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In advanced biotechnology, the utilization of enzymes to achieve new or modified compounds with antibacterial, fungicidal, and anti-cancer specifications is crucial. Mushroom lactases are a hopeful biocatalyst for the synthesis and modification of different compounds. They are an accessible and inexpensive enzyme for the preparation of reaction objects and have recently received attention. Laccase purification was performed from basidiomycete Lentinus strigosus (LS) in several stages: Stage 1. On ion-exchange chromatography on TEAE Servacell 23 (400 ml), two distinctly separated laccase activity peaks were observed, eluted from the carrier at 0.21 and 0.27 M NaCl. In order to reduce the loss of enzymes, all fractions with laccase activity were collected, concentrated, and desalted using an ultrafiltration cell (Amicon, United States) with a UM-10 membrane. Stage 2. The resulting preparation with laccase activity was applied to a Q-Sepharose column (60 ml). Two well-separated peaks with laccase activity were obtained during the elution: laccase I (0.12 M NaCl) and laccase II (0.2 M NaCl). Stage 3. In the course of further purification of both enzymes, carried out on anion-exchange carrier Resource Q (6 ml), a broken gradient was used: 0 - 10%, 10 - 20%, and 20 - 100% with 1M NaCl. Stage 4. Both laccase I and laccase II, obtained after Resource Q, were desalted, concentrated to 1 ml each, and applied to a Superdex 75 gel filtration column. As a result, two laccases were obtained in a homogeneous form. Resumo Na biotecnologia moderna, o uso de enzimas para obter compostos novos ou modificados com propriedades antibacterianas, antifúngicas e anticancerígenas é crucial. Lactases de cogumelos são biocatalisadores promissores para síntese e modificação de diferentes compostos, por serem enzimas baratas e disponíveis para a preparação de componentes de reação, e vem recebendo a devida atenção recentemente. A purificação da lacase foi realizada a partir do basidiomiceto Lentinus strigosus em vários estágios: Etapa 1 - na cromatografia de troca iônica em TEAE Servacell 23 (400 ml), foram observados dois picos de atividade da lacase distintamente separados, com eluição do transportador a 0,21 e 0,27 M de NaCl. Para reduzir a perda de enzimas, todas as frações com atividade de lacase foram coletadas, concentradas e dessalinizadas em uma célula de ultrafiltração (Amicon, Estados Unidos) com membrana UM-10; Etapa 2 - a preparação resultante com atividade de lacase foi aplicada a uma coluna Q-Sepharose (60 ml). Durante a eluição, foram obtidos dois picos bem separados com atividade de lacase: lacase I (NaCl 0,12 M) e lacase II (NaCl 0,2 M); Etapa 3 - no decurso da purificação adicional de ambas as enzimas, realizada no Recurso Q de transportador de troca aniônica (6 ml), um gradiente quebrado foi usado: 0-10%, 10-20% e 20-100% com NaCl 1M; Etapa 4 - tanto a lacase I como a lacase II, obtidas após o Recurso Q, foram dessalinizadas e concentradas para 1 ml cada e aplicadas a uma coluna de filtração em gel Superdex 75. Como resultado, duas lacases foram obtidas de forma homogênea.

Orientador: Lucia Regina Durrant Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: Este trabalho descreve a ação de fungos basidiomicetos na degradabilidade dos quatro principais polímeros sintéticos utilizados em embalagens de alimentos: polietileno tereftalato (PET), polipropileno (PP), poliestireno (PS), policloreto de vinila (PVC), e um outro polímero sintético, a espuma poliuretana (PU). Os microrganismos foram crescidos em meio líquido de sais, pH 6,8, contendo 0,1 % de tiamina, com 0,5 % do polímero sintético como única fonte de carbono durante 20, 30 e 40 dias de cultivo. A biodegradabilidade destes plásticos foi avaliada pelo monitoramento de crescimento dos organismos degradadores de lignocelulose em meio líquido Carbono-deficiente, determinação da perda de massa molar dos polímeros, da massa celular crescida na superfície, e examinação microscópica no final dos ensaios de incubação por Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV), a qual indicou alterações na integridade dos plásticos, particularmente em amostras de PVC, que sofreram reduções de massa muito significantes (cerca de 20 %). A habilidade fúngica para produção de enzimas celulolíticas e ligninolíticas tais como avicelase, xilanase, carboximetilcelulase, manganês peroxidase, lignina peroxidase, álcool veratrílico oxidase e lacase, assim como de biosurfactantes foi observada, revelando o potencial destes organismos para processos de biodegradação. A detecção de produtos de degradação dos plásticos no meio de cultura foi verificada utilizando-se espectrofotometria UVNisível, na faixa de comprimento de onda de 200 a 500 nm, que produziu resultados interessantes para PVC com Pleurotus 001. A degradação dos polímeros foi investigada utilizando métodos viscosimétricos e Cromatografia de Permeação em Gel (GPC), resultando em perda de viscosidade dos polímeros após incubação com os microrganismos e discretas alterações nas distribuições das massas molares nos polímeros testados (PVC e PS). Nossos resultados indicaram a ocorrência de alterações estruturais nos polímeros sintéticos em decorrência do processo de biodegradação. Abstract: This work describes the action of basidiomycetes fungi on the degradability of the four main synthetic polymers used in food packaging: polyethylene terephthalate (PET), polypropylene (PP), polystyrene (PS), polyvinyl chloride (PVC) and another synthetic polymer, a polyurethane foam (PU). The microorganisms were grown in the salts liquid medium, pH 6.8, containing 0.1 % of thiamine, with 0.5 % of synthetic polymer as the sole carbon source for 20,30 and 40 days of cultivation. The biodegradability of these plastics was evaluated by monitoring the growth of the lignocellulose-degrading organisms on carbondeficient liquid medium; determination of the molar mass loss of the polymers, of the cellular mass grown on the surface, and microscopic examination at the end of the incubation assays by Scanning Electron Microscopy (SEM), which indicated changes in the integrity of the plastics, particularly in PVC specimens, which suffered very significant mass reductions (about 20 %). The ability of the fungi to produce cellulolytic and ligninolytic enzymes, such as avicelase, xylanase, carboximethilcellulase, manganese peroxidase, lignin peroxidase, alcohol veratryl oxidase and laccase, as well as of biosurfactants was observed, revealing the potential of these organisms in biodegradation processes. The detection of degradation products of the plastics in the culture medium was verified using ultraviolet-visible spectrophotometry, in the wavelength range of 200 to 500 nm, which produced interesting results for PVC with Pleurotus 001. The degradation of the polymers, investigated using viscosimetric methods and Gel Permeation Chromatography (GPC), resulted in viscosity loss on the polymers following incubation with microorganisms and small changes in the molar mass distribution in the polymers tested (PVC and PS). Our results indicated structural alterations in the synthetic polymers due to biodegradation process. Mestrado Mestre em Ciência de Alimentos

RESUMEN Los hongos del Género Ganoderma son reconocidos mundialmente por sus propiedades medicinales y su mercado nacional e internacional crece continuamente. Con el objetivo de indagar acerca del potencial comercial de nuestra diversidad fúngica, se determinaron los contenidos de compuestos bio-activos, conocidos como Ácidos Ganodéricos (A.G.), a partir de tres fuentes del hongo. De los cuerpos fructíferos de dos variedades de Ganoderma sp y Ganoderma lucidum (silvestre y comercial). La variedad silvestre fue recolectada en el municipio de Quimbaya Quindío, la comercial, certificada, se cultivó sobre residuos agroindustriales de plátano y el sustrato agotado fue obtenido después de la recolección de la variedad comercial. Las tres muestras obtenidas por triplicado, fueron secadas y sometidas a extracción con fluidos supercríticos y por ultrasonido. La concentración de A.G. se determinó por Cromatografía Líquida (HPLC), por el método de normalización de áreas, usando como estándar el Acido Ganodérico A. Los mayores rendimientos de extracción fueron obtenidos por el método de ultrasonido, independientemente de la muestra analizada. El mayor contenido de A.G., fue encontrado en la cepa silvestre (266 µg/g), aproximadamente 30% más que en la variedad comercial, aunque considerablemente menor a estudios internacionales. Es posible concluir que la variedad silvestre tendría potencial para convertirse en una fuente comercial de A.G. ABSTRACT Ganoderma genus are recognized worldwide for their medicinal properties and their national and international market is continuously growing. In order to investigate the commercial potential of our fungal diversity, the contents of bioactive compounds, known as Ganodic Acids (A.G.), were determined from three sources of fungus. Of the fruiting bodies of two varieties of Ganoderma sp and Ganoderma lucidum (wild and commercial). The wild variety was collected in the municipality of Quimbaya Quindío, the commercial, certified, was developed on agro-industrial plantain waste and the spent substrate were obtained after the harvesting of the commercial variety. The three samples obtained in triplicate, were dried and subjected to extraction with supercritical fluids and ultrasound. The concentration of A.G. was determined by Liquid Chromatography (HPLC), by the method of normalization of areas, using as standard Ganoderic Acid A. The method of extraction by ultrasound was the most efficient in all cases. The highest content of A.G., was found in the wild strain (266 μg/g), approximately 30% more than in the commercial variety, although considerably less than international studies. It is possible to conclude that the wild variety would have the potential to become a commercial source of A.G. RESUMO Os fungos do gênero Ganoderma são reconhecidos mundialmente por suas propriedades medicinais e seu mercado nacional e internacional está crescendo continuamente. A fim de investigar o potencial comercial da nossa biodiversidade fúngica, o conteúdo de compostos bioativos, conhecidos como Ácidos Ganódericos (A.G.), foi determinado a partir de três fontes de fungos. Dos corpos frutíferos de duas variedades de Ganoderma sp e Ganoderma lucidum (silvestre e comercial). A variedade silvestre foi coletada no município de Quimbaya Quindío, a comercial, certificada, foi desenvolvida sobre resíduos de bananeira agroindustrial e do substrato gasto obtido após a colheita da variedade comercial. As três amostras obtidas em triplicata, foram secas e submetidas à extração com fluidos supercríticos e ultra-som. A concentração de A.G. foi determinado por Cromatografia Líquida (HPLC), pelo método de normalização de áreas, utilizando como padrão o Ácido Ganodérico A. O método de extração por ultrassom foi o mais eficiente em todos os casos. O maior teor de A.G., foi encontrado na estirpe selvagem (266 μg/g), aproximadamente 30% mais do que na variedade comercial, embora consideravelmente menos do que os estudos internacionais. É possível concluir que a variedade silvestre teria o potencial de se tornar uma fonte comercial de A.G.

