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Este estudo teve como objetivo avaliar a eficiência dos antioxidantes ácido ascórbico, carvão ativado e polivinilpirrolidona (PVP) no enraizamento de miniestacas de quatro clones de Eucalyptus grandis x E. urophylla. As miniestacas foram coletadas em minijardim clonal desenvolvido em sistema de hidroponia em canaletas. Experimentalmente, foram testadas cinco concentrações de ácido ascórbico, quatro de carvão ativado e sete de PVP, nos quatro clones estudados. Foram realizadas avaliações quanto ao porcentual de enraizamento e crescimento das miniestacas enraizadas em casa de vegetação, casa de sombra e pleno sol. Concluiu-se que as respostas dos clones à aplicação dos antioxidantes ácido ascórbico, carvão ativado e PVP foram variadas e específicas, indicando efeito genotípico (clone) quanto às características avaliadas. The objective of the present work was to evaluate the efficiency of the antioxidants ascorbic acid, activated carbon and polyvinylpyrrolidone (PVP) on the rooting of mini-cuttings of four clones of Eucalyptus grandis x E. urophylla. The mini-cuttings were collected in a mini-clonal hedge developed in a hydroponic system in small gutters. Experimentally, five concentrations of ascorbic acid, four concentrations of activated carbon and seven concentrations of PVP were tested, for the four clones studied. Evaluation of the rooting percentage and growth of the rooted mini-cuttings were made in a greenhouse, a shade house and in the open sun. The obtained results led to the conclusion that there's a strong correlation between the genotypic differences of the analyzed materials and the plants rooting and their survival success as a response to the use of antioxidants ascorbic acid, activated carbon and polyvinylpyrrolidone (PVP) on different clones.

Cold storage allows citrus budstick conservation for several months, although gradual bud viability loss and abscission of leaf petioles is observed. This study aimed to maintain bud viability reducing leaf petiole abscission in budsticks of 'Baianinha' and 'Valencia' sweet oranges (C. sinensis Osbeck), 'Tahiti' lime (C. latifolia Tanaka), and 'Murcott' tangor (C. sinensis × C. reticulata), using NAA, GA3, 2,4-D, and low temperature storage. After a 15-minutes-immersion in distilled water and NAA and GA3 solutions at concentrations of 10, 100, 500 and 1000 µmol L-1, and 2,4-D solutions at concentrations of 1, 10, 50 and 100 µmol L-1, the shoots were stored in polyethylene bags at 5 ± 1ºC for 74 days. Percentage of leaf petiole abscission, fresh and dry matter losses, bud viability, and growth flush were evaluated. NAA and 2,4-D had the highest efficiency for petiole abscission inhibition, reaching almost 99% of success. The packaging system and shoot storage under low temperature efficiently reduced fresh and dry matter losses. Bud viability of 'Baianinha', 'Valencia' and 'Murcott' shoots was not reduced by storage, maintaining above 95% of grafting success. NAA, GA3 and 2,4-D treatments had no influence on sprout growth. O armazenamento refrigerado possibilita a conservação de hastes porta-borbulhas de citros por vários meses, embora ocorra perda gradual da viabilidade das borbulhas e abscisão dos pecíolos foliares. Este estudo objetivou manter a viabilidade das borbulhas e reduzir a abscisão dos pecíolos foliares das hastes porta-borbulhas das laranjeiras 'Baianinha' e 'Valência'(C. sinensis Osbeck), da lima ácida 'Tahiti'(C. latifolia Tanaka) e da tangoreira 'Murcote' (C. sinensis × C. reticulata) por meio do tratamento com ANA, GA3, 2,4-D e armazenamento refrigerado. As hastes foram imersas por 15 minutos em água destilada e em soluções com os reguladores de crescimento ANA e GA3 nas concentrações 10, 100, 500 e 1000 µmol L-1 e 2,4-D nas concentrações 1, 10, 50 e 100 µmol L-1 e armazenadas em sacos de polietileno a 5 ± 1ºC, por 74 dias. Foram avaliados a percentagem de abscisão dos pecíolos foliares, a perda de massa da matéria fresca e seca das hastes, a viabilidade das borbulhas e o crescimento das brotações. ANA e 2,4-D controlaram até 99% da abscisão dos pecíolos. O sistema de acondicionamento e o armazenamento em baixa temperatura mostraram-se eficientes na redução das perdas de massa de matéria fresca e seca. O armazenamento não reduziu a viabilidade das borbulhas das laranjeiras 'Baianinha' e 'Valência', e nem da tangoreira 'Murcote', cujo pegamento de enxertia foi superior a 95%. Os tratamentos com ANA, GA3 e 2,4-D não influenciaram o crescimento das brotações.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficiência da enxertia in vitro na propagação de dois clones híbridos de Eucalyptus urophylla e E. grandis. Foram utilizados porta-enxertos juvenis obtidos de sementes de E. grandis e E. urophylla germinadas in vitro. As plantas enxertadas apresentaram pegamento de até 93% aos 50 dias de idade para as combinações de enxerto e porta-enxerto. Quanto ao crescimento em altura, verificaram-se melhores resultados em relação ao porta-enxerto E. urophylla. A análise histológica das plantas enxertadas comprovou a eficiência do processo de cicatrização do calo formado na região de conexão, seguida da reconstituição vascular. The objective of this work was to evaluate the efficiency of the in vitro grafting in the propagation of two Eucalyptus urophylla and E. grandis hybrid clones. Juvenile stocks obtained from seeds of E. grandis and E. urophylla germinated in vitro were used. The grafted plants showed success up to 93% at 50 days for the scion and stock combinations. The highest final plant height values were observed when the stock was E. urophylla. Histologic analysis showed that cicatrized callus in the connection region was successfully followed by vascular recomposition in different combinations among scion with rootstocks.

O cultivo in vitro de ápices caulinares e gemas axilares é importante para uma rápida e eficiente propagação clonal. O objetivo deste trabalho foi determinar a capacidade morfogênica de ápices caulinares e de gemas axilares de Laelia lobato 'Jenni' x L labota 'Alba', identificando o melhor tipo de explante para este híbrido. Ápices caulinares e gemas axilares foram retirados de brotações e bases de pseudobulbos de plantas adultas, após desinfestação. Estes explantes foram inoculados em meio de cultivo liquido com a formulação de Murashige e Skoog (1962), contendo 0,2 mg L^-1 de cinetina e 1,0 mg L^-1 de ANA. Após 50 dias e já com formação de estruturas, os explantes foram transferidos para meio de mesma composição, porém sólido, com carvão ativado e sem fitorreguladores. Os tratamentos foram três tipos de explantes: 24 ápices caulinares (AC), 19 gemas axilares de brotações (GB) e 10 gemas axilares de pseudobulbos (GP). O experimento foi montado no delineamento inteiramente casualizado. Avaliaram-se a porcentagem de estruturas formadas, o aspecto fisiológico e a área final dos explantes. Os explantes GB foram os que apresentaram maior porcentagem de estruturas formadas (47,4%), seguidos dos GP (20%) eAC (12,5%). O grau de oxidação dos explantes foi avaliado como totalmente oxidado (71,7%), oxidado com ápice verde (7,5%), verde com extremidade oxidada (7,5%) e verde expandido (13,2%). Os explantes GB apresentaram maior área final aos 50 dias de cultivo. Embora os três tipos de explantes apresentem alta porcentagem de oxidação, todos mostram boa capacidade morfogênica, principalmente as gemas axilares de brotações, potencializando uma técnica para propagação em escala comercial dessa espécie. The culture in vitro of shoot tips and axillaly buds is important for a rapid and eflicient clonal propagation. The goal of this work was to determine the morphogenic ability of shoot tips and axillary buds of Laelia' lobata ‘Jenni’ x L. lobato 'Alba', identifying the best kind of explants for this hybrid. Shoot tips and axillary buds wae obtained from shoots and pseudobulb bases from adult plants after desinfestation. These explants were inoculated in a liquid culture medium with Murashige & Skoog (1962) formulation containing kinetin (0.2 mg L^-1) and NAA (1.0 mg L^-1). After 50 days, already with the formation of structures, the explants were transferred to a similar, but solid, culture medium with activated charcoal and without growth regulators. The treatments were from three types of explants: 24 shoot tips (ST), 19 shoot axillary buds (SB) and 10 pseudobulb axillary buds (PB). The experiment was built on the completely random design. The percentage of explants regeneration and the physiological aspect were estimated, as well as the tinal explant area. SB explants were the ones to show the higher rate the tinal explant area. SB explants were the ones to show the higher rate of regeneration (47,4%), followed by PB explants (20%) and ST ones (1.25%). The explants oxidation level was evaluated as fully oxidated tip (71.7%), oxidated with green tip (7.5%), green with oxidated tip (7. 5%) and expanded green (13.2%). SB explants showed larger final area by the 50th day of growth. Although the three kinds of explants showed higher percentage of oxidation, all presented good morphogenic capability, specially the shoot axillary buds, making possible in vitro commercial propagation of this species.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico A grande diversidade do gênero Solanum conservada em bancos de germoplasma permite que utilização de genótipos com genes de interesse já identificados possam ser utilizados na rápida obtenção de híbridos com resistências à patógenos. A murcha de fusário é uma doença de solo altamente destrutiva, causada pelo fungo Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (FOL). Este fungo possui três raças fisiológicas descritas (raças 1, 2 e 3) capaz de infectar cultivares com diferentes loci de resistência. Diferentemente das raças 1 e 2, a raça 3 ainda tem distribuição geográfica limitada, representando grande risco à tomaticultura tropical pela escassez de cultivares adaptadas e resistentes a esta raça. A enxertia pode ser uma alternativa para o cultivo de materiais suscetíveis mesmo em áreas infectadas, através do desenvolvimento de porta-enxertos resistentes. Os porta-enxertos devem, além de conferir resistência ao patógeno que se deseja controlar, ter boa compatibilidade com a variedade copa e não influenciar negativamente na produtividade e qualidade dos frutos. Assim, o objetivo foi obter híbridos de tomateiro resistentes à murcha de fusário e direcioná-los quanto ao potencial uso no manejo da doença. Foram obtidos cinco híbridos intraespecíficos de Solanum lycopersicum, denominados FOX1, FOX2, FOX3, FOX4 e FOX5, mediante cruzamentos de linhagens de introgressão de Solanum pennellii (LA4025, LA4026, LA4065, LA4066 e LA4067, que contém o gene I-3 de resistência a raça 3 de FOL) e uma cultivar comercial, que possui resistência às raças 1 e 2. Os híbridos FOX1 e FOX4 foram selecionados por demonstrarem resistência às três raças de FOL e direcionados como possíveis porta-enxertos a serem utilizados no manejo da doença. O híbrido de tomateiro cereja Sweet Heaven foi usado como cultivar copa (enxerto) para FOX 1 e FOX4. A possibilidade de averiguar a compatibilidade entre estes materiais foi realizada através de avaliações das concentrações de fitohormônios em raízes e folhas, 20 dias após a enxertia, e em folhas aos 70 dias após a enxertia. A concentração de alguns fitohormônios relacionados a estresses foi alterada, provavelmente causados pela enxertia. Por exemplo, as folhas de plantas enxertadas com o híbrido FOX1 tiveram menor concentração de ácido salicílico (AS) e maior concentração de ácido abscísico (ABA) aos 70 dias após a enxertia. As altas concentrações de ABA sugerem algum grau de incompatibilidade entre FOX1 e Sweet Heaven, enquanto a concentração deste fitohormônio foi menor em FOX4/SH, indicando maior compatibilidade entre eles. Contudo, por se tratar de um procedimento ainda pouco explorado, é necessário o estudo da compatibilidade dos materiais em condições de cultivo para analisar a viabilidade de interpretações a partir deste tipo de análise. Posteriormente, o desempenho dos híbridos FOX1 e FOX4 como porta-enxertos de Sweet Heaven foi verificado através de um ensaio em condições de casa de vegetação. Os tratamentos consistiram no cultivo de plantas com a combinação entre enxerto e porta- enxertos (FOX1/SH e FOX4/SH), autoenxertia de Sweet Heaven (SH/SH) e plantas pé- franco de Sweet Heaven (SH). Foram realizadas avaliações do crescimento e número de folhas do transplantio até a poda apical (1,80 m), taxa de pegamento dos frutos no 3º e 5º cachos da haste principal, trocas gasosas aos 30, 60 e 90 dias após o transplantio, variáveis relacionadas a produtividade, cor e qualidade dos frutos. A maior parte das variáveis analisadas não foi afetada pela enxertia com FOX1 e FOX4, com exceção da taxa de pegamento dos frutos, que foi reduzida pela enxertia, mas não comprometeu a produtividade. A avaliação de qualidade dos frutos evidenciou reduções na firmeza, sólidos solúveis totais e no pH da polpa em frutos de plantas enxertadas com FOX1 (FOX1/SH), o que pode comprometer sua adoção como porta-enxerto. Por sua vez, as plantas de FOX4/SH tiveram desempenho equivalente aquelas de Sweet Heaven em pé- franco em praticamente todas as avaliações, incluindo a qualidade dos frutos. Portanto, conclui-se que o híbrido FOX4 é material promissor a ser utilizado como porta-enxerto, visando o manejo da murcha de fusário em tomateiro. The great diversity of the genus Solanum conserved in germplasm banks allows that the use of genotypes with genes of interest already identified can be used in the fast obtaining of hybrids with resistances to pathogens. Fusarium wilt is a soil disease highly destructive, caused by the fungus Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (FOL). This fungus has three described physiological races (races 1, 2 and 3) capable of infecting cultivars with different resistance loci. Differently races 1 and 2, race 3 still has limited geographical distribution, representing a great risk to tropical tomato crop due to the scarcity of cultivars adapted and resistant to this race. Grafting may be an alternative for the cultivation of susceptible materials even in infected areas through the development of resistant rootstocks. Besides providing resistance to the pathogen to be controlled, rootstocks should have a good compatibility with the canopy variety and should not negatively influence productivity and fruit quality. Thus, the objective was to obtain tomato hybrids resistant to Fusarium wilt and to direct them regarding the potential use in the management of the disease. Five intraspecific hybrids of Solanum lycopersicum, called FOX1, FOX2, FOX3, FOX4 and FOX5 were obtained through crossings of introgression lineages of Solanum pennellii (LA4025, LA4026, LA4065, LA4066 e LA4067, which contains the resistance gene I-3 for race 3 FOL) and a commercial cultivar that has resistance to races 1 and 2. The hybrids FOX1 and FOX4 were selected for demonstrating resistance to the three FOL races and directed as possible rootstocks to be used in the management of the disease. A hybrid cherry tomato (Sweet Heaven) was used as a canopy variety (scion) for FOX1 and FOX4. The possibility of ascertaining the compatibility between these materials was made through evaluations of phytohormone concentrations in roots and leaves, 20 days after grafting, and in leaves at 70 days after grafting. The concentration of some related stress phytohormones was altered, probably caused by grafting. For example, leaves of plants grafted with the FOX1 hybrid had a lower concentration of salicylic acid (AS) and higher concentration of abscisic acid (ABA) at 70 days after grafting. The high concentrations of ABA suggest some degree of incompatibility between FOX1 and Sweet Heaven, whereas the concentration of this phytohormone was lower in FOX4/SH, indicating a greater compatibility between them. However, because it is a procedure that is still little explored, it is necessary to study the compatibility of the materials under cultivation conditions to analyze the viability of interpretations from this type of analysis. Subsequently, the performance of the FOX1 and FOX4 hybrids as Sweet Heaven rootstocks was verified through test under greenhouse conditions. The treatments consisted in the cultivation of plants with the combination between graft and rootstock (FOX1/SH and FOX4/SH), Sweet Heaven self- grafting (SH/SH) and Sweet Heaven (SH) non-grafting plants. Were evaluated growth and number of leaves from transplanting to apical pruning (1.80 m), the rate of fruit keeping in the 3rd and 5th bunches of the main stem, gas exchange at 30, 60 and 90 days after transplanting, variables related to fruit productivity, color and quality. Most of the variables analyzed it was not affected by grafting with FOX1 and FOX4, except for the rate of fruit keeping, which was reduced by grafting, but did not compromise productivity. The fruit quality evaluation evidenced reductions in firmness, total soluble solids and pH of the pulp in fruits of plants grafted with FOX1 (FOX1/SH), which may compromise its adoption as rootstock. Whereas, FOX4/SH plants had a performed equivalent to those of Sweet Heaven non-grafting in practically all evaluations, including fruit quality. Therefore, it is concluded that the FOX4 hybrid is a promising material to be used as a rootstock, aiming at the management of Fusarium wilt in tomato.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior A enxertia é uma alternativa viável que permite a alteração da arquitetura das plantas. Em espécies frutíferas, porta-enxertos ananicantes são utilizados com o objetivo de aumentar a produtividade das culturas por meio da redução do volume de copa. No tomateiro essa técnica pode ser eficiente para reduzir gastos com mão-de-obra, aumentar a produtividade e otimizar a área de cultivo. Diante disso, o objetivo neste trabalho foi avaliar a influência da enxertia na arquitetura, nutrição, características físico-químicas e produção de frutos de tomateiro. O experimento foi realizado de junho a dezembro de 2016, na unidade experimental de pesquisa e extensão do DFT/UFV. Foram utilizados três acessos do Banco de Germoplasma de Hortaliças da UFV (BGH 2006, BGH 2077 e BGH 2086) como porta-enxerto e o cultivar Santyno como enxerto. O delineamento foi em blocos ao acaso com cinco tratamentos (não enxertado, auto enxertado e três porta-enxertos) e seis repetições. Avaliou-se: porcentagem de pegamento (PPE) e índice de compatibilidade da enxertia (IC); parâmetros fotossintéticos de taxa de assimilação líquida de CO 2 (A), condutância estomática (gs), taxa transpiratória (E) e razão entre a concentração interna e externa de CO 2 (ci/ce); concentrações foliares de N, P, K, Ca, Mg e S; características morfológicas de altura das plantas (AP), índice de área foliar (IAF), diâmetro do entrenó (DE) e comprimento do entrenó (CE); produção e características físico- químicas dos frutos. Não houve diferença para as características IC, A, gs, E, ci/ce, conteúdo de P, K, Mg e S, IAF, DE, produção e características físico-químicas dos frutos. A PPE (média de 97,03 %) foi considerada satisfatória. Houve boa compatibilidade entre o cultivar Santyno® e os porta-enxertos Santyno®, BGH 2006, BGH 2077 e BGH 2086. Houve maior acúmulo foliar de N e K nas plantas auto enxertadas. O porta-enxerto BGH 2086 proporcionou menor altura de planta e menor comprimento de entrenó. A produtividade do cultivar Santyno® não foi influenciada pela combinação enxerto/porta-enxerto. Grafting is a viable alternative that allows the alteration of the architecture of the plants. In fruit species, dwarf rootstocks are used to increase crop productivity by re- ducing plant canopy. In tomato, this technique can be efficient to reduce labor costs, increase yield and optimize the area of cultivation. Therefore, the objective of this work was to evaluate the influence of grafting on architecture, nutrition, physical- chemical characteristics and yield in tomato plants. The experiment was carried out from June to December of 2016, in the experimental unit of research and extension of the DFT / UFV. Three accessions of the Vegetable Germplasm Bank of the UFV (BGH 2006, BGH 2077 and BGH 2086) were used as rootstock and the cultivar Santyno as a scion. The experimental design was in randomized blocks with five treatments (non- grafted, self-grafted and three rootstocks) and six replicates. It was evaluated the per- centage grafting success (PG) and graft compatibility index (CI), photosynthetic pa- rameters such as CO 2 assimilation rate (A), stomatal conductance (gs), transpiratory rate (E) and ratio between internal and external CO 2 concentration (ci/cc), foliar con- centrations of N, P, K, Ca, Mg and S, morphological characteristics of plant height (PH), leaf area index (LAI), diameter of the internode (ID) and length of the internode (IE), yield and physical-chemical characteristics of the fruits. There were no differ- ences for the characteristics IC, A, gs, E, ci/ce, P, K, Mg and S contents, IAF, DE, yield and physical-chemical characteristics of fruits. The PG (average of 97.03%) was considered satisfactory. There was good compatibility between the Santyno® cultivar and the Santyno®, BGH 2006, BGH 2077 and BGH 2086 rootstocks. There was greater leaf accumulation of N and K in the self-grafted plants. The BGH 2086 root- stock provided lower plant height and lower length of the internode. The yield of the Santyno® cultivar was not influenced by the scion/rootstock combination.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior This work had as main objective the study of vegetative propagation via mini-cutting vinhático and specific objectives: 1) evaluate the germination of six progenies of Plathymenia foliolosa; 2) Evaluate the production and survival of the mini-stumps in mini-clonal hedge; 3) evaluate the effect of reduction of leaves of mini-cuttings on rooting and seedling growth of progenies of Plathymenia foliolosa by mini-cutting; and 4) evaluate the type influence of mini-cuttings and the effects of doses of IBA on rooting Plathymenia foliolosa. Plants originated from the propagation of seminiferous were used as mini-stumps and six seed progenies of vinhático (Plathymenia foliolosa Benth) collected from Laranjal (P01), Reduto (P03), Braz Pires (P19), Porto Firme (P21), Ponte Nova (P45) and Amparo do Serra (P53) municipalities were used. The seeds were pre-treated with sulfuric acid for 10 minutes and then taken to germinate. At 30 days after germination, the germination rate was evaluated. The clonal mini-hedges consisted of mini-stumps in semi-hydroponic system, obtained by seminiferous propagation from six progenies of Plathymenia foliolosa. The seedlings were transplanted at a spacing of 10 x 10 cm, containing a total of 96 mini-stumps per progeny. The mineral nutrition of mini-stumps consisted of drip fertirrigation applied three times daily at a total daily flow rate of 4 L m -2. Mini-cuttings form apical part were used to evaluate the influence of leaf reduction on rooting of vinhático with 10 cm long, with treatments consisting of 100% reduction of leaf (without leaf), with 75% reduction of leaf and treatment without leaf reduction. The rooting of the shoots was performed using a remaining term of the plant material in the acclimatized greenhouse for 60 days, with acclimation in shade house for 15 days, followed by transfer to the area of full sun, where it was made a final assessment for the cuttings at 90 days. To evaluate the application of IBA at doses (0, 20.000, 40.000 and 60.000 mg L-1) and types of mini-cuttings (apical and intermediate), the cuttings remained 100 days in the greenhouse. The P19 and P03 progenies had the highest germination rates (88,3 % and 87,7 %, respectively) and P01 (54,8 %) and P45 progeny (47,7%) had the lowest values obtained. As for the survival of mini-stumps in clonal mini- hedges after the fourth successive cuttings collection, P3 and P19 progenies showed the highest survival percentages (64,5 % and 61,5%, respectively), while progeny P1 (32,3 %) and P45 (25%) showed the lowest values observed for this evaluation. The average number of mini-cuttings/mini-stump/collection produced ranged from 0.83 (progeny 53) to 4.8 (progeny 01), and the average productivity of 120 m2 mini-stumps mini-cuttings per collection. As for the influence of reduction of leaves of adventitious rooting in mini-cuttings, foliar treatments without reduction and 75% reduction showed no significant differences, however, 100% mortality was observed when the mini-cuttings had total reduction in leaves. Based on the results, it can be concluded that: progeny showed heterogeneity in the rate of germination; Progenies showed different responses to the productive potential of mini-stumps in successive collections of cuttings. The maintenance of the leaves is important for the survival and rooting of mini-cuttings, especially the reduction of non-leaf mini-cuttings, mainly due to the operational usability and optimization time. The survival of the mini- cuttings was influenced by its type and by the implementation of AIB. Este trabalho teve como objetivo geral o estudo da propagação vegetativa do vinhático (Plathymenia foliolosa) via miniestaquia e como objetivos específicos avaliar: 1) a germinação das sementes de seis progênies de vinhático (Plathymenia foliolosa); 2) a produção de brotações e a sobrevivência de minicepas em minijardim clonal; 3) o efeito da redução foliar das miniestacas no enraizamento e crescimento das mudas de progênies de vinhático (Plathymenia foliolosa) via miniestaquia; e 4) a influência do tipo de miniestaca e do efeito de dosagens de AIB no enraizamento de vinhático (Plathymenia foliolosa). Foram utilizadas como minicepas mudas originadas de propagação via seminífera, utilizando sementes de seis progênies de vinhático (Plathymenia foliolosa Benth), oriundas dos municípios de Laranjal (P01), Reduto (P03), Brás Pires (P19), Porto Firme (P21), Ponte Nova (P45) e Amparo da Serra (P53). As sementes foram pré-tratadas com ácido sulfúrico por 10 minutos e, em seguida, semeadas. Aos 30 dias após a semeadura, foi avaliada a taxa de germinação. O minijardim clonal foi constituído por minicepas em sistema semi-hidropônico, obtidas pela propagação seminífera das seis progênies de vinhático (Plathymenia foliolosa). As mudas foram transplantadas no espaçamento de 10 x 10 cm, contendo um total de 96 minicepas por progênie. A nutrição mineral das minicepas foi feita por fertirrigação por gotejamento aplicada três vezes ao dia, numa vazão total diária de 4 L m -2. Na avaliação da influência da redução foliar no enraizamento de vinhático, foram utilizadas miniestacas da parte apical com altura variando de 8 a 10 cm de comprimento, sendo os tratamentos constituídos por 100% de redução foliar (sem folha), com 75% de redução foliar e sem redução foliar. O enraizamento das miniestacas foi feito utilizando um período de permanência de 60 dias em casa de vegetação climatizada, com a aclimatação em casa de sombra por 15 dias, seguida da transferência para a área de pleno sol, onde se procedeu à avaliação final para as miniestacas, aos 90 dias. Para avaliação da aplicação de AIB nas dosagens 0, 20.000, 40.000 e 60.000 mg L-1 e dos tipos de miniestacas (apical e intermediária), elas permaneceram 100 dias na casa de vegetação. As progênies P19 e P03 apresentaram as maiores taxas de germinação (88,3% e 87,7%, respectivamente) e as progênies P01 (54,8%) e P45 (47,7%), os menores valores. Quanto à sobrevivência das minicepas em minijardim clonal, após a quarta coleta sucessiva de miniestacas, as progênies P3 e P19 apresentaram os maiores percentuais de sobrevivência (64,5% e 61,5%, respectivamente), enquanto as progênies P1 (32,3%) e P45 (25%), os menores valores observados quanto a essa avaliação. O número médio de miniestacas/minicepa/coleta produzidas variou de 0,8 (progênie 53) a 4,8 (progênie 01), sendo a produtividade média das minicepas/m2 de 120 miniestacas por coleta. Quanto à influência da redução foliar das miniestacas no enraizamento adventício, os tratamentos sem redução foliar e com 75% de redução não apresentaram diferenças significativas entre si, no entanto, foi observada 100% de mortalidade das miniestacas quando feita a redução total da folhas. Com base nos resultados, pode-se concluir que as progênies apresentaram heterogeneidade na taxa de germinação e respostas diferenciadas quanto ao potencial produtivo das minicepas nas coletas sucessivas de miniestacas, que a manutenção das folhas é importante para o enraizamento e a sobrevivência de miniestacas, destacando-se a não redução foliar das miniestacas, devido, principalmente, à praticidade operacional e à otimização no tempo. A sobrevivência das miniestacas foi influenciada pelo tipo de miniestaca e pela aplicação do AIB.

