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Introducción. El tizón foliar por Cercospora y la mancha púrpura de la semilla son enfermedades endémicas de la soja en Argentina. Objetivo. Evaluar la prevalencia, la incidencia y la severidad del tizón foliar por Cercospora y de la mancha púrpura de la semilla en Argentina durante dos años consecutivos, 2015 y 2016. Materiales y métodos. Los muestreos se realizaron sobre un total de 132 lotes. La evaluación de la prevalencia, la incidencia y la severidad del tizón foliar por Cercospora se realizaron en campo en la etapa reproductiva R6. El análisis de la prevalencia e incidencia de la mancha púrpura de la semilla se realizó en laboratorio. Resultados. El tizón foliar por Cercospora y la mancha púrpura de la semilla se encontraron difundidas en toda la región sojera de Argentina, con una prevalencia del 100 %. En 2015 y 2016 la severidad del tizón foliar por Cercospora fue estadísticamente inferior en la región pampa sur respecto a las demás regiones. La región norte presentó los mayores niveles de severidad del tizón foliar por Cercospora. La incidencia de la mancha púrpura de la semilla no tuvo diferencias estadísticas entre las regiones y años evaluados. No se encontró asociación entre las variables patométricas de ambas enfermedades. No existió una relación cuantitativa entre la severidad de los síntomas del tizón foliar por Cercospora en hoja con la incidencia de la mancha púrpura de la semilla. Conclusión. Ambas enfermedades en estudio se encontraron difundidas en todas las regiones productoras de soja de Argentina.

Resumen Introducción. El Tizón Foliar y la Mancha Púrpura de la Semilla son enfermedades causadas por Cercospora kikuchii que afectan a la soja (Glycine max L. Merr.) en el mundo y cuyos agentes etiológicos son hongos clasificados en distintas especies con cierta proximidad. Objetivo. Proporcionar un panorama sobre el patosistema del Tizón Foliar y la Mancha Púrpura de la Semilla causadas por Cercospora kikuchii, que afectan el cultivo de soja. Desarrollo. El grado de severidad y/o incidencia de ambas enfermedades varía tanto en Argentina como en el resto del mundo. Estudios recientes demostraron que hay gran variabilidad tanto morfológica como molecular entre los aislamientos de C. kikuchii obtenidos de pecíolo y semilla en las regiones norte, pampa norte y pampa sur recolectados en los años 2015 y 2016. El genoma a nivel de cromosoma de C. kikuchii se encuentra disponible. El ensamblaje del genoma de 9 contigs es de 34,44 Mb y el N50 es de 4,19 Mb. Sobre la base de la predicción de genes ab initio, se identificaron varios genes candidatos relacionados con la patogenicidad, incluidos 242 genes para efectores putativos, 55 grupos de genes de metabolitos secundarios y 399 genes de enzimas activas en carbohidratos. Conclusión. El Tizón Foliar y la Mancha Púrpura de la Semilla son enfermedades endémicas en la Argentina. El patógeno causal de ambas enfermedades presenta una gran variabilidad genética y molecular en la Argentina. Abstract Introduction. Cercospora Leaf blight and Purple Seed Stain are diseases caused by Cercospora kikuchii that affect soybean (Glycine max L. Merr.) worldwide and whose etiological agents are fungi classified in different species certain proximity. Objective. To provide an overview of the pathosystem of Cercospora Leaf blight and Purple Seed Stain caused by Cercospora kikuchii affecting soybean. Development. The degree of severity and/or incidence of both diseases varies in Argentina as well as in the rest of the world. Recent studies showed that there is great variability both morphologically and molecularly among C. kikuchii isolates obtained from petiole and seed in the northern, northern pampas, and southern pampas regions collected in the years 2015 and 2016. The chromosome-level genome of C. kikuchii is available. The genome assembly of 9 contigs is 34.44 Mb and the N50 is 4.19 Mb. Based on ab initio gene prediction, several pathogenicity-related candidate genes were identified, including 242 genes for putative effectors, 55 secondary metabolite gene clusters, and 399 carbohydrate-active enzyme genes. Conclusion. Cercospora Leaf Blight and Purple Seed Stain are endemic diseases in Argentina. The causal pathogen of both diseases shows great genetic and molecular variability in Argentina.

