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Orientadores: Mario Jose Abdalla Saad, Licio Augusto Velloso Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: O substrato-1 do receptor de insulina (IRS-1) desempenha função importante na conexão entre os receptores de insulina (IR) e do fator de crescimento insulina-like-1 (IGF-1R), e as moléculas que participam das etapas subseqüentes da transdução dos sinais gerados pelos respectivos ligantes. No presente estudo, utilizou-se um oligonucleotídeo antisense para o IRS-1 (AS IRS-1), com a finalidade de inibir a expressão dessa proteína in vivo e avaliar as conseqüências desse bloqueio em diferentes tecidos de ratos Wistar. O tratamento com AS IRS-1 durante três dias reduziu a expressão desta proteína em cerca de 80%, 75% e 65% (p

Selected subpopulations of hypothalamic neurons play important roles in the regulation of whole body energy homeostasis. Studies have shown that the saturated fats present in large amounts in western diets can activate an inflammatory response in the hypothalamus, affecting the capacity of such neurons to respond appropriately to satiety and adipostatic signals. In the first part of this review, we will explore the mechanisms behind saturated fatty acid-induced hypothalamic dysfunction. Next, we will present and discuss recent studies that have identified the mechanisms that mediate some of the anti-inflammatory actions of unsaturated fatty acids in the hypothalamus and the potential for exploring these mechanisms to prevent or treat obesity CONSELHO NACIONAL DE DESENVOLVIMENTO CIENTÍFICO E TECNOLÓGICO - CNPQ FUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA DO ESTADO DE SÃO PAULO - FAPESP Fechado

Made available in DSpace on 2016-10-10T03:51:40Z (GMT). No. of bitstreams: 5 The phosphatidylinositol_AKT_atypical PKC pathway is involved in the improved insulin sensitivity by DHEA.pdf: 353052 bytes, checksum: 2d4811553694cfa40a7a741445d2adfc (MD5) license_url: 52 bytes, checksum: 3d480ae6c91e310daba2020f8787d6f9 (MD5) license_text: 21716 bytes, checksum: c200d7a52028dd255d79d7c917cc149a (MD5) license_rdf: 23005 bytes, checksum: 845fd6e03839c7264c0c164178b2e173 (MD5) license.txt: 1818 bytes, checksum: 46de3043f08e87659ae535ef74b8ce9d (MD5) Previous issue date: 2004-11 DHEA improves insulin sensitivity and has anti-obesity effect in animal models and men. However, the molecular mechanisms by which DHEA improves insulin action have not been clearly understood. In the present study, we examined the protein levels and phosphorylation state of insulin receptor (IR), IRS-1 and IRS-2, the association between IRSs and PI3K and SHP2, the insulin-induced IRSs associated PI 3-kinase activities, and the phosphorylation status of AKT and atypical PKCζ/λ in the liver and the muscle of 6 month-old Wistar rats treated with DHEA. There was no change in IR, IRS-1 and IRS-2 protein levels in both tissues of treated rats analysed by immunoblotting. On the other hand, insulin-induced IRS-1 tyrosine phosphorylation was increased in both tissues while IRS-2 tyrosyl phosphorylation was increased in liver of DHEA treated group. The PI3-kinase/AKT pathway was increased in the liver and the PI3K/atypical PKCζ/λ pathway was increased in the muscle of DHEA treated rats. These data indicate that these regulations of early steps of insulin action may play a role in the intracellular mechanism for the improved insulin sensitivity observed in this animal model. Sim Publicado

Orientador: Jose Roberto Bosqueiro Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A desnutrição e a resistência periférica à insulina induzida por administração de glicocorticóides induzem compensações funcionais e morfológicas em ilhotas pan creáticas a fim de manter a homeostase glicêmica. Deste modo, investigamos as alterações desenvolvidas pelo tratamento com dexametasona (Dex) em animais submetidos à restrição protéica. Foram analisados: parâmetros metabólicos, secreção de insulina em resp osta a glicose e proteínas envolvidas na via de sinalização da insulina em ilhotas pancreáticas isoladas. Ratos submetidos à dieta hipoprotéica (LP) apresentaram características padrões que caracterizam a desnutrição como: diminuição de ganho de massa corp oral, redução dos