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Agradecimentos: This study was supported by São Paulo Research Foundation (FAPESP), Proc. 08/52641-1, by the National Council for Scientific and Technological Development (CNPq), Proc. 130628/2008-5, and by CAPES. This work is part of the MSc thesis that was presented by RWAS to the University of Campinas, UNICAMP, 2010 Abstract: Alves Souza, RW, Aguiar, AF, Vechetti-Júnior, IJ, Piedade, WP, Rocha Campos, GE, and Dal-Pai-Silva, M. Resistance training with excessive training load and insufficient recovery alters skeletal muscle mass–related protein expression. J Strength Cond Res 28(8): 2338–2345, 2014—The aim of this study was to investigate the effects of a resistance training program with excessive training load and insufficient recovery time between bouts on muscle hypertrophy- and atrophy-related protein expression. Male Wistar rats were randomly assigned to either a trained (TR, N = 9) or a sedentary (SE, N = 9) group. The TR group was subjected to a 12-week resistance training program with excessive training load and insufficient recovery between bouts that was designed to induce plantaris muscle atrophy. After the 12-week experiment, the plantaris muscle was collected to analyze the cross-sectional area (CSA) of the muscle fibers, and MAFbx, MyoD, myogenin, and IGF-I protein expression (Western blot). The CSA was reduced significantly (-17%, p = 0.05) in the TR group compared with the SE group. Reciprocally, there was a significant (p = 0.05) 20% increase in MAFbx protein expression, whereas the MyoD (-27%), myogenin (-29%), and IGF-I (-43%) protein levels decreased significantly (p = 0.05) in the TR group compared with the SE group. In conclusion, our data indicated that muscle atrophy induced by resistance training with excessive training load and insufficient recovery was associated with upregulation of the MAFbx catabolic protein and downregulation of the MyoD, myogenin, and IGF-I anabolic proteins. These findings suggest that quantitative analysis of these proteins can be important and complementary with other biochemical markers to confirm a possible overtraining diagnosis CONSELHO NACIONAL DE DESENVOLVIMENTO CIENTÍFICO E TECNOLÓGICO - CNPQ COORDENAÇÃO DE APERFEIÇOAMENTO DE PESSOAL DE NÍVEL SUPERIOR - CAPES FUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA DO ESTADO DE SÃO PAULO - FAPESP Fechado

The aim of the present study was to evaluate the influence of different doses of nandrolone decanoate (ND) associated with Strength Training (ST) on the phenotype of fibers and cross-sectional area (CSA) of the extensor digitorum longus (EDL) in Wistar rats. The animals were divided into seven groups: control (CG) and the groups according to the dose of ND administered (0,1, 1, 2, 5, 10 e 20 mg/kg). The ST consisted of water jumping with loads of 50-70% of their body mass, three times per week during five weeks. The association of ST with ND promoted a modulatory role on the muscle fiber types. There was a hypertrophy of fast twitch fibers (type II) as compared with slow twitch (type I). In conclusion, although the association of ST with ND increased muscle CSA and modified fiber phenotype, there was no additional effect of higher doses. O presente estudo avaliou a influência de diferentes doses de decanoato de nandrolona (DN) associado ao Treinamento de Força (TF) sobre o fenótipo de fibras e área de secção transversa (AST) do músculo extensor longo dos dedos (EDL) em ratos "Wistar". Os animais foram divididos em sete grupos: controle (GC) e grupos de acordo com a concentração de DN (0,1, 1, 2, 5, 10 e 20 mg/kg) administrada intramuscular 3 vezes/semana. O TF consistiu de saltos em meio líquido (carga 50-70% do peso corporal) 3x/semana, durante cinco semanas. A associação do TF e DN promoveu ação modulatória sobre os tipos de fibras. Houve hipertrofia das fibras de contração rápida (tipo II) em comparação com as fibras de contração lenta (tipo I). Em conclusão, apesar da associação do TF com DN aumentar a AST muscular e alterar o fenótipo das fibras, não houve efeito gradual das doses mais altas.

Skeletal muscles respond to several stimuli changing their phenotype. Muscular fibers adaptation capability is related to the presence of several myosin heavy chains (MHC). These express four types of pure fibers: I, IIA, IID and IIB containing MHCI, IIa, IId and IIb, respectively. Among pure fibers, there are hybrid fibers, which can express two or more types of myosins. In this study, types of fibers constituting male Wistar rats semitendinous and their myosin heavy chains, as well as influence of intermittent training on hypertrophy of these fibers have been checked through MATPase histochemical technique and electrophoretic proteins separation. All types of pure and hybrid muscular fiber have been found, however the fibers of the types IIA, IID and IIB were predominant, featuring muscle as a fast-contracting one. Training has promoted muscular fibers transition with a significant increase of fibers of IC, IIAD and IIDB type. A cross-section increase of fibers of IIDB and IIB type has also been noticed. In summary, semitendinous muscle is essentially constituted by fast-contracting fibers and training could promote transition and hypertrophy of these fast fibers. Los músculos esqueléticos responden a diversos estímulos cambiando su fenotipo. La capacidad de adaptación de las fibras musculares está relacionada con la presencia de diversas miosinas de cadena pesada (MHC). Estas miosinas expresan cuatro tipos de fibras puras: I, IIA, IID, IIB, que contienen MHCI IIa IId IIb, respectivamente. Entre las fibras puras hay fibras híbridas, las cuales pueden expresar dos o más tipos de miosinas. En este trabajo, se observaron los tipos de fibras y las cadenas pesadas de miosinas del músculo semitendinoso en ratas Wistar macho, así como también, la influencia del entrenamiento intermitente en la hipertrofia de aquellas fibras, a través de la técnica histoquímica de mATPasa y separación eletroforética de proteínas. Todos los tipos de fibras musculares puras e híbridas fueron encontradas, siendo las fibras de tipo IIA IID y IIB predominantes, por ser un músculo de contracción rápida. El entrenamiento promovió la transición de las fibras musculares con un aumento significativo de las fibras del tipo IC, IIAD y IIDB. En una sección transversal, un incremento de fibras del tipo IIDB y IIB también fue reportada. En resumen, el músculo semitendinoso está compuesto esencialmente por fibras de contracción rápida y el entrenamiento puede promover la transición e hipertrofia de las fibras musculares rápidas.

