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The objective of the present work was to elaborate on a chemically defined extender, based on Tris-casein, and to evaluate its efficacy in the goat semen cryopreservation. For this purpose, three goats were used. Eight ejaculates were collected per male (n = 24). After semen collection, the ejaculates were frozen in a conventional extender (Tris-egg yolk) – control group, as well as an extender based on Tris-casein, in different concentrations (CAS1: 0.125 g/l; CAS2: 0.25 g/l; CAS3: 0.5 g/l), combined with 5% of glycerol. After dilution, 200 x 106 sperm/ml was frozen in an automated system and stored in liquid nitrogen (−196 ºC). After thawing (37 ºC, 30 s), the samples were submitted to kinetic analysis (CASA) and functional analysis, through plasma membrane integrity, acrosome integrity and mitochondrial membrane potential. Regarding the kinetic parameters, plasma membrane integrity, acrosome integrity and mitochondrial membrane potential, there were no significant differences (P > 0.05) between the groups evaluated, with the exception of flagellar beat cross frequency (BCF), where the CAS3 group had a higher value (P ≤ 0.05) than the control group. It can be concluded that the chemically defined extender based on Tris-casein presents a viable alternative to the conventional diluent used for freezing goat semen. El objetivo del presente trabajo fue elaborar un diluyente químicamente definido, a base de Tris-caseína, y evaluar su eficacia en el processo de criopreservación de semen caprino. Para este propósito, se utilizaron tres chivos. Se recogieron ocho eyaculados por macho (n = 24). Luego de la recolección del semen, los eyaculados fueron congelados en un diluyente convencional (Tris-yema de huevo) – grupo control, así como un diluyente a base de Tris-caseína, en diferentes concentraciones (CAS1: 0.125 g/L; CAS2: 0.25 g/L CAS3: 0,5 g/L), combinado con 5% de glicerol. Después de la dilución, se congelaron 200 x 106 espermatozoides/mL en un sistema automatizado y se almacenaron en nitrógeno líquido (−196 ºC). Después de la descongelación (37 ºC, 30 s), las muestras se sometieron a análisis cinético (CASA), integridad de la membrana plasmática, integridad del acrosoma y potencial de la membrana mitocondrial. En cuanto a los parámetros cinéticos, integridad de la membrana plasmática, integridad del acrosoma y potencial de la membrana mitocondrial, no hubo diferencias significativas (P > 0,05) entre los grupos evaluados, con excepción de la frecuencia de cruce de latidos flagelares (FBC), donde el grupo CAS3 tuvo una mayor valor (P ≤ 0,05) que el grupo de control. Se puede concluir que el diluyente químicamente definido basado en Tris-caseína presenta una alternativa viable al diluyente convencional utilizado para congelar semen caprino. O objetivo do presente trabalho foi elaborar um diluente quimicamente definido, à base de Tris-caseína, e avaliar sua eficácia no processo de criopreservação de sêmen caprino. Para isso, foram utilizados três caprinos. Oito ejaculados foram coletados por macho (n = 24). Após a coleta do sêmen, os ejaculados foram congelados em diluente convencional (Tris-gema de ovo) – grupo controle, bem como em diluente à base de Tris-caseína, em diferentes concentrações (CAS1: 0,125 g/l; CAS2: 0,25 g/l ; CAS3: 0,5 g/l), combinado com 5% de glicerol. Após a diluição, 200 x 106 espermatozoides/ml foram congelados em sistema automatizado e armazenados em nitrogênio líquido (-196 ºC). Após o descongelamento (37 ºC, 30 s), as amostras foram submetidas à análise cinética (CASA), integridade de membrana plasmática, integridade de acrossoma e potencial de membrana mitocondrial. Em relação aos parâmetros cinéticos, integridade de membrana plasmática, integridade de acrossoma e potencial de membrana mitocondrial, não houve diferenças significativas (P > 0,05) entre os grupos avaliados, com exceção da frequência de batimento flagelar cruzado (BCF), onde o grupo CAS3 apresentou maior valor (P ≤ 0,05) do que o grupo controle. Pode-se concluir que o diluente quimicamente definido à base de Tris-caseína apresenta uma alternativa viável ao diluente convencional utilizado para congelamento de sêmen caprino.

A criopreservação de gametas é uma das ferramentas mais promissoras para a preservação de material genético, útil tanto na conservação de espécies ameaçadas de extinção quanto de interesse econômico e agropecuário. Embora a criopreservação de sêmen de peixes já esteja consolidada, são restritos os relativos sucessos na criopreservação de gametas femininos de peixes. Muitos são os problemas acarretados pela não perda de material genético materno tais como, redução na variabilidade genética, perda do material genético mitocondrial e RNAs mensageiros indispensáveis para o desenvolvimento inicial do embrião. Há muitas décadas, pesquisadores tentam encontrar o equilíbrio necessário entre as substâncias utilizadas como crioprotetores e a técnica adequada de resfriamento e aquecimento. No entanto, mesmo com as diversas variações experimentadas, os problemas ainda parecem ser os mesmos: injúrias celulares causadas pela variação de temperatura, estresse osmótico e o alto grau de citotoxicidade dos crioprotetores, além de problemas reportados mais recentemente como a mutagênese, fragmentação de DNA e cromossomos. Alguns criobiologistas e cientistas de áreas afins pesquisam novas alternativas e diferentes conceitos e etapas da criopreservação que vão desde a intensificação das curvas de resfriamento e aquecimento, quanto a busca por novas soluções crioprotetoras que de fato protejam as células. Nesse contexto, o objetivo desse estudo foi avaliar a capacidade crioprotetora do Alginato de Sódio. Trata-se de um polissacarídeo natural extraído de algas marrons, e foi escolhido com agente crioprotetor não permeável por possuir a capacidade de absorver e reter líquidos além de ser uma substância atóxica. Pela primeira vez utilizado na criopreservação de tecido ovariano de peixes, utilizamos o zebrafish como modelo animal. Além disso, avaliamos o potencial comportamento crioprotetor do Alginato de Sódio tanto isoladamente como crioprotetor, quanto em combinações com outros agentes crioprotetores convencionas como o C2H6OS (DMSO), propilenoglicol, metanol e sacarose. E os resultados obtidos com a utilização do Alginato de Sódio foram surpreendentes, dado que houve resultados positivos para a criopreservação de folículos em estágios I e II, além de ocorrências, mesmo que isoladas, de oócitos em elevado grau de maturação, sem alterações morfológicas. Embora haja a necessidade de estudos massivos acerca dessa biomolécula na criobiologia, o conteúdo deste estudo sugere que o uso do Alginato de Sódio pode ser uma escolha saudável de agente crioprotetor não permeável, além de torná-lo objeto de pesquisa na área. Gamete cryopreservation is one of the most promising tools for preserving genetic material, useful both for the conservation of endangered species and for economic and agricultural interest. Although the cryopreservation of fish semen is already consolidated, relative successes in the cryopreservation of female fish gametes are restricted. There are many problems caused by the non-loss of maternal genetic material such as, reduction in genetic variability, loss of mitochondrial genetic material and mRNAs indispensable for the initial development of the embryo. For many decades, researchers have tried to find the necessary balance between the substances used as cryoprotectants and the appropriate cooling and heating technique. However, even with several variations experienced, the problems still seem to be the same, cell injuries caused by temperature variation, osmotic stress and the high level of cryoprotectants cytotoxicity, in addition to other problems that new studies discover with each new result, such as example mutagen, fragmentation of DNA and chromosomes. Some cryobiologists and scientists from related fields are researching new alternatives and different concepts and stages of cryopreservation process, ranging from intensifying the cooling and heating curves, to the search for new cryoprotective solutions that actually protect cells. In this context, the aim of this study was to evaluate the cryoprotective capacity of sodium alginate. Because it is one natural polysaccharide extracted from brown algae, and was chosen as a non- permeable cryoprotective agent because it has the ability to absorb and retain liquids in addition to being a non-toxic substance. For the first time used in the cryopreservation in fish ovarian tissue, we used zebrafish as an animal model. In addition, we evaluated the potential cryoprotective behavior of sodium alginate both alone and with cryoprotectant, and in combinations with other conventional cryoprotectants such as C2H6OS (DMSO), propylene glycol, methanol and sucrose. And the results obtained with the use of sodium alginate were surprising, given that there were positive results for the cryopreservation of follicles in stages I and II, in addition to occurrences even if isolated from oocytes in a high degree of maturation, without morphological changes. Although there is a need for massive studies about this biomolecule in cryobiology, the content of this study suggests that the use of sodium alginate may be a healthy choice of non-permeable cryoprotective agent, in addition to making it an object of research in this area.

O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - Brasil (CAPES) - C?digo de Financiamento 001. Submitted by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2020-03-24T15:33:40Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) livia_alves_barroso.pdf: 1880053 bytes, checksum: 14172e49e63ce3d603b19d4551e23874 (MD5) Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2020-03-24T15:33:55Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) livia_alves_barroso.pdf: 1880053 bytes, checksum: 14172e49e63ce3d603b19d4551e23874 (MD5) Made available in DSpace on 2020-03-24T15:33:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) livia_alves_barroso.pdf: 1880053 bytes, checksum: 14172e49e63ce3d603b19d4551e23874 (MD5) Previous issue date: 2020 Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) Funda??o de Amparo ? Pesquisa do Estado de Minas Gerais (FAPEMIG) A extra??o a frio ? um m?todo que pode ser aplicado ao caf? sem o uso de altas temperaturas e, assim, consegue preservar os compostos vol?teis do caf?. Entretanto, esse n?o ? o m?todo padr?o para a extra??o do caf? e, portanto, ? necess?rio um processo de otimiza??o das condi??es de processo. Neste estudo, os par?metros para obten??o do caf? extra?do a frio (Coffea arabica), foram otimizados para obter um extrato de caf? rico em cafe?na e s?lidos sol?veis. A otimiza??o dos par?metros do processo foram realizadas utilizando a Metodologia de Superf?cie de Resposta atrav?s de um Delineamento Compostos Central Rotacional. Foram estudados os efeitos do tempo de extra??o, tamanho de part?cula do gr?o de caf?, temperatura de extra??o, raz?o caf?/?gua, agita??o para a concentra??o de cafe?na, s?lidos sol?veis e o rendimento sobre a concentra??o de cafe?na. De acordo com os resultados obtidos neste trabalho foi poss?vel verificar uma redu??o no tempo de extra??o a frio convencional, exigindo apenas 45 minutos para realiza??o da extra??o a frio, resultados diferentes de estudos anteriores que exigiram pelo menos 6 horas de processo. Os resultados obtidos no extrato otimizado demonstraram que a temperatura de extra??o entre 4 ?C e 24 ?C n?o apresentou diferen?a significativa (p

