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A cultura de calos facilita o estudo dos fatores que interferem na embriogênese somática, técnica que permite a obtenção de embriões in vitro a partir de tecido somático, possibilitando a propagação de plantas elite e constituindo uma ferramenta importante nos programas de melhoramento genético. Objetivou-se analisar a influência de reguladores de crescimento na indução de calos embriogênicos das cultivares BRS Araripe e BRS Seridó do algodoeiro. No Laboratório de Cultivo de Tecidos da Embrapa Algodão, para os ensaios de indução e proliferação de calos, segmentos hipocotiledonares foram cultivados em meio MS suplementado com os fitoreguladores ANA, KIN e 2,4-D. Na indução de calos embriogênicos, empregou-se meios de rediferenciação, com ausência de fitoreguladores. Os dados foram analisados de acordo com o teste não paramétrico do Qui-Quadrado, verificando-se elevado número de calos potencialmente embriogênicos, com consistência friável e coloração creme-esverdeado. No tratamento com adição de ANA e KIN, foi observada a formação de calos embriogênicos da cultivar BRS Seridó. A dependência do genótipo é um dos maiores problemas para a baixa frequência de embriogênese somática no algodão que, foi conseguida em poucas cultivares; sendo necessário o estudo em outras variedades para a definição de protocolos adequados a este processo.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-08-27T14:35:38Z No. of bitstreams: 1 Taiza da Cunha Soares.pdf: 1857026 bytes, checksum: 4789b4e7d475cfe2c472e70e3d859355 (MD5) Made available in DSpace on 2018-08-27T14:35:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Taiza da Cunha Soares.pdf: 1857026 bytes, checksum: 4789b4e7d475cfe2c472e70e3d859355 (MD5) Previous issue date: 2018-06-28 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES The release of transgenic cultivars of recalcitrant species such as cotton can be delayed due to the difficulty in regenerating the transformed tissue. Existing regeneration protocols are limited to a few responsive varieties, such as Coker, commonly used as recipients during genetic transformation. One of the factors that may be related to recalcitrance is the inefficiency in the activation of different genes during in vitro culture that may be associated with the acquisition of embryogenic competence. Among the genes mentioned in the literature, the Somatic Embryogenesis Receptor-Like Kinase (SERK) is shown to be responsible for the transition from the somatic cell state to the embryogenic in different plant species. The potential of this gene as a marker of somatic embryogenesis has been investigated. In this work, the relationship of the levels of GhSERK1 expression with the acquisition of embryogenic competence in cotton genotypes was analyzed. For this, a short sequence (186 bp) of this gene was selected from the conserved region between cotton and five other dicotyledons (Theobroma cacao, Citrus sinensis, Vitis vinifera, Glycine max and Phaseolus vulgaris) in order to allow the probe can be applied in the selection of other cultures. Initially, the RT-qPCR gene expression tests were performed in six genotypes with known embryogenic capacity (embryogenic - Coker 312, BRS Rubi and BRS Seridó and non-embryogenic - BRS 201, CNPA Precoce 1 and BRS Topázio), from RNA extracted from meristematic zygotic tissues. The aforementioned genotypes were induced to somatic embryogenesis in medium supplemented with naphthaleneacetic acid and kinetin. Corroborating with the result obtained via RT-qPCR, somatic embryos were formed only in Coker 312, BRS Seridó and BRS Rubi. In the latter, the percentage of fertile plants obtained was higher (50%) than Coker 312 (41.6%). The selective applicability of GhSERK1 was validated in four genotypes top lines (CNPA 286, CNPA BA 139, CNPA BA 1366 and CNPA BA 2247) with unknown in vitro behavior. Simultaneously, we performed induction tests