Introduction. The Cercospora leaf blight and the purple seed stain are endemic diseases of soy in Argentina. Objective. To evaluate the prevalence, incidence and severity of Cercospora leaf blight and the purple seed stain in Argentina during two consecutive years, 2015 and 2016. Materials and methods. Samples were taken from a total of 132 lots. The evaluation of the prevalence, incidence, and severity of Cercospora leaf blight were carried out in the fieldin R6. The evaluation of the prevalence and incidence of purple seed stain was carried out in the laboratory. Results.Cercospora leaf blight and purple seed stain were found to be widespread throughout the soybean region of Argentina, with a prevalence of 100 %. In 2015 and 2016, the severity of the leaf blight by Cercospora was statistically lower in the southern pampa region compared to the other regions. The northern region presented the highest severity levels of the Cercospora leaf blight. The incidence of purple seed stain did not have statistical differences between regions and years evaluated. No association was found between the pathometric variables of both diseases. There was no quantitative relationship between the severity of symptoms of Cercospora leaf blight on leaf with the incidence of purple seed stain.Conclusion. Both diseases under study were found widespread in all soybean-producing regions of Argentina. Introducción. El tizón foliar por Cercospora y la mancha púrpura de la semilla son enfermedades endémicas de la soja en Argentina. Objetivo. Evaluar la prevalencia, la incidencia y la severidad del tizón foliar por Cercospora y de la mancha púrpura de la semilla en Argentina durante dos años consecutivos, 2015 y 2016. Materiales y métodos. Los muestreos se realizaron sobre un total de 132 lotes. La evaluación de la prevalencia, la incidencia y la severidad del tizón foliar por Cercospora se realizaron en campo en la etapa reproductiva R6. El análisis de la prevalencia e incidencia de la mancha púrpura de la semilla se realizó en laboratorio. Resultados. El tizón foliar por Cercospora y la mancha púrpura de la semilla se encontraron difundidas en toda la región sojera de Argentina, con una prevalencia del 100 %. En 2015 y 2016 la severidad del tizón foliar por Cercospora fue estadísticamente inferior en la región pampa sur respecto a las demás regiones. La región norte presentó los mayores niveles de severidad del tizón foliar por Cercospora. La incidencia de la mancha púrpura de la semilla no tuvo diferencias estadísticas entre las regiones y años evaluados. No se encontró asociación entre las variables patométricas de ambas enfermedades. No existió una relación cuantitativa entre la severidad de los síntomas del tizón foliar por Cercospora en hoja con la incidencia de la mancha púrpura de la semilla. Conclusión. Ambas enfermedades en estudio se encontraron difundidas en todas las regiones productoras de soja de Argentina.

