Search

Hepatocellular carcinoma is one of the deadly cancers with a significant incidence worldwide. In cancer cells, aerobic glycolysis increases with the Warburg effect. Glucose transport across the cell membrane becomes important at this stage. It has been found that there is an increase in GLUT1 expression in various cancers. BAY-876 is a new generation GLUT1 inhibitor. The affinity of BAY-876 for GLUT1 was found to be approximately 100 times higher than for other glucose transporters. HepG2 cells will be used in molecular analyzes to investigate the role of this novel GLUT1 inhibitor in GLUT1-mediated cell proliferation and glucose uptake into the cell.The effect of BAY-876 on glucose uptake was investigated in the case of bioenergetic stress by applying metformin, an insulin-sensitizing agent with strong antihyperglycemic properties, and in hypoxic environment by applying CoCl2 treatment. A steatosis cell model was created using oleic acid and palmitic acid. We aimed to investigate the effects of BAY-876 on cell proliferation and glucose uptake in HepG2 cell line and HepG2 steatosis cell model. Drugs were added to the culture medium. its effect on cell proliferation was investigated with the BrDU method. Cell proliferation, glucose uptake and colony formation were investigated in HepG2 cell line and HepG2 steatosis cell model in the presence and absence of BAY-876. BAY-876 inhibits cell proliferation and reduces glucose uptake in HepG2 cells and steatosis cell model. BAY-876 was also found to reduce glucose uptake in normal and steatosis cell models under bioenergetic and hypoxic stress conditions. It is predicted that our study will contribute to the literature, provide a different perspective to anticancer drug research studies of GLUT1 inhibitor and contribute to the elucidation of the signal transmission mechanism of hepatocellular carcinoma.

Objective: Activation of cholinergic muscarinic receptors leads to activation of membrane - bound phospholipase C, leading to generation of IP3 and diacylglycérol, The present study aimed at measuring muscarinic receptor-mediated phosphoinositide breakdown in three different regions of rat brain.Methods: Cortical, hippocampal and striatal slices labeled with [3H] myo-inositol were incubated with muscarinic agonist carbachol (Cch) and LiCI. Reaction was terminated by the addition of chloroform/methanol and labeled inositol phosphates were extracted from tissue. Individual [3H]- inositol phosphates were separated using anion exchange chromatography.Results: Cch caused a rise in IP, formation, where the increase over basal in the cortex, hippocampus and striatum were 98%, 73% and 45%, respectively.Conclusion: Phosphoinositide turnover wasstimulated by carbachol in all brain structures studied, with the most pronounced effects observed in the cortex and hippocampus.Key Words: Muscarinic receptors, inositolphosphates, carbachol, rat brain

Objectives: Muscarinic acetylcholine receptors (mAChR) belong to a family of G protein coupled receptors (GPCRs). These mAChRs regulate several important physiological functions by activating a wide variety of cellular signaling pathways. We have previously shown that muscarinic acetylcholine (M2, M3 and M4) receptors are expressed in K562 cells. In this study, we investigated the effect of muscarinic agonist, antagonists and different signaling pathway inhibitors on c-Fos and cyclin D1 transcripts, using reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) that allows changes of very rare transcripts to be monitored. Material and Methods: Total RNA was prepared from K562 cells challenged with muscarinic agonist, antagonists and inhibitors. c-Fos and cyclin D1 expression were determined by RT-PCR.Results: We showed that treatment with muscarinic agonist, antagonists and inhibitors leads to changes in c-Fos and cyclin D1expression in K562 cells.Conclusions: Our results suggest that muscarinic receptors regulate expression of c-Fos and cyclin D1 genes in K562 cells via different signaling pathways, Amaç: Muskarinik asetilkolin reseptörleri (mAChR) G protein ile kenetli reseptör ailesinin üyesidirler. mAChR farklı sinyal ileti yolakları aracılığı ile bazı mühim f izyolojik fonksiyonları düzenler. K562 hücrelerinde M2 , M3 ve M4 reseptörlerinin eksprese olduğunu önceki çalışmalarımızda gösterdik. Bu çalışmada muskarinik agonist, antagonist ve farklı sinyal ileti yolağı inhibitörlerinin c-Fos ve siklin D1 ekspresyonuna etkileri araştırılmıştır Gereç ve Yöntem: Muskarinik reseptör agonist, antagonist ve sinyal yolağı inhibitörlerinin c-Fos ve siklin D1 ekspresyonuna etkileri ters transkriptaz polimeraz zincir tepkimesi (TT-PZT) kullanılarak analiz edilmiştir. Bulgular: Muskarinik agonist, antagonistler ve sinyal yolağı inhibitörleri K562 hücrelerinde c-Fos ve siklin D1 transkriptlerinde değişime neden olmuştur. Sonuç: Sonuçlarımız K562 hücrelerinde muskarinik reseptör aracılı c-Fos ve siklin D1 . mRNA ekspresyonlarının farklı sinyal ileti yolları ile düzenlendiğini düşündürmektedir.

Background and Design.- Heterotrimeric guanine nucleotide binding protein (G proteins) play a central role in regulation of signal transmission in the cell. G proteins which are localized in the inner surface of the cell membrane consist of α-, β- and γ- subunits. The α-subunit which binds guanine nucleotides (GTP and GDP) contains intrinsic GTPase activity. G proteins are divided into four families based on their α-subunits which confer their specifity: Gαs, Gαi, Gαq and Gα12. This study was designed to measure GTP binding activity and G protein expression in rat brain. Membrane extracts were prepared from whole brain and brain cortex. GTP binding activity in crude membrane fractions (P30) and membrane extracts (S142) was measured using [35S] GTPγS, the non-hydrolyzable analogue of GTP.Conclusion.- We observed that [35S] GTPγS binding increased with time and with increasing amounts of membrane proteins. We also demonstrated that GTPγS binding was strongly magnesium dependent and was maximum at 60mM MgCl2 concentration. The presence of G protein α and βγ subunits in whole brain and of Gαo and Gαi’ in brain cortex was shown by Western blot analysis.*Anahtar Kelimeler: G proteinler, GTP bağlama, beyin*Key Words: G proteins, GTP binding, brain