on somatic embryogenesis to verify the expression results. In the genotypes in which the relative expression was higher (Coker 312 and CNPA BA 139), somatic embryos were formed. A nonradioactive probe was then grown from the 186 bp fragment and attested for its efficiency via Southern Blot in the top line genotypes, robust spots were observed in Coker 312 and CNPA BA 139. Based on these results, the latter was selected as the recipient genotype in future transformation studies. In addition, the sequence used allowed to identify genotypes responsive to somatic embryogenesis from zygotic tissues, optimizing time and costs. This work provides collaborations for the understanding of factors that may be involved in the acquisition of embryogenic competence generating perspectives of new studies to strengthen the programs of genetic improvement of the culture. O lançamento de cultivares transgênicas de espécies recalcitrantes como o algodoeiro pode ser retardado devido à dificuldade em regenerar o tecido transformado. Os protocolos de regeneração existentes limitam-se a poucas variedades responsivas, como a Coker, normalmente utilizadas como receptoras durante a transformação genética. Um dos fatores que podem estar ligados à recalcitrância, é a ineficiência na ativação de diferentes genes durante o cultivo in vitro que podem estar associados à aquisição de competência embriogênica. Dentre os genes citados na literatura, destaca-se o Somatic Embryogenesis Receptor-Like Kinase (SERK) retratado como responsável pela transição do estado celular somático para embriogênico em diferentes espécies de plantas. A potencialidade deste gene como marcador de embriogênese somática tem sido investigada. Neste trabalho, foram analisadas a relação dos níveis de expressão de GhSERK1 com a aquisição de competência embriogênica em genótipos de algodoeiro. Para isto, uma sequência curta (186 pb) deste gene foi selecionada a partir de região conservada entre o algodão e cinco outras dicotiledôneas (Theobroma cacao, Citrus sinensis, Vitis vinifera, Glycine max e Phaseolus vulgaris) de modo a permitir que a sonda também possa ser aplicada na seleção de outras culturas. Inicialmente, os testes de expressão gênica via RT-qPCR foram realizados em seis genótipos com capacidade embriogênica conhecida (embriogênicos – Coker 312, BRS Rubi e BRS Seridó e não embriogênicos – BRS 201, CNPA Precoce 1 e BRS Topázio), a partir de RNA extraído de tecidos zigóticos meristemáticos. Os genótipos supracitados foram induzidos à embriogênese somática em meio suplementado com ácido naftalenoacético e kinetina. Corroborando com o resultado obtido via RT-qPCR, embriões somáticos formaram-se apenas na Coker 312, BRS Seridó e BRS Rubi. Nesta última, o percentual de plantas férteis obtidas foi maior (50%) do que o Coker 312 (41,6%). A aplicabilidade seletiva do GhSERK1 foi validada em quatro genótipos top lines (CNPA 286, CNPA BA 139, CNPA BA 1366 e CNPA BA 2247) com comportamento in vitro desconhecido. Simultaneamente, realizamos ensaios de indução à embriogênese somática para comprovar os resultados de expressão. Nos genótipos em que a expressão relativa foi maior (Coker 312 e CNPA BA 139) houve a formação de embriões somáticos. Uma sonda não radioativa foi então desenvolvida a partir do fragmento de 186 pb e atestada sua eficiência via Southern Blot nos genótipos top lines, manchas robustas foram observadas em Coker 312 e CNPA BA 139. Com base nestes resultados, este último foi selecionado como genótipo receptor em futuros estudos de transformação. Além disso, a sequência utilizada permitiu identificar os genótipos responsivos à embriogênese somática a partir de tecidos zigóticos, otimizando o tempo e os custos. Este trabalho fornece colaborações para a compreensão de fatores que podem estar envolvidos na aquisição de competência embriogênica gerando perspectivas de novos estudos para fortalecer os programas de melhoramento genético da cultura.