Introduction.Cercospora leaf blight (CLB) caused byCercospora kikuchiiis an endemic soybean crop disease in Argentina.Objective.To develop and validate a scale to quantify the severity of CLB in leaflets of soybean (Glycine max) for the evaluation of foliar fungicides and cultivar trials.Materials and methods.A diagrammatic scale to assess the severity of CLB on soybean leaflets (Glycine max) was developed. The scale was based on the evaluation of 50 leaflets. The different severity levels of the leaflets were determined according to Weber-Fechner’s stimulus-response law. The proposed scale included severity levels of 1, 4.5, 17.5, 50, 82.2, 95, and 99 %. The validation of the scale was performed by 23 raters (3 experienced and 20 inexperienced) who assessed the severity of CLB on 50 leaflets with and without the use of the scale.Results.The results from the three experienced raters were more precise than those obtained by the inexperienced raters. The scale improved the visual interpretation to assess the severity of CLB for the inexperienced raters, who obtained estimated severity values close to the actual severity values. When the inexperienced raters used the proposed scale to estimate the severity of CLB on leaflets, they were accurate having determination coefficients (R2) between 0.74 and 0.91. According to the absolute errors, the greatest deviation was observed between -2.49 and 2.46. However, these deviations were not significantly different from the population average. To speed the process of cultivar evaluations we also propose the use of scales based on grades.Conclusions.The proposed scale to assess the severity of CLB on leaflets can be used for the assessment of foliar fungicide trials and soybean cultivars. The scale showed specificity for assessing the severity of Cercospora leaf blight (CFB) in soybean leaflets. Introducción.El tizón foliar por Cercospora (TFC) causado porCercospora kikuchiies una enfermedad endémica en el cultivo de soja en Argentina.Objetivo.Desarrollar y validar una escala para cuantificar la severidad del TFC en foliolos de soja (Glycine max) para la evaluación de fungicidas foliares y ensayos de cultivares.Materiales y métodos.Se elaboró una escala diagramática para evaluar la gravedad del TFC. La escala se basó en la evaluación de 50 folíolos. Los diferentes niveles de gravedad de los foliolos se determinaron de acuerdo con la Ley de estímulo y respuesta de Weber-Fechner. La escala incluyó niveles de gravedad de 1, 4,5, 17,5, 50, 82,2, 95 y 99 %. La validación de la escala fue realizada por 23 calificadores (3 experimentados y 20 inexpertos) que evaluaron la gravedad del TFC en 50 foliolos con y sin el uso de la escala.Resultados.Los resultados de los tres calificadores experimentados fueron más precisos que los obtenidos por los calificadores inexpertos. La escala mejoró la interpretación visual para evaluar la severidad del TFC para los calificadores inexpertos, que obtuvieron valores de severidad estimados cercanos a los valores de severidad reales. Cuando los calificadores inexpertos utilizaron nuestra escala para estimar la severidad del TFC en los foliolos, fueron precisos con coeficientes de determinación (R2) entre 0,74 y 0,91. Según los errores absolutos, la mayor desviación se observó entre -2,49 y 2,46. Sin embargo, estas desviaciones no fueron significativamente diferentes del promedio de la población. Con el fin de acelerar el proceso de evaluación de los cultivares, se propone también el uso de escalas basadas en las calificaciones.Conclusiones.La escala propuesta puede ser utilizada para la evaluación de los ensayos de fungicidas y de los cultivares de soja. La escala presentó especificidad para evaluar la severidad del tizón foliar por Cercospora (TFC) en folíolos de soja.

