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Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES A cardiomiopatia chagásica crônica é observada em 17-50% dos pacientes chagásicos crônicos contribuindo para morbidade e mortalidade da doença de Chagas. Até o momento não existem biomarcadores de evolução clínica descritos para a doença de Chagas, sendo necessário a realização de exames clínicos de alto custo (eletrocardiograma, ecocardiograma, raio X, enema opaco), que necessitam da presença de profissionais especializados e em muitos casos são invasivos e desconfortáveis aos pacientes. A molécula CTLA-4 tem sua expressão influenciada por infecções, é expressa em células T reguladoras e encontra-se solúvel no plasma sanguíneo. Proteínas cardíacas liberadas após lesão tecidual podem gerar a produção de autoanticorpos que contribuem para o processo de dano cardíaco. Esse estudo teve como objetivo avaliar autoanticorpos anti-troponina I, anti-mioglobina e a molécula CTLA-4 solúvel no soro como biomarcadores clínicos não invasivos para a cardiopatia chagásica crônica. A produção de IgG anti-T. cruzi, autoanticorpos IgG total anti-troponina I, anti-mioglobina, e a concentração de CTLA-4 solúvel foram determinados por ELISA no soro de 90 pacientes chagásicos crónicos portadores das formas indeterminada (n=30), cardíaca (n=30), digestiva (n=14) e cardiodigestiva (n=16), e correlacionados com à fração de ejeção do ventrículo esquerdo, índice cardiotorácico e diâmetro do átrio. Foram utilizados soros de indivíduos não infetados (n=30) como controles. Pacientes chagásicos portadores das formas clínicas indeterminada, cardíaca, digestiva e cardiodigestiva apresentaram maior produção de anticorpos IgG total anti-T cruzi, autoanticorpos IgG anti-troponina I e autoanticorpos anti-mioglobina, quando comparados aos indivíduos não infectados. Ademais, pacientes com a forma cardíaca da doença apresentaram maior produção de autoanticorpos IgG anti-mioglobina comparado a pacientes com a forma indeterminada. De maneira interessante, pacientes indeterminados apresentaram níveis normais de CTLA-4 solúvel, quando comparado a indivíduos portadores das formas clínicas cardíaca, digestiva e cardiodigestiva que apresentaram níveis reduzidos. Nossos resultados indicam que a produção elevada de autoanticorpos antitroponina-I e anti-mioglobina associada a baixa quantidade de CTLA-4 sérico podem estar associadas ao desenvolvimento da forma cardíaca da doença de Chagas. Chronic chagasic cardiomiopathy is observed in 17-50% of patients, contributing to morbidity and mortality of Chagas disease. There are no biomarkers of clinical evolution described for Chagas disease, requiring high-cost clinical examinations (electrocardiogram, echocardiogram, X-ray, opaque enema), which require the presence of specialized professionals and many cases are invasive and uncomfortable to patients. CTLA-4 is expressed in regulatory T cells and is soluble in blood plasma, CTLA-4 expression is influenced by infections. Cardiac proteins released after tissue damage can generate the production of autoantibodies that contribute to the process of cardiac damage. This study aimed to evaluate anti-troponin I, anti-myoglobin autoantibodies and CTLA-4 soluble in serum as non-invasive clinical biomarkers for chronic chagasic cardiophaty. Specific IgG production anti-T. cruzi and autoantibodies anti-troponin I, anti-myoglobin, and soluble CTLA-4 concentration were determined by ELISA in the serum of 90 chronic chagasic patients with indeterminate (n = 30), cardiac (n = 30), digestive (n = 14) and cardiodigestive (n = 16) clinical forms, and correlated with left ventricular ejection fraction, cardiothoracic index and atrial diameter. Sera from uninfected individuals (n = 30) were used as controls. Chagasic patients with indeterminate, cardiac, digestive and cardiodigestive clinical forms had higher production of total IgG anti-T cruzi and anti-troponin I and anti-myoglobin autoantibodies, when compared to uninfected individuals. In addition, cardiac patients showed higher production of anti-myoglobin IgG autoantibodies compared to indeterminate patients. Interestingly, indeterminate patients had normal levels of soluble CTLA-4, when compared to individuals with clinical cardiac, digestive and cardio-digestive forms that had reduced levels. Our results indicate that the high production of anti-troponin-I and anti-myoglobin autoantibodies associated with low soluble CTLA-4 may be associated with the development of the cardiac form of Chagas disease.

