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Se realizó la evaluación del uso de plaguicidas con el fin de conocer cuáles son los más empleados en la zona de estudio, para posteriormente analizar los cultivos de mayor relevancia con lo cual se propuso un plan manejo de agropesticidas. The evaluation of the use of pesticides was carried out in order to know which are the most used in the study area, to later analyze the most relevant crops with which an agropesticide management plan was proposed.

Dithiocarbamates (DTC) fungicides have characteristics related to high instability when in the presence of moisture and oxygen, thus requiring special preparation of the sample to be worked on, as well as the development and validation of an individual method for analysis of the generated compounds. In this work, an individual method for the determination of DTC in yerba mate was miniaturized and validated, based on the acid hydrolysis of the sample in the presence of tin chloride II, purification of the extract and subsequent analysis of the carbon disulfide (CS2) generated using gas chromatography–mass spectrometry (GC-MS). The optimization conditions were evaluated through miniaturization in the sample extraction process, based on the amount of sample, volume of extracting solvent and acid solution and the stirring time during the hot bath. These conditions were compared to those already described in the literature. As it is a complex matrix, an extract purification step was carried out through the dispersive solid phase extraction (d-SPE) process using primary and secondary amine (PSA) as sorbents, graphitized carbon (GCB) in addition to magnesium sulfate (MgSO4) as a drier. For the method validation study, the following parameters were evaluated: linearity, matrix effect, limit of detection (LOD) and limit of quantification (LOQ), precision and accuracy. Within the results obtained in the validation study, the LOD was established at 0.05 mg L-1 CS2, and the LOQ at 0.1 mg kg-1 CS2. The coefficient of determination (r2) obtained through the analytical curves was r2 > 0.99. The results obtained through the precision study were acceptable values with RSDr ≤11.2% and RSDpi ≤19.4% and, as well as the recoveries, in the range of 71.3 to 118.2%. The matrix effect calculated was -5.1%, which is within acceptable values for determining trace levels of contaminants. The validation parameters are in accordance with those described in DG-SANTE (2019) and, therefore, suitable for the determination of DTC in yerba mate. The validated method proved to be faster, simpler, and cheaper when compared to the traditional method described in the literature and quite effective for determining DTC in yerba mate. The miniaturized method was applied to 58 samples produced and sold in southern Brazil, 3 produced in Brazil and exported to Uruguay, and 4 produced in Argentina and sold in Brazil. Of the 65 herb samples that were used for the monitoring study, 33.8% had detectable levels of CS2, and 14% had concentration levels higher than the LOQ. Os fungicidas da classe dos ditiocarbamatos (DTC) apresentam características particulares relacionadas à alta instabilidade quando em presença de umidade e oxigênio, necessitando assim, de preparo especial da amostra a ser trabalhada, bem como desenvolvimento e validação de método individual para análise dos compostos gerados. Neste trabalho, um método individual para determinação de DTC em ervamate foi miniaturizado e validado, com base na hidrólise ácida da amostra em presença de cloreto de estanho II (SnCl2), purificação do extrato e posterior análise do dissulfeto de carbono (CS2) gerado utilizando Cromatografia Gasosa acoplada a Espectrometria de Massas (GC-MS, do inglês Gas Chromatography–mass Spectrometry). As condições de otimização foram avaliadas através da miniaturização no processo de extração das amostras, com base na quantidade de amostra, volume de solvente extrator e solução ácida e o tempo de agitação durante o banho quente. Essas condições foram comparadas às já descritas na literatura. Por se tratar de uma matriz complexa, foi realizada uma etapa de purificação do extrato através do processo de extração em fase sólida dispersiva (d-SPE, do inglês Dispersive Solid Phase Extraction) utilizando como sorventes amina primária e secundária (PSA, do inglês, Primary Secundary Amine) e carvão grafitizado (GCB, do inglês Grahitized Carbon Black) além de sulfato de magnésio (MgSO4) como secante. Para o estudo de validação do método, foram avaliados os seguintes parâmetros: linearidade, efeito matriz, limite de detecção (LOD, do inglês Limit of Detection) e limite de quantificação (LOQ, do inglês Limit of Quantification), precisão e exatidão. Dentro dos resultados obtidos no estudo de validação, o LOD foi estabelecido em 0,05 mg L-1 CS2, e o LOQ 0,1 mg kg-1 CS2. O coeficiente de determinação (r2) obtido através das curvas analíticas foi r2>0,99. Os resultados obtidos através do estudo de precisão foram valores aceitáveis com RSDr ≤11,2% e RSDpi≤19,4% e, assim como as recuperações, na faixa de 71,3 a 118,2%. O efeito matriz calculado foi de -5,1%, estando dentro dos valores aceitáveis para determinação de contaminantes em níveis traço. Os parâmetros de validação estão em acordo com descrito no DG-SANTE (2019) e, portanto, apropriados à determinação de DTC em erva-mate. O método validado mostrou ser mais rápido, simples e barato quando comparado ao método tradicional descrito na literatura e bastante eficaz para determinação de DTC em erva-mate. O método miniaturizado foi aplicado a 58 amostras produzidas e comercializadas no sul do Brasil, 3 produzidas no Brasil e exportadas ao Uruguai, e 4 produzidas na Argentina e comercializadas no Brasil. Das 65 amostras de erva que foram utilizadas para o estudo de monitoramento, 33,8% com níveis detectáveis de CS2, sendo que, 14% apresentaram níveis de concentração maior que o LOQ.

ilustraciones, graficas Los ditiocarbamatos (DTC), específicamente mancozeb y propineb, son los fungicidas más vendidos en Colombia, estos son aplicados en una gran variedad de cultivos debido a su actividad fúngica de amplio espectro, además han sido reportados en los últimos años con gran frecuencia en los monitoreos de residuos de plaguicidas realizados por la Comisión Europea. Los DTC son analizados por métodos indirectos debido a su inestabilidad química y baja solubilidad, razón por la que su análisis presenta importantes retos. En el presente trabajo se implementó y evaluó dos metodologías para el análisis de residuos de ditiocarbamatos, específicamente para mancozeb y propineb en frutas y vegetales. Esto con el objetivo de brindar una herramienta para evaluar la calidad e inocuidad de alimentos en Colombia. La primera metodología desarrollada fue propuesta como alternativa y solución a dificultades en la metodología oficial de la Comisión Europea. Esta consistió en la derivatización de mancozeb y propineb a los productos metilados Dimetil-etilenbisditiocarbamato (dimetil-EBDC) y Dimetil-propilenbisditiocarbamato (dimetil-PBDC), extracción con QuEChERS y análisis por Cromatografía Líquida de alta resolución con detector de arreglo de diodos. La metodología se optimizó y validó en una gran variedad de matrices, los resultados demostraron que es eficaz, precisa, lineal y selectiva puesto que permite identificar y separar los residuos de mancozeb y propineb. Se obtuvieron límites de cuantificación expresados como disulfuro de carbono por kilogramo de matriz de 0.059 mg CS2/ kg para Mancozeb (Dimetil-EBDC) y 0.065 mg CS2/kg para Propineb (Dimetil-PBDC) con coeficientes de variación menores al 20%. Adicionalmente, muestra que es adecuada para evaluar la calidad e inocuidad de frutas y vegetales de acuerdo con los límites máximos de residuos establecidos por el CODEX Alimentarius. La segunda metodología se basó en el método oficial de la Comisión Europea. Consiste en realizar una hidrolisis ácida al ditiocarbamato con el fin de producir disulfuro de carbono. Esta no es selectiva para la identificación individual de mancozeb y propineb, ya que el producto de transformación de ambos ditiocarbamatos es disulfuro de carbono. Se realizó la validación de la metodología y se demostró que es lineal, precisa, veraz y selectiva en matrices que no sean de las familias Brassicaceae y Alliaceae, ya que estas matrices producen disulfuro de carbono endógeno. El límite de cuantificación fue de 0.050 mg CS2/kg con coeficientes de variación menor al 20%, porcentajes de recuperación entre el rango de 70%-120%. Por último, se evaluó la estabilidad de los residuos de mancozeb y propineb durante la etapa de procesamiento, se determinó a partir de pruebas estadísticas que el proceso de homogeneización a baja temperatura previene la degradación del ditiocarbamato. Las dos metodologías de análisis demostraron ser equivalentes para el cumplimiento de los límites máximos de residuos en ditiocarbamatos para frutas y vegetales, el método oficial presenta retos que pueden ser superados con el método por derivatización, lo cual permitiria, obtener más información sobre el origen del disulfuro de carbono, mejorar los monitoreos y disminuir la probabilidad de reportar falsos positivos (Texto tomado de la fuente) Dithiocarbamates (DTC), specifically mancozeb and propineb, are the best-selling fungicides in Colombia, these are applied in a wide variety of crops due to their broad-spectrum fungal activity, and have also been reported in recent years with great frequency in monitoring of pesticide residues carried out by the European Commission. DTCs are analyzed by indirect methods due to their chemical instability and low solubility, which is why their analysis presents important challenges. In the present work, two methodologies were implemented and evaluated for the analysis of dithiocarbamate residues, specifically for mancozeb and propineb in fruits and vegetables. This with the objective of providing a tool to evaluate the quality and safety of food in Colombia. The first methodology developed was proposed as an alternative and solution to difficulties presented by the official methodology of the European Commission. This Consisted of the derivatization of mancozeb and propineb to the methylated products Dimethyl-EBDC and Dimethyl-PBDC, extraction with QuEChERS and analysis by High Performance Liquid Chromatography with diode array detector. It was optimized and validated in a wide variety of matrices, the results showed that this methodology is efficient, precise, linear and selective, it since it allows to identify and separate mancozeb and propineb residues. Quantification limits expresed as miligrams of carbon disulfide per kilogramo of matrix of 0.059 mg CS2/kg were obtained for Mancozeb (Dimethyl-EBDC) and 0.065 mg CS2/kg for Propineb (Dimethyl-PBDC) with coefficients of variation less than 20%. Additionally, the derivatization methodology is suitable for evaluating the quality and safety of fruits and vegetables in accordance with the maximum residue limits established by the CODEX Alimentarius. The second methodology was based on the official method of the European Commission. This consists of carrying out an acid hydrolysis of the dithiocarbamate in order to produce carbon disulfide. This methodology is not selective for the individual identification of mancozeb and propineb, since the transformation product in both dithiocarbamates is carbon disulfide. The validation of the methodology was carried out and it was shown that it is linear, precise, truthful and selective in matrices that are not from the Brassicaceae and Alliaceae families, since these matrices produce endogenous carbon disulfide. The quantification limit was 0.050 mg CS2/kg with coefficients of variation less than 20%, recovery percentages between the range of 70%-120%. Finally, the stability of mancozeb and propineb residues during the processing stage was evaluated, it was determined from statistical tests that the low temperature homogenization process prevents the degradation of dithiocarbamate. The two analysis methodologies proved to be equivalent for compliance with the maximum residue limits in dithiocarbamates for fruits and vegetables, the official method presents challenges that can be overcome with the derivatization method, which would allow obtaining more information on the origin of carbon disulfide, improve monitoring and reduce the probability of reporting false positives. Maestría Magíster en Ciencias - Química Química analítica

