Search

Although often beneficial, the inflammatory process is closely involved in the pathophysiology of several diseases. The use of anti-inflammatory drugs available on the market is still a problem for patients, as the prolonged use is associated with severe side effects. Therefore, is relevant to identify new molecules with therapeutic potential for the treatment of inflammatory disorders. Cyclic peptides have attracted interest from the pharmaceutical industry for drug development that more than 40 cyclic peptide-based drugs have been approved by the FDA for clinical use in the past decade. In addition to neuroprotective effects, the cyclic dipeptide cyclo (Glycine-Proline, CGP), has been described by our research group as having analgesic and anti-inflammatory effects by inhibiting hypernociception and the accumulation of leukocytes in inflamed tissue. From these results, our main objective was to identify cellular and molecular targets that could account for the anti-inflammatory action of CGP. Initially, we found that GCP does not present cytotoxicity in all tested concentrations (10-300 μM). Our results also showed that CGP significantly inhibited the adhesion of neutrophils to endothelial cells at all concentrations tested (10-50 μM). We verified that CGP did not affect the expression of ICAM-1 and E-selectin. Similarly, CGP also did not significantly affect the production of IL-6, IL-8, IL-12p70 and reactive oxygen species (ROS) by endothelial cells stimulated with TNF-α. When assessing the motility the endothelium, our results show that CGP did not affect cell migration. However, CGP induced a significant increase in calcium influx in endothelial cells stimulated with histamine, a phenomenon that was not observed when cells were stimulated with CGP alone. In this regard, evaluating the competition of CGP for binding to receptors coupled to protein G was evaluated by the NanoBRET technique, we found that CGP promoted an increase in the interaction between H1 and β2 receptors and their respective natural ligands, a phenomenon that was not observed for other receivers, such as A1, A2A, A2B, A3, VEGFR2, CXCR4 and CXCR7. Taken together, we demonstrated, for the first time, that CGP may interact with H1 and β2 receptors and their ligands in which it may be associated with the effects of this dipeptide on the endothelium. CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior O processo inflamatório, embora benéfico, está intimamente envolvido na fisiopatologia de várias doenças. O uso dos fármacos anti-inflamatórios disponíveis no mercado ainda constitui um problema para os pacientes, pois o uso prologando está associado a efeitos colaterais severos. Logo, identificar novas moléculas com potencial terapêutico para o tratamento de desordens inflamatórias é relevante. Os peptídeos cíclicos têm despertado interesse da indústria farmacêutica para o desenvolvimento de fármacos, tanto que mais de 40 medicamentos à base de peptídeos cíclicos foram aprovados pela agência reguladora de fármacos norte-americana FDA para uso clínico na última década. O dipeptídeo cíclico ciclo(Glicina-Prolina, CGP) além do efeitos neuroprotetores, tem sido descrito, pelo nosso grupo de pesquisa, como possuidor de efeitos analgésicas e anti-inflamatórias por inibir a hipernocicepção e o acúmulo de leucócitos no tecido inflamado. A partir destes resultados, buscamos identificar alvos celulares e moleculares que poderiam responder pela ação anti-inflamatória do CGP. Incialmente, constatamos a ausência de citotoxicidade do GCP, em todas as concentrações testadas (10-300 μM), o que garantiu segurança para interpretar os resultados obtidos. Em seguida, verificamos que a adesão de neutrófilos às células endoteliais tratadas com CGP foi inibida de forma significativa em todas as concentrações testadas (10-50 μM). Ao avaliar o conteúdo de moléculas de adesão nas células endoteliais verificamos que o CGP não afetou a expressão de ICAM-1 e E-selectina. De forma semelhante, o CGP também não afetou de forma significativa a produção de IL-6, IL-8, IL-12p70 e espécies reativas de oxigênio (ROS) por células endoteliais estimuladas com TNF-α. Ao avaliar a motilidade das células endoteliais verificamos que o CGP não afetou a migração celular. Entretanto, o CGP induziu um aumento significativo no influxo de cálcio em células endoteliais estimuladas com histamina, fenômeno que não foi observado quando as células foram estimuladas apenas com CGP. A este respeito, avaliando a competição do CGP pela ligação em receptores acoplados à proteína G foi avaliada pela técnica de NanoBRET, constatamos que o CGP promoveu um aumento na interação entre os receptores H1 e β2 e seus respectivos ligantes naturais, fenômeno que não foi observado para outros receptores, como A1, A2A, A2B, A3, VEGFR2, CXCR4 e CXCR7. Tomados em conjunto, demonstramos, pela primeira vez, que o CGP pode interagir com os receptores H1 e β2 e seus ligantes, de forma que tal interação pode estar associada aos efeitos deste dipeptideo sobre o endotélio.

The inflammatory response is described as an organism reaction that aims purpose is to contain/eliminate aggressive agents and promote tissue repair. However, when inflammation goes beyond the physiological limits, pathogenesis is established for several types of diseases. The synthesis and characterization of new drugs, capable of inhibiting inflammation, are still essential as currently available therapies that have significant limitations and adverse effects. Guanylhydrazones are shown as a group of important molecules for different fields of study including the biomedical and medicinal chemistry areas. Once the structural modifications already made in guanylhydrazones have allowed the obtaining of a large number of new molecules possessing a wide range of pharmacological effects, including antioxidant and antiviral activities. Based on the relevance of guanylhydrazone derivatives, as well as the absence of pharmacological evaluations of their possible analgesic and anti-inflammatory effects. In this study, the goal was to evaluate the antinociceptive and anti-inflammatory effects of the guanylhydrazone derivative called 2 - [(3, 5-di-tert-butyl-4-hydroxyphenyl) methylene] hydrazinecarboximidamide, also known as LQM10. Initially, nociceptive response induced by intraperitoneal (i.p.) injection of acetic acid was significantly inhibited by the treatment with LQM10 from the concentration of 0.0305 μmol / kg. Next, in this same experimental model, the use of the antagonists: yohimbine, atropine, and glibenclamide were not able to reverse the antinociception induced by LQM10. In the formalin test, treatment with LQM10 at the highest doses of 15.25 and 30.5 μmol / kg inhibited the response, respectively, by 50 and 53% only in the second phase of this test. Treatment with LQM10 also did not affect the nociceptive response induced by the hot plate model. In nociception induced by capsaicin, treatment with 3.05, 15.25 and 30.5 μmol / kg of LQM10 decreased the nociceptive response by 38%, 46%, and 43%, respectively. Additionally, animals treated with LQM10 showed no motor performance alterations when evaluated in the rota-rod test. When assessing the effect of this guanylhydrazone derivative on the formation of inflammatory edema, it was found that the treatment with LQM10 significantly inhibited the formation of carrageenan-induced paw edema. Additionally, in the in vitro system, using A549 cell culture, we found that cells exposed to LQM10 for 24 h at concentrations below 10 μM did not have their viability affected. When A549 cells were stimulated with TNF-α, there was an increase in the production of the reactive species of oxygen, nitric oxide, and IL-6, phenomena that were inhibited by the treatment with LQM10. Together, these results demonstrate that LQM10 has an antinociceptive effect that seems to depend on vanilloid receptors. In addition, has an anti-inflammatory effect capable of inhibiting the generation of pro-inflammatory mediators as reactive species of oxygen, nitric oxide, and IL-6 cytokine. A resposta inflamatória pode ser descrita como uma reação do organismo cuja finalidade é de conter/eliminar agentes agressores e promover reparo tecidual. Porém, quando a inflamação ultrapassa os limites fisiológicos se estabelece a patogênese para vários tipos de doenças. A síntese e caracterização de novos fármacos capazes de inibir a inflamação ainda são imprescindíveis, pois as terapias atualmente disponíveis apresentam limitações e efeitos adversos significativos. As guanilhidrazonas mostram-se como um grupo de moléculas de interesse para diferentes campos de estudo incluindo as áreas biomédicas e de química medicinal. As modificações estruturais já realizadas nas guanilhidrazonas permitiram a obtenção de um grande número de novas moléculas detentores de uma vasta gama de efeitos farmacológicos, incluindo atividades antioxidantes e antivirais. Com base na relevância dos derivados guanilhidrazonas, bem como na ausência de avaliações farmacológicas acerca de seus possíveis efeitos analgésicos e anti-inflamatórios, neste estudo objetivamos avaliar em diferentes modelos experimentais os efeitos antinociceptivos e anti-inflamatórios do derivado guanilhidrazona denominado 2-[(3,5-di-tert-butil-4-hidroxifenil)metileno]hidrazinacarboximidamida, denominado de LQM10. Inicialmente, constatou-se que a resposta nociceptiva induzida pela injeção intraperitoneal (i.p.) de ácido acético foi inibida de forma significativa pelo tratamento com LQM10 a partir da concentração de 0,0305 μmol/kg. Neste mesmo modelo experimental, o uso dos antagonistas ioimbina, atropina e glibenclamida não foram capazes de reverter a antinocicepção induzida pelo LQM10. No teste de formalina, o tratamento com LQM10 nas duas maiores doses (15,25 e 30,5 μmol/kg) inibiu, respectivamente, em 50 e 53% apenas a segunda fase deste teste. O tratamento com LQM10 também não afetou a resposta nociceptiva induzida no modelo da placa quente. Já na nocicepção induzida por capsaicina, o tratamento com 3,05, 15,25 e 30,5 μmol/kg de LQM10 reduziu a resposta nociceptiva em 38%, 46% e 43%, respectivamente. Adicionalmente, animais tratados com LQM10 não exibiram alteração no desempenho motor quando avaliados no teste do rota-rod. Ao ser avaliado o efeito deste derivado guanilhidrazona na formação do edema inflamatório, constatou-se que o tratamento com LQM10 inibiu de maneira significativa a formação do edema de pata induzida por carragenina. No sistema in vitro, utilizando cultivo de células A549, constatamos que o tratamento com LQM10 por 24 h em concentrações inferiores a 10 μM não afetaram a viabilidade das células. Quando as células A549 foram estimuladas com TNF-α observou-se um aumento na produção de espécies reativas de oxigênio, óxido nítrico e IL-6, fenômenos que foram todos inibidos pelo tratamento com LQM10. Juntos, estes resultados demonstram que o LQM10 possui efeito antinociceptivo que parece depender de receptores vaniloides e efeito anti-inflamatório capaz de inibir a geração de mediadores pró-inflamatórios como espécies reativas de oxigênio, óxido nítrico e citocina IL-6.

