador dos recetores da angiotensina, geralmente prescrito no tratamento da hipertensão. A enteropatia “spruelike” associada a este fármaco é uma entidade recentemente descrita, com poucos casos reportados. Manifesta-se por diarreia crónica associada a atrofia vilositária intestinal, devendo ser incluída no seu diagnóstico diferencial. Com este caso pretende-se alertar os clínicos para a possibilidade deste evento em doentes sob tratamento com este fármaco.

The recognition of an enteropathy caused by olmesartan is recent. It was first described in 2012 by the Mayo Clinic, which presented 22 clinical cases. Olmesartan is a highly prescribed drug and the differential diagnosis of a sprue-like enteropathy is very wide, so it is important to be aware of this pathology. We report a case of a 67-years-old man, with arterial hypertension under treatment with olmesartan, with a 4-months history of diarrhea and weight lost. He was admitted three times in our Department during this period of time. An initial diagnosis was made of lymphocytic colitis but he did not respond to treatment with corticosteroids. There was a high suspicion of celiac disease, so the patient started a gluten-free diet but still there were no symptomatic changes. The patient underwent several blood and imaging tests which were negative. Due to the suspicion of an enteropathy caused by drugs, olmesartan was stopped and the patient showed a significant improvement of his symptoms. The exact pathophysiology of this entity remains to be elucidated. It may affect all gastrointestinal tract and mimic a refractory celiac disease as well as a lymphocytic colitis due to similar symptoms and histology. It is expected more cases like this in the future due to high use of olmesartan in current clinical practice. So, it is important to all gastroenterologists to be aware of this pathology and take it into consideration when putting together a differential diagnosis. A enteropatia por Olmesartan não estava reconhecida até ao ano de 2012 quando a “Mayo Clinic” apresentou 22 casos. Apesar de existirem poucos casos publicados, é importante familiarizar os clínicos com aspectos referentes a esta patologia, visto tratar-se de um fármaco muito prescrito e o diagnóstico diferencial da enteropatia “sprue-like” ser muito amplo. Apresentamos o caso de um paciente em tratamento com Olmesartan por hipertensão arterial. É internado 3 vezes num prazo de 4 meses por quadro de diarreia e perda importante de peso. Inicialmente, é diagnosticado de colite linfocítica que não responde ao tratamento com corticóides e, posteriormente, de provável doença celíaca que não responde a dieta sem glúten. Realizam-se inúmeros exames complementários, analíticos e de imagem, sem concluir-se nenhum diagnóstico. Perante a suspeita de uma enteropatia por Olmesartan, retira-se o fármaco definitivamente e reinicia-se o glúten na dieta, confirmando-se uma melhoria espectacular do quadro clínico. Durante os internamentos não tomava Olmesartan, sendo o motivo da melhoria clínica durante os mesmos. Os mecanismos associados a esta patologia são desconhecidos. Pode afectar todo o aparelho digestivo e mimetizar uma doença celíaca refractária e/ou colite linfocítica devido a semelhança dos sintomas e da anatomia patológica. Devido à elevada prescrição deste medicamento, é esperável que no futuro se diagnostiquem mais casos, motivo pelo qual, os clínicos, principalmente os gastroenterologistas, devem de considera-la no diagnóstico diferencial.

Probiotics bacteria such as Bifidobacterium ssp and Lactobacillus ssp are important for the health of human beings; therefore , whenever consumed , they increase the number and the activity of intestinal microorganisms with useful properties to the host , being essential for the production of symbiotic products. Probiotics has a positive effect on many diseases, facilitating to the formation of the probiotic barrier in the intestine, thus hindering the settling of microbiota for pathogenic bacteria. Some of the described mechanisms for this impediment are: competition in the intestine favoring the bacteria probiotics, stimulation of the Immunologic System thus facilitating the defense of the organism, reduction of cholesterol levels with reduction of the LDL cholesterol, improvement of the protein digestion and increase of vitamin absorption. Foods with probiotics are known as Probiotics Food, as for example, fermented milk which nowadays helps people with intestine cancer, Crohn’s disease , diarrheas caused for virus and bacteria and traveler’s diarrhea. However, for these probiotics bacteria to be really efficient, they must be resistant to the gastric juice and bile, so that they can reach the microbiota and perform their functions. This work had the purpose to point out the importance of probiotics bacteria such as Bifidobacterium and/or Lactobacillus for the health of human beings. Bactérias probióticas como Bifidobactéria e Lactobacilos são importantes para a saúde humana, pois quando consumidas, podem aumentar o número e a atividade dos microrganismos intestinais com propriedades úteis ao hospedeiro. São muitas as doenças em que os probióticos tem efeitos benéficos, facilitando a formação da chamada barreira probiótica no intestino, impedindo, assim, a colonização da microbiota por bactérias patogênicas. Alguns dos mecanismos descritos para esse impedimento é a competição que ocorre no intestino favorecendo as bactérias probióticas, o estimulo do sistema imunológico facilitando a defesa do organismo, significativa redução dos níveis de colesterol total com diminuição do LDL colesterol, melhora da digestão de proteínas e aumento da absorção de vitaminas e minerais. Os alimentos que contém probióticos são chamados de Alimentos Funcionais, como, por exemplo, os leites fermentados que ajudam hoje pessoas com câncer de colo de intestino, doença de Cronh, diarréias causadas por vírus e bactérias, e diarréia do viajante. Porém, para que essas bactérias probióticas sejam realmente eficazes, é necessário que sejam resistentes ao suco gástrico e à bile, para que possam chegar até a microbiota e desempenhem suas funções. Esse trabalho salienta a importância das bactérias probióticas como Bifidobacteria e/ou Lactobacilos para a saúde humana.

Contexto - Os mecanismos pelos quais o H. pylori produz diferentes quadros patológicos no estômago e no duodeno não são totalmente conhecidos. Considerando a diversidade geográfica relacionada à prevalência dos fatores de virulência desse microrganismo e sua associação com o desenvolvimento de diferentes doenças, vem se intensificando a pesquisa de marcadores de patogenicidade, como o CagA e os alelos do VacA por técnicas moleculares. Objetivos - O objetivo desse estudo foi investigar a presença da infecção por H. pylori, e a frequência dos diferentes genótipos dessa bactéria em pacientes com doenças gastrointestinais da nossa região, procurando estabelecer sua associação com os achados histopatológicos. Métodos - Em estudo prospectivo, foram coletadas amostras de 554 pacientes com diferentes doenças gastrointestinais (gastrite, úlcera duodenal, úlcera gástrica e câncer gástrico), atendidos em hospital de referência para todo o Estado do Pará, localizado na região metropolitana de Belém. Foram analisados dados obtidos através de questionário epidemiológico, relacionados ao sexo e faixa etária desses pacientes. A presença do H. pylori e do genótipo bacteriano foi detectada utilizando a PCR. As biopsias gástricas foram avaliadas histologicamente. Resultados - Observou-se uma prevalência de 91% da infecção pelo H. pylori, sendo mais frequente nos portadores de úlcera gástrica e câncer gástrico, nos quais houve predomínio do sexo masculino e a idade foi maior que a dos outros dois grupos estudados. O genótipo bacteriano predominante foi o s1m1cagA positivo, sendo mais frequentes entre os pacientes com úlcera gástrica, úlcera duodenal e câncer gástrico. Houve associação significante das cepas com o genótipo s1m1cagA positivo com maior grau de inflamação, atividade neutrofílica e desenvolvimento de metaplasia intestinal. Conclusão - Nosso estudo demonstra a alta incidência da infecção pelo H. pylori nos pacientes analisados em nosso meio, especialmente em portadores de úlcera e câncer gástricos. As cepas virulentas s1m1cagA+ foram predominantes e estavam associadas a lesões mais graves. Background - The mechanisms whereby Helicobacter pylori produces different pathological manifestations in the stomach and duodenum are not fully understood. Considering the geographic diversity in the prevalence of virulence factors of this microorganism and their association with the development of different diseases, the search for pathogenicity markers such as CagA and VacA alleles by molecular techniques has intensified. Objectives - To investigate the presence of H. pylori infection and the frequency of different genotypes of this bacterium in patients with gastrointestinal diseases from Northern Brazil, and to establish their association with the histopathological findings. Methods - In a prospective study, samples were collected from 554 patients with different gastrointestinal diseases (gastritis, duodenal ulcer, gastric ulcer, and gastric cancer) seen at a referral hospital attending the entire State of Pará, located in the metropolitan region of Belém. Data such as gender and age obtained with an epidemiological questionnaire were analyzed. The presence of H. pylori and the bacterial genotype were investigated by PCR. Gastric biopsies were assessed histologically. Results - The prevalence of H. pylori infection was 91%. Infection was more frequent among patients with gastric ulcer and gastric cancer. In these groups, there was a predominance of men and older patients when compared to the other two groups studied. The predominant bacterial genotype was s1m1cagA+, which was more frequent among patients with gastric ulcer, duodenal ulcer and gastric cancer. A significant association was observed between s1m1cagA+ strains and a higher degree of inflammation, neutrophil activity and development of intestinal metaplasia. Conclusion - The present study demonstrates a high incidence of H. pylori infection in the patients analyzed, especially among those with gastric ulcer and gastric cancer. Virulent s1m- 1cagA+ strains predominated and were associated with more severe lesions. VINAGRE, I. D. F.; MARTINS, L. C. Universidade Federal do Pará

