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A caracterização molecular e morfofisiológica de 28 isolados de Metarhizium ssp. foi avaliada por análises de seqüências do espaçador transcrito interno (ITS1 e ITS2), presença de elementos dsRNA e taxa de crescimento e esporulação em diferentes temperaturas e pH. A patogenicidade de 19 isolados do fungo entomopatogênico Metarhizium ssp. foi avaliada para fêmeas ingurgitadas do carrapato Boophilus microplus. As alterações cronológicas durante o processo de infecção Metarhizium anisopliae isolado E6 em B. microplus foi avaliada em detalhe por microscopia óptica e eletrônica de varredura e transmissão. O seqüenciamento do espaçador transcrito interno confirmou a identidade taxonômica dos isolados avaliados como M. anisopliae var. anisopliae ou M. anisopliae var. majus e mostrou que dois isolados (CG291 e CG423), previamente classificados como Metarhizium flavoviride, são pertencentes a M. anisopliae var. anisopliae. Os testes sobre a influência da temperatura e pH no desenvolvimento e esporulação dos isolados evidenciaram que a melhor temperatura de crescimento para a maioria desses foi 28oC e que o crescimento foi ótimo na faixa de pH entre 4 a 9. Os bioensaios mostraram que três isolados (C14, CG47 e CG97) foram altamente patogênicos para fêmeas ingurgitadas de B. microplus sendo tão virulentos quanto o isolado E6, previamente analisado, causando cerca de 90-100% de mortalidade ao 4o dia de infecção. Outros isolados foram menos virulentos ou não mostraram virulência para o carrapato. A presença de dsRNA foi avaliada em 28 isolados e detectada em 21 isolados. Vários padrões de dsRNA foram observados baseados no tamanho molecular analisado por eletroforese em gel de agarose. Nenhuma correlação foi observada entre a presença de dsRNA e a virulência do fungo. As observações microscópicas evidenciaram que o fungo M. anisopliae isolado E6 invade seu hospedeiro por penetração direta da cutícula, sendo que este processo envolveu as etapas de adesão e germinação dos conídios, formação do apressório e penetração do fungo na cutícula do hospedeiro. A adesão e germinação dos conídios na superfície da cutícula se iniciou após 24 h de infecção. Neste mesmo tempo, ocorreu diferenciação do apressório, estrutura que exerce a pressão mecânica durante o processo de penetração, sendo que este processo é facilitado pela ação de enzimas hidrolíticas secretadas pelo fungo. A penetração de algumas hifas ocorreu até 24 h após a infecção do fungo, embora, neste mesmo tempo de infecção, a maioria dos conídios ainda estivesse em processo de germinação. A penetração em massa do fungo foi observada 72 h após a infecção e, após 96 h, as hifas emergiram na superfície da cutícula para originarem novos conídios e assegurarem a perpetuação do fungo. A intensa invasão das hifas nos tecidos adjacentes confirmou a eficácia do isolado E6 na infecção do carrapato B. microplus.

O efeito do extrato bruto etanólico da casca do caule da Magonia pubescens foi analisado no tubo digestivo de larvas de terceiro estádio do Aedes aegypti. Diferentes tempos de exposição (2, 4, 6, 8, 10, 12 e 13 horas) foram utilizados com a finalidade de verificar, de forma progressiva, as alterações morfológicas. Os efeitos tóxicos do e.b.e. foram evidenciados, principalmente, ao nível do mesêntero, iniciando-se na região anterior e, estendendo-se para a região posterior. As principais alterações observadas incluíram, destruição total ou parcial das células, alta vacuolização citoplasmática, aumento do espaço subperitrófico, hipertrofia das células e, aparente estratificação epitelial. Essas alterações iniciaram-se após 4 horas de tratamento, sendo que, diferentes graus de destruição foram observados de acordo com o aumento do tempo de exposição ao e.b.e. e com a parte do mesêntero analisado. Este trabalho evidencia o mecanismo de ação do e.b.e. da M. pubescens, ampliando o seu potencial de utilização no controle do A. aegypti. Crude ethanol extracted from Magonia pubescens trunks was utilized to prove its effect in the intestinal tract of Aedes aegypti 3rd instar larvae. Exposure times (2, 4, 6, 8, 10, 12, and 13 hours) were tested to verify when the morphological alterations begin to occur, in the intestinal tract of the larvae. The toxic effect of the extract was mainly in the midgut, beginning at the anterior midgut and followed through to posterior midgut. The main alterations observed were partial or total cell destruction, high citoplasmatic vacuolization, increase of subperitrophic space, cell hypertrophy and the epithelium did not maintain its monolayer appearance. The alterations began after four hours of exposure to M. pubescens extract. Observations of tissue sections from larvae treated for different lengths of time revealed a wide variation in the degree of damage between exposure periods and midgut larvae region. The present study provides evidence regarding the mode of action of the M. pubescens extract and suggests its potential utilization as a larvicide to control Aedes aegypti mosquito.

Rhipicephalus microplus (Canestrini, 1888) é um importante ectoparasito na criação de bovinos em regiões tropicais, subtropicais e temperadas no mundo. Esse carrapato atua na transmissão de patógenos, levando a quadros patológico em bovinos, e diminuindo a produtividade na bovinocultura de corte e de leite. Como o carrapato R. microplus possui importância médico veterinária, elevando os custos de produção de bovinos, torna-se importante a realização de controle, que é atualmente realizado quase que exclusivamente com a utilização de carrapaticidas organossintéticos. Atualmente, existem formulações comerciais disponíveis para controle de R. microplus com base na associação dos princípios ativos, fipronil e fluazuron, que tem sido amplamente utilizada. Contudo, não existem informações a respeito das alterações histológicas dessas moléculas sobre esse carrapato, e tais estudos permitirão melhor compreensão do mecanismo de ação e toxicidade desses ingredientes ativos em diferentes órgãos. Assim, o objetivo desse estudo foi avaliar o potencial efeito na biologia reprodutiva e histológico de uma formulação comercial, contendo fipronil e fluazuron em ovários de fêmeas ingurgitadas de R. microplus. Para a realização do estudo, três bezerros foram infestados com aproximadamente 5.000 larvas nos dias -24, -21, -19, -17, -14, -12, -10, -7, -5 e -3, considerando o dia 0, o dia do tratamento. O tratamento consistiu na aplicação da formulação carrapaticida comercial contendo fipronil (1,25 %) e fluazuron (2,5%) (Tick Gard®- MSD Saúde Animal). Antes da aplicação da formulação carrapaticida, foram recuperadas 20 fêmeas ingurgitadas, naturalmente desprendidas dos bovinos, para formação do grupo controle. Após a aplicação da formulação comercial, foram coletadas fêmeas ingurgitadas naturalmente desprendidas dos animais nos dias +5, +10 e +20 para acompanhamento da biologia reprodutiva e +4, +12 e +20 para avaliação da histologia dos ovários. As fêmeas coletadas para acompanhamento da biologia reprodutiva foram mantidas em câmara climatizada para oviposição, posteriormente, incubação desses ovos, enquanto as fêmeas utilizadas para as análises histológicas foram mantidas em câmara climatizada por 4 dias e após esse período, foram dissecadas. Na avaliação da biologia reprodutiva, foi observado que as fêmeas provenientes dos grupos tratados produziram uma menor quantidade de ovos (p

