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Leishmaniasis is a major public health problem, affecting thousands of people annually. The treatment of this neglected disease has several limitations, the drugs used for the treatment of patients have high toxicity, severe adverse effects, difficult administration, and high cost. Being the therapy of this pathology mainly based on the administration of pentavalent antimonials, which have been used since 1945. All these problems result in discontinuation of treatment by patients and, consequently, the emergence of resistant strains. Because of all these treatment difficulties and the absence of vaccines, there is urgency in the search for new therapeutic drugs that are effective against parasites and do not present harm to the patient. Therefore, in this work, we evaluated the anti-Leishmania activity of derivatives acridine-thiosemicarbazone and the reference drug amphotericin B against promastigote and amastigote forms of Leishmania infantum and its cytotoxicity against human erythrocytes. The results showed that the acridine-thiosemicarbazone derivatives (GLDL 03 and GLDL 06) and the reference drug showed activity against promastigotes of L. infantum, with CI50 of 3.512μg/mL, 5.279 μg/mL and 0.955 μg/mL, respectively. The compounds GLDL 03 and GLDL 06 and the amphotericin B were also active against the axênic amastigote forms of L. infantum, with values of CE50 6.201 μg/mL, 7.550μg/mL, 0.476 μg/mL, in this sequence. It was noted these compounds have shown promise in vitro, it is necessary to conduct more detailed studies that identify their mechanisms of action and they can be used in the treatment of leishmaniasis. Owing to these compounds have shown promise in vitro, it is necessary to conduct more detailed studies that identify their mechanisms of action and they can be used in the treatment of leishmaniasis. Thus, the continuity of tests that elucidate such paths is extremely important in the research of a disease so neglected. Nenhuma A leishmaniose é um importante problema de saúde pública, afetando milhares de pessoas anualmente. O tratamento dessa doença negligenciada apresenta várias limitações, as drogas utilizadas para tratamento dos pacientes possuem alta toxicidade, efeitos adversos graves, difícil administração, e custo elevado. Sendo a terapêutica dessa patologia baseada principalmente na administração de antimoniais pentavalentes, que são utilizados desde 1945. Todos esses problemas resultam na descontinuação do tratamento pelos pacientes e, consequentemente surgimento de cepas resistentes. Devido a todas essas dificuldades de tratamento e a ausência de vacinas, há urgência na busca de novas drogas terapêuticas, que sejam eficazes contra os parasitos e que não apresentem malefícios para o paciente. Nesse contexto, este trabalho avaliou a atividade anti-Leishmania de derivados tiossemicarbazônicos-acridínicos e do fármaco de referência, anfotericina B, contra formas promastigotas e amastigotas axênicas de Leishmania infantum e a sua citotoxicidade frente a eritrócitos humanos. Os resultados demonstraram que os derivados tiossemicarbazônicos-acridínicos (GLDL 03 e GLDL 06) e o fármaco de referência, anfotericina B, apresentaram atividade contra formas promastigotas de L. infantum, com CI50 de 3,512μg/mL, 5,279 μg/mL e 0,955 μg/mL, respectivamente. Os compostos GLDL 03 e GLDL 06 e a anfotericina B, também se mostraram ativos contra as formas amastigotas axênicas de L. infantum, com valores de CE50 6,201 μg/mL, 7,550μg/mL, 0,476 μg/mL, nesta sequência. Foi observado que os derivados tiossemicarbazônicos-acridínicos possuem atividade biológica anti-Leishmania relevante contra as formas celulares do parasita e não apresentaram toxicidade para as células sanguíneas humanas. Visto que esses compostos se apresentaram promissores in vitro, cabe a realização de estudos mais detalhados que identifiquem os seus mecanismos de ação e eles possam vir a serem utilizados no tratamento da leishmaniose. Dessa forma, a continuidade de testes que elucidem tais caminhos é de extrema importância na pesquisa de uma doença tão negligenciada.