Submitted by (ana.araujo@ufrpe.br) on 2017-02-20T18:31:01Z No. of bitstreams: 1 Marina Medeiros de Araujo Silva.pdf: 1111837 bytes, checksum: fa89f364f5e0242c84916270c538f88a (MD5) Made available in DSpace on 2017-02-20T18:31:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marina Medeiros de Araujo Silva.pdf: 1111837 bytes, checksum: fa89f364f5e0242c84916270c538f88a (MD5) Previous issue date: 2010-02-09 The somatic embryogenesis is a technique of in vitro culture applied in clonal propagation of plants and regeneration of genetically transformed cells, in addition to supporting basic studies related to morphological, molecular and biochemical events that happen during the embryogenic process. The initial stages of this morphogenic pathway are characterized by the induction of genes related to stress, which leads to the hypothesis that somatic embryogenesis is an extreme response to stress in plant cells cultivated in vitro. In this work, were induced embryogenic pathways direct and indirect in the RB 872552 variety of sugarcane and analyzed the activity of enzymes from antioxidant system in order to assess the correlation between somatic embryogenesis and regulation of oxidative stress. For the direct pathway (ESD), were applied four treatments (TS, TD, TG e TA) based on protocols previously described for sugarcane. These protocols differed as to the composition of the medium and incubation condition (dark or light period of 16 hours) in a completely randomized design with 10 replications per treatment. For the indirect pathway (ESI), were used by eight different treatments combinations of four concentrations of 2,4-D (2,4-dichlorophenoxyacetic acid) and two Fe-EDTA, in a factorial 4x2 and 20 replicates per treatment. Were calculated the indices of embryo formation (IFE) and callus (IFC) and evaluated the activity of catalase, peroxidase and polyphenoloxidase. Somatic embryos were visualized only in the treatment of ESD plus 2,4-D and BAP (6-benzylaminopurine), and treatment of ESI with 8 mg.L-1 2,4-D. The conversion of somatic embryos into plants was performed in culture medium without added phytoregulators. The activity of antioxidant enzymes was obtained by reading of a spectrophotometer, from the extract obtained from embryogenic and non-embryogenic tissues treatment of ESD. The polyphenoloxidase and catalase activity increased in non-embryogenic tissue, whereas peroxidase was less active in these tissues when compared to embryogenic. It was found that the induction of somatic embryogenesis in the variety studied is related to oxidative stress and that these antioxidant enzymes may become important as biochemical markers of this process. A embriogênese somática é uma técnica de cultivo in vitro aplicada na propagação clonal de plantas e na regeneração de células transformadas geneticamente, além de auxiliar estudos básicos relacionados aos eventos morfológicos, moleculares e bioquímicos que ocorrem durante o processo embriogênico. As fases iniciais dessa via morfogênica são caracterizadas pela indução de genes relacionados ao estresse, o que leva à hipótese de que a embriogênese somática é uma resposta extrema ao estresse de células de plantas cultivadas in vitro. Neste trabalho, foram induzidas as vias embriogênicas direta e indireta na variedade RB 872552 de cana-de-açúcar e analisada a atividade de enzimas do sistema antioxidante, a fim de avaliar a correlação entre a embriogênese somática e a regulação do estresse oxidativo. Para a via direta (ESD), foram aplicados quatro tratamentos (TS, TD, TG e TA) baseados em protocolos já descritos para cana-de-açúcar. Esses protocolos diferiam quanto à composição do meio e condição de incubação (escuro ou fotoperíodo de 16 horas), em delineamento inteiramente casualizado, com 10 repetições por tratamento. Para a via indireta (ESI), foram utilizados oito tratamentos diferenciados pelas combinações de quatro concentrações de 2,4-D (ácido 2,4-diclorofenoxiacético) e duas de Fe-EDTA, em esquema fatorial 4x2 e 20 repetições por tratamento. Foram calculados os índices de formação de embriões (IFE) e de calo (IFC) e avaliada a atividade da catalase, peroxidase e polifenoloxidase. Embriões somáticos foram visualizados apenas nos tratamentos de ESD acrescidos de 2,4-D e BAP (6-benzilaminopurina), e no tratamento de ESI com 8 mg.L-1 de 2,4-D. A conversão de embriões somáticos em plantas foi realizada em meio de cultura sem adição de fitoreguladores. A atividade das enzimas antioxidantes foi obtida através de leitura feita em espectrofotômetro, a partir do extrato obtido de tecidos embriogênicos e não embriogênicos dos tratamentos de ESD. A atividade da polifenoloxidase e da catalase aumentou em tecidos não embriogênicos, enquanto que a peroxidase foi menos ativa nesses tecidos quando comparada aos embriogênicos. Evidenciou-se que a indução da embriogênese somática na variedade estudada está relacionada ao estresse oxidativo e que estas enzimas antioxidantes podem exercer papel relevante como marcadores bioquímicos deste processo.