Sweet bread is associated with smooth texture and high carbohydrate content, tasty and filling - quality that makes it preferred for snack. The key is in formulating raw material and other components. Commonly, sweet bread has short shelf life. Frozen dough could be the solution to this problem, and glucomannan addition during freezing process should be able to improve its physicochemical characteristics. This research aims to determine the effect of adding modified arrowroot (Maranta arundinacea L.) starch (MAS) as substitution, and glucomannan as frozen dough cryoprotectant toward sweet bread’s physicochemical. Randomized Complete Block Design Factorial (RCBD) was applied, and two factors were studied. The first factor was modified arrowroot starch (0.00%, 3.75%, and 7.50%) and the second was glucomannan (0.0%, 0.5%, and 1.0%). The best result was combination between MAS 3.75% and glucomannan 0.5%, reaching dough expansion volume range of 50% to 60%, bread expansion volume range of 77% to 80%, hardness range of 2 N mm-2 to 3 N mm-2, elasticity range of 88% to 96%, moisture content of 16% to 19%, ash content of 1.4% to 1.7%, fat content of 10% to 15%, protein content of 5%, and carbohydrate content of 51% to 66%. MAS is able to substitute wheat flour in bread production only if it is combined with glucomannan. RESUMO O pão doce é caracterizado por apresentar textura macia, alto teor de carboidratos, sabor e recheio agradáveis que o tornam preferido para lanches rápidos. A chave está nas matérias-primas e outros componentes usados na sua formulação. No entanto, o pão doce possui vida de prateleira curta. O congelamento da massa pode ser usado para solucionar esse problema e a adição de glucomanano durante o congelamento pode melhorar suas características físico-químicas. O objetivo dessa pesquisa foi determinar o efeito do uso de amido modificado de araruta (Maranta arundinacea L.) como substituição e glucomanano como crioprotetor das propriedades físico-químicas da massa congelada de pão doce. O delineamento experimental em blocos inteiramente casualizados foi usado em esquema fatorial com dois fatores. O primeiro fator foi a adição do amido modificado de araruta em três níveis (0,00%, 3,75% e 7,50%) e o segundo fator foi o glucomanano em três níveis (0,0%, 0,5% e 1,0%). O melhor resultado foi a combinação de MAS 3,75% e glucomanano 0,5%, atingindo volume de expansão da massa de 50% a 60%, volume de expansão do pão de 77% a 80%, faixa de dureza 2 N mm-2 a 3 N mm-2, faixa de elasticidade de 88% a 96%, teor de água de 16% a 19%, teor de cinzas de 1,4% a 1,7%, teor de gordura de 10% a 15%, teor de proteínas 5% e teor de carboidratos 51% a 66%. MAS é capaz de substituir a farinha de trigo na produção de pão apenas se for combinada com glucomanano.

The objective of this study was to evaluate the vitrification of bovine preantral follicles with dimethylsulfoxide (D) and sucrose (S) plus α-tocopherol 5mmol/L (T5) or 10mmol/L (T10) and, evaluate the thawed with minimal essential medium (m) with or without sucrose (s). Ovaries of cows were collected from slaughterhouse for the experiment I (n=66) and II (n=51). In the laboratory ovarian fragments were randomly assigned either to fresh control and 8 vitrification treatments (Controle and Dm; Dms, DSm; DSms; DST5m; DST5ms; DST10m; DST10ms). Ovarian fragments were placed in vitrification solution (5 min) and immersed in liquid nitrogen (-196°C), after a week, the fragments were thawed and analyzed. In the experiments I, preantral follicles were morphologically observed for histological evaluation, (normal; degenerated and developing of stage). In the experiment II, preantral follicles were mechanically isolated from ovarian tissue and examined with trypan blue, where dead and live corresponded to stained or non-stained. The treatments DSm, DSms and DST10m were effective in preserving the morphology in situ. However, the viability of isolated preantral follicles after vitrification remained high only in treatment DST10m. Thus, DST10m preserves survival rates and morphological integrity during vitrification of bovine preantral follicles. Resumo: Os objetivos deste estudo foram avaliar a vitrificação de folículos pré-antrais bovinos com dimetilsulfóxido (D) e sacarose (S) adicionando α-tocoferol 5mmol/L (T5) ou 10mmol/L (T10) e, avaliar o aquecimento com meio essencial mínimo (m) com ou sem sacarose (s). Ovários de fêmeas bovinas foram coletados de abatedouro, para o experimento I (n= 66) e II (n= 51). No laboratório fragmentos ovarianos foram distribuídos aleatoriamente para o controle fresco e 8 tratamentos de vitrificação (Controle e Dm; Dms, a DSm; DSms; DST5m; DST5ms; DST10m; DST10ms). Os fragmentos ovarianos foram colocados na solução de vitrificação (5 min) e imersos em nitrogênio líquido (-196°C). Após uma semana os fragmentos foram aquecidos e analisados. No experimento I, folículos pré-antrais foram observados morfologicamente para avaliação histológica (normal, degenerados e estádio de desenvolvimento). No experimento II, folículos pré-antrais foram mecanicamente isolados do tecido ovariano e examinados com o azul de trypan, observando mortos e vivos corados e não corados respetivamente. Os tratamentos a DSm, DSms e DST10m foram eficazes na preservação da morfologia in situ. No entanto, a viabilidade de folículos pré-antrais isolados após a vitrificação manteve-se elevada apenas no tratamento DST10m. Assim, DST10m preservou as taxas de sobrevivência e integridade morfológica durante a vitrificação de folículos pré-antrais bovinos.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Natural yeast (sourdough) is a mixture composed of wheat flour and water being fermented by the action of lactic acid bacteria (LAB) and yeasts, used to make some bakery products, such as panettone. Panettone is a product typically marketed in the Christmas period and has a long shelf life, in part due to the pH characteristics and the type of fermentation to which the dough is subjected. The microorganisms involved in the natural fermentation are diverse, with predominant microbiota composed of yeasts and lactic acid bacteria. During their multiplication, these microorganisms produce metabolites able to imprint peculiar sensorial characteristics to the products, as well as to modify physical-chemical characteristics and of stability to the fungal deterioration. The identification of these microorganisms is fundamental to enable studies of interaction between microbial communities, and their isolation and conservation are fundamental for their industrial use as starter yeasts. This doctoral thesis aimed to evaluate the influence of a sourdough composed of lactic acid bacteria and yeasts on the microbiological stability of panettones, aiming to increase the shelf life without the addition of chemical preservatives. To that end, initially the predominant microorganisms in the raw materials (refined wheat flour, wholewheat flour) and sourdough were isolated in the media from Man, Rogosa and Sharpe (MRS) and Sabourand Dextrose Agar (SDA) and were identified through sequencing. Subsequently, some species of microorganisms were selected, based on scientific literature, to evaluate their potential for use in the elaboration of panettones. One of the constraints for large-scale use of these microorganisms is the maintenance of their viability and characteristics over time. Thus, studies were conducted by freeze-drying some isolated microorganisms with different cryoprotectants (sucrose, trehalose, skim milk and sodium glutamate) and evaluated their viability throughout the storage at room temperature. Finally, different formulations were prepared and panettones were elaborated with these freeze-dried microorganisms, which were characterized physicochemistry (instrumental firmness, specific volume, color, moisture, water activity, pH and titratable total acidity), sensorial (check- all-that-apply - CATA, acceptability and purchase intent) and microbiologically (enumeration of molds and yeasts). The predominant microorganisms recovered and identified from the raw materials and freeze-dried sourdough were Saccharomyces cerevisiae, Wickerhamomyces anomalus (Syn. Pichia anomala), Pediococcus pentosaceus, Lactobacillus plantarum and Lactobacillus fermentum. The addition of trehalose promoted a cryoprotective effect on the microorganisms and was more significant for the yeasts. Trehalose provided satisfactory viability rates only for W. anomalus during one year of storage at room temperature. On the other hand, the solutions with 10% of skimmed milk plus 5% of sodium glutamate maintained the highest indexes of cellular stability for Lb. fermentum and W. anomalus during the storage period. The preparation of panettones from selected strains and without artificial preservatives proved to be a more natural and promising alternative in view of the fact that it was well accepted in the sensory field. The panettone made with 50% Lb. fermentum and 50% of W. anomalus presented the best physico-chemical and microbiological characteristics. By the CATA test it was possible to observe a clear distinction between the panettones elaborated with sourdough of those made with commercial yeast. The artisanal panettones proved to be very competitive in comparison to the control and commercial panettones showing more soft throughout the useful shelf life. The commercial panettone showed higher marks in the acceptance test, however it remained stable for only 30 days. Panettones made with sourdough, although presenting conditions susceptible to fungal growth, such as high water activity, did not mold until the 126 days of storage. The use of Lb. fermentum IAL 4541 and W. anomalus IAL 4533 as starters in the production of panettones without artificial preservatives can be considered a promising technological alternative that meets the strong demand of consumers for more natural products. O fermento natural (sourdough) é uma mistura composta por farinha de trigo e água sendo fermentada pela ação de bactérias ácido láticas (BAL) e leveduras, utilizado para elaboração de alguns produtos de panificação, como o panetone. O panetone é um produto tipicamente comercializado no período natalino e apresenta uma longa vida útil, em parte devido às características de pH e tipo de fermentação à que a massa é submetida. Os microorganismos envolvidos na fermentação natural são diversos, com microbiota predominante composta por leveduras e bactérias ácido láticas. Durante sua multiplicação, estes microorganismos produzem metabólitos capazes de imprimir características sensoriais peculiares aos produtos, bem como modificar características físico-químicas e de estabilidade à deterioração fúngica. A identificação destes micro-organismos é fundamental para possibilitar estudos de interação entre as comunidades microbianas, e seu isolamento e conservação são fundamentais para utilização industrial dos mesmos como fermentos iniciadores. Esta tese de doutorado objetivou avaliar a influência de um sourdough composto por bactérias ácido láticas e leveduras na estabilidade microbiológica de panetones, visando o aumento da vida útil sem a adição de conservantes químicos. Para tanto, inicialmente os micro-organimsmos predominantes nas matérias-primas (farinha de trigo refinada, farinha de trigo integral) e sourdough foram isolados nos meios de Man, Rogosa e Sharpe (MRS) e Sabourand Dextrose Agar (DAS) e foram identificados através de sequenciamento molecular. Posteriormente, algumas espécies micro-organismos foram selecionadas, com base em literatura científica, para avaliação de seu potencial para uso na elaboração de panetones. Um dos limitantes para uso em larga escala destes micro-organismos é a manutenção de sua viabilidade e características ao longo do tempo. Assim, foram conduzidos estudos liofilizando-se alguns micro-organismos isolados com diferentes agentes crioprotetores (sacarose, trealose, leite desnatado e glutamamto de sódio) e avaliou-se sua viabilidade ao longo da estocagem em temperatura ambiente. Por fim foram testadas diferentes formulações e foram elaborados panetones com estes micro-organismos liofilizados, os quais foram caracterizados físicoquímica (firmeza instrumental, volume específico, cor, umidade, atividade de água, pH e acidez total titulável), sensorial (check-all-that-apply - CATA, aceitabilidade e intenção de compra) e microbiologicamente (enumeração de bolores e leveduras). Os micro-organismos predominantes recuperados e identificados a partir das matérias primas e do sourdough liofilizado foram Saccharomyces cerevisiae, Wickerhamomyces anomalus (Syn. Pichia anomala), Pediococcus pentosaceus, Lactobacillus plantarum e Lactobacillus fermentum. A adição de trealose promoveu um efeito crioprotetor nos micro-organismos e foi mais significativa para as leveduras. Trehalose proporciou taxas de viabilidade satisfatórias apenas para W. anomalus durante um ano de armazenamento a temperatura ambiente. Já as soluções com 10% de leite desnatado mais 5% de glutamato de sódio mantiveram os maiores índices de estabilidade celular para Lb. fermentum e W. anomalus durante o período de armazenamento. O preparo de panetones a partir de cepas selecionadas e sem conservantes artificiais, mostrou-se como uma alternativa mais natural e promissora tendo em vista que foi bem aceito sensorialmente. O panetone elaborado com 50% de Lb. fermentum e 50% de W. anomalus foi o que apresentou as melhores características físico-químicas e microbiológicas. Pelo teste CATA foi possível observar uma clara distinção entre os panetones elaborados com sourdough dos elaborados com fermento comercial. Os panetones artesanais mostraram-se bastante competitivos frente aos panetones controle e comercial mostrando-se mais macios durante todo o período de vida útil. O panetone comercial apresentou notas mais altas no teste de aceitação, no entanto manteve-se estável por apenas 30 dias. Os panetones elaborados com sourdough embora apresentassem condições suscetíveis ao crescimento fúngico, como a alta atividade de água, não mofaram até os 126 dias de armazenamento. A utilização de Lb. fermentum IAL 4541 e W. anomalus IAL 4533 como starters na produção de panetones sem conservantes artificiais pode ser considerada uma alternativa tecnológica promissora e que atende à forte demanda de consumidores por produtos mais naturais.

