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Dissertação de Mestrado em Química apresentada à Faculdade de Ciências e Tecnologia A permeabilidade dos solutos através da barreira hematoencefálica (BBB) é dependente do seu peso molecular, carga, lipofilicidade, anfifilicidade e tamanho da molécula. O Gd-DOTA é muito utilizado em Imagiologia de Ressonância Magnética como agente de contraste positivo, na deteção de tumores cerebrais. No entanto, a sua passagem para o Sistema Nervoso Central apenas ocorre quando a BHE se encontra comprometida, devido à sua elevada hidrofilicidade. De modo a contornar esta problemática foram sintetizados dois derivados do Gd-DOTA, através da adição de uma cadeia alquílica de quatro e oito carbonos ao anel do macrocíclo.A velocidade de permeação do Gd-DOTA foi determinada por ICP-MS. Com este objectivo, o complexo metálico foi encapsulado em vesículas unilamelares grandes (LUV’s) de POPC, e o composto que permeou a membrana foi separado do que ainda se encontrava encapsulado utilizando cromatografia de exclusão. A permeabilidade do Gd-DOTA foi caracterizada às temperaturas de 40, 50 e 60 , obtendo-se por extrapolação um coeficiente de permeabilidade através da membrana a igual a 5.8×10-13 cm/s a 37 C.A interação de um dos novos complexos metálicos sintetizados (Gd-DOTA-C8) com as membranas lipídicas, foi estudada através da determinação do coeficiente de partição com recurso a diferentes técnicas: Calorimetria de Titulação Isotérmica (ITC), relaxometria, efeito na temperatura de transição de fase do lípido, variação no tamanho dos LUVs (por dispersão dinâmica de luz, DLS) e variação na carga dos LUVs (através da medição do potencial zeta). Nenhuma das abordagens permitiu caracterizar com rigor a afinidade do Gd-DOTA-C8 para as membranas lipídicas, os estudos forneceram, no entanto, alguma informação importante. Os estudos de ITC mostraram que o complexo forma agregados quando em solução aquosa em concentrações na ordem dos mM, tendo-se obtido o valor de 0.11 mM para concentração crítica de agregação em tampão fosfato salino a 37 C. Comos estudos de relaxometria, obtiveram-se os valores das velocidades de relaxação longitudinal e transversal do novo complexo sintetizado, sendo ligeiramente superiores às observadas para o Gd-DOTA. Estes resultados sugerem que os agregados formados pelo Gd-DOTA-C8 são de pequenas dimensões. Observou-se ainda que o Gd-DOTA-C8 não influencia significativamente a temperatura de transição de fase de membranas de DPPC. No entanto, a adição de concentrações crescentes do complexo a lipossomas de POPC, conduz a um aumento no tamanho das partículas em solução e a uma variação no seu potencial zeta que se torna mais negativo. Foram ainda efetuados estudos preliminares para uma possível quantificação do ião Gd3+ em soluções contendo Gd-DOTA, utilizando o corante laranja de xilenol. The permeability of solutes across the blood-brain barrier (BBB) is dependent on their molecular weight, charge, lipophilicity, amphiphilicity and molecule size. Gd-DOTA is widely used in Magnetic Resonance Imaging as a positive contrast agent in the detection of brain tumors. However, its passage to the Central Nervous System only occurs when a BBB is compromised, due to its high hydrophilicity.To get around this problem, two Gd-DOTA derivatives were synthesized, through the addition of an alkyl chain of four and eight carbons to the macrocycle ring.The permeation rate of Gd-DOTA was provided by ICP-MS. For this purpose, the metal complex was encapsulated in large unilamellar vesicles (LUV's) of POPC, and the compound that permeated the membrane was separated from what was still encapsulated using exclusion chromatography. The permeability of Gd-DOTA was characterized at temperatures of 40, 50 and 60ºC, obtaining by extrapolation of the permeability coefficient through the membrane a equal to 5.8 × 10-13 cm/s at 37ºC.The interaction of one of the new synthesized metal complexes (Gd-DOTA-C8) with lipid membranes was studied by determining the partition coefficient using different techniques: Isothermal Titration Calorimetry (ITC), relaxometry, effect on temperature of lipid phase transition, change in size of LUVs (by dynamic light scattering, DLS) and change in charge of LUVs (through measurement of zeta potential). None of the bindings accurately characterize the affinity of Gd-DOTA-C8 for lipid membranes, the studies provided, however, some important information. ITC studies differentiated that the complex forms aggregates when in aqueous solution in accordance with the order of mM, having a predicted value of 0.11 mM for critical aggregation concentration in phosphate buffered saline at 37ºC. As relaxometry studies, the values of the longitudinal and transversal relaxation variations of the new synthesized complex were obtained, very light to those observed for Gd-DOTA. These results obtained that the aggregates formed by Gd-DOTA-C8 are of small dimensions. It was further observed that Gd-DOTA-C8 does not evolve at the phase transition temperature of DPPC membranes. However, the addition of complex enhancers to POPC liposomes leads to an increase in the size of the particles in solution and a variation in their zeta potential which becomes more negative.Preliminary studies were also carried out for a possible quantification of the Gd3 + ion in solutions containing Gd-DOTA, using the xylenol orange dye.

