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This study determined the prevalence of intestinal protozoa in Long Term Residency Institutions for the Elderly (ILPI) in elders, nurses and food handlers, identifying the risk factors associated with the infections. Stool samples taken from the elderly (n = 293), nurses (63) and food handlers (19) were studied. Questionnaires were used with questions related to sociodemographic variables, health, behavior and health characteristics. Stool samples were examined using the techniques of Faust and Ziehl Neelsen, and the prevalence of G. duodenalis, Cryptosporidium spp., E. histolytica/dispar in the elderly was 4.0%, 1.0% and 0.3% respectively. Nurses and food handlers showed 4.8% and 5.2% positivity only for G. duodenalis, respectively. The origin of the individuals and contact with domestic animals has been associated with infection by G. duodenalis in the elderly, and contact with domestic animals was considered a risk factor for infection. The last stool examinations were related to Cryptosporidium spp.. None of the variables were associated with E. histolytica/dispar. The frequency of hand washing was significantly associated with G. duodenalis among nurses. The frequency of positive samples of G. duodenalis, Cryptosporidium spp., E. histolytica/dispar showed that ILPIs environments are conducive to this occurring due to contact between the elderly, nurses and food handlers, which are often poorly trained in hygiene procedures and food handling. Este estudo determinou a prevalência de protozoários intestinais em Instituições de Longa Permanência para Idosos (ILPI), enfermeiros, manipuladores de alimentos identificando fatores de risco associados às infecções. Amostras de fezes de idosos (n = 293), enfermeiros (63), manipuladores de alimentos (19) foram estudadas. Foram aplicados questionários relacionados a variáveis sociodemográficas, de higiene, comportamento e características de saúde. As amostras de fezes foram examinadas pelas técnicas de Faust e Ziehl Neelsen e a prevalência de G. duodenalis, Cryptosporidium spp., E.histolytica/dispar nos idosos foi de 4,0%, 1,0% e 0,3%, respectivamente. Enfermeiros e manipuladores de alimentos apresentaram 4,8% e 5,2% de positividade apenas para G. duodenalis, respectivamente. A origem dos indivíduos, o contato com animais domésticos foram associados à infecção por G. duodenalis nos idosos, sendo que o contato com animais domésticos foi considerado um fator de risco para a infecção, o tempo do último exame coproparasitológico foi relacionado a Cryptosporidium spp.. Nenhuma das variáveis apresentaram associação com E. histolytica/dispar. A frequência da lavagem das mãos foi associada significativamente com G. duodenalis entre enfermeiros. As frequências de amostras positivas para G. duodenalis, Cryptosporidium spp., E. histolytica/dispar demonstram que ILPIs são ambientes propícios para esta ocorrência devido ao contato entre idosos, enfermeiros, manipuladores de alimentos, que muitas vezes são mal treinados em procedimentos de higiene e manipulação de alimentos.

O objetivo do estudo foi avaliar a presença de helmintos em caixas de areia de creches públicas e privadas da cidade de Uberlândia, Minas Gerais em 2005. Foram selecionadas 14 creches particulares e 14 públicas que possuíam área de lazer. As coletas foram realizadas em duas estações do ano, uma na seca e a segunda na chuvosa. As amostras foram analisadas pelos métodos de Willis e Baermann. Na primeira coleta 17 (61%) creches foram positivas para larvas e 14 (50%) para ovos de helmintos e na segunda, em 18 (64%) e 10 (36%), respectivamente. Não foi observada influência da estação climática e da situação socioeconômica das creches. The objective of the study was to test for helminthes in sandboxes in day care centers in the city of Uberlândia, Southeastern Brazil in 2005. Fourteen private and 14 public day care centers with playgrounds were selected. One collection was carried out during the dry season (June and August), and the second one was in the rainy season (September and November). Samples were tested using Willis and Baermann methods. In the first collection, 17 (61%) day care centers were positive for helminthes larvae and 14 (50%) for eggs. In the second collection, 18 (64%) day care centers were positive for larvae and 10 (36%) for eggs. No influence of either season of the year or day care finance condition was seen.

With the purpose of investigating the biological aspects of Angiostrongylus vasorum (Baillet, 1866) Kamensky, 1905 in Subulina octona Bruguiere, 1789 experimental infections were carried out with the exposure of 90 adult molluscs to 155 L1 of the parasite/mollusc during 24 hours. The intramollus-can larval development was checked out daily through the chemical digestion of four infected molluscs and one molluscs from the control group during 21 days after infection. Until the 6th day post-infection, only Li of the parasite has been observed. On the 7th day; the presence of L2 was detected and from the 13th day on, L3 of A. vasorum also appeared. By means of larval morphometry, it has been observed that, Li had na average size of 335 x 14,5 um whereas L2 had an average size of 440,7 x 33,9 um on the 7th day ofter infection, reaching a, aximal diameter of 41,8 um on the 12th day after infections. The L3 had an average size of 472,4 x 38,7 um on the 13th day day and on the 21st' day after infection the measure was 551,3 x 27,6 um. In order to verify the infectivity of L3, from 5. octona to the definitive host, infection of a dog was undertaken by means of ingestion of tritured molluscs. On the 49th day post-infection, Li was found in the feaces of the dog and at necropsy on the 84th day post-infection adults worms were found in the lungs.

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais Parasitic infections are among the commonest health problems that affect birds. The identification of Cryptosporidium spp. and Giardia spp. in wild birds is relevant, since these animals can act as disseminators of these parasites to humans through environmental contamination. The aim of this research was to determine the occurrence and to perform the molecular characterization of Cryptosporidium and Giardia species/genotypes in feces from free-living and captive wild birds treated in the Laboratory of Wild Animals Research from the Federal University of Uberlândia (LAPAS) and kept in the Zoo of the Municipal Park of Sabiá, in Uberlândia, Minas Gerais, Brazil. The DNA extracted directly from feces was submitted to nested-PCR and semi-nested PCR analysis for amplification of fragments of the SSU rRNA and gdh genes of Cryptosporidium spp. and Giardia spp., respectively. Results showed that out of 256 samples collected, 10 (3.9%) were positive for Cryptosporidium spp., and 8 (3.1%) for Giardia spp.. Out of 172 samples of captive birds, six (3.49%) were positive for Cryptosporidium spp., and four (2.32%) for Giardia spp.. Out of 84 samples of free-living birds, four (4.76%) for Cryptosporidium spp. and four (4.76%) for Giardia spp. were positive. The occurrence of parasites in waterfowl (n=39) was two (5.13%) for Cryptosporidium spp., and four (10.26%) for Giardia spp.; in non-aquatic birds (n=217), it was eight (3.7%) and four (1.84%), respectively. There was no significant difference in the occurrence of Cryptosporidium spp. and Giardia spp. among captive and free-living birds (p = 0.62 and 0.29, respectively). Although no statistical analysis was performed for the positivity of Cryptosporidium spp. and Giardia spp. between waterfowl and non aquatic birds, the meeting of these parasites in waterfowl may have implications for the transmission of these protozoa to humans and other animals. RFLP and sequencing analysis have identified C. meleagridis in two birds of the Anatidae family, in two Aratinga leucophthalma (White-eyed parakeet), and in two Athene cunicularia (Burrowing Owl). They have also found C. baileyi in three Amazona aestiva (Blue-fronted Parrot) and in one Amazona amazonica (Orange-winged Parrot). Only three positive