Chikungunya virus (CHIKV) is an alphavirus that causes feverish illness accompanied by joint pain. The dysregulation of the inflammatory immune response may be related to the development of chronicity of the disease that is accompanied by milder, but relapsing and persistent joint symptoms that may cause movement limitation. In this context, the understanding of the role of CD8+ T lymphocytes and the viral combat mechanisms in CHIKV infection are important in understanding the disease immunopathology. Studies of the acetylcholine role influencing immune responses have been conducted and in recent years the cholinergic system has been associated with inflammatory and anti-inflammatory immune responses. Due to the severity of inflammatory symptoms in CHIKV infection, there is an urgency to search for new molecules with bioactive and/or pharmacological activities. Natural products are a source of molecules with various biological activities. Alkamides are described by various biological activities, including anti-inflammatory activity. Given the above, the objective of this work was to study the phenotypic characteristics of peripheral CD8+ T lymphocytes in CHIKV infection in humans, the immunomodulatory role of Riparin III in these cells and to investigate the participation of cholinergic receptors in the phenotypic modulation of these lymphocytes in this infection. To perform the assays, leukocytes from acute and chronic infection patients and healthy individuals were obtained, followed by labeling with ex vivo extracellular and intracellular antibodies and after treatment with drugs in an in vitro study to evaluate phenotypic characteristics of CD8+ T cells and the Riparina III immunomodulatory role by the flow cytometry method. The results obtained in this work demonstrated that: 1- CD8+ T lymphocytes are activated in both acute and chronic phase of infection by increasing the expression of CD69 activation marker. 2- They have cytotoxic mechanism activated by the expression of cytotoxic molecules (Granzima B and Perforin) in the acute phase in relation to healthy individuals. 3- Express increase of death markers CD95 and CD95L in both stages of the disease. 4- There is an increase in IL17A production by these lymphocytes in the acute and chronic phase of infection and a decrease in IL10R expression have also been demonstrated. 5- There was no increase or decrease in PD-1 expression by these cells, demonstrating that these lymphocytes are not subjected to exhaustion. 6- Riparina III has in vitro reliability because it does not alter cell viability in hemolytic activity and PBMC tests by the MTT method. 7- Riparina III was able to negatively modulate IL-17A production mainly in the acute phase of infection and negatively modulated the expression of INF-γ, evidencing its anti-inflammatory role. 8- Riparina III increased the expression of IL-10R, which allows the increased interaction of IL-10 with its receptor, reaffirming the anti-inflammatory role of this molecule. 9- The antiinflammatory effect of Riparina III on CD8 + T cells was not related to cholinergic receptor modulation, due to the non-alteration of phenotypic characteristics of these lymphocytes when treated with different drugs (PNU, MLA, Atropine) and Riparina III. Therefore, it can be concluded from the data obtained in this work that CD8 + T lymphocytes are strongly involved in the cellular response in acute CHIKV infection and the phenotypic characteristics of these cells may be directly related to the development of symptoms observed in this infection. In addition, Riparina III has an anti-inflammatory immunomodulatory effect on CD8 + T lymphocytes in CHIKV-infected patients in the acute phase of the disease mainly by decreasing inflammatory cytokine levels in these lymphocytes. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES O vírus da chikungunya (CHIKV) é um alfavírus que causa doença febril acompanhada de dores articulares. A desregulação da resposta imune inflamatória pode estar relacionada ao desenvolvimento de cronicidade da doença que é acompanhada de sintomas articulares mais leves, porém recidivantes e persistentes podendo causar limitação de movimento. Nesse contexto, o entendimento do papel dos linfócitos T CD8+ e os mecanismos de combate virais na infecção por CHIKV são importantes na compreensão da imunopatologia da doença. Estudos do papel acetilcolina influenciando repostas imunes têm sido conduzidos e nos últimos anos o sistema colinérgico tem sido associado a respostas imunes inflamatórias e anti-inflamatórias. Devido a gravidade dos sintomas inflamatórios na infecção CHIKV há uma urgência na busca de novas moléculas com atividades bioativas e/ou farmacológicas. Os produtos naturais constituem uma fonte de moléculas com diversas atividades biológicas. As alcamidas são descritas por diversas atividades biológicas, dentre elas a atividade anti-inflamatória. Diante do exposto, o objetivo deste trabalho foi estudar as características fenotípicas de linfócitos T CD8+ periféricos na infecção por CHIKV em humanos, o papel imunomodulador da Riparina III nestas células e investigar a participação de receptores colinérgicos na modulação fenotípica desses linfócitos nesta infecção. Para realização dos ensaios, leucócitos de pacientes em fase aguda e crônica da infecção e indivíduos saudáveis foram obtidos e em seguida foi realizada marcação com anticorpos extracelulares e intracelulares ex vivo e após o tratamento com as drogas em estudo in vitro para avaliação de características fenotípicas de células T CD8+ e do papel imunomodulador da Riparina III pelo método de citometria de fluxo. Os resultados obtidos neste trabalho demonstraram que: 1- Os linfócitos T CD8+ estão ativados tanto na fase aguda quanto na fase crônica da infecção pelo aumento da expressão do marcador de ativação CD69 em relação. 2- Possuem mecanismo citotóxico ativado pela expressam de moléculas citotóxicas (Granzima B e Perforina) na fase aguda em relação aos indivíduos saudáveis. 3- Expressam aumento de marcadores de morte CD95 e CD95L em ambas as fases da doença. 