Trabalho Final de Mestrado para obtenção do grau de Mestre em Engenharia Química e Biológica Submitted by Isabel Melo (imelo@sa.isel.pt) on 2022-01-25T11:08:26Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao.pdf: 2918184 bytes, checksum: b68572f0ff492e4d83286f624fbc0337 (MD5) Made available in DSpace on 2022-01-25T11:08:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao.pdf: 2918184 bytes, checksum: b68572f0ff492e4d83286f624fbc0337 (MD5) Previous issue date: 2021-07 info:eu-repo/semantics/publishedVersion

Hoje em dia, vivemos num mundo cada vez mais digital, sendo esta uma realidade a que as empresas têm de se adaptar para se manterem competitivas no mercado. Desta forma, as redes sociais são uma parte integrante destas novas adaptações, uma vez que grande parte da população as utiliza diariamente. Com esta constante evolução, surgiram os influenciadores digitais, que vieram alterar a forma como as pessoas escolhem os produtos e serviços que pretendem adquirir. Os influenciadores digitais conseguem reunir grandes audiências, constituídas por outros indivíduos predispostos a consumir os seus conteúdos e que se deixam influenciar, seja através dos seus comportamentos ou até mesmo na intenção de compra, algo que se observa bastante no setor da moda. Neste sentido, o presente trabalho de investigação pretende analisar o impacto que os influenciadores digitais de moda exercem na intenção de compra dos consumidores, tendo em conta os diversos fatores relacionados com as etapas deste processo. Por conseguinte, de modo a alcançar este objetivo, foi traçado um modelo concetual, construído de acordo com a literatura, que traduzisse as possíveis relações de interdependência que podem existir entre as diferentes variáveis que antecedem a intenção de compra de produtos de moda. De seguida, foram formuladas dezoito hipóteses testadas na parte empírica da tese, recorrendo a um inquérito por questionário com aplicação online, distribuído através de redes sociais. Foi obtida uma amostra de 207 respondentes, o que permite observar os antecedentes da intenção de compra, utilizando a análise fatorial exploratória e a análise de regressão linear múltipla. Os resultados obtidos mostram que a expertise e a confiança do influenciador digital afetam positivamente o envolvimento com o processo da mensagem. Já o envolvimento com o processo da mensagem exerce um efeito positivo no valor percebido da marca, no engagement com a marca e também na intenção de compra. Por sua vez, a homofilia, entre o influenciador digital e o consumidor, influencia o engagement com a marca. Realce-se que o valor percebido da marca assume um papel relevante na satisfação com a marca e na intenção de compra dos consumidores. Já o engagement com a marca, a satisfação com a marca e likeability evidenciam um impacto positivo na atitude em relação à marca. Por fim, a satisfação com a marca, a atitude em relação à marca e likeability exercem um efeito positivo na intenção de compra.