Genipa americana (jenipapeiro) é uma essência florestal pertencente à família Rubiaceae, que apresenta importância econômica e ambiental, sendo valorizada para produção de alimentos, na recuperação de áreas degradadas, na composição em áreas de preservação permanentes e em sistemas agroflorestais. Objetivou-se avaliar o efeito de diferentes tempos de desidratação em câmara de fluxo laminar e tempos de imersão em solução crioprotetora (MS+0,5M de sacarose) na capacidade regenerativa de ápices caulinares da espécie para estabelecimento de futuros protocolos de criopreservação. Os ápices caulinares foram obtidos de plântulas, acesso Oiteiros, germinadas e cultivadas in vitro. Os explantes foram submetidos ao encapsulamento e a diferentes tempos de imersão em solução crioprotetora e tempos de desidratação em câmara de fluxo laminar. A crioproteção e a desidratação não alteram a viabilidade dos ápices caulinares de jenipapeiro encapsulados ou não encapsulados. A imersão por 24 horas em solução crioprotetora e a desidratação em câmara de fluxo laminar por 2 horas apresentam potencial para uso em futuros trabalhos de criopreservação por encapsulamento-desidratação. Genipa americana (genipap) is a forest species belonging to the Rubiaceae family that has economic and environmental importance, being valued for food production, recuperation of degraded areas, in the composition in areas of permanent preservation and agroforestry. The objective of this research was to evaluate the effect of different times of dehydration in laminar flow cab and immersion time in cryoprotecting solution (MS+0.5M sucrose) on the regenerative capacity of shoot apices for establishing future cryopreservation protocols. The shoot apices were obtained from seedlings, of Oiteiros accession, germinated and cultured in vitro. Explants were subjected to encapsulation and different exposure times in cryoprotecting solution and dehydration in a laminar flow cab. The cryoprotection and dehydration does not modify the viability of the shoot apices of genipap encapsulated or unencapsulated. Immersion for 24 hours in cryoprotecting solution and the dehydration in a laminar flow cab by 2 hours have potential for use in future studies of cryopreservation by encapsulation-dehydration.

This study aimed to evaluate the extract of Aloe vera (AV) associated or not with 10% Dimethylsulfoxide (DMSO) in cryopreservation of tambaqui semen. For the formation of the pools (n= 14), 30 males were hormonally induced twice. Each pool had the objective motility, curvilinear velocity, straight-line velocity, average path velocity and morphology analyzed before and after cryopreservation of semen. The means for cryopreservation were constituted of Powder Coconut Water-104 diluent added DMSO and/or AV (5 or 10%). After cryopreservation, motility, velocities and morphology were reduced significantly when compared to fresh semen. For sperm motility the best treatment was that using only DMSO (20,86±8,31) and DMSO + 5% AV (15.71±9.77). For the velocities, the worse treatment was DMSO+10% AV. Treatment with only the addition of DMSO had a significantly higher effect than others on percentage of morphologically normal sperm. The mean correlation found was between motilityand the rate of morphologically normal sperm (r = 0.687). In conclusion, the addition of AV does not provide greater protection for spermatozoa during cryopreservation.

Submitted by Beatrice Ingrid Macente null (beatrice.vetuel@yahoo.com.br) on 2017-12-13T17:24:54Z No. of bitstreams: 1 Tese de doutorado - FINAL.pdf: 1497835 bytes, checksum: ec09acb806dd08292a1d4ec818d596e7 (MD5) Approved for entry into archive by Karina Gimenes Fernandes null (karinagi@fcav.unesp.br) on 2017-12-13T18:29:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 macente_bi_dr_jabo.pdf: 1454157 bytes, checksum: 970c2725b03ed803688cfef9261d801c (MD5) Made available in DSpace on 2017-12-13T18:29:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 macente_bi_dr_jabo.pdf: 1454157 bytes, checksum: 970c2725b03ed803688cfef9261d801c (MD5) Previous issue date: 2017-11-06 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Esta pesquisa teve por justificativa ampliar os estudos acerca da criopreservação de tecido gonadal e células espermáticas de gatos domésticos, podendo servir de modelo experimental para felinos selvagens. Objetivou-se comparar os efeitos da criopreservação sobre diferentes tamanhos de fragmentos testiculares, empregando dois crioprotetores. Utilizaram-se os testículos de 31 gatos domésticos, submetidos à orquiectomia eletiva. Os testículos foram pesados e apenas os que apresentarem pesos entre 1 e 2 g foram empregados. O tecido testicular foi dissecado e cortado em fragmentos de tamanhos pré-determinados (0,3cm3 e 0,5cm3). Uma amostra foi direcionada para as avaliações a fresco: integridade de membrana e do DNA; histopatologia; incidência de apoptoses por imuno-histoquímica; e índice de peroxidação lipídica - TBARS. A criopreservação foi feita em meio Tris-gema Equex STM suplementado com 3% de crioprotetores (glicerol e propanediol) através da técnica congelação rápida. Após a descongelação, foram realizados os mesmos testes iniciais. Os primeiros resultados obtidos com os 12 gatos iniciais apontaram na avaliação histomorfológica e pelo teste de lipoperoxidação lipídica que o glicerol foi mais eficiente que o propanediol na criopreservação de fragmentos testiculares de gatos domésticos de 0,5cm3 (Capítulo 2). No experimento seguinte, avaliaram-se os fragmentos testiculares de outros 31 gatos domésticos, seccionados nos mesmos tamanhos e criopreservados nas mesmas condições do experimento anterior, empregando-se 3% glicerol ou 3% propanediol no meio diluente Tris-gema Equex STM, utilizando a técnica de congelamento rápido, seguindo das avaliações pelos testes para dano ao DNA dos espermatozoides por meio da acridina laranja; e análise dos fragmentos teciduais semi-quantitativamente por histomorfologia e imuno-histoquímica. A avaliação imuno-histoquímica foi mais eficiente em verificar os danos às células tubulares seminíferas, sendo possível observar a marcação diferenciada da caspase presente no citoplasma e núcleo das células espermáticas, bem como na cabeça dos espermatozoides. Por meio da caspase foram verificado que os fragmentos frescos já apresentavam danos consideráveis as células teciduais e que não diferiram dos achados para os fragmentos criopreservados, demonstrando a eficiência do protocolo de congelação adotado, sem a observação de superioridade entre os dois tamanhos de fragmentos ou entre os crioprotetores. Contudo, a avaliação apenas do espermatozoides tanto pela técnica de acridina laranja, como pela imuno-histoquímica, pode-se verificar a inferioridade do propanediol em relação ao glicerol para fragmentos de 0,5 cm³ (Capítulo 3). Novas pesquisas que possam complementar os testes realizados neste estudo, como o cultivo dos fragmentos, a fertilização in vitro por meio de ICSI, ou ainda, o uso dos fragmentos para xenotrasnplantes poderiam avaliar com maior acurácia os achados das pesquisas reportadas nesta tese. This research had the justification to broaden the studies about the cryopreservation of gonadal tissue and sperm cells of domestic cats, and could serve as an experimental model for wild cats. The objective of this study was to compare the effects of cryopreservation on different sizes of testicular fragments using two cryoprotectants. The testicles of 31 domestic cats submitted to elective orchiectomy were used. The testes were weighed and only those weighing between 1 and 2 g were used. The testicular tissue was dissected and cut into fragments of predetermined sizes (0.3cm3 and 0.5cm3). A sample was directed to fresh evaluations: membrane integrity and DNA; histopathology; incidence of apoptosis by immunohistochemistry; and lipid peroxidation index - TBARS. Cryopreservation was done on Tris-egg yolk Equex STM medium supplemented with 3% cryoprotectants (glycerol and propanediol) by the rapid freezing technique. After thawing, the same initial tests were performed. The first results obtained with the 12 initial cats showed that glycerol was more efficient than propanediol in the cryopreservation of testicular fragments of domestic cats of 0.5 cm3 (Chapter 2). In the following experiment, the testicular fragments from 31 other domestic cats, sectioned in the same sizes and cryopreserved under the same conditions as in the previous experiment, were evaluated using 3% glycerol or 3% propanediol in the Tris- egg yolk Equex STM medium, using rapid freezing technique, followed by evaluations for DNA damage of the spermatozoa by acridine orange; and analysis of the tissue fragments semi-quantitatively by histomorphology and immunohistochemistry. The immunohistochemical evaluation was more efficient in verifying the damage to the seminiferous tubular cells, being possible to observe the differentiated marking of the caspase present in the cytoplasm and nucleus of the sperm cells, as well as in the spermatozoa head. By caspase, it was verified that the fresh fragments already presented considerable damage to the tissue cells and did not differ from the findings for the cryopreserved fragments, demonstrating the efficiency of the adopted freezing protocol, without the observation of superiority between the two sizes of fragments or between the cryoprotectants. However, the evaluation of spermatozoa by both acridine orange and immunohistochemistry, the inferiority of propanediol to glycerol can be verified for fragments of 0.5 cm³ (Chapter 3). New research that could complement the tests performed in this study, such as the culture of fragments, in vitro fertilization using ICSI, or the use of fragments for xenotransplantation could more accurately assess the findings of the research reported in this thesis.

