Search

Submitted by Maria Aparecida (cidazen@gmail.com) on 2022-06-28T17:36:18Z No. of bitstreams: 1 KarinaCristina.pdf: 2475915 bytes, checksum: 456a5794d87e6e5c429e9332fff29b10 (MD5) Made available in DSpace on 2022-06-28T17:36:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 KarinaCristina.pdf: 2475915 bytes, checksum: 456a5794d87e6e5c429e9332fff29b10 (MD5) Previous issue date: 2021-12-16 FAPEMA In Brazil, the main drugs adopted for the treatment of visceral leishmaniasis are pentavalent antimony (Glucantime®) and the antifungal Amphotericin B (AmB), both with high toxicity and occurrences of therapeutic failures reported worldwide, which is a complex and multifactorial phenomenon, related with the host-parasite interaction, as well as the response of the parasite to drugs, measured by their sensitivity to drugs. Considering the scarcity of drugs and even phenomena such as drug resistance, identifying new natural compounds with antileishmanial action has been the focus of much research. In this sense, cyanobacteria are photosynthetic organisms, responsible for the production of bioactive compounds with antiparasitic activity. Thus, the present study aimed to test the antileishmanial activity of the cyanobacteria extract Nostoc sp. and to evaluate drug sensitivity in clinical isolates of Leishmania (L.) infantum obtained from patients with VL in the state of Maranhão. To verify the sensitivity of the promastigote forms, the isolates were submitted to cell viability test, using MTT, against trivalent Antimony and Amphotericin B, verifying an EC50 variation from 66.2 ± 9.8 to 155 ± 3.6 μM and 118.9 ± 14.7 nM to 243.5 ± 21.3 nM, respectively. In the intracellular amastigote forms in peritoneal macrophages, evaluated by direct counting, the EC50 values for pentavalent antimony and amphotericin B ranged from 16.1 to 39.3 μM and 0.09 to 0.18 μM, respectively. Furthermore, both in the intracellular promastigote and amastigote forms, a greater tolerance of clinical isolates to antimony was observed, in the tri- or pentavalent forms. In parallel, when evaluating the antileishmanial activity of promastigotes of the reference strain of L. (L.) infantum against the crude extract of cyanobacteria of the genus Nostoc sp. GBBB01, by direct counting, there was a statistically significant difference in concentrations from 500 to 31.25ug/mL in relation to the untreated control, however when the analysis was performed by flow cytometry, these differences were not found. In the intracellular amastigote forms, the crude extract of cyanobacteria of the genus Nostoc sp showed antileishmanial activity, being possible to calculate the IC50, only for one of the clinical isolates (MHOM/BR/2018/ASFF- MA) evaluated. Furthermore, the crude cyanobacteria extract also did not induce cytotoxic effect on peritoneal macrophages under the conditions tested. Thus, it can be stated that there is an intraspecific variability in the sensitivity to traditional drugs (Antimonium and Amphotericin B) in clinical isolates from this highly endemic area for VL, and that the crude extract of cyanobacteria of the genus Nostoc sp. GBBB01 presented antileishmanial activity, which needs to be better explored due to the divergence of results between analysis techniques, the need for new tests, considering that even for the cyanobacteria extract there is variation in this activity depending on the strain of L. infantum evaluated. No Brasil, os principais fármacos adotados para o tratamento de leishmaniose visceral são o Antimônio pentavalente (Glucantime®) e ao antifúngico Anfotericina B (AmB), ambos com elevada toxicidade e ocorrências de falhas terapêuticas relatadas mundialmente, que é fenômeno complexo e multifatorial, relacionado com a interação hospedeiro-parasito, bem como a resposta do parasito às drogas, medida pela sensibilidade dos mesmos aos fármacos. Considerando a escassez de fármacos e ainda fenômenos como a resistência medicamentosa, identificar novos compostos naturais com ação antileishmanial tem sido foco de muitas pesquisas. Nesse sentido, as cianobactérias são organismos fotossintetizantes, responsáveis pela produção de compostos bioativos com atividade antiparasitária. Desse modo, o presente estudo, teve como objetivo testar a atividade antileishmanial do extrato de cianobactéria Nostoc sp. e avaliar a sensibilidade à fármacos em isolados clínicos de Leishmania (L.) infantum obtidos de pacientes com LV do estado Maranhão. Para verificar a sensibilidade das formas promastigotas, os isolados foram submetidos a teste de viabilidade celular, utilizando MTT, frente ao Antimônio trivalente e Anfotericina B, verificando uma variação de EC50 de 66.2 ± 9.8 a 155 ± 3.6 μM e 118.9 ± 14.7 nM a 243.5 ± 21.3 nM, respectivamente. Nas formas amastigotas intracelulares em macrófagos peritoneais, avaliadas por contagem direta, os valores de o EC50 para antimônio pentavalente e anfotericina B variaram de 16,1 a 39,3 μM e 0,09 a 0,18 μM, respectivamente. Ademais, tanto nas formas promastigotas quanto amastigotas intracelulares observou-se maior tolerância dos isolados clínicos ao antimônio, nas formas tri ou pentavalentes. Em paralelo, ao avaliar-se a atividade antileishmanial de promastigotas da cepa referência de L. (L.) infantum frente ao extrato bruto de cianobactéria do gênero Nostoc sp. GBBB01, por contagem direta, houve diferença estatisticamente significativa nas concentrações de 500 a 31,25ug/mL em relação ao controle sem tratamento, entretanto quando a análise foi realizada pela citometria de fluxo, essas diferenças não foram encontradas. Já nas formas amastigotas intracelulares, o extrato bruto de cianobactéria do gênero Nostoc sp apesentou atividade antileishmanial, sendo possível calcular a IC50, somente para um dos isolados clínicos (MHOM/BR/2018/ASFF-MA) avaliado. Ademais, o extrato bruto de cianobactéria também não induziu efeito citotóxico em macrófagos peritoneais, nas condições testadas. Dessa forma, pode-se afirmar que existe uma variabilidade intraespecífica na sensibilidade aos fármacos tradicionais (Antimônio e Anfotericina B) nos isolados clínicos dessa área de alta endemia para LV, e que o extrato bruto de cianobactéria do gênero Nostoc sp. GBBB01 apresentou atividade antileishmanial, que precisa ser melhor explorada devido a divergência de resultados entre técnicas de análise, a necessidade de novos testes, considerando que mesmo para o extrato de cianobactéria ocorre variação nesse atividade a depender da cepa de L. infantum avaliada.

Bulbine natalensis and Chorophytum comosum are potential medicinal source for the treatment of cancers. Chronic myeloid leukaemia is a hematopoietic stem cells disorder treated by tyrosine kinase inhibitors but often cause recurrence of the leukaemia after cessation of therapy, hence require alternative treatment. This study determines the anti-cancer effect of leaf, root and bulb methanolic and aqueous extracts of B. natalensis and C. comosum in chronic human myelogenous leukaemia (K562) cell line by MTT, Hoechst bis-benzimide nuclear and annexin V stain assays. The root methanolic extract of B. natalensis and C. comosum showed a high cytotoxicity of 8.6% and 16.7% respectively on the K562 cell line at 1,000 μg/ml concentration. Morphological loss of cell membrane integrity causing degradation of the cell and fragmentation were observed in the root methanolic extract of both plants. A high apoptosis (p < 0.0001) was induced in the K562 cells by both leaf and root extracts of the C. comosum compared to the B. natalensis. This study shows both plants possess apoptotic effect against in vitro myelogenous leukaemia which contributes to the overall anti-cancer properties of B. natalensis and C. comosum to justify future therapeutic applications against chronic myelogenous leukaemia blood cancer. Resumo Bulbine natalensis Baker e Chorophytum comosum (Thunb.) Jacques são potenciais fontes medicinais para o tratamento de cânceres. A Leucemia Mieloide Crônica (LMC) é um distúrbio das células-tronco hematopoiéticas que é tratado com inibidores da tirosina quinase, mas frequentemente, causa recorrência da leucemia após a interrupção da terapia, portanto, requer um tratamento alternativo. Este estudo determinou o efeito anticancerígeno de extratos metanólicos e aquosos de folha, raiz e bulbo de B. natalensis e C. comosum na linhagem celular de leucemia mieloide humana crônica (K562) por ensaios de MTT, Hoechst bis-benzimida nuclear e anexina V. O extrato metanólico da raiz de B. natalensis e C. comosum apresentou alta citotoxidade de 8,6% e 16,7% respectivamente, na linhagem celular K562 com a concentração de 1,000 μg / ml. Perda morfológica da integridade da membrana celular causando degradação dos núcleos, citoplasma e encolhimento celular foi observada no extrato metanólico da raiz de ambas as plantas. Uma alta apoptose (p

O objetivo geral foi avaliar in vitro, em modelos que mimetizem pulpotomias, manchamento e citoxicidade de biomaterais, e apresentar por meio de relato de caso exiquibilidade e sucesso de procedimento endodôntico regenerativo para tratamento de molares jovens. Objetivo 1: Simular fratura coronária complicada em incisivo tratado por pulpotomia total com Bio-C Temp (BC-Angelus) em comparação com dois materiais (MTA Flow–MTA, UltraCal XS-UC; Ultradent), avaliando descoloração dentária, radiopacidade e citotoxicidade nas células pulpares. Objetivo 2: Simular pulpotomia parcial com Bio-C Temp (BC) comparado com Bio-C Repair (BCR-Angelus) e Biodentine (BD-Septodont), avaliando descoloração dentária, radiopacidade, citotoxicidade. Objetivo 3: Relatar acompanhamento de série de casos de revascularização em molares permanentes jovens, com preparo mecanizado de canais radiculares. Nos objetivos 1 e 2, dentes bovinos foram preparados para simular fratura coronária extensa em dente com ápice aberto. As raízes foram preenchidas com mistura de ágar/sangue, e os materiais colocados sobre esta. O grupo controle foi preenchido apenas com ágar/sangue. Análises de avaliação da cor foram realizadas utilizando espectrofotômetro. A mudança total de cor (ΔEab, ΔE00) e índice de brancura (WI) foram calculadas com base no CIELAB. Radiografias digitais foram adquiridas para análise de radiopacidade. Células da polpa humana foram usadas para análise da viabilidade celular. Foram utilizados testes ANOVA e Tukey para comparar os grupos experimentais, e o de Dunnett para comparações com o controle. Nas pulpotomias totais (objetivo 1) todos os materiais foram associados com valores de descoloração maiores do que o aceitável e BT resultou em alteração da cor menor ou semelhante ao MTA e UC, respectivamente. Observou-se redução da radiopacidade apenas no MTA (P=0,007). A viabilidade celular dos materiais foi semelhante à do controle (DMEM) (P>0,05), exceto para BT que teve viabilidade significativamente menor (P0,05). A série de casos descreve técnica de revascularização modificada em molares permanentes jovens. Os pacientes foram submetidos ao preparo manual, seguido de limas rotativas NiTi e pasta de hidróxido de cálcio. Na segunda consulta, a medicação intracanal foi retirada, com irrigação final com EDTA sob agitação ultrassônica e promoção do coágulo. Selamento com MTA e ionômero de vidro e restauração com resina. Após 15 dias, verificou-se ausência de dor, edema e fístula, fechamento do ápice radicular e redução da luz do canal. Basedos nos resultados dos três objetivos concluiu-se que: (1) em pulpotomias totais, BT teve viabilidade celular aceitável, semelhante à do MTA e UC nas diluições mais altas, e BT resultou em menor alteração da cor do que MTA e UC; em pulpotomias parciais BCR apresentou melhores resultados do que BD e BCT, com menor mudança de cor, maior radiopacidade e viabilidade > 80%; os achados da série de casos confirmam que a regeneração endodôntica após preparo mecanizado do canal radicular é uma opção promissora para manutenção de molares permanentes em adolescentes. The general objective was to evaluate in vitro, in models that mimic pulpotomies, staining and cytoxicity of biomaterials, and to present, through a case report, the feasibility and success of a regenerative endodontic procedure for the treatment of young molars. Objective 1: Simulate complicated coronary fracture in an incisor treated by total pulpotomy with Bio-C Temp (BC-Angelus) compared to two materials (MTA Flow – MTA, UltraCal XS-UC; Ultradent), evaluating tooth discoloration, radiopacity and cytotoxicity in pulp cells. Objective 2: Simulate partial pulpotomy with Bio-C Temp (BC) compared with Bio-C Repair (BCR-Angelus) and Biodentine (BD-Septodont), evaluating tooth discoloration, radiopacity, cytotoxicity. Objective 3: To report the follow-up of a series of revascularization cases in young permanent molars, with mechanized preparation of root canals. In objectives 1 and 2, bovine teeth were prepared to simulate extensive coronary fracture in a tooth with an open apex. The roots were filled with an agar / blood mixture, and the materials placed on it. The control group was filled with agar / blood only. Color evaluation analyzes were performed using a spectrophotometer. The total color change (ΔEab, ΔE00) and whiteness index (WI) were calculated based on CIELAB. Digital radiographs were acquired for radiopacity analysis. Human pulp cells were used to analyze cell viability. ANOVA and Tukey tests were used to compare the experimental groups, and Dunnett's for comparisons with the control. In total pulpotomies (objective 1) all materials were associated with discoloration values greater than acceptable and BT resulted in a color change that was less or similar to MTA and UC, respectively. A reduction in radiopacity was observed only in the MTA (P = 0.007). The cell viability of the materials was similar to that of the control (DMEM) (P> 0.05), except for BT which had significantly lower viability (P 0.05). The case series describes a modified revascularization technique in young permanent 11 molars. The patients were submitted to manual preparation, followed by rotating NiTi files and calcium hydroxide paste. In the second consultation, the intracanal medication was removed, with final irrigation with EDTA under ultrasonic agitation and promotion of the clot. Sealing with MTA and glass ionomer and restoration with resin. After 15 days, there was no pain, edema and fistula, closure of the root apex and reduced canal light. Based on the results of the three objectives, it was concluded that: (1) in total pulpotomies, BT had acceptable cell viability, similar to that of MTA and UC at higher dilutions, and BT resulted in less color change than MTA and UC; in partial pulpotomies BCR showed better results than BD and BCT, with less color change, greater radiopacity and viability> 80%; the findings from the case series confirm that endodontic regeneration after mechanized root canal preparation is a promising option for maintaining permanent molars in adolescents. Tese (Doutorado) 2023-04-05

Medicinal plants are important sources of secondary metabolites, mainly used in the production of medicines. Many of these plants are used in traditional medicine by Brazilian communities in the treatment of various illnesses. A wide variety of medicinal plants occur in the Caatinga, and among these are Cenostigma pyramidale (Catingueira) and Libidibia ferrea (Pau-ferro). These species have great therapeutic and pharmacological potential due to their chemical composition, presenting compounds from the classes of flavonoids, tannins, organic acids, among other classes. This work aimed to carry out a pharmacological and chemical study of ethanol extracts from C. pyramidale bark and L. ferrea roots. In view of the large number of reports on the use of the species C. pyramidale, a literature search was carried out using the PubMed, Science Direct, Scopus and Web of Science tools, in search of its chemical composition, ethnopharmacological, pharmacological aspects and patentable potential. This research indicated that the flavonoid class is the most abundant, being found in the bark, leaves and roots of the species. Of these, agatisflavone, amentoflavone, podocarpusflavone, rhuschalcone VI and cesalpinioflavone revealed important pharmacological activities such as antiviral, antibacterial, neuroprotective, antioxidant, antiinflammatory and antiparasitic. In traditional medicine, this species is used for various purposes that are proven by its chemical composition and biopharmacological tests. The ethanol extract of the bark of C. pyramidale was submitted to tests to determine the antioxidant activity, the content of phenolic compounds and flavonoids, in addition to the anxiolytic potential against the zebrafish model (Danio rerio). The extract showed high free radical scavenging activity (IC50 = 6.397 ± 0.157 µg / mL) and content of phenolic compounds (71.4872 mg EAG / g of extract) and flavonoids (11.6803 mg EQuer / g of extract). The studied extract showed sedative and anxiolytic effects in the model used and did not show toxicity. The characterization of metabolites present in ethanol extracts from L. ferrea roots was performed by UPLC-ESI-QTOF-MS/MS and revealed the presence of flavonoids, organic acids and steroids in most of them. The root extract showed low content of phenolic compounds (31,189 ± 0.0176 mg / EAG.g-1) and low amount of flavonoids (3,148 ± 0.0014 EQuer / g of extract), good free radical scavenging with values of 9.8363 ± 0.5283 μg / mL for the DPPH radical and 14.0358 ± 0.0835 μg / mL for ABTS. The evaluation of cytotoxic activity was performed by MTT, the extract was active with 75% inhibition in two cell lines HCT-116 (human colon) and HL60 (Leukemia) with IC50 of 87.16 and 38.00 μg / mL, respectively. These results demonstrate that the species under study have biological potential and may be related to their metabolites. It is concluded that this study has an important contribution to the chemical and pharmacological knowledge of native Caatinga species. As plantas medicinais são importantes fontes de metabólitos secundários, utilizados principalmente na produção de medicamentos. Muitas dessas plantas são utilizadas na medicina tradicional por comunidades brasileiras no tratamento de diversas enfermidades. Uma grande variedade de plantas medicinais ocorre na Caatinga, e entre estas, estão a Cenostigma pyramidale (catingueira) e Libidibia ferrea (pau-ferro). Essas espécies apresentam grande potencial terapêutico e farmacológico por sua composição química, apresentando compostos das classes dos flavonoides, taninos, ácidos orgânicos dentre outras classes. Este trabalho objetivou realizar um estudo farmacológico e químico dos extratos etanólicos de cascas de C. pyramidale e das raízes L. ferrea. Tendo em vista a grande quantidade de relatos do uso da especie C. pyramidale, pesquisa bibliográfica foi realizada empregando as ferramentas PubMed, Science Direct, Scopus e Web of Science, em busca de sua composição química, aspectos etnofarmacológicos, farmacológicos e potencial patenteável. Esta pesquisa indicou que a classe dos flavonoides é a mais abundante, sendo encontrados na casca, folhas e raízes da espécie. Destes, agatisflavona, amentoflavona, podocarpusflavona, rhuschalcona VI e cesalpinioflavona revelaram importantes atividades farmacológicas tais como antiviral, antibacteriana, neuroprotetora, antioxidante, antiinflamatória e antiparasitária. Na medicina tradicional, essa espécie é utilizada para diversos fins que são comprovados pela sua composição química e testes biofarmacológicos. O extrato etanólico das cascas de C. pyramidale foi submetido a ensaios para determinação da atividade antioxidante, teor de compostos fenólicos e flavonoides, além do potencial ansiolítico frente ao modelo zebrafish (Danio rerio). O extrato apresentou alta atividade redutora de radicais livres (IC50 = 6,397 ± 0,157 µg / mL) e conteúdo de compostos fenólicos (71,4872 mg EAG / g de extrato) e flavonoides (11,6803 mg EQuer / g de extrato). O extrato estudado apresentou efeito sedativo e ansiolítico no modelo empregado e não apresentou toxicidade. A caracterização dos metabólitos, presentes nos extratos etanólicos das raízes de L. ferrea, foi realizada por UPLC-ESI-QTOF-MS/MS e revelou a presença de flavonoides, ácidos orgânicos e esteroides em sua maioria. O extrato das raizes apresentou baixo teor de compostos fenólicos (31.189 ± 0,0176 mg / EAG.g-1 ) e baixa quantidade de flavonoides (3.148 ± 0,0014 EQuer / g de extrato), boa eliminação de radicais livres com valores de 9,8363 ± 0,5283 μg / mL para o radical DPPH e 14,0358 ± 0,0835 μg / mL para ABTS. A avaliação da atividade citotóxica foi realizada por MTT, o extrato foi ativo com 75% de inibição em duas linhagens celulares HCT-116 (cólon humano) e HL60 (Leucemia) com IC50 de 87,16 e 38,00 μg / mL, respectivamente. Esses resultados demonstram que as espécies em estudo têm potencial biológico e podem estar relacionadas aos seus metabólitos. Conclui-se que este estudo tem uma importante contribuição para o conhecimento químico e farmacológico das espécies nativas da Caatinga