4- Ocorre o aumento da produção de IL17A por esses linfócitos na fase aguda e crônica da infecção e diminuição da expressão de IL10R também foram demonstradas. 5-Não houve aumento ou diminuição da expressão de PD-1 por essas células, demonstrando que esses linfócitos não estão submetidos à exaustão. 6- A Riparina III possui confiabilidade in vitro por não alterar a viabilidade das células em testes de atividade hemolítica e PBMC pelo método de MTT. 7- A Riparina III foi capaz de modular negativamente a produção de IL-17A principalmente em fase aguda da infecção e modulou negativamente a expressão de INF-γ, evidenciando seu papel anti-inflamatório. 8- A Riparina III aumentou a expressão de IL-10R, o que permite o aumento interação da IL-10 com seu receptor, reafirmando o papel antiinflamatório dessa molécula. 9- O efeito anti-inflamatório desempenhado pela Riparina III em células T CD8+ não foi relacionado à modulação em receptores colinérgicos, pela não alteração de características fenotípicas desses linfócitos frente ao tratamento com diferentes drogas (PNU, MLA, Atropina) e a Riparina III. Logo, pode-se concluir com os dados obtidos neste trabalho que os linfócitos T CD8+ estão fortemente envolvidos na resposta celular na infecção aguda por CHIKV e as características fenotípicas dessas células podem estar diretamente relacionadas com o desenvolvimento dos sintomas observados nesta infecção. Além disso, a Riparina III tem um efeito imunomodulador anti-inflamatório nos linfócitos T CD8+ de pacientes infectados com CHIKV na fase aguda da doença principalmente pela diminuição dos níveis de citocinas inflamatórias nesses linfócitos.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq O quadro denominado de estresse oxidativo parece ser um gatilho para o desenvolvimento de inúmeras patologias. Nesse cenário, a resposta inflamatória pode tornar-se um vilão para a homeostase, colocando em risco importantes vias de sinalização celular e nuclear. Frente a isso, o esforço em diminuir as sequelas de vias metabólicas disfuncionais tem ganhado força. Atualmente, muitos estudos têm proposto o uso de polifenois para reduzir uma resposta inflamatória exacerbada. O Resveratrol é um potente alvo por apresentar atividade antioxidante e funções biológicas importantes, sendo conhecido por exercer atividades cardioprotera, anticâncer, anti-inflamatória, neuroprotetora, entre outras. Nesse contexto, a fim de melhor elucidar como este antioxidante regula a inflamação, e revelar o perfil de transcrição gênica durante a resposta inflamatória em células expostas ao Resveratrol, foi utilizado o modelo celular de monócitos - U937. As células foram estimuladas com LPS por 24 h e co-incubadas com Resveratrol (15 μM) durante 4 h. Nossos resultados mostraram através de ensaios in vitro de viabilidade celular e apoptose, que o polifenol estudado não alterou a viabilidade celular como também não induziu morte celular programada. Através do sequenciamento do RNA mensageiro pela plataforma 454 foi revelado 8.671 genes diferencialmente expressos, sendo analisados os de fold change ≥2.0 e ≤-2.0. Os genes up regulados foram principalmente associados à transcrição, processos metabólicos, sistema imunológico e ciclo celular, enquanto que os genes down regulados estiveram associados aos processos de resposta inflamatória, transcrição e remodelação da cromatina. Comparando os dados do transcriptoma com as análises in vitro por imunoprecipitação e expressão proteica, observamos que o Resveratrol foi capaz de modular características epigenéticas como acetilação e metilação de histonas e não histonas. Pela primeira vez foi observada uma diminuição no padrão de acetilação de APE1/Ref-1 sem afetar a sua atividade de reparo. Em resumo, este estudo elucidou importantes processos biológicos relacionados ao efeito anti-inflamatório do Resveratrol, mostrando que o mesmo atua na regulação transcricional de genes relacionados a inflamação. The so-called oxidative stress seems to be a trigger for the development of numerous pathologies. In this scenario, the inflammatory response may become a villain for homeostasis, putting cell and nuclear signaling pathways at risk. Faced with this, the effort to reduce the sequelae of dysfunctional metabolic pathways has gained strength. Currently, many studies have proposed the use of polyphenols to reduce an exacerbated inflammatory response. Resveratrol is a potent target because of its antioxidant activity and important biological functions. It is known to exert cardioprotective, anti-cancer, anti-inflammatory, neuroprotective activities. In this context, in order to better elucidate how this antioxidant regulates inflammation, and to reveal the gene transcription profile during the inflammatory response in cells exposed to Resveratrol, U937 monocytic cells were used. Cells were stimulated with LPS for 24 h e co-incubated with Resveratrol (15 μM) for 4 h. Our results showed that the polyphenol studied was not able to alter cell viability as well as to induce programmed cell death by cell viability and apoptosis assays. Through Genome-wide RNA sequencing by 454 platform was revealed 8.671 differentially expressed genes, with fold change ≥2.0 and ≤-2.0 being analyzed. The upregulated genes were mostly associated to transcription, metabolic processes, immune system and cell cycle, while the downregulated genes were associated to processes as inflammatory response, transcription and chromatin remodeling. Comparing the transcriptome data with an in vitro analysis by immunoprecipitation and protein expression, we observed that Resveratrol is able to modulate epigenetic features as of histones and nonhistones acetylation and methylation. For the first time a decrease in APE1/Ref-1 acetylation pattern was observed without affecting your repair activity. In summary, this study elucidated important biological processes related to the anti-inflammatory effect of Resveratrol, showing that it acts on the transcriptional regulation of genes related to inflammation.