Tectona grandis belongs to Lamiaceae family, original from southestern Asean tropical forests, and introduced commercially to tropical Africa, Australia, Pacific islands, and to Central and South America. Observed expression in growth differences in commercially planted teak trees, was the most important factor as part of genetic differences due to origin. Therefore, productivity could be substantially improved through cautiously provenance and superior genotypes selections. Today, there are breeding programs based on the selection of superior trees, where vegetative propagation research plays an important role due to clonal forestry advantanges. In this context, this study evaluated clonal propagation issues on cuttings and mini-cuttings of four Tectona grandis clones. As specific objectives there were the evaluation of: 1) mini-clonal hegde density influence on mini-stumps survivance and its mini-cuttings productivity; 2) AIB growth regulator influence on mini-cuttings rooting; 3) Foliar reduction and harvest/preparation time-interval effect on survival and mini-cuttings rooting; 4) plus trees vegetative capture techniques through cuttings rooting. The study was developed at clonal nursery in Agrícola Verde Novo Ldta. company, located in Colíder County, Mato Grosso, Brasil, based on four Tectona grandis clones (Carapá, Ipê, GU5 and TB7), established in hydroponic miniclonal hedge, as well as on randomly selected 5, 10 and 15 years-old trees from comercial plantations from Bacaeri company, located in Alta Floresta County, Mato Grosso. Results indicate high survival percentages and rooting rates in greenhouse as well as after acclimatization, independently from AIB dosages (95, 92 and 90% respectively). Similar high values results were also obtained in the study of time intervals between harvest and cutting preparation effect on survivance (92.71%) and rooting (90.03%) after greenhouse conditions, as well as survival after acclimatization (88.09%). No influence of storage periods effects was observed, however, it was registered differences among clones in relation to mini-cuttings rooting rates. In terms of experiments related to cuttings-foliage reduction area, it was observed that there is an influence on its rooting and survival rates, as well as in its height and collar diameter. It was concluded that 25% foliage area utilization in mini-cuttings is recommended, due to its higher values in evaluated characteristics (rooting: 97.4%; survival: 94.27%; height: 10.94 cm and collor diameter: 4.39 mm). Basically due to the absence of limitations in relation to differences in irrigation regimes during rooting and acclimatization stages, which minimized guarda-chuva effect. With respect to density effect on mini-clonal hedge productivity, 10 x 10 cm spacing (100 miniplantas m 2 ) registered highest mini-cutting production per mother plant (0.63). 5 x 5 cm was the highest density in mini-stump per area (m 2 ), which registered the lowest mini-cuttings production per plant (0.48) but highest mini-cutting production per square meter (191 m 2 ). However, it was observed that mini-cutting production varied significantly along the different harvests in the experiment, which is an evidence of environmental effects in teak mini-clonal hedge sprouting. In relation to Tectona grandis plus trees capture, felling down trees registered best results in sprouting (86.7%), number of sprouts per tree (6.5) and the best rooting rate in harvested cuttings (43.1%). Felling down tress as well as in promoting sprouting through half-ringing, best capture results were obtained in trees at lower age. A Tectona grandis (teca), pertencente à família Lamiaceae, é originária das florestas tropicais do sudeste asiático, e foi introduzida e plantada comercialmente na África Tropical, Austrália, ilhas do Pacífico, na América Central e do Sul. Diferenças expressivas observadas no crescimento das árvores nos plantios comerciais desta espécie possuem como fator mais importante as diferenças genéticas entre procedências, podendo a produtividade, ser substancialmente melhorada a partir de seleção cuidadosa de procedências e genótipos superiores. Na atualidade existem programas de melhoramento genético baseados na seleção de árvores superiores, tendo as pesquisas na propagação vegetativa um papel importante, visto as vantagens proporcionadas pela silvicultura clonal. Nesse enfoque, este trabalho visou avaliar a propagação de quatro clones de Tectona grandis por meio da estaquia e miniestaquia. Como objetivos específicos têm-se: 1) avaliar a influência da densidade de minicepas em minijardim clonal quanto à sobrevivência de minicepas e à produção de miniestacas; 2) avaliar a eficiência do regulador de crescimento AIB no enraizamento de miniestacas; 3) avaliar a influência da redução da área foliar e do intervalo de tempo entre coleta/preparo e estaqueamento na sobrevivência e enraizamento de miniestacas, e; 4) avaliar técnicas de resgate de árvores selecionadas quanto à propagação vegetativa pelo enraizamento de estacas. Este estudo foi realizado no viveiro clonal da empresa Agrícola Verde Novo Ltda., localizada no município de Colíder, Mato Grosso, Brasil, sendo utilizados quatro clones de Tectona grandis (Carapá, Ipê, GU5 e TB7), estabelecidos em minijardim clonal em sistema hidropônico. Técnicas de resgate foram avaliadas em árvores selecionadas aleatoriamente em plantios comerciais (propagados via seminífera) de 5, 10 e 15 anos de idade, na fazenda Bacaeri, localizada no município Alta Floresta, Mato Grosso. Os resultados indicaram altos porcentuais de sobrevivência e enraizamento de miniestacas na saída da casa de vegetação e da sobrevivência na saída da casa de sombra, independentemente das dosagens de AIB (95,37; 91,78 e 89,93 % respetivamente). Resultados semelhantes foram obtidos no estudo do intervalo de tempo entre a coleta/preparo e o estaqueamento, com elevados índices para as características sobrevivência (92,71 %) e enraizamento (90,03 %) na saída da casa de vegetação e da sobrevivência na saída da casa de sombra (88,09 %), sem detectar a influência dos períodos de armazenamento utilizados, contudo, foi verificada resposta diferenciada entre clones quanto ao enraizamento das miniestacas. Quanto à redução da área foliar das miniestacas, observou-se influência no enraizamento e sobrevivência das miniestacas, bem como no seu crescimento em altura e diâmetro do colo. Concluiu-se que a utilização de 25% (RF-75%) da área foliar da miniestacas como sendo a recomendada para a produção de mudas clonais, devido a esta utilização apresentar os maiores valores quanto às características avaliadas, principalmente por não apresentar limitações quanto à homogeneidade da irrigação nas fases de enraizamento e aclimatação, minimizando o efeito de guarda-chuva. Com respeito à densidade de minicepas no minijardim clonal, no espaçamento de 10 x 10 cm (100 minicepas m -2 ) apresentou a maior produção de miniestacas por minicepa (0,63), obtendo a menor quantidade de miniestacas por área (62,8 miniestacas m -2 ). A densidade com maior número de minicepas por área (m 2 ), no espaçamento de 5 x 5 cm resultou em menor produção de miniestacas por minicepa (0,48) e maior quantidade de miniestacas por metro quadrado (190,9 miniestacas m -2 ). Foi observada, ainda que a produção de miniestacas variou, significativamente, conforme o espaçamento no decorrer das coletas, o que evidenciou a alta influência do ambiente na emissão de brotos da teca. Em relação ao resgate de árvores selecionadas de Tectona grandis, a decepa proporcionou os melhores resultados quanto à emissão de brotações (86,7%), ao número de brotações (6,5) e ao melhor índice de enraizamento das estacas coletadas (43,1%). Em ambas as técnicas os melhores resultados foram obtidos quando realizadas em árvores em idades mais juvenis (5 anos).

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior The objective of this study is to verify the behavior and growth parameters of four cultivars of basil. The seeds were bought locally and grown in pots with the following measures: 11.8 cm diameter x 8.6 cm diameter x 9.0 cm high, in a greenhouse with regular cultivation. The treatments were a combination of four cultivars of basil and five stages of evaluation, with a 4x5 factorial arrangement, in a completely randomized design with three replications. Each experimental unit consisted of ten plants. The cultivars used were: Anão (Dwarf); Folha Larga (Broad-leaf); Grecco and Roxo (Purple). The stage of evaluation was determined by equidistant intervals of 14 days after sowing - DAS (46, 60, 74, 88 and 102 DAS). The following characteristics were evaluated: stem length (CC), biomass (BG), dry mass of leaves (MSF), dry mass of stem (MSC) and dry mass of root (MSR); SPAD; leaf area (AF); leaf area index (IAF); specific leaf area (AFE); leaf mass fraction (FMF), stem mass fraction (FMC) and root mass fraction (FMR); net assimilation rate (TAL); growth rate of the cultivation (TCC) and relative rate of cultivation (TCR). The data was subjected to analysis of variance and regression. For the qualitative factor, the averages were compared by the Tukey test at 10% probability. CC, BG, MSF, MSC, MSR, AF, IAF and AFE varied over the cycle with a linear behavior for the four cultivars. For stages 60, 74 and 88 DAS, the Roxo (Purple) cultivar was superior to the others for the CC variable. In average characteristic production of BG, MSF and MSR, the Folha Larga (Broad-leaf) cultivar was superior to the others. For variables SPAD, AF, IAF and AFE the Roxo (Purple) cultivar has the best results, on average. The four varieties of basil have aptitude for potted production. Can be used as ornamentals for the Grecco and Anão cultivars, because they have a shorter length of stem. The Folha Larga and Roxo cultivars showed better potted growth performance than the Anão and Grecco cultivars. The best stages for the exploitation of cultivars in pots are at 60, 74 and 88 days after sowing. Objetivou-se verificar nessa pesquisa o comportamento de parâmetros de crescimento de quatro cultivares de manjericão. As sementes foram adquiridas no comércio local, cultivadas em vasos com as seguintes medidas: 11,8 cm diâmetro x 8,6 cm diâmetro x 9,0 cm de altura, em casa de vegetação com tratos culturais regulares. Os tratamentos foram constituídos pela combinação de quatro cultivares de manjericão e cinco épocas de avaliação, em arranjo fatorial 4x5, dispostos no delineamento inteiramente casualizado com três repetições. Cada unidade experimental foi constituída por dez plantas. As cultivares utilizadas foram: Anão; Folha Larga; Grecco e Roxo. As épocas de avalição foram determinadas com intervalos equidistantes de 14 dias após a semeadura DAS (46, 60, 74, 88 e 102 DAS). As seguintes características foram avaliadas: comprimento de caule (CC), biomassa (BG), massa da matéria seca de folha (MSF), caule (MSC) e raiz (MSR); SPAD; área foliar (AF); índice de área foliar (IAF); área foliar específica (AFE); fração de massa folha (FMF), caule (FMC) e raiz (FMR); taxa assimilatória líquida (TAL); taxa de crescimento da cultura (TCC) e relativo (TCR). Os dados foram submetidos à análise de variância e de regressão. Para o fator qualitativo, as médias foram comparadas pelo teste de Tukey ao nível de 10% de probabilidade. O CC, BG, MSF, MSC, MSR, AF, IAF e AFE variaram ao longo do ciclo com comportamento linear para as quatro cultivares. Para as épocas 60, 74 e 88 DAS, a cultivar Roxo foi superior às demais para a variável CC. Na característica produção média de BG, MSF e MSR, a cultivar Folha Larga foi superior às demais. Para as variáveis SPAD, AF, IAF e AFE a cultivar Roxo apresenta em média os melhores resultados. As quatro cultivares de manjericão possuem aptidão para produção em vaso. Podem ser usadas como ornamentais as cultivares Anão e Grecco, por apresentarem menor comprimento de caule da planta. As cultivares Folha Larga e Roxo apresentaram melhor desempenho no cultivo em vaso que as cultivares Anão e Grecco. As melhores fases para a exploração das cultivares em vaso são aos 60, 74 e 88 dias após semeadura.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior This study aimed to perform genetic evaluation of individuals from families of Pinus taeda propagated via somatic embryogenesis deployed in a clonal test. In specific terms, the objective was to estimate the genetic correlation among ages of selection (youth-adult), early selection efficiency for the characteristics of height, diameter, and volume, and to evaluate the capability of spreading Pinus taeda families by somatic embryogenesis using estimates of genetic parameters. This study was carried out by genetic-statistics analysis of a experimental network of Pinus taeda clones, comprising 238 clones propagated via somatic embryogenesis. Diameter, height, volume, and survival characters were obtained at ages of 1, 3, and 4 years in four clonal tests, two located in the State of Paraná and two in the State of Santa Catarina.Genetic and statistical analyses were performed by estimation of variance components via residual maximum likelihood (Reml) and prediction of breeding values via best linear unbiased prediction (Blup) using the Selegen-Reml/Blup software. Genetic correlations between youth ages and rotation age were performed applying the linear model developed by Lambeth (1980). Results indicate that selection of specific clones for different environments is necessary due to the high magnitude of Genotype x environment ( gxe ). Based on the values of accuracy and genetic correlations across environments (rgloc), it is observed that the selection by volume character should be practiced at the fourth year. With the simultaneous selection by stability and adaptability, genetic gain is 10% compared to the average commercial controls. This estimated gain is an indication that the somatic embryogenesis technique is efficient in clonal propagation with good yield potential. According to results of an established model for correlation between juvenile-adult ages, the early selection can be performed in Pinus taeda clones with high selection efficiency. Ages 4-6 years are sufficient to select Pinus taeda clones propagated via somatic embryogenesis for cuts at 8 and 12 years; ages 6-10 years are sufficient to be selected for cutting at 20 years. There are genetic variability and possibility of high genetic gain by selection among families for the somatic embryos presence and number of somatic clones by Pinus taeda families designed to somatic xembryogenesis. There is little or no genetic correlation between the number of clones propagated via somatic embryogenesis and height, diameter, survival, and volume evaluated at four years of age in clonal tests. It is concluded that somatic embryogenesis of Pinus taeda family was able to propagate clones with good productive potentials for growth characteristics. Early selection can be performed in somatic clones of Pinus taeda from four years with good selection efficiency. There is greater genetic gain for the ability to propagation via somatic embryogenesis selecting Pinus taeda families. Objetivou-se com o presente trabalho, realizar a avaliação genética de Pinus taeda propagado por embriogênese somática implantado em teste clonal. De forma específica, objetivou-se estimar a correlação genética entre idades de seleção (juvenil-adulta), eficiência da seleção precoce para as características altura, diâmetro e volume, eficiência da embriogênese somática na propagação de genótipos com bons ganhos de seleção e avaliar a capacidade de propagação de famílias de Pinus taeda por embriogênese somática, utilizando estimativas de parâmetros genéticos. O estudo foi realizado por meio de análise genético-estatística de uma rede experimental de clones de Pinus taeda, composta por 238 clones propagados via embriogênese somática. Os dados dos caracteres diâmetro(dap), altura total, volume e sobrevivência foram obtidos nas idades de 1, 3 e 4 anos, em quatro testes clonais, sendo dois localizados no Estado do Paraná e dois em Santa Catarina. As análises genético-estatísticas foram realizadas pelo procedimento de estimação de componentes de variância via máxima verossimilhança residual (Reml) e de predição de valores genéticos via melhor predição linear não viesada (Blup), usando o software Selegen-Reml/Blup. As correlações genéticas entre idades juvenis e idade de rotação foram realizadas aplicando o modelo linear desenvolvido por Lambeth (1980). Os resultados indicam que, devido à alta magnitude da interação genótipo x ambiente , faz-se necessária a seleção de clones específicos para os diferentes ambientes. Com base nos valores de acurácia e da correlação genotípica por ambientes (rgloc), observou-se que a seleção para o caráter volume deve ser praticada no quarto ano. Na seleção simultânea para estabilidade e adaptabilidade, o ganho genético é de 10% em relação à média das testemunhas comerciais. Esse ganho estimado é um indicativo de que a técnica de embriogênese somática está sendo eficiente na propagação de clones com bons potenciais produtivos. Segundo os resultados do modelo estabelecido para correlação entre idades juvenil-adulta, a seleção precoce pode ser feita em clones de Pinus taeda com alta eficiência. As idades de 4 a 6 anos são suficientes para selecionar clones de Pinus taeda propagados via embriogênese somática para colheita aos 8 e 12 anos, e as idades de viii6 a 10 anos são suficientes para selecionar para a colheita aos 20 anos. Há variabilidade genética e possibilidade de ganhos genéticos altos pela seleção entre famílias para os caracteres presença de embriões somáticos e número de clones por famílias de Pinus taeda destinadas à embriogênese somática. Há baixa ou nenhuma correlação genética entre o número de clones propagados via embriogênese somática e as características altura, diâmetro, sobrevivência e volume avaliados aos quatro anos de idade em testes clonais. Concluiu-se que a embriogênese somática de Pinus taeda foi capaz de propagar clones com bons potenciais produtivos para características de crescimento. A seleção precoce pode ser feita nos clones propagados via embriogênese somática de Pinus taeda, a partir dos quatro anos, com boa eficiência de seleção. Há maior ganho genético para capacidade de propagação por embriogênese somática com a seleção de famílias de Pinus taeda.

