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Vitrification and ultra-rapid freezing, which are more commonly used for oocytes and embryos, have recently been applied to spermatozoa in an attempt to make semen cryopreservation in field conditions easier compared to conventional freezing. It is well-known that in case of unexpected death of rare and wild animals, preserving epididymal spermatozoa from isolated testicles represents a great chance of salvaging male germplasm for future use in assisted reproductive technologies. The aim of this study was to evaluate the morphofunctional integrity of cat epididymal spermatozoa ultra-rapid frozen in pellets or straws with two different extenders [E1 (Tris buffer with 20% egg yolk and 0.25 M sucrose) or E2 (Ham's F10 with 1% bovine serum albumin and 0.4 M sucrose)] and to test whether spermatozoa preserved by the best combination were able to fertilize oocytes and produce embryos

Gli oociti immaturi vitrificati (VOs) di gatto domestico sono un modello utile per sviluppare protocolli di crioconservazione dei gameti per la salvaguardia della fertilit� e della biodiversit� nei felini selvatici a rischio estinzione. Sebbene la vitrificazione di oociti immaturi sia conveniente per i suoi vantaggi pratici (disponibilit� di gameti, velocit� e possibilit� di esecuzione in campo della tecnica), i VOs spesso degenerano dopo il warming (i.e. il ripristino della temperatura fisiologica dopo vitrificazione), e i loro tassi di maturazione e sviluppo embrionale in vitro sono scarsi se comparati a quelli degli oociti freschi. Pertanto, sono necessari miglioramenti per sfruttare appieno il loro potenziale, come degli arricchimenti fisico-chimici al protocollo di vitrificazione o alle condizioni di coltura post-warming. In questo progetto, la vitrificazione di oociti immaturi con il metodo Cryotop ha prodotto tassi di vitalit� elevati (90,8%), ripetibili e riproducibili. Per migliorare la maturazione dei VOs e il loro sviluppo, sono state poi impiegate due strategie. La prima ha previsto la creazione di strutture tridimensionali simil-follicolari (i.e. cellule della granulosa coltivate in microcapsule di alginato), utilizzate come condizione di coltura arricchita per la maturazione in vitro dei VOs, e ha portato al mantenimento dell'attivit� steroidogenica delle cellule della granulosa e alla ripresa della meiosi dei VOs co-coltivati (11,8% di maturazione). La seconda strategia invece, dopo la valutazione dell'attivazione apoptotica nei VOs, ha previsto l'aggiunta di un inibitore chimico delle caspasi che ha prodotto tassi di maturazione (53,1%) simili a quelli degli oociti freschi di controllo e buoni tassi di sviluppo embrionale (34,4%). Lo sviluppo embrionale a stadi avanzati � rimasto scarso, e sono necessarie ulteriori ricerche per ottimizzare la competenza di sviluppo dei VOs. Indagini molecolari sui danni indotti dalla crioconservazione e sulle peculiarit� degli embrioni derivati da oociti crioconservati potrebbero migliorare i risultati dei VOs in vitro, e quindi favorire la creazione di biobanche per i gameti felini.

The in vitro development of vitrified oocytes (VOs) is still suboptimal (Mandawala et al., 2016) and the traditional two-dimensional (2D) culture systems might not be adequate to fully exploit VOs potential. The use of three-dimensional (3D) follicle-like structures, i.e. a combination of granulosa cells (GCs) and semipermeable 3D matrices, could mimic the physiological microenvironment and enhance VOs maturation and embryo development. The aim of this study was to assess the steroidogenic ability (estradiol and progesterone secretion) of GCs encapsulated in 3D barium alginate microcapsules (follicle-like structure) compared to GCs cultured in a 2D monolayer and the maturation outcomes of VOs cultured in these systems. After purification (Simsek & Arikan, 2015), cat GCs retrieved from isolated ovaries were in vitro cultured for 6 days in 3D microcapsules (Vigo et al., 2005) or in 2D monolayers. On days 2 and 6, conditioned medium was collected and hormonal determination by enzyme-linked fluorescent assay was performed. On the same days, 3D and 2D cultured GCs were used as artificial milieu for in vitro maturation of VOs obtained by Cryotop protocol. Nuclear maturation was assessed by bis-benzimide staining. Steroidogenesis was observed in 3D follicle-like structures as well as in 2D monolayers; hormonal concentration increased over time and on day 6 it significantly differed between systems (p=0.02). Vitrified oocytes resumed meiosis in presence of GCs cultured for 2 days (3D: 45.5%; 2D: 56.7%), while GCs cultured for 6 days significantly hindered VOs meiosis progression in monolayers (21.7%, p=0.007), but supported high proportions of full maturation in follicle-like structures (26.7%, p=0.07). Granulosa cells in 3D microcapsules maintained their physiological features and these follicle-like structures were able to restore VOs developmental abilities. However, further advancements in VOs culture methods would optimize the use of these valuable resources., International Journal of Health, Animal Science and Food Safety, Vol 5, No 1s (2018)

Studio filologico della tradizione testuale del teatro di Cervantes, in cui vengono descritte le caratteristiche dei documenti e i loro rapporti ai fini della definizione del testo critico. Vengono inoltre chiariti, con gli strumenti della bibliografia materiale e della storia del libro, i processi di realizzazione dei testi, i rapporti con gli stampatori, il valore commerciale del progetto cervantino e la relazione conflittuale dello scrittore con il teatro professionale dell'epoca. Viene infine tracciata una storia editoriale delle commedie e tragedie di Cervantes fino ad oggi, restituendo un corpus letterario e teatrale di notevole interesse per la comprensione dell'intero fenomeno culturale e artistico.

El propósito de esta comunicación es el estudio de los distintos cambios de espacio dramático en El saco de Roma de Juan de la Cueva (1579), en el que se dramatizan el pillaje de la ciudad italiana, que tuvo lugar en la primavera de 1527, y la coronación de Carlos V en Bolonia, en febrero de 1530. En la comedia, -la primera en llevar a la escena la figura de este emperador y la única del repertorio del sevillano basada en un tema histórico contemporáneo-, Cueva nos ofrece su versión de los he...

Aprovechar las enseñanzas de la Historia, recurrir al pasado remoto o reciente para mostrar en sus héroes, recreados por el teatro, su dimensión arquetípica y modélica, tales son los propósitos de la dramatización de la materia histórica durante el Siglo de Oro español. La Historia no sólo sirvió de mero marco temporal para ubicar la acción dramática de las piezas en un contexto preciso. Las variaciones, anacronismos evidentes o sincronismos implícitos, a partir dde las fuentes manejadas deben leerse como verdaderas estrategias del dramaturgo. El anclaje histórico de los argumentos, mediante juegos de simetrías y contrastes entre realidad y ficción, enfoca la recepción ideológica de las obras. La poética del tiempo histórico en el teatro se pone al servicio de la emergencia de una conciencia nacional: representar el pasado supone mejor decir y cuestionar el presente. Este libro examina también la estética de la temporalidad que nace de las variaciones cronológicas en las obras contempladas. Las diferentes contribuciones de los autores revelan la distancia tomada por los dramaturgos del Siglo de Oro respecto a la preceptiva clásica. Semejante actitud no exenta de críticas en su época, demuestra la libertad con la que aquellos creadores supieron superar los apremios teóricos de la unidad de tiempo a favor de un dinamismo celebrado en su tiempo por el público heterogéneo y exigente de los corrales.