O objetivo do presente estudo foi investigar as alterações no desempenho de força máxima e as adaptações morfológicas decorrentes do treinamento de força máxima e de potência muscular. Quarenta sujeitos foram randomicamente divididos nos grupos treino de força (TF; 178,7 ± 4,3 cm; 75,2 ± 7,3 kg; 22,5 ± 3,8 anos), treino de potência (TP; 177,0 ± 5,9 cm; 76,0 ± 8,9 kg; 24,2 ± 4,1 anos), e controle (C; 178,9 ± 11,0 cm; 74,1 ± 9,6 kg; 24,1 ± 2,7 anos). Os sujeitos dos grupos TF e TP foram submetidos a oito semanas de treinamento, com três sessões semanais. O grupo TF realizou agachamento com cargas entre 60 e 95% de 1 RM, enquanto o grupo TP realizou agachamento com cargas entre 30 e 60% de 1 RM, com a maior velocidade possível. Foi avaliado o ganho de força máxima no teste de 1 RM no agachamento e a área de secção transversa das fibras tipo I, tipo IIa e tipo IIb pré- e pós-treinamento. Os grupos TF e TP aumentaram a força máxima após o período de treinamento (p < 0,001), de maneira similar (p >; 0,05). Houve um efeito principal de tempo para o aumento da área de secção transversa para todos os tipos de fibras (p < 0,05). Concluindo, o TF e o TP produziram ganhos de força e de hipertrofia muscular semelhantes, após oito semanas de treinamento. The aim of this study was to investigate the changes in maximum strength and morphological adaptations after a strength and a power training programs. Forty subjects were randomly divided into a strength training group (TF; 178.7 ± 4.3 cm; 75.2 ± 7.3 kg; 22.5 ± 3.8 years), a power training group (TP; 177.0 ± 5.9 cm; 76.0 ± 8.9 kg; 24.2 ± 4.1 years), and a control group (C; 178.9 ± 11.0 cm; 74.1 ± 9.6 kg; 24.1 ± 2.7 years). Subjects in the TF and TP underwent an 8-week, three sessions per week, training program. The TF performed the squat exercise with loads from 60 to 95% of the squat 1 RM, while the TP used loads from 30 to 60% of 1 RM, as fast as possible. Maximum strength and type I, type IIa, and type IIb cross sectional area were evaluated before and after the training programs. TF and TP increased maximum strength from pre- to post-training (p < 0.001), but there were no difference between them (p >; 0.05). There was a main time effect for muscle cross sectional area for all fiber types (p < 0.05). In conclusion, the TF and the TP produced similar strength gains and muscle fiber hypertrophy after an 8-week training period.

Orientador: Maria Alice da Cruz-Hofling Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A veratrina é o extrato comercial obtido do Schoenocaulon officinale (Liliaceae), planta nativa da América do Sul e Central, que ativa os canais de sódio-voltagem dependentes, induzindo despolarização persistente e aumento da permeabilidade aos íons sódio em fibras musculares ou nervosas. O objetivo do presente trabalho foi investigar os efeitos da veratrina sobre o músculo esquelético de camundongos e peixes. A expressão fenotípica das fibras oxidativas, oxidativa-glicolíticas e glicolíticas no músculo sóleo (de contração lenta, com fibras predominantemente oxidativas) e EDL (de contração rápida, com maioria de fibras glicolíticas) de camundongos, e do músculo lateral de tilápia foi examinada em vários intervalos de tempo após injeção intramuscular da veratrina. As alterações ultraestruturais nos músculos foram analisadas ao microscópio eletrônico de transmissão. Os efeitos da veratrina foram também examinados em mitocôndrias isoladas de músculo esquelético de camundongos e ratos, e em mitocôndrias de fígado de ratos. Nos camundongos, as fibras oxidativas e as fibras oxidativa-glicolíticas, ambas ricas em mitocôndrias, mostraram um decréscimo da atividade das enzimas oxidativas (NADH TR) após a veratrina. As fibras glicolíticas, com menor número de mitocôndrias foram menos sensíveis ao alcalóide. Já nas tilápias, foram as fibras oxidativas e as glicolíticas que apresentaram maior susceptibilidade ao dano metabólico sob ação do alcalóide. Com relação à atividade contrátil houve um significante decréscimo (P=O.OOl) no número de fibras tipo IIB e um aumento no número de fibras tipo I de camundongos após injeção do alcalóide no EDL. Ao contrário, no músculo sóleo houve um decréscimo nas fibras tipo I e IIA. Além disso, houve o aparecimento de fibras indiferenciadas nos dois músculos ao longo dos 60 nrin do tratamento. Em contraposição, não houve alterações na atividade contrátil dos três tipos de fibras presentes no músculo lateral das tilápias ao longo dos 30 nrin após a adnrinistração do alcalóide, exceto pelo aparecimento de fibras indiferenciadas aos 60 min. As alterações mionecróticas produzidas pela veratrina incluíram dilatação das cisternas ternrinais do retículo sarcoplasmático, hipercontração de miofibrilas, desorganização de sarcômeros, dissociação e/ou ruptura de miofilamentos e dano mitocondrial. Estas alterações se diferenciaram quanto à gravidade e ao tempo de aparecimento nos diferentes músculos. Por exemplo, a dilatação das cisternas do retículo sarcoplasmático ocorreu mais precocemente e foi mais evidenciada nas fibras musculares do EDL do que no sóleo, ao passo que foram sutis nas fibras das tilápias. As alterações mitocondriais entretanto, foram mais precoces e proenrinentes no sóleo do que no EDL. Os efeitos da veratrina nas mitocôndrias isoladas mostraram que o alcalóide desacopla a oxidação fosforilativa em músculos esqueléticos de camundongos e ratos, devido a um aumento na transição da permeabilidade da membrana interna a protóns, de modo não específico. Diferentemente, a atividade respiratória nas mitocôndrias isoladas de figado foi inibida após a adnrinistração da veratrina. Nós concluímos que a interação da veratrina com as fibras musculares é espécie específica, músculo-específica e tipo de fibra específica, e que a interação da veratrina com as mitocôndrias é tecido(órgão )-específica. As alterações mionecróticas induzidas pela 11- veratrina foram atribuídas ao maior influxo de íons sódio e de água para o interior das células, já que estes efeitos foram antagonizados pela tetrodotoxina, um bloqueador de canais de sódio. Entretanto, não podemos descartar a possibilidade de que outros mecanismos, tais como a mobilização de Ca2+ das cisternas do retículo sarcoplasmático ou de mitocôndrias e/ou a penetração da toxina para o interior das células possam estar envolvidos Abstract: Veratrine, a commercial extract from the South and Central America plant Schoenocaulon officinale (Liliaceae), activates voltage-dependent Na + channels to produce persistent depolarization and an increase in sodium ion penneability in muscle fibers or nerves. The aim of this study was to investigate the effects of the veratrine aIkaloid on skeletal muscle of mice and fish. The phenotypic expression of oxidative, oxidative glycolytic and glycolytic fibers in soleus muscle (slow-twitch, with predominant1y oxidative fibers) and EDL muscle (fast-twitch, with predominant1y glycolytic fibers) of mice, and lateral muscle of tilapia were examined at various times afier intramuscular injection of veratrine. The ultrastructural changes in the muscles were analyzed by transmission electron microscoy. The veratrine effects were also examined in isolated mitochondria from mice and rats skeletal muscle, and in isolated rat liver mitochondria. In mice, oxidative and oxidative-glycolytic fibers, which are rich in mitochondria, showed decreased oxidative enzyme activity (NADH-TR reaction) afier veratrine. Glycolytic fibers, which have fewer number of mitochondria, were less sensitive