níveis séricos de albumina, proteína total e insulina. Adicionalmente, os ratos LP exibiram aumento da sensibilidade periférica à insulina e redução da área das ilhotas pancreáticas comparadas ao grupo controle ( P < 0,05). Todos estes parâmetros apresentaram valores similares ao grupo controle nos ratos submetidos à dieta hipoprotéica e submetidos ao tratamento com Dex (LPD), exceto para o peso corpóreo ( P < 0,05). A secreção de insulina em ilhotas pancreáticas isoladas de ratos LPD aprese ntou maior responsividade à glicose, em níveis estimulatórios, comparados a secreção em ilhotas de ratos LP (P < 0,05). Paralelo aos resultados de secreção, os ratos LPD exibiram redução do conteúdo protéico de IRS-1, IRS-2 e aumento dos níveis protéicos d e p-FoxO1, p-ERK e PKC comparados ao grupo LP (P < 0,05). Concomitantemente, as ilhotas dos ratos LPD mostraram ¿se hipertrofiadas comparadas com ilhotas de ratos LP ( P < 0,05). Em conclusão, o tratamento com dexametasona reverte, ao menos parcialmente, os efeitos no metabolismo analisados e no funcionamento das ilhotas pancreáticas causados pela restrição protéica, confirmando a grande plasticidade das células ß frente a condições adversas facultativas e/ou permanentes Abstract: Malnutrition caused by protein restriction and dexamethasone -induced insulin resistance, in vivo treatment (Dex) are conditions associated with morphological and functional alterations in pancreatic islets. Thus, the present study evaluated the dexamethasone treatment effects on the metabolic parameters, glucose-stimulated insulin secretion and proteins involved in the insulin - signalling pathway over low protein diet fed rats (LP). LP rats showed decrease in body weight, serum insulin, total serum protein, and serum albumin, patte rns that characterize the LP rats. Moreover, LP rats presented improved peripheral insulin sensibility and reduced islets area (P < 0,05). Except for the body weight (P < 0,05), all these parameters were proned to be normalized in rats exposed to a low protein diet and treated with dexamethasone (LPD), whose islets showed increased glucose stimulated insulin secretion (GSIS). In addition, LPD rats showed lower protein expression of IRS-1, IRS-2 and higher in p-FoxO1, p-ERK and PKC, while presenting pancreatic islet hypertrophy compared to LP rats islet. In conclusion, dexamethasone treatment revert the effects related to metabolism and islet function caused by diet protein restriction, confirming ß-cells wide plasticity, even in transient or lasting adverse conditions Doutorado Fisiologia Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientadores: Patricia da Silva Melo Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Nos últimos anos, a busca por alternativas mais eficientes e menos tóxicas para a terapia de diversas doenças despertou interesse em pesquisadores de diversas áreas, particularmente as que envolvam a utilização de polímeros biodegradáveis no desenvolvimento de sistemas de liberação controlada de hormônios, fármacos anti-câncer, antibióticos e vacinas. A quimioterapia do câncer é uma importante aplicação de conjugados droga-polímero proporcionando aumento da eficácia terapêutica e estabilidade da droga, assim como, a redução dos efeitos colaterais. Recentes estudos comprovaram a atividade anti-Ieucêmica da desidrocrotonina (DHC), que é uma diterpeno lactona extraída das cascas de Croton cajucara (sacaca), uma planta nativa e endêmica da região Amazônica. Em trabalhos anteriores, mostramos que a DHC induz diferenciação e apoptose em células da leucemia humana, HL60, com envolvimento de estresse oxidativo, ativação de caspases 3 e 9, sugerindo a participação da via mitocondrial. Neste trabalho, avaliou-se comparativamente a a indução de diferenciação celular e de morte celular por apoptose pela DHC, na forma livre e complexada em ?