Hücre çoğalması ve hücre siklusunun ilerlemesi büyümenin kontrolünde rolü olan genlerin ekspresyonu ilebağlantılıdır. Ökaryot hücre siklusu M (mitoz) G , S ve G fazlarından oluşmaktadır. Bu süreçte hücre uyarımı vebüyüme meydana gelir veya hücre G fazında durmaktadır. Hücre siklusunda G -S geçişinde, G -M geçişinde vemetafaz-anafaz geçişinde kontrol noktaları bulunmaktadır. Hücre siklusu siklin bağımlı kinazlar (cdk, katalitikaltbirim) ve siklin (cyc, düzenleyici altbirim) tarafından kontrol edilmektedir. Hücre homeostazisi hücreçoğalması, büyümenin durdurulması ve apoptozis (programlı hücre ölümü) ile sürdürülmektedir. Hücre siklusuiçindeki olayları düzenleyen ve kontrol eden etkileşimler çok sayıda ve komplekstir. Hücre siklusunundüzenlenmesindeki hatalar hücre bölünmesinin kontrolunun bozulmasına neden olur. Hücre siklusu kontrolnoktalarında değişimler kanser gelişimine neden olabilir. Kanser gelişiminde tümör baskılayıcı fonksiyon, DNAonarımı ve apoptozis kritik yolaklardır, Proliferation and cell cycle progression are linked to the expression of genes associated with growth control. The eucaryotic cell cycle consists of an M (mitotic) phase, a G phase, the S phase and G phase. Non-dividing cells exist at G . Cell cycle is regulated by several critical cell cycle check points These are G -S check point, G -M check point and metaphase-anaphase check point. Cell cycle is controlled by the cycline dependent kinases (cdk, catalytic subunit) and cyclins (cyc, regulatory subunit). Homeostasis is within a cell is regulated by the balance between proliferation, growth arrest and apopto sis. Defects in cell cycle regulation inhibit controls for cell division. Alterations of cell cycle check points might result in cancer. The interactions which control and regulate the cascade of events within cell cycle are numerous and complex. Tumor supression of growth arrest, DNA repair and apoptosis, are all critical pathways in the development of cancers.

Nikotinik asetilkolin reseptörleri (nAChR'leri) hücre fizyolojisinde önemli rol oynamaktadır. nAChR'leri kanseri de içeren birçok hastalıkla ilişkilidir. nAChR'ler iyonotropik katyon kanallarıdır. Bu reseptörler nöronal ve nöronal olmayan hücrelerde eksprese olmaktadır. nAChR'lerin nöronal olmayan hücrelerdeki expresyonu tam olarak bilinmemektedir. Nikotinik reseptörler sinapslarda aksiyon potansiyeline aracılık eden ligand kapılı iyon kanalı olarak bilinmesine rağmen çeşitli nöronal olmayan dokularda hücre kominikasyonları, hücre çoğalması, adhezyon, migrasyon, salgı, hücre sağkalımı ve apoptoz gibi hücresel fonksiyonlarda önemlidir. Bu çalışmanın amacı asetilkolinin insan eritrolösemi hücrelerinde alfa 7 nikotinik reseptor ekspresyonuna, hücre çoğalmasına ve kalsiyum düzeyine etkisini belirlemektir. Eritrolösemi hücrelerinde alfa 7 nAChR expresyonu düzeyi Western blot yöntemi ile belirlenmiştir. Asetilkolinin hücre çoğalmasına ve kalsiyum düzeyine etkisi sırasıyla BrdU kiti ve ELISA kiti kullanılarak belirlenmiştir. Eritrolösemi hücrelerinde nikotinik agonist ve/veya antagonistler ile hücre çoğalması, kalsiyum düzeyinin, alfa 7 nAChR nikotinik reseptör ekspresyonunun belirlenmesi niklotinik reseptörlerin farklı sinyal ileti yolakları ile etkileşiminin aydınlatılmasına ve literatüre katkı sağlayacak ve gerekli tedaviler için bilgi oluşturacaktır. Nicotinic acetylcholine receptors (nAChRs) play an important role in cellular physiology. nAChRs are closely associated with many human diseases including cancer. These nAChRs typically are ionotropic cationic nicotinic receptor channels. These receptors are widely expressed on neuronal and non-neuronal cells. Expression pattern of nAChRs in nonneuronal cells is largely unknown. Nicotinic receptors are important in cellular functions such as cell communication, cell proliferation, adhesion, migration, secretion, cell survival and apoptosis in various non-neuronal tissues, although ligand-gated ion channels mediate synaptic potency at synapses. Aim of the study at examining the effect of acethylcholine on expression of α7 nAChRs, determining in cell proliferation and levels of calcium in human eryhroleukemia cells. Immuno bloting is used to quantify α7-nAChR expression in erythroleukemia cells. The effect of acethylcholine on cell proliferation and calcium level are detected by BrDu kit and ELISA kit recpectively. Determination of cell proliferation, calcium level, α7 nAChR nicotinic receptor expression by nicotinic agonists and / or antagonists in erythroleukemic cells will elucidate the interaction of nicotinic receptors with different signaling pathways and will contribute to the literature and provide information for the necessary therapies. 112

ÖZETAmaç: K562 hücreleri miyeloyid lösemi, normal miyeloid gelişiminde, farklılaşmanın kontrolünde ve gen ekspresyonu çalışmalarında kullanışlı bir model sistemdir. K562 hücre soyu granülosit soyunun erken farklılaşma evresini temsil eder, insan natural killer hücre tayininde hassas hedef hücre olarak kullanılır. K562 hücre çoğalmasında M2, M3 ve M4 muskarinik reseptörlerin rolü olduğu, karbakolün (CCh) serumsuz kültür ortamında hücre çoğalmasını uyardığı gösterilmiştir. Bu çalışmada, nöronal olmayan kolinerjik sistemin sitokinlerle ilişkisini belirlemek üzere, TNFα’ nın, CXCL8 düzeyine, asetilkolin (ACh) sentezine ve M3 muskarinik reseptor ekspresyonuna etkisi incelenmiştir.Gereç ve Yöntem: Bu çalışmada ATTC’den alınmış K562 hücreleri çoğaltılmıştır. K562 hücreleri 24 saat serumsuz ortamda kültur edildikten sonra TNFα’nın kolinerjik sistem aracılı CXCL8 ve ACh üretimindeki rolünü belirlemek üzere; TNFα (1ng/ml) ve/veya farklı konsantrasyonlarda pilokarpine ((M1/M3agonisti) (1-100 µM) ve/veya M3 antagonist (4DAMP) (10 nm) ile 24 saat muamele edilen hücrelerde, CXCL8 ve asetilkolin düzeyi ELİSA yöntemi ile belirlenmiştir. Çalışmamızda eritrolösemi hücrelerinde TNFα’nın M3 ekspresyonuna etkisi western emdirimi yöntemi ile belirlenmiştir.Bulgular ve Sonuç: Sonuç olarak, muskarinik reseptör agonisti pilokarpinin düşük konsantrasyonları ACh sentezini uyarmaktadır. Muskarinik reseptör aracılı CXCL8 salınımı M3 antagonisti 4DAMP ile olan inhibisyonu TNFα ile geri çevirilmiştir.Anahtar Sözcükler: Kolinerjik reseptörler, pilokarpin, karbakol, 4DAMP, K562 .SUMMARYObjective: K562 cells are used as model systems for normal myeloid, development of myeloid leukemia, control of differentiation and gene expression studies. K562 cell line represent early differentiation stage in granulocyte lienage. It is used for detection human natural killer cell. M2, M3 and M4 muscarinic receptors have a role in K562 cell proliferation and carbachol induced cell proliferation in serum free medium. Aim of this study was to examine effects of nonneuronal acethylcholine on level of TNFα, level of CXCL8, synthesis of acethylcholine and to ivestigate agents effects on M3 muscarinic receptor protein expression.Matherials and metods: K562 cells are purchased from (ATTC). K562 cells were proliferated. K562 cells cultured 24 hours in serum free medium. Cells incubated with TNFα (1ng/ml) and/or differrent concentration of pilocarpine (M1/M3 agonist) (1-100µM) and/or M3 antagonist (4DAMP) (10 µM) 24 hours to detect effects on level of CXCL8, acethylcholine. Effects of TNFα, agonist and antogonist on M3 expression was detected by western blotting method.Results and Conclusion: Consequently, the muscarinic receptor agonist, pilocarpine stimulated the synthesis of acethylcholine by lower concentrations. Muscarinic receptor mediated CXCL8 secretion is inhibited by M3 antagonist, 4DAMP, an effect reversed by TNFα.Key words: Cholinergic receptors, pilocarpine, carbachol, 4DAMP, K562

