Search

Infectious bursal disease (IBD), also known as Gumboro disease, is an acute, highly contagious viral disease of young chickens characterized by severe damage of the bursa of Fabricius and immunosupression. The disease is caused by bisegmented double-stranded RNA virus that is classified as a member of the Birnaviridae family. IBD can only be controlled and prevented by proper vaccination and biosecurity. Mild live vaccines dominated until the end of 1980s, when vaccination failures were reported worldwide. After that, vaccine of intermediate virulence strain is introduced, and lately, so called intermediate plus or hot vaccine with virulent vaccinal strain. We chose a new approach in development of vaccines with higher efficacy – intermediate vaccine against IBD with elevated titre. We developed production procedure and registered new lyophilised vaccine against Gumboro disease with 10-fold higher titre of vaccinal virus in relation with previous product. Master seed virus (VMG-91) was grown in SPF chicken embryonated eggs, infected tissue was homogenized and lyophilised with addition of PPGF stabilizer. Virus titre (≥4 log10 TCID50 per dose) is determined on cell culture of chicken fibroblasts. Safety and efficacy were determined in laboratory and field conditions. A ten-fold dose (≥5 log10 TCID50 per chicken) of the vaccine was given to one-day-old as well as 15-day-old specific pathogen free chickens by ocular route. Chickens were observed daily for next 21 days when they were scarified and their bursae were submitted for histological examination. The results reordered in both groups indicated mild to medium severe alterations of the bursa, but also the tendency of their recovery and repopulating with B cells. A commercial flock of 10000 chickens was vaccinated with minimal recommended dose (4 log10 TCID50 per chicken) via drinking water on day 12 of life. Antibody titres of the infectious bursal disease virus were assessed using FlockCheck ELISA kit on day 5, 12, 17, 26 and 40 of life. Significant increase in antibody titres were recorded, reaching relatively high and uniform mean titre at the age of 40 days. Five trials were carried out in field conditions on more than 100000 aniamls. The new vaccine (GUMBOKAL® IM FORTE SPF) against infectious bursal disease is immunogenic, and does not cause any adverse effect in broiler production under field conditions.

Uspoređen je imunosni odziv kokoši nesilica konzumnih jaja u pokusnim skupinama (2 x 9860 životinja) nakon primjene dviju različitih formulacija trovaljane inaktivirane uljne vakcine PESTIKAL®+EDS+IB sa standardnim (pripravak A) i povećanim sadržajem virusa newcastleske bolesti, sindroma pada nesivosti i zaraznog bronhitisa (pripravak B). Nesilice vakcinirane pripravkom A činile su pokusnu skupinu I, a one cijepljene pripravkom B pokusnu skupinu II. Kontrolna skupina od 6580 pilenki nije cijepljena inaktiviranom vakcinom. Pilenke su tijekom uzgoja vakcinirane živim vakcinama prema programu vakcinacije na farmi, a inaktiviranim vakcinama na kraju uzgoja, u dobi od 18 tjedana. Krv za serološke pretrage uzeta je na dan vakcinacije te 2, 3, 4, 9, 14, 18, 23, 28 i 34 tjedna nakon zadnje vakcinacije, a u kontrolnoj skupini u dobi 18, 27 i 46 tjedana. Titar protutijela inhibicije hemaglutinacije (IHA-titar) za virus newcastleske bolesti (VNB) između trećeg i tridesetčetvrtog tjedna nakon vakcinacije inaktiviranim vakcinama bio je u rasponu od 7.2 do 9.4 log2 u pokusnoj skupini I te od 7.8 do 9.0 log2 u skupini II. Titar protutijela ustanovljenih imunoenzimnim testom (ELISA) za virus zaraznog bronhitisa kokoši (VZBK) bio je tijekom promatranog razdoblja u rasponu od 8216 do 13427 u skupini I i u rasponu od 8156 do 13680 u skupini II. Titar inhibicije hemaglutinacije (IHA-titar) za virus sindroma pada nesivosti (VSPN) između trećeg i tridesetčetvrtog tjedna nakon vakcinacije bio je u rasponu od 5.6 do 8.2 log2 u skupini I te od 6.0 do 8.8 log2 u skupini II. U 46. tjednu života titar protutijela za virus newcastleske bolesti u pokusnim skupinama bio je 8-18 puta viši u odnosu na kontrolnu skupinu. Sustavno praćeni titri protutijela za VNB, VSPN i VZBK bili su tijekom pokusnog razdoblja na zadovoljavajućoj razini u nesilica obje pokusne skupine, bez obzira na formulaciju vakcine, odnosno na sadržaj antigena što ga je vakcina sadržavala.