Mestrado em Biomedicina Molecular The Helicobacter pylori is a gram-negative microaerophilic bacterium. Humans are the principal reservoir and it has been estimated that about 50% of the world population is infected by this bacterium, even though only about 20% of the patients present symptoms. The H. pylori colonizes the human gastric mucosa and is associated to several gastrointestinal diseases, such chronic gastritis, peptic ulceration and gastric cancer. Peroxisomes are membrane-enclosed subcellular organelles, which can be virtually found in all eukaryotic cells. They are involved in several metabolic reactions, with emphasis for the fatty acid oxidation, lipid biosynthesis and hydrogen peroxide detoxification. It is increasingly accepted that peroxisomes are more than simple metabolic organelles within cells. Previous studies of viral infections have demonstrated that peroxisomes are involved in the cellular innate immune response. It has also been suggested that all bacterial and viral pathogens may be exposed to peroxisomal recognition. Thus, it becomes important to better study the role of the peroxisomes in response to infections. In the present work we have analysed the possible peroxisomal alterations in morphology, number and enzymatic function in infected cells with the main aim of exploring a possible role for peroxisomes in H. pylori infection. The obtained results suggest that H. pylori infection does not affect significantly the peroxisomal morphology, number or localization. However, the results obtained suggested that H. pylori infection affects the amount of peroxisomal catalase, probably due to an increase of ROS in the cellular environment, as a consequence of the bacterial infection. Helicobacter pylori é uma bactéria gram-negativa microaerofílica. Os seres humanos são o seu principal reservatório e estima-se que cerca de 50% da população mundial encontra-se infetada, embora apenas cerca de 20% dos pacientes apresentem sintomas. H. pylori coloniza a mucosa gástrica humana e está associada a várias doenças gastrointestinais, como gastrite crónica, úlcera péptica e cancro gástrico. Os peroxissomas são organelos de membrana simples, que se encontram virtualmente em todas as células eucarióticas. Nestes ocorrem várias reações metabólicas, com destaque para a oxidação dos ácidos gordos, a biossíntese de lípidos e a desintoxicação do peróxido de hidrogénio. É cada vez mais aceite que os peroxissomas desempenham muito mais do que simples funções metabólicas. Em estudos anteriores foi demonstrado que os peroxissomas estão envolvidos na resposta imune em infeções virais. Para além disso, foi sugerido que tanto os patogénios bacterianos como os virais podem ser expostos ao reconhecimento peroxissomal. Assim, torna-se importante estudar melhor o papel dos peroxissomas em resposta a infeções. No presente trabalho foram analisadas possíveis alterações peroxisomais relativamente à sua morfologia, número e função enzimática, em células infetadas, com o principal objetivo de explorar o possível papel dos peroxissomas na infeção por H. pylori. Os resultados obtidos sugerem que a infeção por H. pylori não afeta significativamente a morfologia, número ou localização dos peroxissomas. No entanto, os resultados sugerem que a infeção por H. pylori afeta a quantidade de catalase peroxissomal, provavelmente devido a um aumento das EROs no meio celular, resultante da infeção bacteriana.

Mestrado em Biomedicina Molecular Submitted by Daisy Tavares (daisytavares@ua.pt) on 2015-06-12T10:53:07Z No. of bitstreams: 1 Tese.pdf: 2042598 bytes, checksum: ef7fcb87557e65afc8cae9f7033d9dfb (MD5) Made available in DSpace on 2015-06-12T10:53:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese.pdf: 2042598 bytes, checksum: ef7fcb87557e65afc8cae9f7033d9dfb (MD5) Previous issue date: 2015-01-09

A Shigelose é uma causa importante de morbilidade e mortalidade na idade pediátrica. Objectivos: Caracterizar a clínica, epidemiologia e alterações laboratoriais da Shigelose numa população infantil da área Amadora-Sintra e identificar factores associados ao aparecimento de complicações. População e Métodos: Estudo retrospectivo de 1/7/1997 a 30/6/2001. Analisaram-se idade, sexo, raça, condições socio-económicas, contexto epidemiológico, quadro clínico e complicações, exames laboratoriais, terapêutica e medidas preventivas. Resultados: De um total de 40 crianças, 67% eram do sexo feminino, 64% de raça negra, 70% tinham entre 1-4 anos de idade e 67% más condições socioeconómicas. Em 12 casos (30%) havia história de viagem/contacto com viajantes a países africanos. A clínica caracterizou-se por diarreia (100%) com muco e/ou sangue (60%), alteração do estado geral (85%), desidratação (85%) e febre (83%). Verificaram-se complicações em 11 (28%) crianças: insuficiência renal (7), anemia grave (6), anemia e insuficiência renal por síndrome hemolítico-urémico (5), hipertensão arterial(3), enteropatia grave (6), alterações neurológicas (4), sépsis (2) e morte (1). Identificou--se a espécie em 21 casos (52%): 7 (17 %) dysenteriae, 7 (17%) flexneri, 6 (15%) sonnei e 1 (3%) boydi. As resistências antibióticas foram significativas para o trimetoprim-sulfametoxazol (65%), ampicilina (63%) e amoxicilina-ácido clavulânico (46%). A maioria das crianças (72%) efectuou apenas terapêutica sintomática. A antibioticoterapia foi realizada em 11 (28%) dos doentes e 6 (15%) necessitaram de cuidados intensivos. O contexto epidemiológico foi o único factor com significado estatístico associado às complicações. Comentário: A elevada percentagem de complicações, o padrão epidemiológico de países em desenvolvimento e a modificação das resistências antibióticas, tornam necessário um maior investimento nas medidas preventivas., Portuguese Journal of Pediatrics, Vol 34 No 5 (2003)

Leaks duodenais (LD) são complicacoes com elevada morbimortalidade representando internamentos prolongados e reintervenções. O objectivo é avaliar os resultados da abordagem médica e cirurgica dos doentes com LD como complicação de cirurgia gastroduodenal no nosso hospital. Estudo observacional, analítico, longitudinal, retrospectivo. Foram incluidos os doentes com LD após cirurgia gastroduodenal entre 2008 e 2012. Foram excluidos os doentes com LD por trauma. De 172 doentes submetidos a cirurgia gastroduodenal major entre 2008 e 2012, foram incluidos 10 doentes por LD – 6 por cirurgia por doença ulcerosa peptica complicada e 4 pós gastrectomia por doença maligna. Idade = 64,4±10,4 anos, três do sexo feminino. Todos os doentes foram reintervencionados (7,9 dias após primeira cirurgia): resutura duodenal (n=2), duodenostomia terminal com folley (n=4) para leaks do coto duodenal pós gastrectomia e duodenostomia lateral com folley para deiscencias de piloroplastia (n=4). 9 doentes foram admitidos na UCI com estadias de 14,5 dias [3-45]. Em 6 doentes foi necessária reposição hidroeletrolitica agressiva por alterações iónicas e agravamento da função renal. 7 doentes complicaram com infecções nosocomiais. Em 6 doentes removeu-se a duodenostomia (média=27,3±2,51 dias) após duodenografia pela duodenostomia confirmando normal progressão e ausencia extraluminal de contraste. Dois doentes necessitaram de uma terceira intervenção. Mortalidade cirurgica = 40%. O Leak duodenal acresce morbilidade e mortalidade relevante e associou-se a falência de órgão e complicações sépticas. A duodenostomia com Folley associada a uma abordagem agressiva das complicações médicas em Cuidados Intensivos pode ser uma opção válida.