As espécies da ordem Odonata estão distribuídas em diversos tipos de corpos d’água, estando presentes em riachos, lagos e tanques. Várias delas são encontradas em tanques de fazendas de piscicultura, que proporcionam um excelente habitat secundário para o desenvolvimento das espécies. No entanto, as larvas geram diversos prejuízos aos piscicultores, e a principal razão disso é devido a predação dos alevinos pelas larvas de Odonata que habitam os tanques. Durante o período de transição de uma atividade a outra, os piscicultores esvaziam os tanques no intuito de eliminar possíveis doenças e predadores, entre eles, as larvas de Odonata. Logo após o re-enchimento dos tanques, têm se observado que os ovos de Odonata se desenvolvem rapidamente, nos levando à formular a hipótese de que as espécies passaram por uma pressão seletiva que levou a evolução ovos mais resistentes à dessecação. Nós iremos, então, testar o efeito da 2 dessecação experimentalmente em laborátório nos ovos de duas espécies de Odonata neotropicais: Micrathyria hesperis e Perithemis mooma. As taxas de eficiência de eclosão mostram que ambas espécies deste estudo não sofrem efeito da ausência de água sobre a eclosão das larvas. Esse resultado suporta a hipótese que os ovos das espécies de Odonata que habitam ambientes aquáticos temporários apresentam traços adaptativos que maximizam a sobrevivência dos imaturos nos ambientes efêmeros. As espécies Micrathyria hesperis e Perithemis mooma são distantes filogeneticamente, indicando que a resistência à dessecação pode estar distribuída na Ordem Odonata. The Odonata species are distributed along with all kinds of water bodies, being present in streams, lakes, and ponds. Many of them can be found found in fish farming ponds, which provide excellent secondary habitats for species development. However, the larvae provide economic losses to the fish farmers, and the major reason is due to immature fish predation by the Odonata larvae which habit the ponds. During the ponds transition from an activity to another, the fish farmers drain out the ponds, aiming the elimination of pathogens and among them, the Odonata larvae. After the ponds refill, it has been observed in previous studies that the Odonata eggs develop rapidly, leading us to formulate the hypothesis which the species had gone through a selective pressure, which led to the evolution of more resistant eggs to desiccation. We will then, experimentally test the effect of the desiccation in the laboratory studying two neotropical Odonata species: Micrathyria hesperis (Ris 1911) and Perithemis mooma (Kirby, 1889). The hatch efficiencies showed that both species of this study do not suffer the effect of the water absence upon the larvae hatching. This result upholds the 3 hypothesis that eggs from Odonata species in which habitat temporary water bodies exhibit adaptive traits that maximize de immature survival in ephemerous environments. The species Micrathyria hesperis and Perithemis mooma are phylogenetically distant, indicating the desiccation resistance could be distributed among the Odonata. Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás

Microrganismos são agentes de controle biológico, dentre eles, destacam-se os fungos entomopatogênicos. Tolypocladium cylindrosporum IP419 e IP425, Lecanicillium psalliotae IP456, IP491 e IP492 foram isolados de larvas sentinela. Conidiobolus macrosporus IP396 e L. psalliotae IP455 isolados de culicíneos adultos. Em 5 e 15 dias, dependendo do fungo, conídios foram raspados de placas com cultura esporulada e ajustados em suspensões. Em ovos (30 ovos/repetição), foram aplicados 50 μL de suspensão dos isolados IP419, IP425, IP455, IP456, IP491 e IP492 em cinco concentrações (3,3 × 103 a 3,3 × 105 conídios/cm2). Para IP396, aplicou-se 2,5 × 104 conídios/cm2. Em testes com larvas (10 L3/repetição), cinco concentrações foram aplicadas (3,3 × 105 a 3,3 × 107 conídios/ml) para IP419, IP425, IP455, IP456, IP491 e IP492, e (103 a 105 conídios/ml) para IP396. Os controles foram tratados com água destilada. Adultos foram expostos a cinco concentrações (3,3 × 104 a 3,3 × 106 conídios/cm2) de conídios de IP419 e IP425. Para IP396 e IP455, IP456, IP491 e IP492, adultos foram expostos à cultura esporulada. Adultos controle não foram expostos aos fungos. Foram expostos 10 adultos, em 4 repetições. Não houve atividade significante dos isolados testados contra ovos. A mortalidade de larvas tratadas com T. cylindrosporum, foi ≤ 90% na menor concentração (3,3 × 105 conídios/ml) e 100% na maior concentração (3,3 × 107 conídios/ml). A CL50 e CL90 foi de 3.5 × 104 conídios/ml e 6.8 × 106 conídios/ml para IP419 e de 5.9 × 105 e 1.3 × 107 conídios/ml para IP425. O TL50 e TL90 para IP419, na maior concentração (3 × 107 conídios/ml) foi ≤ 7 horas. As concentrações aplicadas tiveram efeito significativo (P < 0,001). Em larvas tratadas com IP396, a mortalidade de L3 aumentou com a concentração de conídios, na maior concentração (105 conídios/ml), foi ≤ 57% em 48 h. Não houve crescimento do fungo sobre L3 expostas em meio ágar para IP396, para T. cylindrosporum o desenvolvimento fúngico foi ≤ 70%. A mortalidade de larvas nos controles foi ≤ 15%. L. psalliotae não teve atividade larvicida. A mortalidade de adultos tratados com T. cylindrosporum foi ≤ 75%. Houve desenvolvimento fúngico sobre cadáveres ≤ 65%, as concentrações aplicadas tiveram efeito significativo (P < 0,001). A mortalidade acumulada de adultos tratados com IP396 chegou a 100% após 5 dias, e ≥ 80% em dez dias para L. psalliotae. Os resultados mostram que T. cylindrosporum e C. macrosporus têm potencial para controle integrado de larvas e adultos de A. aegypti. Microorganisms are agents of biological control, among them, the entomopathogenic fungi stand out. Tolypocladium cylindrosporum IP419 and IP425, Lecanicillium psalliotae IP456, IP491 and IP492 were isolated from sentinel larvae. Conidiobolus macrosporus IP396 and L. psalliotae IP455 isolated from adult culicíneos. At 5 and 15 days, depending on the fungus, conidia were scraped from sporulated culture plates and adjusted in suspensions. In 30 eggs/ replicate, 50 μL of suspension of the isolates IP419, IP425, IP455, IP456, IP491 and IP492 were applied in five concentrations (3.3 × 103 to 3.3 × 105 conidia/cm2). For IP 396, 2.5 × 104 conidia/cm2 was applied. In experiments with larvae (10 L3/repeat), five concentrations were applied (3.3 × 105 to 3.3 × 107 conidia/ml) for IP419, IP425, IP455, IP456, IP491 and IP492, and (103 to 105 conidia/ ml) for IP396. The controls were treated with distilled water. Adults were exposed to five concentrations (3.3 × 104 to 3.3 × 106 conidia/cm2) of conidia of IP419 and IP425. For IP396 and IP455, IP456, IP491 and IP492, adults were exposed to the sporulated culture. Adult controls were not exposed to fungi. Ten adults were exposed in 4 replicates. There was no significant activity of the isolates tested against eggs. Mortality of larvae treated with T. cylindrosporum was ≤ 90% at the lowest concentration (3.3 × 105 conidia/ml) and 100% at the highest concentration (3.3 × 107 conidia/ml). The LC50 and LC90 were 3.5 × 104 conidia/ml and 6.8 × 106 conidia/ml for IP419 and 5.9 × 105 and 1.3 × 107 conidia/ml for IP425. The TL50 and TL90 for IP419 at the highest concentration (3 × 107 conidia/ml) was ≤ 7 hours. The concentrations applied had a significant effect (P