Embora o congelamento apresente vantagens em relação a outros métodos de conservação de alimentos, o mesmo causa alterações sensoriais, principalmente em produtos de origem vegetal. O morango, uma fruta muito apreciada e com formas variadas de consumo, tem comportamento sazonal e apresenta como fator limitante para o congelamento sua estrutura frágil e sensível ao processo, o que causa alterações sensoriais. Tais alterações podem ser minimizadas com a incorporação de crioprotetores, como a trealose, um dissacarídeo que vem se destacando pelo seu efeito crioprotetor em produtos congelados e desidratados. O principal objetivo deste trabalho foi verificar o efeito crioprotetor da trealose incorporada através da impregnação a vácuo em soluções de diferentes concentrações (100, 300 e 500 g/L) em morangos submetidos ao congelamento e descongelamento. As condições de impregnação foram de 5 min, aplicando pressão de -650 mmHg e 10 min de tempo de relaxamento. As alterações provocadas pelo processo de impregnação bem como a verificação do efeito crioprotetor da trealose foram identificadas através de análise de cromatografia líquida de alta eficiência (High Performance Liquid Chromatography- HPLC), análise colorimétrica, análise de textura, determinação do teor de sólidos solúveis, determinação do teor de umidade e perda de massa (perda por gotejamento). Os resultados mostraram que a concentração da solução de trealose exerce influência significativa no teor de umidade, teor de sólidos solúveis e teor de trealose. As amostras tratadas com soluções mais concentradas não sofreram desidratação após descongelamento. O teor de trealose, após descongelamento, permaneceu constante em todas as amostras tratadas. Todas as amostras tiveram a mesma perda de massa após descongelamento (perda por gotejamento), porém a composição da massa diferiu entre elas. Amostras tratadas com a solução mais concentrada perderam sólidos enquanto que as amostras tratadas com a menos concentrada, perderam água. Na análise de textura, a introdução da trealose não influenciou a força máxima de pico nas amostras impregnadas. Após descongelamento, todas as amostras, exceto a tradada com solução de 500 g/L, sofreram amolecimento. A parte externa dos morangos não sofreu alterações de cor devido à introdução da trealose nem devido ao congelamento e descongelamento. Na parte interna dos frutos, ocorreram variações no parâmetro L* devido à impregnação e no parâmetro b*, devido ao congelamento e descongelamento. Although freezing offers advantages to others food conservations process, it causes sensorial changes, mostly in vegetables products. The strawberry, a quite appreciated fruit, shows different ways of use, has seasonal behavior and is limited to freezing due the sensorial changes caused by its fragile structure to freezing process. These sensorial changes can be minimized by the incorporation of cryoprotectors, as trehalose, that is known by its cryoprotector effect during freezing and dehydration. The aim of this work was to verify the trehalose cryoprotector effect in frozen and thawed strawberries introduced by vacuum impregnation with different solutions (100, 300 and 500 g/L). The impregnation conditions were 5 min of applying pressure of -650 mmHg and after atmospheric pressure was restored, the sample was maintained within the solution for 10 min (these conditions were obtained from previous experiments). The alterations caused by the vacuum impregnation and the verification of the cryoprotector effect of trehalose were identified by High Performance Liquid Chromatography (HPLC), color analysis, texture analysis, soluble solids content, moisture content and drip loss. The results have shown that concentration of the trehalose solution had a significant influence on the moisture content, soluble solids and trehalose content of impregnated strawberries. The samples treated with more concentration solutions did not dehydrated after thawing. The trehalose content was the same in all treated samples after thawing. All the samples showed the same drip loss due to thawing although the composition of the mass was different among the samples. Samples treated with the most concentration solution lost trehalose while the sample treated with the least concentration solutions lost water. The introduction of trehalose did not affect the maximum peak force of the impregnated samples. The freezing and the thawing process caused the softening of the samples. This effect was not observed on the sample treated with solution of 500 g/L. The introduction of trehalose did not cause significant differences in all color parameters measured on the outside of the strawberries after impregnation and thawing. In the inside of the samples, there were variation in the L* parameter caused by the vacuum impregnations and in the b* parameter caused by the freezing and thawing process.

Submitted by Socorro Pontes (socorrop@ufersa.edu.br) on 2017-03-22T14:51:38Z No. of bitstreams: 1 AlanaAB_DISSERT.pdf: 4740716 bytes, checksum: e3666ea7a25906742164df387e99208b (MD5) Made available in DSpace on 2017-03-22T14:51:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AlanaAB_DISSERT.pdf: 4740716 bytes, checksum: e3666ea7a25906742164df387e99208b (MD5) Previous issue date: 2016-11-01 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior The cryopreservation of somatic tissue derived from collared peccaries represents an interesting step in the obtainment and conservation of cells for nuclear transfer (cloning). In this sense, tissue vitrification protocols need to be optimized to ensure maximum preservation of viable cell characteristics. Therefore, the aims of this study were to characterize histologically the peripheral auricular integumentary system (Stage 1) and evaluate different cryoprotectants in the solid-surface vitrification of somatic tissue of collared peccaries (Stage 2). Thun, ear fragments (9.0 mm3) were collected of sixteen animals derived from the Multiplication Center of Wild Animals (CEMAS/UFERSA). In the first stage, tissue samples were evaluated for the characterization of layers, its components and proliferative activity. For the second stage, tissue fragments were cryopreserved by solidsurface vitrification using Dulbecco modified minimum essential medium supplemented with 10% fetal bovine serum and different cryoprotectants and concentrations [dimethylsulfoxide (DMSO, 3.0 M), ethylene glycol (EG; 3.0 M) and association DMSO/EG (1.5 M; 1.5 M) in the absence and presence of sucrose (0.25M)]. After two weeks, warmed and non-vitrified (control) fragments were analyzed using histological techniques. Thus, for both steps, tissue samples were evaluated using hematoxylin-eosin and Gomori Trichrome, quantification of regions argyrophilic nucleolar organizer (AgNORs) and viability by MTT assay (3-[4,5- dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide). Also, in the first stage, fragments were analyzed by transmission electronic microscopy. Thus, in the first stage, sizes of 104.2 μm and 222.6 μm were observed in the epidermis and dermis, with a volumetric ratio of 36.6% and 58.7%, respectively. Moreover, in the epidermis were evidenced the basal layer (22.5 μm), intermediate (53.5 μm) and cornea (28.2 μm), with mean values of 65.3 epithelial cells, 43.4 melanocytes and 14.8 perinuclear halos. Already the dermis has 127 fibroblasts with 2.5 AgNORs by nucleolus. Additionally, the metabolic activity was 0.243. In the second stage, the 3.0 M EG with sucrose was able to maintain normal tissue characteristics compared with non-vitrified (control), especially for the volumetric ratio of epidermis (61.2 vs. 58.7) and dermis (34.5 vs. 36.6), number of fibroblast (90.3 vs. 127.0), and AgNOR ratio (0.09 vs. 0.17), respectively. In conclusion, the peripheral auricular integumentary system derived from collared peccaries possessed some variations compared to other mammals, as the number of layers and thickness of the epidermis, number of epithelial cells, melanocytes and proliferative parameters. Moreover, 3.0 M EG with 0.25 M sucrose resulted in a better cryoprotectant composition in the vitritification for somatic tissue of collared peccaries A criopreservação de tecido somático de catetos representa uma etapa interessante na obtenção e conservação de células para a transferência nuclear (clonagem). Nesse sentido, protocolos de vitrificação tecidual necessitam ser otimizados para garantir a máxima conservação das características viáveis das células. Portanto, os objetivos do presente trabalho foram caracterizar histologicamente o sistema tegumentar da região auricular periférica (Etapa 1) e avaliar diferentes crioprotetores na vitrificação em superfície sólida de tecido somático de catetos (Etapa 2). Para tanto, fragmentos auriculares (9,0 mm3) foram recuperados de dezesseis animais oriundos do Centro de Multiplicação de Animais Silvestres (CEMAS/UFERSA). Na primeira etapa, amostras teciduais foram avaliadas quanto à caracterização das camadas, seus componentes e atividade proliferativa. Para a segunda etapa, fragmentos teciduais foram criopreservados por vitrificação em superfície sólida em meio essencial mínimo modificado por Dulbecco suplementado com 10% de soro fetal bovino e diferentes crioprotetores e concentrações [dimetilsulfóxido (DMSO; 3,0 M), etilenoglicol (EG; 3,0 M) e associação DMSO/EG (1,5 M; 1,5 M) na ausência e presença de sacarose (0,25 M)]. Após duas semanas, fragmentos aquecidos e não criopreservados (controle) foram analisados usando técnicas histológicas. Assim, para ambas as etapas, amostras teciduais foram avaliadas usando colorações hematoxilina-eosina e tricômico de Gomori, quantificação de regiões argirofílicas organizadoras nucleolares (AgNORs) e viabilidade pelo ensaio de MTT (brometo de 3-[4,5-dimetil-tiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazólio). Ainda, na primeira etapa, fragmentos foram analisados por microscopia eletrônica de transmissão. Assim, na primeira etapa, tamanhos de 104,2 μm e 222,6 μm foram observados para epiderme e derme, com uma proporção volumétrica de 36,6% e 58,7%, respectivamente. Além disso, na epiderme, foram evidenciadas as camadas basal (22,5 μm), intermediárias (53,5 μm) e córnea (28,2 μm), com valores médios de 65,3 de células epidermais, 43,4 melanócitos e 14,8 de halos perinucleares. Já a derme apresentou 127 fibroblastos com 2,5 AgNORs por nucléolo. Adicionalmente, a atividade metabólica foi de 0,243. Na segunda etapa, a combinação de 3,0 M de EG com sacarose foi adequada em manter as características teciduais normais quando comparado com os fragmentos não vitrificados, especialmente para a proporção volumétrica da epiderme (61,2 vs. 58,7) e derme (34,5 vs. 36,6), número de fibroblastos (90,3 vs. 127,0) e razão de AgNOR (0,09 vs. 0,17), respectivamente. Em conclusão, o sistema tegumentar auricular periférico de catetos possuiu algumas variações em relação a outros mamíferos, quanto ao número de camadas e espessura da epiderme, quantidade de células epidermais, melanócitos e parâmetros proliferativos. Além disso, 3,0 M de EG com 0,25 M de sacarose resultaram na melhor composição de crioprotetores na vitrificação de tecido somático de catetos 2017-03-21