Pesquisa sem auxílio de agências de fomento O emprego de pesticidas, compostos que combatem as pragas em práticas agrícolas, vem apresentando um crescimento considerável. Alguns pesticidas são compostos químicos tóxicos, o número de casos de contaminação de águas naturais, solos e alimentos por resíduos de pesticidas também aumentou significativamente. A classe dos carbamatos e a sub-classe dos ditiocarbamatos são empregadas como pesticidas, entretanto o uso indiscriminado e acima dos limites máximos permitidos podem causar toxicidade em seres humanos e animais. O presente trabalho teve como objetivos realizar um levantamento bibliográfico mostrando metodologias analíticas para a identificação e quantificação de pesticidas da classe carbamatos e da sub-classe ditiocarbamatos, identificar as principais técnicas eletroanalíticas, identificar diferentes tipos de materiais empregados na preparação de eletrodos de trabalho e discutir algumas aplicações específicas, considerando-se a identificação de carbamatos e ditiocarbamatos em águas naturais, solos, alimentos e bebidas. O estudo foi desenvolvido por meio de revisão bibliográfica a partir de uma busca sistemática no banco de dados científicos “Science Direct” on-line. A perspectiva para a determinação analítica de pesticidas carbamatos e ditiocarbamatos quando se trata de técnicas espectroscópicas é de pouca aplicabilidade devido à baixa seletividade da técnica. Referindo-se às técnicas cromatográficas, apresentaram boas perspectivas provavelmente em função do desenvolvimento das microcolunas, que permitiram o uso de técnicas cromatográficas modernas. O emprego de técnicas eletroanalíticas para a determinação de pesticidas carbamatos e ditiocarbamato possuem perspectivas positivas e envolvem uma variedade de materiais de eletrodos de trabalho, os quais contribuem para o aumento da seletividade na determinação. Acrescenta-se a favorável aplicabilidade de uma associação de técnicas de separação e técnicas de detecção por meio de um detector eletroquímico para determinação de pesticidas em geral, associação na qual os eletrodos sólidos de amálgamas se mostram mais promissores. The use of pesticides, compounds that fight pests in agricultural practices, has increased added growth. Some pesticides are toxic chemical compounds, the number of cases of contamination of natural waters, soils and food by pesticide residues has also increased. The class of carbamates and the subclass of dithiocarbamates are used as pesticides, however indiscriminate use and above maximum limits can cause toxicity in humans and animals. The present work aimed to carry out a bibliographical survey showing analytical methodologies for the identification and quantification of pesticides of the carbamates class and the dithiocarbamates subclass, to identify as main electroanalytical techniques, to identify different types of materials used in the preparation of working electrodes and to discuss some applications specific, considering the identification of carbamates and dithiocarbamates in natural waters, soils, food and beverages. The study was developed through a literature review based on a systematic search in the scientific database "Science Direct" online. The perspective for an analytical determination of carbamates and dithiocarbamates pesticides when it comes to spectroscopic techniques is of little applicability due to the low selectivity of the technique. Referring to chromatographic techniques, good advantages due to the development of microcolumns, which allowed the use of modern chromatographic techniques. The use of electroanalytical techniques for the determination of carbamates and dithiocarbamate pesticides has positive perspectives and involves a variety of working electrode materials, which contribute to increased selectivity in the determination. Added to this is the favorable applicability of an association of separation techniques and detection techniques through an electrochemical detector for the determination of pesticides in general, an association in which solid amalgam electrodes show more promise. Dissertação (Mestrado)