to the aIkaloid. However, the oxida tive and glycolytic fibers of tilapia were more susceptible to damage by veratrine. There was a significant decrease (P=0.001) in the number oftype IIB fibers and an increase in the number of type I fibers in EDL muscle of mice (m-ATPase reaction) afier aIkaloid injection. In contrast, there was a decrease in type I and lIA fibers of the soleus muscle. Moreover, undifferentiated fibers were present in both muscles throughout the 60 min treatment. Contrarily, there were not alterations in the contractile activity of the three types of fibers present in tilapia lateral muscle up to 30 min afier aIkaloid injection, but undifferentiated fibers were seen afier 60 minutes. The myonecrotic alterations produced by veratrine included swelling of the terminal cisternae sarcoplasmic reticulum, hypercontraction of myofibrils, disorganization of sarcomeres, dissociation and/or rupture of myofilaments and mitochondrial" damage. These alterations differed in gravity and duration in different muscles. Thus, swelling of the sarcoplasmic reticulum cisternae was earlier and more prominent in EDL muscle fibers than in the soleus, and was subtle in tilapia muscle fibers. The mitochondrial alterations though were earlier and more prominent in the soleus than in the EDL. The effects of veratrine in isolated mitochondria showed that the aIkaloid uncouples oxidative phosphorylation in mice and rats skeletal muscle due to an increase in unspecific permeability transition of the inner membrane to protons. Differently, the respiratory activity on isolated liver mitochondria was inhibited afier veratrine administration. We conclude that the interaction of veratrine with muscle fibers is species-specific, muscle-specific and fiber type-specific, and that the interaction of the veratrine with mitochondrial is tissue( organ)-specific. The veratrine induced-myonecrotic alterations were attributed to the higher influx ofNa+ ions and water into cells, since they were antagonized by tetrodotoxin, a Na+ channel blocker. However, the involvement of other mechanisms, such as the mobilization of calcium ions from sarcoplasmic reticulum cisternae or mitochondria, and/or the entry oftoxin into cells cannot be ruled out Mestrado Biologia Celular Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores : Lucia Pereira da Silva, Denise Vaz de Macedo Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O BN-Page ("Blue Native Polyacrylamide gel electrophoresis") é uma técnica desenvolvida para análise de proteínas de membrana. Associada à coloração histoquímica, essa técnica permite análise e caracterização dos complexos enzimáticos da cadeia de transporte de elétrons. A grande vantagem dessa técnica é a utilização de uma pequena quantidade de tecido (30mg) permitindo análise das atividades das enzimas acima especificadas, sem a necessidade do isolamento de mitocôndrias. Dessa forma, esse método pode ser utilizado no estudo de diversas alterações que podem ser induzidas por condições especiais, dentre as quais: o exercício físico, a DPOC e doenças que afetam a função mitocondrial (Parkinson, Alzheimer etc). O objetivo desse trabalho foi a padronização da técnica de BN-Page associada à coloração histoquímica específica dos complexos I e IV da cadeia de transporte de elétrons em músculo esquelético de rato. Os músculos utilizados foram o sóleo, o gastrocnêmio (porção vermelha e branca) e o semitendinoso. A atividade das enzimas foi medida através de densitometria óptica usando a banda referente ao complexo V isolado por eletroforese e corado com Coomassie Blue como padrão interno. Nossos resultados indicaram uma boa resolução dos géis e uma correlação ótima entre a atividade da enzima citrato sintas e (conhecida como marcador de quantidade de mitocôndria) e a área/intensidade da banda referente ao complexo V, indicando que essa também pode ser utilizada como marcador de conteúdo mitocondrial. A atividade do complexo I e IV dos músculos mais oxidativos (sóleo e gastrocnêmio vermelho) apresentou uma variação bem pequena e uma correlação linear com a área do complexo V. Já nos músculos mais glicolíticos houve maior variação na atividade de ambos complexos e sua correlação com o complexo V foi menor Abstract: BN-PAGE (Blue Native Polyacrylamide gel electrophoresis) is a technique developed for the analysis of membrane proteins. This technique added to the histochemical staining enables the analysis and characterization of the activity of the enzymatic complexes of the mitochondrial electron transport chain. A key advantage of this technique is the small quantity of tissue required (30 mg) for homogenate extraction, allowing the use of this analysis for tissues from different species, inc1uding humano This method can be used for protein defects characterization in mitochondrial myopaties such as Leber's disease, Parkinson and A1zheimer diseases among other pathologies such as COPD (chronic obstructive pulmonary disease) and biochemical adaptations induced by physical exercise. The aim of this work was the standardization of this technique using histochemical staining for Complexes I and N of the eletron-transport chain in four rat skeletal musdes (soleus, red and white gastrocnemius and semitendinosus). The enzyme activity was measured by optical density (Image master lD - Pharmacia Biotech) using the Blue stained complex V area obtained from BN-Page as an internal standard. Its good resolution and the good correlation between its areajintensity and citrate synthase activity indicates that complex V is a good quantitative marker of mithocondrial contento The activity of complex I and N of oxidative musc1es (soleus and red gastrocnemius) presented a narrow range of values and a dose linear correlation wtih complex V. On the other hand, the glycolytic musdes (white gastrocnemius and semitendinosus) presented a wide range in their enzyme activity of both complexes and had a little correlation Mestrado Bioquímica Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Maeli Dal Pai Silva Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Este estudo teve como objetivo avaliar a morfologia e o crescimento do tecido muscular estriado esquelético em larvas de tilápia do Nilo alimentadas com dietas suplementadas com lisina. Foram utilizados cinco tratamentos: quatro contendo níveis crescentes de suplementação do aminoácido lisina - grupo lisina (T1 = 0,0; T2= 1,1; T3= 1,7; T4= 4,0%) e um com dieta comercial (T5). Decorridos 30 dias, os peixes foram sacrificados e amostras de músculo foram retiradas e congeladas em n-hexano resfriado em nitrogênio líquido (-159°C). Cortes histológicos obtidos em criostato foram submetidos à coloração HE, às reações NADH- TR, mA TPase, após pré incubação ácida e alcalina e à reação imunohistoquímica PCNA (Antígeno Nuclear de Proliferação Celular). Os peixes que receberam dieta comercial (T5) obtiveram maior crescimento comparado aos peixes do grupo lisina (T1-T4). Não houve diferença no padrão morfolégico e histoquímico (NADH-TR e mATPase) das fibras musculares em todos os tratamentos analisados. A análise morfométrica (número, área miotomal de ,contagem e diâmetro das fibras musculares vermelhas e brancas) não apresentou diferença entre os tratamentos do grupo lisina. O tratamento com dieta comercial (T5) apresentou valores significativamente maiores nesses parâmetros. Em todos os tratamentos, o padrão de distribuição dos diâmetros das fibras nos compartimentos superficial (vermelho) e profundo (branco) foi