Orientador: Gonçalo Amarante Guimarães Pereira Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A doença vassoura-de-bruxa, provocada pelo fungo hemibiotrófico Crinipellis perniciosa, é uma das doenças mais importantes do cacaueiro, diminuindo drasticamente a produção e causando grandes prejuízos econômicos. Uma maior compreensão sobre a interação cacaueiro - C. perniciosa e sobre os processos que ocorrem na planta durante a progressão da doença é necessária para estabelecer novas estratégias de controle para a doença. O presente trabalho teve dois objetivos principais: 1) identificar as mudanças bioquímicas que ocorrem no cacaueiro durante o desenvolvimento da doença; 2) identificar os genes diferencialmente expressos no micélio biotrófico do fungo C. perniciosa cultivado in vitro, sendo este micélio o estágio do ciclo de vida do fungo que induz os sintomas da doença. Os resultados da caracterização bioquímica da doença, usando plântulas de cacau infectadas artificialmente, indicaram uma elevação inicial de metabólitos secundários relacionados à defesa da planta, como alcalóides, fenólicos e taninos. Como esses mecanismos não são eficientes para deter a colonização da planta pelo fungo, uma cascata de eventos, provavelmente ativada pelo aumento dos níveis de etileno, eleva os teores de asparagina, de açúcares, malondialdeido (MDA) e glicerol, altera o perfil de ácidos graxos, reduz os níveis de aminoácidos individuais e de pigmentos fotossintéticos, causando a morte da vassoura. O importante avanço do desenvolvimento de um sistema que permite a manutenção in vitro do micélio biotrófico de C. perniciosa, estabelecido recentemente por nosso grupo, permitiu o estudo da expressão gênica diferencial das duas fases miceliais do ciclo de vida do fungo: biotrófica e necrotrófica. Utilizamos a técnica de microarrays de DNA, analisando 2.304 fragmentos de bibliotecas de DNA genômico do Projeto Genoma da Vassoura-de-bruxa, selecionados a partir da similaridade com genes de patogenicidade de outros patógenos. Os resultados mostraram supressão da expressão de genes relacionados ao transporte e metabolismo de hexoses e ao metabolismo de lipídeos no micélio biotrófico do fungo. Já os genes da família do citocromo P450, hidrofobinas, aglutinina, lacase, várias proteases, lipases, álcool oxidase (AOX) e proteínas pol do sistema de retrotransposição de vírus, tiveram sua expressão induzida no micélio biotrófico, sugerindo uma possível participação nos mecanismos de patogenicidade do fungo. Esses resultados representam avanços significativos para as pesquisas sobre o metabolismo do fungo C. perniciosa e sobre as bases moleculares da progressão da doença vassoura-de-bruxa do cacaueiro, e servirão como base para orientar futuras investigações visando o controle da doença Abstract: Witches¿ broom disease, caused by the hemibiotrophic fungus Crinipellis perniciosa, is one of the most important diseases of cocoa, causing dramatic production and economic losses. A better understanding of the cacao - C. perniciosa interaction and the processes that occur in the plant during disease progression becomes necessary in order to establish novel control strategies for this disease. In view of this, the present work had two main goals: 1) establishment of the biochemical modifications that occur in the host plant during disease development; and 2) identification of differentially expressed genes in in vitro grown biotrophic mycelia of C. perniciosa, which constitutes the fungal life stage that induces disease symptoms. The results of the biochemical characterization of the disease in artificially infected cocoa seedlings indicated an initial increase of secondary metabolites related to plant defenses, such as alkaloids, phenolics, and tannins. Since these mechanisms fail to control plant colonization by the fungus, a cascade of events, probably triggered by the increased levels of ethylene, boosts the contents of asparagine, sugars, malondialdehyde (MDA) and glycerol, alters the profile of fatty acids, lowers the levels of individual amino acids and photosynthetic pigments, and ultimately leads to tissue death. The important technological development of an in vitro system that allows the maintenance of the biotrophic phase of C. perniciosa, which was recently established by our group, allowed the analysis of the differential gene expression between the two mycelial phases of the life cycle of this fungus: the biothophic and the necrotrophic phases. For this study we employed the technique of DNA microarrays, analyzing 2,304 fragments obtained from the genomic DNA libraries of the Witches¿ Broom Genome Project, and which were selected based on their sequence similarity to pathogenicity genes of other pathogens. The results showed suppressed expression of genes related to the metabolism and transport of hexoses and to the metabolism of lipids in the biotrophic mycelia of the fungus. On the other hand, the expression of genes of the cytochrome P450 family, hydrophobins, agglutinin, laccase, several proteases, lipases, alcohol oxidase (AOX), and pol proteins of the viral retrotransposition system were induced in the biotrophic mycelia, thus suggesting their possible participation in fungal mechanisms of pathogenicity. These results represent significant advances to our understanding of the metabolism of C. perniciosa and also regarding the molecular basis underlying the progression of witches¿ broom disease of cocoa, and will be valuable as a basis for future investigations aimed at disease control Doutorado Bioquímica Doutor em Biologia Funcional e Molecular

The macro fungi of the genus Agaricus have so far recorded many bioactive compounds with antibacterial properties as a product of their metabolism. However, in Ecuador, A. pampeanus or “Kallamba de finados'' is a species studied for its ethnomycological uses and as part of the fungal biodiversity of the country. In this study, the antibacterial activity of the ethanolic extract of A. pampeanus was evaluated on four ATCC strains and the bioactive compounds present in the extract were identified. Initially, an ethanol extract of A. pampeanus was performed with the use of a Soxhlet extractor. To identify the extracted compounds, a gas chromatograph coupled to a mass spectrophotometer was used. With the mother extract, four solutions of the A. pampeanus ethanol extract (APE) were made at different concentrations, classified in APE1 (50.32 mg/mL), APE2 (40.24 mg/mL), EPA3 (30.16 mg/mL), APE4 (20.12 mg/mL), which were subsequently used in the analysis of antibacterial activity, using the Kirby-Bauer technique. Six chemical compounds were identified; among them Eugenol was found as one of the main compounds. Out of the four concentrations, the A. pampeanus ethanol extract (APE1) was the most effective against Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa and categorized as sensitive, while Escherichia coli did not present any activity and was cataloged as resistant. The APE4 was not effective in any case. The antibacterial effect of APE was verified. Furthermore, A. pampeanus is more effective against Gram positive bacteria. Resumen Los macrohongos del género Agaricus registran, hasta el momento, gran cantidad de compuestos bioactivos con propiedades antibacterianas como producto de su metabolismo. Sin embargo, en Ecuador, A. pampeanus o “Kallamba de finados” es una especie estudiada por sus usos etnomicológicos y como parte de la biodiversidad fúngica del país. En este estudio se evaluó la actividad antibacteriana del extracto etanólico de A. pampeanus sobre cuatro cepas ATCC y se identificaron los compuestos bioactivos presentes en el extracto. Inicialmente, se realizó un extracto etanólico de A. pampeanus con la utilización de un equipo Soxhlet. Para la identificación de los compuestos extraídos se empleó un cromatógrafo de gases acoplado a un espectrofotómetro de masas. A partir del extracto madre se realizaron cuatro soluciones a diferentes concentraciones del extracto etanólico de A. pampeanus (EAP), clasificados en EAP1 (50,32 mg/mL), EAP2 (40,24 mg/mL), EAP3 (30,16 mg/mL), EAP4 (20,12 mg/mL), que posteriormente fueron empleadas en el análisis de actividad antibacteriana, mediante la técnica de Kirby-Bauer. Se identificó un total de seis compuestos químicos; entre estos se encontró al Eugenol como uno de los compuestos principales. De las cuatro concentraciones, el extracto etanólico de A. pampeanus (EAP1) fue el más efectivo frente a Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa, siendo categorizadas como sensibles, mientras que Escherichia coli no presentó ninguna actividad y se catalogó como resistente. Por su parte, el EAP4 no fue efectivo en ningún caso. Se comprobó el efecto antibacteriano del EAP. Además, A. pampeanus presentó mayor efectividad frente a bacterias Gram positivas.

"En U. maydis no se conoce como se lleva a cabo la regulación de la telomerasa ni que tan abundante o esencial es esta enzima en este hongo. Por lo que se analizó el perfil de expresión transcripcional de los genes que componen el centro catalítico de la telomerasa a lo largo del ciclo celular. Así como también se analizó la temporalidad de expresión de estos genes durante el ciclo de vida del hongo para determinar la probable vía de regulación de la telomerasa durante la diferenciación celular. También se obtuvieron mutantes negativas del componente proteico de la telomerasa. Por otro lado se obtuvo el patrón de expresión de abundancias relativas de estos genes en preparaciones de ARN total de cultivos sincronizados y en mutantes histona desacetilasas, e identifico ARN mensajeros de trt1, tck2, dkc3 durante la fase biotrófica del hongo. Además se determinó la presencia de transcritos TERRA de mutantes telomerasa negativas, en la cepa silvestre 521 y en cepas silvestres carentes de secuencias UTASa. Los resultados nos llevan a la conclusión que los genes del complejo telomerasa están diferencialmente regulados tanto en el desarrollo celular como en el proceso de diferenciación celular."