1. ÖZET Amaç: Migren, ölümcül tehlikesi olmayan ama yaşam kalitesini ciddi şekilde etkileyen rahatsızlıktır. Son genom çapı ilişkilendirme çalışmalarında (Genom Wide Association Studies (GWAS) düşük yoğunluklu lipoprotein reseptörü ile ilişkili protein 1 (LRP1) ve potansiyal geçiş reseptör kanalının alt ailesi melastinin sekizinci üyesi (Transient receptor potential cation channel, subfamily M, member 8 [TRPM8]) genlerindeki rs1172113 ve rs10166942 varyantlarının migrenle ilişkili olabileceği belirtilmektedir. Bu çalışmada Türkiye'de LRP1 ve TRPM8 polimorfizmlerinin görülme sıklığının belirlenmesi ve migrenle ilişkisinin saptanması amaçlanmaktadır. Gereç ve Yöntem: Tez çalışmasında Medeniyet Üniversitesi Eğitim ve Araştırma Hastanesi Nöroloji kliniğinden toplanan migren ve kontrol gruplarının kanları alınmıştır. Bu kanlardan Genomik Deoksiribonükleik Asit (DNA) izolasyonu Roche `DNA isolation kit for mammalian blood` kit kullanılarak elde edilmiştir. LRP1 varyantının genotipleri Restriction Lenght Polimorfizim analizi (RFLP) ile analiz edildi. TRPM8 ise Real Time Polimeraz Zincir Reaksiyonu Erime Eğrisi Analizi ile belirlenmiştir. Bulgular ve Sonuç: Bu çalışmada LRP1 varyantı ile migren arasında anlamlı ilişki bulunamamıştır. Ancak TRPM8 varyantı ile migren arasında anlamlı ilişki bulunmuştur (P 0,05). Türkiye toplumunda ilk kez çalışılan LRP1, TRPM8, polimorfizmlerinin migrenle ilişkisinin araştırılması daha önce yapılmış olan farklı mutasyon çalışmalarına da katkıda bulunacaktır. Aynı zamanda bu varyantlarla yapılacak çalışmalarada destek sağlayacaktır.Anahtar Kelimeler: Baş ağrısı, soğuk reseptörü, glutamat, auralı ve aurasız, gen polimorfizmi. 2. SUMMARYObjective: Migraine is not a fatal disease but its severely affecting the quality of life. In current Genome Wide Association Study (GWAS), rs1172113 and rs10166942 variants of Low Density Lipoprotein receptor related protein 1 (LRP1) and Transient receptor potential cation channel, subfamily M, member 8 (TRPM8) genes are reported to be associated with migraine. In the present study, we aimed to determine the prevalence of LRP1 and TRPM8 polymorphisms and its relation with migraine in Turkey.Materials and Methods: In the present thesis study, blood samples were collected for migraine and control groups from Neurology Department in Medeniyet University Training and Research Hospital. The genomic Deoxyribonucleic acid (DNA) was isolated from the collected blood samples using Roche DNA isolation kit for mammalian blood. The genotypes of variants were detected by Restriction Fragmant Length Polymorphism Analysis (RFLP), TRPM8 variants were detected by Real-time Polymerase Chain Reaction (PCR) and Melting Curve analysis.Results and Conclusion: In this study, there was no significant correlation between migraine with LRP1 variant. However, TRPM8 variant was significantly associated with migraine (P