muito variável: no grupo lisina, a freqüência das fibras vermelhas com diâmetro _ 8J.tm foi maior, enquanto que em T5 a freqüência das fibras vermelhas foi maior entre os diâmetros de 16 a 24J.tm. Em relação às fibras brancas, no grupo lisina, a maioria das fibras apresentou diâmetro entre 8 a 16J.tm, e em T5, a maioria das fibras apresentou diâmetro acima de 24J.tm. A proliferação celular foi mais intensa nos tratamentos do grupo lisina, predominando o crescimento hiperplásico em detrimento do crescimento hipertrófico. O crescimento muscular em T5 se deu pela associação dos processos hiperplásico e hipertrófico. Os resultados sugerem que o aminoácido lisina suplementado não foi utilizado na síntese de proteínas miofibrilares do tecido muscular da tilápia do Nilo no estágio analisado Mestrado Histologia Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Gerson Eduardo Rocha Campos Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Os músculos esqueléticos de mamíferos são compostos por diferentes tipos de fibras que podem alterar seu fenótipo em razão de fatores tais como a desnervação, reinervação, exercício fisico, envelhecimento, hormônios, etc. Assim sendo, o objetivo do trabalho foi analisar os possíveis efeitos da testosterona nos músculos Sóleo (SOL) e Extensor Longo dos Dedos (EDL) de ratos jovens e senis. Para isso, foram usados 20 ratos Wistar de 80 dias (10) e 1 ano de idade (10). Os animais foram divididos em 4 grupos: testosterona jovem (TJ, 6), testosterona senil (TS, 6), controle jovem (CJ, 4) e controle senil (CS, 4). Os grupos TJ e TS receberam 15 aplicações subcutâneas de cipionato de testosterona (5mg/kg) em dias alternados, enquanto os grupos controles receberam apenas o veículo. Após 30 dias, os animais foram sacrificados e tiveram seus músculos retirados e analisados pela técnica histoquímica da mATPase. Os dados obtidos foram submetidos aos testes ANOV A, Kruskal-Wallis e Post Hoc de Duncan com nível de significância de 5%. Os grupos TJ e TS apresentaram queda significativa de peso corpóreo sem alteração de peso relativo dos músculos. A testosterona não alterou significativamente a distribuição dos tipos de fibras musculares, mas apresentou tendência (p>0.05) à transição de fibras do tipo I para fibras dos tipos IIC, IIA e IIAD no músculo SOL e tendência ao aumento (p>0.05) das fibras do tipo IID, com diminuição (p>0.O5) das fibras do tipo IIB, no músculo EDL. Houve aumento da área de secção transversal das fibras do tipo I no músculo SOL do grupo TI No músculo EDL, houve aumento da área das fibras dos tipos I e IIAD do grupo TJ e diminuição da área das fibras do tipo I do grupo TS. Estes resultados revelam que a testosterona não causa alterações significativas na distribuição dos tipos de fibras em músculos esqueléticos de ratos, apenas a área de secção transversal de alguns tipos de fibras sofrem alterações Mestrado Anatomia Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Gerson Eduardo Rocha Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Os músculos esqueléticos em geral são constituídos por vários tipos de fibras que expressam diferentes isoformas de miosina (MHC). As miosinas dos tipos I, IIa, Iid/x e IIb estão presentes nas fibras puras dos tipos I, IIA, IID/X e IIB, respectivamente. Entre as fibras puras existem as fibras híbridas, que podem expressar duas ou mais isoformas de miosina. Nesse trabalho foi verificado, através da técnica histoquímica de mATPase e da técnica de separação eletroforética de proteínas, os tipos de fibras que compõe o músculo semitendinoso de ratos Wistar e as respectivas isoformas de miosina. Também foi avaliado como o treinamento intervalado pode influenciar na plasticidade dessas fibras. Os resultados mostraram que o músculo semitendinoso possui duas porções distintas, uma vermelha e outra branca. Apresenta todos os tipos de fibras puras, com predominância das fibras do tipo IIB, caracterizando-o como um músculo de contração rápida. Observou-se também a presença de fibras híbridas dos tipos IC, IIC, IIAD e IIDB. O treinamento promoveu alterações nas fibras musculares, em especial nas fibras do grupo II. Em conclusão, o fenótipo do músculo semitendinoso é de contração rápida e o treinamento intervalado foi capaz de promover aumento do número de fibras híbridas IC, IIAD e IIDB, bem como, aumento da secção transversal das fibras IIDB e IIB Abstract: In general, the skeletal muscles are formed to several muscle fiber types that are able to express different kinds of myosin heavy chain (MHC) isoforms. The MHCI, IIa, IId and IIb will establish the pure muscle fibers of the type I, IIA, IID and IIB, respectively and, among them there are the hybrid fibers that can express two or more MHC types. In this work was verified through mATPase histochemical and eletophoretic separation techniques which myosin isoforms and hybrids make the semitendinous muscle of the Wistar rats and also how intermittent training influence in the plasticity of these fibers. It was seen that this muscle has two distinct portions, one red portion and one white portion and that was meeting all pure fibers, where the IIB type was seen in large number, characterized the semitendinous how muscle of fast twitch. There was also observed the presence of the IC, IIC, IIAD, IIDB hybrid fibers. The training promoted changes in the muscle fibers, in special in the hybrid fibers of the group II and promoted increase in the cross-sectional area of some glycolytic fibers (IIDB and IIB). In conclusion, the phenotype of the semitendinous muscle is formed in great part by fast-twitch fibers and the training was able to promote changes in the MHC isoforms present in these muscle fibers Mestrado Anatomia Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador : Gerson Eduardo Rocha Campos Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Os músculos dos camundongos da linhagem C57BL6J são pouco conhecidos, principalmente no que diz respeito às fibras híbridas. Assim sendo, procurou-se, no presente trabalho, delinear a composição do músculo sóleo (SOL), extensor longo dos dedos (EDL), tibial anterior (TA) e gastrocnêmio (GAS) desses animais em camundongos da linhagem C57BL6J. Utilizou-se a técnica histoquímica da mATPase para determinação dos tipos de fibras musculares em conjunto com a técnica bioquímica de eletroforese para identificação das isoformas de mio sina. O músculo SOL apresentou fibras do tipo I (38.42%), IIA (37.90%), IIAD (18.72%) e IID (4.94%). No EDL observou-se fibras do tipo I (0.67%), IC/IIC (2.98%), IIA (0.64%), IIAD (8.03%), IID (1.07%), IIDB (24.83%) e IIB (61.74%). O TA mostrou predominância de fibras dos tipos IIB (58.54%) e IIDB (31.26%), seguido de fibras dos tipos IIAD (4.86%), IID (2.44%), lIA (1.71%), I (0.71%) e IC/IIC (0.46%). No GAS foram delineadas fibras dos tipos IIE (55.08%), IIDB (18.41%), TID (2.78%), IIAD (12.36%), lIA (5.56%), ICIIC (0.05%) e I (5.74%). Concluiu-se neste trabalho que o músculo SOL de camundongos da linhagem C57BL6J apresenta predominância de fibras dos tipos I e lIA, devido à sua função de músculo postural. Nos músculos, EDL, TA e GAS, a maioria de fibras são do tipo IIE. A possível explicação para a maior ocorrência de fibras IIE, de contração rápida no EDL TA e GAS, deve-se ao reduzido tamanho desses animais, o que permite, e em algumas situações exige, movimentos rápidos. Por isso há predominância de fibras de contração rápida nestes músculos Abstract: The muscles of C57BL6J mice are little known, especially with respect to hybrid