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Importance Anti–vascular endothelial growth factor (VEGF) therapies are a novel treatment option in retinopathy of prematurity (ROP). Data on dosing, efficacy, and safety are insufficient. Objective To investigate lower doses of anti-VEGF therapy with ranibizumab, a substance with a significantly shorter systemic half-life than the standard treatment, bevacizumab. Design, Setting, and Participants This randomized, multicenter, double-blind, investigator-initiated trial at 9 academic medical centers in Germany compared ranibizumab doses of 0.12 mg vs 0.20 mg in infants with bilateral aggressive posterior ROP; ROP stage 1 with plus disease, 2 with plus disease, or 3 with or without plus disease in zone I; or ROP stage 3 with plus disease in posterior zone II. Patients were recruited between September 2014 and August 2016. Twenty infants were screened and 19 were randomized. Interventions All infants received 1 baseline ranibizumab injection per eye. Reinjections were allowed in case of ROP recurrence after at least 28 days. Main Outcomes and Measures The primary end point was the number of infants who did not require rescue therapy at 24 weeks. Key secondary end points included time-to-event analyses, progression of physiologic vascularization, and plasma VEGF levels. Stages of ROP were photodocumented and reviewed by an expert committee. Results Nineteen infants with ROP were enrolled (9 [47.4%] female; median [range] postmenstrual age at first treatment, 36.4 [34.7-39.7] weeks), 3 of whom died during the study (1 in the 0.12-mg group and 2 in the 0.20-mg group). Of the surviving infants, 8 (88.9%) (17 eyes [94.4%]) in the 0.12-mg group and 6 (85.7%) (13 eyes [92.9%]) in the 0.20-mg group did not require rescue therapy. Both ranibizumab doses were equally successful in controlling acute ROP (Cochran-Mantel-Haenszel analysis; odds ratio, 1.88; 95% CI, 0.26-13.49;P = .53). Physiologic intraretinal vascularization was superior in the 0.12-mg group. The VEGF plasma levels were not systematically altered in either group. Conclusions and Relevance This pilot study demonstrates that ranibizumab is effective in controlling acute ROP and that 24% of the standard adult dose (0.12 mg) appears equally effective as 40% (0.20 mg). Superior vascularization of the peripheral retina with 0.12 mg of ranibizumab indicates that the lower dose may be favorable. Unchanged plasma VEGF levels point toward a limited systemic drug exposure after ranibizumab. Trial Registration clinicaltrials.gov Identifier:NCT02134457and clinicaltrialsregister.eu Identifier:2013-002539-13.

Ca²+-Signale in T-Lymphozyten regulieren eine Reihe von fundamentalen Zellfunktionen. Veränderungen der intrazellulären Calciumkonzentration und damit auch Aktivitätsänderungen von Ionenkanälen spielen eine bedeutende Rolle und sind kennzeichnend für zelluläre Prozesse wie Proliferation und Apoptose. In der vorliegenden Arbeit werden mehrere Mechanismen zur intrazellulären Ca²+-Erhöhung und damit zur T-Zellaktivierung beschrieben. Der Zelloberflächen-TCR/CD3-Komplex kann wie hier dargestellt durch Anti-CD3, einem monoklonalen Antikörper, aktiviert werden. Auch PHA löst unspezifisch gebunden an den TCR eine Reaktion aus, die zur T-Zellaktivierung führt. Als drittes auslösendes Agens wurde Thapsigargin verwendet, ein Sequesterpenlacton, das irreversibel an die endoplasmatische Ca²+-Pumpe (SERCA-ATPase) bindet, diese blockiert und dadurch die Aufnahme von Ca²+ in das ER verhindert. Mittels fluoreszenzmikroskopischen Methoden wurde die intrazelluläre Ca²+-Konzentration in humanen peripheren Lymphozyten und der T-Zellymphomlinie Jurkat bestimmt. Die hier durchgeführten Messungen der [Ca²+]i ergaben, dass Stimulation mit Anti-CD3, PHA und Thapsigargin jeweils eine anhaltende erhöhte intrazelluläre Caliumkonzentration zur Folge hat. Daraus resultiert die T-Zellproliferation. Somit konnte gezeigt werden, dass verschiedene Agenzien in der Lage sind, TZellen zu stimulieren. Dies wiederum war als Voraussetzung für die folgenden Experimente wichtig: In vorhergehenden Studien hat sich herausgestellt, dass in aktivierten T-Zellen rafts in der Plasmamembran vorhanden sind, was vermutlich zur schnelleren und effektiveren Signaltransduktion beiträgt. In naiven T-Zellen konnten rafts nur intrazellulär gefunden werden. In dieser Arbeit konnte mittels verschiedenen Anfärbemethoden in live-Kameraaufnahmen gezeigt werden, dass der TCR indem raft vorhanden ist. Auf jeder T-Zellmembran befand sich erstaunlicherweise nur ein deutlich angefärbter cluster. Die Frage nach dem Vorhandensein des CRAC-Kanals in rafts konnte indirekt beantwortet werden. Es konnte dargestellt werden, dass FM1-43, der Farbstoff, der rafts anfärbt, den ICRAC blockiert. Die aktivierten T-Zellen reagierten nach Zugabe von FM1-43 und Anbieten von extrazellulären Calciums direkt am raft mit keiner Erhöhung der [Ca²+]i. Dies beweist, dass FM1-43 den CRAC-Kanal blockiert und dieser in den rafts vorhanden sein muß. Aufgrund fehlender Identifizierung des CRAC-Proteins und mangelnder Antikörper kann ein direkter Beweis noch nicht durchgeführt werden. Der dritte Teil dieser Arbeit befasste sich mit der Reaktion der [Ca²+]i nach CD95-Rezeptor Stimulation. Neben der für die Begrenzung der Immunreaktion wichtigen Induktion von Apoptose wird durch Stimulation des CD95-Rezeptors ein anhaltender Block des kapazitativen Calciumeinstromes ausgelöst. Eine Reduktion der IL-2-Synthese in aktivierten T-Zellen ist die Folge. Das Absinken der IL-2 Konzentration führt in letzter Konsequenz zum Stop der T-Zellproliferation und damit zum Abbruch der Immunantwort. Diesen Vorgang, Abschalten kultivierter T-Lymphozyten ohne sie apoptotisch zu deletieren, bezeichnet man als Anergie. Calciumsignals regulate different cell functions in T lymphocytes. In this dissertation we will show various mechanisms of intracellular Calcium increase which are followed by T cell activation. Furthermore because of stimulation of CD95 receptor the calciumsignal can be inhibited and is therefore the main reason of apoptosis of T cells.