Leishmaniasis treatment is based on the use of pentavalent antimonial compounds, as first choice drugs; even though they are highly toxic presenting several side effects. This diseases complex is a public health problem, with challenges in the new therapies identification that allow a greater adhesion and better quality in the treatment of the patients. Due to high toxicity and drug resistance, the search of new alternatives for the treatment of leishmaniasis is justified. In this context, this study aimed to evaluate the anti-Leishmania activity of Morita-Baylis-Hillman adducts in vitro and ex vivo experimental models. Activity of the compounds on the promastigote and axenic amastigote forms of the Leishmania parasite, in addition to the human peripheral blood monuclear cells, were evaluated by the MTT colorimetric test (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium). The rate of infection in human monocytes and the cell death profile of promastigote forms were assessed by flow cytometry. In addition, hemolytic activity on human erythrocytes and indirect evaluation of nitric oxide levels by Griess's reagent were measured. Screening of 36 molecules from the Morita-Baylis-Hillman reaction on L. donovani's promastigote forms had MBH-A12 and MBH-A13 as one of the lowest IC50 values (4.71 and 0.37 μg/mL), besides they present the same chemical synthesis process, being thus selected for the continuation of the biological evaluation. These two substances also showed significant inhibition of growth (IC50) on the promastigote forms of L. infantum (5.6 and 5.3 μg/mL), L. amazonensis (13.2 and 13.4 μg/mL) and L. braziliensis (16.32 and 19.09 μg/mL). In addition, they showed activity on the axenic amastigote forms of L. infantum (EC50 of 9.08 and 10.76 μg/mL) and L. amazonensis (EC50 of 13.4 and 10.4 μg/mL), demonstrating effect on the diversity of Leishmania species that cause different clinical manifestations. Among the tested concentrations, these drugs did not present toxicity to peripheral blood mononuclear cells and human erythrocytes, thus demonstrating selectivity indices to parasite tropism. In the infection model evaluation of human monocytes, we did not observe statistical difference with the substances treatment, nor in modulation via nitric oxide synthesis. Cell death profile in Leishmania spp. suggests a pattern involving apoptosis death mechanism for MBH-A12 and MBH-A13 adducts, different from amphotericin B which also leads to the necrosis process. Thus, we concluded that the Morita-BaylisHillman adducts are compounds with expressive anti-Leishmania activity in an in vitro model, being molecules that need to be better investigated, regarding to the action mechanism, in the search for new treatments for leishmaniasis. O tratamento das leishmanioses é baseado na utilização de compostos antimoniais pentavalentes, como medicamentos de primeira escolha; sendo drogas altamente tóxicas e que apresentam vários efeitos colaterais. Esse complexo de doenças é um problema de saúde pública, com desafios na identificação de novas terapias que permitam uma maior adesão e melhor qualidade no tratamento aos pacientes. Com a elevada toxicidade e o aparecimento de resistência às drogas, se justifica a busca de novas alternativas para o tratamento das leishmanioses. Neste contexto, este trabalho teve como objetivo avaliar a atividade anti-Leishmania dos adutos de Morita-Baylis-Hillman em modelos experimentais in vitro e ex vivo. A atividade dos compostos sobre as formas promastigotas e amastigotas axênicas do parasito Leishmania, além das células monucleares de sangue periférico humano foram avaliadas pelo teste colorimétrico do MTT (brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-yl)-2,5difenil tetrazólio). A taxa de infecção em monócitos humanos e o perfil de morte celular de formas promastigotas foram avaliados por citometria de fluxo. Além disso, foi mensurada a atividade hemolítica sobre eritrócitos humanos e a avaliação indireta dos níveis de óxido nítrico pelo reagente de Griess. A triagem das 36 moléculas oriundas da reação de Morita-Baylis-Hillman sobre as formas promastigotas de L. donovani, teve os MBH-A12 e MBH-A13 com um dos menores valores de CI50 (4,71 e 0,37 µg/mL), além de que apresentam o mesmo processo de síntese química, sendo assim selecionados para a continuação da avaliação biológica. Essas duas substâncias também apresentaram inibição de crescimento (CI50) significativa sobre as formas promastigotas de L. infantum (5,6 e 5,3 µg/mL), L. amazonensis (13,2 e 13,4 µg/mL) e L. braziliensis (16,32 e 19,09 µg/mL); além disso, apresentaram atividade sobre as formas amastigotas axênicas de L. infantum (CE50 de 9,08 e 10,76 µg/mL) e L. amazonensis (CE50 de 13,4 e 10,4 µg/mL), demonstrando efeito sobre a diversidade de espécies de Leishmania que causam manifestações clínicas diferentes. Dentro das concentrações testadas, essas drogas não apresentaram toxicidade para células mononucleares de sangue periférico e eritrócitos humanos, apresentando assim índices de seletividade com tropismo para o parasito. No modelo de avaliação da taxa de infecção em monócitos humanos, não observamos diferença estatística com o tratamento das substâncias, nem modulação via síntese de óxido nítrico. O perfil de morte celular em promastigotas de Leishmania spp. sugere um padrão envolvendo mecanismo de morte via apoptose para os adutos MBH-A12 e MBH-A13, diferente da anfotericina B que também leva ao processo de necrose. Assim, conclui-se que os adutos de MoritaBaylis-Hillman são compostos com atividade anti-Leishmania em modelo in vitro, sendo moléculas a serem investigadas quanto ao mecanismo de ação, na busca por novos tratamentos para as leishmanioses.