Os tripanossomatídeos são protozoários parasitos pertencentes à família Trypanosomatidae, dentre os quais destacam-se os gêneros Trypanosoma e Leishmania. Quirópteros são hospedeiros antigos e naturais de Trypanosoma cruzi e Leishmania infantum, agentes etiológicos da doença de Chagas e da leishmaniose visceral, respectivamente. Entretanto, a participação de morcegos no ciclo de transmissão do T. cruzi e da L. infantum ainda é subestimada. O objetivo deste estudo foi avaliar a taxa de infecção desses tripanossomatídeos em quirópteros capturados no município de Natal, no estado do Rio Grande do Norte. Noventa e cinco morcegos foram coletados, 50 provenientes de captura passiva em área urbana com auxílio do Centro de Controle de Zoonoses (CCZ) de Natal entre 2019 e 2020, e 45 obtidos por captura ativa, utilizando redes de neblina em área de conservação ambiental (Parque das Dunas), no município de Natal-RN. Os animais foram identificados, eutanasiados, e submetidos a coleta de fragmentos de fígado, baço e pele. O DNA foi extraído e técnicas de PCR para a amplificação do kDNA do T. cruzi e para amplificação de uma região específica do gene hsp70 que detecta o gênero Leishmania foram realizadas. A espécie Artibeus planirostris foi a mais prevalente entre os morcegos capturados em ambiente urbano e no Parque das Dunas, e apresentou 95% e 56% de infecção por Leishmania spp. e T. cruzi, respectivamente. As taxas de infecção dos morcegos por T. cruzi, Leishmania spp, e coinfectados por T. cruzi/Leishmania spp. foram de 56% (53/95), 73% (69/95) e 41% (39/95), respectivamente. Leishmania spp. foi detectada na pele de 55% (43/79) dos animais avaliados. Animais capturados no Parque das Dunas apresentaram a maior taxa de infecção relativa por T. cruzi (67%) (p=0,0401), quando comparado a morcegos capturados no ambiente urbano (46%). O sexo e o hábito alimentar dos quirópteros não influenciou a taxa de infecção por T. cruzi. Quirópteros frugívoros (90%) apresentaram maior taxa de infecção por Leishmania spp., quando comparados a insetívoros (65%) (p=0,0067) e nectarívoros (33%) (p=0,0005). Por outro lado, o sexo (p>0,9999) e o local de captura (urbano x Parque das Dunas) (p=0,3587) não influenciaram a taxa de infecção por Leishmania spp. Nossos resultados demonstram elevada taxa de infecção por tripanossomatídeos em quirópteros capturados no município de Natal-RN, indicando que poderiam participar do ciclo de transmissão epidemiológico de Leishmania spp. e T. cruzi. Trypanosomatids are parasite protozoa belonging to the Trypanosomatidae family, which inhere Trypanosoma cruzi and Leishmania infantum, etiologic parasites of Chagas disease and visceral leishmaniasis. Chiropterans are ancient and natural hosts of T. cruzi and L. infantum. However, the participation of bats in the epidemiological cycle of T. cruzi and L. infantum is still underestimated. The aim of this study was to evaluate the infection rate by trypanosomatids in chiropterans captured in the city of Natal-RN. Ninety-five bats were collected together with Zoonosis Control Center (CCZ) of Natal between 2019 and 2020, 50 animals from passive capture in urban areas and 45 obtained from active capture, using fog nets, in an environmental conservation area (Parque das Dunas) in the municipality of Natal-RN. Animals were identified, euthanized, and fragments of liver, spleen and skin were collected. DNA was extracted and PCR for T. cruzi kDNA and hsp70 which detects the Leishmania genus were performed. The species Artibeus planirostris was the most prevalent among bats captured in urban environments and Parque das Dunas, presented 95% and 56% of infection by Leishmania spp. and T. cruzi, respectively. The total rate of bats infection by T. cruzi, Leishmania spp., and co-infected T. cruzi/Leishmania spp. was 56% (53/95), 73% (69/95) and 41% (39/95), respectively. Leishmania spp. was detected into the skin of 55% (43/79) of animals evaluated. Animals captured in Parque das Dunas showed a higher infection rate by T. cruzi (67%) (p=0,0401), when compared to bats captured in the urban environment (46%). Sex and eating habits of chiropterans did not influence the infection rate by T. cruzi. Fruit-eating chiropterans (90%) had a higher rate of infection by Leishmania spp., when compared to insectivores (65%) (p=0,0067) and nectarivores (33%) (p=0,0005). On the other hand, sex (p> 0.9999) and place of capture (urban vs. Parque das Dunas) (p = 0.3587) did not influence the infection rate by Leishmania spp. Our results demonstrate a high infection rate by trypanosomatids in chiropterans captured in the city of Natal-RN, indicating that they could participate in the epidemiological transmission cycle of Leishmania spp. and T. cruzi.