Somatic embryogenesis in scutella of wheat (Triticum aestivum L.) is a well documented phenomenon and it has been shown through transcriptome analysis that genes involved in antioxidant responses, particularly in glutathione (GSH) biosynthesis, participate in the process. Thus, we investigated the influence of post-transcriptional silencing (PTGS) of the glutathione biosynthesis genes GSH1 and GSH2 on somatic embryogenesis in wheat. We found that PTGS of either of the target genes drastically inhibits callus regeneration and overall efficiency of transformation, in a similar manner as the GSH biosynthetic inhibitor buthionine sulfoximine. Supplementing the medium with glutathione did not overcome the observed low efficiency of wheat transformation. Furthermore, of the small number of obtained transformants, none exhibited altered GSH1 and GSH2 levels of transcription. Thus, it is concluded that GSH is essential for somatic embryogenesis and, as a consequence, it is difficult to regenerate wheat plants with silenced GSH1 and GSH2 genes. © 2012 Springer Science+Business Media B.V. Fil: Bossio, Adrian Ezequiel. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Genética; Argentina Fil: Díaz Paleo, Antonio Horacio. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Genética; Argentina. Universidad Nacional de Luján. Departamento de Ciencias Básicas; Argentina Fil: del Vas, Mariana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; Argentina Fil: Baroli, Irene Mabel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Genética; Argentina Fil: Acevedo, Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria; Argentina Fil: Rios, Raul Daniel. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Genética; Argentina. Universidad Nacional de Luján. Departamento de Ciencias Básicas; Argentina

Nitrogen is the second most critical factor for crop production after water. In this study, the beneficial rhizobacterium Pseudomonas protegens Pf-5 was genetically modified to fix nitrogen using the genes encoding the nitrogenase of Pseudomonas stutzeri A1501 via the X940 cosmid. Pf-5 X940 was able to grow in L medium without nitrogen, displayed high nitrogenase activity and released significant quantities of ammonium to the medium. Pf-5 X940 also showed constitutive expression and enzymatic activity of nitrogenase in ammonium medium or in nitrogen-free medium, suggesting a constitutive nitrogen fixation. Similar to Pseudomonas protegens Pf-5, Pseudomonas putida, Pseudomonas veronii and Pseudomonas taetrolens but not Pseudomonas balearica and Pseudomonas stutzeri transformed with cosmid X940 showed constitutive nitrogenase activity and high ammonium production, suggesting that this phenotype depends on the genome context and that this technology to obtain nitrogen-fixing bacteria is not restricted to Pf-5. Interestingly, inoculation of Arabidopsis, alfalfa, tall fescue and maize with Pf-5 X940 increased the ammonium concentration in soil and plant productivity under nitrogen-deficient conditions. In conclusion, these results open the way to the production of effective recombinant inoculants for nitrogen fixation on a wide range of crops. Fil: Setten, Lorena María. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Genética; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina Fil: Soto, Gabriela Cynthia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Genética; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina Fil: Mozzicafreddo, Matteo. Universita Degli Di Camerino; Italia Fil: Fox, Ana Romina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina Fil: Lisi, Christian Daniel. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Genética; Argentina Fil: Cuccioloni, Massimiliano. Universita Degli Di Camerino; Italia Fil: Angeletti, Mauro. Universita Degli Di Camerino; Italia Fil: Pagano, Elba. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Genética; Argentina Fil: Díaz Paleo, Antonio Horacio. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Genética; Argentina Fil: Ayub, Nicolás Daniel. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Genética; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina

Three cultivars of wheat showing different levels of spontaneous karyotypic instability were studied regarding their stability in vitro for a number of characters, i.e. chromosome structure, gliadin pattern, glume and grain colour, awn type, chlorophyll pigmentation and plant morphology. The progenies of somaclones derived from immature embryos of both aneuploid and euploid plants were used in this study along with foundation seeds and a large number of their sexual progeny in order to discriminate between pre-existent variability and any novel variation induced by the in vitro culture. Only one translocation not described before and a new gliadin pattern were detected which could be ascribed to the effects of tissue culture, suggesting that this technique is not effective for inducing novel variation for breeding purposes in wheat.

