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The different pathotypes of Escherichia can produce a large number of human diseases. Surveillance becomes complex since their differentiation are not easy.Particularly, the detection of Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) serotype O157:H7 consists of stool culture of a diarrheal sample in enrichment and/or selective media, identification of presumptive colonies and confirmation by Multiplex PCR technique for the genotypic characterization of serogroup O157 and Shiga toxins (stx1 and stx2), in addition to the traditional biochemical identification.All of these procedures are laborious, require a certain level of training, are time consuming and expensive. Among the currently most widely used methodologies, MALDI-TOF MS mass spectrometry (matrix-assisted laser desorption/ionization with time-of-flight mass detection), allows a quick and easy way to obtain a protein spectrum of a microorganism, not only in order to identify the genus and species, but also the discovery of potential biomarker peaks of a certain characteristic. In the present work, the information obtained from 60 clinical isolates was used to detect peptide fingerprints of STEC O157:H7 and other diarrheagenic E. coli. The differences found in the protein profiles of the different pathotypes established the foundations for the development and evaluation of classification models through automated training.The application of the Biomarkers in combination with the predictive models on a new set of samples (n=142), achieved 99.3% of correct classifications, allowing the distinction between STEC O157:H7 isolates from the other diarrheal Escherichia coli.Therefore, given that STEC O157:H7 is the main causal agent of haemolytic uremic syndrome and based on the performance values obtained in the present work (Sensitivity=98.5% and Specificity=100%), this development could be a useful tool for diagnosis of the disease in clinical microbiology laboratories.

Escherichia coli productora de toxina Shiga (STEC) O157:H7 es el serotipo más frecuentemente identificado como agente causal de colitis hemorrágica y síndrome urémico hemolítico (SUH), aunque se han descripto más de 100 serotipos con potencial patogénico similar. El objetivo del trabajo fue describir casos de enfermedad humana asociados a la infección por STEC O121:H19, atendidos en la ciudad de Mar del Plata y establecer la relación genética de los aislamientos mediante técnicas de epidemiología molecular. Se observó un amplio espectro en la severidad clínica de los ocho casos estudiados: dos fueron asintomáticos (contactos de SUH), un paciente tuvo diarrea sanguinolenta, y cinco presentaron SUH. Uno de los pacientes con SUH falleció. Las cepas O121:H19 portadoras del genotipo stx2a/eae/ehxA fueron sensibles a los antibióticos ensayados y presentaron por electroforesis en gel de campo pulsado (Xbal-PFGE) distintos patrones de macrorrestricción, con similitud del 84,25%. El patrón AREXKX01.0072, detectado en un SUH y en su contacto, es nuevo en la Base de Datos Nacional de STEC no-O157 de la Argentina. La utilización de métodos estandarizados de detección y tipificación de STEC permite a los laboratorios de referencia monitorear la frecuencia temporal y la distribución geográfica de las cepas circulantes para la prevención y control de estos patógenos asociados a enfermedad humana. Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) O157:H7 is the most frequent serotype identified as causative agent of sporadic cases and outbreaks of diarrhea with or without blood, hemorrhagic colitis and hemolytic uremic syndrome (HUS), although more than 100 serotypes have been described of similar pathogenic potential. The aim of the study was to describe cases of human disease associated with STEC O121:H19 infections, assisted in Mar del Plata City, and to establish the genetic relationship of the isolates by molecular epidemiology techniques. A wide spectrum was observed in the clinical severity of the eight cases studied: two were asymptomatic (contacts of HUS), one patient had bloody diarrhea, and five cases presented HUS. One HUS case died. All STEC O121:H19 strains carried the stx2a/eae/ehxA genotype, were sensitive to all antibiotics tested and showed different macrorestriction patterns by pulsed-field gel electrophoresis (Xbal-PFGE), with 84.25% similarity. The pattern