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq Os radicais livres, produzidos para a manutenção da infecção pelo Trypanosoma cruzi (T. cruzi) no humano na fase crônica da Doença de Chagas, tem relação direta com o desenvolvimento de cardiomiopatias. Antioxidantes vem sendo usados como aliados no tratamento dessa condição. Os nitróxidos são radicais livres estáveis capazes de interagir com espécies reativas, reduzindo sua carga no organismo e, consequentemente, agindo na redução do estresse oxidativo corporal. O Tempol é o nitróxido mais estudado, e a partir da adição outros grupamentos, pode-se obter diversos compostos, como o Bztempo (BZT). Complexos de inclusão com a β-ciclodextrina (βCD) podem ser obtidos para a melhoria de características físico-químicas e a biodisponibilidade de diversos compostos. Tendo isso exposto, o seguinte estudo buscou obter racionalmente um complexo de inclusão contendo BZT e a βCD para o tratamento da infecção por T. cruzi. O planejamento dos complexos de inclusão foi feito a partir de metodologias in sílico, sendo elas Relação Quantitativa Estrutura-Propriedade (QSPR-2D) e Energia de Interação Linear (LIE). Os sistemas obtidos por mistura física (MF), malaxagem (MAL) e co-evaporação (CE), caracterizados por Espectroscopia de Absorção na Região do Infravermelho (FTIR), Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV), Calorimetria Exploratória Diferencial (DSC) e Análise Termogravimétrica (TG). A atividade in vitro foi feita pela inibição de resazurina em duas formas evolutivas da cepa Y de T. cruzi, epimastigota e tripomastigota, frente as amostras de BZT, βCD, MAL e CE. O modelo de predição obtido por QSPR-2D aliado ao LIE foi capaz indicar a viabilidade dos complexos de inclusão entre o BZT e βCD, demonstrando energias livres favoráveis para a interação. O FTIR indicou a formação de complexos de inclusão por MAL e CE, pois obtiveram espectros que diferem das bandas características dos compostos isolados. As fotomicrografias obtidas por MEV demonstraram a natureza cristalina do BZT e também foram indicativos da formação dos complexos por alterações na superfície dos sistemas, comparado aos compostos isolados. O DSC dos sistemas obtidos de MF e MAL apresentaram picos endotérmicos característicos dos compostos isolados. Por sua vez, o CE apresentou um perfil térmico diferente, com eventos próprios da mistura. A TG demonstrou que os sistemas obtidos por MAL e CE incrementaram a proteção térmica do BZT isolado. No tocante da atividade in vitro, a βCD não interferiu na atividade para ambas as formas evolutivas e os complexos de inclusão testados, MAL e CE, incrementaram a atividade do BZT isolado. Para formas epimastigotas, MAL e CE não chegaram a obter os mesmos resultados do fármaco usado como controle positivo, o Benznidazol (BZND). Para essa forma evolutiva, entre eles, o MAL obteve maior atividade em comparação ao CE até a concentração 50 µg/mL e a partir de 50 µg/mL, o CE obteve maior atividade. Para as formas tripomastigotas, o MAL obteve atividade semelhante ao BZND nas concentrações de 10 e 25 µg/mL. Em 50, 100 e 1 µg/mL, o MAL se sobressaiu em relação ao BZND, e ao outro método de obtenção testado, o CE. Os resultados demonstraram que os complexos de inclusão obtidos com BZT por MAL e CE podem ser aliados no tratamento da Doença de Chagas. The free radicals produced to the maintenance of Trypanossoma cruzi’s (T. cruzi) infection in the human, under the chronic phase of Chagas Disease has a direct relation with the development of cardiomyopathies and antioxidants are being used as allies to the treatment of this condition. Nitroxides are stable free radicals that can interact with reactive species, reducing its load in the organism and, consequently, acting in the reduction of the corporal oxidative stress. Tempol is the most studied nitroxide and, through the addition of functional groups, other molecules can be obtained, such as Bztempo (BZT). The inclusion complexes with β-cyclodextrin (βCD) can be obtained to enhance the physicochemical properties and bioavailability of many compounds. Thus, the following study aims to rationally achieve an inclusion complex with BZT and βCD to the treatment of the infection by T. cruzi. The