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Las glutatión S--transferasas (GST's) son una familia de enzimas detoxificantes que catalizan la conjugación del glutatión con una gran variedad de compuestos electrofílicos. Existen varios tipos de GSTs, que se diferencian por su especificidad hacia el substrato electrofílico y aunque todas comparten características estructurales generales, las diferencias en las secuencias primarias y por ende, en las estructuras de las enzimas, afectan sus propiedades catalíticas, Los aminoácidos Y6 y Y115 (en la mayoría de las GST clase mu) se han estudiado como los principalmente involucrados en las interacciones entre la enzima y el sustrato durante la catálisis de las GSTs, debido a la participación de su grupo hidroxilo en la activación y estabilización del glutatión (GSH), así como brindando asistencia electrofílica en la catálisis. Para estudiar la importancia de estos residuos fue el sitio activo de la GST clase mu del camarón Litopenaeus vannamei, los residuos de tirosina Y7 y Y116 fueron reemplazados por fenilalanina por medio de mutagénesis sitio-dirigida. Las proteínas recombinantes de ambas mutantes (Y7F y Y116) así como la enzima silvestre se obtuvieron por sobreexpresión heteróloga en Escherichia coli y se purificaron por cromatografía de afinidad hacia GSH. De la misma manera se purificó una GST nativa clase mu a partir de branquias de camarón L. vannamei. Se determinaron las constantes cinéticas de las enzimas utilizando CDNB como segundo substrato y se obtuvieron modelos estructurales de la enzima silvestre y las mutantes. Los valores de velocidad de catálisis (kcat) para la enzima silvestre recombinante resultaron muy similares a las reportadas para la GST clase mu purificada a partir de branquias. Sin embargo la eficiencia catalítica (Kcat/KmGSH) resultó mayor para la enzima recombinante, esto debido a la mayor afinidad (Km ) que presentó esta enzima por el sustrato GSH. En las mutantes la eliminación del grupo hidroxilo resultó en un ligero aumento en la Kcat de la Y116F y tuvo muy poco efecto en kcat-Km para GSH y CDNB, esto debido a la menor afinidad de la Y116. rec()mbinanles, no se ()bservaron cambios importantes en la topologla del sitio activo al comparar las mutantes con la enzima silvestre. En 9eneral, el cambio en los residuos Y7 y Y116 no so reflejó en los valores para las constantes cinéticas, lo cual podrla Indicar que la función que desemperian estos rnslduos en la catálisis, no es tan relevante para la GST de camarón.

la super óxido dismutas a (Cu Zn S OD ) y la glutatión S-t ransferas a (G ST) f orman parte de los sistemas enzimáticos de defensa antioxidante en la mayoría de los organismos. La superóxido dismutasa elimina a los radicales su peróxido , producto del metabolismo del oxígeno , mediante una reacción de dismutación . La glutatión S- transferasa, cataliza la conversión de un gran número de compuestos tóxicos por medio de la reducción del glutatión, a otros compuestos que fácilmente son desechados por el organismo. Tanto la su peróxido dismutas a como la glutatión S-t ransferas a son enzimas alta mente conservadas a nivel de secuencia de aminoácidos . Ambas enzimas se han estudiado en un gran númer o de organismos , principalmente insectos , en donde la expresión de la GST se asocia con la resistencia a varios insecticidas. En crustáceos , la información existente acerca de estas dos enzimas hasta a hora es limitada, y en especies de importancia económica, como el camarón, su estudio cobra mayor importancia. Por lo anterior , el objetivo de este trabajo fué obtener y caracterizar a los genes de C uZ nSOD y GST de camarón blanco Penaeus (Lito penaeus ) vannamei, así como detectar su expresión. La secuencia nucleotídica de CuZnSO D se obtuvo inicialmente por medio de amplificación por PCR con oligonucleótidos degenerados para unfragmento interno de CuZnSOD, la cual se donó y secuenció para confirmar su identidad . Esta Secuencia de 289 bases, que correspon de a l62% del cDNA completo , se tradujo en 96 aminoácidos y mostró la más alta similitud con CuZnSOD de la mosca Drosophilasaltans (66%), ciervo Cervuselaphus (68%) y caballo Equuscaballus (70%), además dicha secuencia contiene a todos los aminoácidos catalíticos . Este fragmento seuso como son damarcada para buscar el cDNA completo de CuZnSOD en un banco de genes de hepatopáncreas de camarón blanco, sin embargo no se tuvo éxito.