ÖZETHemin ile Eritroid Farklılaştırılmış Kronik Miyeloid Lösemi K562 Hücre Soylarının Çoğalmasında Beta Adrenerjik Reseptörlerin RolüAmaç: Bu çalışmada K562 kronik miyeloid lösemi hücreleri hemin ile eritroid farklılaşmaya indüklenerek farklılaştırılmıştır ve farklılaştırılmış insan eritrolösemi hücrelerinin çoğalmasında β-adrenerjik reseptörlerin rolünü belirlemek için izoprenalin ve/veya propranolol varlığında hücre sayım deneyleri yapılması amaçlanmıştır. Eritroid farklılaştırılmış insan eritrolösemi hücrelerinde β1 ve β2-adrenerjik reseptör ekspresyon düzeyinin de belirlenmesi amaçlanmıştır.Gereç ve Yöntem: K562 kronik miyeloid lösemi hücreleri çoğaltıldıktan sonra heminle eritroid farklılaştırılmıştır. Farklılaşmanın olup olmadığını belirlemek üzere benzidin boyama ve glikoforin A gen ekspresyonu çalışmaları yapılmıştır. Hemin ile farklılaştırılan K562 kronik miyeloid lösemi hücrelerinde propranololün hücre çoğalmasına etkisini belirleyebilmek için farklı konsantrasyonlarda propranolol ve/veya izoprenalin ile 24 ve 48 saat muamele edilen hücreler, BrDU yöntemi ile sayılmıştır. Farklılaştırılmış hücre gruplarından hazırlanan kesimlerinde Lowry yöntemi ile protein tayini yapıldıktan sonra Western emdirimi yöntemi ile β1 ve β2 reseptör protein düzeyi belirlenmiştir.Bulgular ve Sonuç: Bu çalışmada, eritroid farklılaşmaya indüklenen K562 kronik miyeloid lösemi hücrelerinde β-adrenerjik reseptörlerin hücre çoğalmasındaki rolü saptanmıştır. β-adrenerjik agonist ve antagonistlerinin farklılaştırılmış hücre çoğalmasındaki rolü belirlenmiştir. Eritroid farklılaşmanın olup olmadığının göstergesi olan benzidin boyama ile pozitif hücreler, ayrıca glikoforin A gen ekspresyonu gösterilmiştir. Eritroid farklılaştırılmış insan eritrolösemi hücrelerinde β1-adrenerjik reseptör ekspresyon düzeyinin β2-adrenerjik reseptörden fazla olduğu bulunmuştur.Anahtar Sözcükler: G protein kenetli reseptörler, kanser, izoprenalin, propranolol, gen ekspresyonuSUMMARYThe role of β-adrenergic receptors on erythroid differentiated chronic myeloid leukemia cell lines K562 proliferation with hemin Objective: In the present study, K562 chronic myleoid leukemia cells induced erythroid differentiation with hemin. The aim of this study is to do the cell proliferation assay in the presence of isoprenaline and propranolol to evaluate the role of β1/β2-adrenergic receptors on proliferation of differentiated cells. Moreover, the expression level of β1/β2-adrenergic receptors are also aimed to be investigated on human erythroid differentiated K562 chronic myeloid leukemia cells.Materials and methods: After the K562 cells are proliferated, these cells are differentiated with hemin (50 μM). In order to detect if there is a differentiation or not, benzidine staining and detection of glycophorin A expression investigations are done. To understand the affect of propranolol on the proliferation of the hemin induced eritroid differentiated K562 cells, the cells are incubated with the different concentrations of propranolol and/or isoprenaline for 24 and 48 hours long and counted with BrDU method. The lysate of differentiated K562 cell groups are prepared. After the protein levels are detected with Lowry method. The β1, β2 reseptor protein level is detected by Western blotting.Results and conclusion: In the present study, we detected that the role of β-adrenergicreceptors in erythroid differentiated cell proliferation. The effects of the nonselective antagonist and agonist β-adrenergic receptor on the proliferation of human erythroid differentiated K562 chronic myeloid leukemia cells are detected. Positive cells are shown with benzidine staining method which displays the erythroid differentiation. Moreover, the gene expression of glycophorin A is shown. The results showed that the expression level of β1-adrenergic receptors are higher than the expression level of β2-adrenergic receptors in human erythroid diffrentiated K562 chronic myeloid leukemia cells.Key Words: G protein coupled receptors, cancer, isoprenaline, propranolol, gene expression

Amaç: Bu çalışmada K562 kronik miyeloid lösemi hücreleri hemin ile eritroid farklılaşmaya indüklenerek farklılaştırılmıştır ve farklılaştırılmış insan eritrolösemi hücrelerinin çoğalmasında β-adrenerjik reseptörlerin rolünü belirlemek için izoprenalin ve/veya propranolol varlığında hücre sayım deneyleri yapılması amaçlanmıştır. Eritroid farklılaştırılmış insan eritrolösemi hücrelerinde β1 ve β2-adrenerjik reseptör ekspresyon düzeyinin de belirlenmesi amaçlanmıştır.Gereç ve Yöntem: K562 kronik miyeloid lösemi hücreleri çoğaltıldıktan sonra heminle eritroid farklılaştırılmıştır. Farklılaşmanın olup olmadığını belirlemek üzere benzidin boyama ve glikoforin A gen ekspresyonu çalışmaları yapılmıştır. Hemin ile farklılaştırılan K562 kronik miyeloid lösemi hücrelerinde propranololün hücre çoğalmasına etkisini belirleyebilmek için farklı konsantrasyonlarda propranolol ve/veya izoprenalin ile 24 ve 48 saat muamele edilen hücreler, BrDU yöntemi ile sayılmıştır. Farklılaştırılmış hücre gruplarından hazırlanan kesimlerinde Lowry yöntemi ile protein tayini yapıldıktan sonra Western emdirimi yöntemi ile β1 ve β2 reseptör protein düzeyi belirlenmiştir.Bulgular ve Sonuç: Bu çalışmada, eritroid farklılaşmaya indüklenen K562 kronik miyeloid lösemi hücrelerinde β-adrenerjik reseptörlerin hücre çoğalmasındaki rolü saptanmıştır. β-adrenerjik agonist ve antagonistlerinin farklılaştırılmış hücre çoğalmasındaki rolü belirlenmiştir. Eritroid farklılaşmanın olup olmadığının göstergesi olan benzidin boyama ile pozitif hücreler, ayrıca glikoforin A gen ekspresyonu gösterilmiştir. Eritroid farklılaştırılmış insan eritrolösemi hücrelerinde β1-adrenerjik reseptör ekspresyon düzeyinin β2-adrenerjik reseptörden fazla olduğu bulunmuştur.Anahtar Sözcükler: G protein kenetli reseptörler, kanser, izoprenalin, propranolol, gen ekspresyonu Objective: In the present study, K562 chronic myleoid leukemia cells induced erythroid differentiation with hemin. The aim of this study is to do the cell proliferation assay in the presence of isoprenaline and propranolol to evaluate the role of β1/β2-adrenergic receptors on proliferation of differentiated cells. Moreover, the expression level of β1/β2-adrenergic receptors are also aimed to be investigated on human erythroid differentiated K562 chronic myeloid leukemia cells.Materials and methods: After the K562 cells are proliferated, these cells are differentiated with hemin (50 μM). In order to detect if there is a differentiation or not, benzidine staining and detection of glycophorin A expression investigations are done. To understand the affect of propranolol on the proliferation of the hemin induced eritroid differentiated K562 cells, the cells are incubated with the different concentrations of propranolol and/or isoprenaline for 24 and 48 hours long and counted with BrDU method. The lysate of differentiated K562 cell groups are prepared. After the protein levels are detected with Lowry method. The β1, β2 reseptor protein level is detected by Western blotting.Results and conclusion: In the present study, we detected that the role of β-adrenergicreceptors in erythroid differentiated cell proliferation. The effects of the nonselective antagonist and agonist β-adrenergic receptor on the proliferation of human erythroid differentiated K562 chronic myeloid leukemia cells are detected. Positive cells are shown with benzidine staining method which displays the erythroid differentiation. Moreover, the gene expression of glycophorin A is shown. The results showed that the expression level of β1-adrenergic receptors are higher than the expression level of β2-adrenergic receptors in human erythroid diffrentiated K562 chronic myeloid leukemia cells.Key Words: G protein coupled receptors, cancer, isoprenaline, propranolol, gene expression 130