Submitted by Maria Costa (mbsc_14@hotmail.com) on 2020-03-12T23:21:07Z No. of bitstreams: 4 Carta autodep??sito.pdf: 231629 bytes, checksum: d94d23f01b970883c6828d77d63ca4f0 (MD5) Ata de defesa.pdf: 678411 bytes, checksum: da7f243fd7a0d8f6e7e4622d7c48f1a8 (MD5) Folha de aprova????o.pdf: 192680 bytes, checksum: 7def4c161dce1683fa08a855b498b9fb (MD5) Disserta????o Beatriz Vers??o ap??s corre????es banca.pdf: 1695174 bytes, checksum: 15aec58e3a923f8ccb36c7ef29a3b97a (MD5) Approved for entry into archive by PPGCTRA - ICET - Itacoatiara Ci??ncias e Tecnologia para Recursos Amaz??nicos (secretariappgctra@ufam.edu.br) on 2020-03-13T13:25:15Z (GMT) No. of bitstreams: 4 Carta autodep??sito.pdf: 231629 bytes, checksum: d94d23f01b970883c6828d77d63ca4f0 (MD5) Ata de defesa.pdf: 678411 bytes, checksum: da7f243fd7a0d8f6e7e4622d7c48f1a8 (MD5) Folha de aprova????o.pdf: 192680 bytes, checksum: 7def4c161dce1683fa08a855b498b9fb (MD5) Disserta????o Beatriz Vers??o ap??s corre????es banca.pdf: 1695174 bytes, checksum: 15aec58e3a923f8ccb36c7ef29a3b97a (MD5) Approved for entry into archive by Divis??o de Documenta????o/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2020-03-13T17:54:25Z (GMT) No. of bitstreams: 4 Carta autodep??sito.pdf: 231629 bytes, checksum: d94d23f01b970883c6828d77d63ca4f0 (MD5) Ata de defesa.pdf: 678411 bytes, checksum: da7f243fd7a0d8f6e7e4622d7c48f1a8 (MD5) Folha de aprova????o.pdf: 192680 bytes, checksum: 7def4c161dce1683fa08a855b498b9fb (MD5) Disserta????o Beatriz Vers??o ap??s corre????es banca.pdf: 1695174 bytes, checksum: 15aec58e3a923f8ccb36c7ef29a3b97a (MD5) Made available in DSpace on 2020-03-13T17:54:25Z (GMT). No. of bitstreams: 4 Carta autodep??sito.pdf: 231629 bytes, checksum: d94d23f01b970883c6828d77d63ca4f0 (MD5) Ata de defesa.pdf: 678411 bytes, checksum: da7f243fd7a0d8f6e7e4622d7c48f1a8 (MD5) Folha de aprova????o.pdf: 192680 bytes, checksum: 7def4c161dce1683fa08a855b498b9fb (MD5) Disserta????o Beatriz Vers??o ap??s corre????es banca.pdf: 1695174 bytes, checksum: 15aec58e3a923f8ccb36c7ef29a3b97a (MD5) Previous issue date: 2020-03-02 FAPEAM - Funda????o de Amparo ?? Pesquisa do Estado do Amazonas The Aedes aegypti mosquito is the main vector of the dengue virus, hemorrhagic dengue, chikungunya and the zika virus, which has been causing a serious public health problem worldwide. Currently, control of Ae. aegypti is carried out with synthetic larvicides, however, mosquitoes have become highly resistant to them and this makes their eradication more difficult. The emergence of insecticide-resistant mosquitoes reinforces the interest in the search for new products effective against these adult mosquitoes and in their larval state. Thus, the objective of this project was to evaluate the chemiodiversity found in the endophytic fungi isolated from Passovia stelis regarding their larvicidal potential and to understand the possible entomotoxic mechanisms induced. Thus, to achieve the objectives outlined, 104 endophytic fungi isolated in previous studies underwent reactivation, where only 6 showed viability. Each of the six fungi were grown in potato dextrose liquid medium, after the micellar growth, the broth was separated and partitioned with ethyl acetate, providing the crude extracts after evaporation of the solvent. The crude extracts obtained (Ph, FAT07, FAT46, FAT49, FAT50 and CAT20) were subjected to preliminary tests on human lung fibroblast cells (MRC-5) for analysis of cytotoxicity by the Alamar Blue method and determination of reactive species levels of oxygen using the dichlorofluorescein method. The extracts that were cytotoxic and showed production of reactive oxygen species were submitted to the larvicidal potential test against the Ae. Aegypti larvae (bioselective and dose assay). Larvae that died when exposed to the analyzed extract were subjected to quantification of the oxidative damage caused to proteins and lipids by testing reactive substances of thiobarbituric acid and quantification of carbonyl content, respectively. According to the results obtained, the Ph, CAT 20, FAT 49, FAT 46 and FAT 50 samples did not show cytotoxicity, while the FAT 07 sample was cytotoxic. All extracts tested against MRC-5 cells are producers of reactive oxygen species. The extract FAT07 showed larvicidal activity with CL50 equal to 264,456 ppm and CL90 equal to 364,307 ppm, being considered active. Additionally, it is assumed that the larvae, when submitted to the FAT07 extract, die from oxidative damage to proteins and lipids. The FAT07 extract was fractionated, and three substances were isolated, being in the process of identification by Nuclear Magnetic Resonance and Mass Spectrometry. Additionally, a bio-clock assay for antibacterial activity against Xanthomonas citri subsp. citri. O mosquito Aedes aegypti ?? o principal vetor do v??rus da dengue, dengue hemorr??gica, chikungunya e do zika v??rus, que vem causando um grave problema de sa??de p??blica mundial. Atualmente, o controle do Ae. aegypti se realiza com larvicidas sint??ticos, no entanto, os mosquitos t??m se tornado altamente resistentes a eles e isto faz com que sua erradica????o seja mais dif??cil. O surgimento de mosquitos resistentes a inseticidas refor??a o interesse da busca de novos produtos eficazes contra esses mosquitos adultos e no seu estado larval. Dessa forma, o objetivo deste projeto foi avaliar a quimiodiversidade encontrada nos fungos endofiticos isolados de Passovia stelis quanto ao seu potencial larvicida e de compreender os poss??veis mecanismos entomot??xicos induzidos. Assim, para alcan??ar os objetivos delineados, 104 fungos endof??ticos isolados em estudos anteriores passaram por reativa????o, onde apenas 6 apresentaram viabilidade. Cada um dos seis fungos foi cultivado em meio l??quido de batata-dextrose, ap??s o crescimento micelar, o caldo foi separado e particionado com acetato de etila, fornecendo os extratos brutos ap??s a evapora????o do solvente. Os extratos brutos obtidos (Ph, FAT07, FAT46, FAT49, FAT50 e CAT20) foram submetidos ?? testes preliminares em c??lulas de fibroblastos de pulm??o humano (MRC-5) para an??lise de citotoxicidade pelo m??todo do Alamar Blue e determina????o de n??veis de esp??cies reativas de oxig??nio usando m??todo da diclorofluoresce??na. Os extratos que foram citot??xicos e apresentaram produ????o de esp??cies reativas de oxig??nio foram submetidos ao teste de potencial larvicida frente as larvas de Ae. aegypti (ensaio bioseletivo e de dose). As larvas que morreram quando expostas ao extrato analisado foram submetidas a quantifica????o do dano oxidativo causado a prote??nas e lip??dios por meio do ensaio de subst??ncias reativas de ??cido tiobarbit??rico e quantifica????o de teor de carbonila, respectivamente. De acordo com os resultados obtidos as amostras Ph, CAT 20, FAT 49, FAT 46 e FAT 50 n??o apresentaram citotoxicidade, enquanto a amostra FAT 07 foi citot??xica. Todos os extratos testados frente as c??lulas MRC-5 s??o produtores de esp??cies reativas de oxig??nio. O extrato FAT07 apresentou atividade larvicida com CL50 igual a 264,456 ppm e CL90 igual a 364,307 ppm, sendo considerado ativo. Suplementarmente, sup??e-se que as larvas ao serem submetidas ao extrato FAT07 morrem por dano oxidativo a prote??nas e lip??dios. O extrato FAT07 foi fracionado, e tr??s subst??ncias foram isoladas, estando em processo de identifica????o por Resson??ncia Magn??tica Nuclear e Espectrometria de Massas. Adicionalmente, foi realizado ensaio biol??gio para atividade antibacteriana contra Xanthomonas citri subsp. citri.

Dissertação de mestrado em Genética Molecular, Cynara cardunculus L. (C. cardunculus) is a Mediterranean plant used for many years for cheese production and energy applications. Recently, the presence of sesquiterpenes lactones in leaves and seeds of C. cardunculus was reported. Cynaropicrin, a type of sesquiterpene lactone, was the main compound detected, being known for its various biological activities. In this work, the bioactivity of two different extracts of C. cardunculus leaves extracts were evaluated: a crude ethanolic extract (EC) obtained by Pulsed Ultrasound Assisted Extraction (PUAE) and a fractionated extract (EF) obtained by PUAE followed by membrane fractionation process, with an enrichment of cynaropicrin concentration. Two human skin cell lines, HaCaT keratinocytes and BJ-5ta fibroblasts were used to evaluate the effect of exposure to the extracts (0,5, 1, 2, 5, 10, 15 and 50 pg/ml) regarding cell toxicity, viability and migration. The anti-inflammatory potential of these extracts, by quantification of TNF-α released by J774.A1 murine macrophages, and quantification of IL-18 released by HaCaT cells. Higher concentrations of extracts and cynaropicrin were identified as cytotoxic and concentrations above 1 µg/ml caused toxicity to both cell lines. Their effects on migration capability of BJ-5ta and HaCaT cells in a context of wound healing in vitro, and the results show a small increase of cells migrating towards the inflicted scratch. The lowest concentrations of extracts were tested on human keratinocytes and murine macrophages to evaluate their anti-inflammatory potential, as they could reduce for 12h the production of pro-inflammatory cytokine in cells stimulated with DNCB (HaCaT) and LPS (J774.A1). Extracts did not, by themselves, induce inflammation in J774.A1 and in HaCaT cells. These results identify ane opportunity to develop topic applications based on extracts of C. cardunculus for improved treatment of wounds, as a better, more natural treatment of inflammation., Cynara cardunculus L. (C. cardunculus) é uma planta mediterrânea com vários usos, desde produção de queijo ate aplicações energéticas. Recentemente, foi reportada a presença de lactonas sesquiterpenicas nas folhas e sementes de C. cardunculus. A cinaropicrina, pertencente a este grupo, foi o principal composto detetado, sendo conhecida pelas suas inúmeras atividades biológicas. Neste trabalho foram avaliados in vitro os efeitos celulares de dois extratos diferentes de folhas de C. cardunculus urn extrato etanólico bruto (CE) obtido por Extração Assistida por Ultrassom Pulsado (PUAE) e um extrato fracionado (EF) obtidos por PUAE, seguidos de processo de fracionamento por membrana, com enriquecimento da concentração de cinaropicrina. Foram utilizadas duas linhas celulares de pele humana, queratinócitos HaCaT e fibroblastos BJ-5ta, para avaliar as consequências da exposição aos extratos (0,5, 1, 2, 5, 10, 15 and 50 pg/ml) a nível da toxicidade, viabilidade e migração celulares, assim como foi analisado o potencial anti-inflamatório por quantificação de TNF-α libertada por macrófagos de ratinho (J774.A1) e de IL-18 libertada por células HaCaT. Verificou-se que as concentrações mais altas de extratos e de cinaropicrina são citotóxicos, tendo concentrações superiores a 1 µg/ml demonstrado toxicidade em ambas as linhas celulares de pele. Também foi estudado o efeito dos extratos na capacidade de migração de células BJ-5ta e HaCaT num ensaio de cicatrização in vitro, e os resultados mostram um pequeno aumento na percentagem de células migradas em direção a ferida simulada, indicando algum potencial neste sentido. O potencial anti-inflamatório foi igualmente testado com as menores concentrações de extratos, verificando-se alguma redução, as 12h, da produção de citoquinas pró-inflamatórias em células estimuladas com DNCB (ern HaCaT) e LPS (J774.A1), respetivamente. Os extratos, por si só, não induziram inflamação nestas células. Os resultados abriram a oportunidade de desenvolver aplicações tópicas baseadas em extratos de C. cardunculus, que podem contribuir para um tratamento melhor e mais natural da inflamação, embora mais informação seja necessária para prever o eventual beneficio terapêutico destes extratos., O presente trabalho foi apoiado por: MedCynaraBioTec (ALT20-03-0145-FEDER- 039495) - Seleção de genótipos de Cynara cardunculus para novas aplicações biotecnológicas: a melhoria da cadeia de valor de cardo, uma cultura mediterrânea bem-adaptada e ValBioTecCynara (ALT20-03- 0145-FEDER- 000038) - Valorização econ6mica do Cardo (Cynara cardunculus): estudo da variabilidade natural e aplicações biotecnológicas, ambas co-financiadas pela FEDER no âmbito do Programa Alentejo 2020.

Não recebi financiamento Pesticides have been continuously applied in agriculture to control insects considered agricultural pests which increases the likelihood of these products reaching the aquatic environment and affecting the biota, including fish. The present study is of great ecological importance because it evaluated the histopathological lesions and the gills and liver of curimbatá, Prochilodus lineatus (Pisces, Prochilodontidae) after 24 and 96 hours of exposure to increasing concentrations (0, 0,1, 1, 10, 100 and 1000 µg L-1) of the new metallo-insecticide [Mg(hesp)2(phen)] a Mg complex with hesperidin and phenanthroline as a chelating agent called MgHP. In the gills, the most frequent alterations were cell atrophy in the filament epithelium and lamellae, constriction / rupture / dilatation of the marginal canal of the pillar cells, lamellar epithelium hyperplasia, which occurred more frequently after exposure to 100 and 1000 µg. L-1 of MgHP. Gill change index (Iorg) increased significantly after 24 h exposure from 10 to 1000 µg L-1 MgHP and after 96 h exposure to 100 and 1000 µg L-1 MgHP. Chloride (CC) cell proliferation occurred after 96 h of exposure to 100 and 1000 µg L-1 MgHP and was more frequent in the filament epithelium. In the liver, changes in cellular structure were observed, such as hypertrophy, cytoplasmic degeneration and the appearance of intracellular cytoplasmic substances. They were more common and significant at concentrations of 100 and 1000 µg L-1 MgHP in both exposure periods (24 and 96 h). Liver Iorg increased significantly after 24 h exposure at 100 and 1000 µg L-1 MgHP concentrations and after 96 h exposure at 10, 100 and 1000 µg L-1 MgHP concentrations. The data obtained suggest that these lesions may affect the organ structure, altering the physiological functions of the exposed organism and revealed different sensitivity of the gills in relation to the liver. The gills were more sensitive in the first hours of contact with MgHP and showed recovery of gill tissue after 96 h while the liver showed greater changes after 96 h of exposure. Regarding WC, MgHP affected the density of these cells after 24 h, as a reduction was observed, which could cause a transient electrolyte imbalance. On the other hand, an increase in CC density after 96 h suggests a possible compensatory response in order to maintain the ionic balance of the animal. In general, MgHP is not toxic to P. lineatus at low concentrations, such as 0,1 and 1 µg L-1 MgHP, but is potentially toxic at very high concentrations such as 100 and 1000 µg L-1. Agrotóxicos têm sido continuamente aplicados na agricultura no controle de insetos considerados pragas agrícolas, o que aumenta a probabilidade destes produtos atingirem o meio aquático e afetarem a biota, incluindo os peixes. O presente estudo é de grande importância ecológica, pois avaliou as lesões histopatológicas, nas brânquias e fígado de curimbatá, Prochilodus lineatus (Pisces, Prochilodontidae) após 24 e 96 horas de exposição a concentrações crescentes (0, 0,1, 1, 10, 100 e 1000 µg L-1) do novo metalo-inseticida [Mg(hesp)2(phen)], um complexo de Mg com hesperidina e a fenantrolina como um agente quelante, denominado MgHP. Nas brânquias, as alterações mais frequentes foram atrofia celular no epitélio do filamento e nas lamelas, constrição/ruptura/dilatação do canal marginal das células pilares e hiperplasia do epitélio lamelar, sendo que as mesmas ocorreram com maior frequência após exposição a 100 e 1000 µg L-1 de MgHP. O índice de alterações (Iorg) das brânquias aumentou significativamente após 24 horas de exposição de 10 a 1000 µg L-1 de MgHP e após 96 horas de exposição a 100 e 1000 µg L-1 de MgHP. A proliferação das células de cloreto (CC) ocorreu após 96 horas de exposição a 100 e 1000 µg L-1 de MgHP, e foi mais frequente no epitélio do filamento. No fígado foram observadas mudanças na estrutura celular, como hipertrofia, degeneração citoplasmática e o aparecimento de substâncias citoplasmáticas intracelulares. Foram mais comuns e significativas nas concentrações de 100 e 1000 µg L-1 de MgHP, em ambos períodos (24 e 96 horas) de exposição. O Iorg do fígado aumentou significativamente após 24 horas de exposição nas concentrações de 100 e 1000 µg L-1 de MgHP e após 96 horas de exposição nas concentrações de 10, 100 e 1000 µg L-1 de MgHP. Os dados obtidos sugerem que essas lesões podem afetar a estrutura dos órgãos alterando as funções fisiológicas do organismo exposto, e revelaram diferente sensibilidade das brânquias em relação ao fígado. As brânquias foram mais sensíveis nas primeiras horas de contato com o MgHP e mostraram recuperação do tecido branquial após 96 horas, enquanto o fígado apresentou maiores alterações após 96 horas de exposição. Em relação às CC, o MgHP afetou a densidade dessas células após 24 horas, já que uma redução foi observada, o que poderia causar um desequilíbrio eletrolítico transitório. Por outro lado, verificou-se um aumento na densidade de CC após 96 horas que sugere uma possível resposta compensatória de forma a manter o equilíbrio iônico do animal. De forma geral, o MgHP não é tóxico para P. lineatus em concentrações baixas, tais como 0,1 e 1 µg L-1 de MgHP, mas é potencialmente tóxico em concentrações muito altas como 100 e 1000 µg L-1.