-ciclodextrinas (?CDs) em diferentes linhagens de células da leucemia mielóide humana: HL60, K562, K562 Lucena e U937. Os resultados mostram-se promissores quanto à atividade antitumoral da DHC complexada à ?CDs, quanto a citotoxícidade e a atividade antitumoral, mantendo a redução da citotoxicidade em células V79 e em hepatócitos, se comparada à forma livre da DHC. Abstract: In recent years, the search for alternative, more efficient and less toxic to therapy of various diseases awakened interest in researchers from various areas, particularly those involving the use of biodegradable polymers in the development of controlled release systems for hormones, anti-cancer drugs, antibiotics and vaccines. The chemotherapy of cancer is an important application of polymer-drug conjugates providing increased therapeutic efficacy and stability of drugs, as well as the reduction of side effects. Recent studies prove the anti-leukaemic activity of desidrocrotonina (DHC), a diterpeno lactone extracted from the bark Croton cajucara (sacaca), a plant native and endemic of the Amazon region. In previous work, we show that the DHC induces differentiation and apoptosis of leukemia cells in human, HL60, with the involvement of oxidative stress, activation of caspases 3 and 9, suggesting the involvement of the mitochondrial pathway. In this work, it is comparatively assessed aa induction of cell differentiation and cell death by apoptosis by DHC, in the form free and complexada in ?-cicIodextrinas (?CDs) in different cell lines of human myeloid leukemia: HL60, K562, K562 Lucena and U937. The results show is on the promising anti-tumor activity of DHC complexada the ?CDs, on cytotoxicity and antitumor activity while maintaining the reduction of cytotoxicity in cells V79 and in hepatocytes, if compared to how free of DHC. Doutorado Bioquímica Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Marcio Alberto Torsoni Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O hipotálamo desempenha importante papel na manutenção da homeostase da glicose. Robustos sinais originados pela leptina e insulina agem coordenando a ingestão alimentar, o gasto energético e o metabolismo periférico. No hipotálamo e nos tecidos periféricos, a AMPK é um sensor energético que regula o metabolismo celular através do controle entre a produção e consumo de ATP. Ela é inibida em resposta à insulina, leptina e na presença de disponibilidade de nutrientes. O citrato é conhecido como um modulador de algumas enzimas, como a fosfofrutoquinase e acetil-CoA carboxilase. Neste estudo a hipótese do citrato modular enzimas relacionadas com controle da saciedade e do metabolismo periférico foi testada. Primeiramente, foi mostrado que o citrato intracerebrbventricular inibe a fosforilação do sistema AMPK/ACC, diminuie a ingestão alimentar, promove a perda de peso, aumenta a expressão de neuropeptídeos anorexigênicos (POMC e CRH) e diminuiu o tecido adiposo epididimal e perirenal. O clearance da glicose avaliado pelo clamp euglicêmicohiperinsulinêmico e GTT foi maior em animais tratados previamente com citrato, bem como ocorreu maior captação de glicose pelo adiposo e pelo músculo esquelético. Corroborando com o efeito do citrato na homeostase da glicose, a fosforilação de IR, IRS1, IRS2 e AKt avaliada por imunoblotting foi maior, em ambos os tecidos, nos animais que receberam previamente o citrato via ICV. A translocação do GLUT para a membrana plasmática também foi potencializada pelo tratamento prévio com citrato via ICV, tanto no tecido adiposo epididimal como no tecido muscular. Por outro lado, a AMPK no músculo esquelético e no adiposo não foi ativada por citrato ICV, descartando seu efeito na captação de glicose. Nós concluímos que o citrato pode participar com um indicador do estado energético nos neurônios e, portanto, modular o comportamento alimentar, captação de glicose e metabolismo periférico Abstract: Hypothalamic neurons display important role in the glucose homeostase. Robust signals from leptin and insulin act coordinating the food intake, energy expenditure and peripheral metabolism. In the hypothalamus and peripheral tissue the AMPK is an energy sensor that regulates cellular metabolism through its sensitivity to the cellular energy status. It is inhibited in response to insulin, leptin and nutrients availability. The citrate is well known as a modulator of some enzymes, such as phosphofructokinase and acetyl-CoA carboxilase. Here, we hypothesized that citrate participates of neuronal feeding control and glucose homeostasis. Firstly, we show that intracerebroventricular citrate inhibits AMPKlACC phosphorylation. In addition, we show that