In this work, atomic force microscopy and Raman spectroscopy were used to evaluate druginduced biomechanical and biochemical changes in biological cells. First, an atomic force microscope was used to investigate the effects of treatment with Semaphorin 3A on the biomechanical properties of thymocytes, through the analysis of morphology, membrane roughness and cell elasticity. The results indicated that treatment with Semaphorin 3A directly affected these properties, inducing the formation of filopodia, increasing stiffness and roughness of the cell membrane due to rearrangement of the cytoskeleton. In the second study, based on the changes observed in the Raman spectra, the drug-induced anti-inflammatory response in A549 cells was evaluated through a comparative analysis of the actions of dexamethasone and p-coumaric acid. The results of this study indicated that both drugs were efficient in the inflammatory process. However, a joint analysis of the Raman technique with multivariate statistical methods revealed different action mechanisms of the drugs, indicating p-coumaric acid as a natural therapeutic compound for the treatment of inflammatory lung diseases. Additionally, the Raman technique was also used to investigate mechanisms of cell death induced by flavonoids in macrophages infected with Leishmania amazonensis promastigotes. The biochemical changes observed in Raman spectra were associated with markers of cell death. Such alterations evidenced the major molecular mechanisms induced by flavonoids in cell behavior. CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Neste trabalho, a microscopia de força atômica e a espectroscopia Raman foram utilizadas para avaliar alterações biomecânicas e bioquímicas induzidas por fármacos em células biológicas. Primeiramente, um microscópio de força atômica foi usado para investigar os efeitos do tratamento com Semaforina 3A nas propriedades biomecânicas de timócitos, por meio das análises da morfologia, rugosidade da membrana e elasticidade celular. Os resultados indicaram que o tratamento com Semaforina 3A afetou diretamente tais propriedades, induzindo a formação de filopódios, aumentando a rigidez e a rugosidade da membrana celular devido ao rearranjo do citoesqueleto. No segundo estudo, com base nas alterações observadas nos espectros Raman, a resposta anti-inflamatória induzida por fármacos em células A549 foi avaliada através de uma análise comparativa das ações da dexametasona e do ácido p-cumárico. Os resultados deste estudo indicaram que ambos os fármacos foram eficientes no processo inflamatório. No entanto, uma análise conjunta da técnica Raman com métodos estatísticos multivariados, revelou diferentes mecanismos de ação dos fármacos, indicando o ácido p-cumárico como um composto terapêutico natural para o tratamento de doenças inflamatórias pulmonares. Adicionalmente, a técnica Raman também foi usada para investigar mecanismos de morte celular induzidos por flavonoides em macrófagos infectados com promastigotas de Leishmania amazonensis. As alterações bioquímicas observadas nos espectros Raman foram associadas a marcadores de morte celular. Tais alterações evidenciaram os principais mecanismos moleculares induzidos pelos flavonoides no comportamento celular.

Inflammation is a physiological response of vascularized tissues initiated by chemical, physical or biological aggression, which aims to eliminate the initial cause and repair tissue damage. However, the inflammatory response can be triggered inappropriately or be out of physiological limits, contributing to the development of several types of disease. Development of anti-inflammatory drugs remains an important process for therapeutics due to some available drugs side effects. In this regard, natural products are a significant source of bioactive molecules that are usually utilized in the treatment of a large number of diseases. Among compounds found in natural sources, phenolic acids have a large variety of relevant pharmacological effects. The cinnamic acid, a polyphenol compound found in soy, coffee, apple, olive and others, have been reported as a suppressor of lipid peroxidation and tumor cell growth. However, cinnamic acid effects on the inflammatory response still poorly described. Therefore, the present study aimed to evaluate cinnamic acid effects on inflammatory response in vivo and in vitro. To achieve this purpose, models of carrageenan and prostaglandin E2 induced mouse paw edema, lipopolysaccharide (LPS) induced pleurisy and in vitro assays us-ing human neutrophils were used. Results showed that cinnamic acid (in concentra-tions of 5, 50 and 100 mg/kg) significantly reduced carrageenan induced edema for-mation. In the LPS induced pleurisy, treatment with cinnamic acid at 10 mg/kg concen-tration significantly decreased neutrophil influx to the inflammatory site. In vitro neutro-phil treatment with cinnamic acid inhibited TNF-α induced neutrophil adhesion and shape change without interfering with reactive oxygen species generation nor cell via-bility. Thus, these results showed trans-cinnamic acid potential in decreasing inflam-matory response by reducing edema formation and neutrophil motility in vivo and its activation profile in vitro. CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico A inflamação é uma resposta fisiológica de tecidos vascularizados iniciado por uma agressão química, física ou biológica, que objetiva eliminar a causa inicial assim como reparar os possíveis danos teciduais causados. No entanto, a resposta inflamatória pode ser iniciada inapropriadamente ou escapar dos controles fisiológicos do organismo, contribuindo para o desenvolvimento de diferentes tipos de doenças. A identificação de moléculas candidatas a fármacos capazes de modular a inflamação permanece como um processo de suma importância para a etapa de desenvolvimento de medicamentos anti-inflamatórios. Nesse contexto, os produtos naturais constituem uma fonte importante de substâncias bioativas, e são frequentemente utilizados no tratamento de um grande número de doenças. Dentre os compostos de origem natural, os ácidos fenólicos são detentores de uma vasta gama de efeitos farmacológicos relevantes. Entretanto, o ácido trans-cinâmico (ATC), um composto polifenólico encontrado em alimentos como soja, café, maçã e óleo de oliva, tem sido reportado como possuidor de efeitos supressores da peroxidação lipídica e antitumorais. Porém, ainda são escassos os trabalhos que descrevem os efeitos desta substância sobre resposta inflamatória aguda. Portanto, o presente estudo teve como objetivo avaliar o efeito do ácido trans-cinâmico sobre parâmetros da resposta inflamatória in vivo e in vitro. Para atingir este propósito foram utilizados os modelos de edema de pata induzido por carragenina e prostaglandina E2, pleurisia induzida por lipopolissacarídeo (LPS) e ensaios in vitro utilizando neutrófilos humanos. Nossos resultados mostraram que após 4 h do estímulo inflamatório, o ATC inibiu de maneira significativa a formação de edema induzido por carragenina. Além disso, quando a resposta edematogênica foi induzida por PGE2, o tratamento com a menor dose de ATC também promoveu uma inibição da formação do edema. No modelo de pleurisia induzida por LPS, utilizado para avaliar o efeito do ácido no recrutamento leucocitário, o ATC (10 mg/kg) reduziu de forma significativa o influxo de neutrófilos para o sítio inflamatório. In vitro, o tratamento de neutrófilos humanos com ATC inibiu a adesão neutrófilo-endotélio e a mudança de forma (“shape change”) induzidas por TNF-α, porém sem interferir com a geração de espécies reativas de oxigênio, ou mesmo, afetar a viabilidade destas células. Portanto, estes resultados demostram o potencial do ácido trans-cinâmico em inibir a resposta inflamatória por afetar a mobilização de neutrófilos in vivo e seu perfil de ativação in vitro.

In the present study, we investigated in vivo and in vitro the effects of growth hormone (GH) on cellular and molecular processes involved in the inflammatory phase of cutaneous tissue repair in mice. For this purpose, we used 6-month-old male mice of Swiss strain (CEUA / UFAL No. 51/2014). The induction of the wound was performed, after anesthetic administration, with the aid of a 1cm diameter metal ring. Then, the animals were treated with GH (10−7M) for 3 consecutive days, once a day. The control group received only vehicle. The skin fragments were stained with HE for the count of inflammatory cells. Injured skin samples were performed for quantification of cytokines (IL-6, IL-10, TNF-a) involved in inflammatory cellular responses by ELISA. Immunohistochemistry assay was used to evaluate the presence of macrophages and endothelial cells, and the deposition of extracellular matrix molecules: collagen III, fibronectin and laminin. Liver and injured skin fragments were used to evaluate the IGF-1 mRNA expression. In vitro, J774 lineage macrophages and thymic endothelial cells (tEnd.1) were used to evaluate the formation of capillary-like structures in matrigel. Fibroblasts from the 3T3 strain were used for cell migration assay. Initially, the topical treatment with GH for 3 days hás accelerated the recruitment of macrophages and lymphocytes without altering IL-6 levels when compared to control. However, topical use of GH revealed increased levels of IL-10 and decreased levels of TNF-a. In vitro, GH treatment did not alter the IL-6 and IL-10 levels produced by macrophages treated with GH (10−7M). However, GH-treated macrophages conditioned medium stimulated endothelial cells in the formation of capillary-like structures in matrigel. In addition, GH increased the fibroblasts migration. It was further found that topical treatment with GH stimulated angiogenesis, type III collagen deposition of fibronectin and laminin. Finally, gene expression analysis revealed that topical treatment with GH does not alter mRNA levels for IGF-1 in both liver and skin. Taken together, our data suggest that GH accelerates the healing of cutaneous wounds, anticipating macrophage recruitment, increasing the deposition of ECM proteins and stimulating angiogenesis, independent of IGF-1. CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEAL - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Alagoas No presente estudo buscou-se investigar in vivo e in vitro os efeitos do hormônio do crescimento (GH) nos processos celulares e moleculares envolvidos na fase inflamatória do reparo tecidual cutâneo em camundongos. Para este propósito, foram utilizados camundongos, com 6 meses de idade, machos da linhagem Swiss (CEUA/UFAL No 51/2014). A indução da ferida foi realizada, após a administração de anestésico, com auxilio de um punch dermatológico de 1cm de diâmetro. Após estes procedimentos, os animais foram tratados topicamente com GH (10−7 M) por 3 dias consecutivos, uma vez ao dia. O grupo controle recebeu apenas veículo. Os fragmentos de pele foram submetidos a coloração por hematoxilina e eosina (HE) para a contagem de células inflamatorias. Amostras da pele injuriada foram usadas para quantificação das citocinas envolvidas em respostas celulares inflamatórias pelo ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA). Por imunohistoquímica foi avaliada a presença de macrófagos e células endoteliais, e a deposição de moléculas de matriz extracelular: colágeno III, fibronectina e laminina. Fragmentos do fígado e da pele que sofreu injuria foram utilizados para avaliar a expressão do RNAm para o fator-1 de crescimento semelhante a insulna (IGF-1). In vitro, foram utilizados macrófagos da linhagem J774 e células endoteliais tímicas (tEnd.1) para avaliar a formação de estruturas semelhantes a capilares, em matrigel. Fibroblastos da linhagem 3T3 foram utilizados para o ensaio de migração celular. Inicialmente, demonstrou-se que o tratamento tópico com GH por 3 dias acelerou o recrutamento de macrófagos e linfócitos sem alterar os níveis de interleucina-6 (IL-6) quando comparado ao controle. No entanto, o uso tópico do GH revelou aumento dos níveis de IL-10 e diminuição nos níveis do fator de necrose tumoral alfa (TNF-a). In vitro, o tratamento com GH não alterou os níveis de IL-6 e IL-10 produzidos pelos macrófagos, na concentração de 10−7 M, no entanto, o meio condicionado de macrófagos tratado com GH estimulou as células endoteliais na formação de estruturas semelhantes a capilares, em matrigel. Além disso, o GH aumentou a migração de fibroblastos. Verificou-se ainda que o tratamento tópico com GH estimulou a angiogênese a deposição de colágeno tipo III, a deposição de fibronectina e de laminina. Por fim, a análise da expressão gênica revelou que o tratamento tópico com GH não altera os níveis de RNAm para o IGF-1 no fígado e na pele. Em conjunto, os dados obtidos sugerem que o GH modula a cicatrização de feridas cutâneas antecipando o recrutamento de macrófagos, aumentando a deposição de proteínas de matriz extracelular (MEC) e estimulando a angiogênese, independente de IGF-1.

