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Babesia bovis, un parásito protozoario intraeritrocítico transmitido por garrapatas, es uno de los agentes etiológicos de la babesiosis bovina, una enfermedad altamente prevalente en las regions tropicales y subtropicales que causa una morbilidad y mortalidad significativas en el Ganado. Para poder eventualmente comparar los genomas de una cepa virulenta y una atenuada de B. bovis, el objetivo de este estudio fue secuenciar y ensamblar un borrador del genoma para cada cepa del parásito. Eritrocitos de bovino infectados con las dos poblaciones de B. bovis fueron sujetos a una extracción de ADN genómico con fenol y cloroformo orgánico. Se utlizaron 20-30 µg de ADN genómico de cada población de parásitos para la preparación de bibliotecas de ADN, con réplicas técnicas para cada cepa, utilizando el Kit Nextera Xt. La secuenciación de las bibliotecas se llevó a cabo con el procedimiento tipo escopeta en el Instituto de Biotecnología de la UNAM. Se obtuvieron 5,239,525 pares de lecturas de extremo pareado de buena calidad para la cepa atenuada de B. bovis, y 8,237,626 pares de lecturas pareadas para la cepa virulenta. Los genomas se ensamblaron utilizando el programa Spades v3.13.1. obteniéndose un total de 625 contigs con una cobertura de 480x para la cepa atenuada y un total de 2,274 contigs con una cobertura de 130x para la cepa virulenta. La secuenciación y el ensamblado del genoma demostró que la cepa atenuada de B. bovis contiene 7,962,396 pb, mientras que la cepa virulenta 8,760,816 pb, lo que representa una diferencia de 9.11% en el recuento total de pares de bases. Resta realizar la anotación de los genomas para identificar las diferencias que posiblemente estén asociadas a la virulencia o patogenicidad de B. bovis.

La revisión se enfocó en presentar de manera concisa las aportaciones que investigadores del INIFAP, han desarrollado directamente o en colaboración con investigadores de otras instituciones sobre diferentes aspectos de las enfermedades que afectan a la ganadería bovina en México. Se describen investigaciones sobre enfermedades virales como la rabia y la diarrea viral bovina; bacterianas como la anaplasmosis, brucelosis, tuberculosis, paratuberculosis, leptospirosis y enfermedad respiratoria bovina; de las enfermedades parasitarias se incluye a la infestación por garrapatas y a la babesiosis. Se identifican posibles líneas de investigación que pueden coadyuvar a mitigar el impacto de las enfermedades en la producción. Se señalan aportes sobre el desarrollo o adaptación de técnicas diagnósticas de tipo serológico y molecular y se considera el diagnóstico de resistencia a los ixodicidas. Además, se indican parámetros epidemiológicos de las enfermedades y se refieren los biológicos generados que comprenden vacuna contra rabia, anaplasmosis y babesiosis; bacterina contra leptospirosis y una bacterina-toxoide contra neumonías. Asimismo, se comentan las evaluaciones del uso de BCG contra tuberculosis y una vacuna de nueva generación contra la brucelosis. En la revisión se concluye que la investigación del INIFAP en salud animal debe forzosamente tener como perspectiva las ciencias ómicas. Solo así se complementará el entendimiento de los mecanismos de las enfermedades, el desarrollo de nuevas técnicas diagnósticas y el diseño de vacunas efectivas y seguras. De modo que el gran reto será el involucramiento del área de salud animal al concepto de "Una Salud".

El objetivo fue evaluar el grado de infestación natural por Rhipicephalus microplus, así como determinar su correlación con factores climatológicos y su efecto sobre la ganancia de peso en bovinos doble propósito. Se utilizaron 31 bovinos cruzados, Bos taurus x Bos indicus, de ambos sexos, con una edad promedio de 307 días. El conteo de garrapatas semi-repletas (4.5 a 8.0 mm de diámetro) y el pesaje de los animales se realizaron cada 28 días. El conteo de garrapatas se realizó desde la cabeza hasta la base de la cola, abarcando miembros anteriores y posteriores, así como la región ventral de los animales. Las variables de respuesta estudiadas fueron número de garrapatas semi-repletas y ganancia de peso promedio del animal. En julio el número promedio de garrapatas por animal fue mayor (P0.05) el número de garrapatas. La ganancia de peso disminuyó 34 g (P

Two hundred and thirty-three blood samples of water buffalo were collected on four farms in Veracruz state and Tabasco state, Mexico, to detect and confirm the identities of