inclusion complexes were planned by two in silico methodologies, Quantitative Structure-Property Relationship (QSPR-2D) and Linear Interaction Energy (LIE). The systems were achieved by physical mixture (PM), kneading (KN) and co-evaporation (CE) methods, and characterize by Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FTIR), Scanning Electron Microscopy (SEM), Differential Scanning Calorimetry (DSC) and Thermogravimetric Analysis (TG). The in vitro activity was made by resazurin’s inhibition in two T. cruzi’s evolutive forms (Y strain) facing the samples of BZT, βCD, KN and CE. The prediction model achieved by QSPR-2D method, allied to LIE, was capable to indicate the viability of the inclusion complexes between BZT and βCD, showing favorable free-energies to the interaction between the compounds. The FTIR results have indicated the inclusion complexes formation by KN and CE, due to the differences shown in their spectra related to the isolated compounds. The photomicrographs achieved by SEM presented indicatives of the inclusion complex formation due to the changes in the surface of the systems, comparing to the isolated samples. The DSC of the systems achieved by PM and KN methods has exhibited characteristic endothermic events of the isolated compounds. By other hand, the CE has shown a thermal profile that differs from the isolated compounds, with characteristic events of the mixture itself. The TG has shown that KN and CE samples have enhanced the thermal protection of the BZT. Regarding the in vitro activity, the βCD has not interfered in the activity of the both evolutive forms and, the testes systems, KN and CE, had increased the activity of isolated BZT. To the epimastigote forms, KN and CE hasn’t reached close results to the positive control drug, Benznidazole (BZND). To this evolutive form, KN complex had a better activity in comparison to CE until the concentration of 50 µg/mL, and after this concentration, the CE had a better activity. To the trypomastigotes, KN had a similar activity to BZND in the concentrations of 10 and 25 µg/mL. In 50, 100 and 1 µg/mL, the KN has stand out in relation to BZND, and to the other system achieved, CE. The results have shown that the inclusion complexes achieved with BZT by KN and CE can be allies in the treatment of Chagas Disease.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Este trabalho avaliou a presença, a distribuição de triatomíneos e unidades distintas de tipagem (DTUs, Discrete Typing Units) do Trypanosoma cruzi isolados de vetores em diferentes mesorregiões do estado do Rio Grande do Norte (RN). As buscas ativas dos triatomíneos foram realizadas em áreas rurais de 21 municípios, 71 comunidades rurais e 345 unidades domiciliares no período de 2015 a 2019. A genotipagem foi realizada pelos marcadores do gene mitocondrial da subunidade 2 do citocromo oxidase (CO II), domínio divergente D71 do gene 24Sα do DNA ribossomal (rDNA) e espaçador intergênico dos genes miniexon (SL-IR).A infestação foi observada em 7,5% (26/345) dos intradomicílios e em 16,2% (56/345) dos peridomicílios pesquisados. A presença de ninfas no peridomicílio foi observada em 94,7% (45/47) das unidades domiciliares infestadas, indicando colonização neste ambiente. Um total de 1.084 triatomíneos foram capturados em ambientes antrópicos e silvestres, sendo o Triatoma brasiliensis (84,5%) a espécie mais encontrada, seguida de Triatoma pseudomaculata (14,9%), Panstrongylus lutzi (0,5%), Rhodnius nasutus (0,1%). O T. brasiliensis foi a única espécie encontrada no intradomicílio, peridomicílio e ambiente silvestre, e também infestou a maior variedade de ecótopos. A infecção natural pelo T. cruzi foi observada em 11% (96/872) triatomíneos, sendo T. brasiliensis a espécie com maior número de exemplares (95,0%). Dos 96 triatomíneos infectados, foi possível isolar o parasito de 33 (34,4%) amostras, todas foram genotipadas. A DTUI: haplótipo A no COII, rDNA 2 e SL-IR com 150pb foi identificada em 51,5% (17/33) dos isolados do parasito no peridomicílio infectando T. brasiliensis nas três mesorregiões estudadas, e T. pseudomaculata, na mesorregião Oeste. A DTU II: haplótipo C no COII, rDNA 1, SLIR com 150pb foi observado em 9,1% (3/33) dos isolados em T. brasiliensis apenas na mesorregião Central tanto no peridomicílio quanto em ambiente silvestre. Enquanto a DTU III: haplótipo B no COII, rDNA 2, SL-IR com 200pb estava em 27,3% (9/33) das amostras e também foi encontrada em todas as mesorregiões, no intradomicílio na