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Inhaled nitric oxide therapy reaches not only pulmonary vessels, but also other vasculatures, presenting anti-inflammatory effects. Therefore, this study investigated the effects of inhaled nitric oxide on a mice model of carrageenan-induced paw edema. Paw edema was induced in male Swiss mice (20-30 g) by subplantar injection of carrageenan (0.05 ml of a 1% suspension in 0.9% saline). The evaluation of timecourse edema (mililiter) was measured by plethysmometry until 12 h following carrageenan administration. Thirty minutes after carrageenan injection, some groups received inhaled nitric oxide (300 ppm at variable doses and times) or Indometacin (INDO 5 mg/Kg, v.o), while others received sildenafil (1 mg/Kg, i.p) or rolipram (3 mg/Kg, i.p.) with or without inhaled nitric oxide. Paws were assessed for edema levels by plethysmometry, mieloperoxidase activity and histological analysis. Inhaled nitric oxide significantly reduced carrageenan-induced paw edema, mieloperoxidase activity and inflammatory infiltrate, although similar results were also observed in sildenafil and rolipram treated groups. In addition, significant effects between inhaled nitric oxide with pharmacological therapy was observed. Inhaled nitric oxide presents anti-inflammatory effects on carrageenaninduce paw edema, as observed through reduced edema, mieloperoxidase activity and neutrophil infiltration, indicating that inhaled nitric oxide therapy goes beyond lung vascular effects.

Status Epilepticus (SE) is defined as continuous and self-sustaining seizures, which trigger hippocampal neurodegeneration, mitochondrial dysfunction, oxidative stress and energy failure. During SE, the neurons become overexcited, increasing energy consumption. Glucose uptake is increased via the sodium glucose cotransporter 1 (SGLT1) in the hippocampus under epileptic conditions. In addition, a supply of glucose can prevent neuronal damage caused by SE. We evaluated the effect of increased glucose availability in behavior of limbic seizures, memory dysfunction, neurodegeneration process, neuronal activity and SGLT1expression. Vehicle (VEH, saline 0.9%, 1μL) or glucose (GLU; 1, 2 or 3mM) were administered into hippocampus before or after pilocarpine (PILO) to induce SE. Behavioral analysis of seizures was performed for 90 minutes during of SE, according to Racine scale. The memory and learning processes were analyzed by the inhibitory avoidance test. After 24 hours of SE, neurodegeneration process, neuronal activity and SGLT1 expression were evaluated in hippocampal and extrahipocampal regions by Fluoro-Jade C (FJ-C histochemistry, c-Fos and SGLT1 immunofluorescence, respectively. The administration of glucose after PILO reduced the severity of seizures, as well as the number of limbic seizures classes 3-5. In addition, modulation of hippocampal glucose protected memory dysfunction followed by SE. Similarly, glucose after PILO attenuated the number of FJ+ and c-Fos+ neurons in hippocampus, subiculum, thalamus and cortical areas. Finally, SGLT1 expression was elevated in hippocampus after increasing glucose levels. These data suggest that possibly the administration of intrahippocampal glucose protects brain in the earlier stage of epileptogenic processes via an important support of SGLT1. CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Status Epilepticus (SE) é definido como crises contínuas e autossustentadas, que desencadeia neurodegeneração, disfunção mitocondrial, estresse oxidativo e falha energética. Durante o SE, os neurônios ficam hiperexcitados, levando ao aumento do consumo energético. Sabe-se que a captação de glicose aumenta via cotransportador de sódio e glicose tipo 1 (SGLT1) no hipocampo sob condições epilépticas. Além disso, o suprimento de glicose pode prevenir o dano neuronal causado pelo SE. O propósito do presente estudo foi avaliar o efeito do aumento da disponibilidade de glicose no comportamento das crises límbicas, disfunção da memória, processo de neurodegeneração, atividade neuronal e expressão do SGLT1.Veículo (VEH, salina 0.9%, 1μL) ou glicose (GLU; 1, 2 ou 3mM) foram administrados no hipocampo antes ou depois da pilocarpina (PILO), usada para induzir o SE. A análise comportamental das crises foi feita durante 90 minutos do SE, de acordo com a escala de Racine. Os processos de memória e aprendizagem foram analisados pelo teste de esquiva inibitória. Após 24h do SE, o processo de neurodegeneração, a atividade neuronal e a expressão do SGLT1 foram avaliados em regiões hipocampais e extra-hipocampais por meio da histoquímica de Fluoro-Jade C (FJ-C) e imunofluorescência para cFos e SGLT1, respectivamente. A administração de glicose após a PILO reduziu a gravidade das crises, bem como o número e tempo total das crises límbicas de classes 3-5. Adicionalmente, a modulação de glicose hipocampal protegeu da disfunção da memória causada pelo SE. Similarmente, glicose após a PILO atenuou o número de neurônios FJ+ e cFos+ no hipocampo, subículo, tálamo e áreas corticais. Finalmente, a expressão do SGLT1 foi elevada no hipocampo após o aumento dos níveis de glicose. Estes resultados sugerem que possivelmente a administração intra-hipocampal de glicose protege o cérebro na fase aguda da epileptogênese por meio um importante suporte energético garantido pelo SGLT1.

