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Resumo: Foram realizadas biópsias retais de 140 búfalos, machos e fêmeas, das raças Murrah e mestiços de Murrah com Mediterrâneo, com idade acima de três anos, em uma propriedade no município de São Mateus, Maranhão, Brasil. Adicionalmente foram realizadas necropsias de 11 búfalos, para realizar um estudo comparativo entre os achados das biópsias retais e de tecidos de íleo e linfonodo mesentérico. A propriedade apresentava histórico de animais com emagrecimento progressivo e diarreia não responsiva a antimicrobianos. Os búfalos apresentavam sinais clínicos caracterizados por diarreia, estado nutricional regular a ruim, desidratação e edema submandibular. Nas biópsias retais seis búfalos apresentaram lesões sugestivas da paratuberculose na Hematoxilina-Eosina (HE), sendo estas caracterizadas por inflamação granulomatosa multifocal moderada na lâmina própria com macrófagos epitelioides. Em quatro animais foram observadas adicionalmente células gigantes do tipo Langhans. Em 15 búfalos foi observado infiltrado linfocitário multifocal leve na lâmina própria. Pela coloração de Ziehl-Neelsen (ZN), 4,3% (6/140) apresentaram bacilos álcool-ácido resistentes (BAAR) e na PCR em tempo real (qPCR), 5,71% (7/140) tiveram amplificação do material genético. Foram necropsiados 11 búfalos, à necropsia foram observados aumento de linfonodos mesentéricos com áreas esbranquiçadas na superfície de corte; intestino delgado e grosso com dobras transversais evidentes, mucosa espessada e irregular, de aspecto reticulado, placas de Peyer evidentes e conteúdo líquido e marrom. Ainda se viam áreas espessadas em torno da válvula ileocecal e vasos linfáticos evidentes. As lesões histológicas localizadas no intestino delgado e linfonodos mesentéricos de quatro búfalos foram compatíveis com lesões já descritas na literatura, e apresentaram BAAR e amplificação de material genético na qPCR. A concordância entre a biópsia retal e a análise dos tecidos de íleo e linfonodo mesentérico, segundo o teste Kappa (K=0,792), foi alta. A biópsia retal realizada demonstrou ser promissora e pode ser empregada, juntamente com outras técnicas, para auxiliar no diagnóstico ante mortem em búfalos de rebanhos com suspeita de paratuberculose; pela mesma foi possível detectar animais positivos através da coloração de ZN e qPCR. Os resultados obtidos podem ser utilizados no controle da enfermidade para selecionar e eliminar animais positivos do rebanho, diminuindo gradualmente, a disseminação do agente no ambiente, e a consequente contaminação de outros animais. Abstract: Paratuberculosis in a herd of buffaloes was studied in the municipality of São Mateus, Maranhão, Brazil. Rectal biopsies were performed in 140 male and female Murrah, Mediterranean and crossbreed buffaloes older than 3 years. Postmortem examination of 11 buffaloes was performed to compare the rectal biopsies with possible lesions in mesenteric nodes and the intestine. The history of the herd and clinical examination revealed progressive weight loss and non-responsive antimicrobial diarrhea, dehydration and submandibular edema. Rectal biopsies showed in six buffaloes microscopically suggestive lesions for paratuberculosis through hematoxilin-eosin staining (HE), characterized by moderate multifocal granulomatous enteritis with epithelioid cell infiltration. In four buffaloes Langhans giant cells were found. In 15 buffaloes lymphocytic infiltrate was observed in the lamina propria of the large intestine. Ziehl-Neelsen staining (ZN) revealed in 4.3% (6/140) acid-fast bacilli in the rectal mucosa. Real time PCR amplified to 5.71% (7/140) Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map) DNA. 11 buffalos were submitted to postmortem examination, gross examination revealed augmented mesenteric nodes with whitish areas in the cut surface. The mucosa of the small intestine was irregular and thickened, with evident traverse folds and Peyer plates. The brownish intestinal content was fluid, the ileocecal valve area thickened and edematous with evident lymphatic vessels. Histological lesions in the mesenteric lymph node and small intestine four buffalo were compatible with those already described in the literature, and presented acid-fast bacilli by ZN staining and amplification of Map genetic material in qPCR. The concordance between the rectal biopsy and the postmortem samples was in agreement with the Kappa test (K=0.792) and was considered substantial or high. The rectal biopsy showed to be promising and can be used by practitioners, together with other techniques, for antemortem diagnosis in buffalo herds suspected to be affected by paratuberculosis. Samples obtained by rectal biopsy were suitable for ZN staining and real time PCR. Rectal biopsy can be used as a tool for diagnosis and control of Johne´s disease in buffaloes to select and eliminate positive animals within the herd and decrease gradually the spread of Map.