Programa de Estudante-Convênio de Pós-Graduação Since the 80's, Brazil is the world´s largest orange producer. 85 % of its production goes to juice industry. In 11/12 season the country was responsible for 57 % of the world´s orange-juice production, which harvested and manufactured mainly in the state of São Paulo. Ca is the most absorbed nutrient by orange crop, although N and K are the most exported. The recommendations for liming and fertilization in Brazil, are based on the use of tables developed by the Fertilization and Liming Group for Citrus of São Paulo. This study aimed to develop a liming and fertilizer recommendation system for orange crop, based on the modeling of nutrient requirements and supply, as well as revealing knowledge gaps that indicate the needs of future research. The system, called Ferticalc-Orange, is made up of modules: liming, gypsum application, fertilizer recommendations for non-bearing and bearing trees. The later module is formed by nutrient requirement and supply subsystems. Nutrient requirement subsystem includes total nutrient demand (TND), nutrient use efficiency (NUE) and total nutrient requirement (TNR). TND of the crop´s first and second year in the field is calculated considering nutritional demand for annual vegetative biomass increase (NDAVBΔ), however, from the third year on, TND is made up of NDAVBΔ as well as nutritional demand for fruit production (NDFP). NDAVBΔ contemplates annual vegetative biomass production, its partitioning and nutrient contents corresponding to the considered year. NDFP depends on the expected yield and fruit biological utilization coefficient (FBUC). NUE indicates how much of the applied nutrient in fact is absorbed by the plant. TNR of each nutrient is calculated by dividing TND of the nutrient with NUE of the same nutrient. Supply subsystem consists of: nutrient supplied by soil (Soil_Nut), nutrient supplied by litter (Litter_Nut) and N mineralization from soil organic matter (SOM_N). Thus, N supply considers Litter_N and SOM_N, while P, K, Ca and Mg supply take in account Soil_Nut and Litter_Nut. S and micronutrients supply only Soil_Nut. Based on the simulations made it was determined that depending on the circumstances the recommendations obtained with Ferticalc-Orange may be higher or lower than those found in the currently used tables. The system is an alternative to the use of tables and as well as these it has to be constantly improved. The development of this system shows that it would be of interest to promote research for this crop in different fields such as internal and external nutrient cycling, leaf nutrient content according to plant age, detailed dry matter partitioning, among others. Desde a década de 80, o Brasil é o maior produtor de laranjas do mundo, sendo que 85 % da produção nacional destina-se à indústria de suco. Na safra 11/12, o País participou com 57 % da produção mundial de suco de laranja, a qual se concentrou principalmente no Estado de São Paulo. O nutriente mais absorvido pela laranjeira é Ca, porém N e K são os mais exportados. As recomendações de corretivos e fertilizantes, no País, são feitas com base no uso de tabelas desenvolvidas pelo Grupo Paulista de Adubação e Calagem para Citros. Este trabalho objetivou desenvolver um sistema de recomendação de corretivos e fertilizantes para a cultura da laranjeira, baseado na modelagem do requerimento e do suprimento, além de revelar lacunas no conhecimento que indicam a necessidade de futuras pesquisas. O sistema, que recebe o nome de Ferticalc-Laranja, compõe-se dos módulos: calagem, gessagem, adubação de implantação e formação, e adubação de produção, que por sua vez está formado pelos subsistemas requerimento e suprimento. O subsistema requerimento engloba a demanda total (DT), a taxa de recuperação pela planta (TRpl) e o requerimento total (RT). A DT dos primeiros dois anos da cultura no campo se limita à demanda para incremento anual da biomassa vegetativa (DΔBV), no entanto, a partir do terceiro ano a DT se constitui da DΔBV mais a demanda para produção de frutos (DPF). A DΔBV está em função da produção de BV, da partição e dos teores correspondentes ao ano considerado. A DPF varia em função da produtividade esperada e do coeficiente de utilização biológica de frutos (CUBF). A TRpl indica que proporção do nutriente aplicado efetivamente é absorvido pela planta. Dividindo a DT de cada nutriente pela TRpl do nutriente obtém-se o RT do nutriente. O subsistema suprimento está formado por: nutriente suprido pelo solo (Nut_solo), nutriente suprido pelos resíduos vegetais (Nut_res.veg.) e para N também é levado em consideração o N proveniente da mineralização da matéria orgânica do solo (N_MOS). Desta maneira, o suprimento de N se compõe do N_res.veg. e N_MOS, o suprimento de P, K, Ca e Mg pelo Nut_solo e Nut_res.veg. e o suprimento de S e micronutrientes pelo Nut_solo. Com base nas simulações feitas observou-se que, dependendo do cenário, as recomendações podem ser maiores ou menores que as de tabelas utilizadas atualmente. Acredita-se que o sistema seja uma alternativa ao uso das tabelas e que da mesma maneira que estas deverá ser aprimorado constantemente. O desenvolvimento deste sistema evidencia que seria de interesse promover pesquisas para esta cultura em diversas áreas, tais como ciclagem interna e externa de nutrientes, nível crítico foliar segundo a idade, partição de matéria seca mais detalhada, etc.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Somatic embryogenesis is the process of development of embryos from somatic cells. The aim of this study was to evaluate the efficiency of growth regulators at different stages of somatic embryogenesis of three cultivars of sugarcane, RB 867515, RB928064 e RB925345, and characterize the effects of in vitro treatments of the anatomical development of somatic embryos. Embryogenic calluses were obtained after inoculation of immature leaves arising from lateral buds on MS medium plus 30g.L sucrose, 2.5 g.L agar and different concentrations of 2,4-D, Dicamba and CPA (5,10,15 and 20 mM). After 30 days of induction it showed that the dose of 20μM 2, 4-D was the concentration that induced the highest percentage of callus, 36.95%, and callus were compact and whitish. The calluses were subcultured in the same medium for 30 days and after this period, the callus were transferred to medium with low concentration of 2,4-D (0.5 mg.L-1) to obtain globular pro-embryos. The globular pro-embryos were transferred to multiplication medium and after 30 days were transferred to maturation medium. osmotic regulators were tested, mannitol and sucrose (30, 60 and 90 gL) and ABA (0 and 5 mM). The embryos were transferred to regeneration medium containing 1 mg. L-1 BAP and GA3. The embryos that were in the medium with 30g. L-1, with ABA when transferred to regeneration medium formed healthy and vigorous plants. The histochemical Blue Evans test and Carmine Acetic confirmed the embryogenic of the material. The anatomical study of the process of somatic embryogenesis in leaf explants of sugar cane showed the emergence of callus from the epidermis, which in more advanced stages (globular embryos) easily detached from the explant. It was evident the presence of a well-defined protoderms, isodiametric cells with prominent nuclei and nucleoli and high nucleus / cytoplasm ratio. In the later stages were observed the basal and apical meristem well defined, bounded by a protoderm and immersed in a mass of vacuolated cells, assuming one is in the process of somatic embryo formation. At the end of 30 days in maturation, it was observed a bipolar structure, consisting of stem and root apices, which had a closed vascular system, without connection to the adjacent tissue, confirming the presence of the somatic embryo. A embriogênese somática é o processo de desenvolvimento de embriões a partir de células somáticas. O objetivo desse trabalho foi avaliar a eficiência de reguladores de crescimento nas diferentes fases da embriogênese somática de três cultivares de cana-de- açúcar, RB 867515, RB928064 e RB925345, e caracterizar os efeitos dos tratamentos in vitro no desenvolvimento anatômico dos embriões somáticos. Foram obtidos calos embriogênicos após inoculação de folhas imaturas advindas de gemas laterais em meio MS acrescido de 30g.L de sacarose, 2,5g.L de ágar e diferentes concentrações de 2,4-D, Dicamba e CPA (5,10,15 e 20 μM). Aos 30 dias após indução verificou-se que a dose de 20μM de 2,4-D foi a dose que induziu maior porcentagem de calos embriogênicos, 36,95%, sendo que estes calos tinham aspecto compacto e eram de coloração esbranquiçada. Os calos foram subcultivados no mesmo meio por mais 30 dias e após esse período, os calos embriogênicos obtidos foram transferidos para meio com baixa concentração de 2,4-D (2,26μM) para obtenção de embriões globulares. Os embriões globulares foram transferidos para meio de multiplicação composto do memso meio de indução, acrescido de três diferentes doses de AIA (6, 12 e 24 μL/placa) e foi observada diferença significativa entre as variedades testadas, sendo que na maior dose ocorreu maior multiplicação de calos embriogênicos. Após 30 dias foram transferidos para meio de maturação, onde foram testados os reguladores osmóticos, manitol e sacarose (30, 60 e 90 g.L) e o ABA (0 e 5 μM). Os embriões viáveis foram transferidos para meio de regeneração, contendo 1mg. L-1 de BAP e GA3. Os embriões somáticos que estavam em meio com 30g. L-1, com ABA quando transferidos para meio de regeneração formaram plântulas sadias e vigorosas. O teste histoquímico azul de Evans e carmim acético confirmaram a natureza embriogênica do material. O estudo anatômico do processo de embriogênese somática em explantes foliares de cana-de-açúcar evidenciou o surgimento de calos embriogênicos a partir da epiderme, que em estágios mais avançados (embriões globulares) se desprendiam facilmente do explante. Era evidente a presença de uma protoderme bem definida, células isodiamétricas, com núcleo e nucléolo proeminentes e alta relação núcleo/citoplasma. Nos estágios posteriores foi possível observar uma estrutura apresentando meristema apical e basal bem definido, delimitada por uma protoderme e imersa em uma massa de células vacuolizadas, supondo ser um embrião somático em processo de formação. Ao final dos 30 dias em meio de maturação foi observada uma estrutura bipolar, constituída de ápices caulinar e radicular, que apresentava um sistema vascular fechado, sem conexão com os tecidos adjacentes, confirmando ser um embrião somático.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico The use of bioreactors has been an alternative tool for the micropropagation of several species, contributing to the automation in certain phases of the in vitro cultivation, though enabling large-scale production. Accordingly, this study evaluated the micropropagation by means of axillary buds proliferation in the multiplication and elongation stages in vitro of Eucalyptus grandis x E. urophylla clones using temporary immersion bioreactors. During multiplication stage in RITA® bioreactors, experiments were performed with the aim of testing the influence of several factors on fresh weight, number of shoots per explant and hyperhydricity of the culture, among them: culture media (MS, WPM, QL and JADS); BAP and NAA combinations; ratios between nitrogen sources (nitrate and ammonium); cultivation in agar solidified and liquid media; different managements of immersion frequencies (2, 4, 8 and 16 h) and type of support of the explants (filter paper and foam); and a ventilation system with additional air input coupled to the bioreactor containers. In the elongation step, it was evaluated the influence of different periods of cultivation (14, 21, 28 and 35 d) in elongation in vitro of explants cultured in temporary immersion bioreactors RITA® and BIT® (liquid medium) and in plastic pots (semi-solid medium). In multiplication stage, the culture medium MS, the combination of 1.0 μM BAP and 0.5 μM NAA, the ratio 3:1 of N(NO3 -):N(NH4 +), the smallest intervals between immersions (2 and 4 h) and support filter paper promoted greater fresh weight accumulation and number of shoots per explant; for these characteristics, the RITA® system was more efficient as compared to agar-jellified medium. There was a remarkable difference in the development of cultures between the two clones evaluated. The increase in ammonium concentration in the culture medium (1:1, 1:2 and 1:3 of N(NO3 -) :N(NH4 +)) led to smaller effect of explants and the injection of additional air (0.8 L min-1) to the RITA® bioreactor container did not influence the development of the cultures. In general, under the experimental conditions, cultures displayed high percentages of hyperhydricity, and this physiological disorder was a limiting factor for the Eucalyptus cultivation in bioreactors, but not for plants grown in semi-solid agar medium. In the elongation phase, the BIT® bioreactor and cultivation on agar in plastic pots promoted the highest fresh weight accumulation and the final number of shoots at all ages during assessment; however, shoot elongation was not satisfactory, with most shoots (> 60%) within the of class-size of 0.0- 2.0 cm. In conclusion, there is a need to adjust of the culture management in multiplication and elongation steps, in order to obtain shoots with greater vigor and competence to root in ex vitro conditions, in order to make this technique potentially viable to be applied to a large scale shoot production. O uso de biorreatores tem sido uma alternativa na micropropagação de algumas espécies, por contribuir para automação em determinadas fases do cultivo de plantas e possibilitar a produção em larga escala. Neste sentido, este estudo avaliou a micropropagação via proliferação de gemas axilares nas fases de multiplicação e alongamento in vitro de clones de Eucalyptus grandis x E. urophylla com o uso de biorreatores de imersão temporária. Na fase de multiplicação, foram realizados experimentos individuais com o objetivo de testar diferentes meios de cultura (MS, WPM, QL e JADS), combinações entre os fitorreguladores BAP e ANA, diferentes relações entre fontes de nitrogênio (nitrato e amônio), comparar o cultivo em ágar e em meio líquido, diferentes manejos de frequência de imersão (2, 4, 8 e 16 horas) e suportes de apoio dos explantes (papel filtro e espuma), assim como um sistema de ventilação comentrada de ar adicional acoplado ao recipiente dos biorreatores, quanto às características massa fresca, número de brotos e hiper-hidricidade dos explantes, cultivados em biorreatores RITA®. Na fase de alongamento, avaliou-se a influência de diferentes períodos de cultivo (14, 21, 28 e 35 dias) no alongamento in vitro de multibrotações cultivadas em biorreatores de imersão temporária RITA® e BIT® (meio líquido) e em potes plásticos (meio semissólido). Na etapa de multiplicação, o meio de cultura MS, a combinação 1,0 μM de BAP com 0,5 μM de ANA, a relação 3:1 de N(NO3 -):N(NH4 +), os menores intervalos entre as imersões (2 e 4 horas) e o suporte papel filtro promoveram maior massa fresca e número de brotos por explante, sendo o cultivo em biorreator RITA® superior ao ágar para estas características. Houve diferença quanto ao desenvolvimento das culturas entre os dois clones avaliados. O aumento da concentração de amônio no meio (relações 1:1, 1:2 e 1:3 de N(NO3 -):N(NH4 +)) levou ao menor vigor dos explantes, e a injeção adicional de ar (0,8 L min-1) ao recipiente do biorreator RITA® não influenciou o desenvolvimento das culturas. No geral, as culturas apresentaram alto percentual de hiper-hidricidade, sendo esta desordem um fator limitante nas condições deste estudo para o cultivo de Eucalyptus em biorreatores, não sendo percebida nas plantas cultivadas em meio semissólido. No alongamento, o biorreator BIT® e o cultivo em ágar nos potes plásticos promoveram maiores médias de ganho em massa fresca e número final de brotos em todas as idades de avaliação, porém o alongamento dos brotos não foi satisfatório, sendo a maior parte dos brotos (>60%) classificados na classe de tamanho de 0,0-2,0 cm. Há necessidade de ajuste do manejo da cultura nas fases de multiplicação e alongamento para a obtenção de brotos com maior vigor aptos a enraizar em condições ex vitro, a fim de que esta técnica possa se tornar viável em larga escala.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico The Azadirachta indica A. Juss species, popularly known as neem, belongs to the Meliaceae family, which has great potential for azadirachtin (AZA) production; however, neem has recalcitrant seeds, cross-pollination and variable content of AZA. Four experiments were conducted in order to understand the in vitro growth limiting factors of these plants and changes in levels of AZA: i) In vitro propagation of neem by culture of collected nodal segments; ii) Evaluation of leaf anatomy of plants grown in three different environments (in vivo, in vitro and acclimatized), using the micromorphometric technique; iii) Evaluation of levels of AZA, which were determined by High Performance Liquid Chromatography (HPLC) in cotyledonary callus, grown in WPM liquid medium with absence and presence of glucose (carbon source), hydrolyzed casein (nitrogen source) and methyl jasmonate (elicitor agent); and, iv) The propagation of somatic embryos from cotyledonary callus. It was found that MS medium has presented the best results for shooting rate, leaflet number and average size of the explants as compared to others culture media (WPM and JADS). It was not induced in vitro rooting of shoots; however, the root system has developed ex vitro during acclimatization, with seedling survival rate of 80%. It was also assayed the general content of lipids, essential oils, resins and oils, tannins and mucilage. It was found that there are significant differences in height between the evaluated leaf tissues, adaxial and abaxial epidermis, as well as in the mesophyll from three environmental conditions. The histochemical assay showed that there is general production of lipids, essential oils and tannins in leaf idioblasts of neem, meanwhile the mucilage test showed negative results for the three evaluated locations. The highest concentrations of AZA (mean 0.2470 mg g-1) were produced in the first and second cultivation week in the presence of these three substances, demonstrating the synergistic effect when the cell mass was cultured in medium supplemented with these. Calli showed high propagation capacity by both regenerative routes organogenesis and embryogenesis starting from the fourth subculture in WPM medium presenting the highest shooting and somatic embryos germination rates. Calli went from a smooth to granular appearance during the subcultures, while color went from dark brown to light brown and white. From the seventh subculture, there was dramatic reduction of in vitro regeneration rate for both types of neem cotyledonary callus. Therefore, this work has contributed for a better understanding of biotechnology techniques aiming the in vitro propagation, cell cultivation for AZA production and anatomical aspects of A. indica. A espécie Azadirachta indica A. Juss, conhecida popularmente por nim, pertence à família Meliaceae, a qual apresenta grande potencial para a produção de azadirachtina (AZA); contudo, possui sementes recalcitrantes, polinização do tipo cruzada e teor variável de AZA. Com o objetivo de se entender os fatores que limitam o crescimento dessas plantas in vitro e a variação nos teores de AZA, foram conduzidos quatro experimentos: i) A propagação in vitro de nim pela cultura de segmentos nodais coletados; ii) Avaliação das anatômicas foliares de plantas cultivadas em três ambientes distintos (in vivo, in vitro e aclimatizado) por meio da técnica de micromorfometria; iii) Avaliação dos teores de AZA foram determinados por meio de Cromatografia Líquida de Alto Desempenho (HPLC) em calos cotiledonares, cultivados em meio líquido WPM na ausência e presença de glicose (fonte de carbono), caseína hidrolisada (fonte de nitrogênio) e metil jasmonato (agente elicitor); iv) A propagação de embriões somáticos a partir de calos cotiledonares. Constatou-se que o meio MS apresentou os melhores resultados de taxa de brotação, número de folíolos e tamanho médio dos explantes em relação aos demais meios de cultivo (WPM e JADS). Não foi induzido enraizamento in vitro dos brotos, porém, o sistema radicular se desenvolveu ex vitro, durante a aclimatização, apresentando taxa de sobrevivência das mudas de 80%. Foi também analisado o conteúdo de lipídios gerais, óleos essenciais e óleos resinas, tanino e mucilagem. Verificou-se diferenças significativas na altura entre os tecidos foliares avaliados, epiderme adaxial e abaxial, assim como no mesofilo nos três ambientes de cultivo. Os testes histoquímicos evidenciaram que há produção de lipídios gerais, óleos essenciais e taninos em idioblastos foliares de nim enquanto o teste para mucilagem foi negativo nos três ambientes avaliados. As maiores concentrações de AZA (média de 0,2470 μg g-1) foram produzidas na primeira e segunda semana de cultivo na presença dessas três substâncias, demonstrando o efeito sinérgico quando a massa celular foi cultivada em meio suplementado com essas substâncias. Os calos apresentaram alta capacidade de propagação pelas duas vias regenerativas, organogênese e embriogênese a partir do quarto subcultivo, em meio WPM, apresentando as maiores taxas de brotação e germinação de embriões somáticos. Os calos passaram do aspecto liso para o granular ao longo dos subcultivos, enquanto que a coloração passou de marrom escuro para marrom claro e branco. A partir do sétimo subcultivo, houve redução brusca quanto à taxa de regeneração in vitro para ambos os tipos de calos cotiledonares de nim. Portanto, esse trabalho colaborou para maior entendimento das técnicas biotecnológicas visando a propagação in vitro, cultivo de células para produção de AZA e aspectos anatômicos de A. indica.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico The present study aimed to determine the time for the rooting of minicuttings in a climatized greenhouse; to assess the influence of the time interval between collection/preparation and plantation, and; to evaluate the use of antioxidants in minicutting rooting of Eucalyptus clones. Minicuttings of five Eucalyptus spp. clones (C1, C2, C3 and C4 = Eucalyptus urophylla x E. grandis and C5 = natural hybrid Eucalyptus grandis), collected in ministumps located at a clonal minigarden, were used. The ministumps were obtained by minicutting rooting in channels of masonry filled with washed sand. By the monitoring of the rooting process of five clones (C1, C2, C3, C4 and C5), peculiarities related to the behavior of each genetic material during the rooting process were verified. It was possible to observe that the necessary time for this process differs among the clones, allowing the identification of the best rooting point for each genetic material. As regards the influence of time interval between collection/preparation and plantation of minicuttings, it was noticed that, in general, time intervals longer than two hours cause a decrease in the rooting and growth of plants. However, the studied clones responded differently to the imposition of the factor, indicating genotypic effect. With regards to the use of antioxidants in the minicuttings, varied responses were observed in the clones, due to the application of ascorbic acid and polyvinylpyrrolidone (PVP). The first one was favorable to the minicuttings from the clone with the lowest rooting percentage (C3); the second one, however, was unfavorable to the studied clones. O presente trabalho teve como objetivos determinar o tempo de enraizamento de miniestacas em casa de vegetação climatizada; verificar a influência do intervalo de tempo entre coleta/preparo e estaqueamento, e; avaliar a utilização de antioxidantes no enraizamento das miniestacas de clones de Eucalyptus. Foram utilizadas miniestacas de cinco clones de Eucalyptus spp. (C1, C2, C3 e C4 = Eucalyptus urophylla x E. grandis e C5 = híbrido natural de Eucalyptus grandis), as quais foram coletadas em minicepas localizadas em minijardim clonal, obtidas pelo enraizamento de miniestacas, implantadas em canaletas de alvenaria, preenchidas com areia lavada. A partir do acompanhamento do processo rizogênico dos cinco clones (C1, C2, C3, C4 e C5), verificou-se peculiaridades em relação ao comportamento de cada material genético durante o enraizamento e foi possível constatar que o tempo necessário para o processo rizogênico difere entre os clones, permitindo a identificação do ponto ótimo de enraizamento para cada material genético. Quanto à influência do intervalo de tempo entre coleta/preparo e estaqueamento de miniestacas, observou-se que, de maneira geral, intervalos de tempo superiores ao período de duas horas causam diminuição no porcentual de enraizamento e no posterior crescimento das mudas, porém os clones estudados responderam de forma diferente à imposição do fator, indicando efeito genotípico. Com relação ao uso de antioxidantes nas miniestacas, foram observadas respostas variadas dos clones com a aplicação do ácido ascórbico e polivinilpirrolidona (PVP), sendo que a utilização do primeiro foi favorável para as miniestacas do clone com menor porcentual de enraizamento (C3), porém, a utilização do PVP mostrou-se desfavorável para os clones trabalhados.