The most of living organisms have a habitual cycle from which they perform all their activities. These are generated internally by the molecular clock and synchronized by the abiotic factors to a period around 24 hours. For fish, the photoperiod is one of the environmental synchronizers that has a great influence on the molecular clock, coordinating environmental factors with its physiology. One of the systems that seems to be under the influence of the endogenous molecular clock is the endocrine system, precisely the somatotropic axis. To investigate the relationship between the clock and the endocrine system, we aimed to analyze the expression of a molecular clock gene, clock1a, and the gene of the somatotropic axis, gh, of Nile tilapia (Oreochromis niloticus) fingerlings when exposed to photoperiods from 12h: 12h light: dark (C: E) and 24h (C: C); And to verify the influence of the photoperiod on the length, mass, body growth and condition factor. The fingerlings were kept in the photoperiod for 52 days and biometry was performed on days 0, 7, 22, 37 and 52. At the end of the exposure, the animals were sacrificed and the brain was extracted for quantification of gene expression. Regarding the length, we observed no differences as a function of the photoperiod, except at times 22 and 37 (days), whose averages were 4.95 ± 0.36, 4.75 ± 0.41 and 6.65 ± 0.66 , 6.39 ± 0.68cm for C: C and C: E, respectively. Regarding body mass, difference was only observed on day 7, with 1.08 ± 0.23 C: C and 0.98 ± 0.23g C: E, respectively. Regarding the growth, no significant differences between treatments were observed, except between day 7 and 37 that presented a differentiated growth between the photoperiods. Regarding the condition factor, the data did not reveal significant differences. The analyzed genes did not present a circadian pattern of expression, but the clock1a gene showed differences in their daily levels, that is, between the sampling points for the two photoperiods. Also, larger expression oscillations were also observed for the C: E photoperiod for the clock1a gene. The gh, in turn, did not present a biological rhythm as well as absence of differences between the times. Finally, the possibility of the correlation between the genes mentioned above in their respective photoperiod conditions was tested. However, the resulting scores were highly distant from any correlation. In summary, exposure to photoperiods did not significantly interfere with the biometric variables and between the molecular clock genes and the somatotropic axis. A maioria dos organismos vivos possuem um ciclo habitual do qual desenvolve todas suas atividades. Estas são geradas internamente pelo relógio molecular e sincronizadas pelos fatores abióticos a um período em torno de 24 horas. Para os peixes, o fotoperíodo é um dos sincronizadores ambientais que apresenta uma grande influência sobre o relógio molecular, coordenando fatores ambientais com sua fisiologia. Um dos sistemas que parece estar sob a influência do relógio molecular endógeno é o sistema endócrino, precisamente, o eixo somatotrópico. Para investigar a relação entre o relógio e o sistema endócrino, objetivamos analisar a expressão de um gene do relógio molecular, o clock1a, e o gene do eixo somatotrópico, gh, de alevinos de tilápia-do-Nilo (Oreochromis niloticus) quando expostos aos fotoperíodos de 12h:12h claro:escuro(C:E) e 24h (C:C); e verificar a influência do fotoperíodo sobre o comprimento, massa, crescimento corporal e fator de condição. Os alevinos foram mantidos no fotoperíodo por 52 dias e a biometria foi realizada nos dias 0, 7, 22, 37 e 52. Ao final da exposição, os animais foram sacrificados e o cérebro foi extraído para quantificação da expressão gênica. Em relação ao comprimento não observamos diferenças em função do fotoperíodo, exceto, nos tempos 22 e 37 (dias), cujas médias foram de 4,95±0,36, 4,75±0,41 e 6,65±0,66, 6,39±0,68cm para o C:C e C:E, respectivamente. No tocante a massa corporal, tevese diferença apenas no dia 7, com 1,08±0,23 C:C e 0,98±0,23g C:E, respectivamente. No que se refere ao crescimento, não foram observadas diferenças significativas entre os tratamentos, exceto entre o dia 7 e 37 que apresentaram um crescimento diferenciado entre os fotoperíodos. Com relação ao fator de condição, os dados não revelaram diferenças significativas. Os genes analisados não apresentaram padrão circadiano de expressão, mas o gene clock1a, apresentou diferenças nos seus níveis diários, isto é, entre os pontos de amostragem para aos dois fotoperíodos. Também foram observadas oscilações de expressão maiores para o fotoperíodo C:E para o gene clock1a. O gh, por sua vez, não apresentou um ritmo biológico como também ausência de diferenças entre os tempos. Por fim, foi testada a possibilidade de uma correlação entre os genes supracitados nas suas respectivas condições de fotoperíodo. Contudo, os escores resultantes foram altamente distantes de qualquer correlação. Em síntese, a exposição aos fotoperíodos não interferiram de maneira significativa em relação as variáveis biométricas e entre os genes do relógio molecular e do eixo somatotrópico.

A inflamação é composta de uma reação vascular e outra celular, conferindo diferentes reações de tecidos e células, tanto do ambiente intravascular, como o do ambiente extravascular. À medida que o processo inflamatório ocorre, proteases da coagulação, em especial a trombina (FIIa), são capazes de desencadear diversas respostas celulares na biologia vascular e por isso, frequentemente é observada a ativação de outros sistemas biológicos, levando à complicações durante um evento inflamatório, como a trombose e a angiogênese. Assim, moléculas antagonistas desses eventos são modelos interessantes para o desenvolvimento de novos fármacos anti-inflamatórios. Neste contexto, destacam-se os glicosaminoglicanos (GAGs), os quais interagem com diversas proteínas envolvidas em processos biológicos importantes, incluindo inflamação e coagulação. Por essa razão, o presente trabalho teve por objetivo avaliar os potenciais anti-inflamatórios, antitrombótico, antiangiogênico, bem como anticoagulante de GAGs do tipo dermatam sulfato (DS) extraídos do cefalotórax do camarão Litopenaeus vannamei. O composto foi obtido após proteólise e purificação por cromatografia de troca-iônica. Após total digestão por liases que digerem compostos tipo DS (condroitinase ABC), sua natureza do tipo DS foi revelada, sendo então denominado DSL. O composto do camarão mostrou reduzido efeito anticoagulante pelo ensaio de TTPa, porém apresentou alta atividade anti-IIa, diretamente e via Cofator II da heparina. Sobre a inflamação, o composto apresentou significativo efeito inibitório com redução de citocinas pró-inflamatórias. Potenciais inibitórios foram relatados no ensaio antitrombótico e antiangiogênico, sendo este último dose-dependente. Quanto à atividade anti-hemostática, o polissacarídeo não induziu efeito hemorrágico significativo. Assim, os resultados exibidos pelo composto tipo DS isolado do camarão, apontam este glicosaminoglicano como alvo biotecnológico com perspectivas para o desenvolvimento de novas drogas multipotentes. Inflammation is combined of a vascular and a cellular reaction, resulting in different cells and tissue responses, both the intravascular and extravascular environment. As the inflammatory process occurs, coagulation proteases, in particular thrombin (FIIa), are able to initiate various cellular responses in vascular biology and therefore is often observed activation of other biological systems, leading to complications during an event inflammatory, such as thrombosis and angiogenesis. Thus, antagonists molecules of these events are interesting models for the development of novel anti-inflammatory drugs. Thereby, it is worth stressing the glycosaminoglycans (GAGs), which are able to interact with several proteins involved in important biological processes, including inflammation and coagulation. Therefore, this study aimed to evaluate the anti-inflammatory, antithrombotic and anti-angiogenic potentials, as well anticoagulant of a dermatan sulfate-like GAG (DS) extracted from the Litopenaeus vannamei cephalotorax. The compound was obtained after proteolysis and purification by ion-exchange chromatography. After total digestion by DS-like compounds digesting lyases (chondroitinase ABC), the DS-like nature was revealed, and then called DSL. The shrimp compound showed reduced anticoagulant effect by the aPTT assay, but high anti-IIa activity, directly and through heparin cofactor II. On inflammation, the compound had a significant inhibitory effect with the reduction of proinflammatory cytokines. Potential Inhibitory were reported in the antithrombotic and anti-angiogenic assay, the latter being dose dependent. As for anti-hemostatic activity, the polysaccharides did not induced significant bleeding effect. Thus, the results shown by the shrimp DS-like compound indicate this glycosaminoglycan as a biotechnology target with prospects for the development of new multipotent drugs.