Doutoramento em Bioquímica Helicobacter pylori is a bacterial pathogen that affects more than half of the world’s population with gastro-intestinal diseases and is associated with gastric cancer. The cell surface of H. pylori is decorated with lipopolysaccharides (LPSs) composed of three distinct regions: a variable polysaccharide moiety (O-chain), a structurally conserved core oligosaccharide, and a lipid A region that anchors the LPS to the cell membrane. The O-chain of H. pylori LPS, exhibits unique oligosaccharide structures, such as Lewis (Le) antigens, similar to those present in the gastric mucosa and are involved in interactions with the host. Glucan, heptoglycan, and riban domains are present in the outer core region of some H. pylori LPSs. Amylose-like glycans and mannans are also constituents of some H. pylori strains, possibly co-expressed with LPSs. The complexity of H. pylori LPSs has hampered the establishment of accurate structure-function relationships in interactions with the host, and the design of carbohydrate-based therapeutics, such as vaccines. Carbohydrate microarrays are recent powerful and sensitive tools for studying carbohydrate antigens and, since their emergence, are providing insights into the function of carbohydrates and their involvement in pathogen-host interactions. The major goals of this thesis were the structural analysis of LPSs from H. pylori strains isolated from gastric biopsies of symptomatic Portuguese patients and the construction of a novel pathogen carbohydrate microarray of these LPSs (H. pylori LPS microarray) for interaction studies with proteins. LPSs were extracted from the cell surface of five H. pylori clinical isolates and one NCTC strain (26695) by phenol/water method, fractionated by size exclusion chromatography and analysed by gas chromatography coupled to mass spectrometry. The oligosaccharides released after mild acid treatment of the LPS were analysed by electrospray mass spectrometry. In addition to the conserved core oligosaccharide moieties, structural analyses revealed the presence of type-2 Lex and Ley antigens and N-acetyllactosamine (LacNAc) sequences, typically found in H. pylori strains. Also, the presence of O-6 linked glucose residues, particularly in LPSs from strains 2191 and NCTC 26695, pointed out to the expression of a 6-glucan. Other structural domains, namely ribans, composed of O-2 linked ribofuranose residues were observed in the LPS of most of H. pylori clinical isolates. For the LPS from strain 14382, large amounts of O-3 linked galactose units, pointing to the occurrence of a galactan, a domain recently identified in the LPS of another H. pylori strain. A particular feature to the LPSs from strains 2191 and CI-117 was the detection of large amounts of O-4 linked N-acetylglucosamine (GlcNAc) residues, suggesting the presence of chitin-like glycans, which to our knowledge have not been described for H. pylori strains. For the construction of the H. pylori LPS microarray, the structurally analysed LPSs, as well as LPS-derived oligosaccharide fractions, prepared as neoglycolipid (NGL) probes were noncovalently immobilized onto nitrocellulosecoated glass slides. These were printed together with NGLs of selected sequence defined oligosaccharides, bacterial LPSs and polysaccharides. The H. pylori LPS microarray was probed for recognition with carbohydratebinding proteins (CBPs) of known specificity. These included Le and blood group-related monoclonal antibodies (mAbs), plant lectins, a carbohydratebinding module (CBM) and the mammalian immune receptors DC-SIGN and Dectin-1. The analysis of these CBPs provided new information that complemented the structural analyses and was valuable in the quality control of the constructed microarray. Microarray analysis revealed the occurrence of type-2 Lex and Ley, but not type-1 Lea or Leb antigens, supporting the results obtained in the structural analysis. Furthermore, the H. pylori LPSs were recognised by DC-SIGN, a mammalian lectin known to interact with this bacterium through fucosylated Le epitopes expressed in its LPSs. The -fucose-specific lectin UEA-I, showed restricted binding to probes containing type-2 blood group H sequence and to the LPSs from strains CI-117 and 14382. The presence of H-type-2, as well Htype- 1 in the LPSs from these strains, was confirmed using specific mAbs. Although H-type-1 determinant has been reported for H. pylori LPSs, this is the first report of the presence of H-type-2 determinant. Microarray analysis also revealed that plant lectins known to bind 4-linked GlcNAc chitin oligosaccharide sequences bound H. pylori LPSs. STL, which exhibited restricted and strong binding to 4GlcNAc tri- and pentasaccharides, differentially recognised the LPS from the strain CI-117. The chitin sequences recognised in the LPS could be internal, as no binding was detected to this LPS with WGA, known to be specific for nonreducing terminal of 4GlcNAc sequence. Analyses of the H. pylori LPSs by SDS-PAGE and Western blot with STL provided further evidence for the presence of these novel domains in the O-chain region of this LPS. H. pylori LPS microarray was also applied to analysis of two human sera. The first was from a case infected with H. pylori (H. pylori+ CI-5) and the second was from a non-infected control.The analysis revealed a higher IgG-reactivity towards H. pylori LPSs in the H. pylori+ serum, than the control serum. A specific IgG response was observed to the LPS isolated from the CI-5 strain, which caused the infection. The present thesis has contributed to extension of current knowledge on chemical structures of LPS from H. pylori clinical isolates. Furthermore, the H. pylori LPS microarray constructed enabled the study of interactions with host proteins and showed promise as a tool in serological studies of H. pyloriinfected individuals. Thus, it is anticipated that the use of these complementary approaches may contribute to a better understanding of the molecular complexity of the LPSs and their role in pathogenesis. O Helicobacter pylori é uma bactéria patogénica que afeta mais de metade da população mundial com doenças gastrointestinais e está associado ao cancro gástrico. A superfície celular do H. pylori é decorada com lipopolissacarídeos (LPSs), que são constituídos por três regiões distintas: uma região polissacarídica variável (“O-chain”), um “core” oligossacarídico estruturalmente conservado e o lípido A, que ancora o LPS à membrana celular. A “O-chain” apresenta estruturas oligossacarídicas únicas, tais como os antigénios de Lewis (Le), que são semelhantes às presentes na mucosa gástrica e que estão envolvidas na interação com o hospedeiro. Glucanas, heptoglicanas e ribanas também constituem o “core” dos LPSs do H. pylori. Glicanas do tipo amilose e mananas também são referidas como integrantes de estirpes de H. pylori, possivelmente co-expressas com os LPSs. A complexidade dos LPSs do H. pylori tem dificultado o estabelecimento de uma relação entre a estrutura e a função em interação com o hospedeiro, que é crucial para o desenvolvimento de vacinas. Os microarrays de carboidratos são ferramentas recentes no estudo de antigénios e de novos ligandos oligossacarídicos, e que têm revelado a sua função em interações patogéniohospedeiro. O trabalho desta tese teve como objetivos principais a análise estrutural de LPSs de estirpes do H. pylori isoladas de biópsias gástricas de Portugueses sintomáticos e a construção de um microarray de LPSs do H. pylori (H. pylori LPS microarray) para estudos funcionais de interação com proteínas. Os LPSs foram extraídos da superfície celular de cinco isolados clínicos do H. pylori e de 1 estirpe de referência (NCTC 26695) pelo método fenol/água, fracionados por cromatografia de exclusão molecular e analisados por cromatografia em fase gasosa acoplada à espetrometria de massa. Os oligossacarídeos resultantes da hidrólise ácida parcial do LPS foram analisados por espetrometria de massa de electrospray. Para além de estruturas existentes no “core”, a análise estrutural, revelou a presença de antigénios de Le do tipo-2, Lex e Ley, e de sequências de resíduos de N-acetillactosamina (LacNAc), tipicamente encontrados em H. pylori. A identificação de resíduos de glucose ligados na posição O-6 nos LPSs das estirpes 2191 e NCTC 26695, indicou a presença de 6-glucanas. Outros domínios, nomeadamente ribanas, compostos por resíduos de ribofuranose ligados em posição O-2, foram identificados nos LPSs da maioria dos isolados clínicos. A presença de uma galactana (O-3 galactose), recentemente identificada noutra estirpe do H. pylori, foi também identificada para a estirpe 14382. Nos LPSs das estirpes 2191 e CI-117, a elevada quantidade de resíduos de Nacetilglucosamina (GlcNAc) ligados na posição O-4, sugeriu a presença de glicosídeos semelhantes à quitina (4GlcNAc) que, ao nosso conhecimento, ainda não foram descritos para o H. pylori. Para a construção do novo microarray, os LPSs analisados e os neoglicolípidos (NGLs) derivados de frações oligossacarídicas dos LPSs foram imobilizados não-covalentemente em suportes de nitrocelulose, juntamente com NGLs com sequências oligossacarídicas definidas, LPSs de outras bactérias e outros polissacarídeos. O microarray foi avaliado com proteínas de especificidade conhecida, que incluíram anticorpos monoclonais (mAbs) específicos para os antigénios de Le e estruturas relacionadas, um módulo de ligação a carboidratos (CBM), lectinas de plantas e os recetores do sistema imunitário DC-SIGN e Dectina-1. A análise com estas proteínas forneceu informação complementar à análise estrutural, para além de ter sido útil para o controlo de qualidade do microarray. A análise do microarray revelou a ocorrência de antigénios de Le do tipo-2, Lex e Ley, mas não do tipo-1, Lea e Leb, o que está de acordo com os resultados obtidos na análise estrutural. Os LPSs do H. pylori foram reconhecidos pela DC-SIGN, que é uma lectina conhecida por interagir com esta bactéria através dos antigénios de Le expressos nos seus LPSs. A lectina UEA-I, específica para -fucose, mostrou ser restrita para determinantes do grupo sanguíneo H do tipo-2 e para os LPSs das estirpes CI-117 e 14382. A ocorrência de antigénios do tipo H-2 e do tipo H-1 nos LPSs destas estirpes foi corroborada utilizando mAbs específicos. Os antigénios do tipo H-1 já tinham sido identificados em H. pylori, mas os do tipo H-2 foram identificados pela primeira vez neste estudo. Os LPSs do H. pylori foram também reconhecidos por lectinas com especificidade para oligossacarídeos de quitina (4-linked GlcNAc). A STL, que mostrou uma ligação restrita aos tri- e pentassacarídeos, reconheceu distintivamente o LPS da estirpe CI-117, que poderão ser internas, dada a ausência de ligação detectada pela lectina WGA, com especificidade para terminais não redutores 4GlcNAc. A análise dos LPSs do H. pylori por SDS-PAGE e Western blot com a STL apontou para a presença destas estruturas na “O-chain” deste LPS. O microarray dos LPSs do H. pylori foi utilizado para a análise do soro de um indivíduo infetado com H. pylori (H. pylori+ CI-5), e mostrou um aumento na detecção de IgGs para os LPSs de H. pylori no soro H. pylori + quando comparado com o soro de um indivíduo não-infetado (H. pylori-). A resposta observada foi específica para o LPS do isolado da estirpe CI-5, causadora da infeção. O trabalho desenvolvido nesta tese contribuiu para a extensão do conhecimento estrutural dos LPSs dos isolados clínicos do H. pylori. A construção do microarray dos LPSs de H. pylori permitiu o estudo de interações com proteínas do hospedeiro, e mostrou ser útil na análise serológica de indivíduos infetados com esta bactéria. Deste modo, espera-se que o uso destas técnicas complementares possa contribuir para uma melhor compreensão da complexidade molecular dos LPSs e do seu papel na patogenicidade.