Submitted by EYNER ANDRADE (eyner.godinho@ifam.edu.br) on 2020-07-16T21:54:16Z No. of bitstreams: 4 TESE_EYNER.pdf: 27667401 bytes, checksum: e0d046f303a392db8a5ebdcbb2b2e667 (MD5) CartaEncaminhamentoAutodepo??sito (2).pdf: 392195 bytes, checksum: 21e4f833a28d5938b69a6e004e89e862 (MD5) ATA_Doutorado.pdf: 553512 bytes, checksum: bf06b4520adf5a38b3cca7f3138715ba (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Approved for entry into archive by PPGCIPET Ci??ncias Pesqueiras nos Tr??picos (ppgcipet@ufam.edu.br) on 2020-07-27T20:21:00Z (GMT) No. of bitstreams: 4 TESE_EYNER.pdf: 27667401 bytes, checksum: e0d046f303a392db8a5ebdcbb2b2e667 (MD5) CartaEncaminhamentoAutodepo??sito (2).pdf: 392195 bytes, checksum: 21e4f833a28d5938b69a6e004e89e862 (MD5) ATA_Doutorado.pdf: 553512 bytes, checksum: bf06b4520adf5a38b3cca7f3138715ba (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Approved for entry into archive by Divis??o de Documenta????o/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2020-07-28T14:24:44Z (GMT) No. of bitstreams: 4 TESE_EYNER.pdf: 27667401 bytes, checksum: e0d046f303a392db8a5ebdcbb2b2e667 (MD5) CartaEncaminhamentoAutodepo??sito (2).pdf: 392195 bytes, checksum: 21e4f833a28d5938b69a6e004e89e862 (MD5) ATA_Doutorado.pdf: 553512 bytes, checksum: bf06b4520adf5a38b3cca7f3138715ba (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Made available in DSpace on 2020-07-28T14:24:44Z (GMT). No. of bitstreams: 4 TESE_EYNER.pdf: 27667401 bytes, checksum: e0d046f303a392db8a5ebdcbb2b2e667 (MD5) CartaEncaminhamentoAutodepo??sito (2).pdf: 392195 bytes, checksum: 21e4f833a28d5938b69a6e004e89e862 (MD5) ATA_Doutorado.pdf: 553512 bytes, checksum: bf06b4520adf5a38b3cca7f3138715ba (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-07-16 Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient??fico e Tecnol??gico - CNPq This study evaluated the yield, chemical composition, autolytic activity, texture, and color of surimi of tambaqui and matrinx??, and proposed improvements in the frozen storage and thermal gelation steps through the use of cryoprotectants and protease inhibitors. Studies have shown that losses during processing reduce the yield from 40%, for mechanically deboned meat (MDM), to 36%, for tambaqui surimi, and in the case of matrinx?? species, the results were 48.5% and 40.5% for MDM and surimi, respectively. The centesimal composition of MDM revealed that successive washes increased the moisture content in both fish, thus, obtaining a special class of surimi according to the moisture criterion. There was a reduction in protein content during the washing step due to the removal of sarcoplasmic proteins. This process also reduced the mineral content of the fish; however, it was not efficient in removing lipids. The water-holding capacity (WHC) data showed a tendency to decrease after 90 days of storage, regardless of the type of cryoprotectant used. Protein solubility did not show great variations until the end of the experiment. The texture was significantly affected by the length of the storage time, as it started, decreasing after 90 days. These results were confirmed by electrophoresis, which revealed significant denaturation of myosin after 120 days of storage. The use of a cryoprotectant mixture containing 4% sucrose, 4% sorbitol, and 0.5% sodium tripolyphosphate gave us the best results for both the species studied. The results for autolytic activity levels showed that 5% soy protein isolate treatment was most effective, inhibiting around 60% of the autolytic activity in surimi of tambaqui and matrinx??. Both soy and potato extracts gave good results which indicated that serine proteases play an important role in the muscle proteolytic activity of both species. The addition of inhibitors improved the elasticity of gels measured via a folding test, where all treatments obtained AA concept. The results obtained for gel strength measurements (g.cm) for tambaqui kamaboko showed that only potato extract treatment at 1% did not improve the texture, however this value was statistically equal to the control. In matrinx?? kamaboko, the gel strength improved after the treatments with ovalbumin (5%) and soy protein isolate (3% and 5%), but decreased after treatment with potato extract. The soy protein isolate and potato extract caused losses in the ???whiteness??? of the product, however this value remained above 70%. To conclude, soy protein isolate is the most efficient inhibitor for both the species of fish studied here. Este estudo avalia o rendimento, composi????o qu??mica, atividade autol??tica, textura, e cor dos ???surimi??? de tambaqui e matrinx??, propondo melhorias na estocagem congelada e na geleifica????o t??rmica atrav??s do uso de crioprotetores e inibidores de proteases. Os estudos mostraram que durante o processamento h?? perdas que reduziram o rendimento passando de 40% para Carne Mecanicamente Separada (CMS) e 36% para o ???surimi??? de tambaqui e, para o matrinx??, os resultados foram de 48,5% e 40,5% para CMS e ???surimi???, respectivamente. A composi????o centesimal da CMS revelou que as lavagens sucessivas aumentaram do teor de umidade para ambos os peixes, obtendo-se um ???surimi??? de classe especial segundo o crit??rio da umidade. Houve redu????o do teor proteico decorrente da remo????o das prote??nas sarcoplasm??ticas durante a lavagem. A etapa reduziu ainda o teor de minerais, por??m, n??o foi eficiente na remo????o dos lip??dios. Os dados da Capacidade de Reten????o de ??gua (CRA) mostraram tend??ncia a diminui????o a partir dos 90 dias, independente do tipo de crioprotetor. A solubilidade proteica n??o apresentou grandes varia????es at?? o final do experimento. A textura foi sensivelmente afetada pelo tempo de estocagem, decrescendo a partir dos 90 dias. Os resultados foram confirmados pela eletroforese que revelou maior desnatura????o da miosina a partir dos 120 dias de conserva????o. O uso da mistura de crioprotores a 4% de sacarose, 4% de sorbitol e 0,5% de tripolifosfato de s??dio apresentou os melhores resultados para ambas as esp??cies. Os resultados para atividade autol??tica mostraram que a prote??na isolada de soja a 5% foi mais eficiente, inibindo em torno de 60% da atividade autol??tica nos ???surimi??? de tambaqui e matrinx??. Tanto a soja como o extrato de batata apresentaram bons resultados indicando que as serino-proteases desempenharam importante papel na atividade proteol??tica muscular de ambas as esp??cies. A adi????o de inibidores melhorou a elasticidade dos g??is atrav??s do teste da dobra, onde todos os tratamentos obtiveram conceito AA. Os resultados de For??a de Gel (gxcm) para o ???kamaboko??? de tambaqui mostraram que apenas o extrato de batata a 1% de adi????o n??o incrementou a textura, entretanto sendo estatisticamente igual ao controle. No ???kamaboko??? de matrinx??, a for??a de gel foi melhor nos tratamentos com ovoalbumina 5% e prote??na isolada de soja a 3% e 5%, mas apresentou resultados negativos para o extrato de batata. A prote??na de soja e o extrato de batata causaram perdas na brancura do produto, por??m manteve-se acima de 70%. Concluiu-se assim que a prote??na isolada de soja ?? o inibidor mais eficiente para ambas as esp??cies.

Experiments were conducted to improve the fertilization rate of cryopreserved semen of dourado, Salminus brasiliensis. The experiment tested two cryoprotectant solutions at different semen: cryoprotectant ratios (1:5, 1:15, 1:25 and 1:50). The standard solution for the species (mixture of dimethyl sulfoxide, glucose, egg yolk and distilled water) was compared to a 350 mOsm ACP(r)-104 solution, which is composed of powdered coconut water diluted in distilled water and methylglycol. Differences between the dilutions tested were significant only for ACP(r). The fertilization potential by using the standard solution at the lowest dilution (1:5) is equated when the sperm is diluted in ACP(r) at 1:25 or 1:50. These results show that the standard solution is the most suitable for the cryopreservation of dourado sperm, since the dilution did not alter the fertilization rate, requiring smaller storage space. RESUMO. Experimentos foram realizados, visando melhorar a taxa de fertilização com a utilização de sêmen criopreservado do dourado, Salminus brasiliensis. O experimento testou duas soluções crioprotetoras em diferentes diluições de sêmen:solução crioprotetora (1:5, 1:15, 1:25 e 1:50). A solução padrão para a espécie (mistura de glicose, água destilada, gema de ovo e dimetilsulfóxido) foi comparada com a solução ACP(r)-104 350 mOsm, composta por água de coco em pó diluída em água destilada e metilglicol. Foi observada diferença entre as distintas diluições testadas apenas para a ACP(r). O potencial de fertilização com o uso da solução padrão na menor diluição testada (1:5) é igualado apenas quando o sêmen em ACP(r) é diluído em 1:25 ou 1:50. Os resultados apontam que a solução padrão é mais vantajosa para a criopreservação de sêmen do dourado, uma vez que a variação da diluição do sêmen não altera a taxa de fertilização, requerendo, assim, menor espaço para armazenamento das amostras.

The objective of this work was to adapt the application of electrolytic conductivity and potassium leaching tests to assess the viability of cryopreserved embryos of 'Anão Verde do Brasil de Jiqui' (AVeJBr) coconut. The zygotic embryos were excised, sterilized and subjected to four cryoprotectant treatments combined with three incubation times (12, 16 and 20 hours), totaling 12 treatments. The pre-treatment of mature zygotic embryos of AVeJBr coconut using a cryoprotectant with 1.75 mol L-1 of sucrose + 15% glycerol for 12 and 16 hours promoted lower embryo humidity and increased viability in electrolytic conductivity and potassium leaching tests. Samples with ten embryos are sufficient for electrolytic conductivity analysis in cryopreserved or non-cryopreserved AVeJBr coconut zygotic embryos. The 4 to 8 hour imbibition period of the embryos is promising for the electrolytic conductivity analysis of non-cryopreserved mature zygotic embryos of AVeJBr coconut. O objetivo deste trabalho foi adaptar a aplicação de testes de condutividade elétrica e lixiviação de potássio para avaliar a viabilidade de embriões de coqueiro 'Anão Verde do Brasil de Jiqui' (AVeJBr) criopreservados. Os embriões zigóticos foram excisados, esterilizados e submetidos a quatro tratamentos crioprotetores combinados a três tempos de incubação (12, 16 e 20 horas), o que totalizou 12 tratamentos. O pré-tratamento de embriões zigóticos maduros de coco AVeJBr com crioprotetor contendo 1,75 mol L-1 de sacarose + 15% de glicerol por 12 e 16 horas promoveu menor umidade dos embriões e maior viabilidade em testes de condutividade elétrica e lixiviação de potássio. Amostras com dez embriões são suficientes para análise de condutividade elétrica em embriões zigóticos de coqueiro AVeJBr criopreservados ou não. O período de embebição de 4 a 8 horas é promissor para a análise da condutividade elétrica em embriões zigóticos maduros de coco AVeJBr não criopreservados.

ResumoAs biotécnicas aplicadas à reprodução animal como inseminação artificial, transferência e produção in vitro de embriões, indução e sincronização de cio e congelamento de gametas vêm sendo cada vez mais utilizadas na prática veterinária. No entanto, algumas biotécnicas ainda não alcançaram o seu total aperfeiçoamento técnico na reprodução equina, como a criopreservação de sêmen. Objetivou-se avaliar as características pós-descongelamento (motilidade total, vigor e integridade de membrana plasmática e acrosomal) dos espermatozoides de garanhões da raça Mangalarga Marchador (n=5), empregando-se três diluentes de criopreservação. Após a colheita, o sêmen foi diluído na proporção de 1:1 em meio à base de leite em pó desnatado e centrifugado a 600 G por 10 minutos. Após a centrifugação, o sobrenadante foi desprezado e o pellet obtido dividido e ressuspendido com Botucrio, FR5 ou FR6. As amostras foram envasadas em palhetas de 0,5 mL sendo a concentração ajustada para 200x106espermatozoides/mL. As palhetas foram distribuídas em uma plataforma-suporte e estabilizadas a 5 ºC/60 min., em refrigerador comercial. Para o congelamento, as palhetas, posicionadas horizontalmente, foram expostas por 15 minutos ao vapor de nitrogênio líquido, em uma caixa de isopor, a 6 cm acima do nível de nitrogênio líquido. Logo em seguida, as palhetas foram imersas no nitrogênio líquido, acondicionadas em raques e estocadas em botijão criogênico a -196 ºC, para posterior avaliação. Não houve diferença para as variáveis motilidade, vigor e integridade das membranas plasmática e acrossomais quando se utilizaram diluentes que contêm a associação de amidas e glicerol (Botucrio e FR6; P>0,05). As variáveis seminais no diluente contendo apenas glicerol foram inferiores em todas as avaliações (P AbstractThe techniques applied to animal reproduction such as artificial insemination, transfer and in vitro production of embryos, heat synchronization and induction, and gametes cryopreservation have been more utilized in veterinary practice each day. Nevertheless, some techniques have not achieved their full technical capacity within the equine reproduction field, such as semen cryopreservation. The aim of this study was to evaluate the characteristics of post-thawing semen (total motility, strength, plasmatic and acrosomal membrane integrity) of Mangalarga Marchador breed stallions, using three different extenders (Botucrio, FR5 and FR6). Ejaculates from five stallions were collected and the gel-free semen was diluted in a 1:1 dilution in skim milk extender, and centrifuged at 600 g for 10 minutes. After the centrifugation the supernatant was removed and sperm pellet was divided and re-suspended using three different extenders to a concentration of 200 x 106 cells/mL. The samples were packed into 0.5 mL straws, placed in a stainless steel support and kept inside the refrigerator (5 ºC) for one hour. Subsequently, these straws were kept at a height of 6 cm from liquid nitrogen for 15 minutes in an isotherm box and, after that, plunged into liquid nitrogen (-196 ºC) and stored in a liquid nitrogen holding tank. There were no differences in the parameters evaluated when extenders using mixed amides and glycerol (Botucrio and FR6) were used (P > 0.05). All parameters evaluated were lower for the extender containing only glycerol (P