citrate also decreases food intake; promotes weight loss, increases the expression ofanorexigenic neuropeptides (POMC and CRH) and increases the epididymal fat pad andperirenal adipose tissue. Glucose clearance evaluated by hyperinsulinemic-euglycemic clamp and GTT was increased in animais treated previously with citrate, as well as adipose and skeletal muscle tissue glucose uptake. Corroborating the effect of the citrate on the glucose homeostase, IR, IRS2, IRS1 and AKt phosphorylation evaluated by immunoblotting was improved by citrate treatment in both tissues, as well as GLUT 4 location in thl~ membrane compartment. On the other hand, AMPK in the skeletal muscle anej adipose tissue was not activated by citratelCV injection discarding their effect on the glucose uptake. We concluded that citrate could be an indicator regarding to energy status of the neuron. This in turn changes the neuropeptides expression to modulate feeding behavior, glucose uptake and peripheral metabolism Doutorado Bioquímica Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientadores: Maria Helena de Melo Lima, Thais Moreira São João Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Enfermagem Resumo: A adesão aos antidiabéticos orais (ADOs) em pessoas com diabetes mellitus tipo 2 (DM2) é considerada uma das estratégias essenciais para o controle glicêmico. Entretanto, devido ao tratamento complexo desta condição crônica, muitos usuários podem enfrentar dificuldades para realização deste comportamento em saúde. Com a alta proporção de pessoas com DM2 não aderentes à terapêutica medicamentosa, torna-se necessária a compreensão das barreiras bem como o desenvolvimento de intervenções comportamentais para a promoção da adesão de ADOs entre indivíduos com DM2. Este estudo teve como objetivo geral avaliar o efeito de uma intervenção baseada na combinação das estratégias "planejamento da ação" e "planejamento de enfrentamento de obstáculos" sobre a adesão aos antidiabéticos orais em pacientes com Diabetes Mellitus tipo 2, em seguimento na atenção primária, no final de quinze semanas. Trata-se de estudo controlado randomizado (ECR) envolvendo 88 usuários com DM2. Dois grupos (intervenção - GI e controle - GC) foram acompanhados por um período de 15 semanas. O GI recebeu a combinação das estratégias para promoção da adesão aos antidiabéticos orais em encontros presenciais e por meio de ligações telefônicas. O GC recebeu os cuidados usuais do serviço de saúde. Foram incluídos indivíduos adultos, em uso contínuo de antidiabéticos orais há pelo menos seis meses, com habilidade para ler e escrever em português do Brasil e que apresentarem escore positivo de Intenção (motivação) de tomar os medicamentos para o DM2. As medidas do comportamento, da avaliação global da adesão e da hemoglobina glicada (HbA1c) foram avaliadas como desfechos primários. As medidas da intenção e do estresse relacionado ao diabetes foram consideradas os desfechos secundários. A pesquisa foi realizada em dois centros de saúde da atenção primária do município de Campinas - SP, Brasil. Aplicaram-se modelos Generalized estimating equations para comparar os grupos ao longo do seguimento. O Consolidated Statement of Reporting Trials (CONSORT) foi seguido para a aleatorização, mascaramento, seguimento dos grupos e análise dos dados. O projeto foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa local e registrado no Registro Brasileiro de Ensaios Clínicos. A média de idade dos participantes do GI foi de 61,1 anos e do GC de 61,8 anos. Os resultados mostram que a maioria dos participantes era do sexo feminino em ambos os grupos. Houve significante incremento da medida do comportamento, da avaliação global da adesão, da proporção da adesão, da HbA1c e do estresse relacionado ao diabetes no GI. As análises de regressão evidenciaram melhores escores para o comportamento (p=0.0239), avaliação global da adesão (p=0.0003), porcentagem da adesão (p