O câncer é a segunda maior causa de morte no mundo, sendo o de mama o mais incidente em mulheres brasileiras, após o de pele não-melanoma. A quimioterapia é amplamente utilizada no tratamento dessa doença, contudo, possui efeitos colaterais que debilitam as pacientes. Nesse sentido, torna-se necessária a busca por medicamentos mais seletivos e menos tóxicos, e que, sobretudo, combatam a resistência tumoral. O presente estudo objetivou avaliar o potencial mutagênico/recombinogênico do complexo metálico ternário de cobre associado a β-dicetona e 1,10 fenantrolina (CBP-01) e sua citotoxicidade frente a linhagens mamárias, comparada a fármacos rotineiramente utilizados. As concentrações do composto utilizadas no teste de mutagenicidade/recombinogenicidade in vivo foram determinadas pela curva de toxicidade em D. melanogaster. Foi realizado o Teste de Mutação e Recombinação Somática – SMART para avaliar o efeito mutagênico e/ou recombinogênico de CBP-01 (0.03mM, 0.06mM, 0.12mM e 0.25mM), Carboplatina (0.5mM) e Cisplatina (0.025mM). Posteriormente, foram conduzidos os ensaios de MTT (brometo-3-(4,5-dimetiltiazol2-il)-2,5-difeniltetrazólio) a fim de se verificar a citotoxicidade de CBP-01, Carboplatina, Cisplatina e Doxorrubicina, em diferentes concentrações (1µM, 5µM, 10µM, 12.5µM, 25µM e 50µM), à linhagens de Câncer de Mama, T-47D (carcinoma ductal), MCF7 (carcinoma luminal) e MDA-MB-231 (triplo-negativa metastática) e à linhagem não tumoral MCF 10A. Foi possível encontrar a dose letal (DL) de CBP-01 em D. melanogaster (0,4mM) e por meio do teste SMART foi observado o potencial recombinogênico de CBP-01 apenas na menor concentração (0.03mM) e após sua biotransformação, o que sugere a geração de substâncias reativas capazes de gerar danos ao DNA quando metabolizado. Quanto aos demais fármacos, todos induziram alta frequência de manchas, o que confirma seus potenciais recombinogênico/mutagênico. Os resultados encontrados pelo ensaio de MTT mostraram a seletividade de CBP-01, que apresentou citotoxicidade às linhagens tumorais, especialmente contra as células triplo-negativas, MDA-MB-231 (IC50 2.05 após 72h de tratamento e índice de seletividade de 3.10) quando comparado aos demais quimioterápicos. CBP-01 apresenta-se potencialmente promissor para o tratamento do CM, no entanto, estudos adicionais são necessários para compreender os eventos molecuares mediados por seu tratamento, para que assim sejam estabelecidos novos desenhos terapêuticos para o CM. Cancer is the second leading cause of death woroldwide, and breast is the most common in brazilian women, after non-melanoma skin. Chemotherapy is widely used for treatment of this disease, however, responsible for debilitating side effects. Therefore, it is necessary to search for more selective, less toxic drugs, and effective to combat tumor resistance. The present study aimed to evaluate the mutagenic / recombinogenic potential of the copper ternary metal complex associated with β-diketone and 1,10-phenanthroline (CBP-01), and its cytotoxicity in mammalian lineages, compared to routinely used compounds. The concentrations of the compound for in vivo mutagenicity / recombinogenicity test were established by the toxicity curve in D. melanogaster. The Somatic Recombination and Mutation Test - SMART was performed to evaluate the mutagenic and / or recombinogenic effect of CBP-01 (0.03mM, 0.06mM, 0,12mM and 0.25mM), Carboplatin (0.5mM) and Cisplatin (0.025mM). Subsequently, the MTT (bromide-3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium) assays were conducted in order to verify the cytotoxicity of CBP-01, Carboplatin, Cisplatin and Doxorubicin, in diferents concentrations (1µM, 5µM, 10µM, 12.5µM, 25µM e 50µM), to breast cancer lineages T-47D (ductal carcinoma), MCF7 (luminal carcinoma) e MDA-MB-231 (triple-negative metastatic) and non-tumoral lineage MCF 10A. The lethal dose (LD) of CBP-01 in D. melanogaster was defined (0.4mM) and through the SMART test the recombinogenic potential of CBP-01 was only observed at the lowest concentration (0.03mM) and after its biotransformation, which suggests the generation of reactive substances capable of damaging the DNA. The other drugs induced high frequency of spots, confirming their recombinogenic / mutagenic potential. The results found by the MTT assay showed the selectivity of CBP-01, which was cytotoxic to tumor cell lines, especially against triple-negative cells, MDA-MB-231 (IC50 2.05 after 72 hours of treatment and selectivity index of 3.10) when compared to the other chemotherapeutic agents. CBP-01 is potentially promising for CM treatment, however, additional studies are needed to understand the molecular events mediated by their treatment, so that new therapeutic designs for CM will may be established. Dissertação (Mestrado) 2023-02-13

Submitted by Maiara Sales (maiaralf@hotmail.com) on 2019-05-28T20:01:23Z No. of bitstreams: 4 DISSERTA????O_versao_corrigida_RCSN_final_3.pdf: 2341842 bytes, checksum: 51698e1806009ed4968bcb2c1d36d1c7 (MD5) ata_defesa.png: 1974779 bytes, checksum: 20ccaa6dfda7a276a14cea1f3a526be2 (MD5) CartaEncaminhamentoAutodep??sito.png: 1808677 bytes, checksum: cc75a46f857ff5866df21a92ddd44952 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Approved for entry into archive by PPGQ Qu??mica (ppgqsecretaria@gmail.com) on 2019-05-29T12:13:57Z (GMT) No. of bitstreams: 4 DISSERTA????O_versao_corrigida_RCSN_final_3.pdf: 2341842 bytes, checksum: 51698e1806009ed4968bcb2c1d36d1c7 (MD5) ata_defesa.png: 1974779 bytes, checksum: 20ccaa6dfda7a276a14cea1f3a526be2 (MD5) CartaEncaminhamentoAutodep??sito.png: 1808677 bytes, checksum: cc75a46f857ff5866df21a92ddd44952 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Approved for entry into archive by Divis??o de Documenta????o/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2019-05-30T19:05:27Z (GMT) No. of bitstreams: 4 DISSERTA????O_versao_corrigida_RCSN_final_3.pdf: 2341842 bytes, checksum: 51698e1806009ed4968bcb2c1d36d1c7 (MD5) ata_defesa.png: 1974779 bytes, checksum: 20ccaa6dfda7a276a14cea1f3a526be2 (MD5) CartaEncaminhamentoAutodep??sito.png: 1808677 bytes, checksum: cc75a46f857ff5866df21a92ddd44952 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Made available in DSpace on 2019-05-30T19:05:27Z (GMT). No. of bitstreams: 4 DISSERTA????O_versao_corrigida_RCSN_final_3.pdf: 2341842 bytes, checksum: 51698e1806009ed4968bcb2c1d36d1c7 (MD5) ata_defesa.png: 1974779 bytes, checksum: 20ccaa6dfda7a276a14cea1f3a526be2 (MD5) CartaEncaminhamentoAutodep??sito.png: 1808677 bytes, checksum: cc75a46f857ff5866df21a92ddd44952 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2019-03-22 CNPQ - Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient??fico e Tecnol??gico 92984187123 The Amazon region presents a vast biodiversity, but little studied. This project aims to analyze the species Aspidosperma nitidum (Benth) belonging to the family Apocynaceae, commonly known in the north of the country as carapana??ba, due to harboring carapan?? in their covers. Therefore, this work aims to contribute to the phytochemical study as well as biological assays of the extracts, fractions and substances isolated from the branches, leaves and barks of the species A. nitidum. The extracts were obtained by successive maceration at room temperature with different solvents, which were submitted to classical and modern chromatographic methods, as well as to spectroscopic and spectroscopic methods (Mass Spectrometer, Nuclear Magnetic Resonance, Infrared and UV Region Absorption Spectroscopy -visible). Thus, it was possible to identify four indole alkaloids, two of which were not yet reported in the species, carapanaubine and deoxycordifoline, as well as the known harmano carboxylic acid and 3??, 20??-10-Methoxy-18,19-dihydrocorinanteol. This work also evaluated the antioxidant activity, obtaining good results for the methanolic extracts, fractions of the partition, chloroform and hydroalcoholic phases and for isolated substance carapanaubina. It has been found that the methanolic and aqueous extracts of the barks of the present study present moderate inhibition potential of acetylcholinesterase as well as the isolated substance carapanaubine, a promising substance in the studies of new drug syntheses. However, for the substance desoxycordifoline, it is necessary that there be more isolation of the same, so that its test is reworked, since in the literature it reports its high potential which could not be confirmed in this work. It was also found that the chloroform phase and the substance carapanaubina presented promising cytotoxic activity with values ??????of IC50 < 40??g/mL. A regi??o Amaz??nica apresenta uma vasta biodiversidade, por??m pouco estudada. Utilizando a estrat??gia de combinar informa????es de conhecimento popular para o uso medicinal de esp??cies regionais com estudos fitoqu??micos, esse projeto objetiva analisar a esp??cie Aspidosperma nitidum (Benth) pertencente ?? fam??lia Apocynaceae, comumente conhecida no norte do pa??s como carapana??ba, devido a abrigar carapan??s em suas lamelas. Diante disso, este trabalho tem como objetivo contribuir com o estudo fitoqu??mico al??m de realizar ensaios biol??gicos dos extratos, fra????es e subst??ncias isoladas dos galhos, folhas e cascas da esp??cie A. nitidum. Os extratos foram obtidos por macera????o sucessiva ?? temperatura ambiente com diferentes solventes, os quais foram submetidos a m??todos cromatogr??ficos cl??ssicos e modernos, assim como a m??todos espectrom??tricos e espectrosc??picos (Espectr??metro de massas, Resson??ncia Magn??tica Nuclear, Espectroscopia de Absor????o nas Regi??es do Infravermelho e UV-vis??vel). Com isso, foi poss??vel identificar quatro alcal??ides ind??licos sendo dois ainda n??o relatados na esp??cie, a carapanaubina e a desoxicordifolina, al??m dos j?? conhecidos ??cido harmano carbox??lico e o 3??,20??-10-Metoxi-18,19-diidro-corinanteol. Este trabalho avaliou tamb??m a atividade antioxidante, obtendo bons resultados para os extratos metan??licos, fra????es da parti????o, fase clorof??rmica e hidroalco??lica e para subst??ncia isolada carapanaubina. Verificou-se que os extratos metan??lico e aquoso das cascas da esp??cie em estudo apresentam moderado potencial de inibi????o da acetilcolinesterase assim como a subst??ncia isolada carapanaubina, uma promissora subst??ncia nos estudos de s??nteses de novos f??rmacos. Entretanto, para a subst??ncia desoxicordifolina, ?? necess??rio, que haja mais isolamento da da mesma, para que seja refeito seu teste, visto que na literatura relata seu alto potencial o que n??o p??de ser confirmado neste trabalho. Constatou-se tamb??m que a fase clorof??rmica e a subst??ncia carapanaubina apresentaram atividade citot??xica promissora com valores de IC50 < 40??g/mL.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas, 2018. Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq), Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) e Fundação de Apoio à Pesquisa do Distrito Federal (FAPDF). O câncer de próstata é um problema de saúde pública em todo o mundo. As alternativas terapêuticas ainda são limitadas. A biodiversidade brasileira representa uma importante fonte de potencial descoberta de novos fármacos derivados de plantas. O objetivo desse estudo foi realizar um estudo químico biomonitorado de extratos vegetais de Pouteria ramiflora, devido ao seu potencial citotóxico em linhagens celulares de câncer da próstata humano sensíveis a andrógenos (LNCaP), demonstrado em estudo anterior. O extrato bruto de caule de P. ramiflora foi fracionado e a citotoxicidade das frações foi avaliada por MTT (brometo de 3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difeniltetrazólio). A expressão de AR e mTOR total e fosforilado foi realizada por meio de western blot, para avaliação de vias relacionadas a carcinogênese. A fração hexano:acetato de etila foi submetida a cromatografia em coluna, sendo obtidos 46 grupos de frações agrupadas de acordo com o perfil em cromatografia em camada delgada. Os grupos de frações foram testados (MTT). Dois dos grupos que apresentaram atividade citotóxica foram submetidos ao estudo químico. Entre as 5 frações oriundas de extrato hexânico do caule de P. ramiflora, a fração hexano:acetato de etila foi a que apresentou maior rendimento e melhor resposta citotóxica. Com a separação desta fração foram obtidos 46 grupos de frações sendo que os grupos 4 e 8 foram selecionados para purificação. PR01, oriundo do grupo 4, continha β-amirina, acetato de β-amirina, lupeol, acetato de lupeol e friedelina. Desses, acetato de β-amirina foi isolado. A análise da expressão de proteínas mostrou que o grupo 4 é ativo devido à diminuição de expressão do AR e mTOR. O grupo 8 foi purificado e o composto epifriedelanol foi isolado, no entanto, não mostrou atividade citotóxica. O estudo biomonitorado de Pouteria ramiflora levou à identificação e isolamento de compostos com potencial citotóxico para linhagem de células de adenocarcinoma de próstata humano. Prostate cancer is a public health problem worldwide. Therapeutic alternatives are still limited. The Brazilian biodiversity represents an importante source for discovery of new drugs derived from plants. We aimed to conduct a biomonitoring chemical study of plant extracts from Pouteria ramiflora, previously shown to be cytotoxic in androgen-sensitive human prostate cancer cell lines (LNCaP). The raw stem extract of P. ramiflora was fractionated and the cytotoxicity of the fractions were evaluated by MTT (3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide). The expression of total and phosphorylated mTOR and AR was assessed by western blot, for evaluation of pathways related to carcinogenesis. The hexane:ethyl acetate fraction was fractionated by column chromatography, result in 46 groups, according to the thin layer chromatography profile. These groups were evaluated by MTT. Two groups that showed cytotoxic activity were submitted to the chemical study. Among 5 fractions from the hexane extract of the stem of Pouteria ramiflora, the hexane:ethyl acetate fraction presented higher yield and better cytotoxic response. This fraction was separated into 46 groups, and the fractions 4 and 8 were selected for purification. PR01, from group "4", was composed of β-amirin, β-amyrin acetate, lupeol, lupeol acetate and friedelin, and β-amirin acetate was isolated. Protein expression analysis showed that group 4 is active due to decreased expression of the AR and mTOR. Group "8" was purified and the epifriedelanol compound was isolated, but, it did not demonstrate cytotoxic activity. The biomonitoring study of Pouteria ramiflora led to the identification of compounds with cytotoxic potential in human prostate adenocarcinoma cell line.

Entre os materiais com potencial para aplicações em implantes biodegradáveis o magnésio tem ganhado uma atenção especial por apresentar uma boa combinação de propriedades mecânicas, biológicas e eletroquímicas. Estudos recentes mostram que o processamento do magnésio por deformação plástica severa refina a microestrutura e melhora as propriedades mecânicas. O presente trabalho mostra a caracterização microestrutural e mecânica do magnésio puro e de ligas comerciais AZ31, AZ91 e ZK60 após processamento por ECAP (Equal-Channel Angular Pressing) e HPT (High Pressure Torsion). O magnésio comercialmente puro (CP-Mg) foi processado por ECAP em alta temperatura e por HPT na temperatura ambiente. As ligas de magnésio foram processadas por HPT na temperatura ambiente. Para avaliar possíveis modificações nas propriedades mecânicas causadas pelo processamento foram feitos ensaios de tração em temperatura ambiente das amostras de magnésio e foram construídos mapas de distribuição de dureza das seções transversais das amostras processadas por HPT. A taxa de corrosão de todas as amostras foi determinada por meio de ensaios eletroquímicos de polarização e ensaios de evolução de hidrogênio. A resistência de polarização também foi medida utilizando técnicas de espectroscopia de impedância eletroquímica EIS (electrochemical impedance spectroscopy). Para comparar os aspectos morfológicos do processo corrosivo em cada amostra também foram realizados ensaios de inspeção visual com registro fotográfico. Para avaliação da citotoxicidade foram utilizados dois testes diferentes o MTT e o teste comercial Live/Dead. O tipo de distribuição e o tamanho médio de grão nas amostras em cada etapa de processamento foram avaliados utilizando procedimentos de metalografia e a aquisição de imagens foi feita por microscopia óptica, microscopia eletrônica de varredura (MEV), e microscopia eletrônica de transmissão (MET), no caso das amostras com microestrutura ultrafina. Os resultados mostram que o processamento por HPT refina a estrutura de grãos do magnésio e suas ligas até a escala submicrométrica e aumenta significativamente a dureza. A biocompatibilidade não é afetada pelo processamento e o comportamento durante a corrosão varia dependendo do material processado. O refino de grão promove uma mudança no comportamento em corrosão de um perfil de corrosão localizada para corrosão generalizada no magnésio puro. Os resultados dos ensaios eletroquímicos não mostram mudanças significativa nas ligas de magnésio após processamento por HPT. Among the materials with potential for applications as biomaterials magnesium has received special attention due to their good combination of desirable (mechanical, biological and electrochemical) properties. Recent studies show that the processing of magnesium by severe plastic deformation refines the microstructure and improves the mechanical properties. The present work shows the microstructural and mechanical characterization of pure magnesium and commercial alloys AZ31, AZ91 and ZK60 after processing by ECAP (Equal-Channel Angular Pressing) and HPT (High Pressure Torsion). Commercially pure magnesium (CP-Mg) was processed by ECAP at high temperature and by HPT at room temperature. The magnesium alloys were processed by HPT at room temperature. To evaluate possible modifications in the mechanical properties caused by the processing tensile tests were performed at room temperature on magnesium samples and hardness distribution maps of HPT discs cross section were constructed. The corrosion rate of all samples was determined by electrochemical polarization tests and hydrogen evolution tests. The polarization resistance was also measured using electrochemical impedance spectroscopy (EIS) techniques. To compare the morphological aspects of the corrosive process in each sample, visual inspection tests with photographic record were also carried out. To evaluate the cytotoxicity, two different tests were used the MTT and the Live / Dead assays. The distribution and the average grain size in the samples at each processing stage were evaluated using metallography procedures and the image acquisition was performed by optical microscopy, scanning electron microscopy (SEM) and transmission electron microscopy (MET) in the case of samples with ultrafine microstructure. The results show that HPT processing refines the grain structure of magnesium and its alloys to submicron scale and significantly increases hardness. Biocompatibility is not affected by processing and the corrosion behavior varies depending on material. Grain refinement promotes a change from localized corrosion to generalized corrosion in pure magnesium. The electrochemical tests results do not show significant changes on corrosion behavior of magnesium alloys after processing by HPT.

Made available in DSpace on 2019-03-11T12:47:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_11890_Dissertação Final Patrícia Moreira Valente.pdf: 920970 bytes, checksum: 219955f956fae63f7a975aa39eeaf562 (MD5) Previous issue date: 2018-10-10 Diversos metabólitos secundários são sintetizados pelas plantas com o objetivo de garantir sua sobrevivência no ambiente. Na propagação in vitro os compostos metabolizados pelas plantas podem gerar um ambiente tóxico devido ao acúmulo de substâncias químicas em um sistema fechado de cultivo, como observado para plantas de Dionaea muscipula, que apresentaram morte precoce com sintomas de autointoxicação. A partir dessas observações, objetivou-se avaliar o potencial tóxico e alelopático dos extratos de D. muscipula nos estágios de vida e morte e dos meios de cultura onde foram cultivadas, bem como do composto majoritário encontrado, em bioensaios com as plantas modelo alface (Lactuca sativa) e cebola (Allium cepa). A germinação das sementes e o desenvolvimento inicial das plântulas foram analisados, assim como o índice mitótico, alterações cromossômicas e nucleares em células meristemáticas dos modelos vegetais. Reduções na taxa de germinação, do crescimento radicular e do índice mitótico foram observados nas plântulas tratadas, comparado ao controle negativo, água. Além disso, foi observada uma elevada incidência de alterações cromossômicas, aumentadas conforme dose-dependência, demostrando o efeito citotóxico dos extratos de D. muscipula e seu composto majoritário, plumbagina. Dentre as alterações cromossômicas, o elevado número de cromossomos aderentes indica ação aneugênica dos compostos, assim como a elevada incidência de núcleos condensados demostra a potencialidade dos compostos em induzir a morte celular. A maior visualização de alterações nucleares nos bioensaios tratados com a plumbagina indica sua atividade genotóxica, também observada para o extrato da planta viva, com concentração de 89,71% de plumbagina. Diante dos resultados obtidos, pode se afirmar que os extratos de plantas de D. muscipula apresentam potencial para sua utilização como bioherbicida, sendo seu efeito fitotóxico atribuído à substância natural plumbagina, responsável pela morte precoce das plantas de D. muscipula durante seu cultivo in vitro.

Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-07T15:17:02Z No. of bitstreams: 1 Ana Carolina da Cruz Campos Dissertacao completa.pdf: 2252356 bytes, checksum: b400ce2fe3e5d3a6c50b76439cf6e5e9 (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-07T15:17:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ana Carolina da Cruz Campos Dissertacao completa.pdf: 2252356 bytes, checksum: b400ce2fe3e5d3a6c50b76439cf6e5e9 (MD5) Previous issue date: 2018-03-18 Fundação Carlos Chagas Filho de Amparo a Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro The metallic ions iron, cooper and zinc are essentials elements to survival of both microorganisms and hosts. To microorganisms, metallic ions take part of proteins structures and perform an important role in enzymatic activities as co-factors. However, these metals might also have a deleterious effect to cells, since in high concentrations they take part in free radical generation, act on peroxidation of membrane lipids and block action of fundamental enzymes to cellular metabolism. On a previous study, inhibition of iron capitation altered biofilm formation and adherence of enteroaggregative E. coli (EAEC) to epithelial cells. Hence, we decided to investigate the metallic ions influence in adherence of EAEC strains to biotic and abiotic surfaces. The strains used on this study had been already characterized regarding their fimbriae expression. Besides other characteristics, such as presence of iron capitation genes in strains, were considered when we evaluated the responses to metallic ions. Data showed that there is no parallel between these characteristics and the strains response to metallic ions. Nevertheless, results showed that metallic ions, especially cooper and zinc ions reduce biofilm formation in most of the tested strains. Additionally, other aspects like substrate influence biofilm formation. On this work, we observed that metallic ions interfere with biofilm formation in a distinguish way, there is a different response depending of the substrate, glass or polystyrene. We also tested if the presence of oxygen interfered with biofilm formation and it might increase or reduce biofilm in some of the strains. In addition, the strains showed increased or reduced hydrophobicity in the presence of metallic ions. Metals not only altered biofilm formation but also reduced cell viability on the biofilm. The cytotoxicity assays were performed in eukaryotic cells to verify the metals influence on cellular viability. Three cells lines were tested, HEp-2, T84 and Caco-2. The most resistant cell line, Caco-2, was chosen to adherence assays. We observed that metals modify the adherence pattern of some bacterial strains. In conclusion metallic ions interfere with EAEC pathogenesis, probably altering the surface of bacteria. O íons metálicos de ferro, cobre e zinco são elementos essências para a sobrevivência de microrganismos e de mamíferos. Para os microrganismos os íons metálicos participam da estrutura de proteínas exercendo um papel importante na atividade enzimática como co-fator. No entanto, esses metais também podem ter efeitos deletérios para as células. Uma vez que em altas concentrações participam da geração de radicais livres, atuam na peroxidação de lipídeos de membrana e bloqueiam a ação de enzimas fundamentais para o metabolismo celular. Em um estudo recente foi demonstrado que a inibição da captação de íons ferro alterou a formação de biofilmes e a aderência das cepas EAEC. Foram usados neste estudo cepas já caracterizadas quanto à expressão de fimbrias. Além disto, outras características, como a presença de genes de captação de ferro pelas cepas foram levados em conta na finalidade de se encontrar alguma relação destas características com as respostas aos íons metálicos. Nossos resultados mostraram que de fato não se tem nenhum paralelo entre essas características e a resposta das cepas aos íons metálicos. Contudo, resultados obtidos mostram que os íons metálicos principalmente os íons de cobre e zinco reduziram a formação de biofilme para a maioria das amostras testadas. Além disto, a formação de biofilme também foi influenciada por outros aspectos como o substrato. Os íons metálicos foram capazes de interferir na formação do biofilme de forma distinta. Dependendo do substrato, vidro ou poliestireno, levou a uma resposta diferente na formação de biofilme. Também foi testado se a presença de oxigênio interfere na formação do biofilme. Para algumas cepas na presença de metais e em aerobiose ocorreu aumento da formação de biofilme, enquanto para outras ocorreu redução. As cepas apresentaram também alteração na hidrofobicidade na presença dos íons metálicos. Os metais além de alterar a formação de biofilme também reduziram a viabilidade das células no biofilme. Foi realizado o teste de citoxidade das células eucarióticas para verificar a influência dos metais na viabilidade celular. Foram testados três linhagens, HEp-2, T84 e Caco-2. A mais resistente, a Caco-2, foi escolhida para os experimentos de aderência. Observamos que os metais alteraram o padrão de aderência de algumas cepas bacterianas. Todos esses resultados sugeriram que os íons metálicos podem interferir em processos da patogênese de EAEC, provavelmente alterando a superfície bacteriana.

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico As cascas de Luehea speciosa, família Malvaceae, são utilizadas na medicina tradicional para o tratamento de disenteria, reumatismo, tumores, bronquites, feridas de pele, emagrecimento entre outros. Porém, existem poucas informações sobre a espécie na literatura. Dessa forma, faz-se de grande interesse investigar a sua constituição química e suas possíveis atividades biológicas, visto que a comprovação cientifica promove uma alternativa de tratamento de forma segura aos usuários. Neste sentido, o presente estudo buscou a constituição química do extrato bruto seco (EBS) e das frações hexânica (FHX), diclorometano (FDM), acetato de etila (FAE) e metanólica (FME), da espécie, através de analises por cromatografia liquida de alta eficiência acoplada a espectrometria de massas - LC/MS, bem como suas atividades antioxidante, por bioautografia, e citotóxica, in vitro, frente as linhagens de células tumorais, HELA e HEP-2 e VERO. As amostras apresentaram atividade antioxidante, sendo as frações FDM e FAE com perfil mais relevante. O EBS e as frações demonstraram citotoxidade sobre todas as linhas em estudo, porém a fração FDM apresentou maior atividade citotóxica contra células tumorais. Nas análises por LC/MS, foram detectados compostos fenólicos, com características sugestivas da presença do ácido chicórico, através do m/z = 148, além do espectro de UV semelhante. Esses resultados demonstram que a espécie em estudo possui atividade antioxidante e sugerem que a amostra exerce citotoxidade contra células tumorais, apresentando-se promissora para futuros estudos. The barks of Luehea speciosa, family Malvaceae, are used in traditional medicine to treat dysentery, rheumatism, tumors, bronchitis, skin wounds, weight loss and others diseases. However, studies give little information about the species in the literature. Thus, it is of great interest to investigate its chemical constitution and biological activities, since the scientific proof of its activity can promote, in the future, a therapeutic alternative. The present study analyzed the chemical constitution of the dry crude extract (EBS) and hexane (FHX), dichloromethane (FDM), ethyl acetate (AED) and methanolic (FME) fractions of the species by high-performance liquid chromatography (HPLC) with tandem mass spectrometric - LC/MS, as well as its antioxidant activities by bioautography and cytotoxic assays, in vitro, against HELA, HEP-2 and VERO tumor cell lines. The samples showed antioxidant activity, being the fractions FDM and AED results more relevant. The EBS and fractions demonstrated cytotoxicity on all cell lines, however the FDM fraction had greater cytotoxic activity against tumor cells. In the LC/MS analyzes, were detected phenolic compounds and suggestive characteristics of chicoric acid presence through m/z = 148, as in the UV spectrum. These results demonstrate that this species has antioxidant activity and suggest its cytotoxicity against tumor cells, being a promising species for future studies.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2017. O presente estudo avaliou o efeito citotóxico do extrato de semente de uva (ESU) em contato direto e transdentinário com células de cultura primária de polpa humana, em diferentes concentrações e tempo de exposição. Células pulpares assim como discos de dentina foram obtidas a partir de terceiros molares de adultos com idades entre 18 e 25 anos. Culturas primárias foram estabelecidas e cultivadas até a obtenção do número adequado de células. O ESU foi diluído previamente ao início de cada experimento. Após a quarta passagem, no teste de contato direto, dez mil células foram semeadas em placas de 96 poços e após 24 horas receberam os tratamentos. Na primeira fase, testou-se diferentes concentrações formando os seguintes grupos: G1: controle negativo celular (D-MEM); G2: controle negativo de tratamento (Hepes); G3: 6,5% de ESU; G4: 0,65% de ESU; G5: 0,065% de ESU; G6: 0,0065% de ESU; G7: controle positivo com peróxido (H2O2 a 20%). Após uma hora de contato, as soluções experimentais foram removidas e novo meio de cultivo (DMEM) foi adicionado. Na segunda fase foram testados diferentes tempos de exposição das melhores concentrações da “fase 1” (0,65% ESU e 0,0065% ESU). Para tal os grupos experimentais foram: G1: controle celular (DMEM) por 1 hora, G2: controle de tratamento (Hepes) por 1 hora, G3: ESU por 1 hora, G4: ESU por 30 minutos, G5: ESU por 10 minutos, G6: ESU por 1 minuto, G7: controle peróxido (H2O2 a 20%) em contato por 1 hora. No teste transdentinário, foram semeadas cinquenta mil células em discos de dentina adaptados a um dispositivo de câmara pulpar artificial em placas de 24 poços. Os seguintes grupos permaneceram por 24h em contato com o ESU: G1: controle negativo celular (D-MEM); G2: controle negativo de tratamento (Hepes); G3: 0,65% de ESU; G4: controle peróxido (H2O2 a 20%). Transcorridos os tempos experimentais de contato, as soluções testadas foram removidas e novo meio de cultivo (DMEM) foi adicionado. Para compor a analise de citotoxicidade, o metabolismo celular foi avaliado por meio do teste de produção de desidrogenase succínica (MTT) 24 e 72 horas após o tratamento; o estresse oxidativo foi avaliado por meio do ensaio de óxido nítrico (ON) 24 e 72h após os tratamentos, e foi realizada microscopia eletrônica de varredura para ilustração dos melhores grupos. Os resultados foram analisados por testes paramétricos (ANOVA e Tukey) ou nao paramétricos (Kruskall-Wallis e Mann-Whitney; α=0,05). De acordo com os dados obtidos, foi possível observar que a menor concentração de extrato de uva testada (0.0065%) apresentou resultados favoráveis tanto para o metabolismo celular, com um aumento no período de 24 horas, quanto a produção de ON, com redução dessa produção no período de 72 horas. Nenhuma resultou em redução do metabolismo celular maior que 10% do controle, indicando a não toxicidade desse extrato tanto aplicado diretamente sobre a cultura primaria de células pulpares quanto na presença de barreira dentinária.O ESU foi capaz de estimular o metabolismo celular sem levar a um aumento do estresse oxidativo em todos os tempos avaliados e mesmo na menor concentração, sugerindo uma potencial bioatividade deste agente crosslinker sobre células pulpares. The present study evaluated the cytotoxic effect of grape seed extract (GSE) in direct and transdentinal contact with cells of primary culture of human pulp, in different concentrations and time of exposure. Pulp cells as well as dentin discs were obtained from adults at the age of 18 years and 25 years. Primary cultures were established and cultured until adequate numbers of cells were obtained. GSE containing 95% proanthocyanidin was diluted in Hepes buffer before each experiment. After a fourth passage, on direct contact test, ten thousand cells were seeded in 96-well plates and after 24 hours, received treatments. In the first phase, different concentrations were tested to form the following groups: G1: cell negative control (D-MEM); G2: negative control of treatment (Hepes); G3: 6.5% GSE; G4: 0.65% GSE; G5: 0.065% GSE; G6: 0.0065% GSE; G7: Positive control with peroxide (20% H2O2). After one hour of contact, as experimental solutions were removed and new culture medium (DMEM) was added. In the second phase, different exposure times of the best concentrations of "phase 1" (0.65% GSE and 0.0065% GSE) were tested. G4: GSE for 1 hour, G3: GSE for 1 hour, G3: GSE for 1 hour, G3: GSE for 1 hour, G4: GSE for 1 hour G6: GSE for 1 minute, G7: control peroxide (H2O2 at 20%) in contact for 1 hour. In the transdentinal test, fifty thousand cells were seeded in dentin discs adapted to an artificial pulp chamber device in 24-well plates. The following groups remained for 24 hours in contact with the GSE: G1: cellular negative control (D-MEM); G2: negative control of treatment (Hepes); G3: 0.65% GSE; G4: peroxide control (20% H2O2). After the experimental times of contact, as tested solutions were removed and new culture medium (DMEM) was added. To compose a cytotoxicity analysis, the cellular metabolism, evaluated by means of the succinic dehydrogenase (MTT) test 24 and 72 hours after the treatment; Oxidative stress was evaluated by means of the nitric oxide (ON) test 24h and 72h after the treatments, and scanning electron microscopy was performed to illustrate the best groups. The results were analyzed by parametric (ANOVA and Tukey) or non-parametric testicles (Kruskall-Wallis and Mann-Whitney; α = 0.05). According to the data obtained, it was possible to observe that the lowest concentration of grape extract tested (0.0065%) presented favorable results both for the cellular metabolism, with an increase in the period of 24 hours, and for a production of NO, as Reduction of production in the 72-hour period. Although different behaviors were observed for the different concentrations, they resulted in reduction of the cellular metabolism greater than 10% of the control, indicating the non-toxicity of this extract both applied directly on a primary culture of cellular cells in the presence of dentin barrier. The GSE was able to stimulate cell metabolism without increasing oxidative stress at all correct times and even at the lowest concentration, suggesting a potential bioactivity of this crosslinking agent on pulp cells.

A atividade citotóxica frente a células tumorais de derivados do lapachol é reconhecida pela comunidade científica e vem sendo estudada desde o século passado. Com vistas a desenvolver uma estratégia que possa melhorar essa bioatividade, tornando as substâncias citotóxicas para células tumorais e pouco agressivas contra células normais, neste trabalho foram sintetizadas quinonas 1,2,3-triazólicas inéditas acopladas ao núcleo organo-selênio. A síntese destes compostos foi planejada de modo a unir dois centros redox, um capaz de gerar espécies reativas de oxigênio e outro capaz de utilizar tais espécies em um modo similar ao realizado pela enzima glutationa peroxidase, porém, sem a especificidade desta enzima, com resultados deletérios para a célula tumoral. Os compostos foram avaliados contra seis linhagens de células tumorais (HL-60, HCT-116, PC3, SF295, MDA-MB-435 e OVCAR-8) e três linhagens de células normais (V79, L-929 e PBMC). Entre os compostos testados, diversas moléculas apresentaram alta citotoxicidade frente às linhagens tumorais testadas (IC50 < 2 ¿M), sendo alguns destes compostos mais ativos e seletivos que a doxorrubicina (controle positivo) e os esperados resultados em células normais, apresentando bons índices de seletividade. Também foi analisada a capacidade de dois destes triazóis reagirem com a glutationa reduzida na presença da espécie reativa de oxigênio H2O2, em comparação ao fármaco ebselen. Os resultados foram positivos, mostrando que estes compostos são capazes de utilizar essa espécie reativa de oxigênio em reações químicas. Por fim, também foi avaliada a atuação da enzima NAD(P)H quinona oxidoredutase (NQO1) intrinsicamente relacionada com o mecanismo de ação farmacológica de quinonas. Cytotoxic activity of lapachol derivatives against tumor cells is known and has been studied by the scientific community since the last century. In order to develop a new strategy to improve this bioactivity, turning these substances more cytotoxic against tumor cells and less aggressive against normal cells, new 1,2,3-triazolic naphthoquinone compounds were synthesized, by coupling the naphthoquinone part to organochalcogen groups. The synthetic procedure was planned to engage a ROS generator group to a ROS user group that could use this reactive species in a manner similar to that performed by theenzyme glutathione peroxidase, but without the specificity of this enzyme, leading to deleterious results for the tumor cell. These compounds were evaluated against six different cancer cell lines (HL-60, HCT-116, PC3, SF295, MDA-MB-435 e OVCAR-8) and three normal cell lines (V79, L-929 e PBMC). Most of these compounds showed high cytotoxicity against cancer cell lines (IC50 < 2 M), some of them even more active thandoxorubicine (positive control) and showed a good selectivity index against normal cell lines. Also the ability of two of these triazoles to react with glutathione in the presence of the reactive oxygen species H2O2, compared to medicine drug ebselen was analyzed. Theresults were positive, presenting that these compounds are able to use this reactive species of oxygen in reactions. At the end, the role of NAD(P)H quinone oxidoreductase (NQO1) was evaluated on these compounds, showing their intrinsic activity in the mecanism ofaction of these compounds.

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior O câncer é uma doença multifatorial que pode acometer qualquer indivíduo, independente da classe social, econômica, raça e região geográfica e que onera bastante o sistema de saúde. É imprescindível o desenvolvimento de tratamentos mais eficazes e com menores efeitos adversos e estudos visando avaliar o potencial terapêutico de novas substâncias antitumorais são de suma importância. Princípios ativos têm sido isolados com sucesso de fontes naturais como plantas e microrganismos. O quimioterápico rapamicina, por exemplo, é um antibióticos isolado de microrganismos. Trichoderma asperelloides é um fungo micoparasita saprófito, heterotrófico, cosmopolita, envolvido no processo de reciclagem de nutrientes e regulação da microbiota associada ao solo que tem sido utilizado como biocontrole de fitopatógenos, em substituição ao uso de fungicidas químicos. Princípios ativos com atividade microbicida, antiviral, imunomodulatória e antitumoral já foram isolados do extrato de fungos do mesmo gênero (T. viride T. harzianum e T. asperellum). Não há estudos, entretanto, reportando moléculas antitumorais derivadas de T. asperelloides. O objetivo deste projeto foi avaliar o efeito biológico do extrato etanólico do fungo T. asperelloides (ExtTa) e de suas frações sobre linhagens celulares derivadas de adenocarcinoma de mama humanoo (MDA-MB-231 e MCF7) e murino (4T1). O extrato total de hifas e esporos (ExTa) foi obtido em etanol 95% e as frações isoladas por FPLC. Verificou-se por SDS-Page uma predominância de proteínas de massa molecular entre 30 e 3,5 kDa e de glicoproteínas (coloração de Schiff) no extrato. Os efeitos biológicos do extrato e de suas frações foram avaliados in vitro em linhagens de adenocarcinoma de mama Nos ensaios de viabilidade celular utilizando o MTT, foi observada toxicidade para as células tumorais, sendo a MDA-MB-231 mais sensível apresentando índice de seletividade (IS) de 1,6 em comparação com a linhagem não tumorigênica de fibroblasto humano GM637. As frações 4.1 e 5.2 do extrato apresentaram IS ainda maior de 1,96 e 1,92, respectivamente. A ação do ExtTa não envolve o aumento da produção de ROS (avaliação utilizando a sonda DFCH-DA), entretanto ele induz parada na fase G0-G1 e redução de células MDA-MB-231 na fase S (avaliado por citometria de fluxo). Foi observado por microscopia eletrônica de transmissão um aumento na produção de vacúolos autofágicos nas linhagens MDA-MB-231 e GM637, após o tratamento com ExtTa. Os resultados sugerem que o extrato de T. asperelloides possui potencial citotóxico contra linhagens tumorais, promove parada do ciclo celular e formação de vacúolos Cancer is a multifactorial disease, with the potential to assail any individual, with no regards to social class, religion, race or place. The development of effective forms of cancer treatment, with minor side effects is of extreme relevance due to the importance of this disease in the world and its excessive cost to the public health system. Therefore, the discovery and evaluation of new therapeutic substances is highly regarded. Many of the active principles being studied today were isolated from natural resources, such as plants and microorganisms. In fact, a few of the chemotherapy drugs largely deployed in the medical facilities, like the rapamycin, are antibiotics produced by fungi or bacteria. The fungus Trichoderma asperelloides is a saprophytic, heterotrophic and cosmopolite micoparasite, related to the soil nutrient recycling and regulation that has been used as a mean of biocontrol of phytopathogens, replacing the chemical fungicides. Active principles with bactericide, antiviral, imunomodulator and antitumoral properties have already been isolated in fungi of this same genre (T. viride, T. harzianum and T. asperellum). However, there has been no studies regarding antitumoral molecules in the T. asperelloides extract. The aim of this project was to evaluate the biological effects of the etanolic extract of the T. asperelloides (ExtTa) fungus and its fractions on human (MDA-MB-231 and MCF7) and mouse (4T-1) breast tumor cell lineages. The hyphae and spore extract was made with 95% ethanol and the fractions were separated by FPLC. Using BCA (bicinchoninic acid) and DNS (dinitrosalisilic acid) 40,00 mg/ml and 139,07 mg/ml of protein and 7,08 mg/ml and 10,20 mg/ml of carbohydrates were isolated in ExtTa 1 and 2 respectively. SDS-Page of the protein showed that most of the proteins presented a mass between 30 and 3,5 kDa and the Schiff staining showed predominance of glycoproteins. Cellular viability MTT assay showed that the extracts had high toxicity to tumor cells. The non-tumor human fibroblast lineage GM637 was used to determine the selectivity index (SI) and MDA-MB-231 was the most susceptible cell line. Fractions 4.1 and 5.2 showed a higher IS (1,96 and 1,92 respectively). The influence of ExtTa on the oxidative stress was measured using a DFCH-DA probe, which showed no influence over the production of ROS. Also, flow cytometry showed that the ExtTa seems to induce G0-G1 cell cycle arrest and reduction of the number of MDA-MB-23 cells in S phase. An increase on the number of autophagic vesicles in both MDA-MB-231 and GM637 lineages was observed through ETM (electronic transmission microscopy), after the treatment with ExtTa. These results suggest that the T.asperelloides has a cytotoxic potential against tumor cells and biological effects on cycle cell arrest and autophagy vesicle formation on the adenocarcinoma MDA-MB-231.