FromtheInstitutodeGene´ticaE.A.Favret,CICVyA,InstitutoNacionaldeTecnologi´aAgropecuaria,CC25,B1712WAA,Castelar, Provincia de Buenos Aires, Argentina.Address correspondence to Alberto R. Prina at the address above, or e-mail: aprina@cnia.inta.gov.ar.Cytoplasmic line 2 (CL2) is a chlorophyll mutant that was se-lectedfromaplastidmutatorgenotypeinbarley.Thedynam-icsof greening and plastid development ofCL2 first-leaf bladecontrasts with that of monocots. Previous characterizationsof CL2 suggested that this mutant has a delay of plastid genetranslation during embryogenesis. We hypothesize that CL2is a mutant in the infA gene, which encodes translation initi-ation factor 1 (IF1). Wild-type barley infA gene differs in somenucleotides from that in wheat, but the corresponding IF1proteinsareidentical.However,infAfromCL2carriesapointmutation, which leads to an amino acid change in IF1 residue52. One CL2-like seedling selected from a new mutator poolalso carries a point mutation in infA gene, this time leading toa change of the universally conserved amino acid residue 32.Both point mutations were T / C substitutions. We se-quenced the complementary DNA of the infA transcriptsfrom the wild type and CL2 and found that the mutationwas conserved at the mRNA level. Results strongly suggestthat CL2 and CL2-like are infA gene mutants, this being thefirsttimethatamutantphenotypeisattributedtoinfAgeneina higher plant.A curious cytoplasmically inherited chlorophyll-deficient mu-tant, codified as cytoplasmic line 2 (CL2), was previously de-scribed in barley (Prina 1996). It presented a time-dependentexpression mainly localized on the upper part of the first leafblade, showing a dynamics of greening and plastid develop-ment opposite to that usually observed in monocots (Mullet1988, 1993; Prina et al. 2003). Previous characterization bytransmission electron microscopy and pigment analysis in ex-periments with antibiotics and different temperatures (Prinaet al. 2003) showed that CL2 syndrome produces a delay inplastid protein synthesis during embryogenesis, which is ac-companied by a delay and sometimes an impairment of nor-mal plastid development and plastid ribosome formation. Onthis basis, the infA gene, which encodes the translation ini-tiation factor 1 (IF1), is proposed as a candidate gene respon-sible for CL2 syndrome.In bacteria, the rate-limiting step for translation initiationis usually the formation of 30S subunit ternary complex withthe mRNA (Pon and Gualerzi 1984; Stern et al. 1997) that, toproceed properly, requires the presence of 3 translation fac-tors (Boelens and Gualerzi 2002). IF1 functions in modulat-ing 30S–IF2 interactions, and the association/dissociationof ribosomal subunits are widely recognized (Dahlquist andPuglisi 2000; Boelens and Gualerzi 2002; Croitoru et al.2004; Laursen et al. 2005). Plastid translation is generallyregulated at the initiation phase (Zerges 2000). Among bac-terial genes encoding translation initiation factors only infAgene has homologues residing in the plastome of higherplants (Millen et al. 2001). IF1 is a highly conserved proteinthat has functional counterparts in all living organisms (Kyr-pides and Woese 1998; Roll-Mecak et al. 2001) and belongs tothe family of oligonucleotide-binding fold proteins, whichalso includes the ribosomal protein S1 and the cold shockproteins CspA and CspB. IF1 has shown to have not onlystructural resemblance but also functional similarities withthose cold shock proteins (Laursen et al. 2005). Mutantsfor infA gene have not been reported in higher plants, andthey were rare until recently even in bacteria (Croitoruet al. 2004). No phenotypes have been so far attributed toinfA mutants in higher plants, and its functions in chloro-plasts are inferred from information in bacteria (Kozak1983; Millen et al. 2001).Here we show results of infAgene sequencing in CL2 andCL2-like mutants and 2 different controls. We found one dif-ferent point mutation in each of the 2 independent mutantorigins, both of them affecting conserved residues in the de-duced IF1 proteins.