Natural products are commonly used for the treatment of different pathologies, including inflammation. Among the molecules present in plants, the triterpenes exibith wide range of pharmacological effects, including anti-inflammatory and antioxidant actions. In the present study were sought to investigate the effect of friedelin at the inflammatory response in vivo. The study also looked to characterize the formation of inclusion complex between friedelin and hydroxypropyl-β-cyclodextrin, and to evaluate its potential to inhibit allergic inflammation in experimental asthma model mice. Initially, were demonstrated that friedelin is able to inhibit the plasma extravasation at the edema model induced by carrageenan, histamine and PGE2, but not by serotonin. Then, with the purpose of evaluating with the actions of friedelin extend on the cellular events of inflammation; we assessed the effect of this triterpene on the inflammatory response induced by LPS using the pleurisy model. In this experimental model, friedelin inhibited the influx of neutrophils as well as the amount of cytokines and inflammatory chemokines in the pleural effluent. Furthermore, in assessing the effect of friedelin on mobilization of human neutrophils, were demonstrated, in vitro, that friedelin induced in a lower adherence of neutrophils to activated endothelium, as well as a lower chemotactic response which were not associated with reduction in viability. These results suggest a direct effect of friedelin in neutrophils. Subsequently, to confirm whether these effects would be also observed in vivo, were decided to evaluate leukocyte motility events using intravital microscopy. In this model, we confirmed that friedelin was able of reducing rolling and adhesion of leukocytes, events that can be associated with lower influx of leukocytes to the inflammatory site. Additionally, we confirmed that friedelin allowed be attached to cyclodextrin, phenomenon that was demonstrated by using spectroscopic methods, such as analysis by ultraviolet-visible and infrared. Moreover, the effects of friedelin and its complex with cyclodextrin were evaluated against allergic pulmonary inflammation induced by ovalbumin. In this experimental model, both friedelin and friedelin:cyclodextrin inhibited the parameters of respiratory mechanics as resistance and airway elastance. We also verify that both leukocyte recruitment and the production of cytokines and chemokines in bronchoalveolar lavage were inhibited by the treatment with friedelin and friedelin:cyclodextrin. Additionally, treatment with friedelin:cyclodextrin increased the amount of cytokine IL-10 in bronchoalveolar lavage. Evaluation of lung tissue from asthmatic animals we noted that several histopathological changes, such as extracellular matrix deposition and mucus production, were also inhibited under friedelin and friedelin:cyclodextrin treatments. These treatments also restored the activity of catalase in lung from asthmatic animals. In conclusion, the data obtained in this study shows that the carrier system of friedelin with hydroxypropyl-beta-cyclodextrin increases the anti-inflammatory effects of friedelin in preventing the onset of inflammation in acute asthma. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Produtos naturais são comumente usados para o tratamento de diferentes patologias, incluindo inflamação. Dentre as moléculas obtidas a partir de espécies vegetais, os terpenos exibem diferentes atividades biológicas, como anti-inflamatória e antioxidante. No presente estudo, buscou-se investigar o efeito da friedelina sobre a resposta inflamatória in vivo, bem como caracterizar a formação do seu complexo de inclusão em hidroxipropil-β-ciclodextrina, avaliando ainda seu potencial em inibir a inflamação alérgica no modelo de asma experimental em camundongos. Para este propósito, diferentes metodologias foram utilizadas. Inicialmente, demonstrou-se que a friedelina inibiu o extravasamento plasmático no modelo de edema de pata induzido por carragenina, histamina e PGE2, mas não por serotonina. Em seguida, com o propósito de avaliar se as ações da friedelina se estendiam sobre os fenômenos celulares da inflamação, avaliou-se o efeito deste triterpeno na resposta inflamatória induzida por LPS, utilizando o modelo de pleurisia. Neste grupo de experimentos, constatou-se que a friedelina inibiu o influxo de neutrófilos, bem como a produção e/ou secreção de citocinas e quimiocinas pró-inflamatórias no efluente pleural. Para melhor avaliar o impacto da friedelina na mobilização de neutrófilos, demonstrou-se, in vitro, que o tratamento de neutrófilos humanos com friedelina resultou em uma menor adesão desta célula ao endotélio ativado, bem como em uma menor resposta quimiotática, fenômenos que não foram associados à redução na viabilidade deste tipo celular. Tais resultados sugerem um efeito direto da friedelina nos neutrófilos. Com propósito de confirmar se estes efeitos teriam repercussões in vivo, avaliaram-se os eventos de motilidade de leucócitos, usando a metodologia de microscopia intravital. Neste modelo, confirmou-se que a friedelina reduz fenômenos de rolamento e adesão, característica que parece estar associada ao menor influxo de leucócitos para o sítio inflamatório. Em continuidade, confirmouse que a friedelina mostrou-se capaz de formar complexo com ciclodextrina, fenômeno que foi caracterizado por metodologias espectroscópicas, tais como análise no ultravioleta visível e infravermelho. Por fim, os efeitos da friedelina e de seu complexo com ciclodextrina foram avaliados frente à inflamação pulmonar alérgica induzida por ovalbumina. Neste modelo experimental, verificou-se que a friedelina, bem como seu complexo em ciclodextrina, inibiu parâmetros da mecânica respiratória, como a resistência e elastância das vias aéreas. Verificou-se ainda que tanto o recrutamento de leucócitos quanto a produção de citocinas e quimiocinas no lavado broncoalveolar mostraram-se inibidos pelo tratamento com friedelina e pelo complexo friedelina:ciclodextrina. Cabe destacar que o tratamento com friedelina:ciclodextrina aumentou a quantidade de IL-10 no lavado broncoalveolar. Estendendo as análises para o pulmão, constatou-se que as alterações histopatológicas, como deposição de colágeno e produção de muco, foram também inibidas. Além disso, o tratamento com friedelina:ciclodextrina restaurou a atividade da enzima catalase no pulmão de animais asmáticos. Assim, concluiu-se que o carreamento da friedelina com hidroxipropil-beta-ciclodextrina incrementa os efeitos anti-inflamatórios da friedelina, por prevenir a instalação da inflamação do quadro de asma aguda.