Introdução: A Gastroenterite Aguda (GEA) é uma patologia com importante morbilidade sendo a segunda causa de internamento na idade pediátrica.Objetivo: Caracterizar a GEA, em crianças internadas em dois hospitais da área de Lisboa com diferentes características demográficas. Métodos: Estudo prospetivo de maio 2011 a junho 2012. Pesquisados potenciais agentes etiológicos por técnicas convencionais e de biologia molecular em amostras de fezes e analisados dados epidemiológicos e clínicos. Resultados: Total de 140 amostras de crianças com GEA com identificação do agente em 83,6%: 64,3% vírus, 27,9% parasitas e 21,4% bactérias. Os agentes mais frequentes foram rotavírus (26,4%), norovírus II (13,6%), enterovírus (12,1%), Microsporidia (11,4%), Escherichia coli (9,3%), Campylobacter jejuni (7,9%), Giardia sp. (5,7%), Cryptosporidium sp. (5%) e Salmonella sp. (4,3%). Coinfecções (2 ou mais agentes) em 40 doentes (28,6%). Mediana de idade de 1,4 anos (min-5 dias; max-17 anos) sendo a etiologia viral mais frequente abaixo dos 5 anos (p, Portuguese Journal of Pediatrics, Vol. 44 No. 4 (2013)

Mestrado em Biologia Molecular e Celular Thirty-five Listeria monocytogenes isolates previously collected from food (n=20) and human patients suffering from listeriosis (n=15), with different antibiotic resistance profiles were characterized and compared based on: (i) their ability to survive through sequential conditions that parallel the digestive tract; (ii) their capacity to survive extreme pH values; (iii) the potential relationship, between antibiotic resistance and the resistance of L. monocytogenes isolates to the stress conditions investigated. The response was shown to be strain- and stress-dependent and no relation between food and clinical isolates was observed (p > 0.05). The results showed that L. monocytogenes is able to survive under extreme acid and alkaline conditions and did not survive when submitted to simulated sequential gastro-intestinal transit, i.e. the activity of bile salts after combined action of hydrochloric acid and pepsin. No correlation was observed between antibiotic resistance and response to the stress conditions applied to the isolates investigated. Trinta e cinco isolados de Listeria monocytogenes provenientes de alimentos (n=20) e pacientes humanos com listeriose (n=15) e com diferentes perfis de resistência a antibióticos foram caracterizados e comparados com base na: (i) sua capacidade de sobrevivência à passagem pelo trato gastrointestinal simulado, (ii) sua capacidade de sobrivência a condições extremas de pH, (iii) potencial relação entre a resistência a antibióticos e a resistência às condições de stresse investigadas. A resposta às várias condições de stresse demonstrou ser estirpe- e stresse-dependente e não foi observada nenhuma relação entre isolados alimentares e clínicos (p > 0.05). Os resultados mostraram que L. monocytogenes sobrevive em condições ácidas e alcalinas extremas e não sobrevive quando submetida à passagem pelo trato gastrointestinal simulado, ou seja, à atividade dos sais biliares após ação conjunta do ácido clorídrico e pepsina. Não foi observada qualquer correlação entre a resistência a antibióticos e a resposta às condições de stresse aplicadas para os isolados estudados.