mesorregião Oeste, em áreas silvestres no Centro e em peridomicílio no Agreste. A proximidade e até sobreposição de áreas de ocorrência dos genótipos foi observada em várias áreas. Em Caicó, este fato foi evidenciado pela detecção de infecções mistas com TcI e TcII. Estes resultados mostram que o T. brasiliensis continua sendo a espécie com maior importância epidemiológica no semiárido do RN, devido à ampla distribuição geográfica, alto grau de adaptação aos diferentes ambientes, ecótopos, elevado índice de infecção natural pelo T. cruzi e a diversidade de DTUs, e reforçam a necessidade de vigilância entomológica contínua no estado, a fim de impedir o contato desta espécie com os seres humanos e animais domésticos. This work evaluated the presence, distribution of triatomines and discrete typing units (DTUs) of Trypanosoma cruzi isolated from vectors in different mesoregions of the state of Rio Grande do Norte (RN). The captures of triatomines were carried out in rural areas of 21 municipalities, 71 rural communities e 345 domiciles in the period from 2015 to 2019. The genotyping was performed using the markers mitochondrial cytochrome oxidase subunit 2 (COII) gene, the region of the 24Salpha rRNA, spliced leader intergenic region (SL-IR). The infestation was observed in 7.5% (26/345) of households and 16.2% (56/345) of the surveyed households. The presence of nymphs in the home was observed in 94.7% (45/47) of the infested households, indicating colonization in this environment. A total of 1,084 triatomines were captured in anthropic and wild environments, with Triatoma brasiliensis (84.5%) being the most found species, followed by Triatoma pseudomaculata (14.9%), Panstrongylus lutzi (0.5%), Rhodnius nasutus (0.1%). T. brasiliensis was the only species found in the home, peridomicile and wild environment, and also the one that was able to infest the largest variety of infested ecotopes. Natural infection by T. cruzi was observed in 11.0% (96/872) triatomines, with T. brasiliensis being the species with the highest number of specimens (95.0%). Of the 96 infected triatomines, it was possible to isolate the parasite from 33 (34.4%) samples, all of which were genotyped. DTU I: haplotype A in COII, rDNA 2 e SL-IR with 150pb (51.5%; 17/33) was identified in the peridomicile infecting T. brasiliensis in the three studied mesoregions, and T. pseudomaculata, in the western mesoregion. DTU II: haplotype C in COII, rDNA 1, SL-IR with 150pb: (9.1%; 3/33) was found in T. brasiliensis only in the Central mesoregion, both in the home and in the wild. DTU III: haplotype B in COII, rDNA 2, SL-IR with 200pb:(27.3%, 9/33) was also found in all mesoregions, in the home area in the West mesoregion, in wild areas in the Center and the home area in Agreste. The proximity and even overlap of areas of occurrence of the genotypes were observed in several areas. In Caicó, this fact was evidenced by the detection of mixed infections with TcI and TcII. These results show that T. brasiliensis remains the species with the greatest epidemiological importance in the semi-arid region of RN, due to its wide geographical distribution, high degree of adaptation to different environments and ecotopes, high rate of natural infection by T. cruzi and the diversity of DTUs that can house, and reinforce the need for continuous entomological surveillance in the state, in order to prevent contact of this species with humans and domestic animals.

Os nematoides gastrintestinais são uma das principais preocupações de produtores no que diz respeito a sanidade de pequenos de ruminantes. A ocorrência da resistência anti-helmíntica, em função do uso indiscriminado de medicamentos anti-helmínticos, tem favorecido investigações sobre o uso de tratamentos alternativos. A Calotropis procera pertence à família Apocynaceae, popularmente conhecida como “bombardeira”, “flor de seda”, “algodoeiro de seda” e “rosa cera”, nativa da África e Índia, a espécie, apresenta boa adaptabilidade às condições semiáridas do Nordeste brasileiro. Relatos dessa planta por produtores rurais indicam o uso na alimentação animal e no alívio de distúrbios gastrintestinais. Dessa forma, este estudo objetivou avaliar o potencial anti-helmíntico do extrato hidroetanólico das folhas da C. procera por meio de ensaios in vitro e in vivo em nematóides gastrintestinais de ovinos naturalmente infectados. O experimento foi divido nas seguintes etapas: I. Preparo do extrato e estudo fitoquímico; II. Avaliação da atividade anti-helmíntica