Inflammation is a physiological process that aims to protect the body from infection and injury. However, numerous conditions lead to pathological inflammation, and this imbalance needs to be treated therapeutically. Natural plants have been used for millennia for diseases treatment, and modern science has allowed the isolation and identification of active compounds. Citronellal is an herbal substance with proven efficacy in the treatment of inflammation, among other effects, but little is known about its performance in cells of the immune system. Therefore, in this work we sought to evaluate the anti-inflammatory potential of citronellal on lymphocytes, important cells that govern the inflammatory process. For this purpose, murine lymphocytes were obtained from subcutaneous lymph nodes (CEP authorization No. 028370 / 2010-07) and exposed to citronellal for 1 hour before each assay. The interference of citronellal treatment on lymphocytes over migration, adhesion, expression of adhesion molecules and fractions of actin filaments was evaluated. In this study, citronellal reduced the capacity of both spontaneous and targeted (CXCL12-induced chemotaxis) migration of lymphocytes, independent of the subpopulation of lymphocytes (T-CD4+, T-CD8+ and B220+). At another assay, citronellal treatment was shown to increase total lymphocyte adhesion, with a marked increase in B220 + lymphocytes. When evaluating two important adhesion molecules participating in the recruitment, VLA-4 and CD62L, treatment with citronellal was able to reduce the number of VLA-4+ lymphocytes, however without altering the mean expression of this surface receptor, and none alteration was observed for CD62L. As migration, adhesion and integrins are related to the cellular cytoskeleton for its functioning, the evaluation of filamentous actin (F-actin) is extremely relevant and it has been shown that citronellal increased the levels of F-actin in lymphocytes, mainly in the types CD4+ and CD8+ cells. Thus, all the results indicate that citronellal exerts an effect on the mobilization of lymphocytes, with remarkable modulation of the F-actin cytoskeleton. Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Inflamação é um processo fisiológico que tem o objetivo de proteger o organismo contra infecções e injúrias. No entanto, inúmeras condições levam à inflamação patológica, e este desequilíbrio precisa então ser tratado terapeuticamente. Plantas naturais são usadas há milênios para o tratamento das doenças, e a ciência moderna permitiu o isolamento e identificação de compostos ativos. O citronelal é uma substância fitoterápica com eficácia demonstrada no tratamento da inflamação, entre outros efeitos, mas pouco se sabe sobre a sua atuação em células do sistema imunológico. Por isso, neste trabalho buscou-se avaliar o potencial anti-inflamatório do citronelal sobre linfócitos, importantes células que regem o processo inflamatório. Para tal, linfócitos murinos foram obtidos de linfonodos subcutâneos (autorização CEP Nº 028370/2010-07) e expostos ao citronelal por 1 hora antes de cada ensaio. Avaliouse a interferência do tratamento do citronelal em linfócitos sobre a migração, adesão, expressão de moléculas de adesão e frações dos filamentos de actina. Neste estudo, o citronelal reduziu a capacidade migratória de linfócitos, tanto espontânea quanto orientada (quimiotaxia induzida por CXCL12) independente da subpopulação de linfócitos (T-CD4+, T-CD8+ e B220+). Em outro ensaio, observou-se que o tratamento com citronelal aumentou a adesão dos linfócitos totais, com aumento destacado de linfócitos B220+. Ao se avaliar duas importantes moléculas de adesão que participam no recrutamento, VLA-4 e CD62L, o tratamento com citronelal foi capaz de reduzir o número de linfócitos VLA-4+, no entanto sem alterar a expressão média deste receptor de superfície, e nenhuma alteração foi observada quanto ao CD62L. Como a migração, adesão e as integrinas estão relacionadas com o citoesqueleto celular para seu funcionamento, a avaliação da actina filamentosa (F-actina) é extremamente relevante e foi demonstrado que o citronelal aumentou os níveis de F-actina em linfócitos, principalmente nos tipos CD4+ e CD8+. Dessa forma, o conjunto dos resultados indicam que o citronelal exerce efeito na mobilização de linfócitos, com notável modulação do citoesqueleto de F-actina.

Natural products are commonly used for the treatment of different pathologies, including inflammation. Among the molecules present in plants, the triterpenes exibith wide range of pharmacological effects, including anti-inflammatory and antioxidant actions. In the present study were sought to investigate the effect of friedelin at the inflammatory response in vivo. The study also looked to characterize the formation of inclusion complex between friedelin and hydroxypropyl-β-cyclodextrin, and to evaluate its potential to inhibit allergic inflammation in experimental asthma model mice. Initially, were demonstrated that friedelin is able to inhibit the plasma extravasation at the edema model induced by carrageenan, histamine and PGE2, but not by serotonin. Then, with the purpose of evaluating with the actions of friedelin extend on the cellular events of inflammation; we assessed the effect of this triterpene on the inflammatory response induced by LPS using the pleurisy model. In this experimental model, friedelin inhibited the influx of neutrophils as well as the amount of cytokines and inflammatory chemokines in the pleural effluent. Furthermore, in assessing the effect of friedelin on mobilization of human neutrophils, were demonstrated, in vitro, that friedelin induced in a lower adherence of neutrophils to activated endothelium, as well as a lower chemotactic response which were not associated with reduction in viability. These results suggest a direct effect of friedelin in neutrophils. Subsequently, to confirm whether these effects would be also observed in vivo, were decided to evaluate leukocyte motility events using intravital microscopy. In this model, we confirmed that friedelin was able of reducing rolling and adhesion of leukocytes, events that can be associated with lower influx of leukocytes to the inflammatory site. Additionally, we confirmed that friedelin allowed be attached to cyclodextrin, phenomenon that was demonstrated by using spectroscopic methods, such as analysis by ultraviolet-visible and infrared. Moreover, the effects of friedelin and its complex with cyclodextrin were evaluated against allergic pulmonary inflammation induced by ovalbumin. In this experimental model, both friedelin and friedelin:cyclodextrin inhibited the parameters of respiratory mechanics as resistance and airway elastance. We also verify that both leukocyte recruitment and the production of cytokines and chemokines in bronchoalveolar lavage were inhibited by the treatment with friedelin and friedelin:cyclodextrin. Additionally, treatment with friedelin:cyclodextrin increased the amount of cytokine IL-10 in bronchoalveolar lavage. Evaluation of lung tissue from asthmatic animals we noted that several histopathological changes, such as extracellular matrix deposition and mucus production, were also inhibited under friedelin and friedelin:cyclodextrin treatments. These treatments also restored the activity of catalase in lung from asthmatic animals. In conclusion, the data obtained in this study shows that the carrier system of friedelin with hydroxypropyl-beta-cyclodextrin increases the anti-inflammatory effects of friedelin in preventing the onset of inflammation in acute asthma. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Produtos naturais são comumente usados para o tratamento de diferentes patologias, incluindo inflamação. Dentre as moléculas obtidas a partir de espécies vegetais, os terpenos exibem diferentes atividades biológicas, como anti-inflamatória e antioxidante. No presente estudo, buscou-se investigar o efeito da friedelina sobre a resposta inflamatória in vivo, bem como caracterizar a formação do seu complexo de inclusão em hidroxipropil-β-ciclodextrina, avaliando ainda seu potencial em inibir a inflamação alérgica no modelo de asma experimental em camundongos. Para este propósito, diferentes metodologias foram utilizadas. Inicialmente, demonstrou-se que a friedelina inibiu o extravasamento plasmático no modelo de edema de pata induzido por carragenina, histamina e PGE2, mas não por serotonina. Em seguida, com o propósito de avaliar se as ações da friedelina se estendiam sobre os fenômenos celulares da inflamação, avaliou-se o efeito deste triterpeno na resposta inflamatória induzida por LPS, utilizando o modelo de pleurisia. Neste grupo de experimentos, constatou-se que a friedelina inibiu o influxo de neutrófilos, bem como a produção e/ou secreção de citocinas e quimiocinas pró-inflamatórias no efluente pleural. Para melhor avaliar o impacto da friedelina na mobilização de neutrófilos, demonstrou-se, in vitro, que o tratamento de neutrófilos humanos com friedelina resultou em uma menor adesão desta célula ao endotélio ativado, bem como em uma menor resposta quimiotática, fenômenos que não foram associados à redução na viabilidade deste tipo celular. Tais resultados sugerem um efeito direto da friedelina nos neutrófilos. Com propósito de confirmar se estes efeitos teriam repercussões in vivo, avaliaram-se os eventos de motilidade de leucócitos, usando a metodologia de microscopia intravital. Neste modelo, confirmou-se que a friedelina reduz fenômenos de rolamento e adesão, característica que parece estar associada ao menor influxo de leucócitos para o sítio inflamatório. Em continuidade, confirmouse que a friedelina mostrou-se capaz de formar complexo com ciclodextrina, fenômeno que foi caracterizado por metodologias espectroscópicas, tais como análise no ultravioleta visível e infravermelho. Por fim, os efeitos da friedelina e de seu complexo com ciclodextrina foram avaliados frente à inflamação pulmonar alérgica induzida por ovalbumina. Neste modelo experimental, verificou-se que a friedelina, bem como seu complexo em ciclodextrina, inibiu parâmetros da mecânica respiratória, como a resistência e elastância das vias aéreas. Verificou-se ainda que tanto o recrutamento de leucócitos quanto a produção de citocinas e quimiocinas no lavado broncoalveolar mostraram-se inibidos pelo tratamento com friedelina e pelo complexo friedelina:ciclodextrina. Cabe destacar que o tratamento com friedelina:ciclodextrina aumentou a quantidade de IL-10 no lavado broncoalveolar. Estendendo as análises para o pulmão, constatou-se que as alterações histopatológicas, como deposição de colágeno e produção de muco, foram também inibidas. Além disso, o tratamento com friedelina:ciclodextrina restaurou a atividade da enzima catalase no pulmão de animais asmáticos. Assim, concluiu-se que o carreamento da friedelina com hidroxipropil-beta-ciclodextrina incrementa os efeitos anti-inflamatórios da friedelina, por prevenir a instalação da inflamação do quadro de asma aguda.