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior INCT - Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia Este trabalho objetivou estudar a paratuberculose (PTB) em bubalinos no estado do Maranhão (MA). Para isso foram realizadas a utilização da biópsia retal como ferramenta auxiliar na coleta de amostras para o diagnóstico ante mortem da PTB; dosagem de teores de cobre (Cu), zinco (Zn) e ferro (Fe) em animais positivos para PTB, assim como, o relato da detecção de Mycobacterium avium subesp. paratuberculosis (Map) em útero e feto bubalino. No primeiro estudo foram realizadas 140 biopsias retais em bubalinos das raças Murrah, Mediterrâneo e seus mestiços, com idade acima de três anos, no município de São Mateus, MA. Essas biópsias foram processadas por meio das técnicas de Ziehl-Neelsen (ZN) e reação em cadeia da polimerase quantitativa (qPCR). Adicionalmente foi realizada necropsia de 11 búfalos com sinais clínicos sugestivos de PTB, coletadas amostras de íleo e linfonodo mesentério (LM) para a realização de ZN e qPCR. Pela colaboração de ZN das biopsias retais, 4,3% (6/140) apresentaram bacilos álcool-ácidos resistentes (BAAR) e na qPCR, 5% (7/140) tiveram amplificação do material genético. As lesões anatomopatológicas de quatro animais foram compatíveis com lesões sugestivas de PTB, apresentaram BAAR e amplificação de material genético. A concordância entre a biopsia retal e a analise dos tecidos de íleo e LM, segundo o teste Kappa foi alta (k=0,792). No segundo estudo, foram realizadas 13 necropsias em búfalos de raças Murrah, mediterrâneo e seus mestiços, com idade acima de três anos, nos municípios de São Mateus e São Luís, MA. Foram coletadas amostras de íleo e LM para pesquisa de Map e de fígado para dosagem de minerais (Cu, Zn e Fe). Sete búfalos foram positivos PTB e alocados no Grupo 1; e seis búfalos foram negativos e alocados no Grupo 2. Na dosagem dos microminerais, os búfalos do Grupo 1 apresentaram níveis abaixo dos valores de referência para Cu e Zn. observou-se que as medias dos teores de Cu foi 18,0ppm. Os teores de Fe em ambos os grupos foram elevados (>669ppm). O terceiro estudo foi conduzido em uma propriedade em São Luís, MA. Uma búfala prenha, com acentuada debilidade física e com suspeita clinica de PTB foi eutanasiada e necropsiada. Foram coletadas fragmentos de íleo, LM, útero e placenta da fêmea; fragmentos de rim, fígado, vaso umbilical e sistema digestivo (SD) do feto e analisadas através de ZN e qPCR. A fêmea foi positiva em amostras de íleo, LM e útero na qPCR e o feto foi positivo no SD. No íleo, LM e nas fezes foram observados BAAR. Conclui-se que a analise de biopsia retal pode ser empregada para auxiliar no diagnostico ante mortem. A PTB pode induzir quadros de deficiência mineral com consequente piora do quadro clínico da doença. E a presença de Map em búfalos pode ocorrer em vários órgãos, inclusive no sistema reprodutivo e a transmissão intrauterina pode ocorrer nesta espécie. This study investigated paratuberculosis (PTB) in water buffaloes in the state of Maranhão (MA). For that were performed using the rectal biopsy as an auxiliary tool in the collection of samples for ante mortem diagnosis of PTB; dosages of copper (Cu), zinc (Zn) and iron (Fe) in PTB positive animals was performed, as well as the report of the detection of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map) in the utero and fetus of a buffalo. In the first study were conducted 140 rectal biopsies in buffaloes of Murrah, Mediterranean and their crossbreeds, over the age of three years in São Mateus, MA. These biopsies were processed by Ziehl-Neelsen (ZN) staining and quantitative PCR (qPCR). Postmortem examination of 11 buffaloes with clinical