Uspoređeni su različiti programi vakcinacije tovnih pilića protiv zarazne bolesti burze (ZBB) atenuiranim vakcinama koje su svadržavale soj Winterfield 2512 (10e3,5 EID50 po dozi) ili soj VMG '91 (10e3,0 ili 10e4,0 EID50 po dozi). Četiri jata jednodnevnih tovnih pilića (Ross ), svako po 19000 jedinki, useljena su u tjednim razmacima u zasebne nastambe iste farme i držana do 42 dana. Jedna je skupina (I) vakcinirana dvokratno, u dobi od 8 i 13 dana, sojem VMG '91 u količini od 10e3,0 EID50 po piletu. U drugoj su skupini (II) primijenjene iste vakcinacije s razlikom da su pilići u dobi od jednog dana vakcinirani sojem Winterfield 2512. Treća (III) i četvrta (IV) skupina su vakcinirane prema programu II skupine, ali su pilići III skupine u dobi od 13 dana te pilići IV skupine u dobi od 8 i 13 dana vakcinirani sojem VMG '91 u količini od l0e4,0, umjesto 10e3,0 EID50 po piletu. Sve vakcine su dane u pitkoj vodi. Protutijela za virus ZBB su određena imunoenzimnom probom (IDEXX) u dobi pilića od 1, 8, 13, 23, 33 i 42 dana. U pilića svih skupina su nađena naslijeđena protutijela za ovaj virus (1347 u I skupini, 1327 u II skupini, 2596 u III skupini i 1023 u IV skupini u dobi od jednog dana). Titri protutijela na kraju tova su bili značajno viši ukoliko su pilići u dobi od jednog dana vakcinirani sojem Winterfield 2512 (3277 u II skupini u usporedbi s 2326 u I skupini). Također se može zaključiti da soj VMG '91 u količini od 10e4,0 umjesto 10e3,0 EID50 nije značajno utjecao na konačne titre protutijela (3277 u II skupini, 3856 u III skupini i 3352 u IV skupini u dobi od 42 dana), ali je veći sadržaj vakcinalnog virusa potakao bržu tvorbu specifičnih protutijela (1377 u II skupini, 1931 u III skupini i 2413 u IV skupini u dobi od 33 dana).

Priređena je inaktivirana "split" vakcina protiv virusa newcastleske bolesti (VNB ). Nakon inaktivacije virusa formaldehidom, provedena je kontrolirana solubilizacija virusa pomoću neionskog detergenta Tweena 80. Vakcina je priredena u obliku voda-u-ulju-u-vodi emulzije s malim sadržajem mineralnog ulja. Istražen je serološki odziv u pilenki vakciniranih različitim dozama inaktivirane "split" vakcine protiv newcastleske bolesti (PESTlKAL FORTE), te odnos doze i serološkog odziva. Takoder je istražen serološki odziv pura u dobi l6 tjedana, vakciniranih istom vakcinom. Pilenke su vakcinirane u dobi od 8 tjedana s različitim dozama (l ml, 0,5 ml i 0,25 m1) inaktivirane "split" vakcine protiv VNB-a. Pure su vakcinirane s po 1 m1 i 0,5 ml iste vakcine. Razina specifičnih antitijela u vakciniranih pilenki bila je u porastu do kraja pokusa. ELISA titar antitijela u serumu pilenki 28. dan nakon vakcinacije pokazao je da serološki odziv ovisi o dozi vakcine. U pura vakciniranih s 1 ml inaktivirane "split" vakcine protiv VNB-a razina specifičnih antitijela je zadovoljavajuća, dok je u skupini vakciniranoj s 0,5 ml vakcine potrebna revakcinacija.

Immunogenicity of an experimental vaccine against Newcastle disease (ND) was tested on chickens and turkeys under laboratory and field condition, respectively.Vaccine, prepared in form of a water-in-oil-in-water (WOW), contained detergent solubilized ND virus. 21-day-old chickens, hatched from SPF eggs, were intramuscularlly (i.m.) vaccinated with 0.2 ml vaccine containing 1, 1/25, 1/50 and 1/100 viral doses. Also, 21-day-old light laying chickens received i.m. 0.2 ml vaccine containing 1, 1/5 1/25 and 1/50 viral doses. Control groups were not vaccinated. Three weeks postvaccination, chickens were i.m. challenge infected with 106 ELD50 Herts33 strain of NDV. The vaccinal dose recommended by Eu.Ph for safetly chicken protection was detrmined according to the Spaerman-Kärber methode and it amounted to 0.5 ml vaccine with 50 PD50/dose. Turkey breeders, vaccinated with 1.0 ml vaccine at the age of 16 weeks developed a high level of NDV antibodies persisting till the end of experiment, i.e. turkey age of 50 weeks. This suggest that no additional vaccination is requred during the whole laying period.