Advanced glycation end products the (AGE) comprise a series of compounds, quite different, whose activity is related to their ability to modify the chemical and functional properties of diverse biological structures. Several studies, including that used animals, indicate that AGE restriction in the diet can have many protective effects. Furthermore, the use of certain medicinal plants appears to offer additional benefits, especially to individuals suffering from disorders associated with excessive accumulation of AGE. It is believed that plants combiam antiglicantes and antioxidant properties, have positive effects on the inhibition of glycation. This fact has attracted the interest of the scientific community, as it can provide important therapeutic potential. Although any further component is particularly suitable as reducing AGEs in the context of the human body, some substances in vitro studies demonstrated the anti-AGE effects important and worth further investigation such as pyridoxamine, alilcisteína (garlic extract component), phenolics, vitamins C and E, thiamin, taurine and carnosine, recognized for its antioxidant properties. Therefore the aim of this proposal was to determine the antiglicante activity of extracts of plants native to the brasileleira flora of recognized antioxidant activity. All the studied extracts are part of the bank of plant extracts belonging to the Laboratory for Research on Natural Resources (LPqRN), the Institute of Chemistry and Biotechnology - UFAL. Therefore, this thesis was divided into three parts, which generated three articles. The first titled "Antioxidant activity of native plant extracts of flora by ABTS methods, DPPH, FRAP and ORAC", aimed to investigate the antioxidant capacity of different plant extracts, by different in vitro assays (ABTS, DPPH, FRAP , ORAC), and determine whether there is correlation between the tested methods. In this proposal, 49 plant samples were studied, the tests of antioxidant capacity, DPPH; ABTS; FRAP and ORAC. Further tests were conducted to see if there was a correlation between the methods. The results were screened for to follow up the research, specifically, the antiglicante activity, believed to be related to the antioxidant activity. So the second article entitled "antiglicante in vitro activity of native plant extracts of flora", aimed to determine the antiglicante activity of native plant extracts of brazilian flora, with recognized antioxidant activity and the possibility of correlation between tests, antiglicante and antioxidants. For this 18 extracts, which had been classified as important sources of antioxidant compounds were tested for activity antiglicante. From the most promising extract, Auxemma oncocalyx Taub. (Bark) for activity, an isolated quinone thereof was tested in Oncocalixona A. This may be an important antiglicante agent, which resulted in the third section, "Oncocalyxone The functions of an anti-glycation agent in vitro", that this was submitted to the journal FOOD CHEMISTRY, ISSN: 0308-8146, Impact factor 3.259, on 02/12/14, in the form of Short communication. The particular this thesis is of importance, since investigations of this nature favors the development of research investigating potential therapeutic products, and that in turn may be useful in treating diseases associated with excessive accumulation of AGE Os produtos de glicação avançada (AGE) englobam uma série de compostos, bastante diferentes entre si, cuja atividade está relacionada à capacidade destes de modificar as propriedades químicas e funcionais das mais diversas estruturas biológicas. Diversos estudos, inclusive que utilizaram animais, apontam que a restrição de AGE na dieta pode exercer diversos efeitos protetores. Além disso, o uso de determinadas plantas medicinais parece oferecer benefícios adicionais, especialmente, para indivíduos que sofrem com transtornos associados ao acúmulo exagerado de AGE. Acredita-se que plantas que combinam propriedades antiglicantes e antioxidantes, exercem efeitos positivos sobre a inibição da glicação. Este fato tem atraído o interesse da comunidade científica, visto que pode oferecer importante potencial terapêutico. Embora nenhum componente seja ainda especificamente indicado como redutor de AGEs no contexto do corpo humano, em estudos in vitro algumas substâncias demonstraram efeitos anti-AGE importantes e merecem investigações adicionais, tais como piridoxamina, alilcisteína (componente do extrato de alho), compostos fenólicos, vitaminas C e E, tiamina, taurina e carnosina, reconhecidos por suas propriedades antioxidantes. Por esta razão o objetivo da presente proposta foi determinar a atividade antiglicante de extratos de plantas nativas da flora brasileira, que tenham reconhecida atividade antioxidante. Todos os extratos estudados fazem parte do banco de extratos vegetais pertencentes ao Laboratório de Pesquisas em Recursos Naturais (LPqRN), do Instituto de Química e Biotecnologia – UFAL. Para tanto, a presente tese foi dividida em três partes, que geraram três artigos. O primeiro deles entitulado “Atividade antioxidante de extratos de plantas nativas da flora brasileira pelos métodos ABTS, DPPH, FRAP e ORAC”, teve como objetivo investigar a capacidade antioxidante de diferentes extratos de plantas, por diferentes ensaios in vitro (ABTS, DPPH, FRAP, ORAC), e determinar se existe correlação entre os métodos testados. Nesta proposta, foram estudadas 49 amostras vegetais, pelos ensaios de capacidade antioxidante, DPPH; ABTS; FRAP e ORAC. Adicionalmente foram realizados testes para verificar se existia correlação entre os métodos. Os resultados foram uma triagem para dar sequência às pesquisas, especificamente, da atividade antiglicante, que se acredita haver relação com a atividade antioxidante. Assim o segundo artigo entitulado “Atividade antiglicante in vitro de extratos de plantas nativas da flora brasileira”, teve como objetivo determinar a atividade antiglicante de extratos de plantas nativas da flora barasileira, com reconhecida atividade antioxidante e a possibilidade de correlação entre os testes, antiglicante e antioxidantes. Para isto 18 extratos, que haviam sido classificados como importantes fontes de componentes antioxidantes, foram testados para atividade antiglicante. A partir do extrato mais promissor, Auxemma oncocalyx Taub. (entrecasca) para a atividade, foi testada uma quinona isolada do mesmo, a Oncocalixona A. Esta demonstrou ser um importante agente antiglicante, o que resultou no terceiro artigo, “Oncocalyxone A functions as an anti-glycation agent in vitro”, este que foi submetido à revista FOOD CHEMISTRY, ISSN: 0308-8146, Fator de impacto 3.259, no dia 02.12.14, na forma de Short communication. A presente tese se reveste de particular importância, uma vez que investigações desta natureza favorecem o desenvolvimento de pesquisas que investiguem potenciais produtos terapêuticos, e que por sua vez, possam ser úteis no tratamento de doenças associadas ao acúmulo exagerado de AGE

Treatment with gold nanoparticles (Au NPs) exhibit a variety of biological effects, including anti-inflammatory effects. In the present study, we investigated the effect of intranasal treatment with the Au NPs on allergic inflammatory response induced by ovalbumin (OVA) in rats subjected to experimental model of asthma. The animals were sensitized on days 0, 7 and 14 by intraperitoneal injection with 50 mg OVA. On days 21, 22 and 23 after the initial stimulus, the animals were challenged with OVA (50 mg / 25 μl PBS) intranasally. Treatment with the Au NPs (6 or 60 mg / kg) occurred 1 h before the antigen challenge, and the evaluation of the biological parameters performed 48 h after the last challenge. The effect of Au NPs in airway hyperresponsiveness induced by methacholine was investigated by determining the resistance and elastance; eosinophil infiltration, peribronchial fibrosis and mucus production were investigated using histological techniques; Leukocyte infiltration and production of pro-inflammatory mediators in allergic airways induced stimulation by enzyme- linked immunoassay (ELISA); The production of reactive oxygen species in vitro and in vivo measures was the reduction of nitroblue tetrazolium (NBT) and flow cytometry using cells labeled with 2 ', 7'-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA), respectively; The interference ability of Au NPs on phagocytosis, generation of TNF-α in murine macrophages and viability was evaluated by determining the phagocytic capacity, ELISA and MTT method, respectively. In the lungs, treatment with Au NPs reduced eosinophil infiltration after OVA challenge by attenuated production of mucus reversed resistance and increased lung compliance and decreased levels of IL-4, IL-13, KC, eotaxin-1 and eotaxin-2 in the lung tissue. Additionally, in vitro, macrophages exposed Au NPs in non-cytotoxic doses, when activated with zymosan showed a decrease in the production of reactive oxygen species (ROS) and secretion of TNF-α. Taken together, our results demonstrate the anti-inflammatory properties of the Au NPs and its association with reduced leukocyte infiltration, suppression of production of proinflammatory cytokines and antioxidant effect. The Au NPs were found to be a therapeutic option for the treatment of allergic inflammation. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior O tratamento com nanopartículas de ouro (NPs Au) exibem uma variedade de efeitos biológicos, incluindo efeitos anti-inflamatórios. No presente estudo, investigamos o efeito do tratamento intranasal com as NPs Au sobre a resposta inflamatória alérgica induzida por ovalbumina (OVA) em camundongos submetidos ao modelo experimental de asma. Os animais foram sensibilizados nos dia 0, 7 e 14 por via intraperitoneal com 50 µg de OVA. Nos dias 21, 22 e 23 após o estímulo inicial, os animais foram desafiados com OVA (50 μg/25 μl PBS) por via intranasal. O tratamento com as NPs Au (6 ou 60 μg/Kg) ocorreu 1 hora antes do desafio antigênico, sendo a avaliação dos parâmetros biológicos realizada 48 h após o último desafio. O efeito das NPs Au na hiperresponsividade brônquica induzida por metacolina foi investigada por meio da determinação da resistência e elastância; o infiltrado eosinofílico, fibrose peribrônquica e produção de muco foram investigadas através de técnicas histológicas; O infiltrado leucocitário e a produção de mediadores pró-inflamatórios nas vias áreas induzidos por estímulo alérgico pelo método de ensaio imunoenzimático (ELISA); A produção de espécies reativas de oxigênio in vitro e in vivo foi mensura pela redução do nitroblue tetrazolium (NBT) e citometria de fluxo utilizando células marcadas com 2',7'- diacetato de diclorofluoresceína (DCFH-DA), repectivamente; A capacidade de interferência das NPs Au sobre a fagocitose, geração de TNF-α e viabilidade em macrófagos murinos foi verificado pela determinação da capacidade fagocítica, ELISA e método de MTT, respectivamente. No pulmão, o tratamento com as NPs Au reduziu o infiltrado eosinofílico após desafio por OVA, atenuou a produção de muco, reverteu o aumento da resistência e elastância pulmonar e reduziu os níveis de IL-4, IL-13, KC, eotaxina-1 e eotaxina-2 no tecido pulmonar. Adicionalmente, in vitro, macrófagos expostos as NPs Au em doses não citotóxicas, quando ativados com zimosan apresentaram uma diminuição na produção de espécies reativas oxigenadas (ERO) e a secreção de TNF-α. Em conjunto, nossos resultados demostraram as propriedades anti-inflamatórias da NPs Au e sua associação com a redução do infiltrado leucocitário, supressão na produção de citocinas pró-inflamatórias e efeito antioxidante. As NPs Au revelaram-se como uma opção terapêutica para o tratamento da inflamação alérgica.