The present study aimed to evaluate Eucalyptus urophylla x E. globulus and Eucalyptus grandis x E. globulus clones in relation to micropropagation by axillary shoot proliferation in the in vitro establishment and multiplication phases, and the rooting of mini-cuttings in the clonal propagation of these hybrids. In the in vitro establishment phase, contamination by fungi and bacteria, browning and nodal segment shoot inductions of 21 Eucalyptus urophylla x E. globulus clones and eight Eucalyptus grandis x E. globulus clones were evaluated in different in vitro introductions. In the in vitro multiplication phase, the multiplication rate of 21 Eucalyptus urophylla x E. globulus clones and six Eucalyptus grandis x E. globulus clones was evaluated in successive subcultures using MS and JADS culture media in different in vitro introductions. In the mini- cuttings, the survival and emission of roots at the bottom of the dibble tube in the green house and shade house was evaluated, and the rooting and number of roots of apical and intermediary mini-cuttings in the shade house, treated with IBA, in nine Eucalyptus urophylla x E. globulus clones and two Eucalyptus grandis x E. globulus clones. In the in vitro establishment phase, shoot induction varied among clones, being satisfactory for most of the genotypes, while the browning rate and bacterial and fungal contamination did not compromise the establishment of the cultures. In the in vitro multiplication phase, a differentiated response for the multiplication rate was noted, with clones presenting good in vitro multiplication rates and recalcitrant others for micropropagation. The MS and JADS culture media had positive effects, with greater multiplication rate tendencies for the MS media, where the multiplication rate of the subcultures varied with the tendency of an initial increase and subsequent fall in most of the clones and in vitro introductions. As for the mini-cuttings, there was no significant effect of IBA in any of the studied characteristics. The survival rate of the mini-cuttings was high for most of the clones and the rooting rate varied among clones and the types of mini-cuttings with superior results for apical mini- cuttings. A high variability of responses to rooting was observed among the studied clones, with clones presenting a high rate of rooting and number of roots for minicuttings, while some clones still lacked adjustments to the mini- cuttings propagation process. O presente estudo teve como objetivos avaliar clones de Eucalyptus urophylla x E. globulus e Eucalyptus grandis x E. globulus em relação à micropropagação pela proliferação de gemas axilares nas fases de estabelecimento e multiplicação in vitro, e o enraizamento de miniestacas na propagação clonal desses híbridos. Na fase de estabelecimento in vitro, foram avaliadas a contaminação por fungos e bactérias, oxidação e a indução de brotações em segmentos nodais de 21 clones de Eucalyptus urophylla x E. globulus e oito clones de Eucalyptus grandis x E. globulus em diferentes introduções in vitro. Na multiplicação in vitro, avaliou-se a taxa de multiplicação de 21 clones de Eucalyptus urophylla x E. globulus e seis clones de Eucalyptus grandis x E. globulus em sucessivos subcultivos nos meios de cultura MS e JADS, em diferentes introduções in vitro. Na miniestaquia, avaliou-se a sobrevivência e a emissão de raízes no fundo do tubete na casa de vegetação e de sombra, e o enraizamento e número de raízes na casa de sombra de miniestacas apicais e intermediárias, tratadas com AIB, em nove clones de Eucalyptus urophylla x E. globulus e dois clones de Eucalyptus grandis x E. globulus. No estabelecimento in vitro, a indução de brotações foi variável entre clones, sendo satisfatória para a maioria dos genótipos, enquanto a ocorrência de oxidação e contaminação por bactérias e fungos não comprometeu o estabelecimento das culturas. Na fase de multiplicação in vitro, houve resposta diferenciada quanto à taxa de multiplicação, com clones apresentando boas taxas de multiplicação in vitro e outros recalcitrantes à micropropagação. Os meios de cultura MS e JADS tiveram efeitos positivos, com tendência de maiores taxas de multiplicação para o meio MS, sendo que ao longo dos subcultivos a taxa de multiplicação variou com tendência de aumento inicial e posterior queda na maioria dos clones e introduções in vitro. Quanto à miniestaquia, não houve efeito significativo do AIB em nenhuma das características estudadas. A sobrevivência das miniestacas foi alta para a maioria dos clones e as taxas de enraizamento variaram entre clones e entre os tipos de miniestacas, com resultados superiores para miniestacas apicais. Foi observado entre os clones estudados alta variabilidade de resposta ao enraizamento, com clones apresentando alto índice de enraizamento e número de raízes por miniestaca, enquanto alguns clones ainda carecem de ajustes no processo de propagação por miniestaquia.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Current protocols used for citrus genetic transformation have resulted in a low number of transgenic plants, furthermore, it used juvenile material which source of explants. Plants regenerated from these sources of explants have long juvenile periods for initial fruit production and are necessary many years for evaluation of the introduced characteristics of interest in the target plant. A reliable and ideal protocol for citrus plant transformation would be based on the use of mature tissue as sources of explant, because the juvenility problem could be lessened and the transgenic trait could be analyzed in a relatively short period of time. Therefore, the initial objective of the present work was to establish promotive conditions for a reliable in vitro regeneration system from internodal segments of mature tissue of sweet orange and rangpur lime to further adequate an efficient and reproducible transformation methodology. For organogenesis induction, we investigated the effects of different culture media associated, growth regulator (BAP and NAA) and β-lactams antibiotics, (timentim, cefotaxime, meropenen and augmentin) on the morphogenic response from mature tissue of Citrus sinensis and C. limonia. We have demonstrated that in vitro shoot induction from mature tissue of Citrus was affected mainly by the genotype, growth regulators, media formulation and antibiotics incorporated to the culture medium. Furthemore, an improved protocol for genetic transformation of epicotyl and immature cotyledons were developed via Agrobacteirum tumefaciens. For protocol involving epicotyl explants some factors were investigated, such as: the use of sonication, vacuum infiltration and sonication in association with vacuum infiltration, comparing with conventional Agrobacterium-mediated transformation method ( dipping method) during cocultivation of Pineapple sweet orange (Citrus sinensis L. Osbeck) and citrumelo Swingle (Citrus paradisi Macf. X Poncirus trifoliate L. Raf.) explants. The use of sonication for 2 seconds, followed by 10 minutes of vacuum infiltration had a positive effect on putative transgenic efficiency, resulting in the highest transformation efficiency (8.4%) for Pineapple sweet orange. For citrumelo Swingle the transformation efficiency also was enhanced with the combination of sonication and vacuum infiltration (9.6%), however power than the highest scores reached by ordinary co-cultivation protocol, which rended a transformation efficiency of 11.2%. Finally, we studied factors that might influence morphogenesis and Agrobacterium-mediated transformation efficiency of immature cotyledons from Duncan grapefruit . For organogenesis induction, the combination of 2 mg l-1 BAP, 1 mg l-1 KIN and 1 mg l-1 IAA led to the highest frequency of cotyledons forming shoots (96%) and number of shoots per explant (5.8), using explants cultured upside down for 3 weeks in the darkness, followed by 3 weeks in 16/8 h (light/dark) regime. Thus, optimization of Agrobacterium-mediated parameters showed that the highest transformation efficiency was achieved when explants were submitted to vacuum infiltration (15 min) in presence of agrobacteria (OD600nm 0.5); co- cultivation for 3- days on 100 μM acetoseryngone- supplemented medium; and finally transferred to a selective MS-based medium, added with 30 mg l-1 kanamycin, 12.5 mg l-1 de Meropenen®, 2 mg l-1 BAP, 1 mg l-1 KIN and 1 mg l-1 IAA. Os protocolos utilizados para transformação genética de citros têm resultado numa baixa eficiência de transformação, com obtenção de pequeno número de plantas transgênicas, além de utilizarem material juvenil como fonte de explantes necessitando de um longo período para frutificação e conseguinte avaliação de uma característica de interesse introduzida. Um protocolo ideal para a transformação de citros seria baseado na utilização de tecido adulto como fonte de explantes, que reduziria o longo período de juvenilidade, e abreviria o tempo para a análise da característica transgênica incorporada. O objetivo inicial do presente trabalho foi o estabelecimento de um sistema de regeneração in vitro a partir de segmentos internodais de plantas adultas de três variedades de laranja doce (Citrus sinensis L. Osb.) e limão Cravo (Citrus limonia Osb.), visando à otimização da metodologia de transformação. Para a indução de organogênese, investigamos diferentes meios de cultura associados a reguladores de crescimentos (BAP e ANA) e antibióticos β- lactâmicos (timentim, cefotaxima, meropenen e augmentina), utilizados na supressão do crescimento bacteriano e na resposta morfogênica de tecidos adultos de C. sinensis e C. limonia. Demonstrou-se que a indução in vitro de brotações em tecidos adultos de citros foi afetada pelo genótipo, reguladores de crescimento, formulação do meio e a pela incorporação de antibióticos no meio de cultura. Além disso, foram adequados protocolo otimizados para a transformação genética de segmentos de epicótilo e cotilédones imaturos via Agrobcaterium tumefaciens. Para a otimização do protocolo envolvendo explantes provenientes de segmentos de epicótilo, alguns fatores foram investigados, como; o uso de sonicação, infiltração a vácuo e sonicação associada com infiltração a vácuo, comparando-se ao método tradicional de transformação envolvendo Agrobacterium (co- cultivo ou imersão na solução bacteriana) durante o co- cultivo de explantes de laranja doce Pineapple , e citrumelo Swuingle . A utilização de sonicação por 2 segundos, seguidos por 10 minutos de infiltração a vácuo, teve efeito positivo na eficiência de transformação (8.4%) para laranja Pineapple . Para citrumelo Swuingle a eficiência de transformação também foi aumentada com a combinação de sonicação e infiltração a vácuo (9,6%), mas não foi suficiente para obter uma percentagem maior que a utilização somente da metodologia tradicional de co-cultivo, com eficiência de transformação de 11,2%. Finalmente, estudou- se fatores que pudessem influenciar o processo de indução da morfogênese e a eficiência de transformação em cotilédones imaturos de grapefruit Duncan . Para a indução da organogênese a combinação de 2 mg l-1 BAP, 1 mg l-1 KIN and 1 mg l-1 AIA promoveu a maior freqüência de cotilédones produzindo brotações (96%) e número de brotações por explante (5,8), utilizando explantes cultivados dorsalmente em contato com o meio de cultura por 3 semanas no escuro, seguido por mais 3 semanas em regime de 16/8 horas (luz/ escuro). Os parâmetros analisados para aumentar a eficiência de transformação mediada por Agrobacterium resultaram em uma alta eficiência de transformação obtida quando os expantes foram submetidos a 15 minutos de infiltração a vácuo em presença da Agrobacterium (OD600nm 0,5), co- cultivados por 3 dias em meio contendo 100 μM de acetoseringona e transferidos para meio de seleção, constituído do meio MS contendo 30 mg l-1 de canamicina, 12,5 mg l-1 de meropenen, 2 mg l-1 BAP, 1 mg l-1 KIN and 1 mg l-1 AIA.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Sugarcane is one of species more cultivated in whole world, reaching more than 80 countries. With the biotechnological progresses, important tools appear for genetic breeding of cane. The production of transgenic plants is very important for clonal propagation species as sugarcane. But plant transformation is dependent of in vitro cultivation and, among their techniques it is somatic embryogenesis, the object of present study. For embryogenesis induction were evaluated effects of growth regulator 2,4-D in followed concentrations: 0, 1, 3, 6 and 9 mg.L-1. During multiplication was tested 1, 3 and 6 mg.L-1 of 2,4-D. In maturation and germination of callus were evaluated presence and absence of light, and the presence or sucrose absence in the medium of cultivation. It was verified that the conditions of the plant in field affect the surface sterilization process directly. The auxin is very important for embryogenic callus induction, however there wasn t significant difference among different concentrations of growth regulator. During the multiplication it was observed that the interaction among 2,4-D and the genotype was significant. Therefore, it was made the unfolding of analysis. The 3 mg.L-1 of 2,4-D treatment was the most efficient for callus multiplication of clone RB835486. In the clones RB855536 and RB928064 the multiplication of embryogenic callus was inversely proportional to the concentration of 2,4- D in the medium. The presence or sucrose absence in the culture medium didn't influence the germination of the somatic embryos significantly. The same was observed in the callus that were maintained under light (clear) or in the darkness during the 30 days of cultivation. In spite of the limited number of regenerate plantlets, the process of plantlets acclimatization was made with success, because 59% of survivors were obtained. A cana-de-açúcar é uma das espécies mais cultivadas em todo o mundo, abrangendo mais de 80 países. Com os avanços biotecnológicos surgem importantes ferramentas para o melhoramento genético desta espécie. Dentre as principais técnicas, está a transgenia que é de suma importância para espécies de propagação clonal como a cana-de-açúcar. Ressalta-se que a transgenia é dependente do cultivo in vitro que por sua vez apresenta como possibilidade a embriogênese somática, objeto do presente estudo. Para a indução da embriogênese, avaliaram-se os efeitos do regulador de crescimento 2,4-D nas concentrações de 0, 1, 3, 6 e 9 mg L- 1. Durante a multiplicação, testou-se 1, 3 e 6 mg L-1 de 2,4- D. Na maturação e germinação, foram avaliadas a presença e ausência de luz (irradiância), além da presença ou ausência de sacarose no meio de cultura. A auxina é fundamental para a indução de calos embriogênicos, contudo não houve diferença significativa nas concentrações utilizadas do regulador de crescimento. Durante a fase de multiplicação, observou-se que a interação entre o 2,4-D e as cultivares foi significativa. Logo, procedeu-se o desdobramento da análise, onde 3 mg L-1 de 2,4-D foi o tratamento mais eficiente para a multiplicação de calos da cultivar RB835486. Nas cultivares RB855536 e RB928064 houve uma relação inversa entre a concentração do regulador de crescimento e a expansão dos calos em milímetros. A presença ou ausência de sacarose no meio de cultura não influenciou significativamente a germinação dos embriões somáticos. O mesmo foi observado nos calos que foram mantidos sob o fotoperíodo de 16 horas- luz (claro) ou no escuro durante os 30 dias de cultivo. Apesar do limitado número de plântulas formadas, o processo de aclimatação das mesmas foi feito com sucesso, alcançando 59% de sobrevivência.