Submitted by Fabiano Jucá (fjuca@unicentro.br) on 2017-08-03T17:48:51Z No. of bitstreams: 1 LUCIANA ERZINGER ALVES DE CAMARGO.pdf: 14056677 bytes, checksum: 1af971f4f6f0b2ab2e84aa6a08bde7da (MD5) Made available in DSpace on 2017-08-03T17:48:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LUCIANA ERZINGER ALVES DE CAMARGO.pdf: 14056677 bytes, checksum: 1af971f4f6f0b2ab2e84aa6a08bde7da (MD5) Previous issue date: 2017-04-17 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Cancer represents the second cause of non traumatic diseases that can causes death worldwide. There are a wide therapeutic arsenal available and it is composed for sinthetics and natural compounds, however due to their high tocixity and the lack of seletivity, the pacient adhesion is impaired. Curcumin has important biological activities, as well as pronouced effects over several molecular targets, which are involved in the tumor promotion and maintenance. However, curcumin applicability is limited, due to its physicochemical features, such as low aqueous solubility and permeability, chemical instability, resulting in pharmacokinetic drawbacks. The development of nanostructured systems is one of the main strategies to increase curcumin therapeutics efficience. In present work, it was obtained bovine serum albumin nanoparticles containing curcumin, by the desolvation method, and particles shoed spherical morfhology, mean diameter 150 ± 8nm , polydispersity index 0.16 ± 0.02 and zeta potential -32 ± 3mV. The encapsulation efficiency was analysed by high performance liquid chromatography, presentig 45 ± 11%. The physicochemical characterization assay demonstrated the nanoencapsulation process has provided to curcumin amorphous characteristics and interaction between curcumin and the polymer. The stability trial showed the curcumin nanoparticles mantained constant the mean diamether and polydispersity index for 45 days at room or refrigerate temperatures. The curcumin release was prolonged, biphasic and diffusion-dependent. The antioxidant assay, which was performed temporally over the ABTS radical, showed maintenance of the curcumin activity by the nanoparticles for the analyzed period, while the non encapsuled curcumin, showed effect any after 4 hours. The cytotoxicity over normal cells (erythrocytes), it was observed that encapsuled curcumin exerted lower hemolysis significantly than curcumin, while the cytotoxicity over tumor lines (HeLa cell and B16F10) was similar. At in vivo anti tumor activity, performed in melanoma murine model, curcumin loaded nanoparticles showed higher efficiency than curcumin, assessed by the survival and tumor volume in mice. Albumin nanoparticles are efficient curcumin carriers, for its possible biological application, specially, over tumor models analyzed. O câncer representa a segunda maior causa de morte não traumática mundial. O arsenal terapêutico disponível é amplo, composto por drogas de origem sintética e natural, porém devido à toxicidade e baixa seletividade dos tratamentos atualmente prescritos, a adesão por parte dos pacientes à terapia é limitada. A curcumina possui importantes propriedades biológicas, bem como pronunciado efeito sobre diversos alvos moleculares, envolvidos na promoção e manutenção das neoplasias. No entanto, sua aplicabilidade é limitada, devido às suas características físico-químicas, como baixa solubilidade e permeabilidade, instabilidade química, resultando em problemas farmacocinéticos. O desenvolvimento de sistemas nanoestruturados é uma das principais estratégias para ampliar a eficiência terapêutica da curcumina. Neste trabalho desenvolveu-se nanopartículas de soro albumina bovina contendo curcumina, pelo método de dessolvatação, apresentando morfologia esférica, diâmetro médio de 150 ± 8nm, índice de polidispersão de 0,16 ± 0,02 e potencial zeta -32 ± 3mV. A porcentagem da eficiência de encapsulação foi avaliada por cromatografia líquida de alta eficiência, apresentando valor de 45 ± 11%. Os ensaios de caracterização físico-química demonstraram que o processo de nanoencapsulação conferiu à molécula de curcumina característica amorfa e interação entre a curcumina e o polímero. O ensaio de estabilidade demonstrou que as nanopartículas contendo curcumina mantiveram constantes o diâmetro médio e índice de polidispersão durante 45 dias em temperatura ambiente ou refrigeradas. A liberação da curcumina a partir das nanopartículas apresentou-se prolongada, bifásica e difusão-dependente. O ensaio antioxidante, realizado temporalmente sobre o radical ABTS, demonstrou que as nanopartículas mantiveram a atividade da curcumina durante o período analisado, enquanto que a curcumina não-encapsulada, não apresentou efeito após 4 horas. Na citotoxidade sobre células normais (hemácias), observou-se que a curcumina encapsulada exerceu atividade hemolítica significativamente menor à curcumina, enquanto que a citotoxicidade sobre linhagens tumorais (células Hela e B16F10) foi semelhante. Na atividade antitumoral in vivo, realizada em modelo de melanoma murino, as nanopartículas contendo curcumina apresentaram maior eficiência do que a curcumina considerando à sobrevida e volume tumoral nos camundongos. As nanopartículas de albumina apresentam-se como eficientes carreadores de curcumina, para possível aplicação biológica, em especial, sobre os modelos tumorais analisados.

Plants have been utilized for treatment of diseases throughout human existence and, culturally have been the bases for treatment of several diseases, both in traditional way, due to knowledge of the certain plant properties, passed from generation to generation, as well as by the Its use as a source of bioactive compounds, derived from scientific research. The present study aimed to investigate cytotoxicity, antimicrobial and wound healing potential of leaves, twigs and steam extracts of Jatropha gossypiifolia L. Leaves, twigs and stems were separated and dried at room temperature and the extracts were obtained by maceration in ethanol, concentrated on a rotary evaporator and dried in a vacuum desiccators. These extracts were submitted to fractionation to obtain hexane, chloroform, ethyl acetate and methanolic fractions. Phytochemical screening were performed; the citotoxicity were analyzed by MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) tetrazolium reduction assay; Antimicrobial activity by Broth Microdilution Method; Evaluation of in vitro healing potential by the Scratch Assay method, with 3T3 fibroblasts. Phytochemical screening identified the presence of tannins, steroids, flavonoids, flavones, xanthones, coumarins and anthraquinones. The results indicated that the stem extract presented cell viability above 80% in all tested concentrations; the leaves presented moderated cytotoxicity while twig extract at the concentrations of 62.5, 125 and 250 μg/mL exhibited a severe cytotoxicity, hindering the continuation of the study with this part of the plant. Antimicrobial activity evaluation of leaves extract presented MIC of 500 μg/mL to S. aureus, S. epidermidis and P. aeruginosa. Already, twig ethanolic extract exposed a MIC of 1000, 500 and 250 μg/mL, concomitantly. And for stem ethanolic extract a MIC of 1000, 500 e 1000 μg/mL was observed, respectively. It was also observed that the extracts tested were not capable at any of tested concentrations, of promoting the inhibition of E. coli microorganism. The MIC performed with the fractions from leaves and stems ethanolic extracts did not present inhibitory activity for these bacteria. In vitro assay for healing evaluation was performed utilizing the Scratch assay, and evidenced that methanolic fraction of the leaves favoured cell migration in an average of 45% more than the control. Studies with this plant species should be continued for isolation of the active principle aiming the production of a wound healing. As plantas vêm sendo utilizadas para o tratamento de doenças ao longo da existência humana e, culturalmente, constituíram as bases para tratamento de diversas doenças, tanto na forma tradicional, decorrente do conhecimento das propriedades de determinada planta, passado de geração a geração, quanto pela sua utilização, como fonte de moléculas bioativas, oriundas de pesquisas científicas. O objetivo do estudo foi investigar o potencial citotóxico, antimicrobiano e cicatrizante de extratos das folhas, galhos e caule da Jatropha gossypiifolia L. As folhas, galhos e caules foram separados e secos em temperatura ambiente e os extratos obtidos por maceração em etanol, concentrados em evaporador rotatório e secos em dessecador à vácuo. Esses extratos foram submetidos ao fracionamento para obtenção das frações hexânica, clorofórmica, acetato de etila e metanólica. Em seguida foram realizados testes de prospecção fitoquímica; citotoxidade pelo MTT; atividade antimicrobiana pelo método de microdiluição em caldo; avaliação do potencial cicatrizante in vitro pelo método do Scratch assay, com fibroblastos 3T3. A prospecção fitoquímica identificou a presença de taninos, esteroides, flavonoides, flavonas, xantonas, cumarinas e antraquinonas. Os resultados indicaram que o extrato do caule apresentou viabilidade celular acima de 80% em todas as concentrações testadas, as folhas apresentaram-se moderadamente citotóxicas enquanto o extrato dos galhos nas concentrações de 62,5; 125 e 250 μg/mL exibiu uma citotoxicidade severa, inviabilizando o prosseguimento do estudo com essa parte da planta. A avaliação da atividade antimicrobiana dos extratos das folhas exibiu CIM de 500 μg/mL para as bactérias S. aureus, S. epidermidis, e P. aeruginosa. Já, o extrato etanólico dos galhos expôs uma CIM de 1000, 500 e 250 μg/mL, concomitantemente. E para extrato etanólico do caule a CIM observada foi de 1000, 500 e 1000 μg/mL, respectivamente. Observou-se também que, os extratos testados não foram capazes, em nenhuma das concentrações usadas, de promover a inibição do microrganismo E. coli. A CIM realizada com as frações oriundas dos extratos em etanol das folhas e caules não apresentaram atividade inibitória para estas bactérias. A avaliação cicatrizante pelo bioensaio in vitro com uso da técnica Scratch assay, evidenciou que a fração metanólica das folhas propiciou a migração celular em média de 45% a mais do que o controle. Estudos com esta espécie vegetal devem ser continuados para isolamento do princípio ativo visando a produção de um cicatrizante de feridas.

O Brasil é detentor de uma das maiores biodiversidades do planeta e neste sentido não podemos abdicar desta posição privilegiada para o estudo químico dos produtos naturais visando à descoberta de novas moléculas bioativas. Ao longo do território nacional são encontrados seis biomas que apresentam uma grande diversidade de plantas. Neste trabalho, Senna spectabilis (Fabaceae) foi selecionada para o estudo químico por apresentar alcaloides piperidínicos do tipo 2,6-dialquil-piperidin-3-óis, raros na natureza e com grande potencial farmacológico. O estudo foi realizado a partir do extrato etanólico das flores e os compostos isolados foram submetidos aos ensaios para avaliação da atividade leishmanicida e citotoxicidade. Inicialmente, o extrato etanólico das flores de S. spectabilis foi submetido à extração líquido-líquido com n-hexano, clorofórmio e acetato de etila. As frações foram analisadas por cromatografia em camada delgada (CCD), onde foi constatado que a fração clorofórmio apresentou maior número de alcaloides com diferentes Rfs. Esta fração foi submetida a cromatografia em coluna (CC), de onde foi obtida a mistura dos homólogos (-)-cassina (1) e (-)-espectalina (6), que foram separados por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) utilizando detector de light scattering. Estes compostos foram submetidos aos experimentos de ressonância magnética nuclear (RMN) e espectrometria de massas de alta resolução com ionização por eletrospray (IES-EM) para determinação das suas estruturas. Ao longo do fracionamento cromatográfico foram obtidas duas misturas de compostos homólogos (61a e 61b e 62a e 62b), mais polares que os alcaloides 1 e 6. Devido a pequena quantidade de massa, estes metabólitos foram identificados por EM-IES. Também foi obtida uma fração com uma mistura de alcaloides de polaridade menor que 1 e 6, que foi submetida a CCD preparativa, de onde foi possível obter uma mistura dos alcalóides homólogos (-)-3-O- acetilcassina (13) e (-)-3-O-acetilespectalina (14) que foram separados por CLAE-light scattering. Os compostos isolados foram submetidos ao ensaio para avaliação da atividade leishmanicida utilizando cepas do parasita Leishmania amazoniensis, sendo que 6 e 13 apresentaram valores de IC50 promissores (IC50 15,81 ± 0,47 pg mL-1 e 30,25 ± 1,74 pg mL-1, respectivamente), quando comparados com o padrão positivo anfotericina B (0,29 ± 0,01 pg mL-1). A partir do ensaio de citotoxicidade, foi observado que o alcaloide 6 apresenta certa toxicidade (CC50 66,67 ± 9,68 pg mL-1), porém, a partir do cálculo do índice de seletividade (IS), foi possível constatar que os compostos avaliados apresentam atividade leishmanicida em concentrações não citotóxicas. Brazil holds one of the greatest biodiversity on the planet and in this sense we cannot give up this privileged position for the chemical study of natural products for the discovery of new bioactive molecules. Along the national territory are six biomes that present a great diversity of plants. In this work, Senna spectabilis (Fabaceae) was selected for the chemical study because it presents 2,6-dialkyl-piperidin-3-ol type piperidine alkaloids, rare in nature and with great pharmacological potential. The study was carried out from the ethanolic extract of the flowers and the isolated compounds were submitted to the tests to evaluate the leishmanicidal activity and cytotoxicity. Initially, the ethanolic extract of S. spectabilis flowers was submitted to liquid-liquid extraction with n-hexane, chloroform and ethyl acetate. The fractions were analyzed by thin layer chromatography (TLC), where it was found that the chloroform fraction had a higher number of alkaloids with different Rfs. This fraction was subjected to column chromatography (CC), from which the mixture of (-)-cassine (1) and (-)- spectaline (6) homologues were obtained, which were separated by high performance liquid chromatography (HPLC) using light scattering detector. These compounds were submitted to nuclear magnetic resonance (NMR) experiments and high resolution mass spectrometry with electrospray ionization (ESI-MS) to determine their structures. During the chromatographic fractionation, two mixtures of homologous compounds (61a and 61b and 62a and 62b) were obtained, more polar than alkaloids 1 and 6. Due to the small amount of mass, these metabolites were identified by ESI-MS. Furthermore, a fraction with a mixture of alkaloids less polar than 1 and 6 was also obtained, which was subjected to preparative TLC, and was possible to obtain a mixture of the homologous alkaloids (-)-3-O-acetylcassine (13) and (-)- 3-O-acetylspectaline (14) which were separated by HPLC-light scattering. The isolated compounds were tested for leishmanicidal activity using strains of the parasite Leishmania amazoniensis, with 6 and 13 showing promising IC50 values ( IC50 15.81 ± 0.47 pg mL-1 e 30.25 ± 1.74 pg mL-1, respectively), when compared to the positive control amphotericin B (0.29 ± 0.01 pg mL-1). From the cytotoxicity assay, it was observed that alkaloid 6 presents some toxicity (CC50 66.67 ± 9.68 pg mL-1), but from the calculation of the selectivity index (SI), it was possible to verify that the evaluated compounds presented leishmanicidal activity at non-cytotoxic concentrations. Dissertação (Mestrado)

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico O objetivo deste trabalho foi realizar estudos farmacognósticos, fitoquímicos, atividade antileishmania e citotoxicidade de Geissospermum vellosii Allemão e Geissospermum sericeum Miers. Os estudos farmacognósticos foram realizados de acordo com a Farmacopeia Brasileira, V ed. (2010). Os extratos (EEGV e EEGS) foram obtidos através da maceração exaustiva com etanol (96° GL), seguido de concentração em rotaevaporador. O extrato etanólico foi fracionado por dois métodos: extração sob refluxo (frações de diferentes polaridades) e partição ácidobase (fração de neutro e fração acaloídica). As frações alcaloídicas (FAGV e FAGS) foram fracionadas em coluna cromatográfica contendo gel de Sephadex LH-20, e as subfrações resultantes foram analisadas em CCD e reveladas com reagente de Dragendorff e ultravioleta (365 nm). As subfrações F6FAGV e F6FAGS, onde se detectou alcaloides e bom rendimento, foram submetidas a novos fracionamentos em CLAE-DAD semipreparativa e a métodos espectrofotométricos. Na avaliação antileishmania utilizou-se formas promastigotas da espécie de Leishmania amazonensis (5 x 106 parasitas/100μL) tratada com diferentes concentrações das amostras por 24, 48 e 72h. A analise foi feita adicionando-se brometo de [3-(4,5- dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio] (MTT) em leitor de ELISA, em 490nm. A citotoxicidade foi avaliada através do ensaio de viabilidade celular com o MTT em células THP-1 diferenciadas e HepG2. Como critério de seleção foi utilizado o cálculo do índice de seletividade (IS), descrito como a razão entre a concentração citotóxica 50% em linhagens celulares e a Concentração inibitória 50% encontrado para protozoários, considerando-se pormissores valores ≥ 10. Os pós das plantas foram classificados como grosso (G. vellosii) e muito grosso (G. sericeum), de baixa densidade, com pH de 4,94 (G. vellosii) e 6,47 (G. sericeum), negativos para saponinas, com teor de cinzas e umidade dentro dos parâmetros estabelecidos pela Farmacopeia Brasileira, V ed. O estudo fitoquímico levou ao isolamento de um alcaloide indólico (F3F6FAGV) e um β-carbolínico (flavopereirina) de ambas as espécies. O fracionamento de EEGV e EEGS resultou em subfrações mais citotóxicas, porém o tempo de exposição e o refracionamento reduziram esta toxicidade. Na avaliação antripromastigota todas as amostras foram ativas e o fracionamento aumentou a atividade. A flavopereirina apresentou atividade tempo dependente e superior a anfotericina B. Entretanto, a associação da flavopereirina com alcaloide indólico e/ou a anfotericina B reduziu a seletividade desse metabólito. O fracionamento dos extratos contribui para elevação do índice de seletividade, sendo a seletividade da flavopereirina elevada (IS= 4893,3). Logo, o isolamento da flavopereirina contribui para redução da citotoxicidade e aumento da seletividade, caracterizando-se como um agente antileishmania promissor. This study aimed to perform pharmacognostic and phytochemical studies, and assess antileishmanial activity and cytotoxicity of Geissospermum vellosii Allemão and Geissospermum sericeum Miers. The pharmacognostic study was carried out as described in the Brazilian Pharmacopoeia, 2010. The ethanol extracts (GVEE and GSEE) were obtained by exhaustive maceration with ethanol (96 ° GL), followed by concentration in rotaevaporator. The ethanol extract was fractionated using two methods: extraction under reflux (fractions of different polarities) and acid-base partition (neutral and alkaloid fractions). The alkaloid fractions (GVAF and GSAF) were fractionated on a chromatographic column with Sephadex LH-20 gel, and the resulting subfractions were analyzed on TLC, and reveled through Dragendorff reagent and ultraviolet (365 nm). The F6GVAF and F6GSAF subfractions, with alkaloids detected and good yield, were subjected to semi-preparative HPLC-DAD, and spectrophotometric methods. For evaluating the antileishmanial activity, promastigote forms of Leishmania amazonensis at a concentration of 5 x 106 parasites/100μL were treated with the samples at different concentrations for 24, 48 and 72h. The analysis was done adding [3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5- diphenyltetrazolium bromide (MTT) to the samples in an ELISA reader at 490 nm. Cytotoxicity was assessed through cell viability assay with MTT in differentiated THP- 1 cells and HepG2. As a selection criteria, the selectivity index (IS) was calculated as the ratio between the cytotoxic concentration 50% in cell lines, and the inhibitory concentration 50% found for protozoa, considering as promising values ≥ 10. The plant powder was classified as thick (G. vellosii), and very thick (G. sericeum), low density, with pH 4.94 (G. vellosii) and 6.47 (G. sericeum), negative to saponins, with ash and moisture within the parameters established by the Brazilian Pharmacopoeia V. In the phytochemical study, we suggest the isolation of an indole alkaloid (F3F6FAGV) and a β-carbolinic (flavopereirine) from both species. The fractionation of GVEE and GSEE resulted in more cytotoxic subfractions, but the exposure time and refractionation reduced this effect. In the antipromatigota assay, all samples were active, and the fractionation increased the activity. The flavopereirine presented time-dependent activity greater than amphotericin B. However, the flavopereirine in association with indole alkaloid and/or amphotericin B reduced the selectivity of this metabolite. The extracts fractionation increases the selectivity index, and the selectivity of flavopereirin is high (SI = 4893.3). Therefore, the isolation of flavopereirine contributes to reduce cytotoxicity and increase selectivity, showing itself as a promising antileishmanial agent.