O presente estudo comparou conídios e blastosporos de Metarhizium anisopliae s.l. (IP 363), Metarhizium robertsii (IP 146) e Beauveria bassiana s.l. (IP 361 e CG 307) quanto a virulência para Rhipicephalus microplus, e quanto a tolerância ao calor e a radiação UV-B; foi avaliado ainda o desenvolvimento de conídios e blastosporos dos isolados IP 146 e IP 361 na cutícula de carrapatos por meio da microscopia eletrônica de varredura (MEV). Larvas e fêmeas ingurgitadas de R. microplus foram tratadas (larvas: 106, 107 ou 108 propágulos/mL; fêmeas: 107 propágulos/mL) por imersão, com conídios e blastosporos dos isolados avaliados. Maior percentual de mortalidade foi obtido nos grupos de larvas tratadas com conídios de IP 361, o qual obteve menor CL50. No bioensaio com fêmeas, blastosporos de IP 146 e IP 361 proporcionaram percentual de controle superior a 90%, enquanto que conídios dos mesmos isolados promoveram mortalidade de 70,97% e 63,29%, respectivamente. Para análise do desenvolvimento dos propágulos na cutícula de fêmeas ingurgitadas, essas foram tratadas topicamente com 50 µL de suspensão fúngica (107 propágulos/mL), incubadas em diferentes tempos de 0 a 96 horas; após cada tempo de incubação as fêmeas foram processadas e analisadas por MEV. Blastosporos de ambos isolados iniciaram seu desenvolvimento já após 4 horas de tratamento, demonstrando rápido desenvolvimento e sugerindo penetração por aberturas naturais do carrapato; com 4 horas de incubação foi possível ver a penetração de blastosporos de IP 361 através da cutícula, situação não evidenciada pelo isolado IP 146 em nenhum tempo avaliado. Nos testes de tolerância ao calor, o isolado de Metarhizium acridum (ARSEF 324) foi inserido como isolado padrão, por ser conhecida a sua tolerância. Suspensões fúngicas (103 propágulos/mL) foram expostas ao calor (45°C) por diferentes tempos, em seguida inoculadas em placas de Petri com meio BDAY acrescido de cloranfenicol (0,055% v/v) e incubadas por 7 dias a 27°C, e UR ≥ 80%. Conídios de ARSEF 324 (79,1%) demonstraram ser mais tolerantes ao calor do que conídios de IP 363 (55,5%), IP 146 (1,5%), CG 307 (0%) e IP 361 (0%) no tempo de 2 horas de exposição, assim como blastosporos no tempo de 60 minutos, demonstrando percentual relativo médio de 100%, 12,3%, 30,7%, 55% e 0%, respectivamente. Nos testes de exposição à UV-B, suspensões fúngicas (103 propágulos/mL) foram inoculadas em placas de Petri contendo BDAY e expostas a diferentes doses de radiação; após tratamento, as placas foram incubadas por 7 dias a 27°C, e UR ≥ 80%. Não houve diferença do percentual relativo médio de conídios e blastosporos expostos a mesma dose de radiação. Adjuvantes adequados que visem proteger os propágulos fúngicos contra fatores abióticos estressantes são requeridos para formulações de conídios e blastosporos; no entanto, a seleção de isolados naturalmente mais tolerantes ao calor e a radiação UV-B podem favorecer o desenvolvimento de bioprodutos. Nesse sentido, acredita-se que blastosporos sejam promissores para o biocontrole de carrapatos, já que estes se demonstraram virulentos para R. microplus, além de apresentarem rápido desenvolvimento sobre a cutícula desse artrópode, o que pode indicar menor tempo de exposição desses propágulos a fatores abióticos limitantes no ambiente. The current study compared the virulence of conidia and blastospores of Metarhizium anisopliae s.l. (IP 363), Metarhizium robertsii (IP 146) and Beauveria bassiana s.l. (IP 361 and GC 307) against Rhipicephalus microplus, and the tolerance to heat and UV-B radiation; in addition, it evaluated the development of conidia and blastospores of the isolates IP 146 and IP 361 on the tick cuticle by scanning electron microscopy (SEM). Larvae and engorged females of R. microplus were treated (larvae: 106, 107 or 108 propagules/mL, females: 107 propagules/mL) by immersion in conidia or blastospores suspensions of tested isolates. The higher percentage of larval mortality was obtained in the group treated with conidia of IP 361, which had lower LC50. In bioassays with engorged females, IP 146 and IP 361 blastospores, provided tick percent control superior to 90%, while conidia of the same isolates, promoted 70.97% and 63.29% of tick control, respectively. Ticks were treated topically with 50 μL of fungal suspension (107 propagules/mL) and incubated at different times from 0 to 96 hours to analyze its development on the engorged females cuticle; after each incubation time, the females were fixed and analyzed by SEM. Blastospores of both isolates have started development 4 hours after treatment, demonstrating rapid development and suggesting penetration by the tick natural openings; at 4 hours incubation, indicative of penetration of IP 361 blastospores through the cuticle was observed, but no signs of penetration was observed with IP 146 blastospores at any time evaluated. Furthermore, fungal suspensions (103 propagules/mL) were exposed to heat (45 °C) for several time periods, then inoculated in Petri plates with BDAY medium plus chloramphenicol (0.055% v/v), and incubated for 7 days at 27 °C and RH ≥ 80%. ARSEF 324 conidia (79.1%) were more tolerant to heat than conidia of IP 363 (55.5%), IP 146 (1.5%), GC 307 (0%), and IP 361 (0% ) at 2 hours exposure, as well as blastospores after 60 minutes exposure, demonstrating mean percent CFU of 100%, 12.3%, 30.7%, 55% and 0%, respectively. Fungal suspensions (103 propagules/mL) were also inoculated on BDAY in Petri plates, and exposed to UV-B radiation; after treatment, plates were incubated for 7 days at 27 °C and RH ≥ 80%. No difference in mean relative percent CFU between conidia and blastospores was observed. Suitable adjuvants which aim at protecting fungal propagules against stressful abiotic factors are required for conidia and blastospores; however, the selection of isolates with marked natural tolerance to heat and UV-B radiation may increase performance of bioproducts. Accordingly, it is suggested that blastospores are promising fungal propagules for biological control of ticks, since they were virulent against R. microplus; in addition, the rapid development of blastospores on the tick cuticle indicates they may be exposed shortly to harmful environmental abiotic factors. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Aedes aegypti é o principal vetor do dengue e das febres chikungunya e zika. Até o momento, devido à inexistência de medidas terapêuticas e profiláticas específicas, a principal forma de prevenção dessas arboviroses é o controle do vetor. Esse controle é realizado principalmente com aplicação de inseticidas, porém o uso contínuo dessas substâncias favoreceu o aparecimento de populações resistentes, tornando necessário o desenvolvimento de estratégias alternativas para o controle vetorial. Um exemplo é a pesquisa de substâncias vegetais que possam interferir no desenvolvimento do mosquito. Nesse sentido, as plantas do Cerrado podem ser um caminho promissor. Este trabalho investigou a atividade inseticida do líquido da castanha de caju (LCC) extraído da espécie Anacardium humile, planta nativa do Cerrado. Frutos de A. humile foram coletados e mantidos em estufa de ventilação forçada a 40ºC por sete dias para a extração do LCC. Foram realizados testes de mortalidade de larvas de terceiro estádio (L3), pupa e adulto. Além disso, observou-se o comportamento de oviposição das fêmeas, viabilidade dos ovos e o efeito residual da solução sobre L3. O LCC foi diluído em concentrações gradativas decrescentes de 1000 a 3ppm, para obtenção das concentrações letais (CL). Na oviposição foi empregada a CL99 para larvas. Os testes de efeito residual e oviposição se deram em duas etapas, um teste-piloto a 100ppm e um teste com a CL99. Obtiveram-se as CL50 e CL90 respectivamente, 6,63 e 11,23ppm para larvas; 276 e 728,62ppm para pupas. Não foi observada a mortalidade em adultos. O efeito residual da solução foi de sete dias no teste piloto e cinco dias na CL99. No teste piloto para oviposição observou-se efeito repelente do LCC sobre as fêmeas havendo redução significativa do número de ovos (p=0,0001 e p=0,0348) e mudança nos padrões de estratificação dos ovos no substrato de oviposição. Contudo, a taxa de eclosão larval dos ovos expostos