samples for Giardia spp. - classified as Giardia duodenalis assemblage B - were sequenced, two of them found in Rupornis magnirostris (Roadside Hawk), and one in Theristicus caudatus (Buff-necked Ibis). The essay concluded that Cryptosporidium spp. and Giardia spp. are present in wild birds in the microregion of Uberlândia, MG. The existence of zoonotic C. meleagridis and G. duodenalis assemblage B in the animals of this study may have a negative impact on public health. Infecções parasitárias estão entre os problemas sanitários comuns que acometem aves em todo mundo. A identificação de Cryptosporidium spp. e Giardia spp. em aves silvestres é relevante, visto que esses animais podem agir como veiculadoras dos parasitos para o ser humano, por meio da contaminação ambiental. O objetivo deste estudo foi determinar a ocorrência e caracterizar geneticamente as espécies/genótipos de Cryptosporidium e Giardia em aves silvestres de cativeiro e vida livre atendidas no Laboratório de Pesquisa em Animais Silvestres da Universidade Federal de Uberlândia (LAPAS-UFU) e procedentes do zoológico do Parque Municipal do Sabiá, Uberlândia, Minas Gerais, Brasil. O DNA, extraído diretamente das fezes coletadas, foi submetido a reações de nested-PCR e semi-nested PCR para amplificação de fragmentos dos genes SSU rRNA e gdh de Cryptosporidium spp. e Giardia spp., respectivamente.Das 256 amostras coletadas, 10 (3,9%) foram positivas para Cryptosporidium spp. e 8 (3,1%) para Giardia spp. Das 172 amostras de aves de cativeiro, seis (3,49%) foram positivas para Cryptosporidium spp.. e quatro (2,32%) para Giardia spp.; das 84 amostras de aves de vida livre, quatro (4,76%) para Cryptosporidium spp. e quatro (4,76%) para Giardia spp. foram positivas. A ocorrência dos parasitos em aves aquáticas (n=39) foi dois (5,13%) para Cryptosporidium spp. e quatro (10,26%) para Giardia spp.; em aves não aquáticas (n=217), oito (3,7%) e quatro (1,84%), respectivamente. Não foi encontrada diferença significante na ocorrência de Cryptosporidium spp. e Giardia spp. entre os grupos de aves de cativeiro e vida livre (p=0,62 e 0,29, respectivamente). Apesar de não ter sido realizada análise estatística para a positividade de Cryptosporidium spp. e Giardia spp. entre aves aquáticas e não aquáticas, ressalta-se que o encontro desses parasitos nas aves aquáticas pode ter implicações na transmissão desses protozoários para o homem e outros animais. Análises de RFLP e sequenciamento identificaram C. meleagridis em duas aves da família Anatidae, duas Aratinga leucophthalma (Maritaca) e duas Athene cunicularia (Corujas-buraqueira) e C. baileyi em três Amazona aestiva (papagaio-verdadeiro) e uma Amazona amazonica (papagaio-do-mangue). As amostras sequenciadas para Giardia spp., provenientes de dois Rupornis magnirostris (Gavião-carijó) e uma Theristicus caudatus (Curicaca), foram classificadas como Giardia duodenalis assemblage B. Cryptosporidium spp. e Giardia spp. estão presentes em aves silvestres de cativeiro e vida livre na microrregião de Uberlândia, MG. A presença de C. meleagridis e G. duodenalis assemblage B, considerados zoonóticos, em animais desse estudo, pode gerar impacto negativo na saúde pública. Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Giardia duodenalis is parasite of small intestine of several mammalian species, including humans, and it is found worldwide. Among domestics and wild animals this specie is prevalent regardless of race, sex, age and fitness, with significant clinical and economic importance. For a long time the parasite was considered specific for the host where it was found, but recently it was observed the existence of a relationship between assemblage of isolate and its host. Currently, G. duodenalis have been considered a complex, and molecular characterization of parasite isolates is critical for the knowledge about the transmission of giardiasis. Different results have been identified when various loci are sequenced, therefore, multilocus genotyping becomes the main ally in the trusted attribution of assemblages/subassemblages to the isolates. The aim of this study was to genetically characterize G.duodenalis cysts from dogs, cattle, pigs and lambs from kennels, pet shops, and farms from microregion of Uberlândia, using four markers. To determine the positivity of G. duodenalis cysts a flotation technique was employed. For genotyping, the genes glutamate dehydrogenase (gdh), triose phosphate isomerase (tpi), β-giardin (bg) and SSU-rRNA was used. Cysts of G.duodenalis were found in dogs, cattle, pigs and lambs and the infection rates were 21,66%, 18,75%, 5.5% e 24,8%, respectively. In association between positivity and sex, age, race and fitness, only age was significant regarding the infection. Fragments of gdh, tpi and bg was amplified in 33,3%, 36,8 and 7,2% of samples, respectively. PCR detection of SSU- rRNA failed to amplify and to sequence DNA samples. A total of 70 sequences were obtained, 34 (48,6%) from gdh, 25 (35,7%) from tpi and 11 (15,7%) from bg. The predominace of host-adapted assemblages was observed in all genes, and tpi was the only gene that classified isolates as zoonotic assemblage. Heterogeneous samples were found in gdh (pigs) and tpi (cattle and lambs). On multilocus genotyping (MLG) only three samples demonstrated concordance using the three genes, thus it was not possible to establish any relationship between assemblage and the variables sex, age, race fitness and fecal score. Giardia duodenalis é parasito do intestino delgado de várias espécies de mamíferos, incluindo o homem, tendo distribuição mundial. Entre os animais, domésticos e silvestres é prevalente, independente da raça, sexo, idade e aptidão, com importância clínica e econômica. Durante muito tempo, foi considerado específico para a espécie de hospedeiro onde era encontrado, porém recentemente descobriu-se a existência de relação de especificidade entre o grupo genotípico ou assemblage do parasito e seu hospedeiro. Baseado nisso, atualmente, a Giardia duodenalis é considerada um complexo, sendo a caracterização molecular, de isolados do parasito, de fundamental importância para o entendimento da transmissão da giardíase. Resultados inconsistentes têm sido identificados quando diferentes loci são sequenciados. Por isso a genotipagem multilocus torna-se a principal aliada na atribuição fidedigna das assemblages e subassemblages aos isolados. O objetivo desse trabalho foi caracterizar molecularmente os cistos de Giardia duodenalis, procedentes de cães, bovinos, ovinos e suínos provenientes de propriedades rurais, canis, pet shops e granjas da microrregião de Uberlândia, utilizando-se quatro marcadores. Para a determinação de positividade para cistos de G. duodenalis foi utilizada a técnica de Centrífugo-Flutuação em Sulfato de Zinco a 33%. Para a genotipagem dos isolados utilizou-se os genes glutamato dehidrogenase (gdh), triose fosfato isomerase (tpi), β-giardin (bg) e SSU-rRNA. Foram observados cistos de G. duodenalis em cães, bovinos, suínos e ovinos e as taxas de infecção foram 21,66%, 18,75%, 5.5% e 24, 8%, respectivamente. Na associação entre positividade e sexo, faixa etária, raça e aptidão a faixa etária foi a única variável que apresentou significância estatística em relação à infecção. Fragmentos do gene gdh foram amplificados em 33,3% das amostras, do tpi em 36,8% e do bg em 7,2%. A PCR falhou em amplificar e sequenciar amostras do gene alvo SSU-rRNA. Foram obtidas ao todo 70 sequencias, sendo 34 (48,6%) do gdh, 25 (35,7%) do tpi e 11 (15,7%) do bg. Observou-se predominância de assemblages espécie-específicas no sequenciamento dos três genes, sendo o tpi o único gene que classificou isolados como assemblage zoonótica; Foram observadas amostras heterogêneas, de suínos, no sequenciamento do gene gdh, e de bovinos e ovinos, no sequenciamento do tpi. Na análise da genotipagem multilocus (MLG), somente três isolados apresentaram concordância utilizando-se os três genes, não sendo possível estabelecer relação entre a assemblage e as variáveis sexo, faixa etária, raça, aptidão e escore fecal. Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Organismos que vivenciam fatores estressores e sofrem alterações morfofisiológicas e comportamentais são denominados biomonitores. As aves são organismos modelos para estudos de biomonitoramento por serem sensíveis às alterações ambientais. Neste estudo, foram utilizadas a razão heterófilo/linfócito (H/L - indicativo de estresse crônico), prevalência e parasitemia de hemoparasitos como ferramentas de biomonitoramento em aves do Cerrado. O objetivo foi comparar a razão H/L e o hemoparasitismo de aves entre áreas com diferentes níveis de urbanização e condições ambientais. Foram capturadas 1288 aves (41 espécies) em seis fragmentos florestais de Cerrado, entre 2013-2019, para confecção e análise de extensões sanguíneas. Os fragmentos florestais foram classificados em: rurais, periurbanos, e urbanos, e em cada fragmento foi mensurado os níveis de poluentes sonoros (ruídos antrópicos) e atmosféricos (monóxido de carbono), e foi calculada a área ocupada por recursos hídricos em um raio de 1 km². Verificou-se maior razão H/L em aves capturadas em áreas urbanas e periurbanas e com níveis elevados de poluentes sonoros e atmosféricos, e menor razão H/L nos indivíduos de áreas rurais e com baixos níveis de poluentes. Ao todo, 519 (40,2%) indivíduos apresentaram-se infectados por hemosporídeos, sendo 516 (40%) por Plasmodium spp. e 13 (1,0%) por Haemoproteus spp. A parasitemia não se associou ao nível de urbanização, porém diferiu entre os seis fragmentos florestais, sendo maior naqueles onde há maior quantidade de recursos hídricos. Também foram realizados testes experimentais com canários-belga (Serinus canaria). Os canários foram divididos em dois grupos; um mantido em um centro urbano (n=20), e outro em uma área rural e distante da urbanização (n=20). Em ambas as localidades foram mensurados os níveis de poluentes atmosféricos; monóxido de carbono e material particulado. O experimento durou 120 dias e a cada 15 dias foram feitas coletas e extensões sanguíneas. A razão H/L foi maior nos canários da área urbana e mais poluída, e aumentou com tempo de experimento. As infecções por hemosporídeos (Plasmodium spp.) foram maiores nos canários do ambiente rural, com prevalência média de 57,1% nos canários rurais e 1,11% nos urbanos. A parasitemia correlacionou negativamente com a razão H/L tanto nas aves nativas quanto nos canários, sugerindo que os indivíduos podem estar imunologicamente ativos. O estudo mostrou que as aves que vivem em áreas urbanizadas e poluídas apresentam maiores indicativos de estresse (razão H/L), e que os parasitos hemosporídeos são favorecidos em áreas que podem oferecer mais recursos para a reprodução e desenvolvimento dos vetores. Esses resultados sugerem que a razão H/L e os parasitos hemosporídeos podem ser utilizados como ferramentas de biomonitoramento ambiental e como parâmetros para avaliar as condições das aves de ambientes degradados. Organisms that experience stressors and undergo morphophysiological and behavioral changes are called biomonitors. Birds are model organisms for biomonitoring studies because they are sensitive to environmental changes. In this study, the heterophil/lymphocyte ratio (H/L - indicative of chronic stress), prevalence and parasitaemia of hemoparasites were used as biomonitoring tools in Cerrado birds. The objective of this study was to compare the H/L ratio and hemoparasitism of birds between areas with different levels of urbanization and environmental conditions. A total of 1288 birds (41 species) were captured in six Cerrado forest fragments, between 2013-2019, for the production and analysis of blood smears. The forest fragments were classified into rural, peri-urban, and urban, and in each one the levels of noise (anthropic noise) and atmospheric (carbon monoxide) pollutants were measured, and the size of the area occupied by water resources was also calculated in a radius of 1 km². There was a higher H/L ratio in birds captured in urban and peri-urban areas and with high levels of noise and air pollutants, and a lower H/L ratio in individuals from rural areas and with low levels of pollutants. Altogether, 519 (40.2%) individuals were infected with haemosporidian parasites, 516 (40%) with Plasmodium spp. and 13 (1.0%) by Haemoproteus spp. Parasitaemia was not associated with the level of urbanization, but it differed among the six forest fragments, being higher in those where there is a greater amount of water resources. Experimental tests were also carried out with domestic canaries (Serinus canaria). The canaries were divided into two groups; one kept in an urban center (n=20), and another in a rural area far from urbanization (n=20). In both locations, the levels of atmospheric pollutants were measured, carbon monoxide and particulate matter. The experiment lasted 120 days and every 15 days blood collections were made. The H/L ratio was higher in canaries from the urban and more polluted area and increased with time of experiment. Infections by haemosporidian parasites (Plasmodium spp.) were higher in rural canaries, with an average prevalence of 57.1% in rural and 1.11% in urban canaries. Parasitemia was negatively correlated with the H/L ratio in both native birds and canaries, suggesting that individuals may be immunologically active. This study showed that birds that live in urbanized and polluted areas have higher stress indicators (H/L ratio) and that haemosporidian parasites are favored in areas that can offer more resources for vector reproduction and development. These results suggest that the H/L ratio and hemosporid parasites can be used as tools for environmental biomonitoring and as parameters to assess the conditions of birds in degraded environments. Tese (Doutorado) 2024-07-08

Orientador: Regina Maura Bueno Franco Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Cães e gatos são os animais domésticos mais utilizados para interagir e conviver com as pessoas. Estes animais cada vez mais compartilham o mesmo habitat que os seres humanos. Em que pese os benefícios advindos deste íntimo relacionamento, há que se considerar que cães e gatos podem albergar parasitos com potencial zoonótico, dentre os quais Giardia e Cryptosporidium, ambos de grande importância na medicina veterinária e na saúde pública. Giardia é um protozoário entérico cosmopolita responsável por diarreia em grande variedade de hospedeiros, incluindo o ser humano. Cryptosporidium é um parasito emergente e oportunista, que ganhou destaque com o advento da síndrome da deficiência imunológica adquirida, uma vez que este protozoário pode causar quadros graves em indivíduos imunocomprometidos. Do ponto de vista epidemiológico, é importante entender quais são as espécies de Giardia e Cryptosporidium que acometem os seres humanos e os animais, bem como conhecer aquelas que possuem potencial zoonótico. Conhecer a prevalência desses parasitos na população de cães e gatos torna-se ferramenta importante, que possibilita delinear ações que reduzam o risco de transmissão para outros animais, bem como para a população humana. A determinação das assembleias de Giardia duodenalis mais prevalentes nos cães e gatos também é de grande relevância, visto que este protozoário possui grande diversidade genética e os hospedeiros das espécies canina e felina podem albergar tanto assembleias zoonóticas quanto espécie-específicas. O presente estudo teve como objetivo, através do uso de métodos parasitológicos tradicionais, avaliar a prevalência de G. duodenalis e Cryptosporidium sp. em cães (n=299) e gatos (n=38) pertencentes aos estratos errante, comunitário e semidomiciliado e recolhidos ao Centro de Controle de Zoonoses de Campinas (CCZ), no período de março de 2011 a março de 2012. As amostras fecais positivas para G. duodenalis foram caracterizadas molecularmente através do locus tpi. Também se avaliou a eventual associação entre as características epidemiológicas da população em estudo e infecção por Giardia e Cryptosporidium. Os resultados revelaram uma prevalência de 13,3% para G. duodenalis nas amostras fecais de cães. Houve diferença estatisticamente