Allergic diseases affect millions of people and their prevalence has constantly increased in the world every decade. Among the clinical manifestations, the allergic asthma is considered a major public healthy problem due to its number of cases and death records. Currently, these diseases are treated either with glucocorticoids, anti-histamines, mast cell stabilizers or immunomodulators. Although these drugs exert a strong anti-allergic effects, the long-term use may lead to harmful side-effects. Thus, considering the increase of allergic manifestations in the population and the requirement for new therapeutic tools with less side-effects, the discovery of drug of natural origin have been gaining prominence. Among products from natural origin, triterpenes are secondary metabolites and represent the largest group of phytochemicals in many plant species. Pharmaceutical preparations containing this metabolites are used in several countries because of their medicinal properties, which include anti-inflammatory, analgesic, antipyretic, hepatoprotective, cardiotonic effects, among others. Taking into account these information, the aim of this study was to investigate uvaol anti-allergic efficacy in experimental mouse models of allergy triggered by ovalbumin in mice. Firstly, it was found that in a model of the paw edema induced by OVA and histamine, the oral pretreatment with uvaol 1 hour prior to stimulation reduced both edema. Then, using the same treatment protocol, it was found that in the allergic pleurisy model, using a single allergic challenge, the uvaol significantly inhibited leukocyte recruitment, specially eosinophils, 24 h after allergic stimulation. Furthermore, IL-5 also presented a decreased levels in the pleural fluid. Using murine asthma models, with three exposures to the antigen daily for three consecutive days, it was found that oral administration of uvaol 1 h before each allergic stimulation reduced the accumulation of total leukocytes, mainly eosinophils present in the pulmonary parenchyma as well as IL-5 levels present in the inflamed lung tissue. Moreover, was observed that pretreatment with uvaol reduced the production of mucus after stimulus in airways of asthmatic animals. Bronchoalveolar lavage (BAL) of asthmatics animals pretreated with uvaol were evaluated and it was detected a significantly reduction in total cell number and eosinophils, as well as significantly reduced levels of IL-5. However, the pretreatment with uvaol was not able to interfere with the production of reactive oxygen species (ROS) in cells of the bronchoalveolar lavage. Therefore, considering all the data obtained so far, it was demonstrated for the first time that uvaol has a treatment potential of allergic disorders by reducing leukocyte recruitment and IL-5 levels, but not interfering in the generation of reactive oxygen species. Thus, uvaol shows up as a potential therapeutic tool for the treatment of allergic inflammation. Further studies are necessary to understand its molecular mechanism of action. CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEAL - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Alagoas As respostas inflamatórias de origem alérgica acometem milhares de pessoas em todo mundo, e a prevalência destas doenças na população vem aumentando a cada década. Dentre as manifestações clínicas, a asma alérgica chama a atenção por causa do grande impacto na saúde pública devido ao número de casos e óbitos registrados. Como fármacos disponíveis para a terapêutica destas doenças destacam-se os corticoides, estabilizadores de mastócitos e imunomoduladores. Porém, mesmo sendo de amplo uso pela população, ainda há limitações para estes fármacos, pois o uso prolongado causa diversos efeitos adversos. Assim, considerando a evidências de crescimento das manifestações alérgicas na população, aliado a necessidade de novas ferramentas terapêuticas eficazes e com menos efeitos adversos, a busca por fármacos de origem natural vem ganhando destaque. Dentre os produtos de origem natural os triterpenos são metabólitos secundários que representam o maior grupo de fitoquímicos em várias espécies vegetais. Preparações medicamentosas contendo estes metabólitos são utilizadas em muitos países devido aos amplos efeitos de interesse, incluindo, anti-inflamatório, analgésico, antipirético, hepatoprotetor, cardiotônico, dentre outras. Logo, considerando estas informações objetivou-se neste estudo caracterizar o potencial efeito antialérgico do uvaol em modelos de inflamação alérgica desencadeada por ovalbumina (OVA) em camundongos. Inicialmente, verificou-se que no modelo de edema de pata a resposta edematogênica induzida por OVA ou por histamina foi significativamente reduzida pelo pré-tratamento com o uvaol, por via oral 1 hora antes do estímulo. Em seguida, utilizando o mesmo protocolo de tratamento, verificou-se que no modelo de pleurisia alérgica, utilizando-se um único desafio alérgico, o uvaol inibiu significativamente o recrutamento leucocitário, em especial, os eosinófilos, 24 h após estímulo alérgico. Além disso, os níveis de IL-5 também se mostraram reduzidos no exsudato pleural. Utilizando o modelo animal de asma experimental, com três exposições ao antígeno uma vez ao dia por três dias consecutivos, constatou-se que a administração oral de uvaol 1 h antes de cada estímulo alérgico reduziu o acúmulo total de leucócitos, principalmente os eosinófilos, presente no parênquima pulmonar, bem como os níveis de IL-5 presente no tecido inflamado. Observou-se ainda que o tratamento com uvaol atenuou a produção de muco em células epiteliais brônquicas dos animais asmáticos após estímulo. Ao avaliar o lavado broncoalveolar (BAL) dos animais asmáticos tratados com uvaol notou-se uma redução significativa no número de células totais e eosinófilos, bem como uma redução nos níveis de IL-5. Porém, ao avaliar a geração de espécies reativas de oxigênio (ERO) nos leucócitos provenientes do BAL verificou-se que o tratamento com uvaol não interferiu na produção destas espécies reativas. Portanto, considerando todas as informações obtidas até o momento, demonstrou-se, pela primeira vez, que o uvaol possui potencial para tratamento de manifestações alérgicas por reduzir o recrutamento de leucocitário e geração de IL-5, mas não por interferir na geração de espécies reativas de oxigênio. Deste modo, concluiu-se que, mesmo necessitando de futuros estudos para demonstrar seu mecanismo molecular de ação, o uvaol mostra-se como uma potencial ferramenta terapêutica para tratamento das inflamações alérgicas

Wound healing is a complex event which involves various cells and molecules capable of interacting to provide for reconstruction of the tissue. In this study we evaluated the effect of pentacyclic triterpene, uvaol, in the process of healing of experimental wounds. Thus, excisional wounds were made on the dorsum of Swiss mice, which wound contractions were evaluated under treatment with uvaol, Fibrase® or NaCl (0.9%) on different days after surgical procedure. On day 9 after surgery, uvaol treated mice showed a significant reduction in wound area compared to the controls. Histological analysis showed that uvaol was able to induce an adequate tissue organization as well as an increase in collagen deposition when compared to the group treated with saline. Furthermore, this study demonstrated that topical treatment of uvaol was not able to cause systemic toxicity in parameters determined in this study and for the duration of the healing process assessed. Moreover, this triterpene did not interfere with both animal weight and profile cell blood during the period of treatment. In vitro, uvaol was not able to induce changes in viability of human fibroblasts, indicating absence of toxic effects associated with its use. When incorporated into a cream, uvaol kept its property to heal wounds, indicating that this active ingredient retains its properties even when under pharmaceutical formulation. In addition, skin treatment on skin with this formulation did not induce changes in the treated areas, reinforcing the absence of undesirable effects associated with medication. Together, the results of this study demonstrate for the first time the healing effects of uvaol in therapy of skin wounds. A cicatrização de feridas mostra-se como um evento complexo que envolve diferentes células e moléculas capazes de interagir para proporcionar a reconstituição do tecido. Neste estudo avaliou-se o efeito tópico do triterpeno pentacíclico uvaol, no processo de cicatrização de feridas cutâneas experimentais. Para tal, feridas excisionais foram realizadas no dorso de camundongos Swiss, cujas contrações foram avaliadas em diferentes dias após o procedimento cirúrgico, e depois do tratamento com uvaol, Fibrase® ou solução salina (NaCl, 0,9%). No dia 9, os animais tratados com uvaol apresentaram uma redução significativa na área da ferida, quando comparados com os controles. A análise histológica mostrou que o uvaol induziu uma melhor organização tecidual, bem como um aumento na deposição de colágeno em relação ao grupo tratado com solução salina. Foi demonstrado que o tratamento tópico de uvaol não causou toxicidade sistêmica nos parâmetros determinados neste estudo e durante o tempo do processo de cicatrização avaliado. Ainda, esse triterpeno não interferiu no perfil celular sanguíneo e nem alterou o peso dos animais após o tratamento. In vitro, o uvaol não induziu alterações na viabilidade de fibroblastos humanos, indicando ausência de efeitos tóxicos associados ao uso. Quando incorporado a um creme, o uvaol manteve sua propriedade de cicatrizar feridas cutâneas, indicando que este princípio ativo mantém suas propriedades mesmo quando sob formulação farmacêutica. Em adição, o tratamento cutâneo em pele íntegra com a formulação não produziu alterações nas áreas tratadas, reforçando a ausência de efeitos indesejáveis associados ao uso do medicamento. Em conjunto, os resultados deste estudo demonstram, pela primeira vez, os efeitos cicatrizantes do uvaol na terapia de feridas cutâneas.

Amazonian Tambaqui (Colossoma macropomum) is a commercial important fish species that is intensively cultivated in rice fish-cultures in a variety of water paddies in the area of the São Francisco river in the northeast of Brazil. Commercial formulations of herbicides containing Trifluralin (α,α,α-trifluoro-2,6-dinitro-N,N-dipropyl-p-toluidine) are commonly used to control weed on the rice fields of the area. The present study aimed to investigate the sensitivity of Colossoma macropomum to trifluralin using biomarkers to understand the effects of an acute exposure to this substance. On the in vivo toxicity tests, C. macropomum juvenile were exposed to four concentrations of trifluralin: 0.74, 1.5, 2.23 and 3.0 μmols / L for 96 hours, and compared with negative, positive controls and solvent, respectively. The herbicide trifluralin shows a dose-dependent inhibition profile on the brain C. macropomum cholinesterase activity. On the highest trifluralin concentration was observed a drop in the cholinesterase activity around 62 % and the inhibition of the muscle was 80 % at the highest concentration tested. The estimated value of 96 h LC50 for trifluralin was 1.25 μmols / L. In vitro assays had shown that brain cholinesterase-ChE C.macropomum has a moderate sensitivity toward trifluralin (2.34 μmols / L) whereas the sensitivity to the carbamate eserine is much higher (0.158 μmols / L). In order to get the apparent kinetic constants for C.macropomum brain cholinesterase, kinetic assays were performed on brain homogenate in the presence of acetylthiocholine as substrate. The kinetic results in the presence of acetylthiocholine as substrate, the brain homogenate containing activity were 0.043 ± 0.015 mmol / L and 0.301 ± 0.014 for mmol.min-1.mg-1 protein Kapp m and Vapp max apparent kinetic constants, respectively. We also evaluated the mutagenic, genotoxic and apoptotic exposure of C. macropomum juvenile trifluralin. In the Comet assay, erythrocytes analyzed, compared to the negative control showed induction of DNA damage at all concentrations tested. The higher frequency of micronuclei and high numbers of apoptotic cells were observed in fish treated with concentrations of 1.5 μmols / L with a significant effect (p < 0.01). The results of this study indicate that brain ChE C. macropomum is a reliable biomarker for use in environmental monitoring of pesticides in the delta of the São Francisco river. It was also confirmed the genotoxic and apoptotic trifluralin at concentrations from 1.5 μmols / L for juvenile C. macropomum. (Note: check some nomeclaturas in the original summary because lost formatting in this field) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico O Colossoma macropomum (Tambaqui Amazônico) é uma espécie de peixe comercial importante e intensamente cultivado em consórcio com as culturas de Oryza sativa (arroz) em uma variedade de corpos de água na área do rio São Francisco, no Nordeste do Brasil. Formulações comerciais de herbicida contendo Trifluralina (α, α, α-trifluoro-2,6-dinitro-N, N-dipropil-p-toluidina) são comumente utilizadas para controlar ervas daninha em campos de produção de arroz. O presente estudo teve como objetivo avaliar a sensibilidade de C. macropomum à trifluralina utilizando biomarcadores para analisar os efeitos de uma exposição aguda a esta substância. Nos testes de toxicidade in vivo, juvenis de C. macropomum foram expostos a quatro concentrações de trifluralina: 0,74; 1,5; 2,23 e 3,0 μmols / L durante 96 horas com os controles negativos, positivos e solvente, respectivamente. O herbicida trifluralina apresentou um perfil de inibição dose-dependente na atividade da colinesterase-ChE do cérebro de C. macropomum. Na maior concentração de trifluralina foi observada uma diminuição na atividade da ChE em torno de 62%, enquanto que no músculo a inibição foi de 80% na maior concentração testada. O valor estimado da CL50 em 96 h para trifluralina foi de 1,25 μmols / L. Os ensaios in vitro mostraram que a ChE cerebral de C. macropomum tem uma moderada sensibilidade à trifluralina (2,34 μmols / L), porém, com alta sensibilidade ao controle positivo - carbamato de eserina (0,158 μmols / L). Os resultados cinéticos, em presença de acetiltiocolina como substrato, com o homogenato de cérebro contendo atividade foram de 0,043 ± 0,015 mmol / L e 0,301 ± 0,014 mmol / min-1.mg proteína para as constantes cinéticas aparentes Kapp m e Vapp max, respectivamente. Também foram avaliados os efeitos mutagênico, genotóxico e apoptótico da exposição de C. macropomum juvenil à trifluralina. No ensaio do cometa, os eritrócitos analisados, quando comparados ao controle negativo, apresentaram indução de danos ao DNA em todas as concentrações testadas. A maior frequência de micronúcleos e o elevado número de células em apoptose foram observados nos peixes tratados com concentrações de 1,5 μmols / L com efeito significativo (p