Submitted by Helena Fortuna (hfortuna@ubi.pt) on 2013-03-25T11:14:42Z No. of bitstreams: 1 Tese final.pdf: 1871843 bytes, checksum: ff5315850222c613b8daf2cadbe4a32b (MD5) Made available in DSpace on 2013-03-25T11:14:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese final.pdf: 1871843 bytes, checksum: ff5315850222c613b8daf2cadbe4a32b (MD5) Previous issue date: 2012-04

Fil: Barril, Patricia Angélica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Fil: Barril, Patricia Angélica. Universidad Nacional del Comahue. Facultad de Ciencias Médicas; Argentina. Barril, P. A. (2011). Epidemiología molecular y filogenia intragenotípica de cepas de rotavirus humano grupo a circulantes en Córdoba, Argentina, durante el período 1979-2006. (Tesis doctoral). Universidad Nacional de Quilmes, Bernal, Argentina. Los rotavirus humanos grupo A son los principales agentes etiológicos de gastroenteritis aguda en niños en todo el mundo y una importante causa de muerte por deshidratación crítica en los países en desarrollo. Morfológicamente, los rotavirus son partículas icosahédricas que consisten en 11 segmentos de ARN doble cadena, rodeados por una triple cápside proteica. Las proteínas de la cápside externa, VP7 y VP4, contienen los epitopes que inducen anticuerpos neutralizantes específicos en el hospedador infectado y definen los serotipos G (VP7) y P (VP4). Los principales G y P tipos (G1-G4, P[8]) han sido blanco para el desarrollo de las vacunas actualmente licenciadas. Ante la introducción de una nueva vacuna en un área geográfica determinada es necesario conocer la epidemiología natural de base del virus en la región. Con este objeto, se analizó la circulación de las variantes genotípicas e intragenotípicas G y P de rotavirus grupo A en Córdoba, Argentina, durante el período 1979-2006. El trabajo de investigación mostró una dinámica compleja de circulación de genotipos G y P, que estuvo caracterizada por aspectos locales propios, tales como una alta tasa de infecciones mixtas y co-circulación de distintos genotipos. Los tipos G1 y P[8] fueron los dominantes a lo largo del tiempo y el genotipo G9, emergente a nivel mundial durante la última década, se detectó en Córdoba desde el año 1980. Durante todo el período estudiado se observó un mismo comportamiento de circulación para los genotipos G4, G2 y P[4]. Así, el genotipo G4 mostró una circulación continua durante los 28 años de estudio, sin llegar a ser, durante todo el período estudiado, el G tipo dominante, y G2 y P[4] revelaron frecuencias de detección cíclicas y acompañadas en el tiempo. El genotipo G3 que circuló durante 25 años en baja frecuencia y esporádicamente, mostró un incremento significativo en el año 2006. Los genotipos mundialmente infrecuentes, P[6], P[9], G5 y G8, se identificaron en Córdoba en frecuencias de circulación menores al 5%. Los sistemas de vigilancia clínica y ambiental revelaron una distribución similar de genotipos G de rotavirus con características genéticas y antigénicas comparables. De este modo, la detección de virus a partir de aguas residuales sería una fuente alternativa a la vigilancia clínica para el monitoreo molecular de la epidemiología de rotavirus en la comunidad. El análisis evolutivo de cepas mostró la circulación continua de una misma variante genética del genotipo emergente G9, aislada de muestras de pacientes infectados y aguas ambientales. Por el contrario, los genotipos de mayor prevalencia a nivel local, G1 y P[8], revelaron sustituciones temporales de variantes intragenotípicas y antigénicas. La distribución de G1 y P[8] en distintos linajes no se correlacionó con sustituciones aminoacídicas presentes en regiones antigénicas o variables, respectivamente. De este modo, la circulación continua y dominante de estos genotipos en el tiempo no estaría ligada a la emergencia de variantes antigénicas en la comunidad sino que estaría facilitada por la capacidad replicativa significativamente mayor de las cepas G1 y potencialmente P[8] respecto a otros genotipos. Así, la historia natural de circulación de rotavirus en Córdoba refleja una historia de fuerzas y balances entre los genotipos dominantes, infrecuentes, emergentes y/o de circulación cíclica que conforman el escenario epidemiológico local. Las cepas G1 y P[8] de circulación natural y vacunales presentaron diferencias aminoacídicas en sitios antigénicos, las cuales podrían tener implicancias en la eficacia de las vacunas actualmente licenciadas. Es entonces de importancia que la introducción de las vacunas sea acompañada por sistemas de vigilancia clínica o ambiental a los fines de evaluar su impacto en la dinámica de circulación y diversidad de cepas de RV-A en la comunidad. Group A human rotaviruses are the main etiologic agents of acute gastroenteritis in children worldwide and a major cause of death by critical dehydration in developing countries. Morphologically, rotaviruses are icosahedral particles consisting of 11 segments of double-stranded RNA surrounded by a triple capsid protein. The outer capsid proteins, VP7 and VP4, contain epitopes that induce neutralizing antibodies in the infected host and define specific G (VP7) and P (VP4) serotypes. The main G and P types (G1-G4, P [8]) have been targeted for the development of currently licensed vaccines. Previous to the introduction of a new vaccine in a given geographic area is necessary to know the natural baseline epidemiology of the virus in the region. With this aim, the G and P rotavirus genotype and intragenotipic circulation was analyzed in Cordoba, Argentina, during the period 1979-2006. The research showed a complex dynamic of G and P genotypes circulation, which was characterized by own local features, such as a high rate of mixed infections and co-circulation of different genotypes. G1 and P[8] types were dominants over time and G9 genotype, emergent worldwide during the last decade, was detected in Córdoba since 1980. G4, G2 and P[4] types depicted a same circulation performance throughout the studied period. Thus, G4 circulation was continuous during the 28-years period of study, but was not, during the whole studied period, the dominant genotype; G2 and P[4] types revealed cyclic detection rates that were accompanied in the time. G3 type, which circulated in low rates and sporadically during 25-years, showed a significant increase in the year 2006. Worldwide unusual genotypes, P[6], P[9],G5 and G8, were identified in Córdoba at circulation rates lower than 5%. Clinical and environmental surveillance revealed a similar distribution of rotavirus G genotypes with comparable genetic and antigenic characteristics. Thus, virus detection from wastewater would be an alternative source to clinical surveillance to molecular monitoring rotavirus epidemiology in the community. Evolutionary analysis of strains showed continuous circulation of the same genetic variant of the emerging G9 genotype, strains isolated from samples of infected patients and environmental waters. On the other hand, the local most prevalent genotypes, G1 and P[8], revealed temporal sustitutions of genetic and antigenic variants. The distribution of G1 and P[8] in lineages did not correlate with the presence of amino acid substitutions in antigenic or variable regions, respectively. In this way, the continuous and dominant circulation of G1 and P[8] over time would not be related to the emergence of antigenic variants in the community, but would be provided by the significantly higher fitness of G1 and potencially P[8] strains than the other genotypes. Thus, rotavirus natural circulation history in Córdoba depicts a history of forces and balances between the dominant, infrequent, emergent and/or cyclic circulation genotypes which constitute the local epidemiological scenario. Naturally circulating and vaccinal G1 and P[8] strains showed amino acid differences in antigenic sites, which could have implications in the effectiveness of currently licensed vaccines. Therefore, the introduction of vaccines must be accompanied by clinical or environmental surveillance systems to assess their impact on the dynamics of circulation and diversity of RV-A strains in the community.

As últimas décadas têm sido marcadas por enormes avanços nos meios de diagnóstico gastrointestinal, quer por estudos endoscópicos, quer por modalidades de imagem “cross-section”. Este constante avanço tecnológico, obriga assim a uma redefinição que se vive actualmente, nas indicações para a realização dos exames fluoroscópicos para estudo do tubo digestivo. Efectivamente, o presente trabalho tem como base uma a recolha e análise descritiva dos exames fluoroscópicos do tubo digestivo realizados no Serviço de Imagiologia do Hospital Fernando Fonseca durante o período de 2004 a 2010. Através desta recolha de dados foi possível concluir que o nosso serviço acompanha o panorama internacional, demonstrando um global declínio no número de exames fluoroscópicos realizados, bem como uma redefinição das indicações para estes, reconhecendo actualmente como principais indicações para o uso destes exames, a avaliação única e em tempo real da motilidade, o estudo de complicações pós cirúrgicas e a inexorável capacidade de resposta imediata.