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais The objectives of this work were to propose the proceeds regarding the culture of embryos and induction of somatic embryogenesis of the Acrocomia aculeata palm tree using as explants source the mature and immature zygotic embryos. In the in vitro embryo culture the following were studied: a) the effect of the incubation conditions and of the activated charcoal on the germination of the mature embryos; b) the effect of the medium composition, salt composition and of the activated charcoal on the germination of mature and immature zygotic embryos; and c) the effect of the storage temperature of the fruits and of the sucrose on the in vitro germination of mature and immature zygotic embryos. In relation to the induction of somatic embryogenesis, the effect of the auxin picloram in the induction of embryogenic calluses was evaluated on mature zygotic embryos. In the experiments on in vitro germination of zygotic embryos, the percentage of swelling, oxidation, germination, non reative explants, conversion to viable seedlings, plants with secondary roots, length of the aerial part and of the primary root and the average number of leaves per seedlings were evaluated. In the induction of somatic embryogenesis, the percentages of callus formation on the explants, the type of callus formed (primary or embryogenic), the percentage of nodular callus and the oxidation were evaluated. The culture of embryos under photoperiodic conditions resulted in a high index of oxidation of the explants, but this was favorable to the growth and development of the seedlings if compared to the starting darkness condition. The addition of activated charcoal to the medium showed to be essential to the complete development of the seedlings, mainly because it stimulates the development of an efficient root system, because in the absence of this component in the medium the conversion to the viable seedling was not observed, instead, the seedlings had a slow and unbalanced growth. In relation to the medium composition, in general, the MS medium promoted slightly better results than the Y3 medium, considering the seedling development in the absence of the activated charcoal. However, independent of the saline composition used, the absence of activated charcoal in the medium resulted in the unbalanced growth of the seedlings, which, in this condition, did not show the formation of primary or secondary roots. On the other hand, the addition of activated charcoal to the media promoted the conversion to viable seedlings, with well formed roots and in conditions to grow normally. The seedlings produced from immature embryos had the tendency to develop better in a medium with higher salt concentrations (75 to 100 % of the total power) of the Y3 medium. Moreover, it was observed that the primary roots had a greater length and developed more secondary roots as the concentration of activated charcoal was increased in the medium. In relation to the storage of the fruits, the environmental temperature caused the greatest percentage of germination of the embryos. The lower concentration of sucrose was the worst treatment, because, besides influencing negatively the germination of the embryos, specially those from fruits kept in low temperature, it resulted in the formation of abnormal seedlings, with symptoms of hyperhydricity. In the higher sucrose concentrations no difference was observed in the aspects of the seedlings, that showed great vigour, independently of the storage temperature of the fruits. The temperature of 35 oC stimulated the germination of immature embryos and the formation of viable seedlings, and, independent of the period of time that the fruits were kept in this condition, the physiologic quality and the viability of the explants were maintained. In addition, it rendered greater efficiency during the processing of the fruits and the extraction of the embryos. The frequency of the embryogenic calluses was greater in the medium containing 2,4 mg L-1 of picloram that also showed to be more effective in the formation of nodular structures. Hystologic sections of the nodular calluses showed the formation of pro-embryos and of somatic embryos in the globular phase, but the formation of these structures did not progress to more advanced phases when they were transferred to a maturation medium, and the calluses tended to darken completely after 30 days in this condition. The results obtained in this work allowed to conclude that it is possible to obtain seedlings of Acrocomia aculeata from the in vitro embryo culture in a relatively fast way (12 weeks). Nevertheless, complementary studies directed mainly to the curing of the seedlings should be done, because of the slow growth rate shown, which demonstrates the in vitro rooting difficulty of the species. More specific research in this direction will contribute to increase the survival rate of the seedlings in this phase and thus viabilize the application of this propagation technique to this palm species. The methodologies to improve the maturation phase and the regeneration of somatic embryos need to be adjusted, to allow the cloning in great numbers via somatic embryogenesis, because of the potential as oleaginous plant to produce biofuels. O presente trabalho teve por objetivos a proposição de protocolos para a cultura de embriões e indução de embriogênese somática da macaúba, utilizando-se como fonte de explantes embriões zigóticos maduros e imaturos. Na cultura de embriões in vitro estudou-se: a) o efeito do regime de incubação e carvão ativado na germinação de embriões maduros; b) o efeito da composição do meio, concentração de sais, e do carvão ativado na germinação de embriões zigóticos maduros e imaturos; c) o efeito de temperaturas de armazenamento dos frutos e da sacarose na germinação in vitro de embriões zigóticos maduros e imaturos. Quanto à indução de embriogênese somática, avaliou-se o efeito da auxina picloram na indução de calos embriogênicos, a partir de embriões zigóticos maduros. Nos experimentos de germinação in vitro de embriões zigóticos, avaliaram-se os percentuais de intumescimento, oxidação, germinação, explantes sem reação, conversão de plântulas viáveis, plantas com raízes secundárias, comprimento da parte aérea e da raiz primária e o número médio de folhas por plântula. Na indução de embriogênese somática, foram avaliados os percentuais de calejamento dos explantes, o tipo de calo formado (primário ou embriogênico), o percentual de calos nodulares e a oxidação. O cultivo dos embriões sob fotoperíodo resultou em elevado índice de oxidação dos explantes, no entanto foi favorável ao crescimento e desenvolvimento das plântulas se comparados ao regime de escuro inicial. A suplementação do meio com carvão ativado mostrou-se imprescindível ao pleno desenvolvimento das plântulas, principalmente por estimular o desenvolvimento de um sistema radicular eficiente, visto que na ausência deste componente no meio, não foi observada a conversão de plântulas viáveis, que por sua vez apresentaram crescimento lento e desbalanceado. Em relação à composição do meio, em geral o meio de MS promoveu resultados ligeiramente superiores ao meio Y3, em termos de desenvolvimento das plântulas, na ausência de carvão ativado. Contudo, independente da composição salina utilizada, a ausência de carvão no meio resultou no crescimento desbalanceado das plântulas, que nessa condição, não apresentaram formação de raízes primárias e secundárias. Por outro lado, a incorporação de carvão ativado aos meios, promoveu a conversão de plântulas viáveis, com raízes bem formadas, e em condições de serem aclimatizadas. Plântulas oriundas da cultura de embriões imaturos tenderam a se desenvolver melhor em meio contendo maiores concentrações de sais (75 e 100 % da força total) do meio Y3. Além disso, notou-se que as raízes primárias tiveram maior alongamento e desenvolvimento de raízes secundárias, à medida que a concentração de carvão ativado no meio foi aumentada. Quanto ao armazenamento dos frutos, a temperatura ambiente incorreu em maior percentual de germinação dos embriões. A menor concentração de sacarose foi o pior tratamento, pois além de influenciar negativamente a germinação dos embriões, especialmente para os frutos mantidos em baixa temperatura, resultou na formação de plântulas anormais, com sintomas de hiperidricidade. Nas concentrações mais elevadas de sacarose, não foi observada diferença no aspecto das plântulas, que mostraram-se muito vigorosas, independente da temperatura em que os frutos foram estocados. A temperatura de 35 ºC estimulou a germinação dos embriões imaturos e a conversão de plântulas viáveis, e, independente do tempo em que os frutos permaneceram nessa condição a qualidade fisiológica e viabilidade dos explantes foi mantida. Além disso, proporcionou maior eficiência durante o processamento dos frutos e extração dos embriões. A freqüência de calos embriogênicos foi maior em meio contendo 2,4 mg L-1 de picloram, que também mostrou-se mais efetiva na formação de estruturas nodulares. Seções histológicas de calos nodulares revelaram a formação de pró-embriões e embriões somáticos na fase globular, contudo essas estruturas não progrediram para fases mais avançadas quando transferidas para meio de maturação, e os calos tenderam a escurecer por completo após 30 dias nessa condição. Os resultados obtidos nesse trabalho permitiram concluir que é possível obter plântulas de macaúba a partir da cultura de embriões in vitro de forma relativamente rápida (12 semanas). No entanto, estudos complementares visando, principalmente, aprimorar a fase de aclimatização devem ser conduzidos, considerando o crescimento lento apresentado, o que demonstra a dificuldade de enraizamento in vitro da espécie. Pesquisas mais aprofundadas nesse sentido contribuirão para aumentar a sobrevivência das plântulas nessa fase e com isso viabilizar a aplicação desta técnica na propagação da macaúba. Metodologias que visem a melhoria da fase de maturação e regeneração de embriões somáticos necessitam ser ajustadas, permitindo a clonagem em larga escala desta palmeira, via embriogênese somática, pelo seu potencial como oleaginosa na produção de biocombustíveis.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Current figures show that the flower market is in franc expansion in Brazil and throughout the world, and shows promising for the coming years. Tropical floriculture is adequate as an alternative or auxiliary crop for small-scale producers. Studies about these plants, however, are scarce. The lack of information is perceived in almost every stage of their production, including propagation material, fertilisation and cultivation in general. Heliconia psittacorum L.f., the species featured in this research, shows ample distribution through all of the Brazilian territory, presenting a musaceous growth habit, rhizomes of the sympodial type and erect inflorescences with bracts distributed in a single plane. Flowering occurs during the whole year. This work had as objectives: studying aspects of the cultivation of Heliconia psittacorum L.f. From the selection and preparation of propagation material for obtaining plantlets, to the identification of difficulties and particularities of the culture, in its initial phase of cultivation like: propagation material, substrates and fertilisation, as well as raising data to produce a technical information bulletin for the culture, showing its particularities, but highlighting the simplicity of its cultivation. Four experiments were done, three of them related to propagation material and one to establishing equations for leaf area calculation. For the work with propagation material, the following studies were developed: a study on the classification of rhizomes for commercialisation, another one on the production of propagation material under different organic and mineral fertilisations, and a third on mixtures of substrates for obtaining plantlets with the adequate standard for definitive planting in the field. Results related to propagation show that the best pseudostem diameter for commercial plantlets is 10,01 to 12 mm, classified as Group C. Using non-composted organic materials, when available at the property, is a strategy that can be used by producers for the cultivation of propagation material, while organic and mineral combinations showed more adequate for the production of plantlets. The best plantlet development among substrate mixtures happened with the usage of carbonised sugar-cane bagasse and vermiculite (1:1). As a mineral component in all the mixtures tested, vermiculite presented results better than sand. Dados atuais mostram que o mercado de flores está em franco crescimento no Brasil e no mundo e se apresenta promissor para os próximos anos. A floricultura tropical é adequada como cultura alternativa ou auxiliar para pequenos produtores. Estudos sobre estas plantas, entretanto, são escassos. A carência de informações é constatada em quase todas as etapas da produção, incluindo material de propagação, adubação e o cultivo em geral. Heliconia psittacorum L., espécie alvo desta pesquisa, apresenta ampla distribuição por todo o território nacional, tem hábito musóide, apresenta rizomas do tipo simpodial e inflorescências eretas com brácteas distribuídas em um único plano. O florescimento, ocorre o ano todo. O presente trabalho teve como objetivos: Estudar aspectos da cultura da Heliconia psittacorum L. desde a seleção e preparo de material propagativo para a obtenção de mudas, até a identificação de dificuldades e particularidades da cultura, na sua fase inicial como: material de propagação, substratos e adubações bem como levantar dados com vistas a elaborar um boletim técnico informativo da cultura, mostrando suas particularidades, mas ressaltando a simplicidade do cultivo. Foram realizados quatro experimentos sendo três deles relacionados ao estudo do material propagativo e um ao estabelecimento de equações para o cálculo de área foliar. Para os trabalhos com material propagativo, foi realizado primeiramente um estudo sobre a classificação de rizomas para comercialização, outro sobre produção de material propagativo sob diferentes adubações orgânicas e minerais e um terceiro sobre misturas de substratos para a obtenção mudas com padrão adequado para ir ao campo definitivo. Os resultados relativos à propagação mostraram que os melhores diâmetros de mudas para o comércio é 10,01 a 12 mm de pseudocaule, classificadas como Grupo C. O uso de material orgânico não compostado é uma estratégia que pode ser utilizada pelo produtor, quando disponível em sua propriedade para a produção de material propagativo, sendo que adubações orgânico/mineral, mostraram-se mais adequadas para a produção de mudas. O melhor desenvolvimento de mudas entre as misturas de substratos utilizados se deu com o uso de bagaço de cana carbonizado e vermiculita (1:1). Como componente mineral em todas as misturas de substrato testadas, a vermiculita apresentou melhores resultados que a areia.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico The objective of this work was to evaluate: a) effect of antioxidant substances on the control of oxidation in calli of juvenile explants from Eucalyptus grandis and E. urophylla; b) effect of TDZ on the induction of embryogenic calli in leaves and internodes of Eucalyptus grandis x E. urophylla clones; c) effect of temperature pre-treatment of explants on the induction of embryogenic calli in hybrid clones of Eucalyptus urophylla, and d) effect of TIBA, salicylic acid and acetyl salicylic acid on induction of embryogenic calli in cotyledons and hypocotyls of Eucalyptus urophylla. The parameters evaluated in the present work included percentage of callusing explants, callusing intensity, oxidation, color and texture of calli, and presence of embryogenic structures. In the experiments with the antioxidant substances, callus subculture onto fresh medium every 30 days and the different tested antioxidants were shown inefficient in stopping phenolic oxidation with subsequent explant death after a prolonged culture period. Significant differences were not found for callusing and texture in the different treatments, however, the addition of 10% of coconut water increased callusing of the explants and gave larger percentages of friable calli. In the experiments with TDZ, the combination of TDZ with dicamba and picloram produced calli of yellowish color, whereas the combinations with ZEA and NAA produced most calli of whitish color. The best callusing results were obtained with the treatments combining TDZ, ZEA and NAA. No root induction was observed in any of the treatments, and friable calli were produced only in one clone, but without any embryogenic structure. The use of TIBA, inhibitor of auxin transport, increased callusing intensity in calli induced by dicamba, picloram and 2,4-D. TIBA at the concentrations 0.75 and 1 mg L-1 changed texture from semifriable calli to friable calli, which showed at the end of 50 days a brilliant yellow color with little oxidation, but no embryogenic structures were observed. The pre-treatment at 4oC in combination with the growth regulators dicamba, picloram, TDZ and TDZ + IAA of two Eucalyptus clones did not result in satisfactory induction of somatic embryogenesis. However, with 1 mg L-1, there was formation of cell clusters differentiated into friable calli similar to pro-embryogenic structures in one clone, demonstrating that the cytokinin TDZ is promising for the development of a somatic embryogenesis protocol for adult Eucalyptus explants. The results of this work corroborate with the existing literature with respect to the difficulty in establishing an efficient protocol, with repeatability, for somatic embryogenesis in Eucalyptus species. Nevertheless, the importance of the technique and its applications in clonal silviculture emphasize the need for further studies that approach new possibilities in order to develop an efficient and reproducible somatic embryogenesis system for different species of the genus Eucalyptus. O presente trabalho teve por objetivos avaliar: a) o efeito de substâncias antioxidantes no controle da oxidação em calos obtidos de explantes juvenis de Eucalyptus grandis e E. urophylla; b) o efeito do TDZ na indução de calos embriogênicos em folhas e entrenós de clones de Eucalyptus grandis x E. urophylla; c) o efeito do pré-tratamento com temperatura em explantes na indução de calos embriogênicos de clones híbridos de Eucalyptus urophylla; e d) o efeito das substâncias TIBA, ácido salicílico e ácido acetil salicílico na indução de calos embriogênicos em cotilédones e hipocótilos de Eucalyptus urophylla. Os parâmetros avaliados no presente trabalho foram o percentual de calejamento dos explantes, intensidade de calejamento, oxidação, coloração e textura dos calos e a presença de estruturas embriogênicas. Nos experimentos com as substâncias antioxidantes, a transferência dos calos para novos meios a cada 30 dias e os diferentes antioxidantes testados se mostraram ineficientes em conter a oxidação fenólica e subseqüente morte dos explantes após um período prolongado de cultivo. Não foram observadas diferenças significativas quanto ao calejamento e textura nos diferentes tratamentos, contudo, a adição de 10% de água de coco proporcionou aumento na intensidade de calejamento dos explantes e maiores percentagens de calos friáveis. Nos experimentos com TDZ, a combinação de TDZ com dicamba e picloram proporcionou calos de coloração amarelada, enquanto nas combinações com ZEA e ANA, os calos formados foram em sua maioria de coloração esbranquiçada. Os melhores resultados de calejamento foram obtidos nos tratamentos combinando TDZ, ZEA e ANA. Não foi observada presença de raízes em nenhum dos tratamentos, e calos friáveis foram obtidos somente em um dos clones, entretanto, nenhuma estrutura embriogênica foi observada. A utilização da substância inibidora do transporte de auxina TIBA promoveu aumento na intensidade de calejamento em calos formados com dicamba, picloran e 2,4- D. Nas concentrações de 0,75 e 1 mg L-1 de TIBA, observou-se uma mudança na textura de calos semifriáveis passando para calos friáveis, sendo que estes apresentaram ao final de 50 dias uma coloração amarelo brilhante com pouca oxidação, todavia, não foi observada formação de estruturas embriogênicas. A utilização de um pré-tratamento a 4oC em combinação com os reguladores dicamba, picloran, TDZ e TDZ + AIA em dois clones de Eucalyptus não apresentou resultado satisfatório na indução da embriogênese somática. Contudo, foi observada para um clone a formação de aglomerados celulares diferenciados em calos friáveis obtidos com 1 mg L-1 semelhantes a massas pré-embriogênicas, demonstrando que a citocinina TDZ é promissora no desenvolvimento de um protocolo de embriogênese somática para material adulto de Eucalyptus. Os resultados obtidos neste trabalho corroboram a literatura existente no que diz respeito à dificuldade em estabelecer um protocolo eficiente e com repetibilidade de embriogênese somática para espécies de Eucalyptus. Dada a importância da técnica e suas aplicações na silvicultura clonal, ressalta-se a necessidade de novos estudos que abordem novas possibilidades para o sucesso na obtenção de um sistema eficiente e reproduzível de embriogênese somática para diferentes espécies do gênero Eucalyptus.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior The propagation in vitro of orchids requires specific conditions to be cultivated. This work aimed to evaluate the effects of the methods of cultivation in the process of germination and growth of the species of the Cattleya group, and establish better levels of irradiation for the growth of vitroplants. We evaluated the effects of adding doses (0,0; 1,0; 2,0; 3,0 e 4,0 g L-1) of activated charcoal and of commercial brands in the means of culture GB5, MN, and Peter s. In the second step we evaluated four formulations in the means of culture (Peter s; MS; GB5; and B&G), with 0,0 and 2,0 g L-1 activated charcoal. Finally we studied the effects of the light irradiation (12; 25; 50; 100; and 150 µmol m-2 s-1). The seeds germination of the Laelia purpurata var. carnea, Cattleya amethystoglossa e Laelia anceps var. semia-alba occurred in less time (≈ 30 days) and in higher percentage level (80%) in means of culture without the addition of activated charcoal. In the same conditions, there were more green protocorms also, but the addition of activated charcoal increased the growth of the protocorms with roots. Simpler formulations, for example, the commercial fertilizer Peter s or B&G orchidée can substitute more complex means of culture as MS (1962) and GB5 (1968). Vitroplants of the Cattleya guttata Leopoldi x Lc. Guadalajara cultivated under light irradiation of the 65 µmol m-2 s-1 resulted in a better vegetative growth. In higher levels of irradiation, photo inhibitor effects were observed, but it was reversible in lower frequency, showing the plasticity of the hybrid studied. The propagation in vitro of orchids requires specific conditions to be cultivated. This work aimed to evaluate the effects of the methods of cultivation in the process of germination and growth of the species of the Cattleya group, and establish better levels of irradiation for the growth of vitroplants. We evaluated the effects of adding doses (0,0; 1,0; 2,0; 3,0 e 4,0 g L-1) of activated charcoal and of commercial brands in the means of culture GB5, MN, and Peter s. In the second step we evaluated four formulations in the means of culture (Peter s; MS; GB5; and B&G), with 0,0 and 2,0 g L-1 activated charcoal. Finally we studied the effects of the light irradiation (12; 25; 50; 100; and 150 µmol m-2 s-1). The seeds germination of the Laelia purpurata var. carnea, Cattleya amethystoglossa e Laelia anceps var. semia-alba occurred in less time (≈ 30 days) and in higher percentage level (80%) in means of culture without the addition of activated charcoal. In the same conditions, there were more green protocorms also, but the addition of activated charcoal increased the growth of the protocorms with roots. Simpler formulations, for example, the commercial fertilizer Peter s or B&G orchidée can substitute more complex means of culture as MS (1962) and GB5 (1968). Vitroplants of the Cattleya guttata Leopoldi x Lc. Guadalajara cultivated under light irradiation of the 65 µmol m-2 s-1 resulted in a better vegetative growth. In higher levels of irradiation, photo inhibitor effects were observed, but it was reversible in lower frequency, showing the plasticity of the hybrid studied.

The purpose of this study was to evaluate the influence of storage, antioxidants, auxins and their cofactors on the resulting rooting, as well as rooting rhizogenesis patterns in minicuttings of four Eucalyptus grandis x E. urophylla clones. The samples were collected from a clonal hydroponic minigarden. Regarding the evaluated characteristics, it was observed that the clones responded more effectively to the applications of IBA growth regulator than to the ANA applications, with the IBA doses ranging from 500 and 2,000 mg L-1 being more effective on the examined clones. As for the treatment of the minicuttings using cofactors associated to IBA, it was observed that chlorogenic acid and hydroquinone improved the rooting and survival indices in three clones; phenylalanine and phloroglucinol improved said indices in two of the clones; while only caffeic acid, tryptophane and especially proline improved these responses in all examined clones. The responses to the application of antioxidants varied: the best plant rooting and survival indices were obtained with the use of ascorbic acid and activated carbon with only one clone; whereas PVP showed to be effective with all the examined clones. The best technique was to plant the minicuttings immediately upon their harvest from a clonal minigarden, since it provided the best rooting and survival indices with all four clones, and avoided a negative impact on the propagators due to storage, even when stored for only a short period of time. As for the means used to store the minicuttings, it was observed that the best results were obtained by conditioning the minicuttings in a vertical position with a composite of vermiculite and PVP, possibly due to the specific use of PVP with certain types of clone. The obtained results allow the conclusion that there s a strong correlation between the genotypic differences of the analyzed materials and the plants rooting and their survival success as a response to the use of growth regulators, cofactors and antioxidants on different clones. Thanks to this study new information was brought about regarding the rhizogenesis patterns of minicuttings of the examined clones. It was observed the presence of an endogenous origin of the root primordia as well as the formation and proliferation of a disorganized mass of cells (calli) in minicuttings of up to 12 days old, with one H1 clone standing out from the others for having presented root primordia on or after the eighth day after the minicuttings were planted. O presente trabalho teve como objetivos a avaliação da influência do acondicionamento, antioxidantes, auxinas e seus cofatores no enraizamento adventício, bem como o padrão da rizogênese de miniestacas de quatro clones de Eucalyptus grandis x E. urophylla. Foram utilizadas miniestacas de quatro clones de Eucalyptus grandis x E. urophylla coletadas em minijardim clonal, conduzido em sistema de hidroponia em canaletas. Verificou-se, quanto às características avaliadas, que os clones responderam mais eficientemente às aplicações do regulador de crescimento AIB do que às aplicações de ANA, sendo que as doses entre 500 a 2000 mg L-1 de AIB mostraram-se mais eficientes para os clones estudados. Quanto à utilização dos cofatores associados ao AIB, no tratamento das miniestacas, observou-se que o ácido clorogênico e a hidroquinona melhoraram os índices de enraizamento e de sobrevivência dos três clones; a fenilalanina e o floroglucinol melhoraram os referidos índices em dois clones; somente o ácido cafeico, o triptofano e, principalmente, a prolina melhoraram essas respostas em todos os clones estudados. As respostas dos clones em relação à aplicação dos antioxidantes foram variadas, aonde os melhores índices de enraizamento e de sobrevivência das plantas foram obtidos com a utilização do ácido ascórbico e do carvão ativado para apenas um clone, no entanto o PVP mostrou-se eficiente em todos os clones avaliados. A melhor estratégia foi o plantio das miniestacas logo após a coleta no minijardim clonal, por proporcionar os melhores índices de enraizamento e sobrevivência para os quatro clones, sendo observado efeito negativo do armazenamento dos propágulos, mesmo quando realizado por curto período de tempo. Quanto ao modo de acondicionamento das miniestacas verificou-se que os melhores resultados foram obtidos com o acondicionamento das miniestacas em posição vertical na vermiculita, podendo ser associado com PVP, em função do clone. Os resultados obtidos permitiram concluir que as respostas dos clones em relação à utilização de reguladores de crescimento, cofatores e antioxidantes foram diferenciadas quanto ao enraizamento e sobrevivência das plantas devido às diferenças genotípicas dos materiais estudados. Quanto ao conhecimento do padrão da rizogênese das miniestacas dos clones estudados foi observada a origem endógena de primórdios radiculares, a proliferação e a formação de uma massa de células desorganizadas (calos) em miniestacas com até 12 dias de idade, sendo que um clone destacou-se dos demais por apresentar primórdios radiculares a partir de 8 dias após o plantio das miniestacas.