Amaç: K562 hücreleri miyeloyid lösemi, normal miyeloid gelişiminde, farklılaşmanın kontrolünde ve gen ekspresyonu çalışmalarında kullanışlı bir model sistemdir. K562 hücre soyu granülosit soyunun erken farklılaşma evresini temsil eder, insan natural killer hücre tayininde hassas hedef hücre olarak kullanılır. K562 hücre çoğalmasında M2, M3 ve M4 muskarinik reseptörlerin rolü olduğu, karbakolün (CCh) serumsuz kültür ortamında hücre çoğalmasını uyardığı gösterilmiştir. Bu çalışmada, nöronal olmayan kolinerjik sistemin sitokinlerle ilişkisini belirlemek üzere, TNFα' nın, CXCL8 düzeyine, asetilkolin (ACh) sentezine ve M3 muskarinik reseptor ekspresyonuna etkisi incelenmiştir.Gereç ve Yöntem: Bu çalışmada ATTC'den alınmış K562 hücreleri çoğaltılmıştır. K562 hücreleri 24 saat serumsuz ortamda kültur edildikten sonra TNFα'nın kolinerjik sistem aracılı CXCL8 ve ACh üretimindeki rolünü belirlemek üzere; TNFα (1ng/ml) ve/veya farklı konsantrasyonlarda pilokarpine ((M1/M3agonisti) (1-100 µM) ve/veya M3 antagonist (4DAMP) (10 nm) ile 24 saat muamele edilen hücrelerde, CXCL8 ve asetilkolin düzeyi ELİSA yöntemi ile belirlenmiştir. Çalışmamızda eritrolösemi hücrelerinde TNFα'nın M3 ekspresyonuna etkisi western emdirimi yöntemi ile belirlenmiştir.Bulgular ve Sonuç: Sonuç olarak, muskarinik reseptör agonisti pilokarpinin düşük konsantrasyonları ACh sentezini uyarmaktadır. Muskarinik reseptör aracılı CXCL8 salınımı M3 antagonisti 4DAMP ile olan inhibisyonu TNFα ile geri çevirilmiştir.Anahtar Sözcükler: Kolinerjik reseptörler, pilokarpin, karbakol, 4DAMP, K562 Objective: K562 cells are used as model systems for normal myeloid, development of myeloid leukemia, control of differentiation and gene expression studies. K562 cell line represent early differentiation stage in granulocyte lienage. It is used for detection human natural killer cell. M2, M3 and M4 muscarinic receptors have a role in K562 cell proliferation and carbachol induced cell proliferation in serum free medium. Aim of this study was to examine effects of nonneuronal acethylcholine on level of TNFα, level of CXCL8, synthesis of acethylcholine and to ivestigate agents effects on M3 muscarinic receptor protein expression.Matherials and metods: K562 cells are purchased from (ATTC). K562 cells were proliferated. K562 cells cultured 24 hours in serum free medium. Cells incubated with TNFα (1ng/ml) and/or differrent concentration of pilocarpine (M1/M3 agonist) (1-100µM) and/or M3 antagonist (4DAMP) (10 µM) 24 hours to detect effects on level of CXCL8, acethylcholine. Effects of TNFα, agonist and antogonist on M3 expression was detected by western blotting method.Results and Conclusion: Consequently, the muscarinic receptor agonist, pilocarpine stimulated the synthesis of acethylcholine by lower concentrations. Muscarinic receptor mediated CXCL8 secretion is inhibited by M3 antagonist, 4DAMP, an effect reversed by TNFα.Key words: Cholinergic receptors, pilocarpine, carbachol, 4DAMP, K562 96

1. ÖZET Amaç: Migren, ölümcül tehlikesi olmayan ama yaşam kalitesini ciddi şekilde etkileyen rahatsızlıktır. Son genom çapı ilişkilendirme çalışmalarında (Genom Wide Association Studies (GWAS)) düşük yoğunluklu lipoprotein reseptörü ile ilişkili protein 1 (LRP1) ve potansiyal geçiş reseptör kanalının alt ailesi melastinin sekizinci üyesi (Transient receptor potential cation channel, subfamily M, member 8 [TRPM8]) genlerindeki rs1172113 ve rs10166942 varyantlarının migrenle ilişkili olabileceği belirtilmektedir. Bu çalışmada Türkiye’de LRP1 ve TRPM8 polimorfizmlerinin görülme sıklığının belirlenmesi ve migrenle ilişkisinin saptanması amaçlanmaktadır. Gereç ve Yöntem: Tez çalışmasında Medeniyet Üniversitesi Eğitim ve Araştırma Hastanesi Nöroloji kliniğinden toplanan migren ve kontrol gruplarının kanları alınmıştır. Bu kanlardan Genomik Deoksiribonükleik Asit (DNA) izolasyonu Roche “DNA isolation kit for mammalian blood” kit kullanılarak elde edilmiştir. LRP1 varyantının genotipleri Restriction Lenght Polimorfizim analizi (RFLP) ile analiz edildi. TRPM8 ise Real Time Polimeraz Zincir Reaksiyonu Erime Eğrisi Analizi ile belirlenmiştir. Bulgular ve Sonuç: Bu çalışmada LRP1 varyantı ile migren arasında anlamlı ilişki bulunamamıştır. Ancak TRPM8 varyantı ile migren arasında anlamlı ilişki bulunmuştur (P 0,05). Türkiye toplumunda ilk kez çalışılan LRP1, TRPM8, polimorfizmlerinin migrenle ilişkisinin araştırılması daha önce yapılmış olan farklı mutasyon çalışmalarına da katkıda bulunacaktır. Aynı zamanda bu varyantlarla yapılacak çalışmalarada destek sağlayacaktır.Anahtar Kelimeler: Baş ağrısı, soğuk reseptörü, glutamat, auralı ve aurasız, gen polimorfizmi.2. summaryObjective: Migraine is not a fatal disease but its severely affecting the quality of life. In current Genome Wide Association Study (GWAS), rs1172113 and rs10166942 variants of Low Density Lipoprotein receptor related protein 1 (LRP1) and Transient receptor potential cation channel, subfamily M, member 8 (TRPM8) genes are reported to be associated with migraine. In the present study, we aimed to determine the prevalence of LRP1 and TRPM8 polymorphisms and its relation with migraine in Turkey.Materials and Methods: In the present thesis study, blood samples were collected for migraine and control groups from Neurology Department in Medeniyet University Training and Research Hospital. The genomic Deoxyribonucleic acid (DNA) was isolated from the collected blood samples using Roche DNA isolation kit for mammalian blood. The genotypes of variants were detected by Restriction Fragmant Length Polymorphism Analysis (RFLP), TRPM8 variants were detected by Real-time Polymerase Chain Reaction (PCR) and Melting Curve analysis.Results and Conclusion: In this study, there was no significant correlation between migraine with LRP1 variant. However, TRPM8 variant was significantly associated with migraine (P