Las enfermedades cardiovasculares son la principal causa de muerte en el mundo y se predice que para el año 2030, habrá 23.6 millones de personas que morirán por dicha enfermedad según lo afirma la Organización Mundial de la Salud. El estrés oxidativo, la hipercolesterolemia y la hiperlipidemia se han relacionado con un mayor riesgo de padecer la aterosclerosis que puede conducir a enfermedades cardiovasculares (ECV) y accidentes cerebrovasculares. La aterosclerosis se inicia con la disfunción endotelial que es el daño del revestimiento interno de las paredes arteriales causando inflamación, formación de placas de ateroma y trombos de sangre. Existe evidencia de que llevar una dieta sana puede reducir el riesgo de padecer estas enfermedades no transmisibles por lo que se ha investigado arduamente sobre el papel de los compuestos bioactivos a base de alimentos con efectos cardioprotectores. Los hongos son alimentos apreciados desde la antigüedad por sus atributos sensoriales, propiedades nutricionales y medicinales. El interés por los hongos comestibles y silvestres ha crecido constantemente y han sido reconocidos como alimentos funcionales por ser una buena fuente de proteínas, fibra, vitaminas y minerales que ofrecen beneficios para la salud humana. Contienen compuestos bioactivos protectores frente a enfermedades cardiovasculares como son los polisacáridos, péptidos, ergosterol, triterpenoides, estatinas, eritadenina y compuestos fenólicos que están presentes en cantidades significativas. En esta revisión nos centraremos en los efectos in vitro / in vivo de los efectos cardioprotectores para la prevención y tratamiento de la aterosclerosis como enfermedad sistémica. Cardiovascular disease is the leading cause of death in the world and is predicted that 23.6 million people will die from cardiovascular disease by 2030, according to the World Health Organization.Oxidative stress, hypercholesterolemia and hyperlipidemia have been linked to an increased risk of atherosclerosis that can lead to cardiovascular disease and stroke. Atherosclerosis begins with endothelial dysfunction which is damage to the inner lining of arterial walls causing inflammation, formation of atheroma plaques and blood thrombus. There is evidence that eating a healthy diet can reduce the risk of these noncommunicable diseases so it has been hard researched on the role of bioactive compounds based on foods with cardioprotective effects. Mushrooms are foods appreciated since ancient times for their sensory attributes, nutritional and medicinal properties. The Interest in edible and wild fungi has grown steadily and have been recognized as functional foods for being a good source of protein, fiber, vitamins and minerals that offer benefits to human health. They contain bioactive compounds that protect against cardiovascular diseases such as polysaccharides, peptides, ergosterol, triterpenoids, statins, eritadenin and phenolic compounds that are present in significant amounts. In this review we will focus on the in vitro/in vivo effects of cardioprotective effects for the prevention and treatment of atherosclerosis as a systemic disease. Les malalties cardiovasculars són la principal causa de mort al món i es prediu que per a l'any 2030, hi haurà 23.600.000 de persones que moriran per aquesta malaltia segons ho afirma l'Organització Mundial de la Salut. L'estrès oxidatiu, la hipercolesterolèmia i la hiperlipidèmia s'han relacionat amb un major risc de patir l'aterosclerosi que pot conduir a malalties cardiovasculars (MCV) i accidents cerebrovasculars. L'aterosclerosi s'inicia amb la disfunció endotelial que és el dany de l'revestiment intern de les parets arterials causant inflamació, formació de plaques d'ateroma i trombes de sang. Existeix evidència que portar una dieta sana pot reduir el risc de patir aquestes malalties no transmissibles per la qual cosa s'ha investigat àrduament sobre el paper dels compostos bioactius a força d'aliments amb efectes cardioprotectors. Els fongs són aliments apreciats des de l'antiguitat pels seus atributs sensorials, propietats nutricionals i medicinals. L'interès pels fongs comestibles i silvestres ha crescut constantment i han estat reconeguts com a aliments funcionals per ser una bona font de proteïnes, fibra, vitamines i minerals que ofereixen beneficis per a la salut humana. Contenen compostos bioactius protectors enfront de malalties cardiovasculars com són els polisacàrids, pèptids, ergosterol, triterpenoides, estatines, Eritadenina i compostos fenòlics que estan presents en quantitats significatives. En aquesta revisió ens centrarem en els efectes in vitro / in vivo dels efectes cardioprotectors per a la prevenció i tractament de l'aterosclerosi com a malaltia sistèmica.

Orientador: Prof. Dr. Rodrigo Sequinel Coorientadora: Profª. Drª. Adriana Fiorini Rosado Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor Palotina, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. Defesa : Palotina, 16/12/2021 Inclui referências: p. 46-50 Resumo: O cogumelo basidiomicete Macrocybe titans foi reportado recentemente no Brasil despertando interesse científico. Na literatura, há poucos relatos quanto ao potencial antimicrobiano e micoquímico do macrofungo. Com base nisto, o presente trabalho teve por objetivo verificar a atividade antibacteriana do extrato aquoso do cogumelo M. titans e verificar seus efeitos bactericida e/ou bacteriostático e triagem micoquímica. A linhagem do macrofungo utilizado foi o M. titans, pertencente ao banco de germoplasma do Núcleo Experimental de Micologia Aplicada (NEMA), da Universidade Federal do Paraná - UFPR, Setor Palotina, Paraná. Os microrganismos utilizados foram cepas ATCC de Bacillus cereus 10876, Salmonella Typhimurium 14028, Salmonella Enteritidis 13076, Listeria monocytogenes 19111, Escherichia coli 25922, Escherichia coli O157:H7 43888, Pseudomonas aeruginosa 27853, Staphylococcus aureus 6538, Bacillus subtilis subespécie spizizenii 6633 e Klebsiella pneumoniae 13883. Para obtenção do extrato aquoso o basidioma seco do cogumelo foi triturado, diluído, mantido em repouso a 4ºC e filtrado. As cepas foram reativadas e a padronização dos inóculos foi realizada de acordo com a escala de McFarland de 0,5 e ajustada em espectrofotometria. Diluições foram realizadas a fim de obter a concentração de trabalho. O teste de susceptibilidade dos microrganismos foi realizado pela técnica de microdiluição em caldo utilizando uma placa de 96 poços com a finalidade de avaliar a concentração inibitória mínima (CIM) do extrato aquoso. Todas as cepas testadas apresentaram efeito inibitório e os melhores resultados foram para as bactérias Gram negativas P. aeruginosa e S. Enteritidis, e Gram positivas L. monocytogenes, B. spizizenii e S. aureus apresentaram efeito inibitório na com 0,78% (0,9765 mg/mL) do extrato. Através da concentração bactericida mínima (CBM) e do teste de susceptibilidade antibacteriana por disco-difusão foi possível confirmar a bioatividade do extrato em relação às cepas bacterianas testadas. Todas as cepas testadas apresentaram halos de inibição, no entanto, os melhores resultados observados foram para S. aureus e K. pneumoniae, apresentando tamanho médio de 18,25 e 14,38 mm, respectivamente. S. aureus e P. aeruginosa, foram analisadas através de Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV), onde foi possível observar a diminuição evidente no número de células sem nenhuma alteração aparente na morfologia das bactérias. Abstract: The basidiomycete mushroom Macrocybe titans was recently reported in Brazil, arousing scientific interest. In the literature, there are no reports on the antimicrobial and mycochemical potential of the macrofungus. Based on this, the present work aimed to verify the antibacterial activity of the aqueous extract of the mushroom M. titans and verify its bactericidal and/or bacteriostatic effects and mycochemical screening. The lineage of the macrofungus used was M. titans, belonging to the germplasm bank of the Experimental Nucleus of Applied Mycology (NEMA), at the Federal University of Paraná - UFPR, Setor Palotina, Paraná. The microorganisms used were ATCC strains of Bacillus cereus 10876, Salmonella Typhimurium 14028, Salmonella Enteritidis 13076, Listeria monocytogenes 19111, Escherichia coli 25922, Escherichia coli O157:H7 43888, Pseudomonas aeruginosa 27853, Staphylococcus aureus 6538, Bacillus subtilis subspecies Spizizinni 6633 and Klebsiella pneumoniae 13883. To obtain the aqueous extract, the dried mushroom basidioma was crushed, diluted, kept at rest at 4ºC and filtered. The strains were reactivated and the inoculum standardization was performed according to the 0.5 McFarland scale and adjusted in spectrophotometry. Dilutions were carried out in order to obtain the working concentration. The microorganism susceptibility test was performed using the broth microdilution technique using a 96-well plate in order to assess the minimum inhibitory concentration (MIC) of the aqueous extract. Through a visual analysis, all tested strains showed an inhibitory effect and the best results were for the Gram negative bacteria P. aeruginosa and S. Enteritidis, and Gram positive L. monocytogenes, B. spizizenii and S. aureus showed an inhibitory effect on column 8 with 0.78% (0.9765 mg/ml) of the extract. Through the minimal bactericidal concentration (CBM) and the antibacterial susceptibility test by diskdiffusion it was possible to confirm the bioactivity of the extract in relation to the bacterial strains tested. All strains tested showed inhibition halos, however, the best results were observed for S. aureus and K. pneumoniae, with an average size of 18.25 and 14.38 mm, respectively. S. aureus and P. aeruginosa were analyzed using Scanning Electron Microscopy (SEM), where it was possible to observe a clear decrease in the number of cells without any apparent change in the morphology of the bacteria.

Ganoderma genus are recognized worldwide for their medicinal properties and their national and international market is continuously growing. In order to investigate the commercial potential of our fungal diversity, the contents of bioactive compounds, known as Ganodic Acids (A.G.), were determined from three sources of fungus. Of the fruiting bodies of two varieties of Ganoderma sp and Ganoderma lucidum (wild and commercial). The wild variety was collected in the municipality of Quimbaya Quindío, the commercial, certified, was developed on agro-industrial plantain waste and the spent substrate were obtained after the harvesting of the commercial variety. The three samples obtained in triplicate, were dried and subjected to extraction with supercritical fluids and ultrasound. The concentration of A.G. was determined by Liquid Chromatography (HPLC), by the method of normalization of areas, using as standard Ganoderic Acid A. The method of extraction by ultrasound was the most efficient in all cases. The highest content of A.G., was found in the wild strain (266 μg/g), approximately 30% more than in the commercial variety, although considerably less than international studies. It is possible to conclude that the wild variety would have the potential to become a commercial source of A.G., Los hongos del Género Ganoderma son reconocidos mundialmente por sus propiedades medicinales y su mercado nacional e internacional crece continuamente. Con el objetivo de indagar acerca del potencial comercial de nuestra diversidad fúngica, se determinaron los contenidos de compuestos bio-activos, conocidos como Ácidos Ganodéricos (A.G.), a partir de tres fuentes del hongo. De los cuerpos fructíferos de dos variedades de Ganoderma sp y Ganoderma lucidum (silvestre y comercial). La variedad silvestre fue recolectada en el municipio de Quimbaya Quindío, la comercial, certificada, se cultivó sobre residuos agroindustriales de plátano y el sustrato agotado fue obtenido después de la recolección de la variedad comercial. Las tres muestras obtenidas por triplicado, fueron secadas y sometidas a extracción con fluidos supercríticos y por ultrasonido. La concentración de A.G. se determinó por Cromatografía Líquida (HPLC), por el método de normalización de áreas, usando como estándar el Acido Ganodérico A. Los mayores rendimientos de extracción fueron obtenidos por el método de ultrasonido, independientemente de la muestra analizada. El mayor contenido de A.G., fue encontrado en la cepa silvestre (266 µg/g), aproximadamente 30% más que en la variedad comercial, aunque considerablemente menor a estudios internacionales. Es posible concluir que la variedad silvestre tendría potencial para convertirse en una fuente comercial de A.G., Os fungos do gênero Ganoderma são reconhecidos mundialmente por suas propriedades medicinais e seu mercado nacional e internacional está crescendo continuamente. A fim de investigar o potencial comercial da nossa biodiversidade fúngica, o conteúdo de compostos bioativos, conhecidos como Ácidos Ganódericos (A.G.), foi determinado a partir de três fontes de fungos. Dos corpos frutíferos de duas variedades de Ganoderma sp e Ganoderma lucidum (silvestre e comercial). A variedade silvestre foi coletada no município de Quimbaya Quindío, a comercial, certificada, foi desenvolvida sobre resíduos de bananeira agroindustrial e do substrato gasto obtido após a colheita da variedade comercial. As três amostras obtidas em triplicata, foram secas e submetidas à extração com fluidos supercríticos e ultra-som. A concentração de A.G. foi determinado por Cromatografia Líquida (HPLC), pelo método de normalização de áreas, utilizando como padrão o Ácido Ganodérico A. O método de extração por ultrassom foi o mais eficiente em todos os casos. O maior teor de A.G., foi encontrado na estirpe selvagem (266 μg/g), aproximadamente 30% mais do que na variedade comercial, embora consideravelmente menos do que os estudos internacionais. É possível concluir que a variedade silvestre teria o potencial de se tornar uma fonte comercial de A.G.