signs suggestive of PTB was performed and samples of ileum and mesenteric lymph nodes (MLN) were collected for performing qPCR and ZN. By ZN staining of rectal biopsies, 4.3% (6/140) acid-fast bacilli and qPCR, 5% (7/140) had amplification of genetic material. The pathological lesions of four animals were consistent with lesions suggestive of PTB showed acid-fast bacilli and amplification of genetic material. The correlation between rectal biopsy and analysis of ileal tissue and LM, according to the Kappa test was high (K=0.792). In the second study, 13 postmortem examination were carried in buffaloes of Murrah, Mediterranean and their crossbreeds, over the age of three years in the cities of São Mateus and São Luís, MA. Ileum and mesenteric lymph nodes samples were collected for Map search and liver to dosage minerals (Cu, Zn and Fe). Seven buffaloes were positive for PTB and allocated in Group 1; six buffaloes were negative and allocated in Group 2. In the dosing of trace minerals in Group 1 showed levels below the reference values for Cu and Zn. It was observed that the average Cu concentration was 18.0ppm and Zn 68.6ppm. In Group 2 the average Cu concentration was 113.7ppm and Zn 110.0ppm. The iron concentrations in both groups were high (>669ppm). The third study was conducted on a property in São Luís, MA. A buffalo cow pregnant with marked physical debility and clinical signs suggestive of PTB was eutanasiada and necropsiada. Fragments ileum, MLN, uterus, and placenta of buffalo cow were collected; fragments of kidney, liver, umbilical vessel and digestive system (DS) of the fetus were collected and were analyzed by Zn and qPCR. The buffalo cow was positive in ileum samples, mesenteric lymph nodes and uterus in qPCR and the fetus was positive in DS. In the ileum, MLN and feces were observed acid-fast bacilli. It is concluded that rectal biopsy analysis can be used to help diagnose ante mortem. The PTB could lead to mineral deficiency and worsen the clinical condition of the buffaloes. The presence of Map in buffalo can occur in various organs, including the reproductive system and intrauterine transmission can occur in this species.

Suction rectal biopsy with acetylcholinesterase (AChE) histochemistry has been recognized as a reliable method for the diagnosis of Hirschsprung’s disease (HD). This study compares the final pathologic diagnosis made on paraffin embedded material of 68 colectomy specimens with the histochemical AChE reaction from the same patients previously diagnosed as HD by rectal suction biopsy at the Hospital Infantil Pequeno Príncipe (Curitiba, Brazil) from 1988 to 1999. The group included 58 male and ten female patients with ages ranging from 7 days to 10 years. Thirty-six patients (52.94%) where under 1 year of age at time of surgery. Two of the 68 patients had previous normal histochemical reactions for AChE: one of them resulted a normal ganglionic segment of bowel and the other one was a 15-day-old boy with total colonic aganglionosis, the only false-negative result in this series. Two patients had inconclusive results and because untreatable clinical symptoms also received surgical treatment. One of them resulted a normal ganglionic bowel and the other one was diagnosed as HD. All surgical specimens from the other 64 patients resulted in various extents of aganglionosis presenting prominent nerve trunks in the submucosal and myenteric plexuses, confirming the previous AChE histochemical diagnosis. In three cases there was total colonic aganglionosis. In this study the rectal suction biopsy associated with the histochemical method of AChE, performed days, months or sometimes years before surgery, resulted in a diagnostic accuracy rate of 