fibers. Thus, in the present study we present the composition of the (SOL), extensor digitorum longus (EDL), tibialis anterior (TA) and gastrocnemius (GAS) muscles of these animals.. The mATPase histochemical analysis was used for typing muscle fibers, and the biochemical e1ectophoresis technique for myosin heavy chain isoforms identification. The SOL muscles presented fibers of types I (38.42%), IIA (37.9%), IIAD (18.72%) and 1m (4.95%) and the EDL presented fibers of types I (0.59%), IC/IIC (2.63%), IIA (0.57%), IIAD (7.09%), IID (0.96%), 1mB (21.92%), and 1m (66.23%). The TA musc1e showed a predominance of fibers of types 1m (58.54%) and 1mB (31.26%), followed by fibers of types IIAD (4.86%), 1m (2.44%), IIA (1.71%), I (0.71%), and IC/IIC (0.46%). The GAS musc1e showed fibers of types 1m (55.08%), 1mB (18.41%), IID (2.78%), IIAD (12.36%), IIA (5.56%), IC/IIC (0.05%), and I (5.74%). Nevertheless, in the present study we conclude that the SOL muscle of C57BL6J mice had predomination of I e IIA type fibers. In EDL, TA and GAS muscle, the great number of fiber are classified as type 1m. The explanation for major type 1m fast fiber in EDL, TA and GAS muscle, is the little size of mice, that have fast movements Mestrado Anatomia Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Gerson Eduardo Rocha Campos Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O resumo poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: Not informed Mestrado Anatomia Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Ilma Aparecida Paschoal, Gerson Eduardo Rocha Campos Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: Os músculos esqueléticos constituem um dos tecidos no organismo de maior plasticidade e capacidade de adaptação a situações adversas. Um grande número de estímulos é capaz de produzir alterações na massa e na composição dos músculos, com resultados não necessariamente concordantes nas diferentes regiões do esqueleto. Estudos em indivíduos com DPOC demonstraram que os músculos esqueléticos destes pacientes apresentam alterações bioquímicas e estruturais que indicam baixa função aeróbica. Diversos fatores estão envolvidos na gênese desta disfunção muscular, como inatividade física, hipoxemia, perda de peso, inflamação crônica, envelhecimento e uso de algumas drogas, como corticosteróides. O objetivo deste trabalho foi avaliar a distribuição dos tipos de fibras musculares e de seu tamanho em biópsias de músculo esquelético de membros superiores de indivíduos portadores de DPOC grave e insuficiência respiratória crônica estável -com pressão parcial de oxigênio no sangue arterial (pa02) ? 55 mmHg -, e com índice de massa corpórea (IMC) conservado. Foram realizadas biópsias do bíceps braquial de 08 pacientes e 12 controles. Por meio de análise histoquímica (técnica de ATPase) foram identificados e contados os diversos tipos de fibras (1, 2a e 2b) e a seguir feita a morfometria destas fibras, apenas nos homens. No grupo dos pacientes, a média de idade foi de 54,8 anos, a média de!MC de 25,9 kglm2, a média de VEF1: 34,7 % do previsto, a média de Pa02 de 49,7 mmHg. Houve diferença na distribuição entre as fibras 2a e 2b (p

Orientador: Maria Julia Marques Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: As junções neuromusculares (JNM) dos vertebrados, inicialmente polinervadas, tomam-se monoinervadas em um processo denominado eliminação sináptica. Os mecanismos envolvidos neste processo ainda são pouco conhecidos, sendo uma das possibilidades a de que mudanças no nível das moléculas da membrana pós-sináptica poderiam levar a remoção dos terminais nervosos em excesso. Neste sentido, a JNM distrófica se toma um modelo interessante para o estudo dos mecanismos envolvidos na eliminação sináptica, uma vez que as fibras distróficas não expressam distrofina e apresentam redução de moléculas do complexo distrofina-glicoproteina, complexo este que faz parte do citoesqueleto pós-sináptico e que possivelmente está envolvido na estabilização dos receptores de acetilcolina (AChRs). Desta forma, no presente trabalho verificamos se a eliminação sináptica e a distribuição dos receptores de acetilcolina, observados durante o desenvolvimento pós-natal, estão alterados na fibra deficiente de distrofina. Os AChRs e os terminais nervosos do músculo estemomastóide de camundongos mdx e controle (C57BL/1O) foram marcados, respectivamente, com rodamina-a.-bungarotoxina e anticorpo anti-neurofilamento. Através da microscopia confocal, observamos que 7 dias após o nascimento a maioria das JNMs do camundongo mdx se encontravam monoinervadas (86,7% - n=200), enquanto a mesma observação foi feita em 41,4% no controle (n=200). Consistente com este fato, no mesmo período, a presença de placas perfuradas é mais fTequente no mdx (18,6%) do que no controle (7,3%). No final da segunda semana pósnatal, todas as JNMs se encontravam monoinervadas (100% mdx e 94,7% controle, n=200 para cada grupo) e os AChRs apresentavam o padrão de distribuição adulto. No camundongo mdx, a presença de AChRs distribuídos em pequenas ilhas foi observada no período de 21 dias pós-natal em 13,3% das JNM, indicando a presença de fibras musculares regeneradas. Nossos resultados demonstram que a eliminação sináptica ocorre mais cedo nas fibras musculares distróficas quando comparada ao de um animal controle, sugerindo assim que a estabilização da fibra muscular pela distrofina ou pelo complexo distrofinaglicoproteínas normal é necessário para o curso da eliminação sináptica em tempo normal Abstract: The vertebrate neuromuscular junction goes trom multiple to monoinervated during early postnatal life in a process calIed synapse elimination. The mechanisms underlying this process are unknown but one possibility would be that changes at in the molecular level in the postsynaptic cell lead to the removal of the overlying nerve terminal. The mdx mice show a deficiency of dystrophin and associated proteins, which are part of the postsynaptic cytoskeleton and possibly involved in acetylcholine receptors (AChRs) stabilization. In the study, we used rhodamine-a-bungarotoxin and anti-neurofilament-IgG-FITC to stain AChRs and nerve terminals of the sternomastoid muscle, during early postnatal development of mdx and control C57BL/lO mice. Using fluorescence confocal microscopy, we observed that 7 days after birth, 86,7% of the mdx endplates were monoinervated (n=200) while the same observation was made in 41,4% of the controls (n=200). Consistent with this is the fact that, at this time, perforated plaques were seen more trequent1y in mdx (18,6%) than controls (7,3%). By the end of the second postnatal week, all the endplates were monoinervated (100% mdx and 94,7% controls, n=200 for each group) and AchRs had attained the branched-pattern distribution of adults. In mdx mice, breaking down of receptors into islands, as observed in adult mdx, were seen 21 days after birth in 13,3% of the junctions, indicating the presence of regenerated muscle fibers. These results show that synapse elimination takes place earlier in dystrophin-deficient muscle fibers of the mdx mice, suggesting that stabilization of muscle fiber by dystrophin or a nonnal cytoskeleton complex is required for the nonnal time course of synapse elimination Doutorado Anatomia Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Jose Angelo Camilli Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Procedimentos que permitem a reconstrução e acelerem o reparo de fraturas ósseas são de grande importância clínica. Sendo assim, considerando