Universidade Federal do Espírito Santo The oxidative stress results into reaction series of the reactive oxygen species (ROS) that are considered as detrimental to biological membranes. In addition, the tissues can produce and liberate gases such as the ethylene and CO2, as being the first one responsible for the chlorosis, senescence and leaf abscission. High irradiance on the photosynthesizing tissues results into a stress reaction series so-called photoinhibition. Using the phytoregulators can also change the physiology of the plant, therefore inducing it to stressful condition. Under normal physiologic conditions, the production of those radicals is appropriately controlled by deintoxicant agents. In the species P. edulis f. flavicarpa, the germination of the seeds is genotype-dependent, whereas storage is beneficial to their germination. BAP affects the absorption of mineral nutrients through the hypocotyledonous segments, whereas the soaking time in this cytocinin is related to the formation of organogenetic structures. The irradiance incidence on the hypocotyledonous segments and stem apexes affects the ethylene emission rate and CO2. There is a relationship between the ethylene production and biosynthesis or leaf pigment degradations. In the organogenetic process, a direct relationship occurs between the sprout formations at the highest irradiances and the increase in POD activity. The growth of the stem apexes is related to inactivation of the enzymes SOD and CAT. Yet, increasing MDA levels indicate that only the increased CAT activity is not enough to remove ROS. The increase in the irradiance levels affects the potential quantum production of FSII, whereas this one is indicated for measuring the plantlet stress levels because it shows a behavior similar to photosynthetic activity . The photosynthetic activity evaluation system contributed to the analysis of the passion fruit plant plantlets cropped in vitro. In this study, hypocotyledonous segments and the P. edulis f. flavicarpa plantlets showed a better adaptation to the lowest irradiances. O estresse oxidativo resulta em uma série de reações de espécies reativas do oxigênio (ROS) que são consideradas prejudiciais às membranas biológicas. Além disso, em condições estressantes, os tecidos podem produzir e liberar gases, como o etileno e o CO2, sendo o primeiro, um dos responsáveis pela clorose, senescência e abiscisão foliar. Elevadas irradiâncias sobre os tecidos fotossintetizantes resulta em uma série de reações de estresse denominadas de fotoinibição. O uso de fitorreguladores, também pode alterar a fisiologia da planta e conduzi-la a uma condição estressante. Em condições fisiológicas normais, a produção desses radicais é controlada adequadamente por agentes desintoxicadores. Na espécie P. edulis f. flavicarpa, a germinação das sementes é genótipo-dependente, e o armazenamento beneficia a germinação das mesmas. O BAP influencia a absorção de nutrientes minerais pelos segmentos hipocotiledonares e o tempo de imersão nesta citocinina está relacionado com a formação de estruturas organogênicas. A irradiância incidida sobre os segmentos hipocotiledonares e ápices caulinares influencia a taxa de emissão de etileno e CO2. Há uma relação entre produção de etileno e biossíntese ou degradação de pigmentos foliares. No processo organogênico a uma relação direta entre a formação de brotos, nas maiores irradiâncias, com a elevação da atividade da POD. O crescimento dos ápices caulinares está relacionado com a inativação das enzimas SOD e CAT. E ainda, que os níveis crescentes de MDA indicam que apenas o aumento na atividade da CAT não é suficiente para remover as ROS. A elevação dos níveis de irradiância afeta o rendimento quântico potencial do FSII, e este, por apresentar comportamento semelhante ao da atividade fotossintética é indicado para mensurar os níveis de estresse nas plântulas. O sistema de avaliação da atividade fotossintética, contribuiu para analisar plântulas do maracujazeiro cultivadas in vitro. Neste trabalho, os segmentos hipocotiledonares e as plântulas de P. edulis f. flavicarpa adaptaram-se melhor às menores irradiâncias.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico The present work aimed at: a) evaluating rooting efficiency of adventitious cuttings made from shoots obtained through tree severance, stem ringing and epicormical shoot induction on pruned branches of selected Eucalyptus cloeziana trees; b) evaluating efficiency of growth regulators IBA and NAA in adventitious rooting of minicuttings of Eucalyptus cloeziana clones; c) evaluating efficiency of co-factors PVP and phloroglucinol in adventitious rooting of minicuttings of Eucalyptus cloeziana clones. To obtain shoots through tree severance, 3 and 5 matrices, respectively 5 and 15 years old, were selected. Stem ringing was realized in trees of 5, 15 and 20 years old and branches were cut of trees of 20 years old. To evaluate the growth regulators and co-factors, E. cloeziana clones, originating from the CAF miniclonal hedge, were used. Evaluations verified the efficiency of the root induction methods, survival of the cuttings/minicuttings on leaving greenhouse, rooting on leaving the shade house, survival and height of the cuttings at the age of 90 days, submitted to treatments with growth regulators and co- actors. In the experiment, which evaluated different forms of epicormical shoot induction, all methods were successful at shoot induction. However, only cuttings made of stump shoots resulted in adventitious rooting. Evaluation of the effect of growth regulators IBA and NAA on the rooting of minicuttings showed that clones with the highest rooting potential responded better at adventitious rooting at lowest IBA doses, independent of regulator appliance forms used (liquid or powder). Use of the growth regulator NAA showed no influence on rooting with the majority of the clones studied. In relation to co-factors phloroglucinol and PVP can be concluded that both showed beneficial effects for the majority of the characteristics analysed for the two clones of E. cloeziana. In a general way, based on the objectives of this work, on the applied treatments and on the genetic material used, the obtained results indicate rooting potential of minicuttings techniques of the E. cloeziana clones studied, permitting their clonal propagation in a satisfactory way. O presente trabalho teve por objetivos: a) avaliar a eficiência do enraizamento adventício de estacas confeccionadas a partir de brotações obtidas por meio da decepa da árvore, anelamento de caule e indução de brotações epicórmicas em galhos podados em árvores selecionadas de Eucalyptus cloeziana; b) avaliar a eficiência dos reguladores de crescimento AIB e ANA no enraizamento adventício de miniestacas de clones de Eucalytus cloeziana; c) avaliar a eficiência dos cofatores PVP e floroglucinol no enraizamento adventício de miniestacas de clones de Eucalyptus cloeziana. Para a obtenção de brotações por meio da decepa da árvore foram selecionadas 3 e 5 matrizes de 5 e 15 anos de idade, respectivamente. O anelamento de caule foi realizada em árvores de 5, 15 e 20 anos de idade e os galhos foram retirados de árvores de 20 anos de idade. Para a avaliação dos reguladores de crescimento e dos cofatores foram utilizados clones de E. cloeziana provenientes do minijardim clonal da CAF. As avaliações constaram da eficiência das formas de indução de brotações, da sobrevivência das estacas/miniestacas na saída da casa de vegetação, enraizamento na saída da casa de sombra, sobrevivência e altura das mudas aos 90 dias de idade, submetidas aos tratamentos, com os reguladores de crescimento e cofatores. No experimento em que se avaliou diferentes formas de indução de brotações epicórmicas, todas as formas testadas obtiveram sucesso na indução de brotações, porém, somente as estacas confeccionadas a partir de brotações de cepas, obtiveram resposta ao enraizamento adventício. Na avaliação do efeito dos reguladores de crescimento AIB e ANA no enraizamento das miniestacas, pode-se perceber que os clones com maior potencial de enraizamento responderam melhor ao enraizamento adventício nas dosagens mais baixas de AIB, independentemente da forma de aplicação do regulador (líquido ou pó). No uso de regulador de crescimento ANA, pode-se observar, para a maioria dos clones estudados, que este regulador não influenciou no enraizamento. Em relação aos cofatores floroglucinol e PVP, pode-se concluir que ambos apresentaram efeito benéfico na maioria das características analisadas para os dois clones de Eucalyptus cloeziana. De forma geral, com base nos objetivos do trabalho, nos tratamentos aplicados e material genético utilizado, os resultados obtidos indicam potencialidade de enraizamento das miniestacas dos clones de Eucalyptus cloeziana estudados, permitindo sua propagação clonal de forma satisfatória.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior A simple, reliable, and low-cost cryopreservation method was developed for mature seeds of Dendrobium Jaquelyn Thomas, D. Sena Red Thailand, D. Mini W/RL and D. BFC Pink and for pollen of D. Sena Red Thailand and D. Mini W/RL. Vitrification treatments performed prior to cryopreservation included exposure of seeds and pollen to plant vitrification solution (PVS2) at room temperature or at ice temperature for one to four or five hours before storage in liquid nitrogen. After a few days seeds and pollen were removed from cryopreservation and germination rates were evaluated. Seeds placed directly on liquid nitrogen did not germinate after removal from cryopreservation. For the treatments evaluated, the highest germination rate was observed in seeds exposed to PVS2 for 1 hour on ice. The vitrification has shown to be essential for the germination success and survival of seeds after removal from liquid nitrogen. Germinated seeds developed into normal plantlets. The pollen of D. Sena Red Thailand and D. Mini W/RL has shown high germination rates, above 60 % for all treatments and controls. The vitrification treatment has shown not to be essential for the germination success of pollen after the cryopreservation. The vitrification method, a simple and less time-consuming method of cryopreservation, could be appropriate and practical for conservation of many accessions of orchid seeds. O armazenamento de sementes e pólen tem sido uma preocupação crescente nos programas de melhoramento genético de plantas e tem também grande importância como forma de preservação do material genético. Um método simples para criopreservação de sementes maduras e de pólen de diferentes cultivares do gênero Dendrobium foi testado. Para a cultivar D. Jaquelyn Thomas, o método de vitrificação incluiu a exposição das sementes à solução de vitrificação (PVS2), em temperatura ambiente ou em banho de gelo, por um período de 1, 2, 3, 4 ou 5 horas. Em seguida, as sementes foram colocadas em nitrogênio líquido (NL), durante 14 dias. Após esse período, foram descongeladas e colocadas para germinar em meio MS, contendo metade da concentração dos sais, acrescido de 58,5 mol L-1 de sacarose e solidificado com 0,6 % de ágar, depois de ajustado o pH para 5,7 ± 0,1. A porcentagem de germinação foi determinada após oito semanas de cultivo nesse meio. Para essa cultivar, a maior porcentagem de germinação foi obtida quando as sementes foram deixadas durante uma hora em PVS2 em banho de gelo. Para as demais cultivares, Dendrobium Sena Red; Dendrobium BFC Pink e Dendrobium Mini W/RL, não houve diferença entre os tratamentos em que as sementes permaneceram de uma a três horas em PVS2 em banho de gelo. O tratamento de vitrificação foi essencial para a sobrevivência das sementes após a criopreservação. As sementes que germinaram desenvolveram plantas normais após a vitrificação. O método da vitrificação foi também utilizado na criopreservação de pólen de duas diferentes cultivares do gênero Dendrobium: D. Sena Red Thailand e D. Mini W/RL. A vitrificação incluiu a exposição das políneas ao PVS2 e, em seguida, o armazenamento em NL. Os tratamentos consistiram de um fatorial 4 x 2, em que políneas permaneceram 1, 2, 3 ou 4 horas em PVS2, em temperatura ambiente ou em banho de gelo. Os controles consistiram de: polinização direta das flores (pólen sem PVS2 e sem NL); pólen por 2 horas em PVS2 em banho de gelo e sem NL; pólen em PVS2 no tempo zero e no NL; e pólen colocado direto no NL sem tratamento de vitrificação. As políneas permaneceram em NL durante 48 horas. Após esse período, foram descongeladas e utilizadas para polinizar novas flores. A sobrevivência das políneas ao processo de criopreservação foi determinada pela formação de cápsulas e de sementes viáveis. Não houve diferença significativa, tanto entre os tratamentos, quanto entre estes e os controles, para as duas cultivares testadas. Todas as cápsulas, de todos os tratamentos, produziram sementes viáveis. O método de vitrificação não foi necessário para criopreservar o pólen das cultivares de Dendrobium usadas nesse experimento. Para as cultivares testadas, o simples armazenamento do pólen em NL é suficiente para sua criopreservação.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Atualmente, o TDZ é conhecido como indutor morfogênico, atuando como um substituto de auxinas e citocininas, na embriogênese e organogênese em várias espécies. Com base no exposto, foram realizados estudos com explantes hipocotiledonares cultivados em meio com adição de TDZ e BAP, e sem combinação entre os mesmos. Na primeira e segunda fases, avaliou-se a influência da posição do explante, da polaridade fisiológica e da orientação dos explantes no meio de cultura. Na terceira fase, avaliou-se o potencial do TDZ, como indutor da embriogênese em segmentos hipocotiledonares do maracujazeiro. No final dos estudos, constatou-se que a resposta morfogênica e a rota morfogênica em segmentos hipocotiledonares de maracujazeiro são dependentes da presença e da natureza química das citocininas adicionadas ao meio de cultura em interação com o modo pelo qual o explante é inserido no meio de cultura; a polaridade fisiológica que se estabelece nos extremos dos segmentos hipocotiledonares, bem como a magnitude desta polaridade, pode ser alterada pela natureza química da citocinina, aplicada ao meio de cultivo, e pela orientação do explante nesses meios. Na presença do TDZ, a polaridade não se estabeleceu; não houve gradiente de resposta morfogênica entre os segmentos. Segmentos hipocotiledonares podem ser induzidos à formação de uma massa de células semelhantes à proembriões e estruturas organogênicas sob influência do TDZ, sendo estas rotas morfogênicas dependentes da concentração deste fitorregulador. TDZ is known morphogenic inductor acting as auxin and cytokinin on embryogenesis and organogenesis of several species. Based in this statement, several studies were conducted with passion fruit hypocotyledonary explants, cultivated in a medium with TDZ and BAP without combinations. In the first and the second phase of studies the influence of explant position, physiological polarity and explant orientation were studied. In the third phase of studies the TDZ potentiality as somatic embryogenesis inductor in passionfruit hypocotyledonary segments were studied. Finally, it was observed that the morphogenic response and the morphogenic rote in passion fruit hypocotyledonary segments are dependent on the presence and the chemical nature of the cytokinin in the interaction with position, polarity and orientation of the explant. In the presence of TDZ, the polarity did not establish. There have no gradient of morphogenic response among segments. Under the influence of TDZ and depending on the dose of the same the segment can be induced to form cell masses similar to proembryogenic masses or organogenic structures.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior The nutrition of ornamental plants plays an important role in the production of quality seedlings and flowers. In general, studies focusing on nutrition of such plants are rare, particularly for orchids, which represent a wide field for new research. On this background, our study investigated mainly: the performance of in vitro-grown orchid plants in different chemical media compositions; the effect of the addition of organic and/or chemical fertilizers; and lime addition to the growth medium. In vitro cultivation was evaluated regarding the plant response to different mineral doses and compositions in the medium. The Knudson C medium and that of Novais or NPK fertilizers were used as nutrient sources for this purpose. Two studies were realized in the experiments in pots: one tested different organic fertilizers (a commercial and another homemade one, the latter composed of castor bean meal, bonemeal and ashes) or mineral fertilizers (Peter s or Ca nitrate), applied individually or jointly. The second tested the application of lime doses to the growth medium of plants of the genus Epidendrum. Results obtained in vitro showed that the simple use of NPK fertilizers in culture medium for orchids is feasible; maximal seedling growth was achieved with doses of 5 g L -1 . The simultaneous application of homemade organic and Peter s fertilizers led to a significant increase in plant growth, while separate applications of the two fertilizers did not result in significant differences between them. The commercial organic fertilizer provoked B toxicity symptoms in the plants, as demonstrated in the tissue analysis. Lime application resulted in a higher total dry matter yield and number of leaves per plant. There was however no significant difference in plant height, resulting in plants with shorter internodes, which indicates a probable Zn deficiency. A nutrição de plantas ornamentais é um importante fator para a obtenção de mudas e flores de qualidade. De modo geral, estudos de nutrição para essas plantas são escassos, em particular para as orquídeas, que apresentam um amplo campo para novas pesquisas. Sendo assim, os principais objetivos deste trabalho foram: estudar o comportamento de plantas de orquídeas cultivadas in vitro, submetidas a diferentes composições químicas de meios; estudar o efeito da adição de fertilizantes orgânicos e, ou, químicos e a de calcário no substrato de cultivo. Para os cultivos in vitro, foram realizados estudos com o objetivo de avaliar as respostas das plantas a diferentes doses e composições minerais no meio, sendo, para isso, utilizados os meios Knudson C e de Novais, ou fertilizantes NPK como fontes de nutrientes. Em experimentos em vasos, foram realizados dois estudos: um testando diferentes fertilizantes orgânicos (um comercial e outro doméstico, sendo o último composto por torta de mamona, farinha de ossos e cinzas), ou, minerais (Peters® ou nitrato de Ca), aplicados individualmente ou em conjunto, e um outro testando de doses de calcário no substrato de cultivo de plantas do gênero Epidendrum. Os resultados obtidos in vitro mostraram ser viável a simples utilização de fertilizantes NPK no meio de cultivo para orquídeas, sendo o crescimento máximo das mudas obtido com a dose de 5 g L-1. A aplicação simultânea dos fertilizantes orgânico doméstico e Peters® levou a um significativo aumento no crescimento das plantas, sendo que a aplicação isolada destes dois fertilizantes não resultou em diferenças significativas entre eles. O fertilizante orgânico comercial proporcionou sintomas de toxicidade por B nas plantas, comprovados pela análise de tecidos. A aplicação de calcário resultou em incremento na produção de matéria seca total e no número de folhas de plantas, entretanto, sem diferenças significativas em termos de altura de plantas, o que resultou em plantas com entre-nós mais curtos, indicando uma provável deficiência de Zn.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Este trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar a influência do ácido giberélico (AG3) sobre o florescimento e frutificação da tangerineira 'Poncã', determinar a(s) melhor(es) época(s) de aplicação e reduzir a alternância de produção das plantas. O experimento foi conduzido em delineamento em blocos casualizados com cinco tratamentos e quatro repetições. Em 2001, as plantas foram pulverizadas com ácido giberélico na dose de 25 mg L-1 de AG3 mais 0,1% do espalhante adesivo Silwet®, nos meses de maio (120 dias antes do pleno florescimento – DAPF), junho (90 DAPF), julho (60 DAPF) e agosto (30 DAPF). Em 2002, realizaram-se as pulverizações nos meses de maio (150 DAPF), junho (120 DAPF), julho (90 DAPF) e agosto (60 DAPF), com a dose de 50 mg L-1 de AG3 mais 0,1% do espalhante. A aplicação foliar do ácido giberélico em 2001 promoveu redução no número de brotações reprodutivas desta planta, a qual variou de 89,2% nas plantas pulverizadas com AG3 aos 30 DAPF a 97,8% nas pulverizadas aos 90 DAPF, com redução média de 93,9% nas plantas que foram pulverizadas com AG3 em relação à testemunha. No ano de 2002, houve redução de 83,4% no número de brotações reprodutivas nas plantas pulverizadas aos 60 DAPF, não sendo observado o mesmo comportamento nos demais tratamentos em relação à testemunha. Na safra de 2001/2002, a maior produção total de frutos (21,87 kg planta -1) e o maior número de frutos por planta (120,75 frutos) foram obtidos pelas plantas- testemunha. A menor produção total de frutos (8,38 kg planta -1) e o menor número de frutos por planta (37,25 frutos) foram obtidos pelas plantas pulverizadas com AG3 aos 60 DAPF. Na safra de 2002/2003, o comportamento das plantas foi diferente, sendo os maiores valores de produção total de frutos (36,95 e 28,43 kg planta -1) e número de frutos (246,50 e 194,50 frutos planta -1) obtidos pelas plantas pulverizadas com AG3 aos 120 e 150 DAPF. A alternância de produção da tangerineira ‘Poncã’ não foi reduzida, mas a média de produção (kg planta -1) das duas safras avaliadas (2001/2002 e 2002/2003) foi aumentada, principalmente nas plantas pulverizadas nos meses de maio e junho, indicando ser esses os meses mais propícios para a aplicação do ácido giberélico. Na safra de 2001/2002, as características vitamina C, firmeza da casca, sólidos solúveis totais e acidez total titulável foram as únicas variáveis analisadas nos frutos, que apresentaram diferenças significativas pelo teste de Dunnett. O maior valor de vitamina C, de 48,98 mg/100 mL de suco, foi observado nos frutos das plantas pulverizadas com AG3 aos 90 DAPF, enquanto com relação à firmeza da casca se observaram valores de 24,56 e 32,98 N nas plantas pulverizadas aos 90 e 120 DAPF, respectivamente. As menores porcentagens de sólidos solúveis totais (10,70) e acidez total titulável (0,45) foram verificadas nas plantas pulverizadas aos 120 DAPF. Na safra de 2002/2003, os diâmetros equatorial e transversal, bem como a firmeza da casca, vitamina C, sólidos solúveis totais, açúcares solúveis totais e açúcares não-redutores, foram as características avaliadas que apresentaram diferenças significativas, exibindo os maiores valores (6,02 cm, 8,06 cm, 44,47 mg/100 mL) de suco, 40,26 N, 10,84%, 9,90% e 6,00%, nas plantas pulverizadas com AG3 aos 60, 60, 120, 150, 120, 120 e 120 DAPF, respectivamente. O desenvolvimento do fruto da tangerineira ‘Poncã’ seguiu uma curva do tipo sigmóide simples, sendo a fase I compreendida da antese até o 85o dia após o pleno florescimento, com um período de transição na fase II, que foi até o 101o dia após o pleno florescimento. A fase II teve início logo após a fase de transição, prolongando-se até o 251o dia após o pleno florescimento. A fase III de amadurecimento do fruto iniciou-se no 251o dia após o pleno florescimento, e prolongou-se até a colheita dos frutos, a qual foi realizada no 276o dia após o pleno florescimento. De maneira geral, as plantas pulverizadas com AG3 exibiram o mesmo comportamento das respectivas testemunhas, não sendo possível observar diferenças marcantes com relação às concentrações foliares de carboidratos e teores de nutrientes durante o período em que as mesmas foram avaliadas, com exceção de algumas épocas. As plantas-testemunha exibiram, na maioria das épocas avaliadas, as maiores concentrações de açúcares solúveis totais, redutores, não-redutores e amido, não sendo verificado o mesmo comportamento dos nutrientes N-orgânico, fósforo, cálcio e magnésio. No caso do potássio, as plantas pulverizadas com AG3 exibiram os maiores teores foliares desse nutriente, principalmente no período de maio a dezembro de 2003. The objectives of this work were to evaluate the influence of gibberellic acid (GA 3) on flowering and fructification of ‘Poncã’ tangerine, to determine the best time of application and to reduce plant production fluctuation. The experimental design was a randomized block design, with five treatments and four repetitions. In 2001, the plants were sprayed with 25 mg L-1 plus 0,1% wetting agent spreader Silwet®, in May (120 days before full flowering – DAPF), June (90 DAPF), July (60 DAPF) and August (30 DAPF). In 2002, spraying took place in May (150 DAPF), June (120 DAPF), July (90 DAPF) and August (60 DAPF), with 50 mg L-1 GA3 plus 0,1% spreader. In 2001, foliar application of gibberellic acid reduced the number of reproductive shoots, varying from 89,2% in plants sprayed with GA 3 at 30 DAPF to 97,8% in those sprayed at 90 DAPF, with 93,9% mean reduction in plants sprayed with GA 3 compared with the control. In 2002, there was 83,4% reduction in the number of reproductive shoots of sprayed plants at 60 DAPF, not being observed the same behavior of other treatments compared to the control. In the 2001/2002 harvest, the highest total production (21,87 kg plant-1) and the largest number of fruit per plant (120,75 fruits) were obtained by the control plants, while the lowest total production (8,38 kg plant-1) and the smallest number of fruit per plant (37,25 fruits) were obtained by plants sprayed with GA 3 at 60 DAPF. In the 2002/2003 harvest, plant performance was different, with the largest values for total fruit production (36,95 and 28,43 kg plant-1) and fruit number (246,50 and 194,50 fruits.plant-1) obtained by the plants sprayed with GA 3 at 120 and 150 DAPF. The production fluctuation of the ‘Poncã’ tangerine was not reduced, but the production average (kg plant-1) of the two harvests evaluated (2001/2002 and 2002/2003) increased, mainly in plants sprayed in May and June, indicating those to be the best months to gibberellic acid application. In 2001/2002 crop, the characteristics vitamin C, peel firmness, total soluble solids and total tritable acidity were the only variables analyzed in fruits showing significant differences by Dunnett ́s test. The largest vitamin value C (48,98 mg/100 ml juice) was observed in fruits derived from plants sprayed with GA 3 at 90 DAPF, while values of 24,56 and 32,98 N for peel firmness were found in plants sprayed at 90 and 120 DAPF, respectively. The lowest percentages of total soluble solids (10,70) and total tritable acidity (0,45) were found in plants sprayed at 120 DAPF. In the 2002/2003 crop, equatorial and transversal diameters, as well as peel firmness, vitamin C, total soluble solids, total soluble sugars and non- reducer sugars were the characteristics evaluated that presented significant differences, showing the largest values (6,02 cm, 8,06 cm, 40,26 N, 44,47 mg/100 ml juice, 10,84%, 9,90% and 6,00%) in plants sprayed with GA 3 at 60, 60, 120, 150, 120, 120 and 120 DAPF, respectively. Fruit development followed a simple sigmoid curve, with phase I extending from anthesis to the 85th day after full flowering, with a transition period to phase II that lasted up to the 101st day after full flowering. Phase II began soon after the transition phase, extending up to the 251st day after full flowering. Phase III, fruit ripening, began at the 251st day after full flowering and it was prolonged until harvest, which was carried out at the 276th day after full flowering. Generally, plants sprayed with GA3 showed the same behavior of its respective controls, with no observation of important differences in relation to foliar concentrations of carbohydrates and nutrient levels during the period they were evaluated, except for some times of application. The control-plants, in most of times of application analyzed, showed the highest concentrations of total soluble sugars, reducers, non-reducers and starch, but it was not observed the same results for organic-N, phosphorus, calcium and magnesium. The plants sprayed with GA 3 showed the highest foliar levels of potassium, especially from May to December, 2003.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico A transformação genética está se tornando, cada vez mais, uma ferramenta importante em programas de melhoramento genético de diversas espécies, sendo uma alternativa para a incorporação de gene(s) exógeno(s) no genoma da planta, modificando características de interesse. Para citros, essa ferramenta permite romper barreiras naturais dessa espécie, visto que o desenvolvimento de novas variedades pelo melhoramento convencional possui uma série de limitações impostas pela sua biologia reprodutiva. Entretanto, os protocolos de transformação genética requerem, primariamente, o estabelecimento de um eficiente sistema de morfogênese in vitro para que o sucesso do método de transformação seja alcançado. Portanto, o objetivo deste trabalho foi o estabelecimento das melhores condições de cultivo in vitro para a organogênese e a posterior adequação de uma metodologia eficiente de transformação genética para a variedade de laranja-doce [Citrus sinensis (L.) Osb.] ‘Pêra’. Na avaliação das melhores condições da organogênese in vitro, segmentos de epicótilos foram introduzidos em meio de cultura MT contendo diferentes concentrações de BAP. A concentração de 1,0 mg L -1 de BAP utilizada na fase de indução de brotações assegurou as melhores freqüências de organogênese. Foram também estudados fatores que possam influenciar o processo de transformação genética de citros via Agrobacterium tumefaciens, utilizando epicótilos de laranja ‘Pêra’ como fonte de explante. Os fatores testados foram: tempo de inoculação com Agrobacterium, o período de co-cultivo e a presença de auxina no meio de pré-cultivo. O protocolo otimizado para a transformação genética de laranja ‘Pêra’ foi a imersão do explante em uma solução contendo Agrobacterium, por um tempo de 5 minutos, seguido de um período de co-cultivo de 2 dias em meio de cultura contendo 100 μM de acetoseringona e transferidos para o meio de seleção, constituído do meio MT e ainda de 75 mg L -1 de canamicina, 500 mg L -1 de Timetin ® e 1 mg L -1 de BAP. Genetic transformation is a technique whose importance is increasing as an important tool for breeding programs of several species, being a reliable alternative for introducing characteristics of interest. For citrus, this tool helps to overcome natural reproductive barriers, the obtention of new cultivars by conventional breeding methods has several constraints, mainly linked to its reproductive biology. However, genetic transformation protocols demand, primarily, the establishment of efficient regeneration systems, in order to guarantee the success of transformation method. The objective of the present work was to establish promotive conditions for a reliable in vitro regeneration system from epicotyl explants, and further adequate an efficient and reproducinle transformation methodology for a sweet orange variety [Citrus sinensis L. (Osb.) ‘Pêra’]. For organogenesis, epicotyl explants were cultured onto a MT medium containing different BAP concentrations. For induction phase, 1.0 mg L -1 BAP enabled higher regeneration frequencies of adventitious shoots. Also, factors affecting Agrobacterium-mediated transformation efficiency were tested, as follows: incubation period with bacteria, co-culture period, and the presence of auxin in the pre-culture step. The following conditions generated and optimized protocol for ‘Pêra’ transformation: immersion for 5 minutes of the explants in a diluted Agrobacterium suspension; a 2-days co-culture period in a 100 μM acetoseryngone-supplemented medium; transfer for a selective regeneration MT-based medium, supplemented with 1.0 mg L -1 BAP, 75 mg L -1 kanamycin, and 500 mg L -1 Timentin ® .