ao substrato umedecido com LCC foi significativamente menor (p=0,0102) quando comparada ao controle. Os resultados apresentados evidenciam a atividade inseticida do LCC de A. humile, sugerindo-o como produto promissor na pesquisa por novos inseticidas botânicos. Dessa forma, mais estudos devem ser realizados a fim de verificar possível toxicidade do líquido para outros animais. Aedes aegypti is the major vector of dengue, chikungunya and zika fever. Currently, with the lack of specific therapeutic and prophylactic measures, the main way to prevent these arboviruses is vector control. This control is performed mainly with the application of insecticides, but continuous use of these substances favored the emergence of resistant populations, making it necessary to develop alternative strategies for vector control. An example is the survey of vegetable substances which may interfere with the development of the mosquito. In this sense, the Cerrado plants the may be a promising way. In this study, was investigated the insecticidal activity of Cashew Nut Shell Liquid (CNSL) produced by the species Anacardium humile on Aedes aegypti, the dengue vector, Chikungunya and Zika virus. Fruits of A. humile were collected and kept in greenhouse of forced ventilation at 40º Celsius during seven days for the extraction of CNSL. Were performed mortality tests of third instar larvae (L3), pupa and adult, besides the observation of the oviposition behavior of females and viability of eggs and observation of the residual effect of solution. The CNSL was diluted in decreasing gradual concentrations from 1000 to 3ppm, to obtain the Lethal Concentrations (LC). In oviposition the LC99 was used for larvae. The tests of residual effect and oviposition were given in two stages, a pilot test of 100ppm and a test with the LC99. Was obtained LC50 and LC90, respectively, 6.63 and 11.23ppm for larvae; 276 and 728.62ppm for pupae, not being observed mortality in adults. The residual effect of the solution was seven days in the pilot test and five days in the LC99. In the pilot test for oviposition was observed repellent effect of CNSL on females with a significant reduction of eggs number (p = 0.0001 and p=0.0348) and change in standards of stratification of the eggs on oviposition substrate. The larval hatching rate of the eggs exposed to moistened substrate with CNSL was significantly lower (p = 0.0102) when compared to the control. The results presented evidence the insecticidal activity of the CNSL of A. humile, indicating it as a promising product in the research for new botanical insecticides. This way, further studies should be conducted in order to verify possible toxicity of the liquid to other animals. Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG

Triatoma infestans é o vetor principal da doença de Chagas na Argentina, Bolívia e Paraguai. Beauveria bassiana se destaca por ser eficiente contra todos os estágios de vida de T. infestans. A dinâmica da infecção desse fungo em seus hospedeiros ainda não foi muito estudada, e são necessários mais estudos básicos para a elucidação de aspectos dessa interação. O presente estudo caracterizou compostos voláteis orgânicos (CVO) liberados por T. infestans fisicamente perturbados e infectados por B. bassiana através de cromatografia gasosa acoplada à espectrofotometria de massa, e analisou o padrão de expressão de genes envolvidos na produção e liberação desses voláteis (Ti-brnq e Ti-bckdc) em função do progresso da infecção, através de PCR em tempo real. Foi estudado também o padrão de expressão de genes envolvidos na biossíntese de toxinas de B. bassiana (BbtenS, BbbeaS, BbbslS) durante o processo da infecção em ninfas tratadas com conídios ou blastosporos, e de genes envolvidos na resposta imune humoral (TiPPO, TiHL, TiDEF) nas mesmas ninfas. Além disso, foi analisada a influência de conídios de B. bassiana sobre o comportamento de T. infestans. Não foi encontrado efeito claro de repelência de ninfas a conídios. O CVO majoritário encontrado foi o ácido isobutírico, mas houve efeito da infecção somente sobre a produção do ácido propiônico 1–3 dias após o tratamento (a.t.). A expressão de Ti-brnq e Ti-bckdc foi significativamente maior aos 4 dias a.t. que aos 10 dias para as duas concentrações de conídios testadas, com efeito significativo somente para o primeiro gene. Em indivíduos imersos em conídios na maior concentração, a expressão de BbtenS e BbbeaS apresentou um pico 3 e 12 dias a.t., já na menor concentração, o pico de expressão ocorreu aos 9 dias a.t. Em insetos injetados com blastosporos, o pico da expressão desses genes ocorreu 24 h a.t. e em cadáveres expostos a câmara úmida. Para ninfas imersas em suspensão de conídios, foi encontrado efeito significativo do tempo sobre a expressão de TiPPO nas duas concentrações testadas. TiDEF e TiHL tiveram um pico de expressão aos 6 dias a.t. para as duas concentrações testadas. Em ninfas injetadas com blastosporos, a expressão dos três genes de imunidade variou significativamente de acordo com o tempo de infecção somente com a menor dose de blastosporos. Os resultados ressaltaram a importância de esclarecer melhor a dinâmica da infecção de T. infestans com B. bassiana para o desenvolvimento de estratégias de controle biológico desse vetor com fungos entomopatogênicos. Triatoma infestans is the main vector of Chagas disease in Argentina, Bolívia and Paraguai. Beauveria bassiana is effective against all developmental stages of T. infestans. The dynamics of the host infection with B. bassiana has not been well studied yet and more basic research is necessary to elucidate aspects of this interaction. The present study characterized volatile organic compounds (VOC) secreted by T. infestans physically disturbed and infected with B. bassiana employing gas cromatography coupled to mass spectrometry. The expression of genes potentially involved in the biosynthesis of this volatiles (Ti-brnq and Ti-bckdc) was analysed according to the progress of infection with quantitative reverse transcription real-time (qPCR) methodology. The time-related expression of B. bassiana genes envolved in the biosynthesis of fungal toxins (BbtenS, BbbeaS, BbbslS) in nymphs treated with conidia or blastospores was measured, as well as the gene expression levels of insect proteins belonging to the humoral immune response (TiPPO, TiHL, TiDEF) in the same nymphs. Moreover, the influence of conidia on nymphal behavior was analysed. No clear repellent effect of conidia was found. Isobutyric acid was the most abundant VOC found, however, significant effect of the fungal on propionic acid secretion was found 1–3 days after treatment (a.t.). Ti-brnq and Ti-bckdc expression was higher 4 d a.t. than at 10 d a.t. in both conidial concentrations tested, but a significant effect of the time was found only with the first gene. In individuals immersed in the higher conidial concentration the expression of BbtenS and BbbeaS peaked 3 and 12 days a.t. respectively, and 9 days a.t with individuals treated with the lower concentration. In blastospore-injected nymphs, these genes peaked 24 h a.t. and in dead insect exposed in humid chamber. A significant effect of time on the expression of TiPPO in nymphs immersed in both conidial concentrations was found. TiDEF and TiHL peaked 6 days a.t. to both conidial concentration tested. In insects injected with blastospores significant increase in the expression pattern of all genes was found at the lower dose tested. Results emphasized the importance to elucidate better the dynamics of infection of T. infestans with B. bassiana in order to develop biological control estrategies of these vectors with entomopathogenic fungi.