as vantagens oferecidas pelos biomateriais como substitutos aos enxertos ósseos autógenos e os efeitos positivos do laser de baixa energia no processo de regeneração óssea, as propostas do presente trabalho foram estudar a contribuição do laser de baixa energia no processo de reconstrução de falhas ósseas tratadas com enxerto ósseo autógeno, assim como, analisar "in vitro" e "in vivo" a eficácia da cerâmica de fosfato de cálcio como possível substituta aos enxertos ósseos autógenos. O resultado da laserterapia na dosagem estabelecida em nosso trabalho demonstrou que a mesma acelerou a osteogênese na área de enxertia somente nos primeiros períodos do tratamento e esse efeito foi dose dependente.Enquanto isso, o estudo "in vivo" da biocerâmica demonstrou que o implante foi tão eficiente quanto o enxerto ósseo autógeno no processo de reconstrução da falha óssea. No estudo "in vitro", os osteoblastos humanos apresentaram boa interação com a cerâmica, apresentando maior preferência pelas superfícies mais irregulares do material Abstract: Procedures that allow the reconstruction and speed up the bone repair are of great clinical importance. Being thus, considering the advantages offered for the biomaterials as substitute to the autogenous bone graft and the positive effect of the low-power-laser in the process bone regeneration, the proposals of the present work had been to study the contribution of the low-power-laser in the process of reconstruction of bone defect treated with autogenous bone graft, as well as, to analyze "in vitro" and "in vivo" the efficiency of calcium phosphate ceramic as possible substitute to the autogenous bone graft. The result demonstrated that laser irradiation at the grafted site stimulated osteogenesis during the initial stages of the healing process in na skull defect and this effect was dose dependent. While this, the "in vivo" study of the bioceramic demonstrated that the implantation was so efficient how much autogenous graft in the bone reconstruction process. In the study "in vitro", the human osteoblast had presented' good interaction with ceramics, presenting bigger preference for the surfaces most irregular of the material Doutorado Anatomia Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador : Lucia Pereira da Silva Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Embora níveis moderados de ERas e NO possam exercer importantes funções fisiológicas no tecido muscular, como regulação do fluxo sanguíneo, angiogênese e aumento da força de contração, pouco é conhecido a respeito da formação intracelular de ERas e NO durante a atividade muscular. Por outro lado, uma excessiva produção dessas espécies pode ser prejudicial ao nosso organismo, superando a capacidade do sistema de defesa antioxidante e conduzindo a um desequilibro no estado redox intracelular. Em nosso estudo, examinamos a formação intra e extracelular do NO e H202 em culturas de células, a formação extracelular do H202 em músculo esquelético de rato in vivo e a formação de O2. - em culturas de células e músculos isolados. Para realização deste estudo nós utilizamos as sondas fluorescentes DAF-2-DA (reativa ao NO), DCFH-DA (reativa ao H2O2) e fluoróforo nitróxido (reativa ao ). Nossos resultados in vitro usando culturas de células musculares mostraram que o H2O2 e NO são formados em grandes quantidades no meio intracelular, seguido de um grande efluxo para o espaço extracelular durante atividade muscular intensa (P < 0,05). Por outro lado, durante atividade muscular moderada a produção dessas espécies é mantida em níveis basais sem nenhuma alteração significativa na sua produção (P > 0,05). Os resultados in vitro utilizando cultura de célula e músculos sóleo e EDL isolados mostraram um alto efluxo do do meio intra para o meio extracelular dirante contrações intensas (P < 0,05). O músculo EDL apresentou um maior efluxo do quando comparado que o músculo sóleo (P < 0,05). Os resultados in vivo utilizando o DCFH em combinação com a técnica de microdiálise mostraram uma alta detecção de H2O2 no meio intersticial quando os valores de repouso foram comparados com os valores durante a atividade muscular intensa, sugerindo um alto efluxo dessa espécie do meio intra para o meio extracelular. Nossos resultados mostram que estas sondas fluorescentes utilizadas em nosso estudo são de grande sensibilidade e especificidade na detecção de ERas e NO em tecido muscular submetido a contrações. Em adição, nossos resultados sugerem que a atividade muscular intensa aumenta significativamente a produção de ERas e NO e que essas espécies produzidas intracelularmente são amplamente transportadas para o meio extracelular, processo que protege as células contra os possíveis ataques oxidativos intracelulares gerados por essas espécies Abstract: Although moderate levels of ROS and NO may exert important physiological functions in muscle tissue, such as regulation of blood flow, angiogenesis and contractile force, little is still known about ROS and NO formation in response to muscle activity. In addition, an excessive level of these species may be harmful as it may overcome the antioxidant capacity, leading to oxidative stress. In this study we examined intra- and extracellular H2O2 and NO formation during contractions in primary rat skeletal musc1e cell culture and isolated muscle. The fluorescent probes DCFH-DA/DCFH (2,7-DicWorofluoresceindiacetate/2,7-DicWorofluorescein) and DAF-2-DA/DAF-2 (4, 5-diamino fluorescein diacetate/4,5-diaminofluorescein) were used to detect H2O2 and NO, respectively. Intense electrical stimulation of musc1e cells increased the intra- and extracellular DCF fluorescence by 171% and 105% respectively, compared with control non-stimulated cells (P < 0.05). Addition of glutathione (GSH) or tiron prior to electrical stimulation inhibited the intracellular DCFH oxidation (P < 0.05), whereas addition of GSH-PX + GSH inhibited the extracellular DCFH oxidation (P < 0.05). Intense electrical stimulation also increased (P < 0.05) the intra- and extracellular DAF-2 fluorescence signal by 56% and 20%, respectively. Addition of W-nitro-L-arginine (L-NA) completely removed the intra- and extracellular DAF-2 fluorescent signal. In isolated musc1es intense estimulation increase superoxide release compared with control non-stimulated (P < 0.05). H202 detection in vivo through DCFH-BSA combined with microdia1ysis technique showed an significant increase on DCFH oxidation during intense contractions. GSH-PX antioxidant completely inhibited DCFH oxidation. The current results show that H2O2, NO and O-z are formed in skeletal musc1e cells during contractions. Our results also suggest that a rapid release of these species may constitute an important defense mechanism against the formation of intracellular 'OH and 'ONOO. Furthermore, our data show that DCFH and DAF-2 are suitable probes for the detection of ROS and NO both intra- and extra-cellulary in skeletal musc1e cell cultures Doutorado Fisiologia Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientadores: Humberto do Santo Neto, Maria Julia Marques Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A Distrofia muscular de Duchenne (DMD) é a forma mais comum e a mais devastadora das distrofias musculares. É causada pela mutação do gene responsável pela expressão da distrofina, uma proteína estrutural do sarcolema, a membrana celular das fibras musculares esqueléticas. A ausência dessa proteína leva a uma instabilidade sarcolemal que termina em necrose da fibra muscular. As