Hypertension is a chronic disease difficult to control characterized low rate adherence to medication, wherefore, the use of alternative therapies, herbs occurs at a very high rate among patients with cardiovascular disease including hypertension. Anacardium occidentale Linn. (Anacardiaceae) popularly known as cashew, is present on the national list of plants of interest to the SUS. It is used in folk medicine as anti-inflammatory against arthritis, diabetes. The literature reports cardiovascular studies with extracts of this plant with potent antihypertensive effect induced by bark extract. Anacardium occidentale L leaves extracts exhibited relaxing effect on isolated rat aortic ring preparations. Hence, present study was designed to study the acute cardiovascular effects of the Anacardium occidentale L. leaves hexane extract (AOHE) in rats, by in vivo and in vitro approach. AOHE (0.5; 1; 5; 10; 20 and 30 mg/kg, i.v.) induced hypotensive (-12.9 ± 1.1, -10.8 ± 1, 1, -15.5 ± 1.6, -19.7 ± 3.0, -20.9 ± 2.8 and -17.7 ± 0.9%, respectively) and bradycardic (-7.5 ± 0.7, -4.5 ± 1, 0, -9.3 ± 2.5, -16.8 ± 0.8, -31.0 ± 1.3 and -19.9 ± 0.9%, respectively). This response was changed after preinjection L-NAME, no selective Nitric Oxide (NO) synthase inhibitor, the hypontensive effect was attenuated, as well as, the bradycardia was blocked or reversed. Similary, a inhibitor of cyclooxygenase (indomethacin, 3 mg/kg, i.v.) produced attenuation of hypotensive action induced by AOHE and abolished or reversed the bradycardia response. Pretreatment with muscarinic antagonist, atropine, reduced the hypotensor effect. Moreover, the depressor effects of extract on heart rates were abolished or reversed (only, 30 mg/kg, i.v.). On the other hand, the administration of ganglionic blocker, hexamethoniun, produced significantly change the pressor response AOHE-induced, except in the second, fifth and sixth dose. However, the bradycardic effect was abolished. In the superior mesenteric artery rings isolated from rats pre-contracted with FEN (100 μM), EHAO (1 to 1000 μg / mL) induced vasorelaxation, concentration dependent manner and dependent on the presence of functional endothelium (Emax = 52.56 ± 3.4 %). Similarly EHAO induced vasorelaxation in rings precontracted with 80 mM KCl concentration dependent manner and dependent on the presence of functional endothelium (Emax = 33.30 ± 3.20 %). The administration of a single intragastric dose of 300 mg/kg of AOHE produced antihypertensive activity after the 2h. Our results suggest wich hypotensive, bradycardiac and antihypertensive responses could be mediated by the endothelial and cardiac muscarinic receptors or EDRFs. CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior A hipertensão constitui uma doença crônica de difícil controle caracterizada por baixas taxas de adesão ao tratamento medicamentoso, devido a esta problemática, as plantas medicinais são utilizadas como terapia alternativa no tratamento desta enfermidade. Anacardium occidentale Linn (Anacardiaceae), conhecida popularmente como cajueiro, esta presente na relação nacional de plantas de interesse do SUS (RENISUS), é utilizado na medicina popular como antiinflamatório, contra artrites, diabetes. A literatura relata estudos cardiovasculares com extratos desta planta, apresentando potente efeito anti-hipertensivo induzido pelo extrato da casca da madeira, o extrato das folhas do cajueiro também revelou efeito relaxante em anéis de aorta isolada de rato. Diante do exposto, este trabalho objetivou investigar os efeitos cardiovasculares induzidos pelo extrato hexânico das folhas de Anacardium occidentale (EHAO), através de uma abordagem in vivo e in vitro. O EHAO (0,5; 1; 5, 10, 20 e 30 mg/kg, i.v.) promoveu uma hipotensão (-12,9±1,1; -10,8±1;1; -15,5±1,6; -19,7±3,0; -20, 9±2,8 e - 17,7±0,9 %, respectivamente) e bradicardia (-7,5±0,7; -4,5±1,0; -9,3±2,5; -16,8±0,8; -31,0 ±1,3 e -19,9 ± 0,9 %, respectivamente) de maneira não dose dependente em ratos normotensos não anestesiados. Após o bloqueio da síntese do NO com L-NAME e com indometacina, um inibidor da via da ciclooxigenase, a resposta hipotensora foi atenuada, bem como a bradicardia foi praticamente abolida em todas as doses. Semelhantemente, a resposta hipotensora foi atenuada após o tratamento com atropina, bloqueador não seletivo de receptores muscarínicos, e o efeito bradicárdico foi bloqueado havendo reversão na dose de 30 mg/kg. O efeito bradicárdico foi totalmente abolido após o bloqueio dos receptores ganglionares com hexametônio (30 mg/kg; i.v.). Em anéis de artéria mesentérica superior isolada de rato wistar, pré-contraídos com FEN (100 μM), EHAO (1 – 1000 μg/mL) promoveu vasorelaxamento, de maneira dependente de concentração e dependente da presença do endotélio funcional (Emáx = 52,56 ± 3,4 %). Semelhantemente, EHAO induziu vasorelaxamento em anéis pré-contraídos com KCl 80 mM de maneira dependente de concentração e dependente da presença do endotélio funcional (Emáx = 33,30 ± 3,20 %). EHAO também induziu efeito anti-hipertensivo após a segunda hora da administração de uma única dose intragástrica de 300 mg/kg em ratos espontaneamente hipertensos (SHR) não anestesiados, Em conclusão, os resultados em conjunto sugerem que EHAO induz efeito hipotensor, bradicárdico e anti-hipertensivo, causado pela redução da resistência vascular periférica, provavelmente através da liberação de fatores relaxantes derivados do endotélio, o NO e prostanóides, através da ativação direta ou indireta de receptores muscarínicos endotelial, em parte por redução do débito cardíaco. O efeito bradicárdico parece ser devido a uma ativação indireta de receptores muscarínicos cardíacos, via ativação do nervo vago.