A principal espécie transmissora dos sorotipos do vírus dengue é o Aedes aegypti, o mosquito mais competente e mais adaptado ao ambiente urbano e antrópico. As medidas de controle dessa doença ainda estão prioritariamente sobre o vetor. Recentemente, diversos estudos têm evidenciado o uso de substâncias de origem botânica com potencial inseticida no controle de Ae. aegypti, como alternativa frente à resistência aos inseticidas convencionais. A eficácia do óleo-resina de Copaifera langsdorffii no controle das larvas de Ae. aegypti demonstrada em trabalhos de campo, sinaliza a possibilidade promissora desse composto botânico para o controle desse vetor requerendo estudos que esclareçam o seu mecanismo de ação. Dessa forma, propõe-se demonstrar o mecanismo do processo de mortalidade em larvas de terceiro estádio de Ae. aegypti, através de estudos morfohistológicos. As larvas de Ae. aegypti foram submetidas às soluções de óleo-resina e fração hexânica de C. langsdorffii nas concentrações de 70 ppm e 80 ppm, respectivamente. Posteriormente coletadas nos intervalos de tempo de 6 horas, 12horas e 24horas. Foram fixadas em paraformaldeído a 4% com tampão fosfato de sódio 0,1 M pH 7,2, incluídas em resina, montadas, coradas pela hematoxilina-eosina e analisadas por microscopia de luz. O óleo-resina e fração hexânica de C. langsdorffii, causaram a morte das larvas pela destruição das células da região posterior do mesêntero, por meio de intensa vacuolização citoplasmática, formação de vesícula citoplasmática apical, degeneração do bordo em escova, aumento do volume celular e a dobra na matriz peritrófica. As alterações descritas neste trabalho demonstram como compostos bioativos desencadeiam a degeneração celular e aceleram o rompimento celular. The main transmitter species of serotypes of the dengue virus is Aedes aegypti, the most competent mosquitoes and more adapted to urban and man-made environment. The control measures of this disease are still mainly on the vector. Recently, several studies have shown the use of botanical origin of substances with potential insecticide in control of Ae. aegypti, alternatively opposite resistance to conventional insecticides. The efficacy oleoresin of C. langsdorffii the control of Ae. aegypti demonstrated in field work, signals the promising possibility of this botanical compound to control this vector requiring studies to clarify the mechanism of action. Thus, it is proposed to establish the mechanism of death process in the third stage larvae of Ae. aegypti through morfohistologic studies. The larvae of Ae. aegypti were subjected to oil-resin solutions and hexane fraction C. langsdorffii in concentrations of 70 ppm and 80 ppm, respectively. Subsequently collected in time intervals of 6h, 12h and 24h. They were fixed in 4% paraformaldhyde in 0.1 M sodium phosphate buffer pH 7.2, embedded in resin, mounted, stained with hematoxylin-eosin and analyzed by light microscopy. The oil-resin and hexane fraction C. langsdorffii, caused the death of the larvae by the destruction of the posterior cells of the midgut region through cytoplasmatic vacuolation, apical cytoplasmic vesicle formation, lip brush degeneration, increased cellular volume and fold in peritrophic matrix. The changes described in this paper demonstrate how bioactive compounds can trigger cell degeneration and accelerate cell disruption.

Aedes aegypti é o principal vetor de dengue, da febre amarela urbana e arboviroses emergentes no Brasil, como a febre chikungunya. Esse mosquito encontra-se adaptado ao ambiente urbano, e tem como importante fator para a manutenção de sua espécie, o longo período de quiescência dos ovos, que foi uma extraordinária adaptação fisiológica aos diferentes fatores climáticos. Aproximadamente 2,5 bilhões de pessoas vivem em países endêmicos, expostos à transmissão de dengue. A melhor solução para o controle seria vacinas plurivalentes para os sorotipos existentes. Vacinas tetravalentes estão sendo testadas em vários países, incluindo o Brasil. Recentemente, foi descrito um quinto sorotipo, e isto provavelmente pode ampliar o curso da pesquisa. O controle de dengue, ainda tem sido feito pela intervenção de ações contra o vetor, Ae. aegypti. Dentre as ações, o uso de inseticidas químicos sintéticos tem sido a principal. Porém, com o uso contínuo do mesmo produto, em alguns municípios brasileiros apareceram indícios da modificação da suscetibilidade do mosquito e, posteriormente, a confirmação do status de resistência. Dentre medidas alternativas de controle de Ae. aegypti está a prospecção de compostos naturais inseticidas. Este trabalho propões o estudo do extrato bruto etanólico (e.b.e.) do fruto de Swinglea glutinosa como larvicida e este apresentou CL50 de 74,4 ppm e CL90 de 125,2 ppm para larvas de terceiro estádio de Ae. aegypti, além do efeito de toxicidade em células do intestino dessas larvas, investigados por meio de estudo morfohistológico. As alterações morfológicas que se intensificavam com o aumento do tempo de exposição das larvas ao e.b.e., foram visualizadas principalmente na região posterior do mesêntero, incluía o dobramento da matriz peritrófica, o aumento do espaço subperitrófico, vacuolizações citoplasmáticas, diminuição das microvilosidades das células. O que caracterizou e comprovou o efeito larvicida do e.b.e., demonstrando seu potencial uso para o controle de larvas de Ae. aegypti. Aedes aegypti is the major vector of dengue, urban yellow fever and emerging arboviruses in Brazil, as chikungunya fever. This mosquito is adapted to the urban environment, and is an important factor for the maintenance of its kind, the long period of quiescence of eggs, which was an extraordinary physiological adaptation to different climatic and dietary factors. Approximately 2.5 billion people live in endemic, exposed to dengue transmission countries. The best solution would be to control multivalent vaccines to existing serotypes. Tetravalent vaccines are being tested in several countries, including Brazil. However, recently it described a fifth serotype, and this can probably extend the course of research. So how vaccines are not ready for use, dengue control has been done by the intervention of actions against the vector, Ae. aegypti. Among the actions, the use of synthetic chemical insecticides has been the main, it emerged mosquito susceptibility of modification in many Brazilian cities and later confirmation of resistance status. This paper proposes the search for alternatives, through prospecting of natural compounds insecticides for the control of Ae. aegypti. Among the actions, the use of synthetic chemical insecticides has been the main. However, with the continuous use of the same product in some brazilians municipalities seemed evidence of mosquito susceptibility modification and subsequently confirm the resistance status. Among, measures control alternatives Ae. aegypti is prospecting for natural compounds insecticides. This work proposes the study of crude ethanol extract (c.e.e.) the result of Swinglea glutinous as larvicide and it showed CL50 and CL90 of 74.4 ppm to 125.2 ppm for third instar larvae of Ae. aegypti, besides the toxicity effect on these intestinal cells larvae investigated by morphohistological study. The morphological changes that are intensified with increasing time of exposure to the larvae of c.e.e. were visualized particularly in the posterior region of the midgut, included folding of the peritrophic matrix, increasing subperitrophic space, cytoplasmic vacuolization, reduction of the microvilli cells. What characterized and checked the larvicidal effect of c.e.e. demonstrating its potential use for controlling Ae. aegypti.