AREXKX01.0072, detected in a HUS case and in his contact, is new in the Argentine National Database of non-O157 STEC. The use of standardized methods for detection and typing of STEC allows reference laboratories to monitor the temporal frequency and geographical distribution of circulating strains for the prevention and control of these pathogens associated with human diseases. Escherichia coli produtora de toxina Shiga (STEC) O157:H7 é o sorotipo mais frequentemente identificado como o agente causador de colite hemorrágica e síndrome hemolítica urêmica (SHU), embora tenham sido descritas mais de 100 sorotipos com potencial patogênico semelhantes. O objectivo foi o de descrever os casos de doença humana associadas com a infecção por STEC O121:H19, assistido, na cidade de Mar del Plata e estabelecer relação genética de isolados utilizando epidemiologia molecular. Um amplo espectro foi observado na severidade clínica dos oito casos estudados, dois eram assintomáticos (contacto SHU), uma paciente teve diarreia com sangue, e cinco tiveram SHU. Um caso de SHU faleceu. As cepas O121:H19 portaram o genótipo stx2a/eae/ehxA, foram sensíveis aos antibióticos testados e apresentaram, por eletroforese em gel de campo pulsado (Xbal-PFGE), diferentes padrões de macrorestrição, com similaridade de 84,25%. O padrão AREXKX01.0072 detectado em SHU e em seu contato, é novo para a Base de Dados Nacional de STEC não-O157 na Argentina. O uso de métodos padrão de detecção e tipagem de STEC permite os laboratórios de referência monitorar frequência temporal e distribuição geográfica de estirpes circulantes para a prevenção e controlo destes agentes patogénicos associados com a doença humana.

The objectives of this study were: (1) to estimate STEC frequency in hide and carcass samples taken from beef slaughterhouses supplying the domestic market in Argentina, (2) to establish the pheno-genotypic characteristics of STEC and non-toxigenic Escherichia coli of serogroups O26, O45, O103, O121, O111, O145 or O157 isolated from the analyzed samples and, (3) to study their clonal relatedness. Sixty hides and 60 carcasses were analyzed. At the screening step, 48% of hide and 80% of carcass samples tested positive for the stx gene by endpoint PCR. The STEC isolation rate was 5% for hides and 8% for carcasses. The isolation rate of STEC-positive for O26, O45, O103, O111, O145 or O157 serogroups was 0% for hides and 2% for carcasses. With the purpose of studying the clonal relatedness of isolates, macrorestriction fragment analysis by pulsed-field gel electrophoresis was performed. The results indicated cross-contamination between hides and between carcasses of animals in the same lot and, that the origin of carcass contamination was their own hide, or the hides of other animals in the same lot. The high detection rate at the screening step, especially in carcasses, and the evidence of cross-contamination show the need to apply additional in-plant intervention strategies aimed at preventing carcass contamination. Los objetivos del presente estudio fueron tres: 1) estimar la frecuencia de Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC) en muestras de cuero y carcasa de bovinos en frigoríficos de consumo interno de Argentina; 2) realizar la caracterización feno-genotípica de las cepas STEC y de Escherichia coli no toxigénicas pertenecientes a los serogrupos O26, O45, O103, O121, O145 u O157 aisladas a partir de las muestras analizadas; 3) establecer la relación clonal de ese conjunto de cepas. Se analizaron 60 cueros y 60 carcasas. En la etapa de tamizaje, el gen stx se detectó en el 48% de las muestras de cuero y en el 80% de las muestras de carcasa por una PCR de punto final. La frecuencia de recuperación de cepas STEC fue del 5% en cueros y del 8% en carcasas, y la de cepas STEC positivas para los serogrupos O26, O45, O103, O121, O111, O145 u O157 fue del 0% en los cueros y del 2% en las carcasas. La relación clonal de las cepas aisladas se investigó a través de electroforesis de campo pulsado y análisis de los patrones de macrorrestricción generados. Los resultados demostraron la existencia de contaminación cruzada entre cueros y carcasas de animales pertenecientes a un mismo lote, y también que el origen de la contaminación fue el propio cuero del animal o el cuero de otros animales pertenecientes al mismo lote. Los altos porcentajes de detección en la etapa de tamizaje, especialmente en carcasas, y la evidencia de contaminación cruzada ponen de manifiesto la necesidad de evaluar la implementación de estrategias de intervención tendientes a evitar la contaminación de carcasas. Instituto de Tecnología de Alimentos Fil: Cap, Mariana. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Tecnologia de Alimentos; Argentina. Fil: Carbonari, Claudia C. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud “Dr. Carlos Malbrán”. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas. Servicio Fisiopatogenia; Argentina. Fil: D’Astek, Beatriz A. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud “Dr. Carlos Malbrán”. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas. Servicio Fisiopatogenia; Argentina. Fil: Zolezzi, Gisela. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud “Dr. Carlos Malbrán”. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas. Servicio Fisiopatogenia; Argentina. Fil: Deza, Natalia. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud “Dr. Carlos Malbrán”. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas. Servicio Fisiopatogenia; Argentina. Fil: Palladino, Pablo Martín. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Tecnología de Alimentos; Argentina. Fil: Masana, Marcelo Oscar. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Tecnología de Alimentos; Argentina. Fil: Chinen, Isabel. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud “Dr. Carlos Malbrán”. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas. Servicio Fisiopatogenia; Argentina. Fil: Rivas, Marta. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud “Dr. Carlos Malbrán”. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas. Servicio Fisiopatogenia; Argentina.

Cattle are the main reservoir of Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC), and the strategies to prevent the transmission of these microorganisms are concentrated in the slaughtering plant. The aim of this study was to evaluate the hygienic-sanitary quality and the frequency of detection of STEC in beef carcasses in abattoirs from Tucuman province. Two hundred and seventy four beef carcass sponges were processed; the count of generic E. coli was marginal in 9 (3,3%) of them. Escherichia coli O157 was isolated in 4 (1,4%) samples; 2 of which were characterized as stx2c(vh-a)/eae/ehxA whereas the other 2 were non-toxigenic strains. Non-O157 E. coli ONT:H49, stx2a/ehxA/saa was isolated from 1 sample (0,4%). In this work the quality of the analyzed product indicates that the good practices of manufacture are fulfilled in slaughtering facilities in Tucumán province. Los bovinos son el principal reservorio de Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC), y las estrategias para evitar su transmisión se concentran en la planta de faena. El objetivo de este trabajo fue evaluar la calidad higiénico-sanitaria y la frecuencia de detección de STEC en medias reses bovinas de frigoríficos de tránsito provincial. Se procesaron 274 esponjados de media res, en 9 (3,3%) el recuento de E. coli genérico fue marginal, en 4 (1,4%) se aisló E. coli O157; 2 caracterizados como stx2c(vh-a)/eae/ehxA y 2 no toxigénicos , y en 1 (0,4%) muestra se aisló E. coli no-O157 ONT:H49, stx2a /ehxA/saa. La distribución estacional de los aislamientos fue similar, sin correlación entre recuentos marginales de E. coli genérico y aislamiento de STEC O157 y no-O157. La detección de STEC en media res, mediante técnicas sensibles, es de fundamental importancia en el monitoreo de este patógeno en plantas de faena. Fil: Pérez Terrazzino, Gabriela Beatriz. Universidad Nacional de Tucumán. Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia. Instituto de Microbiología "Luis Verna". Cátedra de Bacteriología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán; Argentina Fil: Condorí, M.S.. Direccion de Bromatologia de Tucuman; Argentina Fil: Vega, Silvia. Direccion de Bromatologia de Tucuman; Argentina Fil: Lopez Campo, Alejandro. Direccion de Bromatologia de Tucuman; Argentina Fil: Chinen, Isabel. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud "Dr. C. G. Malbrán"; Argentina Fil: Rivas, Marta. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud "Dr. C. G. Malbrán"; Argentina Fil: Castillo, Marta Beatriz. Universidad Nacional de Tucumán. Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia. Instituto de Microbiología "Luis Verna". Cátedra de Bacteriología; Argentina Fil: Jure, Maria Angela. Universidad Nacional de Tucumán. Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia. Instituto de Microbiología "Luis Verna". Cátedra de Bacteriología; Argentina

Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) are important food-borne pathogens associated with cases of diarrhea, hemorrhagic colitis and hemolytic uremic syndrome (HUS). E. coli O157:H7 is the dominant serotype in Argentina and also in Neuquen Province, in which HUS incidence is above the national average, with a maximum of 28.6 cases per 100,000 children less than 5 years old reported in 1998. The aim of this study was to characterize a collection of 70 STEC O157 strains isolated from patients with diarrhea and HUS treated in the province of Neuquen, Argentina, between 1998 and 2011. All strains harbored eae, ehxA, rfbO157, and fliCH7 genes, and stx2a/stx2c (78.7%) was the predominant genotype. A total of 64 (91.4%) STEC O157 strains belonged to the hypervirulent clade 8 tested using both 4 and 32 SNP typing schemes. The strains showed the highest values reported in the literature for 6 of the 7 virulence determinants described in the TW14359 O157 strain associated with the raw spinach outbreak in the U.S. in 2006. Clade 8 strains were strongly associated with two of them: ECSP_3286, factor encoding an outer membrane protein that facilitates the transport of the heme complex (P = 0.001), and in particular extracellular factor ECSP_2870/2872, coding proteins related to adaptation to plant hosts (P = 0.000004). The q933 allele, which has been related to high toxin production, was present in 97.1% of the strains studied for the anti-terminator Q gene. In summary, this study describes, for the first time in Argentina, the almost exclusive circulation of strains belonging to the hypervirulent clade 8, and also the presence of putative virulence factors in higher frequencies than those reported worldwide. These data may help to understand the causes of the particular epidemiological situation related to HUS in Neuquen Province.

Escherichia coli productor de toxina Shiga (Stx) (STEC) O157:H7 es un patógeno asociado a enfermedades transmitidas por alimentos, fundamentalmente de origen animal. Se investigó la presencia de E. coli O157 en 250 muestras de carne picada y hamburguesas obtenidas de comercios de las ciudades de Santa Fe y Santo Tomé (Pcia. de Santa Fe) y en 150 muestras de leche provenientes de tanques de enfriado de tambos de la región, utilizando enriquecimiento selectivo y separación inmunomagnética. A partir de 3 muestras de carne (1.2%) se aislaron cepas de E. coli O157:H7 stx2, eae, y ehxA positivas, que pudieron ser diferenciadas mediante electroforesis de campo pulsado, fagotipificación y genotipificación de stx. No se aislaron cepas STEC O157:H7 a partir de las muestras de leche. Estos hallazgos confirman la participación de los alimentos de origen animal en la epidemiología de las enfermedades producidas por E. coli O157:H7. Shiga toxin (Stx)-producing Escherichia coli (STEC) is an emergent pathogen associated with foodborne diseases, especially foodstuffs of animal origin. A total of 250 beef samples (ground beef and hamburgers) obtained from retail outlets in Santa Fe and Santo Tomé cities, and 150 milk samples from bulk tank milk from dairy barns of the region were analyzed by selective enrichment and immunomagnetic separation. Escherichia coli O157:H7 stx2, eae and ehxA positive strains were isolated from three (1.2%) beef samples. The strains could be differentiated by pulsed-field gel electrophoresis, phagetyping and genotyping of stx. The milk samples were negative for STEC O157. These findings confirm the role of food of animal origin in the epidemiology of E. coli O157:H7 - associated diseases. Fil: Roldán, María Liliana. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina Fil: Chinen, Isabel. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas; Argentina Fil: Otero, Jose Luis. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Salud Pública Veterinaria; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Instituto de Lactología Industrial. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ingeniería Química. Instituto de Lactología Industrial; Argentina Fil: Miliwebsky, Elizabeth. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas; Argentina Fil: Alfaro, Natalia Soledad. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Instituto de Lactología Industrial. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ingeniería Química. Instituto de Lactología Industrial; Argentina Fil: Burns, Patricia Graciela. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Instituto de Lactología Industrial. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ingeniería Química. Instituto de Lactología Industrial; Argentina Fil: Rivas, Marta. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas; Argentina