A atividade dos profissionais de saúde exige a adoção de princípios éticos estritos, que, por definição, dependem de múltiplas variáveis. Identificamos a relação médico-utente, o relacionamento interpares (i.e. médicos, enfermeiros e demais técnicos), e a ligação com a sociedade em geral. Neste contexto, a presente dissertação incide, em primeiro lugar, sobre a relevância da ética no sector da saúde, partindo depois para a discussão da importância das estruturas criadas para avaliar as práticas éticas no sector público. Posteriormente, o foco do trabalho centra-se no desenvolvimento de um modelo conceptual representativo das variáveis que influenciam a ética nos serviços públicos de saúde com recurso à utilização de mapas cognitivos "fuzzy", que permitem determinar quais as variáveis mais relevantes no domínio em estudo. Os mapas cognitivos "fuzzy" são uma ferramenta aplicável a diversas áreas do conhecimento, que permite estruturar problemas de decisão complexos e identificar relações de causalidade entre as variáveis, de forma a apoiar o processo de tomada de decisão. Os resultados obtidos com base no "know-how" e experiência de especialistas no sector da saúde mostram que o "Perfil do Profissional", a "Administração", as "Relações de Equipas", os "Fatores Externos", o "Princípio da Equidade" e o "Respeito" são os determinantes que apresentam maior grau de centralidade. Ou seja, são os critérios com maior representatividade na análise das práticas éticas nos serviços públicos de saúde. As vantagens e limitações do modelo desenvolvido são também objeto de discussão. The activity of health care professionals requires the adoption of strict ethical principles, which, by definition, depend on multiple variables. We identify the doctor-patient relationship, the "inter-pare" acquaintance (i.e. doctors, nurses and other technicians), and the connection with the society at large. In this context, the research focuses firstly on the relevance of ethics in the health care sector, and then discusses the importance of the structures created to evaluate ethical practices in the public sector. Next, the study focuses on the development of a conceptual model representative of the variables that influence ethics in the public health care services, using fuzzy cognitive mapping, which allows the most relevant variables in this study context to be identified. Fuzzy cognitive mapping is a tool with great potential in the structuring of complex decision problems, allowing for the identification of cause-and-effect relationships between variables and supporting decisionmaking. The results obtained are based on the know-how and practical experience of experts in the public health care sector, and show that "Professional Profile", "Administration", "Team Relationships", "External Factors", "Principles of Equity and Respect" are the determinants that present the highest degrees of centrality (i.e. are the most representative criteria in the analysis of ethical practices in the public health care services). The advantages and limitations of the cognitive structure developed in this study are also discussed.

Tese de Doutoramento em Ciências Veterinárias. Especialidade de Ciências Biológicas e Biomédicas Plant cell walls are the most abundant source of organic carbon on earth, providing an extraordinary supply of energy for various microorganisms. The energetic constrains posed by anaerobic ecosystems lead to the evolution of highly efficient multi-enzymatic complexes, termed cellulosomes, which orchestrate the deconstruction of structural carbohydrates. Clostridium thermocellum cellulosome has been extensively studied as the bacterium exhibits one of the highest growth rates on cellulose. Cellulosomes are assembled by a large non-catalytic multi-modular scaffoldin which contains repeated type I cohesins. Type I dockerin modules, usually located at the C-terminus of enzymes, bind tenaciously to type I cohesins. Scaffoldins may contain a type II dockerin which specifically recognizes type II cohesins located at the cell envelope, allowing the cell surface attachment of cellulosomes. Here a combination of methodologies was applied to study the structure and function relationships of novel cellulosomal enzymes and cohesin-dockerin complexes. Innovative molecular biology and biochemical protocols that can be applied to crystallize and solve the structure of cohesin-dockerin complexes are described in chapter 2. In addition, the crystal structures of two novel type I cohesin-dockerin complexes (CtCohOlpC-Doc124A and CtCohOlpA-Doc918) are described here. They revealed that the two dockerins are unusual since they lack the structural symmetry that supports the dual binding mode typical of type I modules. Thus, these dockerins present a single binding mode and seem to bind preferentially to cohesins located at the bacterium cell surface and not to cellulosomes (chapter 3). Doc124A is the dockerin of CtCel124A, an endoacting cellulase with a superhelical