The halotolerant microorganisms are considered as a promising source of bioproducts with potential interest for many industrial sectors. The potential of biotechnological applications of these microorganisms highlights the importance of research for biologically active biomolecules. In this context, this study aimed to evaluate the in vitro cytotoxicity of extracellular extract halotolerant bacterium Bacillus sp. in human renal cell carcinoma. The bacteria were obtained from saline Saint Camillus (S 05 ° 03 947 ', N 37 ° 16,318, Natal, Rio Grande do Norte, Brazil) and isolated in BHI medium at 37 °C. Biochemical and morphological analyzes classified the species as halotolerant, supporting up to 13% NaCl. Extracellular extract was obtained by ethyl acetate immersion in culture medium after a 24 h incubation. Cytotoxicity was measured by MTT assay. Cells were cultured for 24 h (5x 103 and 1x 104 cells/well) with different concentrations of the extract. Concentrations of 75 and 100 μg/mL caused severe cytotoxic effects against the cell line 786.0. We conclude that the extracellular extract of Bacillus sp. resulted in severe cytotoxic activity on human kidney cancer cells and not cancerous cells., (Extrato extracelular de bactéria halotolerante Bacillus sp. é citotóxica para linhagem celular 786.0 de adenocarcinoma renal humano). Micro-organismos halotolerantes são considerados como uma fonte promissora para a obtenção de bioprodutos potencialmente promissores em diversos setores industriais. O potencial de aplicações biotecnológicas referente a esses micro-organismos evidencia a importância de pesquisas destinadas à busca de biomoléculas biologicamente ativas. Nesse contexto, esse estudo teve como objetivo analisar in vitro a citotoxicidade de extrato extracelular de bactéria halotolerante Bacillus sp. em linhagem celular de adenocarcinoma humano 786.0. A bactéria foi isolada de habitat salino no Brasil (05º 03,947’S; 37º 16,318’O) usando meios BHI a 37 ºC, aspectos bioquímicos e morfológicos foram verificados e o extrato extracelular foi obtido por imersão do meio de cultura no solvente acetato de etila após um período de 24h de incubação. A citotoxicidade foi verificada pelo ensaio de MTT. Células foram cultivadas por 24h (5x103 e 1x104 células/poço) em diferentes concentrações do extrato. Análises bioquímicas e morfológicas classificaram a espécie como halotolerante, suportando até 13% de NaCl. Duas concentrações do extrato, 75 e 100 μg/mL, mostraram efeitos citotóxicos significativos frente à linhagem celular 786.0.

FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas A malária é uma das patologias infecto-contagiosas mais graves no mundo, apresentando distribuição geográfica bastante extensa em zonas tropicais. Seu tratamento é baseado na administração de drogas específicas, como, a artemisinina e seus derivados: artesunato, o qual será objeto deste estudo, e artemeter. O artesunato, é um composto semi-sintético derivado da artemisinina, substância extraída da planta chinesa Artemisia annua L. Apesar da ampla utilização do artesunato na terapia antimalárica, e de haver fortes evidências de que outros antimaláricos como, a partenina e a cloroquina, apresentem efeitos genotóxicos in vitro; ainda hoje são escassos os trabalhos que demonstrem seus efeitos genotóxicos em linfócitos humanos. Em estudos prévios realizados no laboratório de citogenética humana, foi demonstrado que o artesunato induz danos genotóxicos e citotóxicos ao DNA de linfócitos humanos em cultura. Apesar destes achados, os mecanismos indutores de tais efeitos não foram devidamente caracterizados devido a limitações das técnicas utilizadas. Assim, o presente estudo teve como objetivo caracterizar in vitro os efeitos genotóxicos e citotóxicos do artesunato em linfócitos de sangue periférico humano utilizando técnicas como FISHMN, ensaios de estresse oxidativo e imunocitoquímica por imunofluorescência. Pretendeu-se através do uso de tais técnicas, elucidar os mecanismos responsáveis pelos efeitos do artesunato no DNA de linfócitos humanos. A partir dos resultados encontrados no presente estudo foi possível inferir que o artesunato induz a formação de ROS e outros radicais livres e que estas substâncias estão causando danos no DNA dos linfócitos humanos em cultura. Assim, as células com o DNA danificado, não sendo capazes de reverter tal condição, ativam a apoptose pelas vias extrínseca e intrínseca. Malaria is one of the most serious infectious disease in the world, with quite extensive geographic distribution in tropical areas. Its treatment is based on administration of specific drugs, as artemisinin and its derivatives: artesunate, which will be the subject of this study, and artemether. The artesunate is a semi-synthetic compound derived from artemisinin, a substance extracted from the Chinese plant Artemisia annua L. Despite the widespread use of artesunate in antimalarial therapy and the strong evidences that other antimalarials such as partenin and chloroquine present genotoxic effects in vitro; there are few studies that demonstrate artesunate genotoxic effects in human lymphocytes. In previous studies carried out in laboratory human cytogenetics, it was shown that artesunate induces cytotoxic and genotoxic effects in human lymphocytes in vitro. Despite these findings, the mechanisms of these effects have not been adequately characterized due to limitations of the techniques used. This study aimed to assess in vitro the cytotoxic and genotoxic effects of artesunate on human peripheral blood lymphocytes using assays such as FISHMN, oxidative stress and immunocytochemistry by immunofluorescence. We aimed through these tools elucidate the mechanisms responsible for the effects of artesunate in DNA of human lymphocytes. The results found in this study suggest that the artesunate induces the formation of ROS and other free radicals and that these substances are causing DNA damage in human lymphocytes in culture. Thus cells with damaged DNA, not being able to reverse this condition, activate apoptosis through the extrinsic and intrinsic pathways.

Tese de mestrado, Biologia (Biologia Humana e Ambiente), Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2015 Submitted by Teresa Boa (tdboa@fc.ul.pt) on 2015-12-22T15:28:33Z No. of bitstreams: 1 ulfc115908_tm_Joana_Santos.pdf: 1839801 bytes, checksum: 29eabea8b43605bb7eba9fcd451d11ea (MD5) Made available in DSpace on 2015-12-22T15:28:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ulfc115908_tm_Joana_Santos.pdf: 1839801 bytes, checksum: 29eabea8b43605bb7eba9fcd451d11ea (MD5) Previous issue date: 2015

CAPES e FACEPE Adenocalymma imperatoris-maximilianii (Wawra) L.G. Lohmann (Bignoniaceae) é uma liana conhecida como cipó-amarelo no Nordeste brasileiro, utilizada para afecções da pele e como alimento para caprinos. O presente estudo teve como objetivo caracterizar a morfoanatomia, histoquímica, realizar prospecção fitoquímica e atividades biológicas, frente a vírus, bactérias e linhagens de células tumorais, dos extratos aquosos, metanólicos, hexânicos, clorofórmicos, diclorometânicos e acetato de etila, das raízes, caules, folhas e flores. Para o estudo anatômico foram utilizadas técnicas para montagem de lâminas semipermanentes. Na prospecção fitoquímica preliminar (extrato metanólico) utilizou-se cromatografia em camada delgada (CCD) e cromatográfia a gás- acoplada a espectométria de massa-CG-EM (extratos: hexano, clorofórmio, diclorometano e acetato de etila). Para a análise antiviral, foi utilizada linhagem celular BHK-21-rep-FA17D-LucNeoIres. Para os testes antibacterianos utilizou-se metodologia de Concentração Inibitória Mínima e Bactericída frente á Staphylococcus aureus (CIM e CBM). Para análise citotóxica frente ás linhagens celulares: NCI-H292-carcinoma mucoepidermoide de pulmão humano; HEp-2-carcinoma de laringe humana; HL-60 -leucemia promielocitica aguda e MCF-7-câncer de mama humano, utilizou-se o método do MTT (3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium bromido). Anatomicamente foram videnciados: estômatos paracíticos, anisocíticos e ciclocíticos, cutícula espessa, flange cuticular, presença de cristais prismáticos, tricomas glândulares e tectores, calotas de esclerênquima circundando os feixes vasculares, histoquímicamente evidenciou-se polifenóis totais, amido e lipídeos totais no mesofilo dos foliólos. Preliminarmente, foram evidenciados por CCD: flavonóides, açucares redutores, taninos, derivados cinâmicos, terpenos/esteróides, heterosídeos saponinícos. Na análise por CG-EM: Lupeol, lupenona, stigmasterol, β–amirina, β–sitosterol, esqualeno, neofitadieno, ácido octadeca-9,12-dienóico éster metílico, Ácido 1,2-benzeno, bis-(2-etil-hexil). No presente trabalho, foram identificados dez alcalóides pela primeira vez para família Bignoniaceae. O extrato bruto aquoso das raízes, caules e folhas testados frente ao vírus da febre amarela, não apresentou atividade, e o extrato bruto metanólico das raízes, caules e folhas não foram tóxico frente ás linhagens de células tumorais tratadas (NCI-H292-carcinoma mucoepidermoide de pulmão humano; HEp-2-carcinoma de laringe humana; HL-60 -leucemia promielocitica aguda e MCF-7-câncer de mama humano). Os extratos brutos das partes vegetativas apresentaram atividade antibacteriana (CIM e CBM) que variaram de 32 á 1024μg/mL, frente á Staphylococcus aureus Multiresistente e Multisensíveis. Face ao exposto, a espécie Adenocalymma imperatoris-maximilianii, pode ser considerada uma fonte promissora de moléculas bioativas para terapêutica moderna. Estas são as primeiras contribuições químicas e biológicas para a espécie.

Submitted by Simone Maisonave (simonemaisonave@hotmail.com) on 2020-06-11T23:52:07Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_ANANDA_MORAIS_BARBOSA.pdf: 7265063 bytes, checksum: 042a1a798f592b272b515a23fc27aa00 (MD5) Made available in DSpace on 2020-06-12T12:59:14Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao_ANANDA_MORAIS_BARBOSA.pdf: 7265063 bytes, checksum: 042a1a798f592b272b515a23fc27aa00 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2013-06-13 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES O grafeno tem recebido grande atenção em diferentes áreas desde sua descoberta. Trata-se de um nanomaterial formado por átomos de carbono hibridizados na forma sp2, configurados em uma rede cristalina conhecida como favos-de-mel. Neste trabalho, nanoestruturas de carbono foram obtidas por um método que utiliza serragem como biomassa. A obtenção das nanoestruturas carbonosas ocorreu por queima em forno tubular e foi utilizada uma lâmina de cobre como suporte. As nanoestruturas carbonosas obtidas na superfície do cobre foram caracterizadas por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e espectroscopia Raman demonstrando a formação de grafeno. Também foram desenvolvidos nanocompósitos poliméricos baseados em duas matrizes - uma biodegradável (baseado em Agar) e outra nãonatural (baseada em Polidimetilsiloxano - PDMS) reforçados com partículas de óxido de grafeno recoberto por prata em diferentes concentrações. As partículas de óxido de grafeno foram obtidas pelo método de Hummers e Offeman e tiveram sua superfície modificada pela adição de um precursor de prata obtido pelo método Pechini. As partículas de óxido de grafeno recobertas por prata foram caracterizadas por microscopia eletrônica de transmissão (MET) e espectroscopia Raman. Nas matrizes poliméricas foram inseridas diferentes quantidades de partículas de óxido de grafeno recobertas por prata. Os nanocompósitos poliméricos tiveram sua atividade antibacteriana avaliada frente a bactéria Gram-positiva (G+) Staphylococcus aureus e a determinação da toxidade celular foi realizada em cultivo de células tipo fibroblastos de camundongos (NIH/3T3). Os resultados obtidos foram promissores e suportam futuras aplicações desses nanocompósitos poliméricos em uma grande variedade de pesquisas em saúde humana. Graphene since its discovery has received great attention in many different areas. It is a single-atom-thick sheet of hexagonally arrayed sp2-bonded carbon atoms. In this work, carbon nanostructures were obtained by method using sawdust as biomass. The obtaining of nanostructured carbon happened in tube furnace and used a copper foil as base. The carbon nanostructures obtained on copper were characterized by scanning electron microscopy (SEM) and Raman spectroscopy demonstrated the formation of graphene. On the other hand, this study included the development of a polymer nanocomposites based on two matrix, one biodegradable (based on Agar) and other non-natural (PDMS) with graphene oxide previously functionalization with Ag nanoparticles fillers. The graphene oxide particles were obtained by Hummers and Offeman method and their surface was modified by addition of silver precursor obtained by Pechini method. The graphene oxide particles coated with silver were characterized by transmission electron microscopy (TEM) and Raman spectroscopy. In the polymer matrices were included different amounts of graphene oxide particles coated with silver. The polymer nanocomposites had antibacterial activity tested against Gram-positive (G+) Staphylococcus aureus and determination of cellular toxicity was performed in cell culture (mouse fibroblasts - NIH/3T3). The results were promising future applications and support these polymer nanocomposites in a wide variety of research on human health.

Submitted by Simone Maisonave (simonemaisonave@hotmail.com) on 2020-06-26T15:30:54Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Juliana_Souza.pdf: 1434561 bytes, checksum: 15fadbcc879b8fd9eb2b24b2f43e520c (MD5) Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2020-06-29T12:44:49Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertacao_Juliana_Souza.pdf: 1434561 bytes, checksum: 15fadbcc879b8fd9eb2b24b2f43e520c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Made available in DSpace on 2020-06-29T12:44:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao_Juliana_Souza.pdf: 1434561 bytes, checksum: 15fadbcc879b8fd9eb2b24b2f43e520c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2013-03-28 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES A secreção de fosfolipases e proteinases extracelulares de Candida têm sido descrito como um fator de virulência relevante em infecções humanas. Ácidos graxos alifáticos possuem conhecida propriedade antimicrobiana, mas o modo pelo qual atuam nos fatores de virulência em microrganismos, como Candida, nem sempre é claro. As oximas têm uma longa história em síntese orgânica e na química medicinal. Entretanto, há poucos relatos sobre a sua toxicidade. Assim, este estudo investigou in vitro a atividade antifúngica, a capacidade de inibição da produção de exoenzimas e a citotoxicidade de alguns ácidos graxos, seus derivados ésteres metílicos e etílicos e de dez compostos da classe das oximas contra espécies de Candida. O MIC e o MFC foram realizados usando o método NCCLS M27-A3. Foi também investigado a influência destes compostos na inibição da produção de enzimas hidrolíticas, fosfolipase e proteinase, produzidas por Candida. O ácido graxo que apresentou o melhor resultado em MIC contra espécies de Candida foi o ácido láurico, os ésteres derivados não apresentaram atividade. Para os ácidos graxos, a inibição da enzima fosfolipase foi mais significativa do que a produção de proteinase. Já as oximas apresentaram uma ótima capacidade de inibição da expressão de fosfolipase com a redução de 50% na maioria dos casos. No entanto, não alteraram significativamente a expressão de proteinases. Os resultados mostram uma grande redução na produção de fosfolipase, que sugere que ambas as classes de compostos testados podem interferir na invasão do hospedeiro e na evolução da doença. Os ácidos graxos mostraram viabilidade celular maiores que 80% nas concentrações de MIC, bem como em concentrações de efeito antienzimática. Portanto, a utilização potencial de ácidos graxos e oximas, podem ser consideradas em futuros estudos, para o tratamento de candidíase. The secretion of extracellular phospholipases and proteinases of Candida has been described as a relevant virulence factor of human infections. Aliphatic fatty acids have antimicrobial properties, but the mode by which they act in the virulence factors of microorganisms, such as Candida, is still unclear. The oximes have a long history in organic synthesis and medicinal chemistry. Moreover, there are few reports about their toxicity. Current study investigated the in vitro antifungal activity, exoenzyme production and cytotoxicity of some aliphatic fatty acids and their esters derivatives and ten oximes against the Candida species. The MIC and MFC of aliphatic medium-chain fatty acids, methyl and ethyl esters and oximes were performed by the CLSI M27-A3 method. The influence of these compounds in the inhibition of the production of hydrolytic enzymes, phospholipase and proteinase by Candida was also investigated. Lauric acid was the fatty acid with the best result on MIC against Candida species although its esters derivatives showed no activity. The inhibition of phospholipase was more significant than proteinase production by Candida. Oximes showed a great ability to inhibit phospholipase with 50% reduction in most cases. However, tested compounds for proteinase did not affect the enzyme. Current results showed a great reduction in phospholipase production which suggests that compounds of this class may interfere with the invasion of the host and disease growth. The fatty acids showed 80% cell viability in MIC concentrations, as in the concentrations which presented anti-enzymatic effect. Therefore, the potential use of these fatty acids and oximes could be the base for more antimicrobial tests.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-05T13:59:53Z No. of bitstreams: 1 Ana Paula Castor Batista.pdf: 5193246 bytes, checksum: 330cdf055cf956cd9138d5c1adc67230 (MD5) Made available in DSpace on 2016-10-05T13:59:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ana Paula Castor Batista.pdf: 5193246 bytes, checksum: 330cdf055cf956cd9138d5c1adc67230 (MD5) Previous issue date: 2013-02-22 Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq Among the tumor models can highlight the Ehrlich ascites tumor (TAE) cells and CaCO2. These experimental models are a useful resource for the study of tumorigenesis by allowing quantification and analysis of growth and regression of the tumor mass. Among the substances oncostáticas melatonin has shown effectiveness in limiting tumor cell proliferation. Thus the study investigated the action of melatonin on cell proliferation of human colon carcinoma (Caco-2) cells obtained from a murine model of Ehrlich ascites tumor. We evaluated tumor growth, time and percentage of survival, metastasis and ultrastructure of cells in mice undergoing TAE pinealectomy or not, underwent dose of 150 and 300 μg/30g animal weight of melatonin for 12 consecutive days. For cells CaCo-2 investigated the effect of different concentrations (50, 25, 12.5, 6.25, 3.125, 1.56 and 0.78 mg / mL) of melatonin in order to check the cytotoxicity and ultrastructural . According to the results it was found that the abdominal circumference of melatonin-treated mice was significantly reduced, more significant at a dose of 300 μg. Significant reduction, regardless of the dose, the volume of ascites fluid and cell viability TAE, and increasing the lifespan of the animals. Ultrastructurally TAE cells after treatment with melatonin showed morphological changes, with the cell surface displaying numerous projections, and some with fork. In the cytoplasm was evidenced process of degeneration of mitochondria and abundant vacuoles. The nucleus appeared quite fragmented and without evidence of heterochromatic nucleolus Histopathology of organs showed metastasis in the lungs and kidneys, only the control group animals. Lung tumor cells were found in the alveoli and bronchioles. Kidney revealed the presence of tumor cells both in cortical region but also in the spinal region. No metastasis was observed in liver, small intestine and large intestine in any of the animals of the experimental groups. Cytotoxicity was inversely proportional to the concentrations of melatonin, the concentration 0.78 μg/mL to that caused greater toxicity in Caco-2 cells, followed by concentration 1.56 μg/mL, and the concentration of 50μg/mL was that showed the lowest cytotoxicity not differing from the other concentrations and control. The ultrastructural aspect of cells treated with melatonin did not show formation of monolayers. In the group in which cells showed less cytotoxicity CaCo-2 (50 μg /mL melatonin) was visualized changes in cell morphology, presence of microvilli, large nucleus with peripheral heterochromatin areas, with numerous cytoplasmic vacuoles, mitochondrial degeneration, abundant ribosomes and reduction of reserves glycogen. However, treatments that showed cytotoxicity medium and high (1.56 and 0.78 μg/ml of melatonin, respectively), CaCo-2 cells also showed altered morphology, but with characteristics degeneration of cells in the presence of numerous vacuoles and absence of microvillus. It was also observed absence of glycogen, a significant reduction of ribosomes, mitochondrial degeneration, vacuoles, sometimes containing electron-lucent substance, and nuclear fragmentation. Thus, we can conclude that daily doses of 150 and 300 μg/30g of body weight of melatonin for 12 consecutive days have a very effective oncostática activity on cells TAE and that doses of 1.56 and 0.78 μg/mL Melatonin promotes cytotoxicity in cells CaCo-2 Dentre os modelos tumorais podemos destacar o tumor ascítico de Ehrlich (TAE) e as células caco2. Esses modelos experimentais constituem um recurso útil para o estudo da gênese tumoral, por permitir quantificação e análise do crescimento e regressão da massa tumoral. Dentre as substâncias oncostáticas a melatonina tem mostrado eficácia em limitar a proliferação das células tumorais. Assim a pesquisa investigou a ação da melatonina sobre a proliferação de células do carcinoma colônico humano (caco-2) e células obtidas de um modelo murino do tumor ascítico de Ehrlich. Avaliou-se o crescimento tumoral, tempo e percentual de sobrevivência, ultraestrutura e metástase das células TAE em camundongos submetidos ou não a pinealectomia, utilizando-se as dosagens de 150 e 300μg/30g peso do animal de melatonina por 12 dias consecutivos. Para as células caco2 investigou-se o efeito de diferentes concentrações (50; 25; 12,5; 6,25; 3,125; 1,56 e 0,78μg/mL), in vitro, de melatonina com a finalidade de verificar a citotoxicidade e a ultra-estrutural. De acordo com os resultados verificou-se que a circunferência abdominal dos camundongos tratados com melatonina foi reduzida significativamente, sendo mais expressiva na dosagem de 300μg. Houve redução significativa, independente da dosagem, do volume do líquido ascítico e da viabilidade das células TAE, além do aumento do tempo de vida dos animais. Ultra-estruturalmente as células TAE após tratamento com melatonina mostraram alterações morfológicas, com a superfície celular apresentando numerosas projeções, sendo algumas com bifurcação. No citoplasma evidenciou-se processo de degeneração das mitocôndrias e abundantes vacúolos. O núcleo apresentou-se fragmentado e bastante heterocromático sem evidencias de nucléolo A análise histopatológica dos órgãos revelou metástase nos pulmões e rins, apenas nos animais dos grupos controle. Nos pulmões foram evidenciadas células tumorais nos alvéolos e bronquíolos. Nos rins evidenciou-se a presença das células tumorais tanto na região cortical como também na região medular. Não foi observada metástase no fígado, intestino delgado e intestino grosso em nenhum dos animais dos grupos experimentais. A citotoxicidade foi inversamente proporcional às concentrações de melatonina, sendo a concentração 0,78 μg/mL a que causou maior toxicidade nas células caco-2, seguida da concentração 1,56 μg/mL, e a concentração de 50 μg/mL foi a que apresentou a menor citotoxicidade não diferindo das demais concentrações e do controle. O aspecto ultra-estrutural das células tratados com melatonina não mostrou a formação de monocamadas. No grupo em que as células caco2 apresentaram menor citotoxicidade (50 μg/mL de melatonina) foi visualizado alteração na morfologia celular, presença de microvilosidades, núcleo volumoso com áreas heterocromáticas periféricas, citoplasma com numerosos vacúolos, degeneração mitocondrial, ribossomos abundantes e redução das reservas de glicogênio. No entanto, nos tratamentos que mostraram média e alta citotoxicidade (1,56 e 0,78 μg/mL de melatonina, respectivamente), as células caco2 apresentaram-se também com morfologia alterada, porém com características de células em degeneração pela presença de numerosos vacúolos e ausência de microvilosidades. Foi observado ainda ausência de glicogênio, redução significativa de ribossomos, degeneração mitocondrial, vacúolos, às vezes contendo substância elétron-lucente, além de fragmentação nuclear. Assim, podemos concluir que doses diárias de 150 e 300μg por 30g de peso do animal de melatonina por 12 dias consecutivos teve uma atividade oncostática bastante efetiva sobre as células TAE e que concentrações de 1,56 e 0,78 μg/mL de melatonina promove citotoxicidade nas células caco2.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:30:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_Luciana_Conceicao.pdf: 1166387 bytes, checksum: 74e97c6a817eb6fb90d26b94051d237d (MD5) Previous issue date: 2012-12-20 The application of a material after periodontal surgery is recommended to reduce postoperative bleeding, to protect the wound area and to avoid the formation of excessive granulation tissue. The current trend is the development of new biomaterials eugenol-free for surgical application. The aim of this study was to develop and characterize a periodontal dressing based on photopolymerizable methacrylate monomers. For this purpose, a screening was made to determine the best formulation based on the ease of handling and the use of Exothane 8 , camphorquinone, silica and quartz particles. Three groups were tested: Gperio (Group of periodontal dressing Periobond®, Dentsply); Gbar (Group of periodontal dressing Barricaid®, Caulk), which served as the reference group and Gexp (Group of experimental material). The physical-mechanical performance of the experimental composite and the commercial references Periobond® and Barricaid® (control group) were tested using in vitro tests of tensile strength (n = 15) and sorption and solubility (n = 10). Cytotoxicity (MTT colorimetric assay) and genotoxicity by micronuclei (MN) tests were performed in a cell lineage of mouse fibroblasts 3T3/NIH, in triplicate, in order to characterize the biological response of these materials. Microbiological test assess the amount of viable bacteria of Enterococcus faecalis anaerobic and aerobic and total microorganisms. Data were subjected to statistical analysis based on the model of normal distribution and equal variance One-Way ANOVA, considering the value of P