En 2013 en México, se presentó una grave disminución en la producción de camarón blanco Litopenaeus vannamei, la cual fue asociada a la presencia de cepas patógenas de la bacteria Vibrio parahaemolyticus. Estas mortalidades se asocian al síndrome de mortalidad atípica (early mortality syndrome o EMS, acute hepatopancreatic necrosis disease o AHPND). En un trabajo previo se estudió el genoma de dos cepas de Vibrio, una patógena y una inocua para el camarón. En dichos genomas se identificaron enzimas lipasas, de las cuales se seleccionó una para su estudio y caracterización, designada LipVp (Lipasa de Vibrio parahaemolyticus). Las lipasas confieren a las bacterias la capacidad de utilizar lípidos como única fuente de carbono e incluso pueden tomar parte en la virulencia de éstas. Después de seleccionar a LipVp se alineó contra otras lipasas y se modeló con el algoritmo PHYRE2, encontrándose mayor similitud con una lipasa de Pseudomonas aeruginosa. En el modelo teórico de LipVp se localizó la tríada catalítica conformada por S86, D233 e H255, 5 laminas-β interconectadas con 10 hélices-α, el agujero oxianiónico y posibles aminoácidos para formar un sitio de unión a calcio. Se diseñó un gen sintético con la secuencia de LipVp el cual fue utilizado para transformar bacterias E. coli BL21 (DE3). La LipVp recombinante se obtuvo en cuerpos de inclusión, los cuales fueron solubilizados con urea 8 M, posteriormente se dializó contra urea 4 M, para proceder a purificar la proteína por cromatografía de afinidad a metales (IMAC). El replegamiento de LipVp se realizó mediante diálisis con buffer conteniendo: Tris-HCl 55 mM pH 8.0, NaCl 10.56 mM, KCl 0.44 mM, polietilenglicol 3350 0.055%, MgCl2 2.2 mM, CaCl2 2.2 mM, L-arginina 550 mM, glutatión reducido 0.5 mM y glutatión oxidado 0.05 mM. Se determinó una Km= 4.34 mM y una Vmax= 0.018 μM/min utilizando p-nitrofenil laurato como sustrato. Por último, se comprobó la inhibición de la actividad enzimática con Orlistat® (tetrahidro lipstatin: (S)-((S)-1-((2S,3S)-3-hexil-4-oxooxetan-2-il) tridecan-2-il) 2- formamido-4-metil pentanoato). En conclusión se corroboró que LipVp codifica para una lipasa funcional, donde se predice una estructura similar a otras.

Algunas especies de Ganoderma, principalmente G. lucidum se han utilizado en la medicina tradicional asiática por más de dos milenios, como tónico medicinal, tanto cuerpos fructíferos como micelio pulverizados. El consumo de este hongo se recomienda para tratar distintos padecimientos, entre estos el cáncer. Algunas especies del género sintetizan triterpenoides con actividad antiproliferativa. Ganoderma presenta una distribución cosmopolita, con registros en zonas templadas, tropicales y desérticas. La especie más estudiada y la única que se cultiva a nivel mundial es G. lucidum, no obstante existen más de 219 en el género y muchas de ellas aún no han sido estudiadas. En este trabajo se realizaron exploraciones a distintos puntos de Sonora, con el fin de aislar cepas de Ganoderma e identificarlas taxonómicamente. Se estudiaron ejemplares de ocho especies: G. applanatum, G. curtisii, G. lobatum, G. oerstedii, G. sessile, G. sessiliforme, G. subincrustatum y G. weberianum. Este es el primer reporte de G. lobatum y G. oerstedii en Sonora, y de G. sessile y G. weberianum en México. Además, se estudió la variabilidad morfológica de una cepa de G. subincrustatum, comparando basidiomas silvestres y cultivados. El estudio mostró que los caracteres propuestos para la delimitación de las especies del género (tipo de contexto e incrustaciones, forma de los elementos de la cutícula y esporas) son constantes entre los distintos ejemplares estudiados. También se evaluó la actividad antiproliferativa de extractos de dos fases de desarrollo (micelio dicariótico y cuerpos fructíferos) de aislados de G. subincrustatum y G. weberianum de Sonora, sobre distintas líneas celulares. Se encontró que los extractos de cuerpos fructíferos presentan mayor actividad que los de micelio. Mediante cromatografía en una columna con sílica se obtuvieron 26 sub-fracciones del extracto de cuerpos fructíferos de G. subincrustatum (escogido por su alta actividad), de las cuales las fracciones F7 y F15 presentaron actividad antiproliferativa en la línea A549 (IC50: 37.9 y 41.9 μg/mL, respectivamente). Sin embargo, el extracto completo tuvo mayor actividad (IC50