fold that acts in synergy with the major cellulosomal exo-cellulase, Cel48S, during cellulose hydrolysis. The crystal structure of CtCel124A in complex with two cellotriose molecules suggests that the enzyme may target the interface between crystalline and amorphous cellulose (chapter 5). In addition, the structure of a novel type II cohesin-dockerin complex (CtCohScaC2-XDocCipB) was solved. The functional importance of specific dockerin residues was determined. Type II dockerins are suggested to present two different cohesin-binding faces that express different specificities (chapter 4). Finally, the crystal structure of a penta-modular cellulosomal protein (CtXyl5A), previously of unknown function, was assessed (chapter 6). This protein is one of the largest cellulosomal components and comprises a GH5, two CBMs from families 6 and 13, a fibronectin type III-like module, a CBM from family 62 and a type I dockerin. CtGH5 has a canonical (α/β)8-barrel fold and displays specificity for arabinoxylans and as such, is defined as an arabinoxylanase. CtCBM6 adopts a β-sandwich fold and displays affinity for the reaction products generated by CtGH5 and for undecorated xylooligosaccharides. In addition, the penta-modular structure revealed a great flexibility for the CtCBM62 domain. RESUMO - Estrutura e função de novas enzimas celulossomais e de novos complexos coesina-doquerina - A parede celular vegetal constitui uma das principais fontes de carbono do planeta, sendo por isso um extraordinário recurso energético para muitos microrganismos. As limitações energéticas características dos ecossistemas anaeróbios conduziram à evolução de complexos multi-enzimáticos de elevada eficiência, denominados celulossomas, os quais coordenam a degradação dos hidratos de carbono da parede celular vegetal. O Clostridium thermocellum produz um celulossoma relativamente bem caracterizado já que a bactéria apresenta uma das maiores taxas de crescimento em celulose. A organização do celulossoma é efectuada por uma proteína não-catalítica multi-modular. Esta proteína de integração possui uma série de módulos repetidos, denominadas coesinas do tipo I. Na extremidade C-terminal das enzimas celulosomais existem módulos doquerina do tipo I, os quais se ligam fortemente às coesinas do tipo I. As proteínas de integração celulossomal podem conter ainda uma doquerina do tipo II que reconhece especificamente coesinas do tipo II localizadas no envelope celular permitindo, assim, a fixação dos celulossomas à superfície da bactéria. No presente trabalho foram desenvolvidas várias metodologias inovadoras com o intuito de determinar a estrutura e a função de novas enzimas celulossomais e de novos complexos coesina-doquerina. Os protocolos de biologia molecular e bioquímicos aqui descritos (capítulo 2) permitem ultrapassar as dificuldades inerentes à cristalização e, por conseguinte, à resolução da estrutura de complexos coesina-doquerina. Com base nestas metodologias, foram elucidadas as estruturas tridimensionais de dois novos complexos coesina-doquerina do tipo I (CtCohOlpCDoc124A e CtCohOlpA-Doc918). A análise destas estruturas revelou que as suas doquerinas são atípicas, uma vez que não possuem a simetria estrutural característica dos módulos doquerina do tipo I que lhes confere um modo de ligação duplo. Com efeito, estas novas doquerinas apresentam um modo de ligação simples e parecem ligar-se preferencialmente a coesinas localizadas na superfície da bactéria (capítulo 3). A Doc124A é a doquerina da CtCel124A, uma endo-celulase que possui um enrolamento super-helicoidal e que atua em sinergia com a principal exo-celulase celulossomal, a Cel48S, na hidrólise da celulose. A estrutura tridimensional da CtCel124A em complexo com duas moléculas de celotriose sugere que a enzima pode ter como substrato alvo a interface entre as formas cristalina e amorfa da celulose (capítulo 5). Para além da elucidação destas estruturas, foi também resolvida a estrutura de um novo complexo coesina-doquerina do tipo II (CtCohScaC2-XDocCipB). Os resultados sugerem que as doquerinas do tipo II apresentam duas interfaces de ligação a coesinas que expressam diferentes especificidades (capítulo 4). Por último, é apresentada a estrutura tridimensional de uma proteína celulossomal penta-modular (CtXyl5A) e é elucidada a sua função (capítulo 6). Esta proteína é um dos componentes celulossomais de maiores dimensões e compreende uma GH5, dois módulos de ligação a hidratos de carbono (CBMs) das famílias 6 e 13, um módulo de fibronectina do tipo III, um CBM da família 62 e ainda uma doquerina do tipo I. A GH5 apresenta um enrolamento canónico em barril (α/β)8 e possui especificidade para os arabinoxilanos, tendo sido por isso definida como uma arabinoxilanase. O CBM6 apresenta um enrolamento em β-sanduiche e possui afinidade para os produtos de reação gerados pela GH5 e para xilo-oligossacáridos nãodecorados. A estrutura penta-modular desta proteína revelou uma grande flexibilidade no domínio CBM62.