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas, 2021. Fundação de Apoio a Pesquisa do Distrito Federal (FAP/DF) e Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES). Este estudo teve como objetivos gerais: 1) Validar métodos analíticos e determinar os níveis de ditiocarbamatos e outros pesticidas em frutos e folhas de maracujá (Passiflora edulis) produzido em diferentes regiões do Brasil, polpa congelada e farinha de maracujá; 2) Estimar fatores de processamento (FP) para lavagem e secagem da folha e casca de maracujá e 3) Estimar a ingestão diária e o risco da exposição da população brasileira aos pesticidas pelo consumo de polpa e farinha de maracujá. No total, 55 amostras de maracujá e 53 amostras de folhas foram coletadas de produtores nos estados da Bahia, Minas Gerais e Goiás, e no Distrito Federal. Amostras de polpa congelada (n=30) e farinha de maracujá (n=12) foram obtidas do comércio local. O método espectrofotométrico para determinação de ditiocarbamatos foi validado com LOQ de 0,05 mg kg-1 CS2. Cerca de 25% das amostras de cascas do fruto foram positivas (0,06 a 1,40 mg kg-1 CS2) e apenas uma apresentou resíduos na polpa (0,09 mg kg-1 CS2); 43,4% das folhas continham resíduos. O método multirresíduos validado para o fruto, folha e farinha foi o QuEChERS modificado, com extração com acetato de etila acidificado, partição com sais, clean-up em fase sólida dispersiva, e determinação de 80 pesticidas por LC- MS/MS e GC-MS/MS, com LOQ de 5 ou 10 μg kg-1 . Dezenove analitos foram detectados nas amostras analisadas, principalmente imidacloprido, carbendazim e metamidofós (até 0,10 mg kg-1 ). Cerca de 60% das cascas foram positivas para pelo menos um analito, e 40% das polpas desses frutos continham resíduos. Cerca de 60% das polpas comerciais e 30% das farinhas analisadas foram positivas para pelo menos um pesticida. O mesmo método foi validado para análise de 49 analitos nas folhas por LC-MS/MS (LOQ=5 μg kg-1 ); 60,4% das amostras foram positivas, principalmente para carbendazim, difenoconazol e tebuconazol (até 12 mg kg-1 ). Os resultados apontam que boas práticas agrícolas não têm sido aplicadas pelos produtores, que utilizaram pesticidas não autorizados para a cultura do maracujá. No geral, a lavagem reduz os níveis dos analitos detectados (até 90% para ditiocarbamatos) e a secagem aumenta esses níveis (até 9,3 vezes para tebuconazol em folha seca). O consumo de polpa e farinha de maracujá contendo pesticidas não indicou um risco à saúde dos consumidores brasileiros. This study aimed at: 1) to validate analytical methods and to analyze the levels of dithiocarbamates and other pesticides in passion fruit (Passiflora edulis) and leaves collected from Brazilian growers, frozen pulp and passion fruit flour; to estimate processing factors for washing and drying of passion fruit leaves and peel; and 3) to estimate the potential risks from the consumption of passion fruit commercial pulp and flour. In total, 55 samples of passion fruit and 53 samples of leaves were collected from growers in the states of Bahia, Minas Gerais and Goiás, and in the Federal District. Samples of frozen pulp (n=30) and flour (n=12) were obtained from the local market. The spectrophotometric method for the determination of ditiocarbamates was validated at a LOQ of 0,05 mg kg-1 CS2. About 25% of the peel samples were positives (0.06 to 1.4 mg kg-1 CS2) and only one pulp sample contained residues (0.09 mg kg-1 CS2); 43.4 % of the leaf samples contained residues. A multiresidue QuEChERS method was validated for 80 pesticides by LC-MS/MS and GC-MS/MS, which included extraction with ethyl acetate, partition with salts and clean-up with dispersive solid phase. LOQ were 5 or 10 μg kg-1 . Nineteen analytes were detected in the fruit samples, mainly imidacloprid, carbendazim and methamidophos (up to 0.10 mg kg-1 ). Residues were detected in 60% of the peel samples and 40% of these fruits contained residues. About 60% of the commercial frozen pulps and 30% of the flour also contained residues. The same method was validated for the determination of 49 analytes in passion fruit leaves by LC-MS/MS at a LOQ of 5 μg kg-1 ; 60.4% of the samples contained residues, mainly carbendazim, difenoconazole and tebuconazole (up to 12 mg kg-1 ). The results indicated that the growers are not applying good agricultural practices and most pesticides detected are not registered to be used in passion fruit in Brazil. In general, washing the fruits and the leaves decrease residues levels (up to 90% for dithiocarbamates) and drying increases considerably the pesticide residues (up to 9.3 times for tebuconazole in dried leaves). The consumption of passion frozen pulp and flour containing pesticides does not represent a health risk to consumers.

La uchuva (Physalis peruviana) es una especie frutal que ha cobrado gran importancia en Colombia por su potencial de exportación como fruta fresca. Las divisas generadas representan varios millones de dólares al año, lo que la sitúa en segundo lugar después del plátano. Además, también es considerada una fruta tropical exótica que genera interés en el mercado, esta importancia económica ha permitido una mayor atención al cultivo, sin embargo uno de los problemas más notorios es el relacionado con las enfermedades transmitidas por hongos fitopatógenos, especialmente el Fusarium oxysporum, que no solo afecta muchas investigaciones sino también la economía y producción del país. F. oxysporum es un patógeno difícil de controlar, ya que tiene la capacidad de diseminarse a través de fragmentos de plantas enfermas, material vegetal infectado y movimiento de suelo infestado con clamidosporas, las cuales pueden sobrevivir por más de 10 años, dichas características han permitido que los controles de este hongo sean mínimos y a la vez peligrosos para la salud humana, Por ello, este estudio busca incorporar el uso de moléculas biológicamente activas como las chalconas, aminoácidos como el triptófano, poniendo en práctica el uso de la síntesis química para potenciar la actividad antifúngica de dichas moléculas contra Fusarium oxysporum y al mismo tiempo reducir la incidencia de este fitopatógeno y ser amigable con el medio ambiente CAPÍTULO 1 5 REVISIÓN DE LITERATURA 5 Uchuva (Physalis peruviana L.) 6 Ecofisiología de P. peruviana 7 Temperatura 7 Suministro de agua al suelo 8 Luz 8 Altitud 9 Importancia ecológica de Physalis peruviana L 9 Importancia económica 9 Problemáticas del cultivo 10 Fusarium oxysporum 11 Generalidades 11 Formas especiales 13 Interacción planta-patógeno 14 Control frente a Fusarium oxysporum 16 Control químico 17 CAPITULO 2 20 INTRODUCCIÓN 20 OBJETIVOS 24 Objetivo general 24 Objetivos específicos 24 MATERIALES Y MÉTODOS 24 FASE LABORATORIO: 24 FASE INVERNADERO: 29 RESULTADOS Y DISCUSIÓN 33 CONCLUSIONES 52 OBSERVACIONES 53 BIBLIOGRAFIA 54 The cape gooseberry (Physalis peruviana) is a fruit species that has become very important in Colombia because of its potential for export as fresh fruit. The foreign exchange generated represents several million dollars a year, placing it in second place after bananas. In addition, it is also considered an exotic tropical fruit which generates interest in the market, this economic importance has allowed a greater focus on the crop, however one of the most notorious problems is related to diseases transmitted by phytopathogenic fungi, especially Fusarium oxysporum, which not only affects many investigations but also the economy and production of the country. F. oxysporum is a difficult pathogen to control, because it has the ability to spread through fragments of diseased plants, infected plant material and movement of soil infested with chlamydospores, which can survive for more than 10 years, such characteristics have allowed that the controls of this fungus are minimal and at the same time dangerous to human health, For this reason, this study seeks to incorporate the use of biologically active molecules such as chalcones, amino acids such as tryptophan, putting into practice the use of chemical synthesis to enhance the antifungal activity of such molecules against Fusarium oxysporum and at the same time reduce the incidence of this phytopathogen and be environmentally friendly Pregrado

RESUMO Entre as doenças que causam manchas foliares no algodoeiro, a mancha de ramulária tem se tornado importante em ambientes tropicais, porque as condições climáticas são favoráveis para o desenvolvimento do patógeno. Objetivou-se nesse trabalho avaliar o desempenho dos fungicidas difenoconazol, trifenil hidróxido de estanho, trifloxistrobina, protioconazol e mancozebe, isolados ou em misturas, no controle da mancha de ramulária no algodoeiro. O experimento foi conduzido na safra 2014/2015, em uma fazenda localizada no município de Sapezal, estado do Mato Grosso. O delineamento experimental foi em blocos casualizados e quatro repetições, com parcelas subdivididas no tempo. Foram realizadas sete avaliações de níveis de severidade da mancha da ramulária nos sete tratamentos. Os fungicidas foram aplicados oito vezes, em intervalos de 15 dias. Ao final do período experimental, foi avaliada a produtividade e a eficiência de controle dos fungicidas em comparação com a testemunha. A aplicação de fungicidas reduziu os danos de produtividade devido ao ataque italico fungo Ramularia areola. O trifenil hidróxido de estanho, isolado ou em mistura com o difenoconazol permitiu maior controle da severidade da mancha de ramulária do que a combinação de trifloxistrobina + protioconazol com difenoconazol, ou difenoconazol com mancozebe. ABSTRACT Among the diseases that cause leaf spots in the cotton crop, ramularia leaf spot has become important in tropical environments since the weather conditions are favorable to the pathogen development. The aim of this study was to evaluate the performance of fungicides difenoconazole, triphenyltin hydroxide, trifloxystrobin, prothioconazole and mancozeb, alone or in mixtures, in controlling ramularia leaf spot in the cotton crop. The experiment was carried out in the 2014/2015 crop season, at a farm located in Sapezal Municipality, Mato Grosso State. Experimental design was in randomized blocks with four replicates and split plot in time. Seven evaluations of ramularia spot severity levels were performed with seven treatments. Fungicides were applied eight times, at 15-day intervals. At the end of the experimental period, the yield and the control effectiveness of fungicides were evaluated in comparison with control. Fungicide applications reduced yield damage caused by the attack of the fungus Ramularia areola. Triphenyltin hydroxide alone or in combination with difenoconazole allowed greater control of ramularia spot severity than the combination of trifloxystrobin + prothioconazole with difenoconazole, or diphenoconazole with mancozeb.