Las pasturas cultivadas constituyen uno de los componentes principales en la alimentación de la ganadería argentina, la que en los últimos años fue reordenada en ambientes de menor potencial productivo por efecto de la expansión agrícola. Particularmente, la superficie sembrada con pasturas en la Región Pampeana fue desplazada hacia ambientes afectados por anegamiento temporario, salinidad, alcalinidad y sequías transitorias. La salinidad y la sequía constituyen la principal causa de pérdidas en los cultivos ya que impiden el desarrollo del potencial genético debido a que afectan negativamente el crecimiento, la producción de biomasa y el rendimiento de semillas. Las pasturas compuestas por gramíneas perennes como la festuca alta (Festuca arundinacea Schreb. Var arundinacea) son una herramienta valiosa para mejorar la capacidad productiva en los ambientes marginales. Los objetivos generales de la presente tesis fueron determinar la magnitud de la variabilidad genética entre y dentro de nueve poblaciones de festuca alta colectadas en los ambientes periféricos al nicho ecológico determinado en la región pampeana y analizar fenotípica y genéticamente el crecimiento inicial de familias de medio-hermanos (FMH), derivadas de dichas poblaciones, en condiciones de salinidad y sequía. Para esto se condujeron cinco experimentos; el primero y segundo experimento consistieron en la colecta y determinación de la variabilidad genética a nivel agronómico y molecular de las poblaciones; el tercer experimento estudió la respuesta a la salinidad en el crecimiento inicial de FMH en hidroponia (0mM, 250mM y 500mM de NaCl); el cuarto experimento estudió la respuesta a la sequía en el crecimiento inicial de las mismas familias y el quinto experimento consistió en la caracterización molecular de las FMH seleccionadas por su tolerancia o susceptibilidad a la salinidad y/o sequía. Los resultados obtenidos en los experimentos 1 y 2 detectaron una importante variabilidad fenotípica y molecular entre y dentro de las poblaciones colectadas, las cuales podrían estar sujetas a procesos micro evolutivos de expansión de la especie hacia ambientes restrictivos. A través del análisis de Procrustes Generalizado se observó un alto consenso en el ordenamiento de las FMH confirmando la utilidad de la evaluación morfológica y molecular en la caracterización de las poblaciones. El experimento realizado en condición de salinidad detectó una respuesta diferencial de las familias a los tratamientos impuestos y las estimaciones de heredabilidad en sentido estricto expresaron un importante componente heredable, principalmente en la condición salina intermedia (250mM de NaCl). Se seleccionaron FMH tolerantes y susceptibles al estrés a través del Indice de Tolerancia. El estudio de las familias en condición de sequía detectó diferencias en caracteres de crecimiento inicial, aunque las estimaciones de las varianzas y la heredabilidad de las variables de producción de forraje fueron moderadas a bajas; probablemente porque la inducción de sequía fue moderada. A través del Indice de Tolerancia se seleccionaron FMH tolerantes y susceptibles. El último experimento permitió detectar 12 alelos con efectos significativos, lo que indicaría la relación con la tolerancia o susceptibilidad a salinidad y/o sequía. En términos generales la presente tesis doctoral generó conocimientos y aportó germoplasma utilizable en futuros programas de selección y obtención de cultivares de festuca alta tolerantes a salinidad y sequía, que resulten productivamente útiles en diferentes sistemas ganaderos de la Argentina In Argentina over the past years there was a strong increase of agricultural production displacing livestock into marginal areas, affected by temporary flooding, salinity, alkalinity and temporary droughts. Salinity and droughts negatively affect the growth, biomass production and seed yield of crops. Tall fescue (Festuca arundinacea Schreb. var arundinacea) is a valuable perennial grass that grows spontaneously on the roadsides of the humid Pampas region. The aim of this study was to determine phenotypic and genetic parameters of nine populations collected on the ecological niche boundaries, and 30 half sib families (HS) growing under salinity and drought conditions. Five experiments were conducted on field, greenhouse and laboratory conditions. An important phenotypic and molecular variability between and within collected