In this study, we report Babesia bigemina proliferation in culture medium free of components of animal origin supplemented with a lipid mixture. Babesia bigemina continuously proliferated in VP-SFM with a higher percent parasitized erythrocyte as compare to using other animal component-free culture media. Compared with Advanced DMEM/F12 (ADMEM/F12), VP-SFM had a similar percent parasitized erythrocyte (PPE). Supplementation of VP-SF with a lipid acid mixture improved B. bigemina proliferation in vitro culture, with a maximum PPE of 11.3%. Growth of B. bigemina in a perfusion bioreactor using VP-SFM medium supplemented with lipid mixture resulted in a PPE above 28%. In conclusion, we demonstrated that B. bigemina proliferated in an animal component-free medium supplemented with the fatty acid mixture. This innovation to B. bigemina in vitro culture method presented herein is an important source of biological material for live vaccine production and understanding the mechanisms and molecules involved in parasite attachment and invasion of bovine erythrocytes.

This study reported that Babesia bigemina (Bbig-SF) was continuously cultured in vitro in a serum-free medium supplemented with a mixture of insulin-transferrin-selenite (M-ITS) and putrescine (Pu). Firstly, the effect of five different types of basal culture media supplemented with 40% bovine serum was evaluated regarding the proliferation of the protozoan parasite. Cultures with the advanced DMEM/F12 medium (A-DMEM/F12) showed the highest percentage of parasitized erythrocytes (PPE) at 8.37%. Using A-DMEM/F12, a strain of B. bigemina (Bbig-SF) was adapted for growth in bovine serum-free medium by a sequential reduction of serum and demonstrated a maximum PPE of 7.18% in the absence of serum. The next study was the evaluation of the effect of adding four different concentrations of M-ITS to the serum-free A-DMEM/F12 medium on Bbig-SF; the optimal concentrations of M-ITS were 2000, 1100, and 1.34 mg/L, which yielded a PPE of 7.23%. Next, eight levels of Pu were evaluated on Bbig-SF cultured in serum-free A-DMEM/F12. After the addition of 0.1012 mg/L of Pu, the maximum PPE was 7.61%. When the combination of serum-free A-DMEM/F12 + M-ITS (2000, 1100, and 1.34 mg/L) + Pu (0.1012 mg/L) was evaluated, it yielded a maximum PPE of 14.80%. Finally, the combination of M-ITS + Pu in A-DMEM/F12 without serum and incorporation of a perfusion bioreactor yielded a maximum PPE of 33.45%. We concluded these culturing innovations for B. bigemina in vitro allow the optimization of small- and large-scale proliferation as a source of this protozoan parasite for future studies.

La presente investigación se llevó a cabo con el objetivo de determinar la producción de óxido nítrico (ON) a partir de monocitos de sangre periférica de bovino, expuestos in vitro a L. casei. Se midió la producción de ON cada 24 h durante cuatro días, en cultivos de monocitos de sangre periférica de bovinos de 4 a 6 meses de edad (MDE) (n = 4), 8 MDE (n = 3) y 12 MDE (n = 8), expuestos (E) o no (NE) a Lactobacillus casei. En cada uno de los periodos de 24 h se observó una producción signicativa (p < 0.01) de ON en los monocitos expuestos en comparación con los no expuestos. La diferencia fue más marcada en los monocitos del grupo 4 a 6 MDE. El uso de L. casei puede ser importante para establecer medidas de estimulación de la inmunidad innata en bovinos contra enfermedades producidas por diversos patógenos.

The effect of Lactobacillus casei administered along with a live attenuated vaccine vs. bovine babesiosis (VAC) on induction of IgG1 and IgG2 antibodies to Babesia bovis and Babesia bigemina was assessed by the indirect fluorescent antibody test (IFAT) in bovines of an endemic babesiosis area before (day 0) and after vaccination (days 15 and 30). We previously reported that L. casei increases the efficiency of VAC under controlled conditions and under extreme conditions in the field; however, the levels of IgG1 and IgG2 antibodies to B. bovis and B. bigemina are not known in vaccinated animals. Twenty-one dairy cows were allocated into three groups (seven animals per group): unvaccinated, vaccinated with VAC and vaccinated simultaneously with VAC and L. casei (VAC–LC). All animals were kept in a babesiosis endemic area at Tlalixcoyan, Veracruz. At days 15 and 30 after vaccination, the average levels of IgG1 to B. bovis and to B. bigemina were significantly higher in VAC–LC group than levels observed in VAC and control groups (P < 0.01). Levels of IgG2 were similar in VAC and VAC–LC groups but higher than in the control group (P < 0.01). When tested in in vitro cultures of B. bovis, sera from VAC–LC group significantly inhibited parasite growth as compared with the sera of the other two groups. It is suggested that the efficiency improvement of VAC, in part, is due to the L. casei boost of IgG1 over IgG2 antibodies to B. bovis and B. bigemina when the bacteria is co-inoculated with this vaccine.