Realizou-se uma análise crítica dos dados obtidos do Programa de Análise de Resíduos de Agrotóxicos (PARA) da Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA) sobre os resíduos de agrotóxicos do grupo químico ditiocarbamato (DTCs) em maçãs (Malus domestica Borkh) comercializadas in natura durante dez anos no pais. Foram analisadas 1422 amostras de maçãs, das quais 605 apresentaram algum nível de contaminação. O número de amostras positivas para DTCs foi de somente 32.1% em 2003, já o ano seguinte (2004) configurou como o período de maior número de amostras contaminadas, correspondendo a 83,9%, seguido pelo ano de 2007 com 81,9 %. As maçãs atingiram níveis de até 3,04 mg/Kg no ano de 2005, excedendo o limite máximo de resíduos (LMR) (2 mg/Kg) nacional. Independente dos dados informados, o Programa não informa quantas e/ou a porcentagem de amostras que excedeu o LMR, somente a faixa. Os valores encontrados foram satisfatórios (LMR) nos anos de 2003, 2006 e 2007. Foi possível perceber que as maçãs brasileiras, ao longo do período de avaliação oscilaram em picos de presença de resíduo acima dos LMR (em 2001/2002, 2005, 2009, 2010 e 2012), expondo consumidores aos efeitos adversos dos DTCs. Considerando a faixa de anos do monitoramento realizado pelo PARA e avaliada no presente estudo, foi observado que não houve evolução nos resíduos detectados (redução), muito menos acréscimo no número de amostras analisado (oscilou em todos os períodos), bem como de laboratório oficiais para análise, o que demonstra a necessidade de aprimoramento desses fatores. Há necessidade da ANVISA continuar a informar oficialmente consumidores (via website) já que este processo informativo parou em 2012.

Dithiocarbamates are widely used fungicides, including in passion fruit, whose fruits are mainly used for juice production, the leaves for the preparation of herbal tea and medicines. Also, the use of the peel in the food industry has been proposed. In this study, the spectrophotometric method for determination of dithiocarbamate residues, as CS2, in passion fruit (Passiflora edulis) was validated at a limit of quantification (LOQ) of 0.05 mg kg-1 CS2, and 108 samples (55 fruits and 53 leaves) collected from Brazilian growers were analyzed. About 25% of the fruit peel samples were positive (0.06 to 1.4 mg kg-1) and only one sample had residues in the pulp (0.09 mg kg-1), 43.4% of leaf samples contained residues. Washing of fruit reduced the residues in the peel by up to 100%, and drying the leaves increased residue levels by up to 60%. This is the first study that reports dithiocarbamate residues in passion fruit in Brazil, and the results are important for government authorities when planning monitoring programs, and for food and herbal medicine industries.

Besides the possibility to perform determination of a large number of pesticides in only a single chromatographyc analysis using multiresidual methods, sometimes, due to diversity in pesticides chemical composition and particular characteristics, it is still required develop single-residue method, such as for dithiocarbamates (DTC). Therefore, in this study, firstly, was optimized and validated a single method to determine DTC (mancozeb) in biobeds using GC-MS to evaluate biobeds efficiency on DTC degradation. Validation study was performed and assessed the analytical curve linearity (r2), detection and quantification limits (LOD and LOQ), accuracy (recovery%), precision (RSD%) and matrix effect. Recovery experiments were carried out with a standard spiking solution of the DTC pesticide thiram. Blank biomixture samples were spiked at the three levels corresponding to the CS2 concentrations of 1, 3 and 5 mg kg-1, with seven replicates each (n = 7). The method presented recoveries within the range of 89-96% and RSD ≤ 11%. The analytical curves were linear in the concentration range of 0.05 to 10 μg CS2 mL-1 (r2 > 0.9946). LOD and LOQ were 0.2 and 1.0 mg CS2 kg-1, respectively, and the calculated matrix effects were not significant (≤ 20%). The validated method was applied to 80 samples (biomixture), from sixteen different biobeds. Ten percent of samples presented CS2 concentration below the LOD (0.2 mg CS2 kg-1) and 70% of them showed results below the LOQ (1.0 mg CS2 kg-1), which demonstrates the biobeds capability to degrade DTC. The second step was to devepol and validated a method (modification of the New Dutch mini-Luke method) for multiresidue determination of captan and its degradation product (tetrahydrophytalimide), chlorothalonil, chlorpyrifos-ethyl, fenithrothion, methidathion, phosmet and tebuconazole in biobed, using GC-MS/MS. The dichloromethane use and the evaporation step were eliminated. This improvement avoids chlorinated solvents use and allows final extract direct injection into the GC-MS/MS system. After method optimization, validation study was performed based on SANTE Guidance Document. Linearity of analytical curves (r2), residuals, limits of detection (LOD) and quantification (LOQ) and matrix effects (%), were assessed by the analysis of standards solutions prepared in organic solvent and in blank biobed extract at eight concentrations, with seven replicate injections of each standard solution. Accuracy (as recoveries %) precision (as repeatability of recoveries experiments-RSD% and as intermediate precision) were also determinate. Two labeled internal standards were used for quality control. PCB-153 was used as procedure internal standard (P.I.S.), and HCB-C13 was used as instrument internal standard (I.I.S.). Recovery study was performed by the analysis of blank biobed samples spiked at 50, 100 and 200 μg kg-1 (n=7). All pesticides presented average recoveries within the range of 74 and 117%, except captan which was indirectly detected via tetrahydrophytalimide, its degradation product, and also had acceptable recoveries. The RSD values calculated from the 7 replicated recovery samples at 3 concentration levels were below 20% (2 to 14%). The residuals was lower than 20% for all pesticides. The method was linear within the range of 1 to 300 ng mL-1 for 2 pesticides and of 5 to 300 ng mL-1 for 4 pesticides and for tetrahydrophytalimide (the degradation product of captan). The r2 of the analytical curves calculated from matrix-matched standards were > 0.99 for all pesticides except for chlorpyrifos-ethyl, that had an r2 0.98. All studied pesticides presented the LODs of 10 or 20 μg kg-1 and LOQs of 50 μg kg-1. The calculated matrix effects were higher than 25% for all pesticides, excepted for chlorpiripfós-ethyl, that was -20%. Embora o emprego dos métodos multirresiduais possibilite a determinação de um grande número de agrotóxicos em uma única análise cromatográfica, para agrotóxicos da classe dos ditiocarbamatos (DTC), ainda é necessário o desenvolvimento de métodos individuais. Dessa forma, na primeira parte deste trabalho, otimizou-se e validou-se um método individual para determinação de DTC (mancozebe) em camas biológicas utilizando GC-MS. Foram avaliados os parâmetros de linearidade da curva analítica (r2), limites de detecção e de quantificação, exatidão, precisão e efeito matriz. Os estudos de recuperação foram realizados empregando o agrotóxico tiram como solução padrão de fortificação. As amostras “branco” de biomistura foram fortificadas em três concentrações, 1; 3 e 5 mg CS2 kg-1, em sete replicatas (n = 7). O método apresentou recuperações na faixa de 89-96% e RSD ≤ 11%, com linearidade na faixa de concentração de 0,05 a 10 μg CS2 mL-1 (r2> 0,9946). LODm e LOQm foram 0,2 e 1,0 mg CS2 kg-1, respectivamente, e o efeito matriz calculado não foi significativo (≤ 20%). O método validado foi aplicado para análise de 80 amostras (biomistura), de dezesseis reatores diferentes (coletadas em cinco tempos de amostragem) durante quatorze meses. Dez por cento das amostras apresentaram concentração de CS2 abaixo do LODm (0,2 mg CS2 kg-1) e 70% apresentaram resultados abaixo do LOQ (1,0 mg CS2 kg-1), o que confirma a eficiência das camas biológicas para degradar DTC. Na segunda etapa deste trabalho otimizou-se e validou-se um método multirresidual para a determinação de captana e seu produto de degradação (tetrahidroftalimida), clorotalonil, clorpirifós, fenitrotiona, metidationa, fosmete e tebuconazol em camas biológicas, utilizando GC-MS/MS. A otimização do método “ND” mini-Luke foi efetuada em nosso grupo de pesquisa realizando-se a troca de solventes para eliminar o uso de diclorometano e também evitar o passo de evaporação, permitindo a injeção direta do extrato final no GC-MS/MS, o que reduz tempo de análise e o uso de reagentes. Após otimização do método, a validação do mesmo para determinação multirresidual de agrotóxicos em camas biológicas foi realizada com base nas diretrizes do Documento Guia SANTE/11813/2017 avaliando-se a linearidade (r2), os limites de detecção e de quantificação (LOD e LOQ), o efeito matriz, a exatidão e a precisão. Dois padrões internos foram empregados para controle de qualidade, o PCB-153 foi usado como padrão interno do procedimento e o HCB-C13 como padrão interno do instrumento. No estudo de fortificação e recuperação, as amostras “branco” de biomistura foram fortificadas à 50, 100 e 200 μg kg-1 (n = 7) e todos os agrotóxicos, exceto captana a qual foi determinada indiretamente através do seu produto de degradação tetrahidroftalimida, apresentaram recuperações entre 74 e 117%, com valores de RSD% entre 2 e 14%. Os resíduos foram inferiores a 20% para todos os agrotóxicos avaliados. O método foi linear de 1 a 300 ng mL-1 para 3 agrotóxicos e 5 a 300 ng mL-1 para outros 4 agrotóxicos, com coeficientes de determinação maiores do que 0,99 para quase todos os agrotóxicos, exceto para clorpirifós (r2> 0,98). Todos os agrotóxicos apresentaram LODm de 10 ou 20 μg kg-1 e LOQm de 50 μg kg-1. Os valores calculados de efeito matriz ficaram acima de 25% para todos os agrotóxicos estudados, exceto para clorpirifós que foi de -20%.