Submitted by Johnny Rodrigues (johnnyrodrigues@ufcg.edu.br) on 2019-02-26T12:49:32Z No. of bitstreams: 1 ROGACIANO CIRILO BATISTA - TESE PPGRN 2008..pdf: 15575608 bytes, checksum: fb6c706121081147ecc559c14b6c9a74 (MD5) Made available in DSpace on 2019-02-26T12:49:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ROGACIANO CIRILO BATISTA - TESE PPGRN 2008..pdf: 15575608 bytes, checksum: fb6c706121081147ecc559c14b6c9a74 (MD5) Previous issue date: 2008-03-31 Capes Nas regiões áridas e semi-áridas do mundo, a água tornou-se um fator limitante para o desenvolvimento urbano industrial e agrícola. Sendo assim o reuso de água apresenta-se como alternativa econômica para a atividade humana em benefício do meio ambiente. Portanto este trabalho tem como finalidade apresentar uma proposta com reuso de água residuária urbana proveniente do município de Campina Grande/PB - Brasil, na produção de Algodão-Colorido var. BRS-200, sendo avaliado através da Metodologia Emergética proposta por Odum, onde os aspectos socioeconômico e ambientais são investigados e identificados para avaliar o impacto da água residuária no ambiente; representado pela renovação do produto. A pesquisa foi desenvolvida em campo, na Estação de Tratamento de Efluente (ETE) da Companhia de Água e Esgoto da Paraíba (CAGEPA), sendo a área experimental de 4200 m2, distando 350m da Lagoa de Estabilização (ETE-Catingueira) com uma diferença de nível de 5m, uma declividade de 1,5%; o solo da área é um Neossolo, de textura média franco-argiloso-arenoso compasto natural, cultivado anteriormente com algodão, milho e outras variedades. As águas utilizadas na pesquisa foram provenientes da rede de abastecimento local e da Estação de Tratamento (ETE-Catingueira). De acordo com a pesquisa pode-se observar que a água residuária proveniente do esgoto doméstico realiza uma grande contribuição para o meio ambiente devido ao alto índice de material orgânico; Segundo a Análise Emergética as diferenças básicas existentes entre as Águas de Abastecimento e Residuária, sendo que a água de abastecimento não apresentou um boa taxa de produção por hectare, ficando em 500kg/ha com uma taxa de Renovabilidade de apenas 22%R numa média que vai até 70%R. Enquanto a água residuária apresentou uma produção de 1.500kg/ha, referente à uma taxa de Renovabilidade de 37%R. Para o algodão colorido irrigado com água de abastecimento e vendido a 0,46 US$/kg apresentou apenas 200 US$/ha apresentando a energia do produto em 3,52E+03J/(ha.ano) e uma emergia em dólares de 1,72E+13sej/(ha.ano). Enquanto o algodão irrigado com água residuária vendido ao mesmo preço custo de 0,46 US$/kg apresentou um valor de 600 US$(ha.ano) o que perfaz uma energia do produto em 2,78E+10J/(ha.ano) o que representa mais que o dobro da produção em mesma área irrigada com água de abastecimento. Podemos observar, portanto que os esgotos sanitários podem conter os nutrientes necessários para atender à demanda nutricional das plantas. Entretanto, não necessariamente estarão disponíveis nas formas e no momento exigido. Por exemplo, as formas de nitrogênio mais facilmente assimiláveis são o nitrato (N03", -N) e o amónio (NH+4, -N), mas os efluentes de esgotos tratados podem conter teores consideráveis de amónia (NH+3, -N) e nitrogênio orgânico. Além disso, as demandas de água e de nutrientes não se dão em paralelo, o que requer equacionamento apropriado. Portanto o Algodão Colorido é ecologicamente correto, não poluente, de valor agregado para o produtor e de forte apelo no mercado internacional, é uma excelente alternativa para a agricultura familiar do Semi-árido do Nordeste brasileiro. Além de adaptadas às fiações modernas, as cultivares de algodão colorido reduzem os custos de produção para a indústria têxtil e o lançamento de efluentes químicos e tóxicos, por dispensarem o uso de corantes. In the arid semi-arid regions of the world, the water become a limited factor to the urban, agricultural and industrial development. In this way the water reuse is indicated as an economical alternative for the human activity in aid of the environment. Therefore this work has as objective to show a proposal with reuse of urban residual water originating from the municipality of Campina Grande/PB - Brazil in the production of Colorful cotton, BRS-200 variety, being evaluated through the Emergy Methodology proposed by Odum, where the social-economical and environmental factors are examined and identified to alleviate the