ÖZETİnsan Kronik Miyeloid Eritrolösemi Hücre Soyunda Muskarinik Reseptör Aracılı Mitojenle Aktive Olan Protein Kinaz Aktivasyonunda Epidermal Büyüme Faktör Reseptörünün Rolü Amaç: Muskarinik reseptörler (M1-M5) G protein kenetli reseptör süper ailesinin üyesidir ve farklı fizyolojik olayların düzenlenmesinde rol oynar. Son çalışmalarda muskarinik reseptörlerin hematopoietik hücrelerde hücresel faaliyetlere aracılık ettiği önerilmektedir. Bu çalışmada insan eritrolösemi hücrelerinde Epidermal Growth Faktör reseptörlerinin (EGFR), muskarinik reseptör aracılı mitojenle aktive olan protein kinaz aktivasyonunda, rolünü belirleyebilmek için karbakol ve/veya EGF varlığında ERK, pERK, EGFR, ekspresyon düzeylerinin belirlenmesi amaçlanmıştır.Gereç ve Yöntem: Çalışmamızda ATTC’den alınmış insan eritrolösemi K562 hücreleri kullanılmıştır. K562 hücreleri 24 saat serumsuz ortamda çoğaltıldıktan sonra kolinerjik agonist karbakol (100M, 1mM) veya 16 nM epidermal büyüme faktörü (EGF) 30 dakika uyarılmıştır. Ayrıca EGFR kinaz inhibitörü PD 153035 ile 5 dakika sonra CCh veya EGF ile 30 dakika muamele edilmiştir. Karbakol veya EGF’nin transkripsiyonel cevabını belirlemek üzre c-fos ekspresyonu belirlenmiştir. Ayrıca kolinerjik reseptörler aracılı ERK aktivasyonunda PI3K’ın rolünü belirlemek üzre 20M PI3K inhibitörü wortmanin ile 10 dakika inkübe edilmiştir.Bulgular ve Sonuç: Muskarinik reseptör aracılı mitojenle aktive olan protein kinaz aktivasyonunda epidermal büyüme faktör reseptörünün rolünü belirlemek üzre, protein ekspresyon deneyleri yapılmıştır. İnsan eritrolösemi hücrelerinde EGFR, pERK, ERK, c-fos ekspresyonu gösterilmiştir. Ancak kolinerjik agonist karbakol ve/veya 4DAMP, EGF’nin ve inhibitörlerin ERK, pERK, c-fos, EGFR protein ekspresyon düzeylerinde değişime neden olmamıştır. Anahtar kelimeler: Kolinerjik reseptör, karbakol, ERK, c-fos, K562 hücre2. SUMMARYThe Role Of Epidermal Growth Factor Receptors On Muscarinic Receptor Mediated Activation Of Mitogen-Activated Protein Kinase İn Human Chronic Myelogenous Erythroleukemia Cell Line Objective: Muscarinic receptors (M1-M5) are a member of the G protein coupled receptor superfamily. These are involved in the regulation of many different physiological processes. In Recent studies suggested that muscarinic receptors in hematopoietic cells have been mediated cellular activities. In this study, to evaluate the role of human epidermal growth factor receptor (EGFR) on muscarinic receptor mediated mitogen activated kinase in erythroleukemia cells , effects of CCh and /or EGF are used , have been detected protein expression of ERK,pERK, c-fos and EGFR.Material and method: In our study, human erythroleukemia K562 cells were obtained from ATCC. K562 cells were incubated with carbachol (100µM,1μM) or EGF (16nM) for different times. In some experiments, the cells were pretreated with pharmacological inhibitors for different times. Cells were lysed with TE buffer. Protein concentration was measured Lowry method. Expression of EGFR, pERK, ERK and c-fos were determined with western blotting.Results and conclusion: To evaluate the role of human epidermal growth factor receptor (EGFR) on muscarinic receptor mediated mitogen activated kinase in erythroleukemia cells ,protein expression experiment have been made. In this study shown that expression of EGFR, ERK and c-fos were detected on K562 cells. But cholinergic activation of the mAChR’s in human erythroleukemia cell have not changed expression of EGFR, ERK and c-fos protein levels.Keywords: Cholinergic receptor, carbachol, ERK, c-fos, K562 cell

1.ÖZETTravma sonrası stres bozukluğu sıçan modelinde glukokortikoidlerin rolüAmaç: Travma sonrası stres bozukluğu (TSSB) yaşanılan bir travmayı çağrıştıran hatırlatıcının kişide travmayı yeniden oluşturması ile seyreden bir anksiyete bozukluğudur. Bu çalışmada, steroidlerin rolünü göstermek üzere TSSB sıçan modelinde travma öncesi prednizolon ve steroid sentez inhibitörü metirapon kullanılarak, anksiyete indeksi, donakalma süresi ve rostral pons bölgesinde noradrenalin (NA) düzeyi üzerindeki etkileri incelenmiştir.Gereç ve Yöntem: 200-250 gram ağırlığındaki Sprague- Dawley suşu dişi sıçanlar fizyolojik tuzlu su (FTS; 0,1 ml/100g), prednizolon (20 mg/kg) veya metirapon (100 mg/kg) dozlarında farklı gruplara ayrılmıştır. Enjeksiyonları takiben, kontrol grupları ve travmatize gruplar iki oturumdan oluşan gerekli temiz ya da kirli kedi kumuna maruz bırakılmışlardır. Yükseltilmiş artı labirent (EPM) testinde anksiyete indeksi ve donakalma süreleri ve başka bir aşamada ise rostral ponstaki NA düzeyleri belirlenmiştir.Bulgular ve Sonuçlar: Davranış deneylerinde iki yönlü varyans analizi hem travmanın, hem de ilaç uygulamalarının varyansa neden olduğunu ve ikisi arasında etkileşme olduğunu göstermiştir. Bonferroni post-testi ile davranış parametreleri incelendiğinde, FTS’nin varyansa neden olduğu görülmüştür. Rostral ponsta metiraponun NA düzeyine etkisi travma grubunda kontrol gruplarına göre anlamlı derecede farklı bulunmuştur. Travmadan hemen önce uygulanan prednizolonun, TSSB gelişimini engellediğini ve metirapon uygulamasının anksiyeteyi bir miktar artırsa da, TSSB’nin gelişmesinde farmakolojik glukokortikoid uygulamasının, endojen steroidlerden daha önemli olduğunu göstermiştir.ANAHTAR KELİMELER: Anksiyete indeksi; Yükseltilmiş artı labirent; Locus Coeruleus; Noradrenalin; Rostral pons. The role of glucocorticoids in rat model of post-traumatic stress disorderSUMMARYThe role of glucocorticoids in rat model of post-traumatic stress disorderThe aim: Post-traumatic stress disorder (PTSD) is an anxiety disorder where the subjects re-experience the trauma with a reminder steroid have important roles during stress has been shown in previous studies. In this study, the roles of steroids on anxiety index were studied using a steroid prednisolone and steroid synthesis inhibitor metyrapone.Methods: Female Sprague-Dawley weighing 200-250 g were adopted to reverse light-dark cycle for one week and received physiological saline (PS; 0,1 ml /100g), prednisolone (20 mg /kg) or metyrapone (100 mg /kg). Following injections, the rats were subjected to dirty cat litter in plexiglass cage for 10 minutes. One week following trauma, the rats were subjected to clean cat litter that served as trauma reminder, the behavioral parameters were calculated in elevated plus maze test. NA level was detected in rostral pons area.Results and Conclusion: In the non-traumatized control group the anxiety index was calculated as 0,63;traumatized controls anxiety index was calculated as 0,86. Two-way analysis of variance indicated a variance and an interaction was found between trauma and treatments. Bonferroni post-test showed the PS treatment caused the variance. Noradrenaline content of the rostral pons of the traumatized groups treated with metyrapone was significantly different than the content of control groups.We have observed that prednisolone administered immediately before the trauma can prevent the development of PTSD. Collectively a non-significant increase in the anxiety has been observed with metyrapone treatment, pharmacological use of glucocorticoids seems to be more important than the endogenous steroids in the development of PTSD.Keywords: Anxiety index; Elevated Plus Maze; Locus coeruleus; Noradrenaline; Rostral pons.