95.59%, a positive predictive value of 100% and there were no false-positive results. A biópsia de reto por sucção associada à histoquímica enzimática pela acetilcolinesterase (AChE) tem sido reconhecida como um método confiável para o diagnóstico da doença de Hirshsprung (HD). Este estudo compara o diagnóstico patológico final de 68 peças de colectomias incluídas em parafina com o diagnóstico prévio de HD através da reação histoquímica da AChE em biópsia por sucção retal dos mesmos pacientes, todos operados no Hospital Infantil Pequeno Príncipe, de Curitiba, entre 1988 e 1999. No grupo há 58 pacientes masculinos e dez femininos com idades variando entre 7 dias e 1 ano, sendo que 33 pacientes (52,94%) tinham menos de 1 ano de idade no momento da cirurgia. Dos 68 pacientes, dois tiveram reação prévia normal pela AChE, porém, como persistiam com quadro de suboclusão intestinal, foram levados à cirurgia; um deles resultou HD, padrão aganglionose total do cólon, o único caso falso-negativo deste estudo. Outros dois pacientes tiveram resultado inconclusivo pela AChE, e um deles resultou HD no exame da colectomia. Todas as colectomias dos demais 64 pacientes resultaram agangliônicas (HD), apresentando proeminência de troncos nervosos nos plexos submucoso e mioentérico, confirmando o diagnóstico histoquímico prévio pela AChE. Em três casos havia aganglionose colônica total. Neste estudo a biópsia retal por sucção associada ao método histoquímico da AChE, realizado dias, meses ou anos antes da cirurgia, apresentou taxa de acurácia diagnóstica de 95,59%, valor preditivo positivo de 100% e nenhum resultado falso-positivo.

Dezoito crianças com esquistossomose mansoni foram tratadas com a oxamniquine (20mg/kg de peso, dose únicaj e acompanhadas até o 22? mês pós-tratamento com 22 exames de fezes e uma biópsia retal no último mês. Dos 16 pacientes curados, cinco (31,3%), não apresentaram qualquer tipo de ovo na biópsia retal, 11 (68,7%), apresentaram ovos calcificados, oito (50%), ovos "recém-mortos" e três (18,8%), granulomas. Para observar a dinâmica de desaparecimento de ovos dos tecidos, 31 camundongos, foram infectados com 100 cercárias de S. mansoni e após 45 dias, tratados com drogas sabidamente esquistossomicidas. Os camundongos foram sacrificados 30, 90, 180, 260 e 400 dias após o tratamento. Observou-se diminuição progressiva dos ovos mortos nos fragmentos de intestino dos animais sacrificados, mas cerca de um ano após o tratamento os ovos hemitransparentes, calcificados, cascas e granulomas ainda foram encontrados. 0 encontro apenas destes elementos, fala a favor da cura parasitológica.Eighteen children with schistosomiasis mansoni were treated with oxamniquine (20mg/kg body weight, single oral dose) and follow-up was continued for twenty two months post-treatment, with twenty two stool examinations and one rectal biopsy in the last month. From 16 children considered as cured, the results of the oogram in the rectal snips revealed in 5 (31.3%), no eggs; in 11 (68.7%), calcified eggs; in 8 (50%), "recent-dead" eggs and in 3 (18.8%), granulomas. To study the dynamics of disappearance of S. mansoni eggs in the tissues, 31 white mices were infected with 100 S. mansoni cercariae and after 45 days treated with an association of known schistosomicidal drugs. The animals were sacrificed 30, 90, 180, 260 and 400 days after treatment and ileal fragments were microscopically examined and oograms were performed. A significant decrease in the number of dead eggs was observed, and after one year post-treatment only semi transparents, shells and calcified eggs as well as granulomas were still found. The finding of those types of eggs alone is a strong evidence of parasitological cure.