populations were detected in experiments 1 and 2, and could be associated to the species evolutive expansion to restricted environments. The salinity experiment showed HS initial growth reduction under hydroponics conditions, with different responses depending on each family and treatment; at 250 mM NaCl an important heritability was expressed by the families. The drought experiment affected the families´ initial growth, and narrow sense heritability was low probably because of moderate drought stress. The Relative Tolerance Index (ITPSA) was an important variable to select tolerant and susceptible half-sib families. The molecular characterization of tolerant and susceptible HS allowed the detection of 12 alleles with significant effects, which would indicate association between both stresses. The present thesis provides information and germplasm to be used in future breeding programs in order to obtained salt and drought-tolerant tall fescue cultivars. Fil: Apellido, Nombre. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Agrarias; Argentina Fil: Palacios, Natalia Soledad. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Agrarias; Argentina

La salinidad del suelo afecta a la producción agrícola limitando el crecimiento, el rendimiento y la calidad de los cultivos. La comprensión de los mecanismos de tolerancia a estrés salino es esencial para el mejoramiento genético de especies de interés destinadas a ambientes con dicha limitante. Lotus tenuis es una leguminosa forrajera perenne naturalizada en los campos bajos de la Pampa Deprimida argentina, considerada tolerante a la salinidad en estadios de germinación, plántula y planta adulta. Los mecanismos involucrados en la respuesta a estrés salino de la especie no han sido totalmente dilucidados. Se conoce que el antiporter vacuolar NHX1 es responsable de la compartimentalización de Na+ en vacuolas y, en numerosas especies, se considera fundamental en la tolerancia a la salinidad. El objetivo de la presente tesis doctoral fue estudiar la participación del antiporter vacuolar NHX1 de Lotus tenuis en su tolerancia a salinidad. Para esto, se determinó la expresión transcripcional relativa del gen LtNHX1 y de otros genes involucrados en el transporte y exclusión de sodio en genotipos contrastantes en su tolerancia al estrés, se determinó la localización subcelular del antiporter, y se estudiaron los cambios en la tolerancia a la salinidad de L. tenuis y de Arabidopsis thaliana a partir de la expresión constitutiva de la región codificante del gen. Se inició la investigación con la selección de genotipos de L. tenuis con comportamiento contrastante a la salinidad en fase vegetativa juvenil. Para esto, se evaluó el crecimiento de familias de medios hermanos (FMH) del programa de mejoramiento genético de la Unidad Integrada UNNOBA-INTA bajo distintas concentraciones salinas alcanzadas por aclimatación, en dos ensayos hidropónicos en condiciones semi-controladas. Debido a las condiciones ambientales y a la variabilidad intrafamiliar existente, el comportamiento de las FMH no fue consistente en las distintas evaluaciones. Por esto, los siguientes ensayos se realizaron en condiciones controladas con genotipos propagados vegetativamente y sin aclimatación al estrés. Se estimó un índice de tolerancia relativo y se evaluó la sobrevivencia a lo largo de tres ensayos, para finalmente seleccionar un genotipo tolerante a la salinidad proveniente de una de las FMH evaluadas previamente, y un genotipo susceptible proveniente del cultivar Pampa INTA. Posteriormente, con el fin de tener un conocimiento más acabado de los mecanismos de tolerancia a la salinidad de la especie, se compararon los contenidos de iones Na+ , K+ y Cl- , y la expresión transcripcional relativa de genes codificadores de transportadores de membrana, en distintos tejidos de los dos genotipos contrastantes bajo distintas concentraciones salinas y en distintos momentos. El agregado de sal incrementó los niveles de Na+ y Clen ambos genotipos. En raíz este incremento con respecto al control sin agregado de sal fue mayor en el genotipo tolerante. En parte aérea ocurrió lo contrario y fue el genotipo susceptible el que presentó mayores incrementos respecto al control sin sal. Esto podría indicar una exclusión de iones más eficiente, y un mayor secuestro de los mismos en las vacuolas de la raíz en el genotipo tolerante, contribuyendo a la mayor tolerancia mediante la