The pesticides are chemical substances used to control pests or diseases of plants and animals. Used since classic Greece, these products were spread in several countries after Second World War and in Brazil starting from the decade of 60. Now Brazil is the largest pesticides consumer in the world. The inadequate use of pesticides has been a problem for human and environmental health. Especially the agricultural workers are exposed to the harmful effects of these products. In tobacco farming, in association to the problems caused by exposure to pesticides, farm workers are still exposed to the intoxication caused by nicotine in the tobacco leaf. In Arapiraca, important tobacco producer on the national scenery, the culture of tobacco stands out for excessive pesticides use, a fact that contributes to occurrence of health hazards to workers, mainly for the inappropriate working conditions and disregard for safety standards. This study aimed to characterize the occupational profile of the tobacco growers of Arapiraca, Alagoas, and their exposure to pesticide and nicotine. This is a cross-seccional descriptive study, where 70 workers of the cultivation of the tobacco were interviewed, being used a semi-structured questionnaire to obtain information concerning the occupational profile. The results showed that 41,4% of the workers interviewees ranged in age from 30-45 years and 55,7% had incomplete primary education or were illiterate. It was also observed that 37,1% were owners of the rural property and 58% an income per capita up to a quarter of minimum wage. Almost half of rural workers (47,1%) began work in the tobacco farming until the age of 8 and 48,6% were between 11-30 years of work Most, 54,3% told to work up to 8 hours/day, and 61% worked six days of the week. Also most of the workers (62,9%), applied pesticides and 43,2% of these spent between 5-8 hours a day in the application. Manual backpack pulverizer was used by 72,7% of the pesticide applicators. Among the pesticides used, Confidor was the most mentioned. Regarding the use of protection measures during the mixture of pesticides, 56,8% didn't use none measure and 34,1% justified due to high cost. Most washed hands (93,2%) and took a shower 79,5% often immediately after applying pesticide. Two-thirds of the workers (61,3%) never drank liquid during the application of pesticides and 75% never ate during the same procedure. While 40,9% of the interviewees gotten sick after the pesticides application, 72,7% reported not having pesticide poisoning. Headache, nausea and vomit were signs and symptoms more referred. Regarding exposure to nicotine, 84,3% of the respondents reported skin contact with the tobacco leaf and 71,5% had such contact ever. The use of gloves during harvesting and washing of hands after the harvest was reported by 57,1% e 85,7% of employees, respectively. Most growers (64,3%) had felt ill during the harvest and symptoms most often reported were headache, vomiting and nausea. Most workers, 58,6%, was not smoker and 51,4% didn't smoke while handling the tobacco leaf. It is concluded from this study that growers are constantly exposed to the effects of nicotine and pesticides due to long working hours, poor adherence to prevention available tecnologies due to vulnerabilities and risk minimization. CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Os agrotóxicos são substâncias químicas usadas, entre outras coisas, para o controle de pragas ou doenças das plantas e animais. Utilizados desde a Grécia clássica, esses produtos foram difundidos em vários países após a Segunda Guerra Mundial e no Brasil a partir da década de 60. Atualmente o Brasil é o maior consumidor de agrotóxicos no mundo. O uso inadequado dos agrotóxicos tem se constituído um problema para saúde humana e ambiental. Especialmente os trabalhadores da agricultura estão expostos aos efeitos danosos desses produtos. Na fumicultura, associados aos problemas causados pela exposição aos agrotóxicos os trabalhadores rurais ainda estão expostos a intoxicação causada pela nicotina presente na folha do tabaco. Em Arapiraca, importante produtor de tabaco no cenário nacional, a fumicultura destaca-se pela excessiva utilização de agrotóxicos, fato que contribui para ocorrência de agravos à saúde dos trabalhadores, principalmente pelas condições inadequadas de trabalho e desrespeito às normas de segurança. Esse trabalho objetivou caracterizar o perfil ocupacional dos fumicultores de Arapiraca-AL e sua exposição a agrotóxico e nicotina. Trata-se de um estudo transversal, do tipo descritivo, onde 70 trabalhadores do cultivo do tabaco foram entrevistados, utilizando-se um questionário semi-estruturado para obter informações acerca do perfil ocupacional. Os resultados mostraram que, 41,4% dos trabalhadores entrevistados possuíam idade entre 30-45 anos e 55,7% tinha ensino fundamental incompleto ou eram analfabetos. Também se observou que 37,1% eram proprietários da terra e 58% tinham renda per capita até um quarto de salário mínimo. Quase metade dos agricultores (47,1%) iniciou o trabalho na fumicultura até os 8 anos de idade e 48,6% tinham entre 11-30 anos de trabalho. A maioria, 54,3%, relatou trabalhar até 8 horas/dia, sendo que 61% trabalhavam seis dias da semana. Também a maioria dos trabalhadores, (62,9%) aplicava agrotóxicos e destes 43,2% gastava entre 5-8 horas diárias na aplicação. O pulverizador costal manual era utilizado por 72,7% dos aplicadores. Dentre os agrotóxicos utilizados o Confidor foi o mais citado. Quanto ao uso de medidas de proteção durante a mistura do agrotóxico, 56,8% não usava nenhuma medida e 34,1% justificava devido ao custo elevado. A maioria lavava as mãos (93,2%) e tomava banho (79,5%) frequentemente logo após aplicar agrotóxicos. Dois terços (61,3%) dos agricultores nunca ingeriam líquido durante a aplicação do agrotóxico e 75% nunca comiam durante o mesmo procedimento. Enquanto 40,9% dos entrevistados já passaram mal após aplicar agrotóxicos, 72,7% referiram nunca ter tido intoxicação por agrotóxico. Dor de cabeça, náusea e vômito foram sinais e sintomas mais referidos. Quanto à exposição à nicotina, 84,3% dos entrevistados referiram contato da pele com a folha do tabaco e 71,5% tinham este contato sempre. O uso de luvas durante a colheita e a lavagem das mãos após a colheita foi referida por 57,1% e 85,7% dos trabalhadores, respectivamente. A maioria dos fumicultores já havia se sentido mal durante a colheita (64,3%) e os sintomas mais citados foram dor de cabeça, vômito e náusea. A maioria dos trabalhadores, 58,6%, não era fumante e 51,4% não fumavam enquanto manipulava a folha do tabaco. Concluiu-se com esse estudo que os fumicultores estão permanentemente expostos aos efeitos dos agrotóxicos e a nicotina devido à longa jornada de trabalho, baixa adesão às tecnologias de prevenção disponíveis devido às vulnerabilidades e minimização do risco.

The search for new substances of pharmaceutical interest in the area or even in the most diverse agricultural industry uses, has led researchers to seek alternatives before not properly explored. One such alternative would be to isolate the microorganisms that inhabit plant asymptomatically to produce new substances, studies have shown that these microorganisms, called endophytes, through the coevolution of host plants, has given them many benefits such as protection and resistance pest attack. In parallel, it is seen that many compounds produced by host plants, can also be produced by these microorganisms, and thus its industrial production could be facilitated. This study aimed to isolate and identify fungal endophytes from two species A. cochliocarpos and D. ecsatophyllum popularly known as barbatimão and rabo – de- bugio, respectively, and to examine its antagonism between fungi isolated and the antioxidant activity are also the focus of this work. Endophytic fungi were isolated from six. Of these, five were identified as two of the genus Phomopsis fungi, a fungus of the genus Guignardia and one identified as being of order Pleosporales, the fungus was identified as the fifth genus Nigrospora. One of the fungus could not be identified by the technique used and was called DeF2. The fungi grew better when kept in dark on PDA growth medium and BSA in the laboratory. As antagonists, we observed that the isolates coming from the host D. ecstophyllum were the most efficient and that one gender may have different behaviors depending on the host that originated. From experiments with mycelia of these fungi were obtained organic extrados of different polarities, and the analysis of the antioxidant activity of these extracts showed that the fungus Phomopsis sp. isolated from D. ecastophyllum presented extracts with antioxidant activity than those of other fungi analyzed. Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Alagoas A procura de novas substâncias de interesse na área farmacêutica ou mesmo agroindústria nos mais variados usos, tem levado os pesquisadores a buscar alternativas antes não devidamente exploradas. Uma dessas alternativas seria o isolamento de microrganismos que habitam vegetais de forma assintomática para a produção novas substâncias, estudos tem demonstrado que estes microrganismos, chamados de endofíticos, através da coevolução em suas plantas hospedeiras, tem conferido a elas diversos benefícios como proteção e resistência ao ataque de pragas. Paralelamente, é visto que muitos compostos produzidos pelas plantas hospedeiras, também podem ser produzidos por esses microrganismos, e com isso a sua produção industrial poderia ser facilitada. Este trabalho teve como objetivo isolar e identificar fungos endofíticos de duas espécies vegetais a A. cochliocarpos e a D. ecastophyllum conhecidas popularmente como barbatimão e rabo-de-bugio, respectivamente, bem como analisar suas inter-relações entre os fungos isolados e a atividade antioxidante também são objetivos deste trabalho. Foram isolados seis fungos endofíticos. Destes, cinco foram identificados como sendo dois fungos do gênero Phomopsis, um fungo do gênero Guignardia e um identificado como sendo da ordem Pleosporales, o quinto fungo identificado foi do gênero Nigrospora. Um dos fungos não pôde ser identificado pela técnica utilizada e foi chamado de DeF2. Os fungos tiveram crescimento superior quando mantidos em ambiente escuro e em meio de cultura BDA e BSA em laboratório. Como antagonistas, foi possível observar que os isolados provindos do hospedeiro D. ecstophyllum foram os mais eficientes e que um mesmo gênero pode apresentar comportamentos diferenciados dependendo do hospedeiro que foi originado. A partir de experimentos realizados com micélios destes fungos foi possível obter extrados orgânicos de diferentes polaridades e, a análise da atividade antioxidante destes extratos, mostrou que o fungo Phomopsis sp. isolado de D. ecastophyllum apresentou extratos com atividade antioxidante superior aos de outros fungos analisados.

Studies have shown that growth hormone (GH) is a polypeptide with immunomodulatory properties. Herein, studies were performed to determine in vivo and in vitro effects of GH on macrophage by using cultures of resident peritoneal macrophages from swiss mice. The microscopical analyses revealed alterations in the macrophage morphology after GH treatment with 20 and 200 ng/mL for 12 and 24 hours. It was also observed that GH-treated macrophages have an increase in fibronectin and laminin deposition evaluated by indiret immunocytochemistry. By using flow cytometry, it was shown that GH-treatment (200 ng/mL) for 6 and 24 hours altered the Mac-1 and VLA-6 integrins expression on macrophage surface. Moreover, the same GH concentration, during 6 hours of treatment, was able to decreased macrophage adhesion to laminin. In the in vitro migration assays, the GHtreated cells (200 ng/mL) showed opposite effects depending on the treatment time, after 6 hours, there was a increase in migrating cells whereas after 12 hours was a decrease in cell migration. The in vitro GH treatment did not influence the phagocytic activity of macrophages but when the GH treatment was perfomed in vivo, for 7 consecutive days, the peritoneal macrophages from GH-treated mice (20 and 200 μg/kg) showed a higher porcentage of phagocytosis and also a higher phagocytic capacity than cells from control animals. Taken together, these results reinforce the literature data which show that GH can act as an macrophage activating-factor in the immune response. CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEAL - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Alagoas Estudos mostram que o hormônio do crescimento (GH) é um polipeptídio com propriedades imunomoduladoras. Assim, o objetivo desse estudo foi avaliar os efeitos in vivo e in vitro do GH sobre macrófagos, utilizando culturas de macrófagos peritoneais residentes obtidos de camundongos swiss. Inicialmente, através da análise microscópica foram observadas alterações na morfologia dos macrófagos em cultura, tratados com GH, nas concentrações de 20 e 200 ng/mL, pelos períodos de 12 e 24 horas, quando comparado às células não-tratadas. A presença de ligantes de moléculas da matriz extracelular em macrófagos foi analisada por imunocitoquímica, em que se evidenciou um aumento na deposição de fibronectina e laminina quando as células foram tratadas com GH nas concentrações de 20 e 200 ng/mL, nos tempos de 6, 12 e 24 horas. Por citofluorimetria, observou-se que o tratamento com GH (200 ng/mL), por 6 e 24 horas alterou a expressão das integrinas Mac-1 e VLA-6 na superfície dos macrófagos. Além disso, o tratamento com GH, nesta mesma concentração, pelo período de 6 horas, foi capaz de diminuir a adesão de macrófagos à laminina. No ensaio de migração in vitro, o tratamento com GH (200 ng/mL), apresentou efeitos opostos nos diferentes tempos de tratamento, aumentando o número de células migrantes após 6 horas e diminuindo o número de macrófagos migrantes após 12 horas de tratamento. Demonstrou-se ainda, que o tratamento in vitro com GH, em ambas as concentrações, não modulou a atividade fagocítica dos macrófagos, contudo macrófagos peritoneais obtidos de animais tratados com GH nas doses de 20 e 200 μg/kg, por um período de 7 dias, apresentaram uma maior porcentagem de fagocitose e uma maior capacidade fagocítica quando comparados aos macrófagos de animais do grupo controle. De uma forma geral, os resultados apresentados reforçam os dados já constantes na literatura de que o GH pode agir na resposta imune como um ativador de macrófagos.