A dengue é uma doença infecciosa causada por um arbovírus (gênero Flavivirus, família Flaviviridae), transmitido pela picada de artrópodes, principalmente por mosquitos da espécie Aedes aegypti. Existem quatro tipos diferentes de vírus da dengue: (DENV-1, DENV-2, DENV-3 e DENV-4), que ocorre principalmente em áreas tropicais e subtropicais do mundo, inclusive no Brasil. A infecção por dengue atualmente é considerada um grave problema de saúde público mundial. Segundo a Organização Mundial de Saúde, cerca de 50-100 milhões de pessoas se infectam anualmente em mais de 100 países do mundo. O objetivo deste estudo foi descrever o perfil epidemiológico da dengue no estado da Paraíba no período entre os anos de 2011 a 2014. Uma pesquisa descritiva foi realizada, a qual utilizou dados secundários registrados no SINAN da Paraíba, onde foram analisados os casos notificados de acordo com variáveis como gênero, faixa etária, escolaridade, sorotipo, meses de notificação, classificação clínica e evolução da doença. De 2011 a 2014 na Paraíba foram notificados 53.373 casos suspeitos de dengue, dos quais 52,4% (28.020) foram confirmados. Em 2011 foram confirmados 53% (8.646) dos casos, em 2012 os confirmados foram equivalente a 58% (6.867), o ano de 2013 registrou 48% (8.827), e em 2014 com 49,5% (3.680). Houve predominância do sexo feminino (58%) dos casos. A média de idade dos confirmados foi de 18-60 anos representando 64,2%, quando considerados os anos de estudo. Quando analisado a evolução da doença, observou-se que 89% dos indivíduos confirmados com dengue evoluíram para a cura. Foram registrados 48 óbitos nesse período. O sorotipo DENV-1 foi predominante de 2011 a 2013, seguido do DENV-4. A classificação dengue clássico foi equivalente a 97% dos casos, dengue com complicações foi de apenas 0,1%, febre hemorrágica da dengue foi de 0,5% e por último a síndrome do choque da dengue. Os meses de maior notificação da doença foram no primeiro semestre do ano, com maior incidência entre os meses de março a junho. Conclui-se que as epidemias de dengue na Paraíba apresentaram diferenças importantes, e um diagnóstico imediato da infecção aliado a um diagnóstico molecular dos sorotipos circulantes na comunidade poderiam ser medidas de prevenção e controle para riscos potenciais de formas graves da doença na população. Dengue is an infectious disease caused by an arbovirus (genus Flavivirus, family Flaviviridae), mainly transmitted by mosquitoes of the species Aedes aegypti. There are four different serotypes of dengue virus: (DENV-1, DENV-2, DENV-3 and DENV-4), which occurs mostly in tropical and subtropical areas of the world, including Brazil. Dengue infection is now considered a serious public health problem worldwide. According to the World Health Organization, about 50-100 million people are infected annually in more than 100 countries worldwide. The objective of this study was to analyze the epidemiology of dengue in the state of Paraiba, in the 2011 to 2014 period. A descriptive study was conducted, which used secondary data recorded in the SINAN of Paraiba, where the reported cases were analyzed according to variables such as gender, age, education, serotype involved viruses, months of notification, clinical classification and evolution of disease. From 2011 to 2014 in Paraiba were reported 53 373 suspected cases of dengue, of which 52.5% (28,020) were confirmed. In 2011 have been confirmed 53.4% (8,646) of cases in 2012 confirmed cases were equivalent to 60% (6867), the year 2013 recorded 48% (8827) and in 2014 with 49.6% (3,680). There was a predominance of infection in females, which was equivalent to 58% of cases. The age of patients with confirmed diagnosis ranged from 1 to 60, average age 35, in which the age group between 18-60 years accounted for 64.2% of cases. When analyzing the evolution of the disease, it was observed that 89% of patients with confirmed diagnosis of dengue develop to cure. There were 48 deaths in this period. The DENV-1 serotype was predominant from 2011 to 2013, followed by DENV-4. The classic dengue classification was equivalent to 86.4% of cases. The complication rate was recorded in only 1.3% of cases, these 0.5% were classified as dengue hemorrhagic fever and 0.06% as of dengue shock syndrome. The months of notification of the disease were higher in the first half of the year, with higher incidence during the months from March to June. Our findings offer insights into the understanding the dengue problem in the state of Paraiba, Brazil.