ASLI AYKAÇFLUOKSETİN İLE TEDAVİ EDİLEN POST TRAVMATİK STRES BOZUKLUĞU SIÇAN MODELİNDE GEN EKSPRESYON ÇALIŞMALARIPost travmatik stres bozukluğunun (PTSB) farmakoterapisinde farklı ilaçlar kullanılmasına rağmen hastalığın fizyopatolojisi pekiyi anlaşılmış değildir. Muskarinik reseptörler G proteini ile kenetli reseptör ailesinin üyesidirler. PTSB’ nin fizyopatolojisinde muskarinik asetilkolin reseptörlerinin rolü ve farmakoterapinin bu değişiklik üzerine etkisinin araştırılmasının gerekli olduğunu vurgulamaktadır. Bu çalışmada PTSB’ ye maruz bırakılan sıçanlarda fluoksetin, propranolol ve atropin tedavilerinin anksiyete indeksi üzerine etkisi belirlendikten sonra hipokampus, frontal korteks ve amigdala bölgelerinde muskarinik reseptör alt tiplerinin ve apoptoz proteinlerinden bcl 2, bax ekspresyonları belirlenmiştir. PTSB oluşturulmuş gruplardaki sıçanların anksiyete indeksi ve donakalma süresi artmıştır. Frontal korteksde M2, M3, ve M5 ekspresyon düzeylerinde artış, hipokampal bölgede M4 ekspresyonunda azalma, amigdala bölgesinde ise tüm muskarinik reseptör alt tiplerinin ekspresyonunda azalma belirlenmiştir. Fluoksetin ile tedavi edilen grupların amigdala bölgesi hariç hipokampal ve frontal korteks bölgelerinde muskarinik reseptör ekspresyonlarındaki değişimler geri çevrilmiştir. Saldırgan hayvan kokusuna maruz kalan sıçanlarda muskarinik reseptör ekspresyonlarındaki değişimler propronolol tedavisi ile geri çevrilmiştir. Bu bulgular PTSB’ nin patogenezitesinde muskarinik reseptörlerin ve apoptoz proteinlerinin katılımının olduğunu göstermektedir.Anahtar Sözcükler: Apoptoz proteinleri, fluoksetin, muskarinik reseptörler, propranolol, PTSB. ASLI AYKAÇThe Studies of Gene Expression in a Rat Model of Post Traumatic Stress Disorder Treated with FluoxetineAlthough many drugs are used in the pharmacotherapy of post traumatic stress disorder (PTSD), the physiopathology of the disease has not been studied fully. Muscarinic acetylcholine receptors (mAChRs) are members of G protein coupled receptor family. Identification of mAChRs subtypes expressed in various cells and tissues is important in the development of selective drugs. In this study, contribution of mAChRs and the effect of fluoxetine, propranolol and atropine on anxiety index in a rat model of PTSD performed by conditioning the rats with cat litter and supplying evidence for the pathophysiology of the disease and mAChRs, apoptosis proteins bcl 2, bax expression in amygdala, hippocampus, and frontal cortex by using Western blotting. The data indicate that the rats were exposed to dirty cat litter as a source of the predator scent (PS) had prolonged freezing times and higher anxiety indices. These effects were reversed by classical drugs such as fluoxetine and propranolol. We observed increases in M2, M3 and M5 expression in frontal cortex and, decrease in M4 subtype in hipocampal region, together with an overall reduction of all subtypes in amygdalar region. Application of fluoxetine reversed the changes that occured on muscarinic subtypes by the recall process of the PS except reductions in the amygdalar region. Propranolol treatments also restored the changes that occured on mAChRs subtype expressions in rat exposed to PS test. In conclusion, we have demonstrated the participation of mAChRs and apotosis proteins in PTSD.Key words: Apoptosis proteins, fluoxetine, muscarinic receptors, propranolol, PTSD.