OBJETIVOS: Em pacientes gravemente enfermos, enquanto as disfunções de outros órgãos ou sistemas são rapidamente progressivas, os sinais de disfunção do trato gastrointestinal são frequentemente sutís e pouco valorizados. Contudo, a região esplâncnica tem muito provavelmente um papel importante no desenvolvimento e ou manutenção da resposta inflamatória e disfunção de múltiplos órgãos e sistemas. O objetivo deste estudo foi avaliar a prevalência e os fatores preditivos de disfunção prolongada do trato gastrointestinal. MÉTODOS: Estudo de coorte, retrospectivo e observacional. Foi realizado na unidade de terapia intensiva clínico - cirúrgica de 24 leitos de um hospital universitário. Foram incluídos todos os pacientes entre agosto de 2003 e janeiro de 2004 e que tiveram tempo de permanência na unidade de terapia intensiva superior a 4 dias. A função do trato gastrointestinal foi avaliada diariamente de acordo com uma classificação que considera o exame físico (presença ou ausência de ruídos hidro-aéreos ou distensão) e o nível e tipo de suporte nutricional ofertado. RESULTADOS: Foram incluidos 128 pacientes. A média de idade foi até 56 ± 19 anos, 81 pacientes (63,3%) eram do sexo masculino e 91 pacientes (77,3%) cirúrgicos. Disfunção do trato gastrointestinal prolongada ocorreu em 35 % dos pacientes, com uma prevalência 3,3 vezes maior em pacientes cirúrgicos (27%) do que em pacientes clínicos (8%). Em 38 pacientes (29,7%) foi realizada endoscopia digestiva alta. Lesões erosivas e/ou hemorrágicas foram observadas em ¾ do total das endoscopias digestivas altas. A frequência de disfunção do trato gastrointestinal foi significativamente mais alta em pacientes com edema moderado a grave (51%) do que em pacientes sem edema (22,5%) (p

Mestrado em Toxicologia G. lamblia, agente causal da giardiose, é considerado o parasita protozoário patogénico mais frequente no intestino do Homem, associado a situações de grande morbilidade em todo o mundo e a causa mais comum de diarreia em humanos. De todos os compostos disponíveis, o metronidazol continua a ser considerado o fármaco de eleição no tratamento desta parasitose. Contudo, o número crescente de casos de resistência registados tem vindo a justificar a necessidade de desenvolver metodologias que permitam avaliar a sensibilidade de G. lamblia aos fármacos disponíveis. Espera-se com este estudo contribuir para o desenvolvimento e implementação de metodologias expeditas que permitam avaliar, in vitro, a susceptibilidade deste parasita aos fármacos habitualmente prescritos. Pretende-se obter uma metodologia de simples execução, em microescala e portanto menos dispendiosa, que permita alcançar resultados mais rápidos e mais fiáveis. Neste sentido, este trabalho teve como objectivo determinar a sensibilidade de G. lamblia ao metronidazol recorrendo às metodologias de inibição de aderência (ADE), diacetato de fluoresceína (FDA), iodeto de propídio (PI) e um derivado tetrazolium (XTT). Foram obtidos valores de IC50 de 2,99μM, 9,87μM e 8,93μM para a metodologia ADE, FDA e XTT, respectivamente. A metodologia PI não foi considerada uma vez que apresentou resultados incongruentes. Os resultados permitiram observar que as metodologias FDA e XTT apresentaram valores de IC50 mais próximos. Na metodologia ADE, registaram-se valores cerca de três vezes inferiores. A selecção da melhor metodologia deve ter em conta o mecanismo de actuação do fármaco em estudo bem como a disponibilidade de equipamento necessário à execução das diferentes metodologias. ABSTRACT: G. lamblia, giardiasis cause, is the most frequent pathogenic protozoan found in human, associated with great morbility in the whole world and most common cause for diarrhea. Metronidazole is the most often drug used in giardiasis treatment. However, the increasing number of metronidazole resistance cases justifies the need to develop G. lamblia viability assessment methodologies to other available drugs. It is hoped that this study contributes to the development and implementation of resourceful methodologies of in vitro susceptibility assessment of this parasite to commonly prescribed drugs. The aim is to obtain a simple methodology for microscale implementation, therefore less expensive, and to achieve faster and more reliable results. This study wanted to determine G. lamblia sensitivity to metronidazole using inhibition of adherence method (ADE), fluorogenic dyes fluorescein diacetate (FDA) and propidium iodide (PI) and a tetrazolium derivate (XTT) reduction. Sensibility results estimated IC50 values of 2,99μM, 9,87μM and 8,93μM for ADE, FDA and XTT, respectively. PI was not considered due to inconsistent results. FDA and XTT IC50 values were similar. Values obtained with ADE were three times lower. The best methodology selection must take into account the drug mechanism of action and the equipment availability to different methodologies implementation.