in vitro; III. Avaliação da Citotoxicidade e Toxicidade oral aguda e IV. Ensaio Clínico. O extrato que apresentou melhor perfil fitoquímico e rendimento foi o extrato em etanol 70% preparado na proporção 1g/20ml (planta/solvente), por meio da triagem fitoquímica foi observada a presença de metabólitos secundários pertencentes aos grupos dos flavonoides, saponinas, alcaloides e fenois. Ainda, a análise por Cromatografia em Camada Delgada, sugeriu a presença de rutina e canferol. Na análise por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência Aclopada a Espectofotômetro de Massas Ion – Trap foi possível identificar 21 compostos fenólicos. Em relação ao estudo in vitro para avaliação da atividade anti-helmíntica, o extrato de C. procera apresentou um percentual de inibição da eclodibilidade de ovos superior a 90% na concentração de 24 mg/ml e de 100 % nas concentrações superiores a 36 mg/ml após 48 h de incubação. No teste do desenvolvimento larval, mais de 90% das larvas permaneceram em estádio rabditóide em concentrações superiores a 6 mg/ml do extrato de C. procera. A avaliação da citotoxicidade pelo ensaio de MTT (brometo de [3-(4,5-dimetiltiazol-2yl)-2,5-difenil tetrazolium]) mostrou que as concentrações de 1 a 1.000 µg/ml do extrato não apresentaram citotoxicidade quando comparadas ao controle negativo. O teste de toxicidade oral aguda em ratos, não apresentou mortalidade nas doses de 1.000 mg/Kg e 2.000 mg/Kg, via oral, assim como, não foram observadas alterações significativas nos parâmetros hematológicos e bioquímicos nos grupos tratados. Os resultados apresentados no ensaio clínico com ovinos demonstraram uma redução significativa (76%) pós-tratamento, no 14º dia na contagem de ovos por grama de fezes, quando administrada a dose oral única de 500 mg/Kg. Não foram observadas alterações hematológicas e bioquímicas que evidenciem toxicidade hepática e renal nos animais tratados com o extrato de C. procera. Pode-se concluir que esse estudo forneceu evidências da atividade anti-helmíntica do extrato das folhas da C. procera em nematóides gastrintestinais de ovinos naturalmente infectados. Embora o extrato da C. procera possa não ter um efeito anti-helmíntico altamente eficaz (>90%), o efeito redutor observado nesse estudo pode ser de grande valor em programas de controle integrado de parasitos. Gastrintestinal nematodes are one of the main concerns of producers regarding the sanity of small ruminants. The occurrence of anthelmintic resistance, due to the indiscriminate use, has favored investigations on the use of alternative treatments. The C. procera belonging to the family Apocynaceae is popularly known as "bombardeira", "silk flower" and "silk cotton". Native to Africa and India, the species shows good adaptability to the semi-arid conditions of the Brazilian Northeast, reports of this plant by rural producers indicate the use in farm animal feed and the relief of gastrointestinal disorders. Thus, this study aimed to evaluate the anthelmintic potential of the hydroethanolic extract of C. procera leaves by means of in vitro and in vivo assays on gastrintestinal nematodes of naturally infected sheep. The experiment was divided in stages: I. Phytochemical screening; II. Evaluation of antihelmintic activity in vitro; III. Evaluation of toxicity and IV. Clinical Trial. As a result, phytochemical screening showed the presence of secondary metabolites belonging to the flavonoids, saponins, alkaloids and phenols. Thin Layer Chromatography analysis suggested the presence of rutin and canferol. Analysis by HPLC-IT MS / MS, identified the presence of 21 phenolic compounds. The extract of C. procera leaves had a percentage of egg hatchability greater than 90% at 24 mg/ml and 100% at concentrations higher than 36 mg/ml after 48 h of incubation. In the larval development test, more than 90% in stage rabbtoid larva at concentrations greater than 6 mg/ml of the C. procera leaves extract. The MTT assay showed that concentrations of 1 to 1.000 μg/ml of the extract showed no cytotoxicity when compared to the negative control. The acute oral toxicity test in rats showed no mortality at doses of 1.000 mg/Kg and 2.000 mg/Kg orally, as well as no significant changes in hematological and biochemical parameters in the treated groups. The results presented in the clinical trial with sheep showed a significant reduction (76%) on the 14th day in the egg count per gram of faeces after treatment when the single oral dose of 500 mg/Kg was administered. No hematological and biochemical alterations have been observed that show hepatic and renal toxicity in the animals treated with the C. procera extract. It can be concluded that this study provided evidence of the anthelmintic activity of C. procera leaf extract in gastrintestinal nematodes of naturally infected sheep. Although C. procera extract may not have a highly effective anthelmintic effect (> 90%), the reducing effect observed in this study may be of great value in integrated parasite control programs.