This study aims developing and evaluate a protocol of semen cryopreservation of the lane snapper Lutjanus synagris. Firstly, sperm motility rate, motility time, density and spermatocrit were appraised to characterize the sperm quality of the lane snapper. The effect of three extenders with distinct ionic compositions and pH values combined with seven concentrations of cryoprotector dimethylsulfoxide (0; 2.5; 5.0; 7.5; 10.0; 12.5 e 15.0%), five cooling rates (110, 90, 60, 45 e 30°C –min), nine equilibration time (1; 2,5; 5; 10; 15; 20; 25; 30 e 60 minutes) e five dilutions ratio (1:1; 1:3; 1:6; 1:10 e 1:20) on the sperm motility rate and motility time were analyzed. Fertilization test was accomplished to evaluate the viability of the cryopreserved sperm. The higher sperm motility rate and motility time (P60% validating the present protocol for lane snapper. The cryoconserved sperm of lane snapper is a viable alternative, being possible to maintain appropriate sperm viability. ResumoEste estudo teve a finalidade de desenvolver e avaliar um protocolo de crioconservação do sêmen do ariocó Lutjanus synagris. Para caracterizar o sêmen foram avaliados a taxa de motilidade, a duração da motilidade, a concentração espermática e o espermatócrito. Em seis experimentos foram analisados os efeitos de três diluentes, com distintas composições iônicas e valores de pH distintos, combinados com sete concentrações de dimetilsulfóxido (0; 2,5; 5,0; 7,5; 10,0; 12,5 e 15,0%), cinco velocidades de congelamento (–110, –90, –60, –45 e –30°C/min), nove tempos de equilíbrio (1; 2,5; 5; 10; 15; 20; 25; 30 e 60 minutos) e cinco proporções de sêmen:diluente (1:1; 1:3; 1:6; 1:10 e 1:20) sobre a taxa de motilidade e a duração da motilidade espermáticas. Posteriormente um teste de fertilização foi realizado para avaliar a viabilidade do sêmen crioconservado. O tratamento que propiciou maior taxa de motilidade e duração da motilidade espermáticas (P

This study aimed to evaluate the extract of Aloe vera (AV) associated or not with 10% Dimethylsulfoxide (DMSO) in cryopreservation of tambaqui semen. For the formation of the pools (n= 14), 30 males were hormonally induced twice. Each pool had the objective motility, curvilinear velocity, straight-line velocity, average path velocity and morphology analyzed before and after cryopreservation of semen. The means for cryopreservation were constituted of Powder Coconut Water-104 diluent added DMSO and/or AV (5 or 10%). After cryopreservation, motility, velocities and morphology were reduced significantly when compared to fresh semen. For sperm motility the best treatment was that using only DMSO (20,86±8,31) and DMSO + 5% AV (15.71±9.77). For the velocities, the worse treatment was DMSO+10% AV. Treatment with only the addition of DMSO had a significantly higher effect than others on percentage of morphologically normal sperm. The mean correlation found was between motilityand the rate of morphologically normal sperm (r = 0.687). In conclusion, the addition of AV does not provide greater protection for spermatozoa during cryopreservation.

Cryopreservation of fish semen is a key to optimization of reproductive management, the formation of germplasm bank and the development of genetic improvement programs. The success of this technique depends on the management and balance of several factors such as the collection, dilution, packaging, freezing and thawing. Tambaqui semen cryopreservation protocols have been developed using 0.5 mL straws on packaging. However, the high volumes of semen produced and the elevated taxes of fecundity are presented by this specie, it is necessary to use larger volume storage containers for application to large-scale production. The objective of this study was to establish a tambaqui semen cryopreservation protocol in large straw 4,0mL, from the definition of cryosolution, equilibration time and the best ratio between temperature and time semen thawing. The semen collected was diluted, packaged in large straws, frozen in liquid nitrogen which was conditioned in dry-shipper and stored in cryogenic cylinder at -196 °C. In the first experiment, different cryosolutions (M1 - 5% 5% methylglycol; M2 - 5% 5% methylglycol+ 5% egg yolk; M3 - 10% 5% methylglycol; M4 - 10% 5% methylglycol + 5% egg yolk; M5 - 15% 5% methylglycol; M6 - 15% de 5% methylglycol + 5% egg yolk) and three equilibration times (4, 20 and 40 minutes) were tested. In the second experiment, different relation between temperature and time thawing on sperm quality (30ºC for 50s - T1; 30ºC for 80s - T2; 60ºC for 25s - T3 e 60ºC for 40s - T4) were evaluated. In conclusion, this study showed that the ideal protocol for cryopreservation of tambaqui semen in large straw 4,0mL is made by diluting semen at a ratio of 1: 9 (v: v) in a medium composed of 5% methylglycol and 5% egg yolk. Both of them must have remained in contact with each other for 4 minutes until both were subjected to freezing in dry-shipper. The thawing of samples required to be performed in a water bath at 60 ° C for 25s. A criopreservação de sêmen de peixes é uma ferramenta para a otimização do manejo reprodutivo, a formação de bancos de germoplasma e o desenvolvimento de programas de melhoramento genético. O sucesso dessa técnica depende do domínio e o equilíbrio de vários fatores que envolvem os processos de coleta, diluição, envase, congelamento e descongelamento. Protocolos de criopreservação sêmen de tambaqui já foram desenvolvidos utilizando palhetas de 0,5mL no envase, no entanto, o elevado volume de sêmen produzido e alta fecundidade da espécie sugere o armazenamento em recipientes de maior volume para a aplicação na produção em larga escala. Com isso, o objetivo do presente estudo foi estabelecer um protocolo de criopreservação seminal do tambaqui em macropalhetas de 4,0mL, a partir da definição de um meio diluidor, tempo de equilíbrio e a melhor relação entre temperatura e o tempo de descongelamento do sêmen. O sêmen coletado foi diluído, envasado em macropalhetas, congelado em vapor de nitrogênio líquido no botijão dry-shipper e armazenadas em botijão criogênico a -196°C. No primeiro experimento, foram testadas diferentes composições do meio diluidor (M1 - 5% de metilglicol; M2 - 5% de metilglicol + 5% de gema de ovo; M3 - 10% de metilglicol; M4 - 10% de metilglicol + 5% de gema de ovo; M5 - 15% de metilglicol; M6 - 15% de metilglicol + 5% de gema de ovo) e três tempos de equilíbrio (4, 20 e 40 minutos). No segundo experimento, foram avaliadas diferentes velocidades de descongelamento do sêmen em banho-maria, sobre a qualidade espermática (30ºC por 50s - T1; 30ºC por 80s - T2; 60ºC por 25s - T3 e 60ºC por 40s - T4). Ao final do estudo concluiu-se, que o protocolo ideal para a criopreservação do sêmen do tambaqui em macropalhetas de 4,0mL consiste na diluição do sêmen na proporção de 1:9 (v:v) em um meio composto por 5% de metilglicol e 5% de gema de ovo, os quais devem permanecer em contato por 4 minutos até que sejam submetidos ao processo de congelamento em botijão dry-shipper. O descongelamento das amostras deve ser realizado em banho-maria a 60°C por 25s.