Las plantas se encuentran expuestas de manera constante a diversos factores de estrés que las lleva a producir especies reactivas de oxígeno (ROS) adicionales a las generadas en el metabolismo celular, causándoles estrés oxidativo y daño celular. Para protegerse del daño oxidativo causado por ROS, las plantas cuentan con un sistema antioxidante, siendo el ascorbato (AsA) el principal antioxidante hidrosoluble en plantas. La cantidad de AsA es estrechamente controlada por sus rutas de síntesis y de reciclaje, donde el reciclaje tiene un importante rol en la respuesta y adaptación al estrés. En la vía de reciclaje de AsA, la enzima dehidroascorbato reductasa (DHAR), la cual es un miembro de la familia de las glutatión S-transferasas (GSTs) es clave para el mantenimiento del AsA reducido. El objetivo de este trabajo fue determinar las características bioquímicas y modelar la estructura tridimensional de la enzima DHAR de mango (MiDHAR). La proteína se sobreexpresó de forma heteróloga encontrándose en forma soluble y se purificó por cromatografía de afinidad a metales (Ni-NTA). Una vez purificada, se determinó su actividad enzimática así como su estabilidad a diferentes rangos de temperatura y pH. La proteína pura fue estable en un amplio rango de pH y temperatura conservando más del 80 y 75% de su actividad a pH 9 y 45°C, respectivamente. Por otra parte, MiDHAR mostró un comportamiento cinético de tipo Michaelis-Menten y se determinaron las constantes cinéticas para sus sustratos, obteniendo una Km y Vmax para GSH de 5.63mM y 84.3μM min-1 y para DHA 0.77mM y 74.0μM min-1 respectivamente. A partir de la secuencia aminoacídica de MiDHAR, se obtuvo un modelo estructural por homología de la enzima, utilizando la estructura cristalina recientemente reportada de DHAR de arroz (OsDHAR) (PDB: 5D9W) y se identificaron los posibles aminoácidos del sitio catalítico. Los resultados muestran que la MiDHAR es una enzima estable a valores de pH altos y es termoestable a las condiciones probadas, lo que podría brindarle resistencia en condiciones de estrés. Se sugiere un mecanismo catalítico de reducción tipo ping-pong, que sería necesario corroborar con otros estudios.

El mango, para ser comercializado es sometido a un tratamiento hidrotérmico (TH) para eliminar patógenos. Dicho tratamiento puede generar un estrés fisiológico que deriva en la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS). Las plantas poseen mecanismos para contrarrestar el estrés oxidativo, en los cuales intervienen compuestos y enzimas con capacidad antioxidante. Las glutatión S-transferasas (GSTs) son enzimas detoxificantes, y su substrato, el glutatión reducido, es un antioxidante. Las GSTs han sido ampliamente estudiadas por su capacidad de conjugar xenobióticos con el glutatión reducido y facilitar la eliminación de compuestos tóxicos de las células. Sin embargo, las clases phi y tau también presentan actividad peroxidasa, pudiendo reducir hidroperóxidos de ácidos grasos que pueden ser producto del estrés térmico. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto del TH sobre la expresión de las GSTs phi y tau, así como la actividad enzimática GST total en mango ‘Ataulfo’ durante su maduración poscosecha. Los mangos se sometieron a un TH (46.1º C por 75 min.) y posteriormente fueron almacenados a 20o C. Se tomaron muestras a los días 1, 3, 5, 7 y 9 de almacenamiento para extraer ARN total y sintetizar ADNc para evaluar el perfil de expresión de las GSTs phi y tau mediante PCR cuantitativo (qPCR). Para la medición de la actividad GST total se obtuvo un extracto enzimático de las mismas muestras y se midió la actividad GST utilizando GSH y CDNB como sustratos. Tanto GST phi como tau fueron estimuladas en su expresión a causa del TH los días 1, 5 y 7 de almacenamiento. En cuanto a la actividad GST total, se observó que TH aumenta de manera significativa la actividad transferasa los días 5 y 7 de almacenamiento poscosecha, sin embargo se observa un comportamiento diferente a los perfiles de expresión de GST phi y tau a lo largo del almacenamiento. La familia GST presenta gran divergencia y existe un alto grado de redundancia funcional entre clases y dentro de ellas. Sí bien las GSTs phi y tau de mango ‘Ataulfo’ tienen el residuo catalítico serina que les permite realizar la actividad transferasa, es probable que éstas también actúen como peroxidasas dependientes de glutatión como protección contra el estrés oxidativo, cuando el fruto es sometido a TH.