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq A suscetibilidade do Triatoma brasiliensis a infecção por DTUs I, II e III do Trypanosoma cruzi encontradas no Estado do Rio Grande do Norte foi avaliada experimentalmente. Ninfas de T. brasiliensis foram alimentadas por infecção direta e indireta com os isolados 3188 (TcI), RN79/RN25 (TcII) e Pl1.10.14 (TcIII) em infecções simples ou mistas. O conteúdo intestinal foi avaliado por exame direto, xenocultura e Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) do kDNA. Em seguida, a caracterização dos isolados foi realizada com os marcadores: Gene mitocondrial citocromo Oxidase subunidade II (CO II), gene 24Sα do DNA ribosomal (rDNA) e espaçador Intergênico (SL-IR). Na infecção direta, a positividade das técnicas foi de 30,0%(15/50) no exame direto, 18,0% (9/50) em xenocultura e 88,0% (44/50) na PCR do kDNA. Enquanto na infecção indireta, a positividade no exame direto foi de 5,4%(3/56) e na xenocultura de 25,0% (14/56) e PCR de 41,1% (23/56). Ao comparar as duas técnicas, a infecção direta resultou em percentual de positividade de infecção superior aa infecção indireta. A PCR do kDNA identificou o T. cruzi nas infecções experimentais no T. brasiliensis tanto em infecção direta como indireta com os percentuais de positividade superiores aos verificados nos exames direta e xenocultura. Na caracterização molecular do T. cruzi nos re-isolados foi observado o mesmo perfil do isolado antes e após a infecção simples. Nas infecções mistas foi observado a presença dos dois isolados ou somente um. Os dados evidenciaram a susceptibilidade do T. brasiliensis as DTU´s I, II III, com elevados índices de infecção simples e mistas reforçando a importância do T. brasiliensis na epidemiologia da infecção pelo T. cruzi no Rio Grande do Norte. The susceptibility of Triatoma brasiliensis to infection by Trypanosoma cruzi DTUs I, II and III found in the State of Rio Grande do Norte was evaluated experimentally. Nymphs were fed using direct and indirect xenodiagnosis with the isolates 3188 (TcI), RN79/RN2 (TcII) and Pl1.10.14 (TcIII) in simple or mixed infections. The intestinal contents were evaluated by direct exam, xenoculture and kDNA polymerase chain reaction (PCR). Then, the characterization of isolates was used the cytochrome oxidade subunit 2 gene (COII), 24Sα ribosomal DNA gene (rDNA) and the spliced-leader intergenic region of the mini-exon gene (SL-IR) as markers. In the direct xenodiagnosis, the direct exam presented 30.0%(15/50) of positivity, the xenoculture 18.0%(9/50) and the kDNA PCR 88.0% (44/50). Meanwhile, the indirect xenodiagnosis showed 5.4%(3/56) of positivity to the direct exam, 25.0%(14/56) to xenodiagnosis and 41.1%(23/56) to kDNA PCR. Comparing the techniques, the direct xenodiagnosis showed better results than the indirect procedure. The PCR identified the T. cruzi in both types of infection, with higher positivity than direct exam and xenoculture. With respect the molecular characterization, the re-isolates showed the same profile before and after the simple infections. In the mixed infections were verified two or only one isolate. The data demonstrated the susceptibility of T. brasiliensis to DTUs I, II and III, with high rates in simple and mixed infections reinforcing the importance of T. brasiliensis to the epidemiology of T. cruzi infection in Rio Grande do Norte.