FAPEMIG - Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais O presente estudo avaliou a produção de coquetéis lignocelulolíticos por fermentação em estado sólido (FES), utilizando bagaço de cana-de-açúcar e farelo de trigo como substrato e as linhagens fúngicas Aspergillus niger SCBM1 (Ni), Aspergillus fumigatus SCBM6 (Fu), Ganoderma lucidum 601 (Ga), Trametes versicolor 561 (Tr) e Pleurotus ostreatus PLO6 (Pl), em monoculturas ou em consórcio. Os extratos brutos produzidos foram avaliados em hidrólises de bagaço de cana-de-açúcar pré-tratado por auto-hidrólise (AH) e auto-hidrólise seguida de pré-tratamento alcalino (NaOH) (AH-Soda). Os coquetéis enzimáticos que apresentaram os melhores rendimentos em açúcares fermentescíveis foram selecionados e avaliados em novas hidrólises com altas cargas de sólidos e com adição de surfactante Triton X-100. Por último, realizou-se a fermentação alcoólica dos hidrolisados contendo as maiores concentrações de glicose. Nas FES realizadas com as linhagens isoladas, F1 (A. niger SCBM1 como inóculo - extrato Ni) foi a que mais se destacou na produção de enzimas, com atividades máximas para endoglucanase (82,70 U/g), exoglucanase (80,48 U/g), β-xilosidase (145,01 U/g) e manganês peroxidase (3,38 U/g). Para as FES em cocultivos, os extratos produzidos por consórcios entre Ni+Fu+Pl (F9), Ni+Tr+Pl (F6) e Ni+Ga+Pl (F10) apresentaram as maiores produções de celulases e hemicelulases, principalmente β-glicosidase (104,70, 171,09 e 106,10 U/g), β-xilosidase (89,72, 139,99 e 121,02 U/g) e xilanase (2582,38, 2267,96 e 1697,74 U/g), respectivamente. O extrato bruto produzido a partir do consórcio entre Basidiomicetos (Tr+Ga+Pl- F13) foi o mais eficiente na produção de lacase (25,27 U/g). Após as hidrólises, as maiores concentrações de glicose foram obtidas utilizando o extrato Ni (F1) nos hidrolisados de bagaço pré-tratado por AH e AH-Soda (10,78 e 10,32 g/L), extrato Fu+Ga+Pl (F11) com 9,76 (AH) e 10,60 g/L (AH-Soda) e extrato Ni+Ga+Pl (F10) com 11,92 g/L no hidrolisado de bagaço AH-Soda. Para xilose, a maior liberação foi obtida no hidrolisado F8 que utilizou o extrato Ni+Fu+Tr em bagaço AH (5,08 g/L). Após a fermentação alcóolica, uma conversão de 60,80% (em relação ao máximo teórico) foi alcançada em F1 (fermentação do hidrolisado Ni), com uma produção de 3,206 g/L de etanol e de 58,15% em F6 (3,084 g/L). Nas hidrólises realizadas com alto teor de carga de sólidos, os resultados obtidos demostraram que a concentração de açúcares redutores totais (ART) aumentou de 15,54 para 44,84 g/L no hidrolisado Ni (F1), quando a porcentagem de bagaço AH aumentou de 10 para 35%. No hidrolisado Ni+Tr+Pl (F6), a concentração de ART aumentou de 11,38 para 31,77 g/L nas mesmas condições. A adição de surfactante não influenciou significativamente no aumento no rendimento em ART no hidrolisado F1 (45,16 g/L). Já no hidrolisado F6, a concentração de ART aumentou de 30,94 para 48,16 g/L, sugerindo que para este extrato, a utilização do surfactante favoreceu a hidrólise enzimática. A fermentação do hidrolisado F6 com surfactante produziu 1,66 g/L de etanol, com conversão de 88,03 % em relação ao máximo teórico. Os resultados obtidos são promissores e incentivam estudos adicionais utilizando os extratos enzimáticos produzidos por consórcio fúngico em novas condições de hidrólise a fim de potencializar a produção de açúcares fermentescíveis e de etanol de segunda geração (etanol 2G). The present study evaluated the production of lignocellulolytic cocktails by solid-state fermentation (SSF), using sugarcane bagasse and wheat bran as substrates and the fungal strains Aspergillus niger SCBM1 (Ni), Aspergillus fumigatus SCBM6 (Fu), Ganoderma lucidum 601 (Ga), Trametes versicolor 561 (Tr) and Pleurotus ostreatus PLO6 (Pl) in monocultures and/or in consortia. The crude extracts produced were evaluated in the hydrolysis of sugarcane bagasse pretreated by autohydrolysis (AH) and by autohydrolysis followed by alkaline pretreatment (NaOH) (AH-Soda). The enzymatic cocktails that presented the best yields in terms of fermentable sugars were selected and evaluated in new hydrolyses experiments with high loads of solids and with addition of the surfactant Triton X-100. At last, alcoholic fermentations of the hydrolysates containing the highest glucose concentrations were carried out. In the SSF performed with isolated strains, the fermentation that used A. niger SCBM1 as inoculum (Ni – F1 extract) was the most outstanding in the production of enzymes, with maximum activities for endoglicanae (82.70 U/g), exoglicanae (80.48 U/g), β-xylosidase (145.01 U/g) and manganese peroxidase (3.38 U/g). For the SSF performed in co-culture of fungal strains, the extracts produced by consortia between Ni+Fu+Pl (F9), Ni+Tr+Pl (F6) and Ni+Ga+Pl (F10) presented the highest productions of cellulases and hemicellulases, mainly β-glucosidase (104.70, 171.09 and 106.10 U/g), β-xylosidase (89.72, 139.99 and 121.02 U/g) and xylanase (2582.38, 2267.96 and 1697.74 U/g), respectively. The crude cocktail produced from the consortium between Basidiomycetes (Tr+Ga+Pl) was the most efficient for laccase production (25.27 U/g). After the hydrolyses, the highest glucose concentrations were obtained in the hydrolysates of sugarcane bagasse pretreated by AH and AH-Soda using Ni extract (F1) with 10.78 and 10,32 g/L, Fu+Ga+Pl extract (F11) with 9.76 g/L (AH) and 10.60 g/L (AH-Soda) and Ni+Ga+Pl extract (F10) with 11.92 g/L in AH-Soda hydrolysate. For xylose, the highest release was obtained after F8 hydrolysis that used Ni+Fu+Tr extract in sugarcane bagasse pretreatment by AH (5.08 g/L). After alcoholic fermentation, 60.80 % (in relation to the theoretical maximum) of conversion was achieved in F1 (Ni hydrolysate), with a production of 3,20 g/L of ethanol and 58,15 % in F6 (3,08 g/L) of ethanol. In hydrolysis performed with high load of solids, the results obtained showed that the concentrations of total reducing sugars (TRS) increased from 15.54 to 44.84 g/L in Ni hydrolysate (F1), when the percentage of bagasse pretreatment by AH increased from 10 to 35 % . In the Ni+Tr+Pl (F6) hydrolysate, TRS concentration increased from 11.38 to 31.77 g/L under the same conditions. The addition of surfactant did not significantly influenced concentration of TRS in Ni hydrolysate (45.16 g/L). In the F6 hydrolysis, the TRS concentration increased from 30.94 to 48.16 g/L, suggesting that for this extract, the use of surfactant favored the enzymatic action. The fermentation of F6 hydrolysate produced 1.66 g/L of ethanol, with 88.03 % of conversion in relation to the theoretical maximum. The obtained results are promising and encourage additional studies using enzymatic extracts produced by fungal consortium in new hydrolysis conditions in order to enhance the production of fermentable sugars and second generation ethanol (2G ethanol). Tese (Doutorado)

Resíduos sólidos agroindustriais, que podem gerar impactos negativos à sustentabilidade ambiental, são empregados como biomassa lignocelulósica para produção comercial de cogumelos comestíveis, um alimento de alta qualidade nutricional e terapêutica. No entanto, estes fungos comestíveis são altamente perecíveis e o processo de secagem apresenta-se como alternativa para sua armazenagem segura. Neste trabalho foram investigados os efeitos da temperatura de secagem (35°C e 55ºC) do micélio do fungo comestível Lentinus crinitus cultivado em meio sintético utilizando cinética de secagem. Curvas experimentais de secagem foram obtidas em períodos crescentes até a obtenção de massa constante, empregando estufa de circulação. Os micélios secos a 55ºC demandaram menor tempo de processo e, consequente, redução do consumo energético, sem comprometimento das funções biológicas do fungo. Os modelos matemáticos (Empíricos e Semi-empíricos) testados se ajustaram as curvas de ambas as temperaturas. Porém, os melhores ajustes foram o modelo Page para 35°C e o modelo Midilli para 55ºC. Com base nas equações dos modelos, os resultados indicaram que o tempo para secagem do fungo será de aproximadamente 70 minutos, nas condições geométricas da amostra empregada, quando realizado em temperaturas próximas de 55ºC. Made available in DSpace on 2020-10-17T09:12:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cris-Helm-8734-21957-1-PB.pdf: 1047617 bytes, checksum: cbb5165fbf38860a3dbb6241fb6d490c (MD5) Previous issue date: 2020 Edição Especial - Simpósio Mundial de Sustentabilidade.