Introducción: el sector colombiano lleva más de 40 años exportando flores, es un sector dinámico y beneficioso para la economía del país, actualmente tiene una participación del 19,6% del total de las exportaciones generadas. Colombia es uno de los grandes exportadores de flores a nivel mundial, es el segundo exportador de flores frescas cortadas con una participación del 12,5% en el comercio total, después de Holanda que cuenta con el 47%. Para obtener este tipo de flores de exportación y cumplir con los más altos estándares de calidad a nivel mundial, ha sido necesario el uso de los plaguicidas los cuales fueron introducidos en nuestro país desde comienzos de los años 60. El incremento de la demanda en el consumo de estos ha generado un impacto en la salud de los trabajadores de este sector y en el medio ambiente. Objetivo: caracterizar la exposición a plaguicidas ditiocarbamatos y determinar los niveles de propilentiourea en población ocupacionalmente expuesta en empresas de flores en la Sabana de Bogotá (Cundinamarca) y Rionegro (Antioquia). Materiales y métodos: se realizó un estudio descriptivo transversal empleando una base de datos del proyecto macro denominado “Determinación de Biomarcadores en trabajadores del Sector floricultor en Colombia”. La población universo estuvo constituida por 358 registros provenientes del mismo número de trabajadores. Las variables incluidas fueron las sociodemográficas, laborales y las concentraciones de propilentiourea en orina. Para el análisis estadístico se obtuvieron las frecuencias univariadas y para las variables de tipo cuantitativo, se presentan medidas de tendencia central y de dispersión. Resultados: la edad promedio de los trabajadores fue de 36,2 ± 9,7 años. El 27,1% (97) correspondió al sexo masculino y el 72,9% (261) al sexo femenino. Con respecto al cargo desempeñado, el 7,5% (27) pertenecían al riesgo alto, 86,6% (310) riesgo medio y 5,9% (21) a riesgo bajo. El 70,7% se dedican a actividades de cultivo, corte y empaque. Los plaguicidas más empleados a nivel laboral y en el hogar están dentro de la clasificación toxicológica I (extremadamente tóxicos) y II (altamente tóxicos) del INVIMA que corresponden a plaguicidas tipo organofosforado, carbamatos y ditiocarbamatos. Se evidenció el uso de elementos de protección personal como respirador de doble cartucho en el 7,0%, bota caña baja en el en el 58,4% y tyvec en el 2,0%. Los niveles de del metabolito Propilentiourea (PTU) en orina fueron en promedio al final de la jornada laboral de 2,0 mg/l ±3,4. La mayor variación de las concentraciones de PTU estuvo en el grupo de riesgo medio. Conclusión: Se evidenció el uso de plaguicidas extremada y altamente tóxicos empleados a nivel extralaboral y en los cultivos de flores en la sabana de Bogotá y Antioquia. Se hace necesario revisar la matriz de los elementos de protección personal de los trabajadores de riesgo medio puesto que son los que mayor variación presentaron en la concentración de PTU, así mismo se debe reforzar la capacitación, medidas preventivas en el autocuidado no solo a nivel labora si no a nivel del hogar en el manejo, la manipulación y disposición adecuada de los plaguicidas. Introduction: the Colombian sector has been exporting flowers for more than 40 years, it is a dynamic and beneficial sector for the economy of the country, currently has a participation of 19. 6% of total exports generated. Colombia is one of the great exporters of flowers worldwide, it is the second exporter of fresh cut flowers with a participation of 12. 5% ​​in total trade, after Holand that has 47%. To obtain this type of export flowers and meet the highest quality standards worldwide, it has been necessary to use pesticides which were introduced in our country since the early 60`s. The increase in demand in the Consumption of these has generated an impact on the health of workers in this sector and the environment. Objective: to characterize the exposure to dithiocarbamate pesticides and to determine propylenethiourea levels in an occupationally exposed population in flower companies in the Sabana de Bogotá (Cundinamarca) and Rionegro (Antioquia). Materials and methods: a cross-sectional descriptive study was carried out using a database of the macro project called Determination of Biomarkers in Floriculture Sector workers in Colombia. The universe population was constituted by 358 records from the same number of workers. The variables included were the sociodemographic, labor and urine propylenethiourea concentrations. For the statistical analysis univariate frequencies were obtained and for the variables of quantitative type, measures of central tendency and dispersion are presented. Results: the average age of the workers was 36. 2 ± 9. 7 years. 27. 1% (97) corresponded to the male sex and 72. 9% (261) to the female sex. With respect to the position held, 7. 5% (27) belonged to high risk, 86. 6% (310) medium risk and 5. 9% (21) at low risk. 70. 7% are engaged in cultivation, cutting and packing activities. The most commonly used pesticides at work and at home are within the toxicological classification I (extremely toxic) and II (highly toxic) of INVIMA, which correspond to organophosphate, carbamate and dithiocarbamate pesticides. The use of personal protective elements such as a double cartridge respirator in 7. 0%, low cane boot in 58. 4% and tyvec in 2. 0% was evidenced. The levels of the metabolite Propilentiourea (PTU) in urine were on average at the end of the working day of 2. 0 mg / L ± 3. 4. The greatest variation in PTU concentrations was in the medium risk group. Conclusion: The use of extreme and highly toxic pesticides used at an extra-labor level and in flower crops in the Sabana de Bogotá and Antioquia was evidenced. It is necessary to review the matrix of personal protection elements of medium risk workers since they are the ones that presented the greatest variation in the concentration of PTU, likewise, training should be reinforced, preventive measures in self-care not only at the laboratorial level if not at the household level in the handling, handling and adequate disposal of pesticides.

Apple scab (Venturia inaequalis) is the most important disease in Chilean apple (Malus domestica Borkh.) orchards where fungicide management is the main tool to control disease. Sensitivity tests to difenoconazole, fenarimol, mancozeb, and pyrimethanil fungicides were conducted on V. inaequalis wild isolates to construct local baseline sensitivity distributions, and compare them with a collection of isolates from seven different commercial orchards with no evidence of practical resistance. In vitro assays were conducted and sensitivity was measured as inhibition of mycelial growth (difenoconazole, fenarimol, pyrimethanil) or conidial germination (mancozeb). Departure from the baseline distribution to less sensitivity was found for difenoconazole, fenarimol, and mancozeb with resistance factors of 4.7, 5.8, and 2.1, respectively. The highest difference between baseline and orchard populations was observed for fenarimol which showed the highest shift to less sensitivity. Discriminatory doses of 0.04, 1.0, 0.6, and 0.2 µg mL-1 are proposed for in vitro monitoring of sensitivity to difenoconazole, fenarimol, mancozeb, and pyrimethanil, respectively.La sarna del manzano (Venturia inaequalis) es la principal enfermedad del cultivo en Chile y es controlada principalmente con el uso de fungicidas. Se realizaron pruebas de sensibilidad a los fungicidas difenoconazole, fenarimol, mancozeb y pyrimethanil en aislados monoconidiales de cepas silvestres de V. inaequalis con el fin de elaborar curvas basales de sensibilidad y compararlas con la sensibilidad de una colección de aislados monoconidiales provenientes de siete huertos comerciales sin evidencias de resistencia práctica. Se realizaron pruebas in vitro donde la sensibilidad se midió como la inhibición del crecimiento miceliar (difenoconazole, fenarimol y pyrimethanil) o la inhibición de la germinación de conidias (mancozeb). La población de huertos comerciales estudiada presentó una menor sensibilidad a los fungicidas difenoconazole, fenarimol y mancozeb con valores de factor de resistencia 4,7; 5,8; y 2,1 para difenoconazole, fenarimol y mancozeb, respectivamente. La mayor diferencia de sensibilidad entre la población silvestre y la de huerto se obtuvo con feranimol, fungicida para el cual se observó el mayor cambio hacia una menor sensibilidad. Se proponen dosis discriminatorias de 0,04; 1,0; 0,6; y 0,2 µg mL-1 para difenoconazole, fenarimol, mancozeb y pyrimethanil, respectivamente.