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) O presente estudo teve como objetivo extrair, caracterizar e realizar uma análise prospectiva de atividades farmacológicas de polissacarídeos sulfatados da macroalga verde Caulerpa prolifera. Sete frações (CP-0.3/CP-0.5/CP-0.7/CP-0.9/CP-1.1/CP-1.5/CP-2.0) foram obtidas de C. prolifera por proteólise alcalina seguida de precipitação sequencial em acetona. As análises físico-químicas indicaram que C. prolifera sintetiza diferentes populações de heteropolissacarídeos sulfatados. Na análise da atividade anticoagulante, todas as frações, exceto CP-0.3, apresentaram influência sobre a via intrínseca da coagulação. Todas as frações apresentaram atividade antioxidante em 6 ensaios diferentes, sendo mais pronunciadas no teste de sequestro de peróxido de hidrogênio, com destaque para CP-0.3, CP-0.7 e CP-0.9 (quando se obteve até 61% de sequestro), no teste de quelação férrica (com destaque para CP-0.9, com 56% de quelação) e no teste de quelação cúprica (com destaque para CP-2.0, com quelação de 78%). Com relação a ação imunomoduladora, a presença de CP-0.3, CP-0.7 e CP-0.9 promoveu aumento da produção de óxido nítrico (ON) em macrófagos em até 48, 142 e 163 vezes, respectivamente. De maneira oposta, a síntese de ON caiu em 73% quando macrófagos ativados por LPS foram incubados concomitantemente com CP-2. A atividade anti-adipogênica das frações também foi avaliada e o destaque ficou com CP-1.5, na presença desta fração (0,2 mg/mL) a diferenciação de pré-adipócitos (3T3-L1) em adipócitos foi reduzida em 60%. Vale salientar, que a viabilidade das células 3T3-L1 não foi afetada pela presença de CP-1.5. O que não ocorreu com células de câncer cervical humano (HeLa) e de adenocarcinoma renal humano (786-0), já que a viabilidade dessas células caiu quando elas foram expostas as frações, o destaque foi para a redução da viabilidade em torno de 55% quando as células HeLa foram incubadas com CP-0.3, CP-0.5 e CP-0.9. Já com 786-0, o melhor resultado encontrado foi com o uso da fração CP-1.5, quando se obteve uma redução de ~75% da viabilidade celular. Não se identificou atividade leishmanicida ou microbicida contra a Klebsiella pneumoniae Carbapenemase (KPC) com ao se testar as frações contra estes organismos. No entanto, a proliferação de Staphylococcus epidermidis foi diminuída em 30% na presença de CP-1.5. Outro resultado relevante, foi a observação de que a formação de cristais de oxalato cálcio na presença das frações era alterada. Destaca-se CP-0.3, CP-0.5 e CP-1.1, já que na presença dessas frações identificou-se apenas a formação de cristais dihidratados e de tamanho médio 80% menor do que aquele verificado no grupo controle. Dados oriundos da avaliação do potencial zeta dos cristais formados na presença das frações e da avaliação de imagens de microscopia confocal de cristais formados na presença das frações marcadas fluorescentemente levaram a hipótese de que os polissacarídeos presentes nas frações interagem com o cálcio da rede cristalina e isso afeta o crescimento e a morfologia dos cristais formados. Os resultados aqui descritos levam a sugestão de os principais agentes responsáveis pelas atividades observadas com as frações seriam os polissacarídeos sulfatados, portanto passos posteriores de purificação desses polímeros, bem como a investigação de seus mecanismos de ação devem ser investigados. Por fim, os dados aqui obtidos levam a observação de que as frações ricas em polissacarídeos obtidas da alga C. prolifera apresentam um potencial multiterapêutico por serem anticoagulantes, antioxidantes, imunomoduladores, citotóxicas contra células tumorais, anti-adipogenicos, antibacterianas e alterarem a formação de cristais de oxalato de cálcio. This study aimed to extract, characterize and conduct a prospective analysis of pharmacological activities of sulfated polysaccharides from green seaweed Caulerpa prolifera. Seven fractions (CP-0.3/CP-0.5/CP-0.7/CP-0.9/CP-1.1/CP-1.5/CP-2.0) were obtained from C. prolifera by alkaline proteolysis followed by sequential precipitation in acetone. The physicochemical analyzes indicated that C. prolifera synthesizes a homogalactan (CP-0.9) and different populations of sulfated heteropolysaccharides. In the analysis of anticoagulant activity, all fractions except CP-0.3, influenced the intrinsic coagulation pathway. All fractions showed antioxidant activity in six different assays being more pronounced in hydrogen peroxide scavenging assay, especially CP-0.3, CP-0.7 and CP-0.9 (which obtained 61% of hydrogen peroxide scavenging), in ferric chelation assay (especially CP-0.9 with 56% chelation) and cupric chelation assay (especially CP-2.0 with 78% chelation). With respect to immunomodulatory activity, the presence of CP-0.3, CP-0.7 and CP-0.9 showed an immunogenic potential, increasing the production of nitric oxide (NO) by 48, 142 and 163 times, respectively. Conversely, the NO synthesis fell 73% after the activation of macrophages by LPS, incubated concurrently with CP-2.0. The anti-adipogenic activity of the fractions was also evaluated and CP-1.5 was able to reduce the differentiation of pre-adipocytes (3T3-L1) into adipocytes by 60%, without affecting the cell viability. The fractions CP-0.3, CP-0.5 and CP-0.9 reduced the viability of the HeLa cells (human cervical adenocarcinoma) by 55% and CP-1.5 reduced the viability of the 