fibras necróticas perdem a capacidade regenerativa fazendo com que o tecido muscular seja substituído por tecido fibroso. O comprometimento muscular inicia-se pelos membros inferiores e progride até atingir os músculos respiratórios, o que ocorre geralmente ao redor dos 20 anos de idade, quando os pacientes invariavelmente vão a óbito. Atualmente acredita-se que a cura efetiva da doença poderá ser feita com a terapia gênica que pode ser feita de duas formas. Uma delas consiste em fazer com que as fibras musculares já existentes passem a expressar distrofina e a outra em gerar novas fibras musculares que expressem distrofina. O sucesso dessas terapias depende do restabelecimento funcional das novas fibras musculares e das pré-existentes, cuja inervação deve ter sido perdida durante o momento em que sofreu o primeiro ciclo de degeneração. Por sua vez, a capacidade de reinervação depende exclusivamente da capacidade dos axônios gerarem brotamentos axonais. A simples presença de fibras musculares em degeneração e em regeneração deve atuar como fator estimulador de brotamentos axonais. Entretanto, dados da literatura mostram que em pacientes portadores de DMD, bem como em camundongos da linhagem mdx, o modelo experimental para o estudo da DMD, não ocorre brotamentos axonais. O objetivo deste trabalho foi examinar a capacidade de axônios de camundongos emitirem brotamentos axonais. Foram empregadas duas linhagens de camundongos, mdx e C57BL/10, cada uma delas foi examinada de duas formas: sem nenhum tratamento e com esmagamento do nervo que teve por objetivo induzir a emissão de brotamentos nervosos. Para tal, os animais foram anestesiados com injeção intraperitoneal de virbaxyl/ftancotar e o nervo para o músculo estemomastoideo esquerdo esmagado com pinça de relojoeiro. Oito dias após o esmagamento os animais foram anestesiados, perfundidos com paraformoldeido por via intracardíaca, e os músculos estemomastoídeos direito e esquerdo retirados para marcação dos receptores de acetilcolina e dos axônios pré-terminais e terminais. Isto foi realizado com o uso de a-bungarotoxina conjugada à rodamina e anticorpo monoclonal para filamentos nervosos, respectivamente. Os músculos foram examinados através da microscopia confocal de fluorescência. Nossas observações mostraram que em músculos de camundongos mdx, que não sofreram esmagamento do nervo, portanto que representa o que ocorre durante o curso normal da distrofia muscular, não houve aumento dos brotamentos axonais do tipo nodal, mas houve aumento significativo dos brotamentos extra e intraterminais, comparados aos camundongos C57BL/10. Por sua vez, quando estimulados pelo esmagamento do nervo, os brotamentos do tipo nodal e extraterminal, mas não aqueles intraterminais, estiveram presentes na mesma intensidade dos camundongos não distróficos. Essas observações permitem concluir que, embora durante o curso normal da doença não ocorra brotamento nodal, os axônios dos camundongos mdx são capazes de emitirem brotamentos extra e intraterminais. Considerando-se que a inervação de novas fibras musculares depende mais de brotamentos nodais, os quais podem propagar-se por maiores distâncias dentro de um mesmo músculo, é possível que as novas terapias de transplantes de mioblastos e de células tronco indiferenciadas apresentem menor possibilidade de sucesso que aquelas que consistem na transformação das fibras musculares pré-existentes, que não possuem distrofina em fibras distrofina positivas, já que sua inervação estaria garantida pela presença de brotamentos extraterminais e especialmente intraterminais Abstract: Duchenne Muscular Dystrophy (DMD) is characterized by deficiency of dystrophin, a component of the muscle fiber membrane. The absence of dystrophin leads to muscle fiber degeneration, resulting in progressive muscle weakness. Cell mediated therapy aimed to restore dystrophin expression by fusing transplanted cells into original dystrophic fibers or by forming new dystrophin positive fibers. Thus, the success of cell therapy depends, among other factors, on muscle fiber reinnervation, which in turn depends on the ability of host axons to sprout. It is accepted that sprouts are induced in the presence of degenerating and regenerating muscle fibers. Since muscle fiber degeneration-regeneration is observed in DMD, as well as in the mdx mice, the animal model of DMD, the frequency of sprouts would be expected to be higher in dystrophic than in normal muscles. However, no axonal sprouts have been observed in muscles of DMD and mdx mice. In the present, we investigated whether intramuscular nerve bundles and motor terminals of mdx mice keep their ability to sprout after a nerve crush lesion. The sternomastoid muscles of adult (5-6 months) mdx mice (n=5) and C57Bl/10 controls (n=5) had their acetylcholine receptors and nerve terminals labelled with rhodamine-alpha-bungarotoxin and anti-neurofilament-IGgfluorescein, respectively, for confocal microscopy observation. Additional mdx (n=5) and C57Bl/10 (n=5) had the nerve to the left STN muscle crushed and 8 days later AChRs and nerve terminals were labelled and viewed the same way. Nerve terminal distribution in the mdx was seen as thin filaments with bulbs at their tips, which were in apposition to fainter central areas in the islands of receptors, being suggested that they represent intra-terminal sprouts, seen in about 90% of the endplates viewed of normal and crushed mdx mice. In crushed-mdx mice, extra-terminal sprouts were seen in 73%, while in crushed controls sprouts were present in about 41 % of the endplates. In conclusion, these findings demonstrate that mdx nerve terminals are able to sprout when a second stimulus, such as nerve lesion (in addition to muscle degeneration-regeneration) is present and this response can be of major relevance to the success of cell mediated-therapy to treat DMD Mestrado Anatomia Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Maeli Dal Pai Silva Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Esse trabalho teve como objetivo avaliar a influência da variação da temperatura de incubação dos ovos sobre a morfologia e o crescimento do tecido muscular no pacu (Píaractus mesopotamícus) durante as fases iniciais do desenvolvimento. Os ovos do pacu foram incubados em três temperaturas: 25°C, 27°C e 29°C. Após cinco dias da eclosão as larvas foram transferidas para caixas individuais de cimento amianto (500L) abasteci das com água corrente em temperatura ambiente (25°C a 28°C). Na eclosão e com 5,25 e 60 dias exemplares de pacu foram sacrificados e amostras de músculo estriado esquelético foram congeladas em nitrogênio líquido, outras foram fixadas em paraformaldeído a 4% ou em glutaraldeído a 2,5% para análise morfológica, histoquímica, imunohistoquímica e morfométrica. Na eclosão observou-se uma monocamada de células colunares superficiais adjacente ao tegumento, envolvendo várias camadas de células com aspecto arredondado. A partir de 5 dias foram observadas duas populações distintas de fibras musculares distribuídas em compartimentos. O vermelho, localizado na região superficial, com fibras de metabolismo oxidativo e contração lenta e o branco, constituindo a maior parte da musculatura, formado por fibras com metabolismo glicolítico e contração rápida. Um compartimento intermediário foi evidenciado 25 dias após a eclosão juntamente com as zonas de proliferação celular no ápice da região dorsal. No decorrer do experimento observou-se um espessamento da massa muscular. Esse foi decorrente do aparecimento de novas fibras na zona de proliferação celular e entre as fibras das musculaturas vermelha, intermediária e branca. Fato melhor observado a partir de 25 dias da eclosão, sendo mais acentuado na temperatura de incubação de 29