The Mancozeb is a fungicide belonging to the class of dithiocarbamates (DTCs) widely used in agriculture and non- systemic fungicide controlling a wide variety of fungi in crops of rice, potato, tomato, and citrus. Nowdays, the agrochemical industries quantify the content of Mancozeb in their commercial products using iodometric titration. The biggest drawback of this methodology is the analysis time (about two hours and thirty minutes), which causes downtime, hand labor and idle delays in approving the final product, creating problems in the flow of production and delays in delivery. This work presents the aplication electroanalytical method for the determination the fungicide Mancozeb in pesticides using boron-doped diamond electrode (BDD) and batch injection analysis (BIA) with amperometric detection. Studies regarding the choice of the electrolyte (phosphate solution pH 9.0) and potential applied (+0.3 V) were performed. And, the BIA system parameters such as injection rate and injected volume were optimized. Regarding the quantification of Mancozeb, an analytical curve with a detection limit of 5.14x10-7 mol L- 1 and limit of quantification 1.71x10-6 mol L- 1 was obtained. Interfering studies were performed and yielded recovery coefficients between 88.70 and 108.7 %. The content of mancozeb was determined in samples of pesticides with relative error lower than 1.85 %, another advantages associated to the developed method is high analytical frequency (90 injections per hour). O Mancozebe é um fungicida pertencente à classe dos ditiocarbamatos (DTC) amplamente empregado na agricultura como fungicida não sistêmico, controlando uma grande variedade de fungos em culturas de arroz, batata, citros e tomate. Atualmente, as indústrias agroquímicas quantificam o teor de Mancozebe em seus produtos comercias utilizando titulação iodométrica. O maior inconveniente dessa metodologia é o tempo de análise (cerca de duas horas e trinta minutos), o que acarreta tempo de inatividade, mão-de-obra ociosa e atrasos na aprovação do produto final, gerando problemas no fluxo de produção e atrasos na entrega. Desta forma, esta dissertação apresenta um método eletroanalítico para a quantificação do fungicida Mancozebe em defensivos agrícolas utilizando eletrodo de diamante dopado com boro (DDB) e análise por injeção em batelada (BIA) com detecção amperométrica. Para tanto, foram realizados estudos com relação à escolha do eletrólito suporte (solução fosfato pH 9,0) e do potencial aplicado (+0,3 V). Após esta etapa, parâmetros do sistema BIA tais como velocidade de injeção e volume injetado foram otimizados. Em relação à quantificação de Mancozebe foi obtida uma curva analítica com limite de detecção de 5,14x10-7 mol L-1 e limite de quantificação 1,71x10-6 mol L-1. Estudos de interferentes foram realizados e obteve-se coeficientes de recuperação entre 88,7 e 109 %. O teor de mancozebe foi determinado em defensivos agrícolas com erro relativo inferior a 1,85 %, e com a alta frequência analítica, cerca de 90 injeções por hora. Mestre em Química

El interés del estudio de investigación se basó en recolectar datos de exposición ocupacional a plaguicidas ditiocarbamatos en el sector floricultor. Objetivo: Determinar los niveles de exposición a fungicidas ditiocarbamatos y su relación con las condiciones laborales de los trabajadores del sector floricultor en la Sabana de Bogotá D.C. (Cundinamarca) y Rionegro (Antioquia), Colombia, durante el año 2011. Materiales y Métodos: Se realizó un estudio de corte transversal, en 358 trabajadores de un total de 3700 empleados de 27 empresas del sector floricultor, 12 ubicadas en la Sabana de Bogotá (Cundinamarca) y 3 en Rionegro (Antioquia). Se recoleto información sobre condiciones de trabajo y antecedentes de exposición de la población y se determinaron los niveles de exposición a fungicidas ditiocarbamatos en muestra en orina mediante método Montesano. Conclusiones: Este estudio describe la forma como se utilizan y los niveles de exposición a fungicidas ditiocarbamatos ETU, en el sector floricultor en Colombia. Se dan recomendaciones para mejorar los tiempos de re-ingreso al cultivo según la categoría toxicológica de los productos. The interest of the research study was based on data collected dithiocarbamates occupational exposure to pesticides in the flower industry . Objective: To determine exposure levels dithiocarbamate fungicides and their relationship to the working conditions of workers in the flower industry in Sabana de Bogotá DC (Cundinamarca ) and Rionegro (Antioquia ) , Colombia , in 2011. Materials and Methods: A cross sectional study was conducted in 358 out of a total of 3700 employees in 27 companies in the floriculture sector 12 located in Sabana Bogotá ( Colombia) and 3 in Rionegro (Antioquia ) . Information on working conditions and history of exposure of the population was secluded and exposure levels dithiocarbamate fungicides in urine sample were determined by Montesano method.Conclusions: This study describes how they are used and the levels of exposure to ETU dithiocarbamate fungicides in the flower industry in Colombia. Recommendations are given for timing of re- entry into the culture according to the toxicological category of products, management and proposes measures to reduce exposure of workers, the community and the environment.

Los ditiocarbamatos son fungicidas ampliamente utilizados en la agricultura a nivel mundial. La etilentiourea (ETU) y propilentiourea (PTU), los principales compuestos de degradación del mancozeb y propineb, respectivamente son de especial importancia, ya que están clasificados como carcinógenos y teratogénicos. El objetivo principal del presente trabajo consistió en desarrollar y validar metodologías para la determinación de ETU y PTU como productos de degradación de fungicidas ditiocarbamatos en frutas y hortalizas y en suelos. Para la determinación de los analitos en frutas y hortalizas se seleccionó y optimizó un método de extracción utilizando una mezcla de MeOH: agua 3:1 y posterior limpieza con partición liquido-líquido soportada sobre Extrelut. Así mismo se seleccionó una metodología para el análisis de ETU y PTU en suelo, la cual consistió en una extracción con agitación manual fuerte durante dos minutos utilizando 20 mL de agua y 10 g de suelo previamente secado y homogenizado. En los dos casos, la determinación analítica se llevó a cabo por HPLC – DAD. Se realizó la validación en las dos matrices, encontrando que la metodología es selectiva, específica, precisa, robusta y exacta, presentando límites de detección y cuantificación adecuados para el análisis de ETU y PTU en frutas y hortalizas y en suelos. Utilizando las metodologías validadas se llevó a cabo la determinación de residuos en algunas muestras de papa y tomate obtenidas en el mercado local y en una zona de comercialización primaria, y suelos de cultivo de papa. Los análisis muestran la presencia de PTU a nivel de trazas en una muestra de papa y de ETU en una muestra de tomate. Las concentraciones determinadas se encuentran por debajo del límite máximo de residuos de Sudáfirca, el cual el más estricto. Se encontró presencia de PTU a nivel de trazas en una de las muestras de suelo analizadas. Abstract: Dithiocarbamates are widely used fungicides in agriculture worldwide. In Colombia, Mancozeb and Propineb are some of the best-selling fungicides and they are applied in main crops. Ethylenethiourea (ETU) and propylenethiourea (PTU), the main degradation products of Mancozeb and Propineb, respectively, are particullary important because they are classified as carcinogens and teratogenics. The aim of this study was to develop and to validate methodologies in fruits and vegetables and in soils for determination of ETU and PTU as degradation products of dithiocarbamate fungicides. For the determination of analytes in fruits and vegetables were considered four methods of extraction, and after evaluation process of the performance of each one, was selected and optimized an extraction method using a mixture of MeOH: water 3:1 and subsequent cleaning liquid-liquid partition supported on Extrelut. Similarly, was selected a methodology for the analysis of ETU and PTU in soil, which consisted of extraction of 10 g of dry and homogenized soil during two minutes using 20 mL of water. In both cases, the analytical determination was carried out by HPLC - DAD. The Validation methodology was performed. In both cases, the methodology is selective, specific, robust and accurate, showing limits of detection and quantification suitable for the analysis of ETU and PTU in fruits and vegetables and soils. Using validated methodologies, it was carried out the determination of residues in some potato and tomato samples obtained in the local market and primary trading area, and potato cropping soils. The analysis showed the presence of trace level of PTU in one potato sample and the presence of ETU in one tomato sample. The determined concentrations were below the maximum residue limit more stringent. The presence of PTU was found at trace levels in one of the soil samples analyzed. Maestría