significativa em relação à consistência da amostra fecal, com maior ocorrência nas amostras pastosas ou diarreicas. A prevalência de G. duodenalis em gatos foi de 5,5%. Em relação ao Cryptosporidium, sua prevalência em cães foi de 2,0%. Não foram encontrados oocistos nas amostras de gatos. Os resultados moleculares indicaram em todas as amostras de cães sequenciadas identidade com as assembleias C ou D de G. duodenalis, sugerindo que animais desta espécie pertencentes aos estratos avaliados constituem baixo risco à saúde pública no município de Campinas. A amostra de gato em que foi possível realizar o sequenciamento revelou identidade com a assembleia AI, demonstrando que animais desta espécie pertencentes aos estratos avaliados podem se constituir em preocupação em saúde pública no município de Campinas, podendo os mesmos eliminar cistos com potencial zoonótico Abstract: Dogs and cats are the most common domestic animals used for interact and live with humans. Even more these animals are sharing the same habitat with the human beings. Despite of the benefits of this intimate relationship, we must consider that dogs and cats can be hosts for zoonotic parasites, including Giardia and Cryptosporidium, both parasites with great relevance in veterinary medicine and public health. Giardia is a cosmopolitan enteric protozoan responsible for diarrhea in a wide variety of hosts, including man. Cryptosporidium is an emergent and opportunist parasite, which attained relevance with the advent of the acquired immune deficiency syndrome, since this parasite can cause severe disease in immunocompromised individuals. From an epidemiological standpoint, it is important to understand which are the Cryptosporidium species and Giardia genotypes which affect humans and animals, as well as know those with zoonotic potential. The prevalence rates knowledge of these parasites in canine and feline populations becomes an important tool that makes possible to delineate actions to reduce risk of transmission to other animals, as well as to the human population. The assemblages of Giardia duodenalis more prevalent in dogs and cats are also an important determination, since this protozoan has great genetic diversity and also the canine and feline's host species can harbor both zoonotic and species-specific assemblages. Through the use of traditional parasitological methods, the present study aimed to evaluate the prevalence of G. duodenalis and Cryptosporidium sp. in dogs (n=299) and cats (n=38) belonging to stray, community and semi-domesticated strata and captured by the Zoonosis Control Center of Campinas (CCZ), from March 2011 to March 2012. The positive samples for G. duodenalis have been molecularly characterized through locus tpi. The possible association among the epidemiological characteristics of the studied population with the infection by Giardia and Cryptosporidium, was also evaluated. The prevalence of G. duodenalis was 13.3% in fecal samples in dogs and statistical significant difference has been observed in relation to the consistency of the fecal sample, with higher prevalence in doughy or diarrheic samples. The prevalence of G. duodenalis in cats was 5.5%. In relation to Cryptosporidium, the prevalence in dogs was 2.0%. Oocysts were not found in fecal samples from cats. All amplified sequences sampled from dogs feces showed identity with C or D assemblage of G. duodenalis, suggesting that dogs belonging to evaluated strata constitute low risk to public health in the city of Campinas. The cat's fecal sample, which were possible to sequence, showed identity with the Assemblage AI, demonstrating that animals of this species belonging to this particular strata can be a concern in public health for the city of Campinas, since they can eliminate cysts with zoonotic potential Mestrado Parasitologia Mestre em Parasitologia

Orientador: Regina Maura Bueno Franco Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Surtos de doenças gastrointestinais associados com a ingestão de moluscos bivalves crus ou mal cozidos têm sido reportados em todo o mundo. O procedimento mais utilizado para purificar os tecidos dos bivalves, consiste na utilização de água desinfetada com radiação UV aplicada em tanques de depuração, previamente à introdução dos animais no mercado. Os riscos de aquisição de infecções mediante o consumo de bivalves são maximizados quando estes são cultivados em áreas inapropriadas, ou quando são comercializados sem serem submetidos ao procedimento de depuração. Os objetivos deste estudo foram: avaliar a contaminação por cistos de Giardia duodenalis e oocistos de Cryptosporidium em ostras destinadas ao consumo humano, antes e após o procedimento de depuração com luz UV, e em águas salobras, nas etapas relacionadas com a cadeia produtiva de ostras no estuário de Cananéia, litoral sul de São Paulo; realizar a caracterização molecular de cistos de Giardia em diferentes etapas da produção de ostras para verificar os genótipos circulantes e aqueles relacionados com a infecção em humanos; enumerar a concentração de indicadores bacteriológicos de contaminação fecal, da área de cultivo até a etapa de depuração para verificar se atende à regulamentação do Conselho Nacional do Meio Ambiente (CONAMA). Quatro pontos foram selecionados para coleta de água e ostras e pesquisa de protozoários: ponto 1: região de cultivo e engorda das ostras; ponto 2: captação de água; ponto 3: etapa de filtração de água e ponto 4: tanque de depuração. As amostras de água foram analisadas por filtração em membranas seguida de separação imunomagnética (IMS) e reação de imunofluorescência direta (RID). A contaminação das ostras foi verificada mediante análise de conteúdo líquido interno e lavado branquial por IMS e RID. A reação em cadeia da polimerase e o sequenciamento foram realizados para pesquisa de Giardia duodenalis e caracterização de seus genótipos. Giardia foi o patógeno mais prevalente em todos os pontos de água, sendo detectada em: 50,0%, 25,0%, 33,3% e 50,0% das amostras dos pontos 1, 2, 3 e 4, respectivamente. O subgenótipo AII foi detectado em algumas amostras hídricas dos pontos 1, 2 e 4 e o genótipo C em duas amostras (pontos 3 e 4). Oocistos de Cryptosporidium foram detectados em 16,6% das amostras de água após a depuração. As ostras da região de cultivo continham cistos de Giardia duodenalis em 41,6% das amostras; o subgenótipo AII foi evidenciado em uma amostra. As ostras depuradas apresentaram a maior contaminação: 58,3% das amostras albergavam cistos de Giardia e 3 delas pertenciam ao subgenótipo AII. As análises bacteriológicas revelaram que o ponto de engorda (P1) estava adequado para o cultivo das ostras. Estes resultados refletem a ineficiência do procedimento de depuração com UV aplicado nesta planta de tratamento e a contaminação do produto - na etapa final que precede sua comercialização - por Giardia duodenalis pertencente ao subgenótipo AII, potencialmente infectante para seres humanos. Os resultados evidenciam a necessidade de monitoramento contínuo de patógenos e adequação da legislação do cultivo de moluscos bivalves no Brasil, a fim de garantir a segurança alimentar Abstract: Many shellfish-borne associated outbreaks have been reported worldwide especially related to its ingestion raw or lightly cooked. In the shellfish industry, the most commonly utilized procedure to purify shellfish tissues consists in the utilization of UV disinfected water employed at depuration tanks, before they are placed on the market. The risks of acquiring gastroenteric diseases, through its consumption, are maximized when they are cultured on inappropriate growing areas or whenever they are sold without depuration procedure. The purposes of this study were: evaluate the contamination by Giardia duodenalis cysts and Cryptosporidium oocysts in oysters destined to human consumption, before and after UV depuration procedure, and in brackish waters at stages related to the food chain of edible oysters, from Cananéia estuary located on the south coast of São Paulo; perform molecular characterization of Giardia cysts at different