In our previous work (Fabri et al. 2009), we showed that different extracts of Mitracarpus frigidus had significant antibacterial, antifungal and leishmanicidal activities. In order to increase our knowledge about this species, this work assesses the chemical composition and the in vitro biological activity of its essential oil. Thus, the essential oil obtained by hydrodistillation of the aerial parts of M. frigidus was analyzed by GC/MS. Among several compounds detected, 11 were identified, being linalool and eugenol acetate the major components. The essential oil exhibited a moderate antibacterial effect against Staphyloccocus aureus, Bacillus cereus, Pseudomonas aeruginosa and Enterobacter cloacae (MIC 250 µg/mL). On the other hand, it showed a strong antifungal effect against Cryptoccocus neoformans (MIC 8 µg/mL) and Candida albicans (MIC 63 µg/mL). Expressive activity against L. major and L. amazonensis promastigote forms with IC50 values of 47.2 and 89.7 µg/mL, respectively, were also observed. In addition, the antioxidant activity was investigated through DPPH radical-scavenging and showed a significative activity with IC50 of 38 µg/mL. The cytotoxicity against Artemia salina was moderate with LC50 of 88 µg/mL. The results presented here are the first report on the chemical composition and biological properties of M. frigidus essential oil.Em nosso trabalho anterior (Fabri et al. 2009), mostramos que diferentes extratos de Mitracarpus frigidus apresentaram atividades antibacteriana, antifúngica e leishmanicida significativas. Com o objetivo de aprofundar o conhecimento sobre essa espécie, esse trabalho objetiva identificar os constituintes químicos e avaliar as atividades biológicas in vitro de seu óleo essencial. Dessa forma, o óleo essencial das partes aéreas de M.frigidus foi obtido por hidrodestilação e analisado por CG/EM. Entre os compostos detectados, 11 foram identificados, sendo linalol e o acetato de eugenol os componentes majoritários. O óleo essencial de M. frigidus exibiu moderada atividade antibacteriana contra Staphyloccocus aureus, Bacillus cereus, Pseudomonas aeruginosa e Enterobacter cloacae (CIM 250 µg/mL). Por outro lado, apresentou forte efeito antifúngico contra Cryptoccocus neoformans (CIM 8 µg/mL) e Candida albicans (CIM 63 µg/mL). Expressiva atividade contra as formas promastigostas de Leishmania major e Leishmania amazonensis com valores CI50 de 47, 2 e 89, 7 µg/mL, respectivamente, também foi observada. Além disso, a atividade antioxidante foi investigada através do ensaio com o radical DPPH e este apresentou uma significativa atividade com CI50 de 38 µg/mL. A citotoxidade contra Artemia salina foi moderada com CL50 de 88 µg/mL. Os resultados aqui apresentados são o primeiro relato sobre a composição química e propriedades biológicas do óleo essencial M. frigidus.

Objective: The purpose of the present study was to evaluate flow, film thickness, working time, setting time, dimensional change, sorption, solubility and cytotoxicity of an experimental epoxy-based root canal sealer with addition of bismuth subnitrate in different concentrations. Methods: Endodontic sealers were prepared with an epoxy resin with bismuth subnitrate additions of 20%, 40%, 60%, 80%, 100% and 120%. Flow, film thickness, working time, setting time, dimensional change, sorption, solubility, and cytotoxicity were studied according to ISO standards. Data were analyzed by one-way ANOVA and Tukey. Results: The flow, working time, water sorption, and solubility significantly decreased with increasing filler particle concentration. The film thickness and dimensional change values significantly increased with higher filler particle addition. There was no difference in the results of setting time and cytotoxicity comparing the groups. Conclusion: Addition of bismuth subnitrate appears to be a promising filler particle for root canal sealer. Objetivo: O objetivo deste estudo foi avaliar a adição de subnitrato de bismuto em diferentes concentrações em relação a propriedades reológicas em um cimento endodôntico experimental a base de resina epóxica. Métodos: Os cimentos endodônticos foram preparados a base de resina epóxica com a adição de subnitrato de bismuto nas proporções de 20%, 40%, 60%, 80%, 100% e 120%. Os testes de escoamento, espessura de película, tempo de trabalho, tempo de presa, alteração dimensional, sorção e solubilidade e citotoxicidade foram realizados de acordo com a norma da ISO. Os dados foram analisados com o teste ANOVA de uma via e Tukey. Resultados: Os valores do escoamento, tempo de trabalho, sorção e solubilidade diminuíram significantemente com o aumento da concentração da partícula. A espessura de película e a alteração dimensional aumentaram significantemente com o aumento da adição de partícula. Os resultados de tempo de trabalho e citotoxicidade não apresentaram diferença entre os grupos. Conclusão: A adição de subnitrato de bismuto parece ser uma partícula promissora para ser usada em cimento endodôntico.

This study consists of the acquisition, characterization and evaluation of antimicrobial silver nanoparticles and nanostructured Ag/ZnO. The silver nanoparticles were obtained through a new route using AgNO3 as precursor salt and ammonium citrate as reducing agent. Concerning the commercial zinc oxide, silver nanoparticles were impregnated using the microwave hydrothermal method at different synthesis times. Samples of Ag / ZnO nanostructured were characterized by using techniques of X-Ray Diffraction (DRX), Scanning Electron Microscopy (SEM) and Energy Dispersive Spectroscopy (EDS). The colloidal silver nanoparticles obtained during the processes were characterized through optical spectroscopy in the ultraviolet and visible (UV-Vis) regions. Antimicrobial activity assays were carried for the Ag / ZnO nanostructured and for colloidal silver nanoparticles. They were included six bacteria species as well as six fungal species. Analysis of toxic and cytotoxic activity was performed for colloidal silver nanoparticles on fingerlings of Poecilia Reticulata and Artemia salina. The results show that the chosen synthesis method is effective for silver synthesis, as well as for the process of impregnation of the silver nanoparticles on the commercial zinc oxide. The biological tests revealed significant antimicrobial activity of silver nanoparticles on the micro-organisms analyzed and their low toxicity. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Este trabalho consiste na obtenção, caracterização e avaliação antimicrobiana de nanopartículas de prata e Ag/ZnO nanoestruturado. As nanopartículas de prata foram obtidas através de uma nova rota utilizando AgNO3 como sal precursor e citrato de amônio como agente redutor. Sobre óxido de zinco comercial foram impregnadas nanopartículas de prata por meio do método hidrotermal de micro-ondas em diferentes tempos de síntese. As amostras Ag/ZnO nanoestruturado foram caracterizadas através das técnicas de difração de raios X (DRX), microscopia eletrônica de varredura (MEV) e espectroscopia de energia dispersiva (EDS). As nanopartículas de prata coloidais obtidas durante os processos foram caracterizadas por meio da espectroscopia óptica na região do ultravioleta e visível (UV-Vis). Ensaios de atividade antimicrobiana foram procedidos para o Ag/ZnO nanoestruturado e para as nanopartículas de prata coloidal. Foram incluídas seis espécies bacterianas e seis espécies fúngicas. Análises da atividade tóxica e citotóxica, foram procedidas para as nanopartículas de prata coloidal sobre alevinos de Poecilia Reticulata e sobre Artemia salina. Os resultados demostram que método de síntese escolhido se mostrou eficaz para a síntese da prata, bem como no processo de impregnação das nanopartículas de prata sobre o óxido de zinco comercial. Os testes biológicos revelaram significativa atividade antimicrobiana das nanopartículas de prata sobre os micro-organismos analisados e a sua baixa toxidade.

CAPES Doenças infecciosas causadas por micro-organismos resistentes são alvo de estudo de cientistas, pois afetam milhares de pessoas, sendo prevalente em ambiente hospitalar. A infecção hospitalar vem sendo tratada com bastante atenção, pois se alastra pelos principais centros hospitalares no mundo, atingindo principalmente indivíduos imunocomprometidos e pacientes com câncer e AIDS. Outro tema bastante preocupante, a resistência das células neoplásicas a diversos fármacos vem dificultando o processo da quimioterapia, pois já existem relatos na literatura mostrando que esse fato prejudica o tratamento de diversos casos de câncer metastático. Diante desse quadro, existe a necessidade de buscar novos fármacos mais eficazes e seguros. As 4-tiazolidinonas vêm ganhando destaque, por estar presente em diversos compostos que apresentam amplo espectro de propriedades biológicas comprovado. Na busca de novas substâncias ativas contra micro-organismos resistentes, bem como apresentando boa atividade citotóxica, desenvolvemos a síntese de uma série de 2-[(2-piridinil-metileno)hidrazono]-4-tiazolidinona (3a-d) e seus derivados 5-benzilideno-2-[(2-piridinil-metileno)hidrazono]-4-tiazolidinona (4a-p), com a intenção de sintetizar novos compostos ativos frente à bactérias e fungos, e com atividade antineoplásica. As 5-benzilideno-4-Tiazolidinonas (4a-p) foram sintetizadas em três etapas. A primeira constituiu da obtenção das tiossemicarbazonas (2a-d), que foram sintetizadas a partir de tiossemicarbazidas (1a-d) e 2-formilpiridina e meio hidroetanólico e presença de ácido acético em quantidades catalíticas. As 4-tiazolidinonas (3a-d) foram obtidas através da condensação entre tiossemicarbazonas e ácido cloroacético, em presença de acetato de sódio anidro em meio etanólico. Já as 5-benzilideno-4-tiazolidinonas foram sintetizadas através da reação de condensação do tipo Knoevenagel, através dos intermediários (3a-d) com benzaldeídos. Após purificação, os compostos finais apresentaram rendimentos entre 44-87%. Todos foram caracterizados por métodos espectrométricos convencionais (RMN ¹H, RMN ¹³C e IV), apresentando-se consistentes com as respectivas estruturas. Todos os compostos da série (4a-p) e seus percussores (3a-d) foram testados in vitro contra bactérias e fungos e para o teste citotóxico em células tumorais. A maioria dos compostos não apresentou boas atividades diante de diversos micro-organismos, no entanto o composto 3a apresentou excelente atividade diante da Candida albicans e Fusarium moniliforme, apresentando resultados comparáveis a nistatina. No teste citotóxico os compostos 2-[(2-piridinil-metileno)hidrazono]-4-tiazolidinona (IC₅₀= 1,6 μg/mL), 2-[(4-piridinil-metileno)-hidrazono]-5-p-dimetilamino-benzilideno-4-tiazolidinona (CI50 = 0,7 μg/mL) e 2-[(4-piridinil-metileno)-hidrazono]-5-p-nitro-benzilideno-4-tiazolidinona IC₅₀ (= 0,5 μg/mL) apresentaram excelentes resultados, reduzindo significantente o crescimento de linhagens tumorais, sendo este efeito mais pronunciado nas linhagens HEp-2. Esses compostos apresentaram concentração inibitória superior ao etoposídeo (IC₅₀= 6,63 μg/mL), indicando a presença do radical benzilideno produzindo um efeito positivo na atividade citotóxica para esta série. Infectious diseases caused by resistant microorganisms are studied by scientists, as they affect thousands of people and are prevalent in a hospital environment. The hospital infection has been treated with great attention, as it is spread through the main hospitals throughout the world, reaching mainly immunocompromised individuals and patients with cancer and AIDS. Another very worrying theme, the resistance of neoplastic cells to several drugs, has been making the chemotherapy process difficult, since there are already reports in the literature showing that this fact harms the treatment of several cases of metastatic cancer. Before this situation, there is a need to seek new, more effective and safe drugs. The 4-thiazolidinones have been gaining prominence, being present in several compounds that have a comprehensive spectrum of biological properties proven. In the search for new active substances against resistant microorganisms as well as good cytotoxic activity, we have developed the synthesis of a series of 2 - [(2-pyridinyl-methylene) hydrazono] -4-thiazolidinone (3a-d) and its derivatives 5-benzylidene-2 - [(2-pyridinyl-methylene) hydrazono] -4-thiazolidinone (4a-p), with the intention of synthesizing new active compounds against bacteria and fungi, and with antineoplastic activity. The 5-benzylidene-4-thiazolidinones (4a-p) were synthesized in three steps. The first one consisted of obtaining the thiosemicarbazones (2a-d), which were synthesized from thiosemicarbazides (1a-d) and 2-formylpyridine and hydroethanolic medium and from the presence of acetic acid in catalytic amounts. The 4-thiazolidinones (3a-d) were obtained by condensation between thiosemicarbazones and chloroacetic acid in the presence of anhydrous sodium acetate in medium ethanolic. The 5-benzylidene-4-thiazolidinones were synthesized through the Knoevenagel type condensation reaction through the intermediates (3a-d) with benzaldehydes. After purification, the final compounds showed yields of 44-87%. All were characterized by conventional spectrometric methods (RMN 1H, RMN 13C e IV), and were consistent with the respective structures. All compounds of the series (4a-p) and their percussors (3a-d) were tested in vitro against bacteria and fungi and for cytotoxic testing on tumor cells. Most of the compounds did not present good activity in the presence of several microorganisms, however, the 3a compound presented excellent activity against Candida albicans and Fusarium moniliforme, presenting results comparable to nystatin. In the cytotoxic test the 2 - [(2-pyridinyl-methylene) hydrazono]-4-thiazolidinone compounds (IC₅₀ = 1.6 μg / mL), 2 - [(4-pyridinylmethylene) hydrazono]-5-benzilidene (IC₅₀= 0.7 μg / ml) and 2-[(4-pyridinyl-methylene)-hydrazono]-5-p-nitro-benzylidene-4-thiazolidinone (IC₅₀= 0.5 μg / mL) presented excellent outcomes, reducing significantly the growth of tumoral lineages, being this effect more pronounced in the HEp-2 lineages. These compounds had a higher inhibitory concentration to the etoposide (IC₅₀= 6.63 μg / mL), indicating the presence of the benzylidene radical producing a positive effect on cytotoxic activity for this series.