Orientador: Humberto Santo Neto Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar morfometricamente a regeneração axonal em autoenxerto de lâmina basal muscular tratado com injeção intramuscular de cloridrato de lidocaína a 2% e estabelecer uma análise comparativa com a regeneração obtida através de autoenxerto de nervo. Para isto foram avaliados os diâmetros dos axônios mielínicos e das fibras nervosas regeneradas, além da espessura de suas respectivas bainhas de mielina. Ratos adultos tiveram o músculo sóleo direito exposto, recebendo injeção de 0,1 ml de cloridrato de lidocaína a 2%. Após 24 horas, o ventre muscular do sóleo foi retirado, sofrendo uma fina dissecção para confecção de um retalho de 5 mm de comprimento e espessura semelhante à do nervo isquiático. Em seguida, o nervo isquiático esquerdo foi seccionado e o retalho muscular implantado na fenda entre os cotos nervosos, com sutura epineural. Outro grupo de animais teve o nervo isquiático esquerdo exposto, seccionando-se um fragmento de 5 mm, que sofreu inversão de 1800 e foi imediatamente fixado aos cotos com sutura epineural. Um terceiro grupo teve o nervo isquiático seccionadoe mantido no leito, sem reconexão. O grupo controle consistiu de nervos isquiáticos de animais normais. Após 50 dias de sobrevida, o nervo isquiático esquerdo foi exposto, fixado "in situ" e dividido em 3 porções: coto proximal, coto distal e região do enxerto, que foram processadas para microscopia eletrônica, sendo que os axônios regenerados nos dois grupos experimentais (autotransplante de músculo e autotransplante de nervo) e grupo controle foram analisados histológica e morfometricamente. O grupo de regeneração espontânea não foi submetido a análise morfométrica em função da pobre regeneração axonal observada. Nossos resultados apontam que os axônios atingiram o coto distal em todos os animais dos dois grupos experimentais. A análise histológica mostrou não haver diferenças entre os axônios dos dois grupos no que diz respeito ao aspecto ultraestrutura!. Na região do enxerto a distribuição dos axônios era característica, formando minifascículos, sendo restabelecida a organização fascicular no coto dista!. A análise morfométrica mostrou não haver diferença significativa entre os dois grupos. Concluímos que o enxerto muscular tratado com cloridrato de lidocaína a 2% produziu um nível de maturação axonal semelhante àquele observado em autoenxerto de nervo Abstract: The aim of the present was to perform a morphometric study to comparatively evaluate axonal regeneration after muscle and nerve autografts. Adult rats had their right soleus muscles injected intracutaneously with 0,1 ml of 2% lidocaine hydrochloride. Twenty-four hours later the injected muscle was removed and a lidocaine muscle graft was obtained by trimming the muscle to a rectangular block of approximately 5.0 mm in length. The left sciatic nerve was exposed at the mid-thigh region and a segment removed so that a final 5.0 mm long gap was produced. The muscle graft was coaxially autografted to the epineurium between the proximal and distal nerve stumps. In another group the left sciatic nerve was exposed and a 5.0 mm fragment was removed, inverted in 180 degrees and immediately autografted to the epineurium. In a third group the sciatic nerve was cut and kept in position, without surgical repair. Sciatic nerves from non-operated rats were used as controls. Axonal regeneration was studied ultrastructurally and morph metrically 50 days after the insertion of muscle and nerve autografts. No ultrastructural differences were seen in regenerated axons after muscle or nerve autografts; typically, minifascicles were present in the graft and the fascicular organization was reestablished in the distal stump. Morphometric analyses showed no significant differences between the two groups. We conclude that the use of this model produced a level of maturation similar to that described in nerve autografts Doutorado Doutor em Biologia e Patologia Buco-Dental

Orientador: Maria Julia Marques Tese(mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O objetivo do presente trabalho foi investigar se fibras musculares regeneradas de camundongos normais apresentam alteração no padrão de distribuição dos receptores de acetilcolina (AChRs) e na expressão da óxido nítrico sintase neuronal (nNOS) e comparar os resultados obtidos com fibras regeneradas de camundongos mdx. Para tanto, a degeneração/regeneração foi induzida através de injeções de cloridrato de lidocaína no músculo esternomastóideo (STN) esquerdo de camundongos normais. O lado contralateral foi utilizado como controle. Após 21 dias os músculos foram retirados e marcados com rodamina-a-bungarotoxina para observação dos AChRs, com o anticorpo primário monoclonal anti-nNOS para observação da expressão da nNOS e montados para tluorêscencia. Foi adicionado ao meio de montagem o marcador de DNA nuclear DAPI o que possibilitou a observação dos núcleos celulares. Através da microscopia confocal de tluorêscencia observamos que a distribuição dos AChRs nas fibras regeneradas estava alterada em relação ao padrão das fibras do músculo controle. As fibras musculares regeneradas normais exibiram o mesmo padrão de distribuição dos AChRs observado em fibras regeneradas distróficas, ou seja, os braços juncionais estavam fragmentados, originando ilhas de receptores. Nossos resultados sugerem que a alteração no padrão de distribuição dos AChRs, que é observada no camundongo mdx, pode ser conseqüência apenas da degeneração/regeneração da fibra muscular e não devido a deficiência de distrofina. Quanto a nNOS, não houve alteração de sua expressão em fibras musculares regeneradas quando comparada com fibras do músculo controle. Isto sugere que a diminuição de sua expressão observada nos camundongos mdx pode ser atribuída a ausência de distrofina Abstract: The aim of the present investigation was to study whether normal regenerated muscle fibers show changes in the pattem of distribution of the acetylcholine receptors (AChRs) and in neuronal nitric oxide synthase (nNOS) expression. Degenerative-regenerative changes were experimentaly induced in normal muscle fibers of mouse left sternomastoid (STN) muscle by injecting lidocaine hydrochIoride. The contralateral side .served as a controI. 21 days after lidocaine injection, the STNs (right and left) were removed, labelled with rhodamin a-bungarotoxin for AChRs observation, with anti-nNOS for nNOS observation and mounted in special mouting media for fluorescence with DAPI, a DNA stain for nuclei. By using fluorescence confocal microscopy regenerated muscle fibers showed disrupted AChRs distribution when compared to controls. Normal regenerated fibers exhibited the same pattem of AChR distribution as seen in dystrophic regenerated fibers. Our results suggest that changes in AChRs distribution seen in mdx were probably a consequence of muscle fiber degeneration-regeneration, rather than a symptom of dystrophin deficiency. Conversely, there were no changes in nNOS expression in normal regenerated fibers when compared to normal fibers, suggesting that the decrease in nNOS expression reported for mdx mice might be attributed to the absence of dystrophin Mestrado Anatomia Doutor em Biologia Celular e Estrutural