In this study we evaluated the antinociceptive and anti-inflammatory activities of the stem bark of the species Aspidosperma tomentosum in models of pain and inflammation induced in mice. A A. tomentosum belongs to the family Apocynaceae that has been extensively studied and characterized chemically by the frequent occurrence of alkaloids, some of therapeutic importance, such as vinblastine and vincristine. This species is known as pau-pereiro do campo and was collected in the Brazilian cerrado, in the city of Planaltina the state of Goiás, in May 2004. We assessed the antinociceptive and anti-inflammatory activity of crude ethanol extract obtained by extraction with 20 L of 90% ethanol, fractions obtained by chromatography adapted, according to a solvent gradient of increasing polarity, and the flavonoid isorhamnetin, obtained in the filtration of crude ethanolic extract of stem bark of A. tomentosum. We conducted the following tests: test of writhing induced by acetic acid, hot plate, formalin, ear edema induced by capsaicin, peritonitis induced by thioglycollate 3%. Was also evaluated motility and / or depression of the central nervous system by the test of catalepsy. For statistical analysis we used ANOVA followed by Dunnet test, the tutorial Prisma ®. Values were considered significant when * p

The endophytic microorganisms in at least one phase of its life cycle inhabit the inner tissues of plants without causing apparent damage. Like other tropical species, Caesalpinia echinata Lam has shown several endophytes. Therefore this study aimed to isolate and characterize the endophytic fungi of Brazil wood, as well as assess the antimicrobial activity of extracts. The harvesting of stems has been done in a fragment of Atlantic Forest, and the leaves were harvested from trees growing in the campus of the Universidade Federal de Alagoas. There was a predominance of filamentous fungi compared to bacteria, in both, stems and leaves. By morphological and molecular analyses some endophytic fungi of C. echinata were identified, namely: Botryosphaeria rhodina, Xylaria multiplex and Pestalotiopsis sp. Among all the isolates ten fungi were selected for tests of antagonism against phytopathogenic fungi. The endophytic fungi Pestalotiopsis sp. Xylaria multiplex and Botryosphaeria rhodina were the most effective antagonists of Pythium debaryanum and Phytoththora palmivora. These results obtained in in vitro experiments support the possibility of the application of chemical extracts of the endophytic Botryosphaeria rhodina and Xylaria multiplex for the biological control of plant pathogens such as Rhizoctonia solani and Colletotrichum gloeosporioides. The mycelial growth of the pathogenic fungus Phomopsis sp. was not inhibited by endophytic Botryosphaeria rhodina, Pestalotiopsis sp and Xylaria multiplex. These same endophytes were also the most effective inhibiting the mycelial growth of phytopathogen Pestalotiopsis sp. Botryosphaeria rhodina, Xylaria multiplex, Pestalotiopsis sp. and C.e.A6.F4.c.b. have shown a higher amount of biomass when growing in BD medium incubated in the dark and without agitation. Extracts of the endophytic fungi of Caesalpinia echinata obtained from different solvents, have not shown antibacterial effect on Enterococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus, in the concentrations used. Os microrganismos endofíticos, em pelo menos uma fase do seu ciclo de vida, habitam o interior de tecidos vegetais, sem causar-lhes danos aparentes. Assim como outras espécies tropicais, Caesalpinia echinata Lam. também abriga diversos endofíticos. Sendo assim o presente trabalho teve como objetivos isolar e caracterizar os fungos endofíticos do pau-brasil, assim como, avaliar a atividade antimicrobiana dos extratos obtidos. As coletas de caules foram realizadas em um fragmento de Mata Atlântica, e as folhas foram coletadas de árvores plantadas, no Campus da Universidade Federal de Alagoas. Houve um predomínio de fungos filamentosos em relação a bactérias, tanto nos caules quanto nas folhas. Através de análises morfológica e molecular alguns fungos endofíticos de C. echinata foram identificados, sendo eles: Botryosphaeria rhodina, Xylaria multiplex e Pestalotiopsis sp. Dentre todos os isolados, dez deles foram selecionados para testes de antagonismo contra fungos fitopatógenos. Os fungos endofíticos Pestalotiopsis sp., Xylaria multiplex e Botryosphaeria rhodina foram os mais eficazes antagonistas de Pythium debaryanum e Phytoththora palmivora. Os resultados obtidos no antagonismo in vitro evidenciaram a possibilidade da aplicação dos seus respectivos extratos químicos no controle biológico dos fitopatógenos Rhizoctonia solani e Colletotrichum gloeosporioides. O crescimento micelial do fitopatógeno Phomopsis sp. só foi inibido pelos endofíticos Botryosphaeria rhodina, Pestalotiopsis sp. e Xylaria multiplex. Estes mesmos endofíticos também foram os mais eficazes na inibição do crescimento micelial do fitopatógeno Pestalotiopsis sp. Botryosphaeria rhodina, Xylaria multiplex, Pestalotiopsis sp. e C.e.A6.F4.c.b. apresentaram uma quantidade maior de biomassa ao crescerem no meio BD, incubados no escuro e sem agitação. Os extratos dos fungos endofíticos de Caesalpinia echianata, obtidos a partir de diferentes solventes, não exerceram efeito antibacteriano sobre Enterococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa e Staphylococcus aureus, nas concentrações utilizadas.

This work describes the isolation and structural elucidation of some chemical constituents as well as antioxidant, anticholinesterasic and skin anti-inflammatory activities of extracts and some of the isolated compounds from Coutarea hexandra (Jacq.) K. Schum. (Rubiaceae). In the antioxidant assays, extracts from roots and leaves, when compared to positive controls used, free scavenger radical and inhibited the formation of peroxide of the linoleic acid. In the anticholinesterase and anti-inflammatory assays, at 0.6 mg/ear, some extracts from roots were effective in inhibiting the effects of the anticholinesterase enzyme and the formation of ear edema. The phytochemical investigation of some active extracts from roots resulted in the isolation of three phytosteroids (sitosterol, stigmasterol and sitostenone), a diterpene (2β,3α-dihydroxy-11-oxo-ros-5-ene), two triterpenes (2β,3α-dihydroxy-11,16-dioxo- 5-ene-octanor-cucurbitacin and 23,24-diidrocucurbitacin F 25-acetate) and five 4-phenylcoumarin derivatives [5,7,8-trimethoxy-4-(3,4-dihydroxyphenyl)coumarin, 5-hydroxy-7-methoxy-4-(p-hydroxyphenyl)-coumarin, 5,7,8-trimethoxy-4-(p-methoxyphenyl)coumarin, 5,7-dimethoxy-4-(3-hydroxy-4-methoxyphenyl)coumarin,and 5,7-dimethoxy-4-(p-methoxyphenyl) coumarin]. These compounds had their structures elucidated based on their NMR spectral data and by comparison with literature data. Among isolated compounds, 2β,3α-dihydroxy-11,16-dioxo-5-ene-octanorcucurbitacin and 2β,3α-dihydroxy-11-oxo-ros-5-ene are being reported for the first time; 5-hydroxy-7-methoxy-4-(p-hydroxyphenyl)coumarin are being described for the first time as natural product and 5,7,8-trimethoxy-4-(3,4-dihydroxy-phenyl)coumarin occur for the first time in the Coutarea genus. In the anti-inflammatory assays, 5,7-dimethoxy-4-(pmethoxyphenyl) coumarin, 5-hydroxy-7-methoxy-4-(p-hydroxyphenyl) coumarin, 5,7-dimethoxy-4-(3-hydroxy-4-methoxy-phenyl)coumarin and 23,24-dihydro-cucurbitacin F 25-acetate, at 0.6 mg/ear, inhibited the edema by 35, 67, 19 and 30%, respectively. In the DPPH assays, 5-hydroxy-7-methoxy-4-(p-hydroxyphenyl)coumarin (43.70 0.21 μg/mL) and 5,7,8-trimethoxy- 4-(3,4-dihydroxyphenyl)coumarin (20.85 0.53 μg/mL) free scavenger radical with IC50 values comparable to ascorbic acid and gallic acid, respectively. In the anticholinesterase assays, 2β,3α-dihydroxy-11-oxo-ros-5-ene showed inhibition of this enzyme. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior O presente trabalho descreve o isolamento e a elucidação estrutural de alguns constituintes químicos, bem como das atividades antioxidante, anticolinesterásica e antiinflamatória cutânea de extratos das raízes, folhas e cascas do caule de Coutarea hexandra (Jacq.) K. Schum. (Rubiaceae), bem como de algumas das substâncias isoladas. Nos ensaios para avaliar atividade antioxidante, extratos das raízes e folhas forneceram os melhores resultados e alguns dos extratos das raízes foram eficazes em inibir o efeito da enzima acetilcolinesterase e a formação do edema de orelha induzido pelo óleo de cróton, na concentração de 0,6 mg/orelha. A investigação fitoquímica efetuada com extratos das raízes resultou na obtenção de três fitoesteróides (sitosterol, estigmasterol e sitostenona), dois triterpenos (2β,3α-dihidroxi-11,16-dioxo-5-eno-octanorcucurbitacina e 25-acetato da 23,24-diidrocucurbitacina F), um diterpeno (2β,3α-diidroxi-11-oxo-ros-5-eno) e cinco derivados 4-fenilcumarínicos [5-hidroxi-7-metoxi-4-(p-hidroxifenil)cumarina, 5,7,8-trimetoxi-4-(pmetoxifenil) cumarina, 5,7-dimetoxi-4-(3-hidroxi-4-metoxifenil)cumarina, 5,7-dimetoxi-4-(pmetoxifenil) cumarina e 5,7,8-trimetoxi-4-(3,4-dihidroxifenil) cumarina]. Estes compostos tiveram suas estruturas elucidadas com base na análise dos dados de RMN e pela comparação com dados da literatura. Dentre as substâncias isoladas, o triterpeno 2β,3α-diidroxi-11,16-dioxo-5-eno-octanorcucurbitacina e o diterpeno 2β,3α-diidroxi-11-oxo-ros-5-eno estão sendo relatados pela primeira vez; a 5-hidroxi-7-metoxi-4-(p-hidroxifenil)cumarina está sendo descrita pela primeira vez como produto natural e a 5,7,8-trimetoxi-4-(3,4-diidroxifenil) cumarina ocorre pela primeira vez no gênero Coutarea. Nos ensaios antiinflamatórios, as substâncias 5,7-dimetoxi-4-(p-metoxifenil)cumarina, 5-hidroxi-7-metoxi-4-(p-hidroxifenil)cumarina e 25-acetato de 23,24-diidrocucurbitacina F inibiram o edema por cerca de 35, 67 e 30%, respectivamente. Nos ensaios frente ao DPPH, tanto a 5-hidroxi-7-metoxi-4-(p-hidroxifenil)cumarina (43,70 0,21 μg/mL) quanto a 5,7,8-trimetoxi-4-(3,4-diidroxifenil)cumarina (20,85 0,53 μg/mL) seqüestraram radicais livres com valores de CI50 comparáveis aos do ácido ascórbico e do ácido gálico, respectivamente. Nos ensaios anticolinesterásicos, o diterpeno 2β,3α-diidroxi-11-oxo-ros-5-eno inibiu a ação da enzima acetilcolinesterase.