Escherichia coli productor de toxina Shiga (Stx) (STEC) O157:H7 es un patógeno asociado a enfermedades transmitidas por alimentos, fundamentalmente de origen animal. Se investigó la presencia de E. coli O157 en 250 muestras de carne picada y hamburguesas obtenidas de comercios de las ciudades de Santa Fe y Santo Tomé (Pcia. de Santa Fe) y en 150 muestras de leche provenientes de tanques de enfriado de tambos de la región, utilizando enriquecimiento selectivo y separación inmunomagnética. A partir de 3 muestras de carne (1.2%) se aislaron cepas de E. coli O157:H7 stx2, eae, y ehxA positivas, que pudieron ser diferenciadas mediante electroforesis de campo pulsado, fagotipificación y genotipificación de stx. No se aislaron cepas STEC O157:H7 a partir de las muestras de leche. Estos hallazgos confirman la participación de los alimentos de origen animal en la epidemiología de las enfermedades producidas por E. coli O157:H7. Shiga toxin (Stx)-producing Escherichia coli (STEC) is an emergent pathogen associated with foodborne diseases, especially foodstuffs of animal origin. A total of 250 beef samples (ground beef and hamburgers) obtained from retail outlets in Santa Fe and Santo Tomé cities, and 150 milk samples from bulk tank milk from dairy barns of the region were analyzed by selective enrichment and immunomagnetic separation. Escherichia coli O157:H7 stx2, eae and ehxA positive strains were isolated from three (1.2%) beef samples. The strains could be differentiated by pulsed-field gel electrophoresis, phagetyping and genotyping of stx. The milk samples were negative for STEC O157. These findings confirm the role of food of animal origin in the epidemiology of E. coli O157:H7 - associated diseases. Fil: Roldán, María Liliana. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina Fil: Chinen, Isabel. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas; Argentina Fil: Otero, Jose Luis. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Salud Pública Veterinaria; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Instituto de Lactología Industrial. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ingeniería Química. Instituto de Lactología Industrial; Argentina Fil: Miliwebsky, Elizabeth. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas; Argentina Fil: Alfaro, Natalia Soledad. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Instituto de Lactología Industrial. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ingeniería Química. Instituto de Lactología Industrial; Argentina Fil: Burns, Patricia Graciela. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Instituto de Lactología Industrial. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ingeniería Química. Instituto de Lactología Industrial; Argentina Fil: Rivas, Marta. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas; Argentina

En mayo de 2002 se aisló por primera vez en Uruguay Escherichia coli O157:H7, productora de toxina Shiga a partir del coprocultivo de una niña de 16 meses procedente de Melo, con diagnóstico de síndrome urémico hemolítico. La cepa, productora de toxinas Shiga tipo 2 y tipo 2 variante humana a, era genéticamente distinta de las cepas circulantes en Argentina. Summary Shiga toxin-producing Escherichia coli OI57:H7 was isolated for the first time in Uruguay in May 2002 from fecal specimens cultures of a 16-month-female child coming from Melo with hemolytic uremic syndrome. The strain, Shiga type 2 and human variant a type 2 toxine-producing, was genetically different from current Argentinian strains. Résumé En mai 2002 on a isolé pour la première fois en Uruguay Escherichia coli O 157:H7, producteur de toxine Shiga à partir de la coproculture d'une fille de 16 mois provenant de Melo, avec un diagnostic de syndrôme urémique hémolytique. La cèpe, productrice de toxines Shiga type 2 et type 2 variante humaine a, était génétiquement différente aux cèpes présentes en Argentine.