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais The objective of this work was to evaluate the in vitro grafting efficiency on the propagation of two Eucalyptus urophylla X E. grandis clones. Juvenile stocks obtained from Eucalyptus grandis and Eucalyptus urophylla germinated in aseptic conditions were used. The evaluations to verify the success percentage and graftings height growth during the in vitro stage (at 35 and 50 days), and survival and height growth of the grafted plants in vitro after the acclimation stage in the ex vitro conditions (at 25, 32, 50 and 70 days) in relation to various periods of permanence of the plants in the dark after grafting (0, 7, 14 and 21 days) were done. The histologic analysis made on the union region of the graftings was made at 7, 14, 21, 28 and 50 days after the in vitro grafting. It was observed that the cicatrization processes of the callus formed on the damaged region and the vascular reconnection on the grafted plants occurred at 14 days after grafting. In relation to height growth during the in vitro stage it was observed a similar behavior between the clones and the stock used. As to the success percentage of the in vitro graftings, for the clone 1, the best results (87%) were obtained when the plants were maintained in the dark for until 14 days after grafting, and for clone 2, the best response (93%) was observed for the dark permanence time of 7 days. In the greatest period of darkness (21 days), the clone 2 grafted on Eucalyptus urophylla saplings showed a greater susceptibility, with vigor loss of the plants and most of the graftings oxidized wich resulted in a reduced number of plants surviving the stage of transference to ex vitro conditions. In the stage of ex vitro acclimation and hardening, there was no significant difference between the clones and dark treatments in relation to the initied in vitro condition. The results obtained allow to conclude that the in vitro grafting methodology adopted showed to be efficient and has potential of use in the clonal propagation and in studies related to clonal rejuvenation of Eucalyptus spp., which are represented by the high survival rate of the grafted plants, which was up to 87% at the end of the ex vitro acclimation stage. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a eficiência da enxertia in vitro na propagação de dois clones de Eucalyptus urophylla x E. grandis. Foram utilizados porta-enxertos juvenis obtidos de sementes de Eucalyptus urophylla e E. grandis, germinadas em condições assépticas. As avaliações foram realizadas quanto ao percentual de pegamento e crescimento em altura dos enxertos durante a etapa in vitro (aos 35 e 50 dias) e quanto à sobrevivência e crescimento em altura das plantas enxertadas in vitro, após a etapa de aclimatização nas condições ex vitro (aos 25, 32, 50 e 70 dias), em relação a diferentes tempos de permanência das plantas no escuro após a enxertia (0, 7, 14 e 21 dias). Foi realizada a análise histológica da região de união dos enxertos aos 7, 14, 21, 28 e 50 dias após a enxertia in vitro. Verificou-se que os processos de cicatrização do calo formado na região de injúria e reconexão vascular das plantas enxertadas ocorreram aos 14 dias após a enxertia. Com relação ao crescimento em altura, observou-se durante a etapa in vitro, comportamento semelhante entre os clones e os porta-enxertos utilizados. Quanto ao percentual de pegamento dos enxertos in vitro, para o clone 1, os melhores resultados (87%) foram obtidos quando as plantas permaneceram por até 14 dias no escuro após a enxertia, enquanto que para o clone 2, melhores respostas (93%) foram observadas no tempo de 7 dias no escuro. Quanto ao maior tempo no escuro (21 dias), o clone 2, enxertado em plântulas de Eucalyptus urophylla mostrou maior sensibilidade, com perda de vigor das plantas e grande parte dos enxertos oxidados, resultando em número reduzido de plantas sobreviventes à fase de transferência para as condições ex vitro. No que se refere à etapa de aclimatização e rustificação ex vitro, não houve diferença significativa entre os clones e entre os tratamentos de escuro na condição inicial in vitro. Os resultados obtidos permitiram concluir que a metodologia de enxertia in vitro adotada se mostrou eficiente e com potencial de aplicação na propagação clonal e em estudos relacionados ao rejuvenescimento de clones de Eucalyptus, representados pela elevada taxa de sobrevivência das plantas enxertadas, atingindo até 87% ao final da etapa de aclimatização ex vitro.

O presente trabalho teve por objetivo aprimorar o protocolo para multiplicação in vitro de videira Vitis aestivalis (Michx.) cv. Norton, sendo dividido em três etapas: seleção de formulações salinas; definição de doses de BAP; e teste do DMSO. As formulações MS, MS 50%, C2D, C2D 50%, B5, NN e Knudson C foram testadas em meio de cultura contendo 4 μM de BAP. Às formulações C2D e C2D 50% foram testados diferentes níveis de BAP (0, 2, 4, 8 e 16 μM), num fatorial 2 x 5. O DMSO foi testado em dois experimentos, constituídos de três tratamentos: 2 e 4 μM de BAP dissolvido em 2 e 4 mL de DMSO, respectivamente; 2 e 4 μM de BAP dissolvido em HCl 1N; e 2 e 4 μM de BAP dissolvido em HCl 1N, com adição de alíquotas de DMSO correspondentes ao primeiro tratamento. O delineamento estatístico foi o de Blocos Casualizados, com seis repetições, nas três etapas. A unidade experimental consistiu de um frasco de cultivo com cinco explantes. O meio de cultura foi constituído de 10 mL L-1 de vitaminas de Staba, 100 mg L-1 de mio-inositol, 30 g L-1 de sacarose, com pH ajustado para 5,70 ± 0,01, acrescido de 10 g L-1 de ágar. Distribuíram-se 30 mL de meio em frascos de vidro de 320 mL, diâmetros externo e interno de 68 mm e 65 mm, e 125 mm de altura, fechados com tampa de polipropileno e filme de PVC, que foram esterilizados em autoclave à 121oC e 1,5 atm, por 20 minutos. Em câmara de fluxo laminar, os explantes foram inoculados verticalmente no meio de cultura. Os frascos foram dispostos em sala de cultura à 27 ± 2oC, umidade relativa de 60 a 70 %, fotoperíodo de 16/8 horas e irradiância de 90 μmol m-2 s-1. A avaliação foi feita aos 30 dias, quanto ao peso fresco de calo, número e comprimento de brotos. As formulações salinas C2D e C2D 50% foram as melhores, destacando-se C2D com maior taxa de multiplicação, brotosm alongados e reduzido peso fresco de calo. A taxa de multiplicação aumentou linearmente nestas formulações, sendo os maiores comprimentos de brotos, 12,10 mm e 7,80 mm, respectivamente, obtidos com 6,14 μM e 5,13 μM. Níveis elevados de BAP reduziram a qualidade dos brotos, aumentando o índice de hiperhidricidade. A dissolução de BAP em DMSO aumentou significativamente o número de brotos. A presença do DMSO como componente do meio de cultura aumentou tanto a massa fresca de calo para ambas as doses, quanto o número de brotos para 4 μM de BAP. O comprimento ideal de brotos na multiplicação in vitro de videira é de, no mínimo 10 mm, para tanto recomenda-se 12,5 μM de BAP para o cv. Norton, nível no qual são obtidos 5,63 brotos/explante, com reduzida formação de calo. The purpose of this work was to improve a protocol for in vitro multiplication of grape Vitis aestivalis (Michx.) cv. Norton, realized into three stages: salt constitution selection; citokinins (BAP) levels effective determination; and DMSO test on in vitro culture. The salt constitution MS, MS 50%, C2D, C2D 50%, B5, NN and Knudson C were evaluated on medium culture containing 4 μM BAP. Different BAP levels (0, 2, 4, 8 and 16 μM), were evaluated on C2D and C2D 50% salt constitution, in a 2 x 5 factorial. DMSO was evaluated in two experiments with three treatments: 2 and 4 μM BAP dissolved in 2 and 4 mL DMSO, concerning; 2 and 4 μM BAP dissolved in HCl 1N; and 2 and 4 μM BAP dissolved in HCl 1N, adding the same DMSO quantity concerning at first treatment. A randomized complete-block design with six blocks was used in all stages. The experimental unit consisted of a flask containing five explants. The culture medium was composed by 10 mL L-1 Staba vitamins, 100 mg L-1 mio-inositol, 30 g L-1 sucrose, pH adjusted to 5,70 ± 0,01, with 10 g L-1 agar-agar increased. Flasks with 320 mL capacity, 2.68 and 2.56 inches external and intern diameter, 4.92 inch height, containing 30 mL culture medium, were stoppered with polipropilen top and PVC film, and after were sterilized at 121 oC and 1.5 atm, during 20 minutes. In sterile chamber, explants were vertical inoculated in culture medium. Flasks were placed in a growth room at 27 ± 2oC, under a 16-h light//8-h dark photoperiod and a photon flux density of 90 μmol m-2 s-1. Estimation was made at 30 days, for callus fresh weight, shoot number and length. C2D and C2D 50% salt constitution were the best, with higher multiplication rate, length shoots and smaller callus fresh weight in C2D salt. Multiplication rate linear increased in these salt constitutions, with greater shoot length, 0.48 and 0.31 inches, concerning, obtained at 6.14 μM and 5.13 μM. Higher BAP levels caused shoots quality reducing, with hyperhidricity index increase. BAP dissolution in DMSO expressive increased shoot number. Culture medium containing DMSO how a component increased both callus fresh weight in both levels, and shoot number at 4 μM BAP. Ideal shoot number on in vitro multiplication of grape is the least 0.39 inches, for which recommend 12.5 μM BAP to cv. Norton, level which obtains 5.63 shoots/explant, with reducing callusing.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico A destruição dos ambientes naturais das bromeliáceas, aliada à coleta indiscriminada, tem levado muitas espécies nativas à extinção. No Estado de Minas Gerais já se encontram listadas 48 espécies ameaçadas. Diante disso foram selecionas três espécies nativas deste Estado (Acanthostachys strobilacea, Aechmea bambusoides e Quesnelia quesneliana) para o desenvolvimento de protocolos de propagação in vitro. No laboratório, as sementes passaram por um processo de desinfestação e foram estabelecidas in vitro. Na fase de multiplicação in vitro, para cada espécie foi feito um experimento, testando-se cinco concentrações de BAP (0, 10, 20, 40 e 80 μM) e duas concentrações dos sais minerais de MS (50% e 100%). Avaliou-se o número de brotações formadas, a altura média das brotações e a presença de raízes nas brotações. Em seguida, as brotações foram transferidas para meio de alongamento e enraizamento. Na fase de aclimatização, as plântulas foram submetidas a experimentos distintos. No caso de A. strobilacea as plântulas tiveram as raízes removidas e foram separadas em três grupos: 1 (10 a 20 mm), 2 (30 a 40 mm) e 3 (50 a 60 mm). As plântulas de A. bambusoides foram separadas em dois grupos: 1 (20 a 40 mm) e 2 (acima de 4,1 a 60 mm). Testou-se como substrato xaxim (Dicksonia sellowiana) e aguapé (Eichhornia crassipes) nessas duas espécies. Para Q. quesneliana, selecionadas com 20 a 30 mm de altura, testou-se xaxim, aguapé e a mistura destes (1:1). Verificou-se que o tratamento de desinfestação das sementes propiciou percentagem de contaminação menor que 1%, para as três espécies. O número de brotações formadas, na etapa de multiplicação, foi maior na concentração estimada de 26,8 μM de BAP para A. strobilacea; 26,11 μM para A. bambusoides e 22,15 μM para Q. quesneliana. No entanto, a altura média das brotações diminuiu com o aumento da concentração de BAP. A formação de raízes só foi observada na ausência de BAP, para todas as espécies estudadas. O meio MS com a metade da concentração dos sais foi eficiente na multiplicação, no alongamento e no enraizamento de A. strobilacea e Q. quesneliana. Para A. bambusoides melhores resultados foram conseguidos com o meio MS não modificado. O aguapé pode ser utilizado como substrato para aclimatização das três espécies, sendo que, para Q. quesneliana, o aguapé deve ser misturado com areia na proporção 1:1. The destruction of the habitats of the bromeliaceae, together with the indiscriminate gathering, has threatened many native species to extinction level. Today In the state of Minas Gerais 48 species are listed as endangered. Considering this, three species (Acanthostachys strobilacea, Aechmea bambusoides and Quesnelia quesneliana) native to this state were selected for the establishment of in vitro propagation protocols. In the laboratory, the seeds underwent a disinfestation process and were established in vitro. In the in vitro multiplication phase an experiment was carried out with each one of the selected species for testing five BAP concentrations (0, 10, 20, 40 e 80 μM) and two concentrations of mineral salts in the MS culture medium (50% e 100%). Evaluations were made through the produced axillary shoots, considering their number, mean height and rooting. After these evaluations, the shoots were transferred to the elongation and rooting medium. In the acclimatization phase the plantlets underwent different experiments. In the case of A. strobilacea the plantlets had their roots removed, then separated in three groups: 1 (10 to 20 mm), 2 (30 to 40 mm) and 3 (50 to 60 mm). The plantlets of A. bambusoides were separated in two groups: 1 (20 to 40 mm) and 2 (41 to 60 mm). These two species were tested on two substrates: xaxim (Dicksonia sellowiana) and water- hyacinth (Eichhornia crassipes). For the experiment with Q. quesneliana, the plantlets utilized had 20 to 30 mm of height and the substrates tested were xaxim, water-hyacinth and a mix of these (1:1). It was verified that the disinfestation treatment of the seeds provided contamination less than 1%, in all species. The numbers of axillary shoots produced in the multiplication phase were greater in the estimated concentrations of BAP: 26,8 μM in A. strobilacea; 26,11 μM in A. bambusoides and 22,15 μM in Q. quesneliana. However, the mean height of axillary shoots decreased with increasing BAP concentration. In all species rooting occurred only in the absence of BAP. The MS medium with half of the salt concentrations was efficient in the multiplication, elongations and rooting of A. strobilacea and Q. quesneliana. For A. bambusoides the best results were obtained with the unmodified MS medium. The water-hyacinth may be utilized as substrate in the acclimatization of the three species, but in the case of Q. quesneliana this substrate must be mixed with sand in an 1:1 proportion.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais Algumas espécies da família Orchidaceae, como as do gênero Cattleya, possuem elevada importância econômica no mercado florístico, que está em plena expansão. Isto demonstra a necessidade de se disporem de métodos adequados de propagação massal, como a cultura de tecidos. Os objetivos deste trabalho foram verificar a capacidade morfogênica de algumas espécies de orquídeas do grupo Cattleya, em grande medida, a formação de novas plantas a partir de explantes específicos, cultivados em diferentes meios de cultivo. No primeiro capítulo, foram descritos os ensaios que subsidiaram os experimentos desta pesquisa. Foram utilizados vários tipos de explante, como ápices radiculares de plântulas obtidas pela via seminífera in vitro, calos originados de protocormóides, formados in vitro, em temperatura elevada, e gemas axilares dianteiras de brotações de plantas adultas de distintas espécies, cultivadas em distintos meios, objetivando verificar as respostas morfogênicas dos citados explantes, bem como formulações e composição dos meios, condições de cultivo e métodos de desinfestação adequados para a condução dos experimentos. No segundo capítulo, foram utilizados segmentos de plântulas obtidas pela via seminífera in vitro de Brassolaeliocattleya Sun King Orange x Laelia purpurata, cultivados em meios com concentrações variadas de auxina e citocinina, para estabelecer um meio com adequado balanço hormonal. Concluiu-se que para o híbrido utilizado, pode-se recomendar o cultivo em 47 dias, em um meio de cultivo liquído constituído de minerais nutrientes de MS, adicionando 1,24 mg L-1 de BAP e 0,6 mg L-1 de 2,4-D. No terceiro capítulo, foram usados ápices caulinares de brotações e gemas axilares, extraídos de brotações e da base dos pseudobulbos de plantas adultas, objetivando identificar o melhor explante para Laelia lobata Jenni x L. lobata alba. Embora os três tipos de explantes apresentassem alta porcentagem de oxidação, todos mostraram boa capacidade morfogênica, principalmente as gemas axilares de brotações, potencializando uma via promissora para propagação em escala comercial dessa espécie. No quarto capítulo, utilizou-se pedúnculo de inflorescência de Cattleya White Dream, cujas novas estruturas poderiam ser utilizadas para o desenvolvimento de plântulas. Para esse híbrido, discos de pedúnculos de inflorescências não apresentaram respostas morfogênicas, segundo os procedimentos experimentais adotados. Uma vez que para cada espécie ou híbrido foi necessário um protocolo específico para sua propagação in vitro, obtiveram-se, de modo geral, respostas morfogênicas de algumas espécies, formando plântulas completas e, em alguns casos, em grande número. Dada a importância dos cultivos celulares para esta planta, estudos futuros devem ser conduzidos para se testarem outros tipos de explante, outros meios e condições de cultivo, de modo a otimizar o processo de propagação massal. Some species of the Orchidaceae family, such as those form the Cattleya, have high economic importance in the flower market, which is in clear expansion. This shows the necessity of adequate methods for mass propagation, like tissue culture. The goals of this work are to verify the morphogenic capacity of some orchid species of the Cattleya group, for a great measure, the formation of new plants from specific explants, grown in different culture media. In the first chapter we describe the essays that subsidized the experiments in this thesis. Various kinds of explants were used, such as root tips from seedlings obtained through in vitro seed propagation, callus originated from protocorm-like bodies, formed in vitro under high temperatures, and forward axillary buds from young shoots of adult plants from different species, grown in different media, aiming to verify the morphogenic response of the aforementioned explants, as well as the formulation and composition of the media, growing conditions and adequate de-infestation methods for the execution of the experiments. In the second chapter, segments of seedling obtained through in vitro seed propagation of Brassolaeliocattleya Sun King 'Orange' x Laelia purpurata, grown in media with different concentrations of auxin and cytokinin, were used to establish a medium with adequate hormonal balance. We concluded that for the hybrid used we can recommend the cultivation in 47 days, in a liquid growing medium composed of MS nutritive minerals, adding 1.24 mg L-1 of BAP and 0.6 mg L-1 of 2.4-D. In the third chapter, young shoot tips and axillary buds, extracted from young shoots and from the basis of adult plant pseudobulbs, were used to identify the best explants for Laelia lobata 'Jenni' x L. lobata alba. Although the three kinds of explants showed high percentage of oxidation, all exhibited good morphogenic capacity, specially the young shoot tips, indicating a promising solution for the propagation of that species in commercial scale. In the fourth chapter, we used inflorescence peduncles of Cattleya White Dream, whose formation of new structures could be used for the growing of seedlings. For that hybrid, sections of inflorescence peduncles did not exhibit morphogenic responses according to the experimental proceedings adopted. Considering that for each species or hybrid a specific protocol was necessary for its in vitro propagation, we achieved, in general, morphogenic responses from some species, forming complete seedlings and, in some cases, in large numbers. Given the importance of cellular cultivation for that plant, future studies must be conducted to test other kinds of explants, other media and growing conditions, in order to optimize the process of mass propagation.