An attenuated live vaccine containing Babesia bovis and B. bigemina cultured in vitro with a serum-free medium was assessed for its clinical protection conferred of naive cattle, under natural tick-challenge in a high endemicity zone to Babesia spp. Three groups of six animals were treated as follows: group I (GI) received a vaccine derived from parasites cultured with a free-serum medium; group II (GII) were immunized with the standard vaccine, with parasites cultured in a medium supplemented with 40% (v/v) bovine serum; and a control group (GIII) inoculated with non-infected bovine erythrocytes. Inocula were administered by IM route. Experimental animals were kept during 23days after vaccination in a cattle farm free of ticks and Babesia spp. Thereafter, cattle were moved to a high endemicity farm for natural exposure to Babesia spp. transmitted by Rhipicephalus microplus ticks. Protection against clinical babesiosis was observed in bovines belonging to GI (100%) and GII (83.33%), while the control animals (GIII) were not protected, and showed severe clinical signs, closely related to babesiosis, were observed for at least three consecutive days during the challenge. These were fever, anemia, which were measured simultaneously, and circulating parasites were detected by optic light microscopy. All cattle showed B. bovis and B. bigemina in stained blood films during the challenge; B. bovis antibody titers were higher than those to B. bigemina in GI and GII, and lower titers were determined in GIII. The protective capacity of the vaccine derived from B. bovis and B. bigemina cultured in vitro in a serum-free medium was demonstrated.

This study reports the effect of putrescine addition, either alone or in combination with insulin, transferrin and selenite (ITS), to serum-free Advanced DMEM/F12 (A-DMEM/F12) medium, on the in vitro culture of Babesia bovis and using a perfusion bioreactor to improve efficiency of the process. A B. bovis strain previously adapted to proliferate in serum-free medium (Bbovis-SF) was evaluated using eight increasing concentrations of putrescine. The percentage of parasitized erythrocytes (PPE) obtained from cultures supplemented with 0.101 mg/L was 6.23% compared with 2.3% for control cultures with M199 with Earle's salts (M199) and 40% serum. The combination of putrescine (0.101 mg/L) and a mixture of ITS (2000, 1100, and 1.34 mg/L, respectively) (Pu-ITS), in A-DMEM/F12 culture medium without serum yielded a maximum PPE of 17.26% compared to 2.58% in the control medium. This new formulation of culture medium, together with the use of a hollow-fiber perfusion bioreactor system (HFPBS), caused a substantial increase in the proliferation of B. bovis, yielding a maximum cumulative PPE of 118.8% after five days, compared to 58.6% in cultures treated with control medium M199 and 40% serum. We concluded that the addition of the ITS mixture and putrescine to the culture medium stimulated the proliferation of B. bovis in vitro. This new medium formulation, used in a HFPBS culture system, can be an effective, automated-prone system that can induce massive proliferation of B. bovis for use as a source of parasite antigens and immunogens.

Para evaluar la transmisión por garrapatas Rhipicephalus microplus (R. microplus) de una clona atenuada de Babesia bovis (BOR) y una cepa atenuada de Babesia bigemina (BIS), doce bovinos se dividieron en cuatro grupos e infestados de forma escalonada con larvas de R. microplus libres de Babesia spp. Un becerro de cada grupo se inoculó con 1x108 eritrocitos infectados (EI) con BIS, BOR, y cepas virulentas de B. bigemina y B. bovis, respectivamente. Se realizaron dos inoculaciones seriadas adicionales (pases/jeringa) y se colectaron hembras R. microplus cuya repleción coincidió con presencia de EI en los bovinos inoculados, y cuya progenie fue utilizada para infestar un grupo de bovinos receptores (pases/garrapata). Los tres pases sucesivos por jeringa evidenciaron EI en los bovinos que recibieron las cepas atenuadas y virulentas de B. bigemina y B. bovis. Se identificaron quinetos de Babesia en garrapatas alimentadas sobre bovinos infectados con cepas virulentas de B. bigemina y B. bovis. No se identificaron quinetos en garrapatas alimentadas sobre bovinos inoculados con cepas atenuadas. Todos los receptores infestados con progenie de garrapatas alimentadas sobre bovinos infectados con cepas virulentas, resultaron positivos a Babesia. Contrariamente, los receptores de garrapatas derivadas de bovinos inoculados con cepas atenuadas resultaron negativos, excepto por los infestados con garrapatas derivadas del tercer pase realizado con BIS y BOR. Las cepas atenuadas podrían conferir un margen de seguridad mayor como inmunógenos, al no ser transmitidas por R. microplus y no revertir a la virulencia al menos después de dos pases sucesivos en bovinos.