stages of the production of oysters to verify the main circulating genotypes and those associated with human infection; enumerate bacteriological indicators of fecal contamination from growing site up to depuration site, to check if it complies with the National Environmental Council (CONAMA). Four sampling sites were selected for water and oysters harvesting and protozoa search: site 1- oysters growing area; site 2: catchment water; site 3: filtration stage of water treatment and site 4: oyster's depuration tank. Water samples were analyzed through membrane filtration technique followed by immunomagnetic separation (IMS) and direct immunofluorescence assay (IFA). Oysters' contamination was verified through the analysis of innerwater and gill wash using IMS and IFA. The polymerase chain reaction and sequencing reactions were performed to search for Giardia duodenalis and characterization of its genotypes. Giardia was the most prevalent pathogens in all water sites, where it was detected: 50.0%, 25.0%, 33.3% and 50.0% of water from sites 1, 2, 3 and 4 respectively. The subgenotype AII was detected in several water samples from sites 1, 2 and 4 and the genotype C in two samples (sites 3 and 4). Cryptosporidium oocysts were found in 16.6% of depuration water tank. Oysters from growing area harbored Giardia duodenalis cysts in 41.6% of the samples and subgenotype AII was evidenced once. Depurated oysters were the most contaminated: 58.3% were harboring Giardia duodenalis cysts and 3 belonged to subgenotype AII. Bacteriological analysis demonstrated that site 1 was adequate to growing oysters. These results indicate the ineffectiveness of the UV depuration applied in this shellfish treatment plant, and the contamination of the product - in the final stage which precedes its commercialization - by Giardia duodenalis belonging to subgenotype AII, potentially infectious to humans. The results highlight the need for continued monitoring of pathogens and suit the legislation on the cultivation of bivalve molluscs in Brazil in order to ensure food safety Doutorado Parasitologia Doutor em Parasitologia

Orientadores: Ana Maria Aparecida Guaraldo, Regina Maura Bueno Franco Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Dentre os coccídios que parasitam Passeriformes, os do gênero Isospora (Schneider, 1881) são os mais prevalentes, sendo descritos em mais de 50 espécies ao redor do mundo. Enquanto que Cryptosporidium causa uma das infecções parasitárias mais comuns em aves domésticas e silvestres, tendo sido relatado em mais de 30 espécies de hospedeiros aviários por todo o mundo. Esta pesquisa tem como objetivo determinar a ocorrência de Isospora spp. e Cryptosporidium em canários (Serinus canaria) cativos brasileiros, que participam de campeonatos nacionais de ornitologia. A ocorrência de Isospora foi determinada pela presença de oocistos esporulados nas fezes das aves, obtidos por meio de concentração em sacarose e observados em microscopia óptica. Para análise molecular quatro novos iniciadores foram desenhados para realização da nested PCR. A ocorrência de Cryptosporidium foi determinada a partir de swabs de diversos órgãos em animais enfermos e mortos; e a partir de fezes de animais assintomáticos e enfermos. Para concentração dos oocistos foi utilizada a técnica de centrífugo-sedimentação com éter, seguida de coloração de Ziehl Neelsen modificada para visualização dos oocistos por microscopia óptica. Para análise molecular foram utilizadas nested PCR e a PCR duplex em tempo real específica para C. galli e genótipo III de aves. De 394 amostras fecais colhidas, 59,13% foram positivas para coccídios por microscopia óptica, sendo que 44,6% eram Isospora. A análise das sequências de 34 amostras mostraram homologia de 100% com Isospora e três sequências diferiam daquelas depositadas no GenBank. Os canários enfermos apresentaram maior frequência para o gênero Cryptosporidium do que assintomáticos, mas não houve especificidade de sinais clínicos associados ao gênero, bem como aos genótipos e espécies encontrados, apenas quadros inespecíficos. Predominou em todos os grupos o genótipo I de aves, cujo sítio de infecção pode ser a cloaca da ave pelas evidências apresentadas no trabalho. Independente deste resultado, as mesmas espécies e ou genótipos de Cryptosporidium estão presentes na população de canários assintomática, enferma e em óbito: C. galli, genótipo I, III e V de aves Abstract: Among the coccidia that parasites passerines, the genus Isospora is the most prevalent and are described in more than 50 species around the world. While Cryptosporidium is the most common cause of parasitic infections in domestic and wild birds, and have been reported in more than 30 species of avian hosts worldwide. This research aims to determine the occurrence of Isospora spp. and Cryptosporidium in Brazilian captives canaries (Serinus canaria), participating in national ornithology championships. The occurrence of Isospora was determined by the presence of sporulated oocysts in the birds feces, obtained by sucrose concentration and observed under optical microscopy. For the molecular analysis four new primers were designed for performing nested PCR. The occurrence of Cryptosporidium was determined from swabs of various organs in sick and dead animals; and from asymptomatic and sick animal feces. For oocysts microscopic concentration was used centrifugal sedimentaton technique with ether, followed by Ziehl Neelsen modified staining for oocysts visualization in optical microscopy. For molecular analysis were performed nested PCR and real-time PCR duplex specific for C. galli and avian genotype III. From 394 fecal samples, 59.13% were positive for coccidia and 44.6% were Isospora. Sequence analysis of 34 samples showed 100% of homology with Isospora in 23 samples, and three samples were different from those sequences in GenBank. The sick canaries showed higher frequency for the Cryptosporidium genus than asymptomatic, but there was no specificity of clinical signs associated with the genus, genotypes and species, only unspecific. Avian genotype I predominated in all groups and its site of infection may be the cloaca of the bird by the evidence presented in the paper. Regardless of this outcome, the same Cryptosporidium species and genotypes are present in the population of asymptomatic, sick and dead canaries: C. galli, avian genotype I, III and V Doutorado Relações Antrópicas, Meio Ambiente e Parasitologia Doutora em Biologia Animal CAPES 7357-13-3

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais Este trabalho visa apresentar um problema bioético do Brasil acerca da experimentação. O país adota dois paradigmas para regulamentar a prática da experimentação baseados no critério da espécie. A experimentação humana baseiase constitucionalmente em direitos fundamentais, e estes se inspiram no valor da dignidade da pessoa humana. Os princípios norteadores da prática são, principalmente, autonomia, não maleficência, beneficência e justiça. A experimentação animal baseia-se no princípio constitucional da não crueldade que se inspira no valor da senciência animal. Os princípios norteadores da prática são substituição, redução e refinamento. Um paradigma reconhece a pessoalidade e respeita a dignidade dos participantes. O outro reconhece a senciência e respeita tal condição dos objetos de pesquisa. O problema dessa situação é que pessoalidade não decorre de espécie. Assim, busca-se apresentar a incorreção moral na convivência desses padrões baseados apenas em espécie e objetiva-se demonstrar que, por uma questão de justiça, é necessário respeitar todas as pessoas em sua dignidade. This text aims to present a bioethical problem regarding experimentation in Brazil. The country adopts two paradigms to regulate the practice of experimentation based on the criterion of species. Experimentation with humans is constitutionally referenced in the fundamental rights and these are inspired by the value of human dignity. The guiding principles of practice are mainly autonomy, non-maleficence, beneficence and justice. Experimentation with animals is referenced in the constitutional principle of non-cruelty that is inspired by the value of animal sentience. The guiding principles of practice are replacement, reduction and refinement. One paradigm recognizes the personhood and respects the dignity of the participants. The other recognizes sentience and respects such a condition of the research subjects. The problem with this situation is that personhood does not derive from the species. Thus, this research seeks to present the moral inaccuracy of the coexistence of these species-based standards, and tries to demonstrate that for the sake of justice it is necessary to respect all people in their dignity. Tese (Doutorado)