Mestrado em Microbiologia A presença de microrganismos patogénicos que provêm do esgoto e que são libertados nas águas ambientais determinam a qualidade da água e consequentemente afectam a saúde pública. A gastroenterite viral constitui uma das doenças humanas mais comuns em todo o mundo sendo transmitida feco-oralmente através do consumo e utilização de águas contaminadas com vírus entéricos como o rotavírus, norovírus e adenovírus. Por esse motivo, é epidemiologicamente relevante documentar a presença dos principais vírus entéricos em águas superficiais e fezes humanas. A detecção dos agentes etiológicos responsáveis pelas gastroenterites virais em amostras de águas, de modo a avaliar o risco da sua libertação no meio ambiente, requer a prévia concentração dos vírus presentes nas amostras. Com o advento das técnicas moleculares tornou-se possível a eficaz detecção de vírus presentes em amostras de águas e fezes. Actualmente, em amostras clínicas são geralmente utilizados testes imunocromatográficos como VIKIA® Rota-Adeno (BioMérieux) que permitem a detecção qualitativa dos vírus. Para testar a sensibilidade e especificidade do método imunológico VIKIA® Rota-Adeno utilizado na dupla detecção de rotavírus A e adenovírus em amostras de fezes de pacientes com sintomas gastrointestinais do Hospital Infante D. Pedro, em Aveiro, entre Dezembro de 2008 e Julho de 2009, 18 amostras foram analisadas recorrendo ao método imunológico VIKIA® Rota- Adeno e moleculares (PCR). A detecção de Rotavírus A usando o kit VIKIA® Rota-Adeno, revelou a sua presença em 61% das amostras, enquanto a realização de RT-PCR permitiu a sua detecção em 56% das amostras, revelando uma concordância nos resultados obtidos pelos dois métodos. Relativamente à identificação de Adenovírus, a utilização do kit imunocromatográfico permitiu a sua detecção em apenas 6% das amostras, enquanto por nested PCR foi possível detectar a sua presença em 89% das amostras analisadas, demonstrando uma diferença significativa entre a capacidade de detecção de adenovírus usando as duas metodologias. A comparação dos resultados obtidos usando ambas as abordagens indica que, quando se usou métodos moleculares o adenovírus foi o agente que ocorreu com maior frequência, enquanto que utilizando o kit imunocromatográfico o rotavírus A foi o mais frequente. A sequenciação dos produtos amplificados por PCR das amostras para as quais os resultados através do kit imunocromatográfico foram negativos, permitiu a confirmação da presença de rotavírus humano do grupo A e de adenovírus humano serotipo 41 em algumas amostras de fezes. Através destes resultados observou-se que o kit VIKIA® Rota-Adeno é um método rápido e simples de diagnóstico de infecções por rotavírus A, no entanto poderá não ser suficientemente sensível e específico para detectar adenovírus, por esse motivo a utilização de métodos moleculares como o PCR parecem ser a alternativa mais eficiente. Neste trabalho observou-se também a presença simultânea de rotavírus A e adenovírus em 50% das amostras de fezes analisadas, quando detectadas por métodos moleculares, levanta a questão se um único vírus é responsável pela doença ou se a sua etiologia é provocada pela presença dos dois vírus. Estudos passados demonstraram que rotavírus A e adenovírus são agentes causadores de gastroenterites, neste estudo observou-se esse facto. Neste trabalho analisou-se também 467 amostras de fezes de pacientes com sintomas gastrointestinais através do kit imunocromatográfico, onde foram detectadas positivamente rotavírus A em 12.6% amostras, enquanto apenas 1% das amostras foram positivas para adenovírus. De modo a avaliar a incidência de gastroenterites virais através de informações recolhidas em 474 casos, foi possível concluir que a maioria dos pacientes com sintomas gastrointestinais tinha menos de 5 anos de idade e que o menor número de casos ocorre nos meses de Verão (entre Julho e Setembro). No que diz respeito à infecção por rotavírus concluiu-se também que a maioria das infecções ocorreu em crianças com idade pré-escolar e apresenta sazonalidade nos meses de inverno (de Dezembro a Março). No que diz respeito à infecção por adenovírus só foi possível observar que a maioria dos casos também ocorre em crianças com idade pré-escolar. Para a detecção de vírus em águas residuais foram utilizados dois métodos de concentração (ultracentrifugação e floculação), tendo sido a sua eficiência de recuperação determinada por quantificação das partículas virais obtidas em cada um dos métodos por microscopia de epifluorescência. As amostras de água residual foram recolhidas em Março e Julho de 2009 na zona de tratamento secundário da ETAR Sul de Aveiro. A detecção da presença de rotavírus A e adenovírus por métodos moleculares (RT-PCR e nested PCR, respectivamente) em todas as amostras de águas analisadas, foi possível após a concentração prévia dos vírus. Com base na simplicidade, rapidez e eficácia de recuperação, a ultracentrifugação (68% de eficiência de recuperação) revelou ser o melhor método de concentração de vírus comparativamente com a floculação em que a taxa de recuperação média registada foi de 38% e o procedimento tem uma duração de pelo menos 16 horas. O facto do protocolo da ultracentrifugação ser relativamente rápido e não envolver a adição de reagentes, permite uma visão ecológica global dos vírus presentes nas amostras de água, recorrendo-se posteriormente, por exemplo, a abordagens metagenómicas ou de pirosequenciação. No entanto na floculação é adicionado leite desnatado, HCl e NaOH à amostra podendo afectar a comunidade viral. Wastewater-borne pathogenic microorganisms that are released into the environmental waters affect water quality, and consequently human health. Viral gastroenteritis is one of the most common human illnesses worldwide, contracted by human consumption and use of polluted waters contaminated with enteric virus, namely rotavirus, norovirus and adenovirus. Therefore, it is epidemiological relevant to document the presence of etiological agents of these diseases in environmental waters and human faeces. In order to evaluate the risk of sewage discharges into the environment it is necessary to detect pathogenic viruses, and for that, it is required a virus concentration from superficial waters before the detection. The advent of molecular analysis allows an effective and more sensitive detection of viruses in samples like water or faeces. In clinics are usually used immunochromatographic assays such as VIKIA® Rota-Adeno (BioMérieux) that allows qualitative virus detection. To test the efficacy of immunochromatographic kit in virus detection, between December 2008 and July 2009, 18 faecal samples of gastroenteritis symptomatic patients from Hospital Infant D. Pedro, in Aveiro, were analyzed using simultaneously the immunologic method VIKIA® Rota-Adeno and molecular methods (PCR). The presence of rotavirus A was detected in 61% using the VIKIA® Rota-Adeno kit and in 55% of the samples using RT-PCR, demonstrating a similarity in the sensitivity of both methods for rotavirus A detection. In the case of adenovirus, 6% of the samples were positive when detected by VIKIA® Rota-Adeno kit, while the nested PCR revealed a positive result in 89% of the samples, indicating a significant difference in the detection power of the two methods. Through the analysis of this results, using the immunochromatographic method, rotavirus A were the most frequent while using molecular methods the most frequent was adenovirus. The presence of the viruses in positive amplifications was confirmed by sequencing analysis indicating the presence of human rotavirus A and human adenovirus 41 in all samples that were positive through PCR. The results obtained also indicate that the VIKIA® Rota-Adeno kit is a rapid and efficient diagnosing method, however might not be sensitive enough. Consequently, PCR approach might be the best detection method, since is a higher specific method but is more time consuming. In this work it was also observed simultaneous detection of rotavirus A and adenovirus in 50% of the samples analyzed using molecular methods, raising the question of whether a single virus is responsible for the illness or wither both viruses are involved causing the disease. To evaluate the incidence of viral gastroenteritis, two of the main enteric viruses implicated in gastroenteritis were detected in faecal samples of patients with gastroenteritis symptoms. From January 2006 to July 2009 were collected 474 faecal samples of patients with gastroenteritis symptoms. Among 474 samples 467 were analyzed by VIKIA® Rota-Adeno kit and was detected rotavirus A infections in 12.6% samples while only 1% of the samples were positive for adenovirus. Through the clinical information of the 474 cases was possible to demonstrate that the majority of the patients with gastroenteritis symptoms had less than 5 years and the number of cases was lower in summer months (from July to September). Rotavirus infection also had a higher incidence in children younger than 5 years old and the peak of the cases occurred in winter months (between December and March). Relatively to adenovirus infection, was just possible to conclude that the majority of the cases occur in children with pre-scholar age. To detect viruses in residual waters two concentration methods were compared (ultracentrifugation and flocculation), using the total viral number determined by epifluorescent microscopy before and after water concentration by both concentration methods. The samples were collected in March and July 2009 at a wastewater secondary treatment in Aveiro. Rotavirus A and adenovirus were positively detected by molecular analysis (RT-PCR and nested PCR, respectively) in all residual water samples analyzed after virus concentration. The results based on simplicity, rapidity and recovery rate, the ultracentrifugation was the best method with 68% of virus recovery, while flocculation had 38% of recovery and took at least 16 hours of procedure. The rapidity of ultracentrifugation method could avoid structural changes in viral community allowing the analysis of the sample by metagenomics or pyrosequencing, giving a global ecologic view of the viruses present in water samples. In flocculation method the viral community could be more affected, since was added skimmed milk to form flakes and was added HCl and NaOH to low and high the pH.

Mestrado em Microbiologia Submitted by Bella Nolasco (bellanolasco@ua.pt) on 2011-05-20T14:22:33Z No. of bitstreams: 1 4212.pdf: 891652 bytes, checksum: 52d4cf642c6ea924ccdb7a5bc2f43aec (MD5) Made available in DSpace on 2011-05-20T14:22:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 4212.pdf: 891652 bytes, checksum: 52d4cf642c6ea924ccdb7a5bc2f43aec (MD5) Previous issue date: 2009

Mestrado em Química e Qualidade dos Alimentos A Helicobacter pylori é uma bactéria Gram-negativa que coloniza o estômago de cerca de metade da população mundial. Em Portugal a prevalência é de cerca de 80%. Esta bactéria está associada ao desenvolvimento de patologias do foro gástrico, como gastrite, úlcera péptica, carcinoma gástrico e linfoma de MALT. Alguns testes actualmente disponíveis para a detecção da Helicobacter pylori são invasivos e desconfortáveis ou são dispendiosos. Com este trabalho pretendeu-se desenvolver uma metodologia não invasiva com recurso à microextracção em fase sólida acoplada à cromatografia em fase gasosa e à espectrometria de massa (SPME/GC-MS) com vista à detecção da presença da Helicobacter pylori através de amidas alifáticas que, em contacto com a bactéria, são convertidas nos ácidos alifáticos correspondentes. Numa primeira etapa, a metodologia foi optimizada relativamente à fase estacionária, tendo sido estudados três tipos de fibras: Divinilbenzeno/Carboxen/Polidimetilsiloxano (DVB/Car/PDMS), Carbowax/Divinilbenzeno (CW/DVB) e Poliacrilato (PA). A fase estacionária CW/DVB foi a escolhida pois apresenta a maior eficiência extractiva relativamente aos compostos a analisar: o ácido propiónico e o ácido butírico. Foram feitos ensaios experimentais a partir de uma amidase comercial e de culturas da estirpe de Helicobacter pylori J99 obtidas a partir de um isolado clínico de modo a avaliar a formação de ácidos carboxílicos produzidos pelas amidases em presença de amidas alifáticas. Os resultados obtidos indicam que, após adição de propionamida e/ou de butiramida ao meio contendo a bactéria, ocorre a formação dos respectivos ácidos carboxílicos, por acção da amidase bacteriana sobre as amidas adicionadas. Estes ácidos formados são voláteis passando para a fase de vapor em quantidades que permitem a sua detecção e quantificação por GC-MS. ABSTRACT: The Helicobacter pylori is a Gram-negative bacterium that colonizes the human stomach of half of the world population. In Portugal, the prevalence is around 80%. This bacterium is associated to the development of gastric pathologies such as gastritis, peptic ulcer, gastric carcinoma, and MALT lymphoma. Some currently available tests for the detection of the Helicobacter pylori are uncomfortable, mainly invasive or expensive. A non invasive methodology was developed using a solid phase microextraction and gas chromatography coupled to the mass spectrometry (SPME/GC-MS). Its aim is the detection of the presence of the Helicobacter pylori with aliphatic amides that, when in contact with the bacteria, are converted into the corresponding aliphatic acids. In a first period, the methodology was optimised relatively to the stationary phase. Three types of fibres were studied: Divinylbenzene/Carboxen/Polydimethylsiloxane (DVB/Car/PDMS), Carbowax/Divinylbenzene (CW/DVB), and Polyacrylate (PA). The stationary phase CW/DVB was chosen because it presents higher extractive efficiency in relation to the compounds under analysis: propionic and butyric acids. Experimental studies were done with the commercial enzyme amidase and Helicobacter pylori J99 cultures of “clinical isolated”, as a way to evaluate the formation of carboxylic acids produced by the amidases in presence of aliphaticamides. The results obtained indicate that, after the addition of propionamide and/or butyramide to the environment containing the bacteria, the formation of the respective carboxylic acids occurs by action of the bacterial amidase to the added amides. The acids formed are volatile, migrating to the vapour phase in quantities that permit their detection and quantification by GC-MS.