786-0 cells (human renal adenocarcinoma) by 75%. Leishmanicidal activity and microbicide effect against Carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae (KPC) have not been identified. However, the viability of Staphylococcus epidermidis was reduced by 23.8% in the presence of CP -1.5. All fractions were able to change the formation of calcium oxalate crystals. CP-0.3, CP-0.5 and CP-1.1 only promoted the formation of COD type crystals with a very small size (1 μm). Confocal microscopy and zeta potential data of crystals formed in the presence of the samples showed that the polysaccharides present in the fractions must interact with calcium ions present throughout the crystal lattice, affecting the growth and morphology of crystals The results described herein indicate that the fractions rich in polysaccharides obtained from the green seaweed C. prolifera present a multi therapeutic potential, and subsequent purification steps, as well as research on the mechanisms of action by which these polymers act should be investigated.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq A dengue é uma doença viral transmitida ao homem pela picada de mosquitos do gênero Aedes, sendo o principal vetor urbano o Aedes aegypti. Atualmente tem causado, em escala global, considerável mortalidade e morbidade, o que a torna um grave problema de saúde pública em todo o mundo. São conhecidos quatro sorotipos antigenicamente distintos: vírus dengue (DENV) tipo 1, DENV-2, DENV-3 e DENV-4. O objetivo desse estudo foi Descrever o perfil epidemiológico da dengue nos estados do Rio Grande do Norte (RN) e Paraíba (PB) durante o ano de 2013. Para isso, foram estudados casos suspeitos de dengue, recebidos pelo Laboratório de Biologia Molecular de Doenças Infecciosas e do Câncer (LADIC-UFRN), provenientes de diferentes unidades de saúde dos estados do RN e PB, no período compreendido entre janeiro e dezembro de 2013. O RNA viral das amostras de soro foi extraído através do QIAmp Viral Mini Kit, sendo seguido o protocolo descrito pelo fabricante. Para detecção e tipagem dos DENV, foi utilizada a metodologia descrita por Lanciotti (J. Clin. Microbiol,v.30, n.3, p.545-551, 1992). Foram estudados 478 casos suspeitos de dengue, sendo 252 (52,7%) do Rio Grande do Norte e 226 (47,3) da Paraíba. A infecção por DENV foi identificada em 29,7% (142/478) dos casos. Foi observada a co-circulação de três sorotipos virais: DENV-1 (9,8% [14/142]), DENV-2 (3,5% [5/142]) e DENV-4 (86,7% [123/142]). A faixa etária de 21-30 foi a mais acometida pela doença em todo o período de estudo, representando 23,9% dos casos. O gênero mais acometido foi o feminino, representando 63,3% dos casos. O município de maior circulação do Estado do Rio Grande do Norte foi Pau dos Ferros, com 8,2% (8/97) dos casos identificados. Já na Paraíba, o município mais afetado foi João Pessoa, com 80% (36/45) dos casos. Os meses de maior circulação viral no RN e PB foram Março e Agosto, respectivamente. Estes resultados são de grande importância para a compreensão da atividade dos vírus dengue nos estados do RN e PB, fornecendo dados para nortear as ações de controle da doença, em apoio aos programas locais de combate a dengue. Dengue is a viral disease transmitted by female mosquitoes from genus Aedes, the principal urban vector is Aedes aegypti. Actually dengue has caused, in global scale, substantial morbidity and mortality. Four serotypes (antigenically distinct) are known: DENV-1, DENV-2, DENV-3 and DENV-4. The objective of this study was described the epidemiological profile dengue in the states of Rio Grande do Norte (RN) and Paraíba (PB), 2013. For that, suspected cases of dengue were studied, received for Laboratory of Molecular Biology of infectious disease and cancer (LADIC-UFRN) from different Health Units from RN and PB between January and December of 2013. The viral RNA was obtained from serum samples of patient from health units from RN and PB. It were studied 478 suspected cases of dengue , 252 (52,7%) from Rio Grande do Norte and 226 (47,3%) from Paraíba, showeds a global rate of infection global prevalence of 29,7% (142/478). The co-circulation of three serotypes was observed: DENV-1 (9,8% [14/142]), DENV-2 (3,5% [5/142]) and DENV-4 (86,7% [123/142]). People between 21-30 years old were the most affected by the disease during all the period of the study, representing 63,7% of the cases in both states. The genus most affected was female, representing 63,3% of cases in both states. Pau dos Ferros, Rio Grande do Norte, had the highest circulation of disease, with 8,2% (8/97) of cases. In Paraíba, the city most affected was João Pessoa, with (80% (36/45) of cases. The months with the biggest viral circulation in RN and PB were March and August, respectively. These results are very important to understanding the dengue viral activity in RN and PB, providing data that can guide control actions of this disease in support to local control programs