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior As hemogregarinas (Apicomplexa: Adeleina) são hemoparasitos observados em répteis, sendo os principais gêneros Haemogregarina e Hepatozoon. Análises morfológicas, morfométricas e moleculares são essenciais, pois auxiliam na distinção entre gêneros e espécies desses protozoários. O presente estudo objetivou determinar a positividade e caracterizar morfologicamente, morfometricamente e molecularmente gênero/espécie de hemogregarinas em répteis de vida livre e cativeiro. Foram coletadas amostras dos répteis provenientes dos estados de Minas Gerais, Mato Grosso e Goiás. A amostra de sangue foi dividida em alíquotas para realizar extensões sanguíneas e executar a PCR. As análises morfológicas e morfométricas das formas evolutivas sanguíneas de hemogregarinas foram realizadas nas extensões. A PCR foi realizada com os primers HEMO1/HEMO2 e HEPF300/HEP900. De 222 amostras de répteis coletadas, 102 (45,94%) foram positivas para hemogregarinas, sendo 46,15% (36/78) testudines, 70,68% (41/58) crocodilianos e 29,06% (25/86) serpentes. Houve diferença significativa entre positividade e ambiente de vida (vida livre/cativeiro). Pela análise morfológica e morfométrica, em testudines, foram observadas formas evolutivas de trofozoítos, pré-merontes, micromerontes, macromerontes, duas morfologias de macrogametócitos e duas morfologias de microgametócitos de Haemogregarina sp. Em crocodilianos, foram observados gametócitos extraeritrocíticos e quatro estádios gametocíticos intraeritrocíticos (em dobramento, com cromatina nuclear dispersa, com vacúolos citoplasmáticos, maduros) os quais auxiliaram na identificação de Hepatozoon caimani. Em serpentes, cinco (MI, M2, M3, M4 e M5) diferentes morfologias e morfometrias de gametócitos intraeritrocíticos de Hepatozoon sp. foram observadas, sendo necessária a técnica molecular para identificação de espécies. Devido à escassez de dados moleculares sobre Haemogregarina sp. em testudines, não foi possível identificar espécie, as poucas sequências disponíveis no “GenBank” mostraram-se diferentes das do presente estudo. Com isso, as informações morfológicas, morfométricas e moleculares relatadas nesse trabalho infere possível descrição de uma nova espécie de Haemogregarina, entretanto mais estudos serão realizados para confirmar essa suspeita. Em crocodilianos, não há dados moleculares publicados de caimani, sendo o presente estudo o primeiro. Entretanto, em serpentes através da análise molecular foi possível identificar espécies de Hepatozoon, como Hepatozoon musa parasitando serpentes da espécie Crotalus durissus de vida livre e cativeiro e Hepatozoon cevapii parasitando serpentes da espécie Boa constrictor e Bothrops spp. A partir desse estudo, conclui-se a necessidade em empregar-se o conjunto diagnóstico morfológico, morfométrico e molecular para identificar gêneros e espécies de hemogregarinas em répteis de vida livre e cativeiro, passo inicial para melhor compreensão dos efeitos fisiológicos, biológicos e comportamentais desses parasitos em répteis. Hemogregarines (Apicomplexa: Adeleina) are hemoparasites commonly observed in reptiles, being the main genus Haemogregarina and Hepatozoon. Morphological, morphometric and molecular analyzes are essential to distinguish genus and species of these parasites, an initial step to better understand the physiological, biological and behavioral effects of these hemoparasites in reptiles. The present study aimed to determine the positivity and characterize morphometrically, morphometrically and molecularly genus/species of hemogregarinas in free - living and captive reptiles. Samples from reptiles from the states of Minas Gerais, Mato Grosso and Goiás were collected. Blood samples were divided in aliquots to perform blood extensions and as well as PCR. The morphological and morphometric analyzes of blood evolutionary forms were performed in the extensions. PCR was performed with the primers HEMO1/HEMO2 and HEPF300/HEP900. Of 222 samples of reptiles collected, hemogregarines were observed in 45.94% (102), being 46.15% (36/78) from testudines, 70.68% (41/58) from crocodilians and 29.06% (25/86) from snakes. There was a significant difference between positivity and living environment (free life / captivity). The morphological and morphometric analysis, in testudines, showed erythrocytic stages forms of trophozoites, premeronts, micromeronts, macromeronts, two morphologies of macrogametocytes and two morphologies of microgametocytes of Haemogregarina sp. In crocodilians, extraeritrocitic gametocytes and four intraeritrocytic gametocytic stages (in folding, with dispersed nuclear chromatin, cytoplasmic vacuoles and mature were seen, which aided in the identification of Hepatozoon caimani. In snakes, five (MI, M2, M3, M4 and M5) different morphologies and morphometrics of intrateritocytic gametocytes of Hepatozoon sp. were being necessary the molecular technique for identification of species. Due to the scarcity of molecular data on Haemogregarina sp. in testudines, it was not possible to identify species, the few sequences available in GenBank were different from those of the present study. Thus, the morphological, morphometric and molecular information reported in this work infers a possible description of a new species of Haemogregarina, however further studies will be carried out to confirm this suspicion. In crocodilians, there aren´t published molecular data of Hepatozoon caimani, being the present study the first one. However, in snakes through molecular analysis it was possible to identify species of Hepatozoon, such as Hepatozoon musa parasitizing Crotalus durissus of free living and captivity environment and Hepatozoon cevapii parasiting Boa constrictor and Bothrops spp. From this study, we conclude the need to use the morphological, morphometric and molecular diagnostics to identify genus and species of hemogregarines in free-living and captivity reptiles, a initial step to know better the biological, physiological and behavioral effects of these parasites in these animals. Dissertação (Mestrado)

Orientadores: Regina Maura Bueno Franco, Romeu Cantusio Neto Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Dados sobre a ocorrência das diferentes espécies de Cryptosporidium e das assembleias de Giardia duodenalis em amostras de água bruta no Brasil são escassos. A escolha de um método capaz de detectar a presença desses protozoários nos mananciais é de extrema importância epidemiológica. O objetivo desse estudo foi realizar a caracterização molecular de cistos e oocistos detectados nos rios Atibaia e Capivari que são os principais mananciais que abastecem o município de Campinas, SP. Esses rios mostram-se eutrofizados dado que estão localizados em uma das regiões mais industrializadas do estado de São Paulo. Amostras de água bruta foram filtradas por dois diferentes métodos, sistema Filta-Max® (Iddex) e por Filtração em Membranas de ésteres mistos de celulose (47 mm de diâmetro) na qual adicionou-se uma etapa de eluição aquecida, objetivando-se a comparação entre esses dois procedimentos analíticos quanto à eficiência de recuperação de cistos e oocistos, empregando-se para tanto a suspensão comercial ColorSeed®. Os protozoários foram purificados por separação imunomagnética (IMS) e visualizados com o emprego de anticorpos monoclonais de acordo com o protocolo do Método 1623.1 da Agencia