"El estudio de los compuestos participantes en los procesos de pigmentación ayudará a comprender el mecanismo de su movilización, el cual aún no se ha esclarecido totalmente. El objetivo de este trabajo fue caracterizar una GST de mango y determinar su interacción con antocianinas, como parte del mecanismo de transporte de antocianinas a la vacuola. En la presente investigación se muestra el análisis de la secuencia aminoacídica de una GST tipo Tau de mango (MiGSTU), con una masa molecular de 25.5 kDa. La MiGSTU recombinante se sobreexpresó de forma soluble y se purificó por precipitación con (NH4)2SO4 seguida de una cromatografía de intercambio aniónico (Q-Sefarosa). Se determinaron las constantes cinéticas de MiGSTU para sus sustratos obteniendo una Km, Vmax y Kcat para CDNB de 0.7918 mM, 80.58 μM·min-1 y 68.49 s-1 respectivamente y para GSH 0.693 mM, 105.32 μM·min-1 y 89.57 s-1 respectivamente, mostrando un comportamiento cinético de tipo Michales-Menten. La determinación de la interacción con antocianinas se realizó por medio de un ensayo de inhibición, con cianidina, peonidina, malvidina y delfinidina, observándose una mayor inhibición con cianidina (24.39%). Se realizó un análisis bioinformático mediante el Software MOE, donde se obtuvo un modelo estructural de la MiGSTU, por homología con una GST de trigo (1gwc) y se identificaron los sitios de unión a sustratos (G y H), además de los aminoácidos implicados en el transporte de antocianinas (sitio L). También se realizó un modelo in silico donde se observaron por medio de docking los posibles sitios de unión de las antocianinas en la MiGSTU, los cuales concuerdan con el sitio G. Lo anterior, aunado la inhibición de la actividad de GST presentada al utilizar antocianinas en la reacción, sugiere que existe una interacción de la MiGSTU con las antocianinas, además de su posible función detoxificante."

Las enzimas poligalacturonasas (PG), degradan los enlaces pectídicos de la pared celular durante la maduración de los frutos y por lo que su actividad se ha evaluado y sus diferentes isoformas se han identificado en varios frutos. Sin embargo, el conocimiento que se tiene sobre los genes que codifican para dichas enzimas y su expresión, es escasa. En frutos de mango, variedad “Kent”, se han reportado dos clonas parciales de cDNA PG, pero se desconoce su patrón de expresión génica durante el proceso de maduración. Es por ello, que esta investigación tiene como objetivo clonar y evaluar la expresión de al menos dos genes de poligalacturonasa (PG) durante el proceso de maduración en mangos variedad “Kent”. Para lo cual se recolectaron los frutos y se evaluaron sus parámetros fisiológicos. También se llevaron a cabo extracciones de RNA de mangos en post-cosecha (días 1,4,7,10 y 16 de almacenamiento), a partir del cuál se sintetizaron cDNAs, clonaron PGs mediante PCRs y se evaluó su expresión génica. Los mangos presentaron un comportamiento típico de un fruto climatérico. Se obtuvieron cambios drásticos en la pérdida de firmeza al día 10 de almacenamiento, lo cual coincidió con el aumento en la producción de etileno; mientras que el ángulo de color disminuyó a través del tiempo. Se lograron obtener tres cDNAs parciales correspondientes a PG (MiPG1, MiPG2 y MiPG3) y se dedujeron sus secuencias aminoacídicas. Las PGs de mango son similares a otras PGs depositadas en la base de datos NCBI y contienen los cuatro motivos funcionales característicos en las poligalacturonasas. La expresión génica de MiPG1, MiPG2 y MiPG3 fue diferencial a través del proceso de maduración de los frutos de mango. Los máximos niveles de expresión observados, se presentaron después de la máxima producción de etileno y coincidieron con el día de almacenamiento post-cosecha donde se observó la mayor pérdida de firmeza en los frutos. Estos resultados sugieren que hemos descubierto a tres genes PG asociados al proceso de maduración de los frutos de mango variedad "Kent". Palabras clave: Poligalacturonasas, Maduración, Mango (Mangifera indica L.), Firmeza.