Avaliou-se o efeito do tirame, ditiocarbamato largamente utilizado na agricultura como antifúngico e repelente de roedores, na ossificação endocondral de mamíferos, usando, como modelo, ratos Wistar. Não foram observadas lesões na cartilagem articular, nem nas placas de crescimento, o que pode ser atribuído à dose utilizada e à duração do ensaio. A diminuição da altura da placa de crescimento nos animais aos quais foi administrado o tirame parece traduzir o atraso verificado no crescimento em geral, e não um efeito específico na cartilagem, uma vez que as diferentes zonas da placa epifisária mantiveram as proporções dos animais do grupo-controle. Embora não tenham sido verificados, no presente trabalho, os efeitos registrados para outras espécies nos tecidos cartilaginosos, sugere-se a avaliação dos efeitos crónicos do tirame no crescimento e no desenvolvimento dos ossos longos em mamíferos.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Due to the complexity of grains like soybean, corn and rice, and the very low pesticide concentration expected for these samples, it is really necessary to develop efficient and reliable analytical methods to identify and quantify their residues. The possibility to perform the determination of a large number of pesticides in just a single chromatographic analysis is the major advantage of the multi-residue methods. However, there are important compounds that are not possible to be analyzed together, like the dithiocarbamates (DTC). For that, is so important to develop and validate single methods. Due to low acute toxicity, combined with strong action, low-cost production and low environmental persistence, the dithiocarbamates are still using worldwide. The first part of this study reports a sensitive analytical single method suitable for the quantitative analysis of DTCs in soybeans, rice and corn, using GC-PFPD and GCITD- MS. For the method validation studies, the following parameters were assessed: detection limit (LOD), quantification limit (LOQ), precision (repeatability and intermediate precision) and accuracy, via recovery experiments at 0.05, 0.1 and 0.5 mg CS2 kg-1 spiking levels. For soybeans is necessary a clean-up step due the high fat content in that crop, because of it, same sorbents (Aluminum oxide, Florisil®, Silica, PSA, C18 and C18OH) were tested and the best results were obtained applying silica gel. For the extraction procedure, an amount of sample was weighed and water added. The spike solution (thiram) was added to the sample, 25 mL of isoctane and 150 mL of tin (II) chloride solution in hydrochloric acid were added. The bottles were closed immediately and heated for 1 h in a water bath at 80 °C, under shaking. After cooling, 2 mL aliquot of the upper organic layer of each bottle was pipetted into a tube containing 50 mg of silica gel, for the clean-up step. The analytical curves were linear from 0.02 to 1.0 mg CS2 L-1 with determination coefficients (r2) higher than 0.99 for both detection systems and to all crops. Method LOD and LOQ values were 20 and 50 μg CS2 kg-1, respectively, for soybeans and corn. For rice LOQ was just 40 μg CS2 kg-1. Very good precision was obtained with RSD between 1.8 and 7.9% and recoveries from 67 to 103%, for all matrices. The results obtained in the validation step allow us to conclude that both chromatographic detection systems are appropriate to determine residues of DTCs in grains. The second step was to develop and validate a method for the analysis of 75 pesticides in corn grain and breakfast cereals using LC-MS/MS, ESI positive mode. The extraction procedure was the modified QuEChERS method, however, excluding the dispersive SPE clean-up step. To that end, milled and homogenized corn grain and breakfast cereals with water were spiked with 75 pesticides, at 3 spiking levels (10, 20 and 50 μg kg-1, n=6), plus the procedure internal standard (quinalfos). A volume of 10 mL of acetonitrile with 1% acetic acid was added and the tubes were vigorously shaken for 1 minute. The tubes were uncapped, anhydrous magnesium sulfate were added, the shaking procedure was repeated and the extract was centrifuged at 4000 rpm, for 4 min. The upper layer of the extracts was transferred to chromatographic vial, containing 0.5 mL of the instrumental internal standard (propoxur) in methanol. The linear range wasevaluated and validated between 0.1 and 50 μg L-1 of the analytical curves (7 concentrations, n=6). Also LOD, LOQ, matrix effect, as well as precision (as RSD%) and accuracy (as recovery), for 75 pesticides, were studied The LOD were calculated based on practically realized repeatability RSD. To determine the precision, accuracy and LOQ, blank samples were spiked at 10, 20 and 50 μg kg-1. The results showed recoveries between 70 and 120% and RSDs

Apple scab (Venturia inaequalis) is the most important disease in Chilean apple (Malus domestica Borkh.) orchards where fungicide management is the main tool to control disease. Sensitivity tests to difenoconazole, fenarimol, mancozeb, and pyrimethanil fungicides were conducted on V. inaequalis wild isolates to construct local baseline sensitivity distributions, and compare them with a collection of isolates from seven different commercial orchards with no evidence of practical resistance. In vitro assays were conducted and sensitivity was measured as inhibition of mycelial growth (difenoconazole, fenarimol, pyrimethanil) or conidial germination (mancozeb). Departure from the baseline distribution to less sensitivity was found for difenoconazole, fenarimol, and mancozeb with resistance factors of 4.7, 5.8, and 2.1, respectively. The highest difference between baseline and orchard populations was observed for fenarimol which showed the highest shift to less sensitivity. Discriminatory doses of 0.04, 1.0, 0.6, and 0.2 µg mL-1 are proposed for in vitro monitoring of sensitivity to difenoconazole, fenarimol, mancozeb, and pyrimethanil, respectively. La sarna del manzano (Venturia inaequalis) es la principal enfermedad del cultivo en Chile y es controlada principalmente con el uso de fungicidas. Se realizaron pruebas de sensibilidad a los fungicidas difenoconazole, fenarimol, mancozeb y pyrimethanil en aislados monoconidiales de cepas silvestres de V. inaequalis con el fin de elaborar curvas basales de sensibilidad y compararlas con la sensibilidad de una colección de aislados monoconidiales provenientes de siete huertos comerciales sin evidencias de resistencia práctica. Se realizaron pruebas in vitro donde la sensibilidad se midió como la inhibición del crecimiento miceliar (difenoconazole, fenarimol y pyrimethanil) o la inhibición de la germinación de conidias (mancozeb). La población de huertos comerciales estudiada presentó una menor sensibilidad a los fungicidas difenoconazole, fenarimol y mancozeb con valores de factor de resistencia 4,7; 5,8; y 2,1 para difenoconazole, fenarimol y mancozeb, respectivamente. La mayor diferencia de sensibilidad entre la población silvestre y la de huerto se obtuvo con feranimol, fungicida para el cual se observó el mayor cambio hacia una menor sensibilidad. Se proponen dosis discriminatorias de 0,04; 1,0; 0,6; y 0,2 µg mL-1 para difenoconazole, fenarimol, mancozeb y pyrimethanil, respectivamente.

Para determinação de resíduos de fungicidas ditiocarbamatos em tomate foi realizada uma validação intralaboratorial do método espectrofotométrico utilizando o sistema de reação vertical para dissulfeto de carbono, atendendo os requisitos exigidos pela ABNT NBR ISO/IEC 17025 e a legislação brasileira vigente. Foram realizados ensaios com curvas de calibração em solventes e em matriz, em amostras brancas e em amostras adicionadas de padrão. As premissas relacionadas às estatísticas empregadas foram avaliadas e confirmadas. Nos estudos realizados, a linearidade do método foi demonstrada na faixa de 0,62 a 5,26 g mL-1, com confirmação do efeito do dia e ausência do efeito de matriz. O limite de detecção foi de 0,15 mg kg-1 e o limite de quantificação de 0,5 mg kg-1. Para o limite de quantificação a média de recuperação foi de 115,2 %, confirmando a exatidão. Neste nível, o método apresentou precisão aceitável, com desvios padrão relativos de 11,82%. sob condições de repetitividade e de reprodutibilidade parcial. Foram determinados limite de decisão de 2,4 mg kg-1 e capacidade de detecção de 3,0 mg kg-1. Os resultados obtidos confirmaram que o método espectrofotométrico para determinação de resíduos de ditiocarbamatos em tomate atende os requisitos exigidos. Single laboratory validation of a spectrophotometric method using the system of vertical reaction for carbon disulfide for determination of fungicides dithiocarbamate residues in tomato, according to ISO/IEC 17025 requirements and the Brazilian legislation was accomplished. Experiments with solvent and matrix-matched calibration curves, blanks and spiked samples were performed. The assumptons related to the employed statistics were appraised and confirmed. The method linearity was obtained between 0.62 to 5.26 mg mL-1, with confirmation of the effect of the day and absence of matrix effects. The detection limit was 0.15 mg kg-1 and the limit of quantification 0.5 mg kg -1. On the quantification limit, the recovery average was 115.2%, confirming the trueness. In this level the method presented acceptable precision, with relative standard deviations of 11.82% under repeatability and parcial reproducibility conditions. The limit of decision was 2.4 mg kg-1 and the capacity of detection was 3.0 mg kg -1. The results by spectrophotometric method for determination of dithiocarbamate residues in tomato confirmed the fitness to purpose.