Considerando a importância dos estudos de bioprospecção de espécies de ambientes ameaçados, de grande riqueza biológica e endemismo, esse trabalho visou investigar o potencial biotecnológico de espécies fúngicas de diferentes hábitats de um fragmento de Cerrado. Os fungos foram isolados em cultura, algumas das quais selecionadas para a prospecção de enzimas de interesse industrial, atividade antimicrobiana e toxicidade preliminar. Foi detectada atividade de carboximetilcelulase e peroxidase em todos os isolados avaliados. Nos testes para atividade antimicrobiana, os metabólitos fúngicos não mostraram inibição do crescimento para as cepas bacterianas analisadas, da mesma forma que nos ensaios de toxicidade, esses metabólitos se mostraram inócuos para larvas de Artemia salina. Ainda que a avaliação da toxicidade requeira ensaios complementares, esses resultados estimulam a continuidade dos estudos para a bioprospecção do potencial biotecnológico destes fungos, apontando-os como candidatos promissores para serem empregados em processos de aplicação direta ao homem ou ao meio ambiente.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, CAPES

Submitted by Bruno de Jesus Fontes (brunobjf@gmail.com) on 2019-05-30T17:28:51Z No. of bitstreams: 1 Fontes.Dissertação_2019.pdf: 3014282 bytes, checksum: d52b9e2af5972e4515016a266a9a1561 (MD5) Approved for entry into archive by Adriana Aparecida Puerta Buzzá (dripuerta@rc.unesp.br) on 2019-05-31T18:42:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 fontes_bj_me_rcla.pdf: 3003775 bytes, checksum: c6ad9c4b8f94cbb8b123a7ec002152f9 (MD5) Made available in DSpace on 2019-05-31T18:42:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 fontes_bj_me_rcla.pdf: 3003775 bytes, checksum: c6ad9c4b8f94cbb8b123a7ec002152f9 (MD5) Previous issue date: 2019-02-28 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) As lacases têm sido alvo de investigação devido à capacidade de oxidar compostos aromáticos fenólicos e não fenólicos com a concomitante redução do oxigênio à agua. Embora possam ser sintetizadas por diversos organismos, sua produção se destaca em fungos de podridão branca. As lacases tem sido amplamente aplicada no campo industrial e ambiental. A fim de comparar o potencial catalítico das lacases dos fungos de ambiente marinho e terrestre, no presente estudo as lacases produzidas pelos basidiomicetos de origem marinha (Peniophora sp. CBMAI 1063 e Marasmiellus sp. CBMAI 1062) e terrestre (Peniophora cinerea CCIBt 2541 e Marasmiellus colocasiae CCIBt 3388) foram parcialmente purificadas (ultrafiltração e cromatografia de troca iônica) e caracterizadas bioquimicamente. Para a quantificação das laccases foram utilizados os substratos enzimáticos 2,2’-azino-bis (3- etilbenzotiazolina-6-sulfónico) (ABTS) e siringaldazina (SYG). Os fungos analisados apresentaram produção de lacases no meio utilizado, o qual foi previamente otimizado para a produção de lacases para o Peniophora sp. CBMAI 1063. Nestas condições de cultivo, as enzimas ligninoliticas Manganês Peroxidase (MnP) e Lignina Peroxidase (LiP) não foram produzidas. Com relação ao processo de purificação, a cada passo houve perda no rendimento, em proporções diferentes para o conjunto enzimático de cada fungo, com melhor recuperação para as lacases produzidas pelos fungos do gênero Marasmiellus. O zimograma revelou que Peniophora sp. CBMAI 1063 produz duas isoenzimas de lacases, P. cinerea CCIBt 2541 cinco, Marasmiellus sp. CBMAI 1062 duas e M. colocasiae CCIBt 3388 uma. O conjunto enzimático foi caracterizado de modo aparente. O pH ótimo (4,0 para ABTS e 5,5 para SYG) e temperatura ótima (55 °C) foram iguais para os dois fungos do gênero Peniophora. Para os fungos do gênero Marasmiellus o pH ótimo foi o mesmo (5,0 para ABTS e 6,5 para SYG) porém a temperatura ótima foi diferente (55 °C para Marasmiellus sp. CBMAI 1062 e 50 °C para M. colocasiae CCIBt 3388). As lacases de todas as espécies estudadas não apresentarem atividade na presença de EDTA e L-cisteína, evidenciando a importância do Cu2+ e do aminoácido cisteína no sítio ativo. Diferentes íons metálicos ativam as atividades das lacases. De modo geral, a caracterização do conjunto enzimático do P. cinerea CCIBt 2541 apresentou melhores resultados que o do Peniophora sp. CBMAI 1063. No conjunto enzimatico M. colocasiase CCIBt 3388 íons Mn2+ aumentou a atividade (117%), entretanto Marasmiellus sp. CBMAI 1062 apresentou estabilidade maior frente a todos os íons testados, apresentando aumento da atividade na presença de Al3+ (126%). Quanto à salinidade, o I50 para NaCl foi mais eficiente para as lacases do P. cinerea CCIBt 2541, enquanto que Marasmiellus sp. CBMAI 1062 apresentou maior resistência a 1000 mM de NaCl. De acordo com os valores de KM e Vmax há uma maior afinidade das lacases dos fungos de origem terrestres pelos substratos ABTS e SYG. As lacases parcialmente purificadas apresentaram as seguintes porcentagens de descoloração do corante têxtil marinho reativo (MR) (40 mg/L) após sete dias de incubação: P. cinerea CCIBt 2541 67%, Peniophora sp. CBMAI 1063 61% e M. colocasiae CCIBt 3388 27%. A descoloração do MR pelas lacases dos fungos do gênero Peniophora foi similar à obtida para a lacase industrial de Trametes versicolor (66%). Devido à quantidade insuficiente de lacases do Marasmiellus sp. CBMAI 1062 o teste de descoloração não foi realizado. Testes de toxicidade mostraram que as lacases de P. cinerea CCIBt 2541 deixa praticamente inalterada a toxicidade no tratamento. Entretanto o conjunto de lacases do Peniophora sp. CBMAI 1063 e M. colocasiae CCIBt 3388 apresentam um leve aumento de toxicidade após o período de reação. A lacase pura de T. versicolor não alterou a toxicidade inicial. Os resultados do presente estudo ampliam o conhecimento sobre as lacases produzidas por fungos de origem marinha e abrem novas perspectivas de estudos na área da biotecnologia ambiental. Laccases have been under investigation due to their capacity to oxidize phenolic and non-phenolic aromatic compounds with concomitant reducing of oxygen to water. Although laccases can be synthetized by several organisms; their production is notable in white rot fungi. Laccases have been wide applied in industrial and environmental fields. Aiming to compare the catalytic potential of laccases in fungi from marine and terrestrial environments, in the present work laccases produced by marine basidiomycetes (Peniophora sp. CBMAI 1063 and Marasmiellus sp. CBMAI 1062) and the terrestrial (Peniophora cinerea CCIBt 2541 and Marasmiellus colocasiae CCIBt 3388) were partially purified (ultrafiltration and ionic chromatography) and biochemically characterized. For the laccases quantification were used 2,2’-azino-bis (3- ethilbenzotiazolina-6-sulphnic) (ABTS) and syringaldazine (SYG) as substrates. All studied fungi showed satisfactory laccases productions in the utilized medium, which was previously optimized to laccases production by Peniophora sp. CBMAI 1063. In these culture conditions ligninolytic enzymes Manganese Peroxidase (MnP) and Lignin Peroxidase (LiP) were not produced. Regarding the purification process, there was yield loss in each step, in different proportions to the enzymatic pool for each fungi, with better yielded the laccases produced by the fungi from Marasmiellus genus. Zymogram revealed that Peniophora sp. CBMAI 1063 has two laccase isoforms, P. cinerea CCIBt 2541 has five, Marasmiellus sp. CBMAI 1062 has two and M. colocasiae CCIBt 3388 has one. The enzymatic pools were apparently characterized. The optimum pH (4.0 to ABTS and 5.5 to SYG) and optimum temperature (55 °C) were the same to both Peniophora fungi. The fungi from the genus Marasmiellus had the same optimum pH (5.0 to ABTS and 6.5 to SYG), however, the optimum temperature was distinct, 55 °C to the Marasmiellus sp. CBMAI 1062 and 50 °C to the M. colocasiae CCIBt 3388). EDTA and L-cysteine completely inhibit all enzymatic pools, showing the importance of Cu2+ and the cysteine aminoacid in the active site of laccases. Different metallic ions acted empowering the laccase activities. The enzymatic pool obtained with the fungus P. cinerea CCIBt 2541 showed better results in comparison with Peniophora sp. CBMAI 1063. In the enzymatic pool of M. colocasiase CCIBt 3388 Mn2+ ions enhanced laccase activity (117%), but the pool of Marasmiellus sp. CBMAI 1062 showed better stability with all tested ions, enhancing its activity in the presence of Zn2+ (102%) and Al3+ (126%). Regarding salinity, the I50 of NaCl was most efficient to the laccases of P. cinerea CCIBt 2541, while laccases from Marasmiellus sp. CBMAI 1062 were more resistant to 1000 mM of NaCl. According to the KM e Vmax values, there is a better affinity with laccases from terrestrial fungi to the substrates ABTS and SYG. The partially purified laccases exhibited the following percentage of the Marine Reactive (MR) (40 mg/L) textile dye decolorization after seven days of incubation: P. cinerea CCIBt 2541 67%, Peniophora sp. CBMAI 1063 61% and M. colocasiae CCIBt 3388 27%. Decolorization of MR by Peniophora fungal laccases was similar to the pure industrial laccase from Trametes versicolor (66%). Due to the little amount of laccases of Marasmiellus sp. CBMAI 1062 discoloration test was not carried out. Toxicity tests revealed that laccases from P. cinerea CCIBt 2541 did not change the dye toxicity during the treatment. However, the pool of Peniophora sp. CBMAI 1063 and M. colocasiae CCIBt 3388 slightly increased the toxicity after the treatment. T. versicolor pure laccase did not change the initial toxicity. Results from the present work increase the knowledge about the laccases produced by fungi from marine origin and open new perspectives of studies in the area of environmental biotechnology. FAPESP: 2016/07957-7.