Helicobacter pylori coloniza o estômago humano e está associada a várias gastropatologias. Este trabalho teve como objectivo o estudo de dois membros da família das OMP de H. pylori, o gene jhp870, possível marcador da úlcera péptica, e o seu homólogo jhp649. A prevalência destes genes, a variabilidade no número de cópias, a sua localização genómica e o estudo dos polimorfismos, ao nível da sequência de bases e respectivas proteínas, foram avaliados numa amostra de estirpes clínicas de H. pylori, isoladas de doentes de diferentes regiões geográficas, apresentando diversas gastropatologias. No geral, ambos os genes apresentam uma elevada similaridade quer ao nível de nucleótidos quer de aminoácidos, observando-se, no entanto, uma região média muito polimórfica. Nesta, foram identificadas seis variantes alélicas (alelo AI a AVI), com diferentes prevalências nos dois genes. O alelo AI é exclusivo e predominante do gene jhp870, e o AII predominante do gene jhp649. A observação da constância destes alelos em todas as estirpes, independentemente da sua origem geográfica, patologia, tipo de população, sugere a sua antiguidade, e evidencia a sua conservação ao longo da evolução. Mais, ao existir esta conservação numa região polimórfica, implica que estes alelos podem ter influência na função da proteína., Helicobacter pylori colonizes the human stomach and is associated with various gastropathologies. The present study aims to research two members of the H. pylori OMP family, jhp870 gene, an ulcer marker candidate, and his homologue jhp649. The prevalence of these genes, number of copies, genomic localization and sequence polymorphisms, were evaluated in a panel of clinical H. pylori strains isolated of patients from different geographic regions, presenting different gastropathologies. Both genes displayed a high level of nucleotide and amino acid similarity. However, an extremely polymorphic region was observed, corresponding to the middle region of each gene, which shows six allelic variants (allele AI to AVI) with different prevalence in the two genes. Allele AI is exclusive and predominant of jhp870 gene, and AII is predominant of jhp649 gene. The maintenance of the alleles in all strains, independently of the geographical origin, pathology and population, suggests their antiquity, and shows conservation up along the evolution. Furthermore, the existence of an allelic conservation in a polymorphic region, implicates that these alleles can influence the protein function., Revista Lusófona de Ciências e Tecnologias da Saúde

A propósito de um caso clínico, os autores fazem uma revisão da literatura sobre angiodisplasia gastrointestinal como causa comum de hemorragia oculta no idoso, sua associação com estenose aórtica e a eficácia da terapêutica estroprogestativa na sua prevenção e tratamento.

The recognition of an enteropathy caused by olmesartan is recent. It was first described in 2012 by the Mayo Clinic, which presented 22 clinical cases. Olmesartan is a highly prescribed drug and the differential diagnosis of a sprue-like enteropathy is very wide, so it is important to be aware of this pathology.We report a case of a 67-years-old man, with arterial hypertension under treatment with olmesartan, with a 4-months history of diarrhea and weight lost. He was admitted three times in our Department during this period of time. An initial diagnosis was made of lymphocytic colitis but he did not respond to treatment with corticosteroids. There was a high suspicion of celiac disease, so the patient started a gluten-free diet but still there were no symptomatic changes. The patient underwent several blood and imaging tests which were negative. Due to the suspicion of an enteropathy caused by drugs, olmesartan was stopped and the patient showed a significant improvement of his symptoms.The exact pathophysiology of this entity remains to be elucidated. It may affect all gastrointestinal tract and mimic a refractory celiac disease as well as a lymphocytic colitis due to similar symptoms and histology. It is expected more cases like this in the future due to high use of olmesartan in current clinical practice.So, it is important to all gastroenterologists to be aware of this pathology and take it into consideration when putting together a differential diagnosis.

Submitted by Ana Quininha (ana.quininha@chlc.min-saude.pt) on 2014-04-21T12:08:40Z No. of bitstreams: 1 AMP 1989 163.pdf: 310513 bytes, checksum: 97d305bbd2e3b24e05901ee64d9cd013 (MD5) Made available in DSpace on 2014-04-21T12:08:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AMP 1989 163.pdf: 310513 bytes, checksum: 97d305bbd2e3b24e05901ee64d9cd013 (MD5) Previous issue date: 1989

As doenças gastrointestinais representam um importante problema de saúde pública em todo mundo, desta forma a identificação da origem de transmissão é de grande importância para a avaliação e atribuição de risco. Os estudos epidemiológicos de casocontrolo são usados para identificar os fatores de risco associados à transmissão das doenças. A salmonelose, doença causada por vários serotipos de Salmonella spp., pode ser transmitida ao homem de diversas formas. De uma forma geral, os casos esporádicos de salmonelose não partilham o mesmo fator de risco ou rota de contaminação, de modo que os estudos que medem a relação de probabilidades (“odds ratio”, OR) de qualquer fonte de transmissão podem ocultar os riscos reais tornando-os mais difíceis de detetar (Fullerton et al., 2012). Por exemplo, o frango assado é uma importante fonte de contaminação por Salmonella spp., todavia a maioria das porções de frango não estão contaminadas, de modo que a probabilidade de uma pessoa adquirir salmonelose pelo consumo de frango assado é apenas um pouco superior à das pessoas que não consomem frango assado (controlo). A case-control study is used to identify causal effects of diseases transmission at population level. The objective of this study was to synthesize the association between sporadic salmonellosis and two broad routes of exposure (meat consumption and animals contact) by combining the odds-ratio outcomes extracted from case-control studies found in bibliographic search platforms. A systematic review was conducted through the search engines of Science Direct, Pubmed, Scielo, ISI Web of Science and Scopus. From 69 case-control studies, odds-ratios (ORs), population, design/model/analysis type and probable risk factors were extracted. Subsequently, the global ORs for the transmission routes considered were estimated by mixed-effects metaanalysis models. The obtained results identified that, in the mixed population, consumption of pork is the main source of salmonellosis (pooled OR=2.662), followed by occupational exposure to animals/meat (pooled OR=2.583) and consumption of nonclassified meats, BBQ and game meat (pooled OR=2.442 – 2.459). On the other hand, children were more likely to acquire salmonellosis through contact with farm animals (pooled OR=5,977) followed by consumption of pork meat (pooled OR=3.193) and contact with pets (pooled OR=3.155). A Dra. Ursula Gonzales Barron agradece o apoio financeiro da Fundação para a Ciência e a Tecnologia através do programa Investigador FCT, nível de desenvolvimento (IF/00570). info:eu-repo/semantics/publishedVersion