de Proteção Ambiental dos Estados Unidos. Amostras de água bruta de ambos os mananciais (n= 24) foram processadas mediante o método de referencia visando a caracterização molecular dos protozoários potencialmente patogênicos Cryptosporidium e Giardia. Empregou-se os marcadores moleculares SSU rRNA, beta-giardina, glutamato-desidrogenase e o espaçador transcrito interno do gene 5.8S para a caracterização molecular de G. duodenalis e, para Cryptosporidium sp, objetivou-se a amplificação de um fragmento de 830 pares de bases do gene 18S rRNA. Testes estatísticos demonstraram desempenho similar de ambas as metodologias em estudo quanto à eficiência de recuperação de cistos e oocistos; entretanto, esses procedimentos analíticos acarretaram em maior eficiência de recuperação de cistos que oocistos e, a turbidez exerceu efeito prejudicial na performance de ambas as metodologias em estudo como evidenciado pelo achado de correlação negativa entre turbidez e recuperações de cistos e oocistos. Cistos de Giardia sp ocorreram com maior frequência que oocistos de Cryptosporidium sp em ambos os mananciais. Para o Rio Atibaia, houve concordância entre os resultados para o marcador molecular SSU rRNA e visualização por imunofluorescência, sendo 100% das amostras positivas para cistos enquanto que 66,6% das amostras de água do Rio Capivari resultaram em amplificação. No Rio Atibaia, registrou-se a presença de duas espécies de Cryptosporidium quando empregado o marcador molecular 18S rRNA, a saber: C. hominis e C. parvum; a espécie C. meleagridis foi detectada em uma amostra de água bruta do rio Capivari, assim, essas três principais espécies infecciosas para o ser humano foram detectadas nos locais de captação dos mananciais utilizados para abastecimento público no município de Campinas, sendo tal achado relevante do ponto de vista de Saúde Publica. Para Giardia duodenalis, as análises de sequenciamento apontaram para a presença das assembleias AI e BIV nas amostras do rio Capivari e, no rio Atibaia, a ocorrência da assembleia A tendo-se observado diferenças quanto ao sucesso de amplificação, considerando os quatro marcadores moleculares utilizados. Clonagem do DNA de Cryptosporidium permitiu comprovar a presença de C. meleagridis em uma amostra de água do rio Capivari Abstract: Data about the occurrence of various Cryptosporidium species and different Giardia duodenalis assemblages in water samples from Brazil yet are scarce. The selection of a filtration method able to detecting the presence of these protozoan parasites in water sources is of high epidemiological relevance. We investigate the occurrence of these pathogenic protozoa in raw water samples of Atibaia and Capivari River which are the main water supplies in Campinas city, São Paulo State. These rivers show high degrees of eutrophication as they are located in one of the most industrialized regions in São Paulo State. Samples were concentrated by membrane (47 mm of diameter) filtration technique added a heated elution step and/or by USEPA Method 1623.1 (method of reference) using the system Filta-Max®, aiming the comparison between these two analytical procedures through the recovery efficiencies of cysts and oocysts by using the ColorSeed® commercial suspension. Protozoa were purified by Immunomagnetic separation (IMS) and they were visualized by monoclonal antibodies label according with Method 1623.1. Raw water samples from both water sources were processed through the reference method objecting the molecular characterization of pathogenic protozoan parasites Cryptosporidium spp. and Giardia spp. The molecular markers SSUr RNA, beta-giardin, glutamate-desidrogenase and internal transcribed spacer of 5.8 gene were employed for the molecular characterization of G. duodenalis; for Cryptosporidium, the amplification of an 830 bp fragment of the 18S rRNA gene was used. Statistical analysis showed similar performance of both methodologies under study for cysts and oocysts recovery efficiencies; however, these analytical procedures resulted in a higher recovery efficiency of cysts than oocysts, and turbidity had a detrimental effect on performance of both methodologies as evidenced by our findings (negative correlation between turbidity and cysts/oocysts recoveries). Giardia sp cysts occurred more frequently than Cryptosporidium sp oocysts in both water sources. For Atibaia River, there was agreement between the results for SSU rRNA molecular marker amplification and immunofluorescence assay visualization, with 100% of samples positive for cysts while 66.6% of water samples from Capivari River resulted in amplification. In Atibaia River, the presence of two Cryptosporidium species was documented when the molecular marker 18S rRNA was utilized, namely: C. hominis and C. parvum; C. meleagridis was detected in a sample of raw water of Capivari River; thus, these three main infectious species for humans were detected at the catchment sites of water sources intended for public supply in Campinas city. These findings are relevant from a public health point of view. For G. duodenalis, sequencing analysis pointed to the presence of AI and BIV assemblages in raw water from Capivari River, and in the Atibaia River, the occurrence of assemblage A was detected. In this study, differences were observed regarding the success of amplification considered the four molecular markers used for G. duodenalis. Cloning of DNA of Cryptosporidium allowed to confirm the presence of C. meleagridis in one Capivari River water sample Doutorado Relações Antrópicas, Meio Ambiente e Parasitologia Doutor em Biologia Animal FAPESP 2012/50522-0

Hemoparasitos do filo Apicomplexa merecem destaque devido ao impacto que podem ter na conservação da biodiversidade dos mamíferos. O presente estudo objetivou avaliar a ocorrência de agentes Piroplasmida (Cytauxzoon, Theileria e Babesia) e Hepatozoon spp., utilizando o Exame Microscópico Convencional (EMC) e a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), e identificar os carrapatos presentes em mamíferos silvestres destinados ao LAPAS-UFU, CETAS-GO/IBAMA e CETAS-BH/IBAMA. Obteve-se 152 amostras de sangue total e realizou-se a PCR para Hepatozoon spp., com a utilização dos primers HepF300/Hep900, Hep2F/Hep2R e HAM-1/HPFR2, e para a ordem Piroplasmida, realizou-se a PCR com auxílio dos primers BAB- 33-47/ BAB432-439, PIRO 1F/PIRO 5R. Com punção de sangue periférico, confeccionou-se 352 extensões de 123 animais. Pelo EMC, não foram observados gamontes de Hepatozoon spp., mas pela PCR obteve-se 5,2% de positividade (oito positivos). Foram obtidos quatro novos haplótipos de Hepatozoon canis e Hepatozoon felis nos mamíferos de espécies lobo-guará (Chrysocyon brachyurus), raposa-do-campo (Lycalopex vetulus), irara (Eira barbara) e onça-parda (Puma concolor). Para os piroplasmas, pelo EMC e PCR, obteve-se 34,9% (43 animais positivos) e 26,3% (40 animais positivos), respectivamente. Foram obtidos três novos haplótipos de espécies de piroplasmas, sendo sequências similares à Theileria cervi em veado-catingueiro, Theileria equi em anta e Cytauxzoon felis em jaguatirica. Foram identificadas 432 espécimes, de 30 animais. Os carrapatos identificados foram: Amblyomma nodosum, A. parvum, A. ovale, A. sculptum, A. longirostre, A. dubidatum, Rhipicephalus microplus e R. sanguineus. Além disso, outros hemoparasitos foram observados em microscopia óptica, como Ehrlichia spp. em 23 animais (18,6%) e microfilárias em dois indivíduos de espécie Coendou prehensilis (ouriço-cacheiro). O conjunto de informações trazidas por este trabalho comprova a abundância de hemoparasitos que mamíferos brasileiros podem albergar. Além disso, algumas espécies de carrapatos identificados foram determinantes para inferir possíveis modos de transmissão de hemoparasitos observados nos animais. Sobre o resultado obtido pelo uso das técnicas de diagnóstico, a PCR, aliada ao sequenciamento, mostrou-se mais precisa que o EMC para identificação de espécies de hemoparasitos-alvo deste trabalho. Haemoparasites belonging to filum Apicomplexa deserve attention because can affect the