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Outra Agência Objective: this study evaluated the effects in vitro and in vivo of Agaricus blazei against Haemonchus contortus in sheep. Methods: the in vitro efficacy of aqueous extract on egg hatching inhibition (EHI) was investigated and after 72 h incubation with varying concentrations the effects on, blastomeres, embryonated eggs, and first stage larvae (L1) were evaluated. Larval development inhibition (LDI) for dry powder and the aqueous extract were evaluated in fecal cultures of sheep infected with H. contortus. In vivo efficacy was determined by reduction in fecal egg count (FEC). Lambs were treated with powder A. blazei (11.4 g/kg pc) or trichlorfon, or were untreated and the possible toxicity of this fungus was monitored by plasmatic enzyme analysis. Results: concentrations equal to and higher than 3.62 mg/mL and of aqueous extract were 100% effective in the EHI test. In the LDI test, LC90 was estimated for 5.66 and 106.0 mg/g fecal culture for aqueous extract and powder, respectively. The mean FEC in lambs 14 days post-treatment with A. blazei powder was significantly lower than observed for the negative control, and the serum levels of aspartate transaminase and alanine transaminase were normal. Conclusion: the fungi supplementation promotes, respectively, high and moderate anthelmintic efficacy with in vitro and in vivo tests, respectively, suggesting it as an alternative or complementary treatment for haemonchosis in sheep.

Orientador: André Ricardo de Lima Damásio Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Como forma de diminuir o uso de tecnologias que empregam matéria-prima de origem fóssil, muitas pesquisas vêm sendo desenvolvidas para o estabelecimento do uso de energias renováveis, através de biorrefinarias. A principal matéria-prima empregada em biorrefinarias é a biomassa lignocelulósica, a qual pode ser convertida em produtos de valor agregado via fermentação microbiana ou processos químicos. As enzimas capazes de clivar a complexa rede de polissacarídeos que compõem a estrutura da parede celular de plantas, bem como aquelas associadas à biossíntese e ao metabolismo de carboidratos são chamadas de Carbohydrate-Active Enzymes (CAZymes), comumente produzidas por uma gama de organismos, tais como bactérias, fungos e plantas. Dentre os organismos produtores, descritos na literatura, os fungos filamentosos se destacam na produção e secreção de enzimas lignocelulolíticas de forma homóloga e heteróloga. Neste contexto, basidiomicetos apresentam um arsenal enzimático variado devido aos diversos papéis ecológicos que empregam na natureza. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar em termos de CAZymes o arsenal enzimático dos basidiomicetos Laetiporus sulphureus (podridão marrom), Pycnoporus coccineus (podridão branca) e Trametes versicolor (podridão branca), a fim de buscar novas enzimas alvos que possam contribuir na conversão enzimática da lignocelulose. Os secretomas submetidos a cultivo submerso contendo celulose microcristalina (Avicel®), glicose e resíduo de Eucalyptus grandis, bagaço de cana-de-açúcar (SCB) e palha de cana-de-açúcar (SCS) pré-tratados por explosão a vapor sofreram análises por espectrometria de massas (LC-MS/MS). A maior variedade de proteínas foi verificada nos secretomas de T. versicolor (206 proteínas), seguido por P. coccineus (163 proteínas) e L. sulphureus (121 proteínas). Entre as enzimas encontradas, destaca-se a presença de 8 LPMOs nos secretomas dos basidiomicetos de podridão branca, 5 em T. versicolor e 3 em P. cocineus. Ressalta-se que outras análises foram realizadas como a atividade dos secretomas em diferentes substratos sintéticos e as análises de consumo de glicose e crescimento em diferentes mono e dissacarídeos. Por fim, um ensaio de sacarificação em função do tempo foi realizado utilizando SCB suplementado com o secretoma que obteve maior secreção de enzimas para cada fungo respectivamente Abstract: In order to reduce the use of technologies that use raw materials of fossil origin, many researches have been developed to establish the use of renewable energy through biorefineries. The main raw material used in biorefineries is lignocellulosic biomass, which can be converted into value-added products via microbial fermentation or chemical processes. The enzymes capable of cleaving the complex network of polysaccharides that make up the cell wall structure of plants, as well as those associated with biosynthesis and carbohydrate metabolism are called Carbohydrate-Active Enzymes (CAZymes), commonly produced by a range of organisms, such as bacteria, fungi and plants. Among the producing organisms described in the literature, filamentous fungi stand out in the production and secretion of lignocellulolytic enzymes in a homologous and heterologous form. In this context, basidiomycetes present a varied enzymatic arsenal due to the diverse ecological roles they use in nature. The objective of this work was to evaluate the enzymatic arsenal of the basidiomycetes Laetiporus sulphureus (brown rot), Pycnoporus coccineus (white rot) and Trametes versicolor (white rot) in order to search for new target enzymes that may contribute to lignocellulose enzymatic conversion. The secretomes grown on submerged cultivation containing microcrystalline cellulose (Avicel®), glucose and Eucalyptus grandis residue, sugarcane bagasse (SCB) and sugarcane straw (SCS) pretreated by steam explosion performed mass spectrometric analyzes (LC-MS/MS). The largest variety of proteins were found on the T. versicolor secretomes (206 proteins), followed by P. coccineus (163 proteins) and L. sulphureus (121 proteins). Among the enzymes the presence of 8 LPMOs in the white rot basidiomycetes secretomes, 5 in T. versicolor and 3 in P. cocineus are remarkable. Noteworthy that other analyzes were performed, as the secretomes activity in different synthetic substrates and the analyzes of glucose consumption and growth in different mono and disaccharides. Finally, a saccharification as a function of time assay was performed using SCB supplemented with the secretome which obtained higher secretion of enzymes for each fungus respectively Mestrado Fármacos, Medicamentos e Insumos para Saúde Mestra em Biociências e Tecnologia de Produtos Bioativos CAPES 1701287

Submitted by Jos? Henrique Henrique (jose.neves@ufvjm.edu.br) on 2020-09-29T19:11:37Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) mirian_jesus_souza.pdf: 979233 bytes, checksum: 03161521e90f39ebf8ffee66efd14872 (MD5) Approved for entry into archive by Jos? Henrique Henrique (jose.neves@ufvjm.edu.br) on 2020-09-30T13:12:29Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) mirian_jesus_souza.pdf: 979233 bytes, checksum: 03161521e90f39ebf8ffee66efd14872 (MD5) Made available in DSpace on 2020-09-30T13:12:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) mirian_jesus_souza.pdf: 979233 bytes, checksum: 03161521e90f39ebf8ffee66efd14872 (MD5) Previous issue date: 2019 Na busca de fontes renov?veis de energia destaca-se a produ??o de biodiesel, bicombust?vel obtido pelo processo de transesterifica??o realizada mediante a mistura de ?leo vegetal ou gordura animal em metanolou etanol, na presen?a de um catalisador. Um dos principais res?duos gerados pela produ??o de ?leos para obten??o de biodiesel ? torta, e que apresenta alto potencial para complementa??o da alimenta??o animal. Entretanto algumas tortas apresentam compostos t?xicos naturais em sua composi??o o que limita seu uso. Entre estas tortas temos a de caro?o de algod?o, que possui em sua formula??o gossipol livre e a torta de semente de pinh?o-manso que apresenta ?steres de forbol em sua composi??o que ? t?xico para animais e humanos. Diante da limita??o para o uso destas tortas devido ? presen?a de compostos t?xicos, o presente estudo tem como objetivo promover a destoxifica??o de torta de semente de pinh?o-manso(TSPM)e de caro?o de algod?o(TCA)pelo processo de fermenta??o em estado s?lido usando os fungos filamentosos do filo dos ascomicetos (MB 2.1, MB 2.7 e MB 2.13B) e basidiomicetos (EF 41, EF 71 e EF 79). Os fungos filamentosos que apresentaram maior potencial de redu??o do gossipol livre foram EF 79, com redu??o do gossipol livre em 86,67%, e MB 2.7 com redu??o do gossipol livre em 72,80%. O teor de gossipol livre presente na torta in naturaera de 8,43 mgg-1, ap?s o processo de fermenta??o o teor foi reduzido para 1,12mgg-1 com EF 79 e 2,29 mgg-1 com MB 2.7. Dos fungos utilizados no processo de fermenta??o para a torta de semente de pinh?o-manso, ap?s 15 dias de fermenta??o EF 71 e MB 2.13B reduziram em meia 90% dos ?steres de forbol. O EF 71 promoveu ? redu??o dos 92,02% dos ?steres de forbol e MB 2.13B a redu??o de 90,46%. O teor dos ?steres na torta in natura era de 1,15 mgg-1, ap?s a fermenta??o com o fungo EF 71 o teor observado foi de 0,09 mgg-1 e, com o fungo MB2.13B foi de 0,11mgg-1. Ap?s o processocultivo microbiano foi poss?vel a redu??o dos compostos t?xicos na torta, como tamb?m melhorar sua qualidade nutricional, observado por meio dos resultados de an?lises bromatol?gicas. Dessa forma o processo de cultivo estado s?lido usando os fungos apresentou-se como uma alternativa vi?vel para agregar valor aos res?duos agroindustriais destinados ? alimenta??o animal, que poder?o ser confirmados quando dos ensaios in vivo com adi??o de tortas pr?-tratadas biologicamente pelos fungos insumos para composi??o de ra??o de animais (monog?stricos ou polig?stricos). Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-gradua??o em Biocombust?veis, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2019. In the search for renewable sources of energy, stand out the biofuel production obtained through the transesterification process performed by mixing vegetable oil or animal fat in methanol or ethanol, in the presence of a catalyst. One of the main residues generated by the production of oils to obtain biofuel is cake, which has high potential for complementing animal food. However some cake has natural toxic compounds in their composition which limits their use. Among these cakes are the cottonseed, which has in its formulation free gossypol and the jatropha seed cake that has esters of phorbol in its composition which is toxic to animals and humans. Given the limitation for the use of these cakes due to the presence of toxic compounds, the present study aims to promote the detoxification of Jatropha curd(TSPM)and cottonseed seed cake (TCA)by the solid state fermentation process. Using the filamentous fungi of the Ascomycete phylum (MB 2.1, MB 2.7 and MB 2.13B) and Basidiomycetes (EF 41, EF 71 and EF 79). The filamentous fungi with the highest potential for freegossypol reduction were EF 79, with free gossypol reduction by 86.67%, and MB 2.7 with free gossipol reduction by 72.80%. The free gossypol content present in fresh cake was 8.43 mgg-1, after the fermentation process the content was reduced to 1.12mgg-1 with EF 79 and 2.29 mgg-1 with MB 2.7. From the fungi used in the fermentation process for jatropha seed cake, after 15 days of fermentation EF 71 and MB 2.13B reduced by 90% of phorbol esters. The EF 71 promoted a reduction of 92.02% of phorbol esters and MB 2.13B a reduction of 90.46%. The esters content in fresh cake was 1.15 mgg-1, after fermentation with the fungus EF 71 the observed content was 0.09 mgg-1 and with the fungus MB2.13B was 0.11mgg-1. 1. After the microbial cultivation process it was possible to reduce the toxic compounds in the cake, as well as improve its nutritional quality, observed through the results of bromatological analysis. Thus the solid state cultivation process using the fungi presented as a viable alternative to add value tothe agroindustrial residues destined for animal food, which can be confirmed by the in vivo tests with the addition of pre-treated cakes biologically treated by the fungi to animal food composition (monogastric or polygastric).