O desenvolvimento neonatal é estimulado por diversas interações hormonais. Os poluentes ambientais que mimetizam hormônios esteróides, como o bisfenol-A (BPA), podem causar alterações no padrão de desenvolvimento da próstata, levando a lesões ao longo da vida. O objetivo deste estudo foi verificar se a exposição neonatal ao BPA afeta o desenvolvimento da próstata de gerbilos machos e fêmeas. Para isso, os recém-nascidos foram expostos a níveis ambientais (LBPA – 40 μ/kg/dia) e doses elevadas (HBPA – 4 mg/kg/dia) de BPA, do 1° ao 7º dia de vida. No oitavo dia, os complexos prostáticos foram coletados e processados para as análises morfológica, estereológica e imunohistoquímica. Com a reconstrução tridimensional observamos que nos machos os brotos prostáticos se alongaram em forma de “V” em direção ao mesênquima condensado ventral (VMP). Os dados estereológicos dos machos demonstraram um aumento significativo na frequência relativa do compartimento mesenquimal do grupo LBPA em relação aos demais grupos (p ≤ 0,05). As células AR-positivas tornaram-se significativamente mais frequentes no mesênquima periuretral (PeM), brotos epiteliais ventrais (VB) e camada muscular (SM) dos grupos tratados com BPA. Ocorreu uma redução na frequência de células PCNA-positivas nos brotos periuretrais (PeB) e na SM do grupo LBPA. Em fêmeas, a reconstrução tridimensional demonstrou que os PeBs podem emergir de um ou ambos os lados da uretra e também foi visível uma significativa redução do mesênquima parauretral (PaM) nos grupos tratados com BPA. Apenas as fêmeas do grupo HBPA apresentaram brotos parauretrais (PaB) aparentemente mais desenvolvidos. No grupo LBPA observou-se um aumento na frequência de células AR-positivas no PeM e uma diminuição destas células no PeB e mesênquima parauretral (PaM). No grupo HBPA as células AR-positivas tornaram-se mais frequentes no PeM e PaB, contudo sofreram redução no PeB e PaM. Células PCNA-positivas tornaram-se significativamente menos frequentes no PaB e PaM dos grupos LBPA e HBPA. Em relação às células ER-α positivas, nas fêmeas do grupo LBPA observou-se uma redução das imunomarcações no PeM e SM, enquanto que no grupo HBPA essa redução ocorreu apenas no PaM. Este estudo revelou que o desenvolvimento pós-natal da próstata de fêmeas de gerbilos é mais precoce e morfologicamente distinto do que ocorre nos machos da mesma espécie. Além disso, pode-se observar que o BPA exerceu um efeito antiproliferativo sobre a glândula prostática de machos e fêmeas com oito dias de vida pós-natal, sendo as fêmeas mais susceptíveis a este químico ambiental. The neonatal development is stimulated by various hormonal interactions. Environmental pollutants that mimic steroid hormones, such as bisphenol A (BPA) can cause changes in the pattern of development of the prostate, leading to lifelong lesions. The objective of this study was to determine whether neonatal exposure to BPA affects the development of prostate gerbils males and females. For this, the newborns were exposed to environmental levels (LBPA - 40 μ / kg / day) and high dose (HBPA - 4 mg / kg / day) of BPA, from 1st to the 7th day of life. On the eighth day, the prostatic complexes were collected and processed for morphological analysis, stereological and immunohistochemistry. It was observed through the three-dimensional reconstruction that in males the prostatic buds have elongated in a "V" form towards the ventral condensed mesenchyme (VMP). The stereological data of males showed a significant increase in the relative frequency of the mesenchymal compartment in the LBPA group compared to other groups (p ≤ 0.05). The AR-positive cells became significantly more frequent in the periurethral mesenchyme (PEM), ventral epithelial buds (VB) and muscle layer (SM) in the BPA group. There was a reduction in the frequency of PCNA-positive cells in the periurethral buds (PeB) and in the SM of the LBPA group. In females, the three-dimensional reconstruction showed that PeBs can emerge from one or both sides of the urethra and it was also visible a significant paraurethral mesenchyme (MAP) reduction in the BPA group. Only females of the HBPA group apparently presented paraurethral buds (PAB) more developed. In the LBPA group it was observed an increase in the AR-positive cells frequency in the PeM and a decrease of these cells in the PeB and mesenchyme paraurethral (PaM). In the HBPA group the AR-positive cells were more frequent in the PeM and PaB and reduced in PeB and PaM. PCNA-positive cells became significantly less frequent in the PaB and PaM of LBPA and HBPA groups. Regarding the ER-α positive cells in the group LBPA females showed a reduction in the immunoblots of PeM and MS, whereas in the group HBPA this reduction occurred only in the PaM. This study revealed that the postnatal development of the prostate of female gerbils occurs earlier and are morphologically distinct from what occurs in males of the same species. Furthermore, it can be seen that the BPA exerted a proliferative effect on the prostate gland of males and females with eight days of postnatal life, though females being more susceptible to this environmental chemicals. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

A dengue apresenta impacto na saúde pública das regiões intertropicais do mundo e tem como principal vetor o Aedes aegypti. As medidas mais usadas no controle desse vetor, até o momento, são os inseticidas sintéticos, que aplicados em larga escala durante longo período, fez aparecer resistência. Diante disso, compostos químicos provenientes de plantas podem ser substitutos dos inseticidas sintéticos, com as vantagens do retardamento da resistência, devido à complexidade de seus constituintes, da fácil degradação, da menor toxicidade ao homem e por ser uma alternativa mais segura para o meio ambiente. Ensaios com extrato bruto etanólico (ebe) da casca do caule de Persea americana foram realizados em copos de poliestireno, contendo soluções a 100 ppm do ebe de P. americana, previamente dissolvido em dimetilsulfóxido (DMSO) e água do sistema público de Goiânia. Em cada copo foram colocadas 5 larvas de 3° estádio (L3) do mosquito Aedes aegypti. O estudo das modificações morfohistológicas foi feito a partir de observações realizadas com 4, 8, 12, 16, 20, 24 e 48 h de tratamento com o ebe. Em cada período, as larvas foram coletadas, fixadas, desidratadas, infiltradas e incluídas em historesina. Foram realizados cortes de 3μm de espessura em micrótomo semiautomático, corados pela hematoxilina/eosina (HE), analisados e fotomicrografados em microscópio de luz. Para microscopia eletrônica de varredura (MEV) as larvas tratadas e controle foram fixadas, desidratadas, secas em aparelho de ponto crítico, metalizadas e analisadas em microscópio eletrônico. As modificações morfohistológicas foram observadas a partir de 24h após o tratamento das larvas L3 com ebe de casca de caule de P. americana. As análises dos cortes histológicos do mesêntero de larvas de Ae. aegypti, em microscopia de luz, mostraram a presença de vacúolos no citoplasma das células epiteliais, grande quantidade de secreção e dobramentos da membrana peritrófica nas larvas tratadas por 48h. Houve extrusão de todo conteúdo alimentar juntamente com a matriz peritrófica, sugerindo assim a ação tóxica de P. americana sobre o tubo digestivo das larvas. Essas modificações não ocorreram no grupo controle. Não houve evidência de alterações externas pelo MEV. Dengue has impact on public health of the intertropical regions of the world and its main vector Aedes aegypti. The measures most commonly used to control this vector, so far, are the synthetic insecticides, which applied on a large scale for a long period, did show resistance. Thus, chemical compounds from plants can be substitutes for synthetic insecticides, with the advantages of resistance retardation, due to the complexity of its components, easy degradation, lower toxicity to man and to be a safer alternative to the environment . Assays crude ethanol extract (cee) of Persea americana stem bark were performed in polystyrene cups, solutions containing 100 ppm of P. americana cee, previously dissolved in dimethylsulfoxide (DMSO) and water public Goiânia system. In each glass were placed 5 larvae of 3rd stage (L3) of the mosquito Aedes aegypti. The study was made of morfohistológic modifications from observations made with 4, 8, 12, 16, 20, 24 and 48 h treatment with the cee. In each period, the larvae were collected, fixed, dehydrated, infiltrated and embedded in historesin. of 3μm thick cuts were made in microtome semiautomatic, stained with hematoxylin / eosin (HE), analyzed and photomicrographed under a light microscope. For scanning electron microscopy (MEV) the treated and control larvae were fixed, dehydrated, dried in a critical point apparatus, metallized and analyzed in electron microscope. The morfohistológic changes were observed from 24 hours after treatment of larvae L3 with P. americana stem bark cee. The analysis of histological sections of the midgut of Ae. aegypti in light microscopy showed the presence of vacuoles in the cytoplasm of epithelial cells, large amount of secretion and folding of membrane peritrophic larvae treated for 48 hours. There was extrusion whole food content together with peritrophic matrix, thus suggesting the P.americana. toxic action on the gut of the larvae. These changes did not occur in the control group. There was no evidence of external changes by MEV.