Cilj ovog istraživanja je utvrđivanje optimalne doze vakcine koja štiti od izazivačke infekcije. Istraživanje imunogenosti atenuiranog soja virusa klasične svinjske kuge (soj K umnožen u staničnoj kulturi MPK i liofiliziran uz dodatak stabilizatora) provedeno je u kliničkom pokusu vakcinacije s različitim dozama vakcine i nakon toga izazivačkom infekcijm. Četiri proizvodne serije nove vakcine protiv klasične svinjske kuge testirane su prema propisima koje određuje Europska farmakopeja. Rezultati pokusa provedenog prema takvom protokolu pokazala su da jedna doza vakcine sadržava više od 100 PD50 zaštitnih doza što udovoljava postavljenim zahtjevima. Rezultati su doprinijeli usklađivanju propisa kontrole kvalitete proizvođača, imunogenosti i određivanju doze, s europskim propisima.

Novo cjepivo protiv klasične svinjske kuge pripravljeno je od soja K adaptiranog na minipig kidney (MPK) staničnu kulturu. Supernatant je sakupljen tijekom kultivacije permanentno zaraženih MPK stanica. Dobivena vakcina bila je pomiješana sa stabilizatorom i liofilizirana. Njezina imunogenost provjerena je na prasadi. Sve životinje iz kontrolne skupine su uginule, a vakcinirane su preživjele. Novo cjepivo je imunogeno i štiti svinje od zaražavanja patogenim virusom. Cjepivo sadržava 138 PD50 po dozi.

Osam dana stari pilići lake pasmine podrijetlom od SPF jata primili su živu vakcinu protiv zarazne bolesti burze (ZBB) u vodi za piće. Jedna vakcinalna doza sadržavala je 106,1 TCID50 (tissue culture infective dose) atenuiranog, intermedijarnog soja VMG-91 VZBB, umnoženog u oplođenim kokošjim SPF jajima. Dva tjedna nakon cijepljenja, pilići su okulo-nazalno zaraženi virulentnim sojem Stuttgart P-3 VZBB. Istovremeno su zaraženi i necijepljeni pilići u kontrolnoj skupini. U razdoblju od deset dana nakon zaražavanja nije bilo lokalnih ili općih promjena zdravlja niti spontanih uginuća cijepljenih pilića. Razudbom nisu nađene patološkoanatomske promjene. Histopatološki, u većine cijepljenih pilića uočene su blage atrofične promjene u epitelu nabora sluznice i blaga deplecija limfocita i vakuolizacija u limfoidnim folikulama Fabricijeve burze (FB). U pilića kontrolne skupine uočen je slabiji tek, blaga depresija i nakostriješenost perja. Razudbom su uočene atrofične FB i blago otećeni i blijedi bubrezi. Jaka atrofija i fibrozas FB utvrđena je histopatološkom analizom. U necijepljenih pilića utvrđena je gotovo triputa manja prosječna masa i indeks FB nego u cijepljenih.

In the first weeks of life the piglets originating from vaccinated sows have a protective level of specific maternal antibodies for CSF virus. Due to the interference of specific maternal antibodies and the vaccinal virus the piglets originating from vaccinated sows should be vaccinated by the end of the second month of age (1). In our trials it was evident that in the first three weeks of life the piglets originating from vaccinated sows had the level of specific maternal antibodies for CSF virus which protected them completely from infection. In the period from the 21st to the 42nd day of age the level of specific maternal antibodies provided a partial protection when challenged, but it was high enough for the interference with the vaccinal virus. After the 56th day the level of specific maternal antibodies in the sera of piglets was not high enough to protect the animals from the infection, but it had no negative effects to developing the active immunity after a single vaccination with 100 RaTD50. For the success of vaccination of the piglets originating from vaccinated sows it is necessary to know the level of specific maternal antibodies for CSF virus. According to the results obtained and considering the epizootiological situation in the Republic of Croatia the programme of twofold vaccination of piglets prescribed by the Law is justified.

A Newcastle disease virus (NDV) vaccine, prepared as a water-in-oil-in-water emulsion (WOWE) with low contents of both viral material and mineral oil and high aqueous- to oil-phase and applied for the primary vaccination of chickens, can elicit both humoral immune response and protection against infection. Accordingly, ecological safe NDV subunit vaccine can be used for chicken priming and as a substitute for live vaccines usually accompainied by unesirable side-effects.

The efficacy of the vaccination of one-day-old broiler chickens possessing maternal NDV antibodies was studied. It was found that the live NDV vaccine as well as the live NDV vaccine given simultaneously with antigenic NDv subunits did not interfere with passive virus-neutralizing antibodies.

U Hrvatskoj se već niz godina provodi imunoprofilaksa protiv klasične svinjske kuge, a 20-tak godina lapiniziranom vakcinom klasične svinjske kuge, K-soj (PLIVA). Imunoenzimskim testovima pretraženi su serumi više od 2300 svinja. Prisutnost protutijela ustanovljena je u gotovo 90% vakciniranih životinja. Očitavanje rezultata s pomoću kompetitivnog postupka optičke gustoće rađeno je na ELISA Procesoru II (BEHRING).