impact of residual water in the environment represented by renewing the product. The research was developed in the field, in Paraíba Water and Sewer Company Effluent Treatment Station - STE, being and experimental area of 4.200m2, 350 m away from the Stabilization Pond (STE Catingueira) with a level difference of 5m, na incline of 1,5%, the soil of the area is a Neosoil, with a medium Franc-day-sandy texture, with a natural pasture, previously cultivated with cotton, corn and other varieties. The water used on the research was originating from both the local supply net and Treatment Station (STE-Catingueira). According to the research we could notice that the residual water originating from home sewers realizes a great contribution to the environment due to the high number of organic material. According to the Emergetic Analysis the basic differences between the Supply Water and the Residual one are: the supply water didn't present a good production rate per hectare, being 500kg/ha with a Renewal rate of only 22%R on an average that goes to 70%R; the residual water presented a production of 1.500kg/ha, regarding a renewal rate of 37,00. For the colorful cotton irrigated with supply water and sold t US$ 0,46/kg, it presented only US$ 200/ha presenting the energy product at 3,52E+03J(ha/year) and an emergy in dollars of 1.72E + 13sej/(ha/year). The cotton irrigated with residual water solda the same price of US$ 0,46/kg presented rate of US$600 (ha/year) what results in a product energy of 2,78E+10J/(ha/year) representing more than twice of the production on the same area irrigated with supply water. We can notice that the sanitary sewers can cantain the nutrients necessary to full fil the plants nutritional demand. However, they will not necessianly be available in the ways and moment demanded. For instance, the nitrogen forms more easily assimilated are the nitrate (N03", -N) and the amonio (NH+4,-N), but the sewers effluents treated can contain considerable tenors of ammonia (NH+3, -N) and organic nitrogen. Besides the demands of water and nutrients don't happen in parallel what requires an apropriate equation. Therefore the Colorful Cotton is ecologically correct, non pullutant with an aggregated valve for the producer and has a strong appeal on the international market. It is also an excellent alternative for home agriculture in the semiarid region of Brazilian northeast. Besides being adapted to the modern spinning, the colorful cotton plantations reduce the production costs for the textile industry and the introduction of chemical and toxic effluents because they aroid the use of colorings.

The conservation of germplasm of oleaginous species of the cotton (Gossypium hirsutum L.) and the castor bean (Ricinus communis L.) it is of great importance to guarantee the readiness of the resources genetic vegetables for the improvement. The cryoopreservation is seen as great alternative for conservation long term of the resources genetic vegetables. To present research it was developed in the National Center of Research of the Cotton (CNPA) of the Brazilian Company of Agricultural Research (EMBRAPA), Laboratory of Biotechnology, in Campina Grande, PB, with the objective of evaluating cryopreservation protocols for the cotton and the castor bean culture. Cotton seeds were used of the you cvs. BRS 200 and BRS 201 and of the castor bean seeds of the cvs. BRS 188 - Paraguaçu and BRS 149 - Nordestina for the obtaining of your embryonic axes and of the plantlets for the excision of the explants (shoot apices and nod cotiledonare). Among the cryopreservation techniques, they were appraised protocols of vitrification and encapsulation-dehydration for cotton explants and desiccation of embryonic axes of the cotton and of the castor bean culture. In the vitrification, the DMSO was used (0; 5; 10; and 15%) and/or sucrose (0; 0,1; 0,25 and 0,5 M) in the preculture of the explants for 48 hours. In the encapsulation-dehydration, explants were submitted or not to the preculture for 24 hours MS liquid medium supplemented with 0,3 M of sucrose and dived in the encapsulation solution, containing 3% of Na-alginate, forming a bead that involved the explant, which were maintened by 12 hours in MS liquid medium with 0,75 M of sucrose, on a rotary shaker at 130 rpm. The beads containing the explants was submitted to the desiccation by 0; 3; 6 and 9 hours in the flow camera to laminate, with subsequent determination of the