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico The effects of the growth regulators TDZ, BAP and ANA on the performance of in vitro propagation by organogenesis was evaluated for three hybrid clones of Eucalyptus grandis x Eucalyptus urophylla with leaf and stem explants. These leaf and stem explants were obtained by extended buds in vitro, cultivated in specific culture medium and treated, in each different phase, with different types and concentrations of growth regulators. Combinations of the growth regulators TDZ with ANA and BAP with ANA were used in the callus induction phase under darkness regime, for a period of 35 days. Based on the best treatment obtained during this phase of callus forming, the growth regulators BAP with ANA were evaluated for the phase of buds regeneration, under photoperiod conditions with 16 hours of light and 8 hours of darkness, with an irradiation of 36 mmol m-2s-1, for a period of 35 days. In general, a differentiated response of the clones in relation to intensity, texture, color and oxidation degree of the callus could be observed, due to the growth regulator treatments, for the leaf as well as for the stem explants. For the three examined clones, the best results in cluster forming were observed for the treatments with a combination of the growth regulators TDZ (0.5 mg L -1) and ANA (0.1 mg L-1), achieving 100% of callus forming in the leaf explant. Node formed callus appeared in the petiole region of the leaf explants, and compact node structures, mainly in the extremities of the stem explants. These regions are responsible for the regeneration of adventitious buds in the leaf explants for clone 1 and in the stem explants for clones 1 and 3. The best regeneration response was obtained with 1.0 mg L-1 BAP for clone 1, using leaf explant, and for clone 3, using stem explant. Histological analyses revealed the adventitious origin of the differentiated buds brought forth by leaf and stem explants. However, precaution is recommended in relation to the use of stem explants for regeneration by organogenesis in vitro, due to the possibility of accidental inclusions of axillary buds during the fabrication of the explants, whose production is lower, compared to that of the leaf explant. O presente estudo objetivou avaliar os efeitos dos reguladores de crescimento TDZ, BAP e ANA no desempenho da propagação in vitro por organogênese de explantes foliar e caulinar de três clones híbridos de Eucalyptus grandis x Eucalyptus urophylla. Os explantes foliar e caulinar obtidos de gemas alongadas in vitro foram cultivados em meio de cultura específico e submetidos, em cada fase distinta, a diferentes concentrações e tipos de reguladores de crescimento. Na fase de indução de calos, foram utilizadas combinações dos reguladores de crescimento TDZ e ANA e de BAP com ANA, sendo esta conduzida em regime de escuridão, pelo período de 35 dias. Na fase de regeneração de gemas, a partir do melhor tratamento obtido na fase de calejamento, avaliaram-se os reguladores de crescimento BAP e ANA, sendo conduzida em condições de fotoperíodo de 16 horas de luz e 8 horas de escuro, à irradiância de 36 mmol m-2 s-1, pelo período de 35 dias. De modo geral, pôde-se observar resposta diferenciada dos clones quanto a intensidade, textura, coloração e grau de oxidação dos calos, em função dos tratamentos com os reguladores de crescimento, tanto para explante foliar quanto caulinar. Para os três clones em estudo, os melhores resultados de calejamento foram observados nos tratamentos com a combinação dos reguladores de crescimento TDZ (0,5 mg L-1) e ANA (0,1 mg L-1), obtendo-se 100% de calejamento no explante foliar. Houve a formação de calo com aspecto nodular na região do pecíolo dos explantes foliares e de estruturas nodulares compactas, principalmente na extremidade dos explantes caulinares, sendo essas regiões responsáveis pela regeneração de gemas adventícias nos explantes foliares para o clone 1 e explantes caulinares para os clones 1 e 3. A melhor resposta de regeneração foi obtida com 1,0 mg L-1 BAP para o clone 1 utilizando-se explante foliar e para o clone 3, utilizando-se explante caulinar. As análises histológicas revelaram a origem adventícia das gemas diferenciadas a partir de explantes foliares e caulinares. Todavia, recomenda-se cautela quanto à utilização de explante caulinar na regeneração por organogênese in vitro, devido à possibilidade de inclusão acidental de gemas axilares durante a confecção dos explantes, aliado ao menor rendimento obtido, em comparação com explante foliar.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior A propagação dos Citrus pode se dar: através da cultura de células e tecido e através da propagação vegetativa clássica, com métodos de estaquia, mergulhia e enxertia, sendo este último o que apresenta maior interesse comercial. Dentre os hipobiotos atualmente mais utilizados, destaca-se a tangerineira ‘Cleópatra’ (Citrus reshni Hort. ex. Tan), devido as suas características agronômicas. Desta forma, este trabalho teve como objetivo geral, a pontualização de um eficiente protocolo organogênico de células, tecido e órgãos, uma vez que o cultivo in vitro de células e tecidos constitui uma estratégia de extraordinária importância para solucionar problemas não apenas no âmbito da propagação, como também do melhoramento genético clássico e do melhoramento genético não convencional, notadamente das plantas lenhosas perenes, como são os citros. Sementes de tangerineira ‘Cleópatra’ ( Citrus reshni Hort. ex. Tan) obtidas de frutos de plantas de 16 anos de idade, foram utilizadas como explantes, visando a obtenção do maior número possível de plântulas axênicas, normais e vigorosas. Após 50 dias de incubação no escuro em meio MS (Murashige & Skogg, 1962) na ausência de vitaminas, foram avaliados o número de tubos contaminados; porcentagem de sementes germinadas; número de plântulas e raízes por semente; comprimento do epicótilo e das plântulas; e vigor destas. O melhor resultado foi obtido ao se utilizar as concentrações de HclO a 0,50% v/v por 30 minutos para a primeira desinfestação e a de 1,00% v/v por 5 minutos para a Segunda desinfestação. As plântulas, obtidas de acordo com o protocolo descrito acima, tiveram o epicótilo seccionado em cinco segmentos, os quais foram utilizados para avaliação da influência de BAP e ANA em distintas condições de incubação (luz, escuro e escuro/luz). Após 50 dias em incubação em -1 meio MS, suplementado com três concentrações de ANA (0,00; 0,10 e 1,00 mg.L ) e quatro-1 de BAP (0,00; 0,50; 1,00 e 3,00 mg.L ) e pelas combinações entre estas, foram avaliados no extremo distal e proximal, dos referidos explantes, o número de gemas, brotos e o tamanho dos calos formados. O processo organogênico ocorreu, tanto por organogênese direta (extremo distal), quanto por indireta (extremo proximal). Na organogênese direta, uma maior formação de gemas foi obtida quando BAP foi adicionado ao meio na concentração de 0,50 -1 mg.L , sob incubação em escuro/luz; e a posterior brotação destas ocorreu de forma mais efetiva em meio com 1,60 mg.L -1 de BAP, sob incubação em luz. Para a organogênese indireta, a incubação dos explantes no escuro foi a mais efetiva em todas as etapas, entretanto, as necessidades requeridas, quanto à natureza do regulador de crescimento e da concentração destes, variaram. Para o processo calogênico foram necessárias combinações específicas entre ANA e BAP, para cada explante, enquanto, para a formação de gemas e brotos a adição de 0,50 mg.L -1 de BAP ao meio de cultivo promoveu de uma forma geral os melhores resultados. Visando a avaliação da influência de AIB, ANA e 2,4D no processo de enraizamento adventício in vitro, foram utilizados como explantes, ápices de plântulas axênicas (protocolo descrito anteriormente). Nesta etapa, o meio MS foi suplementado com 4 concentrações de AIB e de ANA (0,00; 0,50; 1,00 e 1,50 mg.L -1 ), e a combinação de AIB e -1 ANA na concentração de 0,50 mg.L , para ambos reguladores de crescimento, sendo que para esta combinação também foram adicionadas duas diferentes concentrações de 2,4D -1 (0,20 e 0,40 mg.L ). Após 50 dias de incubação, foram avaliados: o número de ápices enraizados, o número de raízes por plântulas, o comprimento de raízes, ápices com formação -1 de calos e o vigor das plântulas. A combinação de AIB e ANA a 0,50 mg.L para ambos, e -1 ANA na concentração de 0,50 mg.L , foram os tratamentos que apresentaram melhores resultados. The propagation of the Citrus can occur: by culture of cells and tissue and by the classic vegetative propagation, using methods of cutting, budding and grafting, the last method mentioned represents, comercially, the most interesting. Among the rootstock more utilized today. The mandarin tree "Cleópatra"( Citrus reshni Hort. ex. Tan) is pointed out due to it's agronomical features. Thus, this work had as a general objective, the pointing of an efficient organogenic protocol of cells, tissues and organs, once that the cultivation in vitro of cells and tissues constitutes a strategy of an extreme importance in solving problems, not only in a propagation aspect as well as in the classic and non-conventional genetic improvement, notedly from the hardwood plants, as the Citrus are. Seeds from the "Cleópatra" tangerine tree ( Citrus reshni Hort. ex. Tan) obtained from the fruits of sixteen year -old plants, were utilezed as explants, with the objective of obtaining the highest number possible of normal and vigorous axenic plantules. After fifty days of incubation in the dark in a MS mean (Murashige & Skoog, 1962)in the absense of vitamins, the number of contaminated tubes; percentage of germinated seeds; number of plantules and roots per seed; length of the epicotile and plantules and their strength. The best result was obtained while using the concentrations of HClO to 0.50%v/v during thirty minutes for the first desinfectation and of 1,00%v/v during five minutes for the second desinfectation. The plantules obtained according to the protocol described above had the epicotile seccionated in five segments, that were utilized for evaluating the influence of BAP and ANA in distinct incubation conditions (light, dark, and light/dark). After fifty days of incubation n i a MS mean, suplemented with three concentrations of ANA (0,00; 0,10 and 1,00 -1 -1 mg.L ) and four of BAP (0,00;0,50;1,00 and 3,00 mg.L ) and by combinations betweens them, the number of buds, shoots, and the size of the formed callus were evaluated in the extreme apical and basal of the reffered explants. The organogenic process occurred by directorganogenesis (extreme apical) as well as indirect (extreme basal). In the direct organogenesis a higher formation of buds was obtained when BAP was added to the mean in the concentration -1 of 0,50 mg.L , under incubation in the dark-light; and their posterior shoottting occurred in a more effective form, with 1,60 mg.L -1 of BAP, under light incubation. For the indirect organogenesis, the incubation of the explants in the dark was the most effective in all stages, however, the required necessities varied, in relation to the nature of the growth regulator and their concentrations. For the callogenic process, specific combinations were necessary between ANA and BAP, to each of the explants, while that the formation of buds and soots, an addition -1 of 0,50 mg.L of BAP to the mean of cultivation promoted in a general way the best results. Aiming the evaluation of the influence of AIB, ANA and 2,4D in the process of adventious rooting in vitro, the apex of axenic plantules (previouly described protocol) were used. In that stage the MS mean was suplemented with four concentrations of AIB and of ANA (0,00; 0,50; -1 - 1,00 and 1,50 mg.L ), and the combination of AIB and ANA in the concentration of 0,50 mg.L , for both growth regulator, and two different concentrations of 2,4D (0,20 and 0,40 mg.L -1 ) were also added. After fifty days of incubation, the number of rooted apexes, roots per plantules, root length, apexes with formation of callus and the plantule's vigour were evaluated. -1 The combination of AIB and ANA to 0,50 mg.L for both, and ANA in the concentration of -1 0,50 mg.L , were the treatments that presented the best results.

Diferentes variedades de goiabeira foram estudadas quanto a capacidade de formar raízes em estacas herbáceas de ramos caulinares, quando estas são provenientes de plantas matrizes submetidas ou não a sombreamento e tratadas ou não com diferentes concentrações de ácido indolbutírico (AIB). Para isto foram realizados dois experimentos, no delineamento estatístico de blocos ao acaso, num arranjo fatorial 6 x 3 x 2, com três repetições. O primeiro fator foi composto de seis soluções, sendo uma solução de apenas água e cinco soluções com 0, 500, 1000, 2000 e 4000 mg.L -1 de AIB. O segundo fator foi composto por três variedades de goibeira (‘Paluma’, ‘Pedro-sato’ e ‘Ogawa- vermelha’) e o terceiro fator, com dois tipos de estacas (estacas retiradas de plantas matrizes expostas a radiação natural ou submetidas a 50% desta radiação) num total de 36 tratamentos. A unidade expe rimental foi constituída por nove estacas. No experimento 1 foram avaliados o número de raízes, o comprimento da maior raiz, formação de calo, formação de necrose na base da estaca e sobrevivência de estacas, aos 35, 52 e 70 dias após plantio, utilizando-se duas estacas ao acaso dentro da unidade experimental. Neste experimento, o efeito do aumento da concentração de AIB sobre o número de raízes e o comprimento da maior raiz só ocorreu aos 52 e 70 dias, sendo as concentrações de 2000 e 4000 mg.L^-1 as que apresentaram melhor resultado. As variedades apresentaram comportamento diferenciado, sendo que a variedade ‘Paluma’ apresentou número de raízes e comprimento da maior raiz superiores. A variedade ‘Pedro-sato’ 70 dias. Estacas apresentou maior mortalidade de estacas aos provenientes de plantas matrizes sombreadas, apresentaram maior número de raízes aos 52 e 70 dias após plantio, sendo que as demais características não foram afetadas por este fator. No experimento 2 foram avaliados o número de raízes, o comprimento da maior raiz, o maior diâmetro basal de raízes, a porcentagem de sobrevivência de estacas, a porcentagem de enraizamento, o peso fresco e seco de raízes, a porcentagem de calejamento e a porcentagem de folhas remanescentes na estaca, aos 90 dias após plantio. A porcentagem de enraizamento e o peso fresco e seco de raízes foram influenciados pelas concentrações de AIB, sendo a concentração de 2000 mg.L^-1 a que apresentou melhor desempenho. O maior diâmetro basal de raízes e o número de folhas remanescentes na estaca não foram influenciados pelas concentrações de AIB. As concentrações acima de 486,13 mg.L^-1 de AIB proporcionaram, em média, os mesmos comprimentos da maior raiz. A variedade ‘Paluma’ foi a que apresentou um melhor enraizamento de estacas, seguida pela variedade ‘Ogawa-vermelha’. A variedade ‘Pedro-sato’ foi a que apresentou os piores índices de enraizamento, com apenas 38,7% de estacas enraizadas e peso fresco e seco de raízes também inferiores. Neste experimento não houve diferença entre os tipos de estacas, entretanto o desdobramento da interação tipos de estacas e variedades demonstrou maior número de raízes em estacas provenientes de plantas matrizes cultivadas a pleno sol e da variedade ‘Paluma’. O número de raízes obtido por esta variedade com estacas provenientes de plantas matrizes sombreadas foi superior aos melhores resultados obtidos pelas outras duas variedades, independentemente do tipo de estaca. No desdobramento da interação variedade e concentração de AIB, para características número de raízes, a concentração de 500 mg.L^-1 apresentou resultado semelhante aos obtidos com as concentrações de 1000, 2000 e 4000 mg.L^-1 em estacas da variedade ‘Paluma’. Para as variedades ‘Ogawa-vermelha’ e ‘Pedro-sato’ a concentração de 4000 mg.L^-1 foi a que proporcionou maior número de raízes por estaca. Different varieties of guava tree were studied as for to their capacity to form roots in herbaceous cuttings of caulis branches when they proceed from stock plants submitted or not to the shading process and treated or not with different concentrations of indolbutiric acid (IBA). For this, two experiments were made, in the statistical delineation of blocks by chance, in a factorial arrangement 6 x 3 x 2, with three repetitions. The first factor was composed of six solutions, one solution with just water and five solutions with 0, 500, 1000, 2000 and 4000 mg.L^-1 of AIB. The second factor was composed of three different varieties of guava tree (‘Paluma’, ‘Pedro-sato’ and ‘Ogawa-vermelha’) and the third factor with two types of cuttings (cuttings taken from stock plants exposed to the natural radiation or submitted at 50% of this radiation) in a total of 36 treatments. The experimental unit was constituted of nine cuttings . In the experiment 1 it was evaluated the numbers of roots, the length of the largest root, callus formation, necrosis formation in the base of the cuttings and survival of the cuttings in 35, 52, and 70 days after plantation, using two cuttings by chance inside the experimental unit. In this experiment, the effect of the increase of the concentration of AIB on the number of roots and the length of the largest root only happened in 52 and 70 days with the concentrations of 2000 and 4000 mg.L^-1 presenting the best result. The varieties presented differentiated behavior with the variety ‘Paluma’ presenting a superior number of roots and length of the largest root. The variety ‘Pedro-sato’ presented larger mortality of cuttings proceeded from stock plants within 70 days. Cuttings submitted to the shading process presented a larger number of roots within 52 and 70 days after plantation. The other characteristics were not affected by this factor. In the experiment 2 it was evaluated the number of roots, the length of the larger root, the largest basal diameter of roots, the percentage of survival of cuttings, the percentage of rooting, the fresh and dry weight of roots, the percentage of callosity and the percentage of remaining leaves in the cuttings within 90 days after plantation. The rooting percentage and the fresh and dry weight of roots were influenced by the concentrations of AIB; the concentration of 2000 mg.L^-1 presented the best performance. The largest basal diameter of roots and the number of remaining leaves in the cuttings were not influenced by the concentration of AIB. The concentrations above 486,13 mg.L^-1 of AIB provided, on the average, the same lengths of the largest root. The variety ‘Paluma’ presented the best rooting of cuttings, followed by the variety ‘Ogawa-vermelha’. The variety ‘Pedro-sato’ presented the worst rooting indexes, with only 38,7% roote d of cuttings and inferior fresh and dry weight of roots. In this experiment there was no difference among the types of cuttings; however, the unfolding of the interaction types of cuttings and varieties demonstrated a larger number of roots in cuttings proceeded from stock plants cultivated at full sun and the variety ‘Paluma’. The number of roots obtained by this variety with cuttings proceeded from stock plants shading was superior in relation to the best results obtained by the other two varieties, independent of the type of the cuttings. In the unfolding of the interaction variety and concentration of AIB, for characteristics numbers of roots, the concentration of 500 mg.L^-1 presented similar result to the ones obtained with the concentrations of 1000, 2000 and 4000 mg.L^-1 in cuttings from ‘Paluma’ variety. For ‘Ogawa-vermelha’ and ‘Pedro-sato’ varieties the concentration of 4000 mg.L^-1 was the one that provided the largest number of roots per cuttings.