reducción de la toxicidad iónica en la parte aérea. Los cambios en la expresión génica en las raíces apoyaron esta conjetura, debido a que el genotipo tolerante presentó un incremento en la expresión relativa de NHX1 (responsable de la compartimentalización de Na+ ), de SOS1 (relacionado con su exclusión); y de HKT1 (relacionado con la descarga de Na+ del xilema para evitar su transporte a la parte aérea). También se incrementó la expresión del gen del cotransportador CCC, posiblemente relacionado con la exclusión de Cl- . En el genotipo susceptible, el cloruro de sodio no produjo el incremento de los transcriptos de estos genes en raíz, aunque incrementó la expresión de NHX1 en hoja, lo cual resultó menos eficiente para disminuir los efectos tóxicos del Na+ que la compartimentalización en raíces presumiblemente realizada por el genotipo tolerante. En los dos genotipos se analizaron in silico las regiones 5‟ de LtNHX1, hallando en ambos casos posibles elementos reguladores relacionados con la respuesta a estrés salino y otros tipos de estrés abiótico. Se realizó el estudio de la ubicación subcelular de LtNHX1 mediante la expresión constitutiva de la proteína de fusión LtNHX1-GFP tanto en forma transitoria en Nicotiana benthamiana como en plantas transgénicas de L. tenuis. Se determinó que se trata de un antiporter NHX del grupo I, ubicado en membrana vacuolar. La expresión constitutiva de la región codificadora de LtNHX1 incrementó la tolerancia a la salinidad de una línea transgénica de A. thaliana en fase de germinación y en etapa vegetativa, tanto cuando el estrés fue impuesto por shock como por aclimatación. También se incrementó la tolerancia a la salinidad en etapa vegetativa de una línea transgénica de L. tenuis con sobreexpresión de LtNHX1. En conclusión, se confirmó que el antiporter NHX1 de L. tenuis se ubica en membrana vacuolar y participa en la tolerancia a la salinidad de la especie mediante la compartimentalización de Na+ en las vacuolas de las raíces, complementando la actividad de otros transportadores que reducen o retrasan el transporte de Na+ a la parte aérea de las plantas. Lotus tenuis, commonly known as “lotus” or “narrow-leaf birdsfoot trefoil”, is a perennial, allogamous, diploid pasture legume that is naturalized in the Flooding Pampa region of Argentina. It is considered a salt tolerant species. It is known that the NHX1 vacuolar antiporter is responsible for the compartmentalization of Na+ in vacuoles and, in numerous species, is considered essential in salinity tolerance. The aim of this work was to study the contribution of Lotus tenuis NHX1 vacuolar antiporter to its salinity tolerance. Two genotypes with contrasting level of tolerance were selected, and changes in ion contents and in the gene expression of NHX1 and other membrane transporters were studied. The tolerant genotype showed signs of greater exclusion and compartmentalization of Na+ in roots. The tolerant genotype showed an increase in the relative expression of NHX1 (responsible for the compartmentalization of Na+ ); SOS1 (related to its exclusion) and HKT1 (related to the retrieval of Na+ from the xylem). The expression of the CCC cotransporter gene, possibly related to the exclusion of Cl- , was also increased. In the susceptible genotype, sodium chloride did not cause an increase in the transcripts of these genes in roots, but it increased the expression of NHX1 in leaf, which was less efficient in reducing the toxic effects of Na+ than root compartmentalization present in the tolerant genotype. The study of the subcellular location of LtNHX1 was performed by constitutive expression of the fusion protein LtNHX1-GFP. It was confirmed that it is a group I NHX antiporter, located in vacuolar membrane. The constitutive expression of the coding region of LtNHX1 increased the salinity tolerance of Arabidopsis thaliana in germination and vegetative stage. The overexpression of LtNHX1 in L. tenuis also increased salinity tolerance in vegetative stage. In conclusion, it was confirmed that the Lotus tenuis NHX1 vacuolar antiporter is located in vacuolar membrane and contributes to the salinity tolerance of the species through the compartmentalization of Na+ in root vacuoles, complementing the activity of other membrane transporters that reduce or delay Na+ accumulation in shoots. Affinito, María Agostina. Universidad Nacional del Noroeste de la provincia de Buenos Aires; Argentina