O complexo de ouro K[Au(CN)2], por exemplo, foi introduzido na virada do século XX para o tratamento da tuberculose e logo após substituído pelos tiolatos de ouro (I), que foram usados nos anos 30 para o tratamento da artrite reumatóide. A exploração de complexos de ouro para uso como agente anticâncer foi iniciada na tentativa de se obter uma droga menos tóxica que a cisplatina. O presente trabalho teve como objetivo avaliar o potencial citotóxico e genotóxico, assim como o mecanismo de morte celular de três novos compostos a base de ouro, que tem como substância bioativa de origem sintética utilizando diferentes linhagens celulares in vitro. No ensaio de citotoxicidade os efeitos dos três complexos de ouro foram avaliados frente quatro linhagens tumorais (B16-F10, K562 e A20) e duas linhagens normais (L-929 e MRC-5) através do teste de MTT, em diferentes concentrações dos compostos (0,2; 2; 20; 50; 100; 200 μM) por 48 horas de tratamento. Foi realizado para o estudo o ensaio de eletroforese em gel de agarose nas concentrações correspondentes a IC50 das linhagens testadas (Sambrook, 2001), foram realizados também análises de ciclo celular e teste cometa. Análise estatística para comparação entre os grupos tratados e controle foi utilizado Anova segundo um único critério e pós-teste Dunnet s (software GraphPad Prism V4). Os resultados obtidos através do ensaio de MTT frente às linhagens testadas MRC-5, L-929, B16- F10, A20 e K562 para o composto Au Spar foi (104; 65,1; 45; 48,3; 61,2, respectivamente) para o composto Au Levo foi (52,8; 181; 28,8; 48,9; 50, respectivamente) e para o composto Au Nor foi ( 65,1; 79,2; 26,6; 24,9; 55, respectivamente). Após a triagem dos compostos, testes mais específicos foram realizados apenas com algumas linhagens que apresentaram resultados mais promissores. Para a linhagem K562 e B16-F10 tratadas com Au Levo e Au Spar respectivamente, observou-se que no ensaio de degradação de DNA não apresentaram padrão de degradação por apoptose nos ensaios realizados com 48 h de tratamento com os compostos. A linhagem B16-F10 tratada com o composto Au Spar não alterou significativamente a cinética celular, além de não apresentar danos significativos ao DNA após 48 h de tratamento. Testes mais específicos devem ser realizados com a finalidade de aprofundar no mecanismo de morte das células, visto que os testes realizados não foi o bastante para demonstrar qual é a via pelo qual o composto está agindo. The complex of gold K[Au(CN2)], for example, was introduced at the beginning of the twentieth century for the treatment of tuberculosis and then replaced for the gold thiolates (I), which were used in the decade of 30 for the treatment of Rheumatoid Arthritis. The exploration of gold complexes for the use as an anti-cancer agent, in an attempt to find a drug less toxic that cisplatin. The current study aimed to evaluate potential cytotoxic and genotoxic, as well as the mechanism of cell death of three new gold-based compounds, which is bioactive substance of synthetic origin, using different cell lines in vitro. In the cytotoxicity assay the effects of the three gold complexes were evaluated in four tumor cell lines (B16-F10, K562 and A20) and in two normal lines (L-929, MRC-5) through MTT test, the compounds at different concentrations (0.2, 2, 20, 50, 100, 200 μM) per 48 hours of treatment. The study was conducted to test electrophoresis on agarose gel at concentrations corresponding to IC50 of the strains tested. Were also performed cell cycle analysis and comet test. In statistical analysis for comparison between treated groups and control them, was used Anova, in a single criterion and Dunnet's Post-test (GraphPad Prism 3.02). The results obtained with MTT assay the tested strains MRC-5, L-929, B-16-F10, A20, K562, for the Spar Au compound was (104, 65.1, 45, 48.3, 61 2, respectively) for the Au Levo compound was (52.8, 181, 28.8, 48.9, 50, respectively) and the Au Nor compound was (65.1, 79.2, 26 6, 24.9, 55, respectively). After the screening of compounds, more specific tests were performed only with some strains that showed more promising results. For K562 cells and B16-F10 treated with Au Levo and Au Spar, respectively, observed that the test showed no degradation of DNA by apoptosis in the tests performed with 48 hours of treatment with the compounds. The line B16-F10 treated with the compound Au Spar did not significantly alter cell cycle kinetics and no reported significant damage to DNA after 48 hours of treatment. More specific tests have to be made in order to deepen the mechanism of cell death, since the tests were not enough to demonstrate how the compound is acting.

Compounds present in marine algae can play important biological functions, such as: antimicrobial activity, antifungal, cytotoxicity, larvicidal, molluscicidal, direct “in vivo” or indirectly, activating the defense mechanisms of the hosts. The objective of this study was to evaluate the biological activity of marine benthic algae extracts collected from a beach located on the north coast of Alagoas called Praia de Riacho Doce. Extracts and fractions obtained from algae: Dictyota dichotoma, Padina gymnospora, Digenea simplex, Hypnea musciformis, Sargassum vulgare, Ulva lactuca, Gracilaria caudata, Galaxaura rugosa and Gellidium pusillum were all tested. After collecting, sorting and identifying the dried and powdered seaweed (500g), they were submitted to an extraction with solvents: dichloromethane, chloroform, methanol, ethanol and water. The dichloromethane extracts of H. musciformis and P. gymnospora were selected for fractioning because they presented better yielding. A cytotoxicity evaluation was done facing the human cancerous cells: NCI-H292 - human lung cancer, HEp-2 - epidermoide carcinoma of human larynx, K562 - chronic myelocytic leukemia; facing the dermatophytic fungi: Trichophyton rubrum, T. tonsurans, T. mentagrophytes, Microsporum canis, M. gypseum, Epidermophyton flocossum - and four species of Candida (C. albicans, C. krusei, C. guilliermondii, C. parapsilosis) as well as the evaluation of larvicidal activity against Aedes aegipty, molluscicidal against Biomphalaria glabrata and toxic against Artemia salina. The cytotoxicity activity was done by colorimetric MTT-Methyl Tetrazolium Triazole according to the National Cancer Institute (NCI) protocol. For the fungicidal activity, the methodology outlined in document M27-A2 and M38A was used by the Clinical and Laboratory Standard Institute appropriate for dermatophytes and by M44A standards for Candida. In the bioassays for the control of Aedes aegipty, larvae from the fourth instar in two repetitions were used and extracts that had a mortality rate of less than 50% followed for the tests found. Toxicity assay against brine shrimp nauplii were performed according to the methodology given in literature with some modifications, to obtain mean lethal concentrations (LC50). We note that extracts with higher anticancer action are from species H.musciformis, D. simplex, P. gymnospora, S. vulgare, D. dichotoma, particularly the extracts dichloromethane, chloroform and chloroform fraction. The test results with A. saline showed a low toxicity of the crude extracts of marine algae tested, since, except the ethanolic extract of H. musciformis, all extracts showed LC50> 10-3. Regarding B. glabrata, only the chloroform fractions of the species H. musciformis and P. gymnospora showed molluscicidal activity. Regarding dermatophytes and Candida, dichloromethane and ethanol extracts were the best that have antifungal activity. The results showed that the algae from the coast of Alagoas have a potential that this was not explored until allowing a very promising future use. Compostos presentes em algas marinhas podem desempenhar importantes funções biológicas, entre elas: atividade antimicrobiana, antifungica, citotóxica, larvicida, moluscicida, de forma direta “in vivo” ou indireta, ativando mecanismos de defesa dos hospedeiros. O objetivo deste trabalho foi avaliar atividade biológica de extratos de algas marinhas bentônicas. Foram testados extratos brutos e frações obtidas de algas: Dictyota dichotoma, Padina gymnospora, Digenia simplex, Hypnea musciformis, Sargassum vulgare, Ulva lactuca, Gracilaria caudata, Galaxaura rugosa e Gellidium pusillum coletadas na Praia de Riacho Doce, litoral norte do Estado de Alagoas. Apos coleta, triagem e identificação, as algas secas (500g) e pulverizadas foram submetidas à extração com os solventes: diclorometano, clorofórmio, metanol, etanol e água. Os extratos em diclorometano de H. musciformis e P. gymnospora foram selecionados para fracionamento, por apresentaram melhores rendimentos. Foi realizada avaliação citotóxica frente a células cancerígenas humanas: NCI-H292 - câncer de pulmão humano, HEp-2-carcinoma epidermóide de laringe humana; K562 -leucemia mielocítica crônica; frente aos fungos dermatófitos: Trichophyton rubrum, T. tonsurans, T. mentagrophytes, Microsporum canis,M. gypseum, Epidermophyton flocossum- e quatro espécies de Candida(C. albicans;C. krusei;C. guilliermondi; C. parapsilosis) bem como, avaliação da atividade larvicida contra larvas de Aedes aegipty, moluscicida contra Biomphalaria glabrata e toxica contra Artemia salina. A avaliação da citotoxicidade foi realizada pelo método colorimétrico do MTT-Metil Triazol Tetrazolio de acordo com o Protocolo do National Câncer Institute (NCI). Para atividade fungicida empregou-se a metodologia descrita no documento M27-A2 e M38A pelo Clinical and Laboratory Standard Institute adequado para dermatófitos e pela norma M44A para Candida. Nos bioensaios para controle do Aedes aegipty, foram utilizadas larvas do quarto ínstar em duas repetições e os extratos que tiveram um percentual de mortalidade igual ou superior a 50% seguiram para estudo. Ensaio de toxicidade contra nauplius de Artemia salina foram realizados de acordo com a metodologia descrita na literatura com algumas modificações, para obtenção de concentrações letais médias (LC50). Verificamos que os extratos das espécies H.musciformis, D. simplex, P. gymnospora, S. vulgare, D. dichotoma possuem maior ação anticâncer sobretudo nos extratos obtidos com diclorometano, clorofórmio e fração clorofórmica. Os resultados obtidos no ensaio com A. salina indicaram uma baixa toxicidade dos extratos brutos de algas marinhas testados, uma vez que, excetuando-se o extrato etanolico de H. musciformis, todos os extratos apresentaram LC50> 103. Em relação a B. glabrata, apenas as frações em clorofórmio da espécie H. musciformis e P. gymnospora apresentaram atividade moluscicida. Em relação aos dermatófitos e Candida, os extratos diclorometano e etanol foram os que melhor apresentaram atividade antifúngica.Os resultados permitiram concluir que as algas do litoral alagoano possuem um potencial que até o presente momento não foi explorado sugerindo uma utilização futura bastante promissora.

The frequencies of micronuclei (MN) and morphological nuclear abnormalities (NA) in erythrocytes in the peripheral blood of tambaqui (Colossoma macropomum), treated with 2 mg.L -1 methylmercury (MeHg), were analyzed. Two groups (nine specimens in each) were exposed to MeHg for different periods (group A - 24 h; group B - 120 h). A third group served as negative control (group C, untreated; n = 9). Although, when compared to the control group there were no significant differences in MN frequency in the treated groups, for NA, the differences between the frequencies of group B (treated for 120 h) and the control group were extremely significant (p < 0.02), thus demonstrating the potentially adverse effects of MeHg on C. macropomum erythrocytes after prolonged exposure.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-07-23Bitstream added on 2014-06-13T20:01:53Z : No. of bitstreams: 1 silva_jmf_dr_sjc.pdf: 673718 bytes, checksum: a9a6928557da03c914d3af794e3bd430 (MD5) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) O objetivo do estudo foi avaliar quatro diferentes sistemas adesivos (Multi- Purpose, Single Bond, SE Plus e Easy Bond – 3M ESPE) no que se refere à resistência adesiva ao microcisalhamento na dentina bovina. Além de avaliar a citotoxicidade desses novos sistemas adesivos por meio do teste de barrerira dentinária e ensaio de MTT em fibroblastos pulpares bovinos. Para o teste de microcisalhamento 80 dentes bovinos tiveram suas raízes seccionadas, foram embutidos em resina acrílica e tiveram a superfície vestibular desgastada expondo-se a dentina, sendo que em 40 dentes a espessura de dentina remanescente foi de 500μm e nos outros 40 de 200μm. Os cdp receberam então o procedimento adesivo de acordo com as instruções do fabricante e com auxílio de uma matriz metálica, cilindros de resina (Z 250 – 3M ESPE) de 0,8 mm de diâmetro e 1mm de altura foram construídos. Após 24h os cdp foram então submetidos ao ensaio de microcisalhamento. Para avaliar a citotoxicidade foi usado o teste de barreira dentinária. Células pulpares bovinas transformadas foram cultivadas em redes de nylon por 2 semanas, obtendo-se uma cultura de 3 dimensões. Essas culturas celulares foram separadas dos materiais testados por fatias de dentina de 500 e 200μm em um dispositivo de perfusão celular. Os materiais foram aplicados na porção cavitária do dispositivo de acordo com as instruções do fabricante, e um material de moldagem a base de silicona (President, Coltene) foi usado como controle negativo (100% de viabilidade celular). Após 24 h de periodo de exposição, a viabilidade celular foi mensurada fotometricamente (teste MTT). Por meio de estatística descritiva verificou-se que a melhor eficiência adesiva foi apresentada pelo adesivo auto-condicionante de um passo só, Easy Bond (21,06 MPa - 200μm; 27,01 MPa- 500μm) seguido pelo Single Bond (15,64 MPa - 200μm; 23,45 MPa- 500μm), SE Plus... The aim of this study was to evaluate four different adhesive systems (Multi- Purpose, Single Bond, SE Bond Plus and Easy - 3M ESPE) with regard to microshear bond strength to bovine dentin. In addition evaluate the cytotoxicity of these new adhesive systems by means of a dentin barrier test. To test microshear 80 bovine teeth had their roots sectioned and were embedded in acrylic resin. The buccal surface had been worn to expose the dentin, in 40 teeth the remaining dentin thickness was 500μm and 200μm in the other 40. The specimes received the adhesive procedure according to the manufacturer's instructions and with the aid of a metal matrix, cylinders of resin (Z 250 - 3M ESPE) from 0.8 mm in diameter and 1mm in height were built. After 24h the specimes were then subjected to the microshear testing To evaluate the cytotoxicity, a dentin barrier test was used. SV3NeoB transfected bovine pulp derived cells were grown on nylon meshes for 2 weeks achieving a 3-dimensional cell culture as described. These cell cultures were separated from the test materials by dentin slices of 200 or 500μm thickness in a cell cultures perfusion chamber. The materials were applied into the cavity part of the device according to manufacturer’s instruction, and a silicon impression material (President, Coltene) served as a negative control material (100% cell viability). After a 24h exposure period, cell viability was measured photometrically (MTT test). Median values (plus 25% and 75% percentiles) of cell viability measurements (n=10) were statistically analyzed (Mann-Whitney test, = 0.05). Descriptive statistics found that the best bonding performance was presented by the single step adhesive Easy Bond (21.06 - 200μm, 27.01 - 500μm) followed by Single Bond (15.64 - 200μm; 23.45 - 500μm), SE Plus (18.23 - 200μm; 20.07 - 500μm) and Multi Purpose (15.24 - 200μm; 17.99 - 500μm). Moreover, it was... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2013-08-12T18:43:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-01-01 Made available in DSpace on 2013-09-30T19:16:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-01-01 Submitted by Vitor Silverio Rodrigues (vitorsrodrigues@reitoria.unesp.br) on 2014-05-20T15:32:05Z No. of bitstreams: 0 Made available in DSpace on 2014-05-20T15:32:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-01-01 Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) Financiadora de Estudos e Projetos (FINEP) Three Pd(II) complexes were prepared from N(4)-substituted thiosemicarbazones: [Pd(aptsc)(PPh(3))](NO(3))center dot H(2)O, 1, [Pd(apmtsc)(PPh(3))](NO(3)), 2, and [Pd(apptsc)(PPh(3))](NO(3))center dot H(2)O, 3, where PPh(3) = triphenylphosphine; Haptsc = 2-acetylpyridine-thiosemicarbazone; Hapmtsc = 2-acetylpyridine-N(4)-methyl-thiosemicarbazone and Happtsc = 2-acetylpyridine-N(4)-phenyl-thiosemicarbazone. All complexes were characterized by elemental analysis, IR, UV-Vis, (1)H and (31)P{(1)H} NMR spectroscopies, and had their crystalline structures determined by X-ray diffractometry from single crystals. The monoanionic thiosemicarbazonate ligands act in a tridentate mode, binding to the metal through the pyridine nitrogen, the azomethine nitrogen and the sulfur atoms. The cytotoxic activity against the breast cancer cell line MDA-MB231 and the anti-Mycobacterium tuberculosis H(37)Rv ATCC 27294 activity were evaluated for the compounds. All Pd(II) complexes were highly active against the studied cell line, presenting similar values of IC(50), around 5 mu mol L(-1), while the clinically applied antitumor agent cisplatin was inactive. The compounds show remarkable anti-M. tuberculosis activities, presenting MIC values comparable or better than some commercial anti-M tuberculosis drugs. Univ São Paulo, Inst Quim São Carlos, BR-13566590 São Carlos, SP, Brazil Universidade Federal de São Carlos (UFSCar), Dept Quim, BR-13565905 São Carlos, SP, Brazil Univ Estadual Paulista, Fac Ciencias Farmaceut, BR-14801902 Araraquara, SP, Brazil Universidade Federal de Santa Maria (UFSM), Dept Quim, BR-97105900 Santa Maria, RS, Brazil Univ São Paulo, Inst Fis São Carlos, BR-13560970 São Carlos, SP, Brazil Universidade de Brasilia (UnB), Inst Quim, BR-70919970 Brasilia, DF, Brazil Universidade Federal de São Carlos (UFSCar), Dept Ciencias Fisiol, BR-13565905 São Carlos, SP, Brazil Univ Estadual Paulista, Fac Ciencias Farmaceut, BR-14801902 Araraquara, SP, Brazil

O óleo essencial das folhas e ramos finos frescos e secos de Hyptis crenata forneceu os seguintes rendimentos, 1,4% e 0,9%. Os constituintes voláteis principais foram α-pineno (22,0%; 19,5%), 1,8-cineol (17,6%; 23,2%), β-pineno (17,0%: 13,8%), cânfora (4,7%; 11,6%), limoneno (5,4%; 4,4%) e γ-terpineno (3,5%; 2,4%), totalizando mais de 70% nos óleos. A atividade de seqüestro do radical DPPH para o extrato metanólico (CE50, 16,7 + 0,4 µg/mL) foi comparável ao do BHT (19,8 ± 0,5 µg/mL) mostrando uma significante atividade antioxidante. Os óleos apresentaram baixa atividade. O teor de fenólicos totais (TP, 373,0 + 15,9 mg GAE/g) e equivalente trolox (TEAC, 226,8 + 0,5 mg TE/g) confirmaram a atividade antioxidante do extrato metanólico, que pode ser atribuída à presença de compostos fenólicos polares. No teste com larvas de camarão as concentrações letais para o óleo e extrato metanólico foram 6,7 + 0,2 µg/mL e 13,0 + 3,7 µg/mL, respectivamente, fornecendo importante evidência de suas atividade biológicas. The essential oils of fresh and dried leaves and fine stems of Hyptis crenata furnished the following yields: 1.4% and 0.9%. The main volatile constituents were α-pinene (22.0%; 19.5%), 1,8-cineole (17.6%; 23.2%), β-pinene (17.0%; 13.8%), camphor (4.7%; 11.6%), limonene (5.4%; 4.4%) and γ-terpinene (3.5%; 2.4%), totalizing more than 70% in the oils. The DPPH radical scavenging activity (EC50, 16.7 + 0.4 µg/mL) of the methanol extract was comparable to BHT (19.8 ± 0.5 µg/mL) showing a significant antioxidant activity. The oils showed low activities. The amount of total phenolics (TP, 373.0 + 15.9 mg GAE/g) and trolox equivalent (TEAC, 226.8 + 0.5 mg TE/g) confirmed the antioxidant activity of the methanol extract that can be attributed to the presence of polar phenolic compounds. In the brine shrimp bioassay the lethal concentrations (LC50) for the oil and methanol extract were 6.7 + 0.2 µg/mL and 13.0 + 3.7 µg/mL, respectively, providing important evidence of their biological activities.