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Toxoplasmosis, provoked by the intracellular parasite Toxoplasma gondii, is one of the most prevalent parasitoses in the world. In humans, transmission occurs by three evolutionary forms of the parasite: oocysts, tissue cysts and tachyzoites. Wild and domestic felines are definitive hosts. The ocular form of toxoplasmosis can be of congenital origin with early or late clinical manifestations, or acquired after birth. T. gondii is considered the main culprit for most cases of infectious uveitis. This study aimed at assessing ocular toxoplasmosis, relating it to factors associated to the patient s lifestyle and describing the epidemic-serological and clinical profile of affected individuals. A cross-sectional study was conducted with a population of 159 patients. Univariate analysis (odds ratio) was used to evaluate the data, with a confidence interval of 95% and p-value < 0.05. A prevalence of 4% of ocular toxoplasmosis was observed in the population of patients treated at an ophthalmological clinic. Of patients directly examined by immunoenzymatic assay (MEIA-AxSYM®- Microparticle Enzyme Immune Assay), considering only uveitis, a frequency of anti-T. gondii of 73%, most of whom exhibited titulation between 40-99 UI IgG/mL. With respect to location of ocular lesions, bilaterality was observed in 57% of patients assessed by the ophthalmoscopy technique. When compared with the results of an active search of medical records, a similarity in ocular toxoplasmosis (74%) and bilateral lesion location (55%) was observed. Type I lesion was the most frequent type observed, with intraocular disposition in the macula. An epidemiological survey revealed that direct contact with cats; consuming raw or poorly cooked meat and direct contact with the soil were significantly associated with greater likelihood of acquiring ocular toxoplasmosis. Sample characterization in relation to age range was significant for patients between 31 and 40 years [χ², chi-square test (p = 0.04)], but population traits such as schooling, sanitary district, and monthly income were not significant. Results confirm that ocular toxoplasmosis is widely distributed in the metropolitan area of Natal, Brazil, with significant prevalence of ocular lesions provoked by T.gondii. It is suggested that sanitary authorities exert greater control in order to minimize the risk of toxoplasmic infection, mainly in pregnant women. A toxoplasmose, provocada pelo parasito intracelular Toxoplasma gondii, é uma das parasitoses mais prevalentes em todo o mundo. Nos humanos, a transmissão ocorre por meio das três formas evolutivas do parasito: oocistos, cistos tissulares e taquizoítos. Os felídeos, silvestres ou domésticos, são os hospedeiros definitivos. A forma ocular da toxoplasmose pode ser de origem congênita com manifestações clínicas precoces ou tardias, ou ainda ser adquirida após o nascimento. O T. gondii é considerado o principal responsável pela maioria dos casos de uveítes infecciosas. Este estudo avaliou a toxoplasmose ocular, relacionando-a com fatores associados ao modo de vida dos pacientes e descrever um perfil epidêmico-sorológico e clínico dos indivíduos acometidos. Foi realizado um estudo seccional, com uma população de 159 pacientes. Para avaliação dos dados observados foi utilizada a análise univariada com cálculo de Odds Ratio, tendo como índice de confiança de 95% e o valor de p < 0,05. Foi observada uma prevalência de 4% de toxoplasmose ocular na população de pacientes atendidos na clínica oftalmológica. Dos pacientes examinados diretamente por ensaio imunoenzimático (MEIA-AxSYM®- Microparticle Enzyme Imune Assay), considerando apenas as uveítes, foi verificada uma freqüência de anti- T. gondii de 73%, a maioria dos pacientes apresentaram titulação entre 40-99 UI IgG/mL. Quanto à localização da lesão ocular foi observada a bilateralidade em 57% dos pacientes avaliados pela técnica de oftalmoscopia. Quando comparados com os resultados da busca ativa de prontuários se observou uma similaridade na freqüência de prevalência para toxoplasmose ocular (74%), e 55 % quanto a localização bilateral da lesão. Quanto ao tipo de lesão observada, a mais freqüente foi a lesão do tipo I, com disposição intraocular na mácula. O inquérito epidemiológico revelou que os fatores de riscos: o contato direto com gatos, o consumo de carne crua ou mal cozida e o contato direto com o solo foram significativamente associados com as maiores chances de adquirir toxoplasmose ocular. A caracterização da amostra em relação à faixa etária foi significativa para pacientes entre 31-40 anos [χ², Teste do qui-quadrado (p = 0,04)], porém características populacionais tais como escolaridade, distrito sanitário, renda mensal não tiveram significância segundo esse teste estatístico. Os resultados confirmam que a toxoplasmose ocular está amplamente distribuída na cidade do Natal, com significativa prevalência de lesões oculares provocadas pelo T.gondii. É recomendável um maior controle por parte das autoridades sanitárias, visando minimizar o risco de infecção toxoplásmica em toda população.