Relatos da resistência do carrapato Rhipicephalus sanguineus a bases químicas utilizadas para controle tem sido comuns. Neste contexto, os fungos entomopatogênicos surgem como uma alternativa ao uso exclusivo do controle químico; entretanto, calor e outros fatores ambientais podem limitar a eficácia dos fungos. Sendo assim, o presente estudo avaliou o efeito do calor sobre a germinação de conídios de Metarhizium anisopliae IP 119 quando suspensos em puro óleo mineral (Impex®) ou em água (Tween 80, 0,01%) e aplicados sobre a cutícula de R. sanguineus (in vivo) ou em meio de cultivo BDAY (in vitro). Em seguida, a resposta dos testes in vivo foi comparada a dos testes in vitro, e bioensaios foram realizados para verificar a virulência do isolado IP 119 para fêmeas ingurgitadas de R. sanguineus. Suspensões conidiais de M. anisopliae em água ou óleo, ajustadas a 108 conídios ml-1, foram expostas a 0 h (controle) ou 4 h a 45 ± 0,5 ºC em banho-maria e, em seguida, inoculadas individualmente na superfície dorsal de fêmeas ingurgitadas de R. sanguineus. Os indivíduos foram incubados a 27 ± 1°C e UR > 80% por 0, 12, 18, 24, 36, 48 ou 72 h. Em paralelo, alíquotas das suspensões conidiais aquosas (controle ou 45ºC) foram inoculadas em placas de Petri contendo meio BDAY. As amostras foram incubadas na mesma temperatura e pelos mesmos períodos de tempo descritos acima. Após cada período de incubação, os carrapatos correspondentes foram fixados e dissecados, retirando-se um fragmento da cutícula dorsal. Cutículas que receberam conídios suspensos em água, e expostos ou não ao calor, foram processadas para microscopia de fluorescência para avaliação da germinação. Cutículas que receberam conídios suspensos em água ou óleo, e expostos ou não ao calor, foram processadas para microscopia eletrônica de varredura para avaliação da germinação. A germinação de conídios em BDAY foi avaliada por microscopia de contraste de fase. Um mínimo de 300 conídios por cutícula ou por placa foi avaliado para calcular o percentual de germinação. Verificou-se que quando conídios foram expostos ao calor, um maior percentual de germinação foi observado em BDAY (61,5%) em comparação com a cutícula do carrapato (13%), 72 h após a inoculação. Apressórios foram observados 36 h após a inoculação, apenas em conídios que não foram expostos ao calor. Na cutícula de R. sanguineus, o percentual de germinação de conídios suspensos em óleo mineral e expostos ao calor foi maior em comparação ao percentual de germinação de conídios suspensos em água, em todos os tempos de incubação investigados. Com 36 h de incubação, a germinação média de conídios suspensos em óleo chegou a 16,3%, enquanto conídios suspensos em água apresentavam 2,2% de germinação. Em contrapartida, nos controles, o percentual de germinação de conídios suspensos em água ou óleo diferiu nos tempos de 48 e 72 h de incubação, onde a germinação sobre a cutícula também foi maior em conídios suspensos em óleo. M. anisopliae quando suspenso em óleo e exposto ou não ao calor apresentou percentual de controle de fêmeas maior que o observado nas suspensões aquosas. Sendo assim, os resultados demonstraram: marcante atraso na germinação dos conídios suspensos em água e expostos a 45 ºC em comparação aos conídios suspensos em óleo mineral; a formulação oleosa de conídios quando exposta ou não ao calor mostrou-se mais efetiva para controle de R. sanguineus. Ainda, conídios suspensos em água germinaram mais rapidamente quando inoculados em BDAY do que quando foram aplicados sobre a cutícula do carrapato. Neste sentido, permite-se inferir que o efeito negativo do calor sobre a germinação de conídios suspensos em água foi maior quando os conídios foram aplicados sobre a cutícula do artrópode do que seria previsto nos testes in vitro, e os conídios sofreram menor interferência do calor quando suspensos em óleo. Portanto, conclui-se que o óleo mineral protege os conídios contra a ação do calor e potencializa a germinação do fungo na cutícula de R. sanguineus. Resistence of the tick Rhipicephalus sanguineus to chemicals is commonly reported. Entomopathogenic fungi emerge as an alternative to the exclusive use of chemical acaricides for tick control; however, heat and other environmental factors may limit the efficacy of fungi. Thus, the current study evaluated the effect of heat on conidial germination of Metarhizium anisopliae IP 119 when suspended in pure mineral oil (Impex®) or in water (Tween 80, 0.01%) and applied to the cuticle of R. sanguineus (in vivo) or in artificial medium PDAY (in vitro). Then, the results obtained with tests in vivo were compared to the results obtained with tests conducted in vitro, and finally, experiments were conducted to verify the virulence of M. anisopliae IP 119 for R. sanguineus engorged females. Conidial suspensions of M. anisopliae in water or oil, adjusted to 108 conidia ml-1, were exposed to 0 (control) or 4 h to 45 ± 0.5 °C in a water bath, and then, individually inoculated onto the dorsal surface of R. sanguineus engorged females. The samples were incubated at 27 ± 1 °C and RH > 80% for 0, 12, 18, 24, 36, 48 or 72 h. In parallel, aliquots of the aqueous conidial suspensions (control or 45 °C) were inoculated onto PDAY medium in Petri plates. The samples were incubated at the same temperature and for the same time periods described above. After each incubation time, ticks were fixed and dissected, i.e., a fragment of the dorsal cuticle was removed. Cuticles that received conidia suspended in water, exposed or not to heat, were processed for fluorescence microscopy for evaluation of conidial germination. Cuticles that received conidia suspended in water or oil, exposed or not to heat, were processed for scanning electron microscopy for evaluation of conidial germination. Conidial germination on PDAY plates was assessed using a phasecontrast microscope. A minimum of 300 conidia per cuticle or plate was evaluated for calculation of percent germination. When conidia were exposed to heat, a high percentage of germination was observed in PDAY medium (61.5%) in comparison to the tick cuticle (13%), 72 h after inoculation. Appressoria were observed 36 h after inoculation, only in conidia that were not exposed to heat. On tick cuticle, the percentage of germination of conidia suspended in mineral oil and exposed to heat was high in comparison to the percentage of germination of conidia suspended in water, at all incubation times investigated. At 36 h of incubation, the mean percentage of germination of conidia suspended in oil reached 16.3%, whereas conidia suspended in water reached only 2.2%. Conversely, in the control groups (ticks treated with conidia not exposed to heat), the percentage of germination of conidia suspended in water or oil differed at 48 and 72 h of incubation, where germination was also high for conidia suspended in oil and inoculated on the tick cuticle. M. anisopliae conidia suspended in oil exposed or not to heat showed control percentage greater than the observed with aqueous suspensions. Thus, the results showed a significant delay in germination for conidia suspended in water and exposed to 45 °C in comparison to conidia suspended in mineral oil; in this sense, the oil formulation of conidia when exposed or not to heat proved to be more effective for controlling R. sanguineus engorged females. Moreover, conidia suspended in water germinated faster when inoculated in PDAY than when they were applied to the tick cuticle. Therefore, the results indicated that the negative effect of heat on conidial germination was more expressive when conidia were suspended in water and applied to the arthropod cuticle than it would be predicted by the in vitro thermotolerance tests. Also, conidia suffered less interference from heat exposures when suspended in oil. In conclusion, mineral oil protects conidia against the heat effects and enhances the fungal germination on the cuticle of R. sanguineus. Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG

Biomphalaria glabrata são caramujos aquáticos e habitam coleções hídricas frequentemente efêmeras. Possuem alta capacidade reprodutiva, e massas ovígeras são postas em substratos submersos nas margens dos criadouros expostas ao ressecamento e a patógenos como fungos. Praticamente nada é sabido sobre a viabilidade de massas ovígeras em criadouros transitórios e a sua susceptibilidade a fungos. Estas informações são importantes para o controle desse caramujo hospedeiro intermediário de Schistosoma mansoni, causador de esquistossomose. O presente trabalho relata a viabilidade de massas ovígeras em filme de água e a susceptibilidade a Metarhizium ansiopliae e Beauveria bassiana. Massas ovígeras foram expostas em filme de água formado em dois dispositivos diferentes confeccionados, um com pedra de argila em copo com água e outro com meio ágar água com diferentes concentrações de ágar (0,3% - 3%) em placas de Petri em diferentes umidades relativas (UR > 98% e 75%). Conídios ou blastosporos de B. bassiana (ARSEF 9588) ou M. anisopliae (IP 46) (2 x 107 conídios ou blastosporos/massa ovígera) foram inoculados em massas ovígeras expostas em filme de água em pedra de argila ou submersas (2 x 107 conídios/ml ou blastosporos/ml). As massas ovígeras expostas em filme de água em pedra de argila ou em meio ágar água (ágar < 1%) em UR > 98% foram viáveis. A eclosão e o deslocamento de juvenis nos filmes foram observados independentemente do dispositivo testado (UR > 98%, ágar < 1%), exceto em UR 75% e em vidro sem filme de água. Micélio e conídios desenvolveram sobre massas ovígeras tratadas com conídios ou blastosporos de M. anisopliae em filme de água em pedra de argila (UR > 98%), e não houve eclosão de juvenis a partir de massas ovígeras tratadas com blastosporos de M. anisopliae. Em massas ovígeras submersas tratadas com blastosporos de M. anisopliae ou B. bassiana não houve eclosão de juvenis e em massas ovígeras tratadas com conídios a eclosão média acumulada foi < 52,5%. A viabilidade de massas ovígeras e o deslocamento de juvenis em ambos os dispositivos em UR > 98% foi devido à formação de filme de água estável. Blastosporos podem ter liberado metabólitos tóxicos que inibiram a eclosão de juvenis de B. glabrata. Ambos os dispositivos são promissores para testes com massas ovígeras em filme de água. A viabilidade de massas ovígeras em filme de água em condições laboratoriais deve ser considerada no controle de B. glabrata. Blastosporos de M. anisopliae e B. bassiana são promissores contra B. glabrata. Biomphalaria glabrata snails are aquatic and inhabit often ephemeral basins. They have high reproductive capacity, and egg masses are laid on submerged substrates on the banks of breeding sites exposed to desiccation and pathogens like fungi. Virtually nothing is known about the viability of egg masses in breeding and transient sites and their pathogens. This information is important to control this intermediate host of Schistosoma mansoni, which causes schistosomiasis. This study describes the feasibility of egg masses in water films and susceptibility infection with to Beauveria bassiana and Metarhizium ansiopliae. Egg masses were exposed to water film formed in two different devices, one with a stone clay in a cup with water and another one with water agar at different concentrations of agar (0.3% - 3%) in Petri dishes in different relative humidity (RH > 98% and 75%). Conidia or blastospores of B. bassiana (ARSEF 9588) or M. anisopliae (IP 46) (2 x 107 conidia or blastospores/egg mass) were inoculated in egg masses exposed in the water film in stone clay or submerged (2 x 107 conidia/ml or blastospores/ml). Egg masses exposed in the water film in stone clay or in water agar (agar < 1%) at RH > 98% were viable. The eclosion and the displacement of juveniles in the films were observed regardless of the tested device (RH > 98%, agar < 1%), except at 75% RH and glass without water film. Mycelium and conidia developed on egg masses treated with conidia or blastospores of M. anisopliae in the water film in stone clay (RH > 98%), and there was no eclosion of juveniles from egg masses treated with blastospores of M. anisopliae. In egg masses submerged treated with blastospores of M. anisopliae or B. bassiana no eclosion of juveniles and egg masses treated with conidia accumulated average onset was < 52.5%. The feasibility of egg masses and the displacement of juveniles in both devices on RH > 98% was due to the formation of stable water film. Blastospores may have released toxic metabolites that inhibited the eclosion of juvenile B. glabrata. Both devices are promising for testing egg masses in the water film. The feasibility of egg masses in water under laboratory conditions film should be considered to control B. glabrata. Blastospores of M. anisopliae and B. bassiana are promising against B. glabrata.

Aedes aegypti é o principal vetor do vírus da dengue nos trópicos. A cidade de Goiânia teve a maior incidência dessa arbovirose no Centro-Oeste do Brasil entre 2010 e 2011. Melhores estratégias de controle integrado são necessárias para enfrentar a propagação da resistência desse vetor a produtos químicos. O fungo entomopatogênico Metarhizium anisopliae é efetivo contra ovos, larvas e adultos de A. aegypti em condições de laboratório. Entretanto, há pouco conhecimento sobre formulações e técnicas de aplicação específicas para controlar esse mosquito com esse e outros fungos. O presente estudo reporta o impacto de substratos previamente tratados ou não com óleo vegetal, terra diatomácea e/ou conídios de M. anisopliae s. l. IP 46 sobre a oviposição e sobrevivência de A. aegypti em condições de laboratório e apresenta resultados sobre testes de campo realizados na cidade de Goiânia em 2010 e 2011 com ovitrampas adaptadas. A. aegypti adultos colocados em laboratório foram expostos em gaiolas e expostos a dispositivos para oviposição equipados com água, lama ou papel filtro. Papel filtro úmido ou seco tratado com aditivos (óleo vegetal Graxol® ou terra diatomácea KeepDry®) e/ou conídios de IP 46 foram testados em ensaios de escolha poli ou mono-opcional. A mortalidade e oviposição quantitativa foram avaliadas até 15 dias de exposição e eclosão de larvas após submersão de ovos em água, até 10 dias. Os testes de campo foram executados com ovitrampas tratadas com conídios formulados em água ou óleo-água. Fêmeas ovipuseram mais sobre lama e papel filtro úmido, pouco sobre água e não ovipuseram sobre papel filtro seco. A oviposição quantitativa decresceu em concentrações mais elevadas do óleo, e fêmeas grávidas ovipuserm sobre papéis filtro tratados independente da concentração de conídios (testes poli-opcionais). A mortalidade de adultos alcançou até 42,1% em 15 dias de incubação ao testar papel filtro tratado com IP 46 formulado em óleo-água, e esse formulado reduziu a eclosão larval (testes mono-opcionais). Em condições de campo, ovos foram encontrados sobre papel filtro tratado ou não com conídios formulados em água ou óleo-água. Fêmeas grávidas de A. aegypti detectaram um gradiente de umidade e de óleo, mas não foram influenciadas pela presença de conídios. A toxicidade do óleo vegetal e a virulência de IP 46 aumentaram com o tempo de exposição. M. anisopliae formulado em óleo e aplicado em criadouro simulado mostrou ser promissor contra A. aegypti em condições de laboratório e contra e Aedes sp. em condições de campo. Aedes aegypti is the principal vector of dengue virus in the tropics. Metropolitan Goiânia had the highest incidence of this arbovirose in Central Brazil between 2010 and 2011. Improved integrated control strategies are necessary in order to face vector resistance to chemicals. The entomopathogenic fungus Metarhizium anisopliae is effective against A. aegypti eggs, larvae and adults under laboratory conditions. There is still little knowledge on specific formulation and application techniques to control this mosquito with this and other fungi. The present study reports on the impact of substrates, previously treated or not with vegetable oil, diatomaceous earth and/or M. anisopliae IP 46 conidia on oviposition and survival of A. aegypti under laboratory conditions. In addition, the study presents results on field tests carried out in the city of Goiânia with adapted ovitraps. Laboratory reared adult A. aegypti females and males were exposed in cages to oviposition devices equipped with water, mud or filter paper. Moistened or dry filter paper treated with additives (vegetable oil Graxol® or diatomaceous earth KeepDry®) and/or M. anisopliae s. l. IP 46 conidia were tested as mono or poly-optional assays. Mortality and quantitative oviposition were assessed up to 15 days of exposure and eclosion of larvae after submersion of eggs in water up to 10 days. Field tests were run with adapted ovitraps treated with conidia of IP 46 formulated with water or oil-water. Females never laid eggs on dry filter paper and few eggs on water. Quantitative oviposition decreased at higher oil concentrations and gravid females laid eggs on fungus-treated filter paper regardless of the conidial concentration (poly-optional tests). Adult mortality reached 42.1% at a 15 day incubation when testing filter paper treated with oil-in-water conidia and this formulation reduced larval eclosion (mono-opcional tests). Under field conditions, eggs were detected on filter paper treated or not with water or oil-in-water formulated conidia. Gravid females detected gradient of humidity and oil but they were not influenced by the presence of the conidia. Toxicity of vegetable oil and virulence of IP 46 increased with time of exposure. M. anisopliae applied in a simulated breeding device and formulated in oil showed to be promising against A. aegypti under laboratory and Aedes sp. under field conditions.