conservation of mammals’s biodiversity. This work aimed to avalue the occurencce of Piroplasmida agents (Cytauxzoon, Theileria e Babesia) e Hepatozoon spp. using Convencional Microscopic Exam (CME) and Polymerase Chain Reaction (PCR) and indetify ticks on wild mammals belonging to LAPAS-UFU, CETAS-GO/IBAMA e CETAS-BH/IBAMA. On total, this work obtained 152 total blood samples that were submited to PCR for Hepatozoon spp. with primers HepF300/Hep900, Hep2F/Hep2R e HAM-1/HPFR2, and for Piroplasmida agents, PCR was done using primers BAB- 33-47/ BAB432-439, PIRO 1F/PIRO 5R. To exam slides on optic microscope, was used peripheral samples of 123 mammals. There wasn’t observed gamonts of Hepatozoon spp. on blood slides, but on PCR was observed prevalence of 5,2% (eight positive mammals). From these, was obtained four new haplotypes of Hepatozoon spp. like similar sequence of Hepatozoon canis in maned-wolf (Chrysocyon brachyurus) and hoary fox (Lycalopex vetulus) and similar sequence of Hepatozoon felis in tayra (Eira barbara) and puma (Puma concolor). For Piroplasmida agents, the CME and PCR results were 34,9% (43 positive mammlas) and 26,3% (40 positive mammals), respectively. There was obtained three new haplotypes of Piroplasmida agents, being similar sequences of Theileria cervi in brown brocket deer (Mazama gouazoubira), similar sequence of Theileria equi in brazilian tapir (Tapirus terrestris) and similar sequence of Cytauxzoon felis in ocelot (Leopardus pardalis). There was identified 432 specimnes of ticks on 30 mammals. The species were Amblyomma nodosum, A. parvum, A. ovale, A. sculptum, A. longirostre, A. dubidatum, Rhipicephalus microplus e R. sanguineus. Besides this results, other haemoparasites were observed on optic microscope, like Ehrlichia spp. in 23 mammals (18,6%) and microfilaria in two mammals of the species Coendou prehensilis (brazilian porcupine). The information gathered by this work confirms the abundance of haemoparasites that the Brazilian mammals can harbor. In addition, some species of ticks identified were determinant to infer possible ways of transmitting hemoparasites identified in mammals. The result obtained by the use of molecular diagnostic techniques (PCR and sequencement) was more accurate than the CME for identification of hemoparasites on wild mammals of this work. Dissertação (Mestrado)

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Infecções parasitárias estão entre os problemas sanitários comuns que acometem aves em todo mundo. A identificação de Cryptosporidium spp., Giardia spp. e Enterocytozoon bieneusi em aves é relevante, visto que esses animais podem agir como veiculadores dos parasitos para o ser humano, pela contaminação ambiental. O objetivo deste estudo foi determinar a positividade e caracterizar molecularmente as espécies/genótipos de Cryptosporidium spp., Giardia spp. e E. bieneusi em aves de diferentes locais das microrregiões de Uberlândia e Belo Horizonte, MG, Brasil. O DNA, extraído diretamente das fezes, foi submetido a reações de nested-PCR para amplificação de fragmentos dos genes SSU rRNA, SSU rRNA e ITS de Cryptosporidium spp., Giardia spp. e E. bieneusi, respectivamente. Das 255 amostras coletadas, 25 (9,8%) foram positivas para Cryptosporidium spp., duas (0,78%) para Giardia spp. e 27 (10,6%) para E. bieneusi. Não foi encontrada diferença estatisticamente significante na positividade dos parasitos estudados entre as aves das microrregiões de Uberlândia e Belo Horizonte. Análises de RFLP-PCR e sequenciamento identificaram C. meleagridis em três galinhas (Gallus gallus domesticus), um peru (Meleagris gallopavo) e uma codorna (Coturnix coturnix) de Uberlândia e em 11 galinhas de Belo Horizonte. C. baileyi foi observado em três galinhas e um ganso africano (Anser Cygnoides) de Uberlândia e em uma galinha e uma codorna de Belo Horizonte. Genótipo de pato foi identificado em um marreco-mandarim (Aix galericulata) de Uberlândia e infecção mista (C. meleagridis/C.baileyi) foi reportado em uma galinha de Uberlândia. A subtipagem de C. meleagridis revelou a presença de três famílias. A família IIIg foi identificada em nove isolados e compreendeu 4 subtipos, sendo dois subtipos novos e dois, anteriormente, reportados. A família IIIb foi observada em dois isolados, abrangendo dois subtipos diferentes, já relatados na literatura. A família IIIa foi encontrada em um isolado, cujo subtipo foi considerado inédito. As amostras sequenciadas para Giardia spp., de uma galinha e de um tucano (Ramphastos toco), ambos provenientes de Uberlândia, foram classificadas como Giardia duodenalis assemblage A. Para E. bieneusi, o sequenciamento identificou genótipo D em oito galinhas, uma codorna e um ganso-africano de Uberlândia e em cinco galinhas de Belo Horizonte. A amostra de uma galinha d’Angola (Numida meleagris) proveniente de Uberlândia apresentou o genótipo Tipo IV. O genótipo Peru6 foi observado em um faisão (Phasianus colchicus) e em dois Pombos-domésticos (Columba livia) de Belo Horizonte. O genótipo Peru11 foi identificado em quatro galinhas de Uberlândia e em quatro galinhas de Belo Horizonte. A presença de espécies/genótipos de Cryptosporidium spp., Giardia spp. e E. bieneusi, considerados zoonóticos, em animais desse estudo, pode gerar impacto negativo na saúde pública. Parasitic infection is among the most common health problems that affect birds worldwide. The identification of Cryptosporidium spp., Giardia spp. and Enterocytozoon bieneusi in birds is relevant because these animals can act as disseminators of these parasites to humans through environmental contamination. The aim of this research was to determine the prevalence and perform molecular characterization of Cryptosporidium spp., Giardia spp. and E. bieneusi species/genotypes in feces from several microregions of Uberlândia and Belo Horizonte, MG, Brazil. The DNA extracted directly from feces was submitted to nested-PCR analysis for amplification of fragments of the SSU rDNA of Cryptosporidium spp.and Giardia spp. and of the ITS gene of E. bieneusi. Out of 255 samples collected, 25 (9.8%) were positive for Cryptosporidium spp., two (0.78%) for Giardia spp. and 27 (10.6%) for E. bieneusi. There was no significant difference in the prevalence of parasites studied among birds from the microregions of Uberlândia and Belo Horizonte. RFLP-PCR and sequencing analysis have identified C. meleagridis in three chickens (Gallus gallus domesticus), one turkey (Meleagris gallopavo) and one quail (Coturnix coturnix) from Uberlândia and in 11 chickens from Belo Horizonte. C. baileyi was observed in three chickens and one swan goose (Anser Cygnoides) from Uberlândia and in one chicken and one quail from Belo Horizonte. The duck genotype was identified in one Mandarim duck (Aix galericulata and mixed infection (C. meleagridis/C.baileyi) was reported in one chicken from Uberlândia. C. meleagridis subtyping revealed the presence of three subtype families. The subtype Family IIIg was identified in nine isolates and comprised four distinct subtypes, two novel and two previously reported. The subtype family IIIb was observed in two isolates comprising two different subtypes that have been previously reported. The subtype Family IIIa was found in one isolate that represented a novel subtype. The sequenced samples for Giardia spp. from one chicken and one toucan (Ramphastos toco), both from Uberlândia, were classified as Giardia duodenalis assemblage A. For E. bieneusi, sequencing identified genotype D in eight chickens, one quail and one swan goose from Uberlândia and in five chickens from Belo Horizonte. The helmeted guineafowl (Numida meleagris) sample from Uberlândia presented the TypeIV genotype. Peru6 was observed in one pheasant (Phasianus colchicus) and in two pigeons (Columba livia) from Belo Horizonte. The Peru 11 genotype was identified in four chickens from Uberlândia and in four chickens from Belo Horizonte. The existence of zoonotic species/genotypes of Cryptosporidium spp., Giardia spp. and E. bieneusi in the animals of this study may have a negative impact on public health. Tese (Doutorado)