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Additional file 1: Table S1. Effects of two levels (A and B) of chitinase-containing culture supernatants (CCS) of strain TC -1 on death rates of Spodoptera exigua larvae. Table S2. A broad-spectrum screening assay of primary chitinase with the highest chitinolytic activity in the culture supernatant of the strain TC-1 by isoelectric precipitation. Table S3. A narrow-spectrum screening assay of primary chitinase with the highest chitinolytic activity in the culture supernatant of the strain TC-1 by isoelectric precipitation. Table S4. Toxicity of the pH 6.7-precipitated crude chitinase from the culture supernatant of strain TC-1 against the second- and third-instar larvae of Spodoptera exigua1. Table S5. Factors and levels of response surface design for optimization of chitinase production conditions of strain TC-1. Table S6. Credibility analysis of the regression model. Figure S1. The standard curve of N-acetylglucosamine.

Additional file 1.

Additional file 1: Figure S1. PVX-mediated recombinant GFP expression in N. benthamiana. Detection of green fluorescence in epidermal cells of systemically uninoculated leaves from PVX.GFP-agroinfected plants by CLSM, 21 d.p.ai. (+30). Systemically uninoculated leaves from plants challenged with PVX.PxSDF2L1 were used as the negative control. Figure S2. PCR to detect the PVX DNA vector. PCR products after 40 cycles with specific primers (5’-gaaacctcctcggattccat-3’; 5’-tctccaaatgaaatgaacttcc-3’) for a 312-bp fragment in the 35S promoter of cauliflower mosaic virus (p35S) in PVX-based binary vectors (PVX.PxSDF2L1 or PVX.GFP) on DNase I-digested total RNA (1 μg) isolated from the root of PVX.PxSDF2L1-agroinfected plants (lane 1-6); (+) Agrobacterium tumefaciens strain GV3101 cells carrying the PVX.PxSDF2L1 vector. M, 1 kb DNA ladder.

Additional file 2: Table S1. Summary of all the analyzed SuperSAGE libraries.

The red palm weevil Rhynchophorus ferrugineus (RPW) is an invasive species native to southeast Asia. This weevil is a pest of the Arecaceae palm tree family and is mainly considered the pest of Phoenix canariensis. It has a significant economic and ecological impact on agricultural production and urban environments due to the costs of pest and damaged plant management. Various mite species have been described, mainly as being phoretic, and fungi, mainly as opportunistic saprophytes, in association with the RPW. Mite diversity of these populations has not yet been described in Portugal, as well as the nature of their interaction with the host. The aim of this work is to describe populations of RPW in northern Portugal, to identify associated mites and fungi in order to explore the nature of their interactions with the RPW and to, finally, discuss their potential as biocontrol agents. We placed traps in the districts of Aveiro, Porto, Viana do Castelo and Braga from July 2021 to January 2022. Weevils were dissected and each body part inspected for mites or fungi. Body length, body weight and sex were noted, and thoracic patterns photographed. DNA extractions of mite and fungal samples were made in order to complement morphological identification. Activity of adult RPW in this region was essentially constant during the sampling period. We identified 2 species, 4 genera and one order of mites, all previously described in association with the RPW. The number of weevils collected in traps and the mite load per weevil was higher during the warmer months. Mite species diversity, mite load per host and mite species abundance were high, indicating a good adaptation of these species to studied habitats. The weevil’s elytral area was associated with the highest mite load, suggesting the possibility of it hindering flight capacity, indicating a parasitic interaction with the host, in particular with high mite load. Five species of fungi were identified, where one, Scopulariopsis sp., is for the first time described in the RPW. Identified fungi have pathogenic potential for humans and agricultural crops, indicating the need for RPW control that goes beyond the need for palm tree preservation. This work provides the first description of mites associated with the RPW in Portugal, revealing a significant presence of this pest, and is the first exploring the interspecific relationships between mites and the RPW in these populations. It reveals a further need for its control. Identified mites could have potential as biocontrol agents, a capacity that should be explored and confirmed in further studies. O escaravelho vermelho das palmeiras Rhynchophorus ferrugineus (RPW) é uma espécie invasora nativa do sudoeste asiático. É considerado uma peste significativa das palmeiras da família Arecaceae, principalmente da palmeira das canárias Phoenix canariensis. O seu efeito é considerável, tendo impactos económicos na produção agrícola e em meios urbanos por despesas de manutenção da peste e de plantas afetadas. Foram descritas várias espécies de ácaros, maioritariamente como foréticas, e fungos, saprófitos oportunistas, associadas a este escaravelho. Esta diversidade de ácaros ainda não foi registada em Portugal, bem como a natureza da interação destes com o hospedeiro. O objetivo deste trabalho é fazer um reconhecimento de populações deste escaravelho presentes na região norte de Portugal, identificar os ácaros e fungos associados, de forma a explorar a natureza das suas interações com o escaravelho, e finalmente discutir o seu potencial como agentes de biocontrolo. Colocamos armadilhas nos distritos de Aveiro, Porto, Viana do Castelo e Braga entre os meses de julho 2021 e janeiro 2022. Os escaravelhos foram dissecados e as partes do corpo inspecionadas para observação de ácaros ou fungos. Foram anotados o comprimento do corpo, peso, sexo e foi fotografado o padrão torácico. Extrações de DNA de ácaros e fungos foram feitas para identificação molecular, para complementar a identificação morfológica. A atividade de escaravelhos adultos nesta região foi praticamente constante em todo o período amostrado. Foram identificadas 2 espécies, 4 géneros e uma ordem de ácaros, todos já previamente associadas ao RPW. Verificou-se um pico de amostragem de escaravelhos e de número de ácaros nos meses mais quentes. A diversidade de espécies de ácaros, o número de ácaros por hospedeiro e a abundância de ácaros foram elevadas, indicando uma boa adaptação destas espécies aos habitats amostrados. A zona dos élitros do escaravelho foi a mais ocupada, apontando para a possibilidade de afetar a capacidade de voo do hospedeiro, sugerindo uma relação de parasitismo, em especial quando o número de ácaros for elevado. Foram identificadas cinco espécies de fungos em que uma, Scopulariopsis sp., é pela primeira vez associada ao RPW. Os fungos identificados apresentam potencial para serem patogénicos para humanos e plantas agrícolas, o que sugere uma necessidade de controlo do RPW que se estende além da necessidade de preservação das palmeiras. Este trabalho é a primeira documentação de espécies de ácaros associadas ao RPW em Portugal, é o primeiro que explora as relações interespecíficas entre ácaros e escaravelho nestas populações, e revela uma presença significativa desta peste, e uma necessidade acrescida do seu controlo. Os ácaros identificados podem ter potencial como agentes de biocontrolo, capacidade essa que deverá ser explorada e confirmada em trabalhos futuros. Mestrado em Biologia Aplicada