Na busca de fontes renováveis de energia destaca-se a produção de biodiesel, bicombustível obtido pelo processo de transesterificação realizada mediante a mistura de óleo vegetal ou gordura animal em metanol ou etanol, na presença de um catalisador. Um dos principais resíduos gerados pela produção de óleos para obtenção de biodiesel é torta, e que apresenta alto potencial para complementação da alimentação animal. Entretanto algumas tortas apresentam compostos tóxicos naturais em sua composição o que limita seu uso. Entre estas tortas temos a de caroço de algodão, que possui em sua formulação gossipol livre e a torta de semente de pinhão-manso que apresenta ésteres de forbol em sua composição que é tóxico para animais e humanos. Diante da limitação para o uso destas tortas devido á presença de compostos tóxicos, o presente estudo tem como objetivo promover a destoxificação de torta de semente de pinhão-manso (TSPM) e de caroço de algodão (TCA) pelo processo de fermentação em estado sólido usando os fungos filamentosos do filo dos ascomicetos (MB 2.1, MB 2.7 e MB 2.13B) e basidiomicetos (EF 41, EF 71 e EF 79). Os fungos filamentosos que apresentaram maior potencial de redução do gossipol livre foram EF 79, com redução do gossipol livre em 86,67%, e MB 2.7 com redução do gossipol livre em 72,80%. O teor de gossipol livre presente na torta in natura era de 8,43 mgg-1, após o processo de fermentação o teor foi reduzido para 1,12mgg-1 com EF 79 e 2,29 mgg-1 com MB 2.7. Dos fungos utilizados no processo de fermentação para a torta de semente de pinhão-manso, após 15 dias de fermentação EF 71 e MB 2.13B reduziram em meia 90% dos ésteres de forbol. O EF 71 promoveu à redução dos 92,02% dos ésteres de forbol e MB 2.13B a redução de 90,46%. O teor dos ésteres na torta in natura era de 1,15 mgg-1, após a fermentação com o fungo EF 71 o teor observado foi de 0,09 mgg-1 e, com o fungo MB2.13B foi de 0,11mgg-1. Após o processo cultivo microbiano foi possível a redução dos compostos tóxicos na torta, como também melhorar sua qualidade nutricional, observado por meio dos resultados de análises bromatológicas. Dessa forma o processo de cultivo estado sólido usando os fungos apresentou-se como uma alternativa viável para agregar valor aos resíduos agroindustriais destinados á alimentação animal, que poderão ser confirmados quando dos ensaios in vivo com adição de tortas pré-tratadas biologicamente pelos fungos insumos para composição de ração de animais (monogástricos ou poligástricos). Made available in DSpace on 2020-02-20T18:08:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAOFINALMirian.pdf: 1421468 bytes, checksum: f623f75535830db64669136da6de0ac8 (MD5) Previous issue date: 2019 Dissertação apresentada ao programa de Pós-Graduação em Bicombustíveis da Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, como requisito para obtenção do título de Mestre. Orientador: Prof. Dr.a Nísia Andrade Villela D. Pinto. Coorientador: Dr. Félix Gonçalves de Siqueira, pesquisador da Embrapa Agroenergia.

EnglishWastewater is an environmental constraint for the development of the textile industry, since sometimes due to inappropriate management and/or ineffective treatment, it leads to contamination of biota. One of the main characteristics of textile wastes is the high amount of dye which, during the production process did not adhere to the fiber, thus appearing in the final waste. These wastes, when released into the aquatic environment reduce the availability of light, photosynthesis, as well as other environmental problems. Furthermore, these compounds are mostly toxic, even in small concentrations. Enzymes produced by Pleurotus sajor-caju are reported as efficient in color removal, dye degradation and detoxification of textile wastes. The objective of this study was to evaluate the ability of Pleurotus sajor-caju crude enzyme broth to remove color and reduce the toxicity of solutions containing Red 50 and Blue 56 dyes (100 mg L -1 ). For such, production of the enzyme broth was carried out in a bioreactor (working volume of 4 L), which was used directly on the dye solution, diluted in water (1:1) and diluted in ABTS (2,2’-azino-bis (3-ethylbenzthiazoline-6- sulfonic acid)) (1:1). Ecotoxicological tests were performed using the freshwater crustacean Daphnia magna. Higher efficiency in color removal by the crude enzymatic broth of P. sajor-caju diluted in ABTS solution was observed (removal rates equal to 1.3 and 1.9x10 -2 mg U -1 h -1 , for dyes Red 50 and Blue 56, respectively). The laccase enzyme was quantified in the enzyme broth (115 U L -1 ) and maintained its activity 100% throughout all assays. A statistically significant reduction in toxicity was observed for Blue 56 dye. Red 50 dye remained toxic even after the enzymatic treatment, suggesting the need for a longer reaction time for this dye. The P. sajor- caju crude enzyme broth proved to be effective and promising for use in textile wastewater treatment plants. portuguesAs aguas residuarias sao normalmente um empecilho ambiental para o desenvolvimento da industria textil em razao do gerenciamento inadequado e/ou tratamento ineficaz, que levam a contaminacao da biota. Efluentes de industrias texteis tem como uma de suas principais caracteristicas a alta carga de corantes, os quais durante o processo produtivo nao se aderiram a fibra e, assim, encontram-se presentes no efluente final. Estes, quando lancados no ambiente aquatico, reduzem a disponibilidade de luz e a realizacao da fotossintese e ocasionam outros problemas ambientais. Alem disso, a maioria dos corantes texteis sao toxicos, mesmo em pequenas concentracoes. Enzimas produzidas por Pleurotus sajor-caju sao reportadas como eficientes na remocao de cor, degradacao de corantes e detoxificacao de efluentes texteis. Assim, neste trabalho teve-se como objetivo avaliar a capacidade do caldo enzimatico bruto de Pleurotus sajor-caju em remover a cor e, concomitantemente, diminuir a toxicidade de solucoes que contem os corantes texteis Red 50 e Blue 56 (100 mg L-1). Para tal, produziu-se o caldo enzimatico em biorreator (volume util de 4 L), que foi adicionado diretamente sobre a solucao de corantes sem diluicao, diluido em agua (1:1) e diluido em solucao ABTS (2,2’-azino-bis(3-etilbenzotiazolina-6-sulfonico)) (1:1). O microcrustaceo Daphnia magna foi utilizado nos testes ecotoxicologicos. Observou-se maior eficiencia na remocao de cor pelo caldo enzimatico bruto de P. sajor-caju diluido em solucao ABTS (taxas de remocao 1,3 e 1,9x10-2 mg U-1 h-1, para os corantes Red 50 e Blue 56, respectivamente). A enzima lacase foi quantificada no caldo enzimatico (115 U L-1) e manteve 100% de sua atividade durante todos os experimentos. Observou-se reducao estatisticamente significativa da toxicidade para o corante Blue 56. O corante Red 50 manteve-se toxico mesmo apos o tratamento enzimatico, sugerindo a necessidade de maior tempo de reacao para esse corante. O caldo enzimatico bruto de P. sajor-caju mostrou-se eficaz e de uso promissor em estacoes de tratamento de efluentes texteis.