Dentre os agrotóxicos mais utilizados na cultura do tomate estão os fungicidas e, dentre estes, os mais aplicados na cultura são os ditiocarbamatos. O objetivo deste trabalho foi estudar a eficiência da remoção do ditiocarbamato mancozeb em tomates através de processos de enxágüe. Foram realizadas análises de acidez, brix, da atividade de água (aw), pH e teor do manganês para os tomates. Após realização do processos de enxágüe do fruto com água de torneira, vinagre de álcool, bicarbonato de sódio e solução de dicloroisocianurato de sódio dihidratado foi avaliado o teor do fungicida mancozeb na película e fruto inteiro. Observou-se que o processo de enxágüe do fruto reduz significativamente a quantidade resíduos nos tomates. A redução de mancozeb foi maior na película, onde estão presentes em maior concentração. Os tratamentos usando água de torneira e bicarbonato de sódio removeram acima de 61% dos resíduos presentes na película dos tomates Fungicides are the pesticides mostly used the tomato crop. Among the fungicides the dithiocarbamates are the mostly used. The objective of this work was to study the efficiency of the dithiocarbamate mancozeb removal from tomatoes through processes of washes. We performed analyses of acidity, brix, the activity of water (aw), pH and content of manganese for tomatoes. After completing the procedures of the fruit flush with tap water, vinegar, alcohol, and sodium bicarbonate solution of sodium dichloroisocyanurate dihydrate the level of the fungicide mancozeb was assessed in skin and whole fruit. It was observed that the process of the fruit flush significantly reduces the amount of residues in tomatoes. The reduction of mancozeb was higher in the skin, which are present in highest concentration. The treatments using tap water and sodium bicarbonate removed over 61% of the residue present in the skin of tomatoes

In order to supply the world-wilde demand for food, it is essential to use the pesticides to protect the crops against pests and diseases. But the indiscriminate and injudicious use of these compounds have resulted in widespread contamination in food commodities and environment in all fields, increasing, this way, the preoccupation with chemical products use. Ethylene-bis-dithiocarbamate pesticides, from dithiocarbamate class, are among the most widely used fungicide to control pest. Beside their low toxicity, one of they degradation products, ethylenethiourea, is a toxic metabolite, which have teratogenic, carcinogenic, immunotoxic and mutagenic effects. In the present work, it was developed and validated a chromatographic method for the determination of ethylenethiourea (ETU) residues in urine, using liquid-liquid extraction and HPLC quantification. The developed procedure consist of the interested compound extraction from urine, with 6.0 mL of dichloromethane, aditioning MgSO4 to help in the partitioning process, that is, distribution os compound between organic and aqueous phase. After sample centrifugation, a supernatant aliquot was taken and evaporated, in water bath at 44 ºC, and the final extract was redissolved in purified water and analyzed by HPLC-UV, injecting 50 μL in C18 column with mobile phase MeOH:H2O (10:90; v/v) and detection by UV light absorption at 233 nm. To the validation study of the method, the following parameters were evaluated: detection limit (LOD), quantification limit (LOQ), precision (under repeatability and reproducibility conditions) and accuracy as recovery. The method LOD was 0.05 mg ETU L-1 and LOQ was 0.2 mg ETU L-1. The analytical curve was linear between 0.05 to 1.0 mg ETU L-1 with determination coefficient r2 > 0.998. Very good precision with RSD between 1.7 and 2.7% was obtained and the recoveries ranged from 85.6 to 95.4% for 3 different spike level: 0,05, 0,1 and 0,5 mg ETU L-1 . The results obtained in the validation step allow us to conclude that the method are quite appropriate to determine residue of ethylenethiourea in urine. The developed method has shown advantages, such as simplicity, quickness and that it could be applied in any laboratory. However, there are some points such as no ETU confirmation nether purity analysis of the chromatographic picks besides the low sensitivity and selectivity of the UV detection that would be much improved using a LC-MS/MS. Para atender a demanda mundial por alimentos, é essencial o emprego de pesticidas para proteger as culturas contra doenças e pragas, mas o uso imprudente e indiscriminado destes compostos pode resultar em contaminação dos alimentos e seus derivados, bem como no ambiente como um todo, aumentando, dessa forma, a preocupação em relação ao emprego dos pesticidas. Os pesticidas etileno-bisditiocarbamatos, da classe dos ditiocarbamatos, estão entre os fungicidas mais empregados em todo o mundo para o controle de pragas. Apesar de possuírem baixa toxicidade, um de seus produtos de degradação, a etilenotiouréia (ETU), é um metabólito tóxico, a qual possui efeitos teratogênicos, carcinogênicos, imunotóxicos e mutagênicos. Neste trabalho, desenvolveu-se e validou-se um método cromatográfico para a determinação dos resíduos de ETU em urina, empregando-se extração líquidolíquido e quantificação por HPLC-UV. O procedimento desenvolvido consiste na extração do analito de interesse, com 6 mL de diclorometano, adicionando-se MgSO4 para auxiliar no processo de partição, ou seja, distribuição do composto entre as fases orgânica e aquosa. Posteriormente, centrifugou-se e evaporou-se uma alíquota do sobrenadante em banho de água à 44 ºC, redissolvendo-se em água purificada e analisa-se em sistema HPLC, injetando-se 50 μL em coluna C18 com fase móvel MeOH:H2O (10:90; v/v) e detecção por absorção de luz em 233 nm. Para a validação do método avaliaram-se os seguintes parâmetros: limite de detecção (LOD), limite de quantificação (LOQ), linearidade, precisão (repetitividade e precisão intermediária) e exatidão (recuperação). O LOD do método foi de 0,05 mg ETU L-1 e o LOQ 0,2 mg ETU L-1. As curvas analíticas apresentaram r2 > 0,998 com linearidade entre 0,05 e 1,0 mg ETU L-1. Os resultados de precisão foram excelentes, com valores de desvio padrão relativo entre 1,7 e 2,7%, e as recuperações foram de 85,6 a 95,4% para 3 níveis de fortificação: 0,05, 0,1 e 0,5 mg ETU L-1. Através dos resultados obtidos na validação, pode-se concluir que o método é apropriado para determinar resíduos de etilenotiouréia em urina. O método tem várias vantagens como: simplicidade, rapidez, e poder ser executado com equipamentos geralmente disponíveis nos laboratórios. Entretanto, poderia apresentar resultados ainda melhores em termos de sensibilidade, seletividade e confirmação da identidade da ETU, se fosse possível, por exemplo, a utilização de cromatógrafo à líquido acoplado à espectrômetro de massas, onde a pureza dos picos cromatográficos poderia ser avaliada e a detectabilidade poderia ser 3 ordens de magnitude menor (1000 vezes).

Se informa la síntesis y caracterización estructural de catorce nuevos estanocanoil-ditiocarbamatos del tipo X(CH2CH2S)2 SnnBu(dtc) (X = O, S), (dtc = dimetil, dietil-, diisopropil-ditiocarmanatos y 3-pirrolin-, pirrolidin-, piperidin- y morfolin-carboditioatos), los cuales fueron preparados de los correspondientes cloro oxa-estanocano O(CH2CH2S)2Sn(nBu)Cl 1, tia-estanocano S(CH2 CH2S)2 Sn(nBu)Cl 2 y las sales de sodio de los ditiocarbamatos correspondiente en cloroformo a temperatura de reflujo 3-16 fueron caracterizados por análisis elemental, IR, EM IE, y multinuclear RMN, (1H, 13C, 119Sn). La estructura molecular de 7 fue determinada por análisis de difracción de rayos X. El anillo de ocho miembros presenta una conformación bote-silla con una interacción transanular Sn---O (2.763 Å). La coordinación del ligante es de tipo anisobidentada y la geometría en torno al átomo estaño puede ser descrita como octaédrica