O peixe Geophagus brasiliensis, nativo brasileiro é explorado comercialmente como peixe ornamental, podendo, no futuro, ter reduzidos os estoques naturais. Com isso, a criopreservação pode garantir a sobrevivência e diversidade genética dessa espécie nativa. O objetivo deste estudo foi testar a eficiência crioprotetora e do Dimetil sulfóxido, Etileno glicol e Glicerol em sêmen de G. brasiliensis, utilizando os parâmetros espermáticos motilidade (taxa e tempo de motilidade), integridade de membrana e DNA, funcionalidade mitocondrial e espécies reativas de oxigênio (ERO). Os machos (n=12) foram obtidos de pescadores profissionais da Laguna dos Patos, tiveram seu sêmen coletado por massagem abdominal e diluído (1:9 v/v) em Betsville Thawing Solution para avaliação dos parâmetros espermáticos. As amostras seminais foram diluídas nos difentes tratamentos com crioprotetores DMSO, EG e GLI nas concentrações (5, 10, 15 e 20%). Sendo então, congeladas em Dryshipper e posteriormente armazenadas em botijão de Nitrogênio líquido à -196ºC, por no mínimo 15 dias. Posteriormente, descongeladas em banho-maria a 37º C por 8 segundos e as análises espermáticas refeitas. Todas as análises espermáticas foram realizadas por citometria de fluxo, exceto a motilidade (taxa e tempo) analisada ao microscópio de contraste de fases. Os resultados foram avaliados estatísticamente no programa Statistix 9.0 (2008). Os tratamentos com BTS, DMSO e EG, nas concentrações de 5%, não diferiram na quantidade de ERO (P>0.05). Os tratamentos com DMSO 10, 15 e 20% obtiveram os melhores resultados de integridade de membrana (P0,05). Todos os tratamentos mantiveram a integridade do DNA (P>0,05). O DMSO 10% apresentou melhores médias de motilidade (taxa e tempo), sendo essas de 24% e de 160 segundos. O DMSO 10% foi o tratamento mais eficiente na criopreservação seminal de G. brasiliensis. The Geophagus brasiliensis fish, Brazilian native is commercially exploited as ornamental fish, and may in the future have reduced the natural stocks. Thus, cryopreservation can ensure the survival and genetic diversity of this and other native species. The aim of this study was to test the efficiency of the cryoprotectant dimethyl sulfoxide, ethylene glycol and glycerol in semen G. brasiliensis, using the sperm motility parameters (rate and time), membrane and DNA integrity, mitochondrial function and reactive oxygen species (ROS). The fishes (n = 12) were obtained from fishermen of the Patos Lagoon, The semen was collected by abdominal massage and diluted (1:9 v / v) in Betsville Thawing Solution (BTS) for evaluation of sperm parameters. The samples were diluted in cryoprotectant treatments, DMSO, EG and GLI at different concentrations (5, 10, 15 and 20%) and frozen in Dryshipper and subsequently stored in liquid nitrogen (-196 ° C) for at least 15 days. Subsequently thawed in a water bath at 37 ° C for 8 seconds and remade sperm analysis. All analyzes were performed by flow cytometry, except motility (rate and time) analyzed by phase contrast microscopy. The results were evaluated statistically in Statistix 9.0 (2008) program. Treatments with BTS, EG and DMSO, at concentrations of 5%, did not differ in the amount of ROS (p> 0.05). Treatment with DMSO 10, 15 and 20% achieved the best results of membrane integrity (P 0.05). All treatments were maintained the integrity of DNA (P> 0.05). The 10% DMSO showed better average motility (rate and time) which are 24% and 160 seconds. DMSO 10% was the most effective treatment cryopreservation of semen in G. brasiliensis.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:37:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_alexander_de_oliveira_goncalves.pdf: 291520 bytes, checksum: b6ebcc42cb32615e466fb7da14f76006 (MD5) Previous issue date: 2013-02-22 The bovine in vitro embryo production (IVEP) showed a great expansion in last decades, but, various factors concours to low embryo production rates. This paper aimed to determine the influence of cryoprotector and sperm selection gradient on super recuperation rate and sperm integrity, including the rate of IVEP. The ejaculate of a bull with high FIV rates was divided; one part was frozen with 5% glycerol (GLY) and the other with 3% of ethylene glycol (EG). At sperm selection each group was centrifuged at 5000 x g/5min in discontinuous Percoll® (MP; 90 e 45%) and OptiPrep® (MO; 30 e 26%) mini gradients (600μl), forming four experimental groups: GLI/MP; EG/MP; GLI/OP e EG/OP. Motility, agglutination, recuperation rate, membrane integrity (MI), acrosome integrity (AI) and mitochondrial activity (MA) were evaluated pre- and post-sperm selection. Embryo production rates were accessed at cleavage, D7 and D8. At thawing there was no difference (P>0,05) on sperm motility (GLY - 78.6% ± 6,9 and EG - 75.7%± 5,3) and no sperm agglutination was detected. After sperm selection motility and sperm recuperation were different (P0,05) between groups in sperm structural integrity after thawing and after sperm selection. The cleavage rate of GLY/MP and EG/MP groups were higher (P0,05) to EG/MP group, which do not differ (P>0,05) from EG/MO. At this moment only EG/MO do not differ (P>0,05) from GLY/MO. EG/MP, EG/MO and GLY/MO groups presented similar (P>0,05) embryo production rates at D8. In conclusion, the cryoprotectant do not interfere in the evaluated sperm and embryo parameters, and Percoll® mini - gradient provided better embryo production rates than OptiPrep® mini-gradient. A PIV de embriões bovinos é a biotécnica de reprodução assistida que apresentou o maior crescimento nas últimas décadas, entretanto, vários fatores podem concorrer no comprometimento dos resultados. Este trabalho objetivou determinar a influência do crioprotetor e do gradiente de seleção espermática sobre a recuperação e integridade dos espermatozoides e a taxa de PIV de embriões bovinos. Inicialmente, um ejaculado de um touro reconhecidamente eficiente na FIV foi dividido em duas frações, uma delas congelada com 5% de glicerol (GLI) e a outra com 3% de etilenoglicol (EG). No momento da seleção espermática, cada grupo foi centrifugado a 5000 x g/5min em mini gradientes descontínuos de Percoll® (MP; 90 e 45%) ou OptiPrep® (MO; 30 e 26%) usando o método de volume reduzido (600μl), constituindo quatro grupos experimentais: GLI/MP; EG/MP; GLI/OP e EG/OP. Foram realizadas avaliações espermáticas pré e pós seleção espermática de motilidade, aglutinação, recuperação, integridade de membrana (IM), integridade de acrossoma (IA) e funcionalidade mitocondrial (FM). Com relação à produção embrionária, foram avaliados os parâmetros de clivagem, desenvolvimento embrionário no dia 7 (D7) e no dia 8 (D8). Na avaliação espermática ao descongelamento as taxas de motilidade observadas foram semelhantes (P>0,05) entre os grupos GLI (78,6 ± 6,9) e EG (75,7 ± 5,3). Nesse momento também não foi detectada aglutinação espermática nas amostras dos dois tratamentos. Pós-seleção espermática foi encontrada diferenças para motilidade e recuperação espermática entre os grupos, GLI/MP; EG/MP e GLI/OP; EG/OP (82,9 ± 7,6 e 46,5 ± 13,8; 81,4 ± 9,0 e 44,3 ± 16,3 vs. 27,1 ± 4,9 e 23,1 ± 7,4; 31,4 ± 6,9 e 29,8 ± 12,4, respectivamente). Não foram encontradas diferenças nas avaliações de integridade estrutural dos espermatozoides pósdescongelamento e pós-seleção espermática em nenhum dos grupos testados (P>0,05). Nas avaliações de produção embrionária os grupos GLI/MP e EG/MP foram superiores (P0,05) ao EG/MP, que por sua vez, não diferiu (P>0,05) do EG/MO. Neste momento, apenas o EG/MO não diferiu (P>0,05) do GLI/MO. No D8, os grupos EG/MP, EG/MO e GLI/MO foram semelhantes (P>0,05). Conclui-se que o crioprotetor utilizado no congelamento de sêmen não interfere em nenhuma das avaliações espermáticas e de desenvolvimento embrionário e que o método de seleção espermática usando o mini gradiente OptiPrep® afeta a motilidade e recuperação espermática proporcionando menor taxa de produção embrionária do que quando se utiliza o mini gradiente Percoll®.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2013. Estudos relacionados à criopreservação de germoplasma de raças localmente adaptadas, visam disponibilizar esse material com custo reduzido e maior variabilidade genética. O objetivo desse estudo foi testar protocolos de criopreservação do sêmen que resultassem em um produto de melhor qualidade. Para cada experimento, foram coletados quatro ejaculados de quatro suínos localmente adaptados, com intervalos de 5 a 7 dias. No primeiro experimento foram testados três curvas de congelação: 0h, 2h e 4h de estabilização em BTS após coleta à temperatura de 22-24°C. Foi observado que a estabilização por duas horas resultou em melhor qualidade de sêmen pós congelação (P>0,05) para os parâmetros motilidade total (14,3±6,3%C vs 29,7±6,1A vs 22,9±8,2B, respectivamente) e percentual de células com membrana celular e acrossoma íntegros (9,6±4,2%B vs 17,5±4,7A vs 12,9±6,8A). No segundo experimento, foram testados protocolos utilizando diluentes de 2% e 3% de glicerol no volume final, sem e com (quinze minutos) estabilização pré congelação. Os resultados obtidos com diluente de congelação contendo 3% do volume final de glicerol, estabilizados por quinze minutos foram superiores (P>0,05) para os parâmetros motilidade total (28,1±5,5B vs 31,8±5,0AB vs 29,1±4,9B vs 37,9±5,4A) e percentual de células com membrana celular e acrossomal íntegras (15,1±5,0C vs 18,4±5,7BC vs 19,8±6,4B vs 25,1±5,3A). Os protocolos cujo sêmen foi submetido à estabilização em BTS por duas horas e com concentração final de glicerol a 3% resultaram em sêmen de melhor qualidade ao final do processo de criopreservação. ________________________________________________________________________________ ABSTRACT Studies related to germplasm cryopreservation of locally adapted breeds, aim to eventually reduce cost and gain genetic variability. The aim of this study was to test sperm cryopreservation protocols that could lead to greater quality results after the cryopreservation process. Four ejaculates were collected by intervals of 5-7 days, from four national swine. The first experiment tested three freezing curves: after collected, semen were equilibrated for 0h, 2h and 4h in BTS at a temperature of 22-24 ° C. It was noted that the two hour equilibration resulted in greater semen quality after freezing (P> 0.05) for total motility (14.3±6.3%C vs 29.7±6.1A vs 22.9±8.18B, respectively) and percentage of cells with membrane and acrosome integrity (9.6±4.2%B vs 17.5±4.7A vs 12.9±6.8A). The second experiment tested protocols using liquid storages with 2% and 3% of glycerol in the final volume, with and without fifteen minutes of pre freezing equilibration. The results obtained with the liquid storage that contained 3% of glycerol in the final volume, equilibrated for fifteen minutes, were superior (P> 0.05) for total motility (28.1±5.5B vs 31.8±5.0AB vs 29.1±4.9B vs 37.9±5.4A) and percentage of cells with membrane and acrosome integrity (15.1±5.0C vs 18.4±5.7BC vs 19.8±6.4B vs 25.1±5.3A). Protocols in which semen were submitted to a two hour equilibration in BTS and a final glycerol concentration of 3%, resulted in greater semen quality by the end of the cryopreservation process.

A criopreservação de folículos ovarianos pré-antrais pode ajudar na conservação de muitas espécies domésticas e selvagens. Neste trabalho, objetivou-se verificar o efeito do etileno glicol, em diferentes concentrações, na morfometria e número de células da granulosa de folículos pré-antrais inclusos em tecido ovariano bovino. O teste de toxicidade foi realizado com fragmentos ovarianos expostos ao etileno glicol em concentrações de 10, 20 ou 40%. O tecido foi analisado por técnica histológica clássica. Os folículos primordiais expostos à concentração de 40% apresentaram redução do diâmetro folicular e ovocitário quando comparados ao grupo controle (sem exposição), 10% e 20% (P0,05). Esses resultados sugerem que folículos primários são mais resistentes aos efeitos do etileno glicol quando comparados aos primordiais. ABSTRACT - The cryopreservation of the ovarian preantral follicles could help the conservation of several domestic and wild animal species. The objective of this study was to verify the effect of different concentrations of ethylene glycol on the morphometry and number of granulosa cells of the preantral ovarian follicles. A toxicity test was conducted with strips of ovarian cortex using ethylene glycol (10, 20 or 40%). Tissue analysis was done using classical histology techniques. The primordial follicles expose at a concentration of 40% showed reduction of the follicular diameter and oocyte when compared to the control (non exposing), 10 and 20% groups (P0.05). These results suggest that primary follicles are more resistant to the effect of ethylene glycol when compared to primordial ones.

Em três experimentos, avaliou-se a sensibilidade dos espermatozoides de dourado (Salminus brasiliensis) a diferentes soluções crioprotetoras. No experimento 1, o sêmen foi diluído, 1:10, em 12 soluções (quatro diluidores x três crioprotetores - dimetilsulfóxido (DMSO), metilglicol ou glicerol). Metade de cada amostra foi resfriada por uma hora e a outra, criopreservada. A motilidade espermática foi avaliada imediatamente após a diluição e após o resfriamento em todas as amostras e, após o descongelamento, apenas nas amostras criopreservadas em DMSO. No experimento 2, o sêmen foi diluído, 1:5, em cinco soluções contendo DMSO e resfriado, criopreservado e avaliado como no experimento 1. No experimento 3, o sêmen foi diluído, 1:5, em quatro soluções contendo DMSO e criopreservado e avaliado quanto à motilidade e à fertilidade. Quando o sêmen foi diluído 1:10, observou-se motilidade acima de 58% em todas as amostras resfriadas em DMSO e em NaCl-tris-metilglicol. Baixa motilidade foi observada nas amostras resfriadas nas outras combinações com metilglicol (5-32%) ou glicerol (0-8%) e naquelas criopreservadas (16-20%). Todas as amostras diluídas 1:5 apresentaram motilidade de 65-72% após o resfriamento e de 45-66% após o descongelamento (experimentos 2 e 3). As taxas de eclosão produzidas com sêmen criopreservado, entretanto, foram baixas (17-23%) em relação ao sêmen fresco (60%). The sensitivity of dourado (Salminus brasiliensis) spermatozoa to different cryoprotectant solutions was evaluated in three experiments. In experiment 1, semen was diluted, 1:10, in 12 solutions (four extenders x three cryoprotectants - dimethylsulphoxide (DMSO), methyglycol, or glycerol). Half of each sample was refrigerated for one hour while the other half was cryopreserved. Sperm motility was immediately assessed after dilution and after refrigeration in all samples, and after thawing in those cryopreserved in DMSO. In experiment 2, semen was diluted, 1:5, in five solutions containing DMSO, refrigerated, cryopreserved, and analyzed as in experiment 1. In experiment 3, semen was diluted, 1:5, in five solutions containing DMSO, cryopreserved and evaluated for motility and fertility. When semen was diluted 1:10, motility higher than 58% was observed in all samples refrigerated in DMSO and in NaCl-tris-methylglycol. Low motility was observed in samples refrigerated in the other combinations of methylglycol (5-32%) or glycerol (0-8%) and in those cryopreserved (16-20%). All samples diluted 1:5 yielded motility of 65-72% after refrigeration, and 45-66% after thawing (experiments 2 and 3). The hatching rates produced with cryopreserved semen, however, were lower (17-23%) compared to fresh semen (60%).