Growth hormone (GH), beyond its effects on the growth and metabolism, has pleiotropic actions on immune system and, particularly, on thymus. The objective of this study was to evaluate the involvement of GH in thymocyte/thymic endothelium interactions during migratory process. We applied fresh thymocytes from C57BL/6 mice, aged 4-6 weeks, and thymic endothelial cell line (tEnd.1). It was observed that GH-treated thymocytes were stimulated in 27.7% to adhere to thymic endothelium. This effect was observed in all subpopulations, except in CD4-CD8+ single-positive. By means of immunocytochemical assay, there was an increase of 26.6% in the deposition of fibronectin by tEnd.1 when these cells were cocultured with GH-treated thymocytes. However, laminin deposition by tEnd.1 was increased in the presence of thymocytes. Using flow cytometry, it was found that GH treatment increased in 49.3% VLA-5 integrin expression on cell surface. However, GH treatment decreased VLA-6 expression in CD4+CD8-single-positive thymocytes in 7.8%. With regard to actin cytoskeleton, analysis by flow cytometry and fluorescence microscopy showed that GH was able to induce polarization of thymocytes and polymerization of F-actin. Transmigration assays demonstrated that GH-treated thymocytes migrated more in the presence of IGF-1 as chemoattractant factor (increase of 44.7%), in total thymocytes, CD4+CD8+ and CD4-CD8+ subsets. Taken together, results demonstrate the involvement of GH in thymocyte/thymic endothelium interactions, particularly in the reorganization of the cytoskeleton and transendothelial migration of thymocytes. O hormônio do crescimento (GH), além dos seus efeitos clássicos sobre o crescimento e metabolismo no organismo, possui ações pleiotrópicas sobre o sistema imune e, particularmente, sobre o timo. O objetivo deste trabalho foi avaliar in vitro a participação do GH nas interações entre timócitos/endotélio tímico envolvidas no processo migratório. Para o estudo foram utilizados timócitos frescos de camundongos C57BL/6, com idade entre 4 a 6 semanas de ambos os sexos, e a linhagem de células endoteliais tímicas (tEnd.1). Inicialmente, no ensaio funcional de adesão célula-célula em cocultura, observou-se que o pré-tratamento dos timócitos com GH (100 ng/mL), durante uma hora, aumentou 27,7% a adesão dos timócitos ao endotélio tímico quando comparado ao grupo em que os timócitos não receberam o tratamento. Esse efeito foi observado em todas as subpopulações com exceção da simples-positiva CD4-CD8+. Por meio do ensaio de imunocitoquímica, constatou-se um aumento de 26,6% na deposição de fibronectina pelas tEnd.1 quando cocultivadas com timócitos pré-tratados com GH. Entretanto, a deposição de laminina foi aumentada em tEnd.1 pela presença de timócitos, independente do tratamento prévio com GH. Através de citometria de fluxo, verificou-se que o tratamento com GH aumentou em 49,3% a expressão da integrina VLA-5 na superfície celular em timócitos totais, e esse fenômeno foi observado em todas as subpopulações de timócitos. Entretanto, o tratamento com GH diminuiu 7,8% a expressão da integrina VLA-6 na subpopulação simples-positiva CD4+CD8-. Em relação ao citoesqueleto de actina, a análise por citometria de fluxo e microscopia de fluorescência mostrou que o GH foi capaz de induzir a polarização dos timócitos e a polimerização de F-actina após 30 minutos de tratamento. Em ensaios funcionais de transmigração celular, evidenciou-se um aumento de 44,7% de timócitos migrantes quando previamente tratados com GH e frente ao estímulo quimioatraente do IGF-1, sendo este aumento observado nas subpopulações duplo-positiva CD4+CD8+ e simples-positiva CD4-CD8+. Em conjunto, os resultados obtidos no estudo demonstram a participação do GH nas interações timócitos/endotélio tímico, em especial à reorganização do citoesqueleto e migração transendotelial de timócitos.