Submitted by Divis??o de Documenta????o/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2019-06-03T15:03:23Z No. of bitstreams: 3 Reprodu????o N??o Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) Tese(Parcial)_VanessaGal??cio_PPGBIOTEC.pdf: 424441 bytes, checksum: 7d2fc9de0d235019594170213586206c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Rejected by Divis??o de Documenta????o/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br), reason: on 2019-06-05T13:39:10Z (GMT) Submitted by Divis??o de Documenta????o/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2019-06-05T13:42:02Z No. of bitstreams: 3 Reprodu????o N??o Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) Tese(Parcial)_VanessaGal??cio_PPGBIOTEC.pdf: 424441 bytes, checksum: 7d2fc9de0d235019594170213586206c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Approved for entry into archive by Divis??o de Documenta????o/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2019-06-05T18:28:05Z (GMT) No. of bitstreams: 3 Reprodu????o N??o Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) Tese(Parcial)_VanessaGal??cio_PPGBIOTEC.pdf: 424441 bytes, checksum: 7d2fc9de0d235019594170213586206c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Made available in DSpace on 2019-06-05T18:28:05Z (GMT). No. of bitstreams: 3 Reprodu????o N??o Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) Tese(Parcial)_VanessaGal??cio_PPGBIOTEC.pdf: 424441 bytes, checksum: 7d2fc9de0d235019594170213586206c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-05-17 CAPES - Coordena????o de Aperfei??oamento de Pessoal de N??vel Superior 92 991691571 Brazil is the third largest producer of fruit in the world and the leader in the production of tropical fruits, reaching approximately 44 million tons of fruits per year, being much processed industrially, generating tons of waste that are normally discarded in nature. The Basidiomycete fungi are lignocellulosic, that is, they have the ability to degrade complex compounds such as cellulose and lignin; these fungi are grown on substrates based on residues that, at the end of their cultivation, present high nutritional value similar to the fruiting body. These post-culture substrates, also called spent substrates, are usually discarded or used as organic fertilizer. This work had as objective to produce an animal feed, from the fungal substrate. The first step was the collection, nutritional and microbiological analysis of fruit pulp residues according to the greater local availability and harvest period. After nutritional analysis, the a??a?? residue was selected, which, together with calcium carbonate, was used as substrate for Pleurotus ostreatus and Lentinula edodes. From the cultivation, the two-stage mushroom substrates at the initiations colonization and post-cultivation were tested as feed for broiler chickens by digestibility analysis using the total excreta collection method, with crude energy, metabolizable and corrected nitrogen energy, as well as haematological and parasitological analysis of the birds. From these results, the substrate of a??a?? colonized by Pleurotus ostreatus was selected to perform performance analysis, carcass characteristics, absolute and relative weights of organs, chemical composition of noble cuts and height of intestinal villi of broiler chickens in stages of development. A total of 360 non-sexed Cobb commercial broiler chicks were used in two stages of development, growth phase (21 to 33 days) and final phase (33 to 42 days). The experimental design will be completely randomized with treatments in 5 x 2 factorial arrangement (diets and 2 stages of development). The diets were formulated with different concentrations of the selected substrates after digestibility assay (0%, 3%, 6%, 9% and 12%), and were supplied to six plots with 12 birds per plot. The results demonstrated the feasibility of using the substrate at an average level of 5% of inclusion, evidenced in the improvement of characteristics such as lower abdominal fat weight, higher protein content in the meat and lower lipid content, as well as evidence of benefits regarding immunity and health of animals. The histological analysis of the intestinal villi showed characteristics compatible with the consumption of fiber-rich diets, with the heights decreasing with the increase of the inclusion level of the substrate. Thus, a feed supplemented with an additive of lower cost and high environmental value was produced, the low nutritional content of the residue being modified by the cultivation of basidiomycete fungi that performed the bioconversion of complex compounds, making them available to be absorbed by the organism animal and adding characteristics similar to the mycelium present in the substrate. O Brasil ?? o terceiro maior produtor de frutas do mundo e l??der na produ????o de frutas tropicais, chegando a aproximadamente 44 milh??es de toneladas de frutos por ano, sendo grande parte processado industrialmente, gerando toneladas de res??duos que normalmente s??o descartados na natureza. Os fungos Basidiomicetos s??o lignocelulol??ticos, ou seja, apresentam a capacidade de degradar compostos complexos como a celulose e lignina; estes fungos s??o cultivados em substratos a base de res??duos que, ao final de seu cultivo, apresentam alto valor nutricional semelhante ao corpo de frutifica????o. Estes substratos p??s-cultivo, tamb??m chamados de exaurido s??o normalmente descartados ou usados como adubo org??nico. Este trabalho teve como objetivo produzir uma ra????o animal, a partir do substrato f??ngico. A primeira etapa foi a coleta, an??lise nutricional e microbiol??gica de res??duos de polpas de frutas de acordo com a maior disponibilidade local e per??odo de safra, sendo selecionado o res??duo de a??a?? que acrescido de carbonato de c??lcio foi utilizado como substrato para cultivo de Pleurotus ostreatus e Lentinula edodes. A partir do cultivo, os substratos dos cogumelos, em duas fases, na coloniza????o dos prim??rdios e p??scultivo foram testados para serem usados como ra????o para frangos de corte, atrav??s da an??lise de digestibilidade pelo m??todo de coleta total de excretas, com c??lculo de energia bruta, energia metaboliz??vel e corrigida para nitrog??nio, al??m de analise hematol??gica e parasitol??gica das aves. A partir destes resultados foi selecionado o substrato de res??duo de a??a?? miceliado de Pleurotus ostreatus (SAMPO) para a realiza????o de an??lise de desempenho, caracter??sticas de carca??as, pesos absolutos e relativos de ??rg??os, composi????o qu??mica dos cortes nobres e altura de vilosidades intestinais de frangos de corte em diferentes fases de desenvolvimento. Foram utilizados 360 pintos de corte da linhagem comercial Cobb, n??o sexados, em duas fases de desenvolvimento, fase de crescimento (21 a 33 dias) e fase final (33 a 42 dias). O delineamento experimental foi inteiramente casualizado com tratamentos em arranjo fatorial 5 x 2 (5 dietas e 2 fases de desenvolvimento). As dietas foram formuladas com diferentes concentra????es de SAMPO, 0%, 3%, 6%, 9% e 12%, sendo fornecidas a seis parcelas, com 12 aves por parcela. Os resultados demonstraram a viabilidade de utiliza????o do substrato em um n??vel m??dio de 5% de inclus??o, evidenciado na melhoria de caracter??sticas como menor peso de gordura abdominal na carca??a e na carne maior teor de prote??na e menor teor de lip??deos, al??m de evid??ncias de benef??cios quanto ?? imunidade e sa??de dos animais. A an??lise histol??gica das vilosidades intestinais demonstrou caracter??sticas compat??veis com o consumo de dietas ricas em fibras, com as alturas diminuindo com o aumento do n??vel de inclus??o do substrato. Dessa forma, foi produzida uma ra????o suplementada com um aditivo de menor custo e elevado valor ambiental, sendo o baixo teor nutricional do res??duo, modificado pelo cultivo de fungos Basidiomicetos que realizaram a bioconvers??o de compostos complexos, tornando-os dispon??veis para serem absorvidos pelo organismo animal e agregando caracter??sticas semelhantes ao mic??lio presente no substrato.

Leaf-cutting ants of the genera Atta and Acromyrmex determine serious agricultural problems and live on symbiosis with Leucoagaricus gongylophorus. The aim of this study is to identify morphological and molecularly, as well as to verify the genotypic variability of the symbiotic fungus cultivated by A. heyeri and A. ambiguus from three different regions of the state of Rio Grande do Sul, Brazil. Fungus gardens were collected and fragments of mycelia were grown in selective medium. Total DNA was extracted and amplification of the ITS region was performed by PCR using universal primers. After DNA sequencing, the chromatograms were assembled and phylogenetic analyzes were performed by the Neighbor-Joining method. A total of six isolates of L. gongylophorus were obtained and their identities were confirmed by molecular analyses. Phylogenetic analysis of the ITS region showed a tree with two distinct groups regarding the fungus isolates from A. heiyeri and A. ambiguous. In this study, it was verified that A. heyeri and A. ambiguous, cultivate the same fungus. Additionally, the molecular marker used in this study showed variations in L. gongylophorus, evidencing two distinct branches in the phylogenetic tree, according to the ant species that cultivate L. gongylophorus. However, other studies involving the inclusion of a great number of isolates of L. gongylophorus, as well as the use of other molecular markers to validate the possible variations in the phylogenetic relationship of this symbiotic fungus are required. Formigas-cortadeiras dos gêneros Atta e Acromyrmex causam elevados prejuízos à agricultura e são dependentes obrigatórias da simbiose com Leucoagaricus gongylophorus. O objetivo deste estudo foi identificar morfologicamente e molecularmente, bem como verificar a variabilidade genotípica do fungo simbionte,cultivado por Acromyrmex heyeri e Acromyrmex ambiguus em três regiões do RS, Brasil. Jardins de fungo foram coletados do interior de formigueiros e fragmentos de micélio foram cultivados em meio de cultura seletivo. O DNA total foi extraído e a amplificação da região ITS foi realizada por PCR, utilizando primers universais. Após sequenciamento, os cromatogramas foram montados e as análises filogenéticas foram realizadas pelo método de Neighbor-Joining. Dos jardins de fungo, obtiveram-se seis isolados de L. gongylophorus, confirmados por análise molecular. A análise filogenética da região ITS mostrou uma árvore com dois grupos distintosem relação aos isolados do fungo oriundos de ninhos de A. heyeri e A. ambiguus. Neste estudo, evidenciou-se que as espécies de formigas A. heyeri e A. ambiguus cultivam o mesmo fungo. Entretanto, o marcador molecular estudado evidenciou variações de L. gongylophorus que permitiram formar duas ramificações diferentes na árvore filogenética relacionada à espécie de formiga que o cultiva. Todavia, para validar as possíveis variações nas relações filogenéticas deste fungo simbionte, é necessária a inclusão de um maior número de isolados de L. gongylophorus, bem como o emprego de outros marcadores moleculares.

Armillaria sp. é patógeno causador de podridão de raízes e a morte de árvores de Pinus na região Sul do Brasil. Pouco se conhece sobre aspectos morfofisiológicos e patogênicos dessa espécie. Este trabalho objetivou caracterizar a morfologia, fisiologia, patogenicidade e produção de basidiomas in vitro de isolados de Armillaria da região Sul do Brasil. A análise da morfologia do micélio e rizomorfa foi feita em colônias cultivadas em meio BDA (batatadextrose- ágar) a 20 ºC, no escuro, por 30 dias e em fragmentos de placas miceliais produzidas em seções de tronco inoculadas com o fungo, com microscopia de luz e de varredura. A fisiologia abordou a análise da biomassa produzida em caldo BD (batata-dextrose) em seis temperaturas. O teste de patogenicidade foi realizado em mudas de Pinus taeda. A indução de basidiomas foi feita em seções de tronco de P. taeda inoculados em frascos com meio BDA. As colônias apresentaram variação na morfologia do micélio, crescimento irregular sem simetria radial, coloração variando do branco, cinza ao marrom, e na maioria das vezes com rizomorfas. A análise da hifa revelou estruturas típicas do gênero Armillaria, como grampos de conexão, septos, pilosidades e massas resinosas sobre a superfície de hifas. A morfologia das rizomorfas mostrou-se variável de acordo com o ambiente, apresentando pilosidades quando em crescimento aéreo e superfície lisa quando desenvolvidas no interior do meio de cultura. A placa micelial mostrou-se crostosa com hifas verrucosas. A temperatura ótima para os isolados de Armillaria variou de 16 a 24 ºC. Somente uma planta inoculada morreu demonstrando a dificuldade de se reproduzir a doença in vivo. Um basidioma foi produzido demonstrando a possibilidade de frutificação in vitro de Armillaria sp. Made available in DSpace on 2018-05-04T00:42:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2018AlvaroSummaCaracterizacao.pdf: 2251025 bytes, checksum: fccb1142352277b98a1451d137d44a59 (MD5) Previous issue date: 2018-04-06