Avaliou-se a eficácia de diferentes associações de crioprotetores no congelamento de sêmen eqüino. Foram utilizados três ejaculados de oito garanhões para testar o diluidor lactose-EDTA-gema de ovo com as seguintes associações de macromoléculas e crioprotetores: T1 - glicerol 5% (controle); T2 - metilcelulose 0,5%, rafinose 0,15g e acetamida 2,5%; T3 - metilcelulose 0,5%, rafinose 0,15g e acetamida 3,5%; T4 - metilcelulose 0,5%, rafinose 0,15g e acetamida 5%; T5 - glicerol 5% e 2,4g de leite desnatado; T6 - 1% de glicerol, 4% de etilenoglicol e 2,4g de leite desnatado; T7 - 5% de etilenoglicol e 2,4g de leite desnatado. O sêmen foi diluído em meio Kenney (1:1), centrifugado a 400 x g por 12 minutos, ressuspendido nos diluidores para atingir a concentração de 100X10(6)/ml, envasado em palhetas de 0,5ml e congelado 3cm acima do nível de nitrogênio líquido por 10 minutos. O descongelamento foi realizado em banho-maria a 75°C por sete segundos. Após o descongelamento foram avaliados: motilidade total e progressiva, vigor, morfologia espermática e integridade estrutural e funcional da membrana plasmática. O T1 apresentou os maiores valores de motilidade total e progressiva (38,4% e 33,8%, respectivamente). O vigor e os resultados do teste HO não diferiram entre os tratamentos. Os diluidores contendo leite em sua composição (T5, T6 e T7) apresentaram maiores valores de integridade funcional e estrutural da membrana plasmática. Pode-se concluir que as modificações incorporadas aos meios diluidores testados não resultaram em melhor efeito crioprotetor que o meio à base de glicerol 5% no congelamento do sêmen eqüino. The efficacy of different combinations of cryoprotectants for equine semen was evaluated. Three ejaculates of eight stallions were used to test the lactose-EDTA-egg yolk extender with the following association of cryoprotectants: T1 - glycerol 5% (control group); T2 - methyl cellulose 0.5%, raffinose 0.15g, and acetamide 2.5%; T3 - methyl cellulose 0.5%, raffinose 0.15g, and acetamide 3.5%; T4 - methyl cellulose 0.5%, raffinose 0.15g, and acetamide 5%; T5 - glycerol 5% and 2.4g of dried skim milk; T6 - glycerol 1%, ethylene glycol 4%, and 2.4g of dried skim milk; T7 - ethylene glycol 5% and 2.4g of dried skim milk. After collection, Kenney extender was added to the semen 1:1, and centrifuged at 400 x g for 12 minutes. Sperm pellets were diluted to reach 100x10(6) cells/ml. Spermatozoa were frozen in 0.5ml straws 3cm above the nitrogen level, during 10 minutes. Thawing of samples was done at 75°C for seven seconds followed by immersion of the straw in a water bath at 37°C for 30 seconds. Post-thaw total and progressive motilities and sperm vigor were evaluated. Sperm membrane integrities of the tail and caput, respectively, were evaluated by the hypoosmotic swelling test and fluorescent dyes. T1 showed the highest post-thaw total and progressive motilities (38.4% and 33.8%, respectively). No significant difference was found among treatments for vigor and hypoosmotic swelling test. T5, T6, and T7 showed higher post-thaw values for sperm membrane integrity. It may be concluded that the association of cryoprotectants used in this experiment did not result in better cryoprotectant effect than 5% glycerol for equine semen cryopreservation.

Pintos de corte com um dia de idade foram tratados com microbiota cecal cultivada em condição de aerobiose, nos tempos de congelamento de 90, 200, 290 e 360 dias, e associada aos crioprotetores sacarose, trealose, dimetilsulfóxido (DMSO) e glicerol. Posteriormente as aves foram desafiadas com Salmonella Enteritidis, visando determinar a eficácia dos tratamentos em relação à quantidade de bactérias viáveis da microbiota que foi maior aos 90 dias (10,58 Log10 UFC/ml), quando as aves foram tratadas com sacarose, e menor aos 290 dias, quando tratadas com glicerol (7,73 Log10 UFC/ml). No tempo zero, todas as aves apresentaram Salmonella (100%) quando tratadas com DMSO e glicerol, com colonização cecal de 4,9 e 5,2 Log10 UFC/g do conteúdo cecal, respectivamente; aos 360 dias nenhuma ave foi infectada, independente do tratamento. A microbiota cecal, independente de tratamento, sempre determinou menor quantidade de S. Enteritidis em qualquer um dos parâmetros pesquisados, quando comparada com a das aves não tratadas. O congelamento em nitrogênio líquido foi eficaz na manutenção da viabilidade da microbiota cecal até 360 dias. One-day-old broiler chicks were treated with cecal microbiota cultivated under aerobiose conditions, frozen during 90, 200, 290 and 360 days and associated with different cryoprotectors such as sucrose, trehalose, DMSO and glycerol. Subsequently, the birds were challenged with Salmonella Enteritidis in order to determine the efficacy of the different treatments in relation to the quantity of viable bacteria, which was higher at 90 days when treated with sucrose (10.58 log10 CFU/ml) and lower at 290 days when treated with glycerol (7.73 log10 CFU/ml). The quantity of infected birds was 100% in 0 time, when the cecal colonization by S. Enteritidis was 4.9 and 5.2 log10 CFU/g of cecal content, respectively treated with DMSO and glycerol. No bird was infected at 360 days, irrespectively of the treatment. In all treatments, the cecal microbiota always determined a lesser quantity of S. Enteritidis for all the studied parameters compared to non-treated birds. Frozen in liquid nitrogen was effective in maintaining the viability of cecal microbiota during the experimental period of 360 days.

Este trabalho teve como objetivo avaliar a eficiência de três tempos de adição fracionada de 5%, da dimetil formamida (DMF) ao meio diluídor base INRA 82 modificado, a sua interação com o tempo de equilíbrio e a curva de congelamento na criopreservação de espermatozóides eqüinos. Um ejaculado de seis garanhões foi utilizado para testar três tempos de adição da dimetil formamida: Tempo 1: adição da décima parte da dimetil formamida a cada minuto no tempo de dez minutos; Tempo 2: adição da décima parte da dimetil formamida à cada dois minutos no tempo de vinte minutos; Tempo 3: adição da décima parte da dimetil formamida a cada três minutos no tempo de trinta minutos. Completando-se o período médio de uma hora e oito minutos em temperatura ambiente desde o início até a adição do crioprotetor todas as amostras foram resfriadas até 5°C utilizando uma máquina computadorizada a uma taxa de 0,25°C/min. Foram testadas três diferentes procedimentos para o congelamento: a) sem tempo de equilíbrio adicional à 5°C e congelamento 4cm acima do nível de nitrogênio líquido por quinze minutos, e posterior submersão das amostras no nitrogênio líquido; b) com tempo de equilíbrio adicional a 5°C de quarenta e cinco minutos e congelamento 4cm acima do nível de nitrogênio líquido por quinze minutos, e posterior submersão dasamostras no nitrogênio liquido; c) com tempo de equilíbrio adicional à 5°C de quarenta e cinco minutos e congelamento computadorizado a uma taxa de -10°C/min ate -127°C por quinze minutos, e posterior submersão das amostras no nitrogênio liquido. O descongelamento foi feito a 52°C por dez segundos, seguidos de imersão em banhomariaa 37°C por trinta segundos. Após o descongelamento foram avaliados os parâmetros de motilidade total, motilidade progressiva e vigor espermático em microscopia óptica, com aumento de 400X. A integridade da membrana plasmática da cauda e da cabeça foi avaliada pelo teste hiposmótico e pela coloração de fluorescência respectivamente. Os espermatozóides foram submetidos ao teste de termoresistência. Não foi observada diferença significativa (P> 0,05) entre os três tempos de adição nem as curvas de congelamento. Os resultados permitem concluir que a mudança do tempo de adição do crioprotetor de forma fracionada e da curva de congelamento não altera a viabilidade espermática eqüina avaliada in vitro. The aim of this research was to evaluate the efficiency of three times of fractionate addition of 5%, the dimethyl formamide to the half seminal extender modified base INRA 82, and its interaction with the time of balance and the rates of freezing in the criopreservation of equine spermatozoa. Ejaculates of six stallions was used to test three times of addition of the dimethyl formamide; Time 1: addition of the tenth part ofdimethyl formamide to each the one minute in the time of ten minutes; Time 2: addition of the tenth part of dimethyl formamide to each the two minutes in the time of twenty minutes; Time 3: addition of the tenth part of dimethyl formamide to each the three minutes in the time of thirty minutes. Completing the average period of one hour and eight minutes in ambient temperature since the beginning until addition of the crioprotectan all the samples had been cooled until 5°C using one scheme computerized to a rates of cooling 0,25°C/min. 3 different procedures for the freezing had been tested: a) without time of additional balance 5°C and freezing 4cm above of the nitrogen level fifteen minutes, and posterior submersion of the samples in nitrogen liquid; b) with timeof additional balance 5°C of forty five minutes and freezing 4cm above of the nitrogen level fifteen minutes, and posterior submersion of the samples in nitrogen liquid e; c) with time of additional balance 5°C of forty five minutes and freezing computerized to one rates of -10°C/min ties -127°C per fifteen minutes, and posterior submersion of the samples in nitrogen liquid. The thawing was made 52°C per ten seconds, followed ofimmersion in bath-Maria 37°C per thirty seconds. Immediately post thaw the parameters of total motility, motility progressive and spermatic vigor were evaluated under microscopy 400X. The integrity of the plasmatic membrane of the tail was evaluated through the hiposmotic swelling test and the functional and structural sperm membrane integrity were evaluate by the fluorescent dyes, carboxyfluorescein diacetateand propidium iodide respectively. The spermatozoa were also evaluated in the temperature resistance. Was not observed significant difference (P> 0, 05) enters the three times of addition and enters the freezing rates. The results allow concluding that the changes of the time of addition of the crioprotectan of fractionate form and the curve of freezing did not modify the equine spermatic viability evaluated in vitro..