Se evaluó la seropositividad a Neospora caninum mediante ensayo inmunoenzimático (ELISA) y se de- tectó el ADN por PCR anidada con iniciadores externos Np 21-4 e internos Np 9-10 en leucocitos de vacas del sistema de producción de leche en pequeña escala en Amecameca, Estado de México. Se estudió un hato con 34 hembras adultas realizando el seguimiento con muestreos sanguíneos durante cinco meses; también, se analizaron dos muestras de encéfalo de fetos abortados y se constató la secuencia de los amplicones en el Genbank. La concordancia entre técnicas fue comparada mediante la prueba Kappa. La seroprevalencia por ELISA fue de 85.3 %; y se detectó ADN del parásito en 89.4 % de las vacas. Una muestra de encéfalo fue positiva. La similitud de los amplicones osciló entre 91 y 96 %, el índice Kappa fue de 0.41. El empleo de leucocitos aumenta la probabilidad de ampli car ADN de N. caninum.

The effect of Lactobacillus casei on INIFAP's mixed vaccine against bovine babesiosis (VAC) was assessed in bovines in an endemic babesiosis area. It was previously reported that L. casei increases the efficiency of the Mexican mixed vaccine against bovine babesiosis under controlled conditions. The results of the present study demonstrated the effectiveness of simultaneous vaccination of bovines with L. casei and the mixed vaccine against bovine babesiosis in eliciting a protective immune response under extreme conditions in the field. Twenty Babesia spp free bovines were allocated into three groups: un-vaccinated (Control, n = 9), vaccinated with VAC (n = 5), and vaccinated simultaneously with VAC and Lactobacillus casei (LC-VAC, n = 6). All animals were kept in a tick and Babesia spp free field at Coatepec, Veracruz during 24 days before moving them to Paso delToro, Veracruz, for a natural exposition to Babesia spp transmitted by Riphicephalus (Boophilus) microplus ticks. Protection against Babesia spp was observed in bovines belonging to VAC and LC-VAC groups, while control animals showed severe clinical babesiosis. Bovines in VAC-LC group showed less clinical signs between days 12-16 after challenge as compared with animals in VAC group. All bovines showed both Babesia spp after challenge. Levels of IgG anti-Babesia in animals from both vaccinated groups, determined by indirect immunofluorescence test, always were higher to Babesia bovis than to B. bigemina after vaccination and challenge. It was demonstrated the efficiency of simultaneous vaccination of bovines with VAC and L. casei, in eliciting a better protective immune response against naturally transmitted Babesia spp under extreme field conditions.

"En este estudio se realizó el análisis de Etiquetas de Secuencias Expresadas (EST) obtenidas a partir de 2208 clonas de Escherichia coli, con plásmidos recombinantes conteniendo insertos de cDNA de Babesia bigemina. Las secuencias se analizaron mediante búsqueda de homología en las bases de datos de genes. El análisis de homología en secuencia permitió identificar 470 clonas (agrupadas en 267 clusters) conteniendo EST con similitud de secuencia estadísticamente no significativa con algún gen de Babesia spp o de otro organismo Apicomplexa, sugiriendo la presencia de genes nuevos de B. bigemina; Se identificaron 21 clonas con EST correspondientes a 6 secuencias de genes previamente reportados para B. bigemina; además de 1285 clonas (conformando 159 clusters de genes distintos) de identidad significativa con proteínas hipotéticas o correspondientes a genes ya reportados en el genoma secuenciado de Babesia bovis; 32 clonas con EST homólogas a 16 genes distintos de Theileria spp; 51 clonas (26 genes distintos) con similitud en secuencia a genes de Plasmodium spp; 25 clonas con EST de moderada similitud con 13 genes distintos genes de Toxoplasma gondii; y 4 clonas con EST de mayor identidad con 4 genes diferentes de Cryptosporidium spp. Los resultados obtenidos permiten elaborar una base de datos sobre EST del estadio intraeritrocítico de Babesia bigemina, información básica esencial para la caracterización molecular del parásito, que permite llevar a cabo la identificación y regulación de nuevas regiones génicas codificadoras y, eventualmente el establecimiento de nuevas estrategias de control de la babesiosis bovina causada por B. bigemina."