GRK4 POLİMORFİZMLERİNİN ESANSİYEL HİPERTANSİYON İLE İLİŞKİSİNİN BELİRLENMESİHale YILDIZ G protein kenetli reseptör kinaz (GRK4) esansiyel hipertansiyon (EHT) ile ilişkilidir. GRK4 böbreğin proksimal tübüllerinde sodyum dengesini düzenlemektedir. Bu çalışmada A142V ve A486V polimorfizmlerinin hipertansiyon gelişimindeki olası rolleri Türk bireylerde araştırılmıştır. Genomik DNA, standart kit (Roche) kullanılarak beyaz kan hücrelerinden elde edilmiştir. GRK4’ ün varyantlarının genotipleri Polimeraz zincir reaksiyonu (PZR) – Restiriksiyon fragment uzunluk polimorfizmi (RFLP) analizi ile belirlenmiştir. 60 kontrol, 60 hasta birey üzerinde polimorfizm taraması yapıldı. Bu çalışmada Türk bireylerde A142V ve A486V polimorfizmlerinin EHT ile ilişkili olduğu bulunmuştur (P0.05). EHT ile A142V polimorfizminin ilişkisi kadınlara göre erkeklerde daha anlamlı bulunmuştur. Anahtar Sözcükler: Dopamin, esansiyel hipertansiyon, gen polimorfizmi, G protein kenetli reseptör kinaz 4 (GRK4), Türk bireyler.IDENTIFICATION OF THE ASSOCIATION BETWEEN GRK4 POLYMORPHISMS AND ESSENTIAL HYPERTENSIONHale YILDIZG protein coupled receptor kinase 4 (GRK4) was associated with essential hypertension (EHT). G protein coupled receptor kinase 4 regulate sodium balance in the proximal tubule. In this study, we have investigated A142V and A486V polymorphisms and their association with essential hypertension in the Turkish subjects. Genomic DNA was extracted from white blood cells, using standart kits (Roche). GRK4 variants were genotyped by Polymerase Chain Reaction (PCR) – Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) analysis. 60 healthy subjects and 60 patients diagnosed with essential hypertension screened for GRK4 polymorphisms. The present study has found an association of the A142V and A486V polymorphisms with EHT in Turkish subjects (P0.05). Association of the A142V polymorphism with EHT is more significant in men than women. Key words: Dopamin, essential hypertension, gene polymorphism, G protein coupled receptor kinase 4, Turkish subjects.

Muskarinik reseptörler zarı yedi kere kat eden reseptör süper ailesinin üyesidirler. Bu reseptörler heterotrimerik G proteinlerini aktive ederek farklı efektör sistemlerini düzenlemektedir. Her bir muskarinik reseptör alt tipi ile aktive olan farklı ikinci haberci bağımlı yolaklar vardır. Muskarinik reseptörler adenilat siklazın inhibisyonu, fosfoinositid (PI) hidrolizi ve K kanallarının düzenlenmesi gibi farklı hücresel yanıtlara aracılık eder. Moleküler ve farmakolojik yöntemlerle 5 farklı muskarinik reseptör alt tipi tanımlanmıştır. M1, M3 ve M5 reseptör alt tipleri pertusis toksinine duyarsız Gq proteinine kenetlenerek fosfolipaz C beta (PLCβ)' nın aktivasyonuna ve ardından PI hidrolizine, M2, M4 reseptörleri pertusis toksinine duyarlı Gi/o proteinleri aracılığı ile cAMP' nin baskılanmasına neden olur.Muskarinik reseptörler birçok hücre tipinde eksprese olur ve birçok hücrenin çoğalmasında rolü vardır.Bu çalışmada K562 insan eritrolösemi hücre soyunda muskarinik M3 reseptör alt tipi aracılı sinyal yollarının hücre çoğalmasındaki rolleri araştırılmıştır.Çalışmamızda, muskarinik reseptör agonisti karbakol ve/veya M3 muskarinik reseptör alt tipine özgü antagonistler ve kalsiyum kelatörleri varlığında hücre çoğalmasının ve M3 reseptör ekspresyonunun değişikliği gösterilmiştir. Muscarinic receptors belong to a seven-transmembrane receptors superfamily, which regulates different effector systems by activating heterotrimeric G proteins. Different second messenger dependent pathway being activated by each muscarinic subtype.Muscarinic receptors mediate several cellular responses, including inhibition of adenylate cyclase, breakdown of PI and modulation of K channels.Five distinct muskarinik receptor subtypes (M1-M5) have been identified using molecular and pharmacological techniques. M1, M3 and M5 receptor subtypes are coupled to efficiently to the pertusis toxin insensitive Gq protein, leading to activation of PLCβ and subsequent hydrolysis of inositol 1,5 di phosphate, while M2 and M4 receptors inhibit adenylyt cyclase via pertusis toxin-sensitive Gi/Go proteins. Many cell express a mixture of muscarinic recetor transcripts. Muscarinic cholinergic receptors changes cell proliferation in many cell types. The aim of this study is to investigate M3 muscarinic receptors play a role in K562 cell proliferation. Measure of the multiple components of M3 muscarinic receptor coupled signaling pathways were examined to test their role in K562 cell proliferation.In conclusion, we suggested that carbachol (CCh) alone/with M3 antagonist and Ca2+ chelators changed proliferation and M3 expression in K562 cells. 133

Bu çalışmada insan eritrolösemi hücre soyu olan K562 hücrelerinde Ters Traskriptaz Polimeraz Zincir Reaksiyonu kullanılarak muskarinik reseptör alttiplerinin ekspresyonu incelenmiştir. K562 insan eritrolösemi hücre soyunda muskarinik reseptör alttiplerinin ekspresyonunu incelemek için, K562 insan eritrolösemi hücreleri %10 fetal dana serumu içeren RPMI-1640 kültür ortamında %5 CO2 varlığında çoğaltılmıştır. Çoğaltılan hücreler PBS ile yıkandıktan sonra toplam RNA, guanidyum izotiyosiyonat-fenol-kloroform ekstraksiyonu yöntemi ile izole edilmiştir. İzole edilen RNA' lardan m1, m2, m3, m4 muskarinik reseptör alttipleri için uygun primerler kullanılarak Ters Transkriptaz Polimeraz Zincir Reaksiyonu (TT-PZR) yöntemi ile uygun bölgeler çoğaltılmıştır. TT-PZR yöntemi ile elde edilen ürünler %2' lik agaroz jel elektroforezinde yürütüldükten sonra UV altında görüntü alınmıştır. K562 insan eritrolösemi hücre soyunda m2, m3 ve m4 muskarinik reseptörlerinin ekspresyonunun varlığı belirlenmiştir. m1 muskarinik reseptör ekspresyonunun olmadığı gösterilmiştir.MUSCARINIC ACETYLCHOLINE RECEPTOR SUBTYPES EXPRESSION IN K562 CELLSSUMMARY:This study aimed to determine muscarinic receptor expression in K562 cells.The erythroleukemia (chronic myeloid leukemia) cell line K562 was grown in suspension using RPMI-1640 medium supplemented with %10 fetal calf serum at 37 ° C in 5% CO2 humidified atmosphere. The cells were washed with PBS buffer. Total RNA was isolated by the guanidium thiocyonate-phenol-chloroform extraction method. RNA samples were analysed by RT-PCR. Analysis of PCR reactions was performed on 2% agarose gels stained with ethidium bromide.RT-PCR analysis showed that m2, m3 and m4 muscarinic receptor subtypes were expressed in K562 cells. No expression of mRNA for m1 muscarinic receptor subtype was observed in K562 cells.