content of water. In the procedure of desiccation of the embryonic axes, cotton and castor bean seeds they were submitted the imbibition in water for 24 hours for subsequent extraction of the embryonic axes in the flow camera to laminate, where axes stayed desiccation for 0; 30; 60 and 90 minutes after extraction, with subsequent determination of the content of water. In all experiments the explants they were them placed in cryotubes and directly plunged into liquid nitrogen (-196°C), during 0; 5; 30 and 60 days. At the end of each period, the thawing of the explants was accomplished fast (38±2°C for 1-2 min) and slowly (25±2°C for 60 min) and then cultured in vitro for four weeks, moment in that took place them analysis of viability of the cotton explants and embryonic axes of both species. The desiccation of the cotton embryonic axes for 60 minutes (16% of the content of water) and of the castor bean for 90 minutes (5% of the content of water), when obtained of imbibed seeds, it guaranteed regeneration after cryopreservation. The employment of the DMSO above 5% affected the viability of the explants. The encapsulation induced a reduction in the development of the explants and the desiccation it affected the regeneration. The vitrification and the encapsulation-dehydration didn't guarantee regeneration of the cotton explants cryopreserved. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES A conservação de germoplasma de espécies oleaginosas como o algodoeiro (Gossypium hirsutum L.) e a mamoneira (Ricinus communis L.) é de grande importância para garantir a disponibilidade dos recursos genéticos vegetais para o melhoramento. A criopreservação é vista como ótima alternativa para conservação a longo prazo dos recursos genéticos vegetais. A presente pesquisa foi desenvolvida no Centro Nacional de Pesquisa do Algodão (CNPA) da Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária (EMBRAPA), Laboratório de Biotecnologia, em Campina Grande, PB, com o objetivo de avaliar protocolos de criopreservação para o algodoeiro e a mamoneira. Foram utilizadas sementes de algodoeiro das cvs. BRS 200 e BRS 201 e da mamoneira cvs. BRS 188 - Paraguaçu e BRS 149 - Nordestina para a obtenção de seus eixos embrionários e de plântulas matrizes para excisão dos explantes (ápices caulinares e nós cotiledonares). Dentre as técnicas de criopreservação, foram avaliados protocolos de vitrificação e encapsulamento-dessecação para explantes de algodoeiro e dessecação de eixos embrionários do algodoeiro e da mamoneira. Na vitrificação, empregou-se o dimetilsulfóxido (0; 5; 10; e 15%) e/ou sacarose (0; 0,1; 0,25 e 0,5 M) no meio MS de pré-cultivo dos explantes por 48 horas. No encapsulamento-dessecação, explantes de algodoeiro foram pré-cultivados em MS com 0,3 M de sacarose por 24 horas e mergulhados na solução de encapsulamento com alginato de sódio a 3%; explantes encapsulados foram transferidos para cultivo em MS com 0,75 M de sacarose durante 12 horas sob 130 rpm e então submetidos a dessecação por 0; 3; 6 e 9 horas na câmara de fluxo laminar, com posterior determinação do teor de água. No procedimento de dessecação dos eixos embrionários, sementes de algodoeiro e mamoneira foram submetidas a embebição por 24 horas para posterior extração dos eixos embrionários na câmara de fluxo laminar, onde eixos permaneceram dessecando por 0; 30; 60 e 90 minutos após extração, com posterior determinação do teor de água. Em todos experimentos foram empregadas quatro réplicas de 10 unidades experimentais, que foram postas em criotubos e imersos no nitrogênio líquido (-196°C), onde permaneceram por 0; 5; 30 e 60 dias. Ao final de cada período, o descongelamento das amostras foi realizado rapidamente (38±2°C por 1-2 min) e lentamente (25±2°C por 60 min) e então cultivadas in vitro durante quatro semanas, momento em que se realizou as análise de viabilidade dos explantes de algodoeiro e eixos embrionários de ambas espécies. A dessecação dos eixos embrionários de algodoeiro por 60 minutos (16% do teor de água) e da mamoneira por 90 minutos (5% do teor de água), quando obtidos de sementes embebidas, garantiu regeneração após criopreservação. O emprego do dimetilsufóxido acima de 5% afetou a viabilidade dos explantes. O encapsulamento induziu uma redução no desenvolvimento dos explantes e a dessecação afetou a regeneração. A vitrificação e o encapsulamento-dessecação não garantiram regeneração aos explantes de algodoeiro criopreservados.