Orientador: Alessandra Gambero Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A obesidade, principalmente a central (visceral), está relacionada à presença de inflamação sistêmica e de baixo grau, pela produção de adipocinas pró-inflamatórias devido à migração/ativação de macrófagos para o tecido adiposo branco (TA). Drogas que bloqueiam esta inflamação local resultam em melhora de vários parâmetros sistêmicos alterados pela obesidade. O tratamento de camundongos obesos com metotrexato, droga imunossupressora cujo mecanismo de ação envolve a inibição da captação celular de adenosina, resultou em melhora metabólica importante na manutenção da obesidade. Deste modo, este trabalho teve como objetivo estudar uma possível função da estimulação de receptores de adenosina A1 e A2A sobre as alterações metabólicas e do TA de camundongos com obesidade induzida por dieta. Camundongos Swiss alimentados com dieta padrão (CN) ou hiperlipídica (DH) por 12 semanas. Nas duas últimas semanas, foram tratados com CPA (agonista seletivo A1, 0,05 e 0,1 mg/kg.dia), CGS 21680 (agonista seletivo A2A, 0,1 e 0,5 mg/kg.dia) ou NECA (agonista não-seletivo, 0,005 e 0,01 mg/kg.dia). Peso corpóreo, adiposidade, glicemia e teste de tolerância à insulina foram avaliados. Biópsias de TA foram obtidas para dosagem de adipocinas por ELISA. Citocinas séricas foram determinadas por imunoensaio Luminex. Expressão de A1-R, A2A-R, VEGF, ERK, p38 MAPK, AMPK e JNK foram avaliados por Western blot. Infiltrado de macrófagos foi avaliado por imunohistoquímica de F4/80. Animais obesos e tratados com CPA apresentaram peso final e adiposidade maiores que os controles obesos não tratados. Animais tratados com CGS 21680 e com NECA apresentaram redução dos níveis glicêmicos alterados pela obesidade, mas somente o tratamento com CGS foi capaz de reverter a resistência periférica à insulina, bem como reduzir o nível sérico de insulina, sugerindo um controle adequado da homeostase glicêmica. Todos os grupos tratados com agonistas apresentaram aumento do metabolismo corporal. A atividade lipolítica, avaliada ex-vivo, foi reduzida nos animais tratados com CPA 0,1, confirmando relatos prévios de literatura que indicam uma atividade antilipolítica mediada por receptores A1. Animais tratados com a menor dose de NECA também apresentaram redução da lipólise basal ex-vivo. O infiltrado de macrófagos, a produção da proteína quimiotáxica de monócito (MCP)-1 e do fator de necrose tumoral (TNF)-? estavam reduzidos no TA de animais tratados com CGS. NECA e CPA também reduziram a expressão de MCP-1 no TA. A expressão do receptor A2A não foi modificada no TA pela obesidade e os níveis de fosforilação da p38 e ERK1/2 foram aumentados pelo tratamento com CGS. Sistemicamente, somente a produção do inibidor do ativador de plasminogênio (PAI)-1 foi inibida no grupo tratado com CGS. Em conclusão, o tratamento de animais obesos com agonistas de adenosina sugere que a ativação do receptor A1 resulta em efeito antilipolítico podendo levar ao ganho de peso, enquanto a ativação do receptor A2A resulta em um efeito anti-inflamatório no TA que pode estar relacionado à melhora na homeostase glicêmica observada. O uso do agonista não seletivo NECA resulta em respostas isoladas que foram observadas para os agonistas seletivos, mas não resulta em melhora metabólica, embora tenha se observado uma redução do peso corporal e adiposidade Abstract: Obesity, especially central (visceral), is related to low level systemic inflammation, by production of pro-inflammatory adipokines due to migration/activation of macrophages in white adipose tissue (AT). Treatment with drugs that block this local inflammation results in improvement of many systemic parameters that are altered by obesity. Treatment with metotrexate in obese mice, an immunosuppressive drug, that inhibits adenosine cellular uptake, has resulted in significant metabolic improvement despite of the obesity maintenance. Thus, this study aimed to analyze a possible role of agonists of adenosine receptors A1 and A2A on metabolic and AT changes in mice with diet-induced obesity. Swiss mice were feed with commercial chow (CN) or high fat diet (HFD) for 12 weeks. In the last two weeks, mice were treated with CPA (selective A1 agonist, 0.05 and 0.1 mg/kg.day), CGS 21680 (selective A2A agonist, 0.1 and 0.5 mg/kg.day) or NECA (non-selective agonist, 0.005 and 0.01 mg/kg.day). Body weight, glucose blood levels and insulin tolerance test (ITT) were evaluated. AT biopsies were obtained for adipokines measurements using ELISA. Serum cytokines were evaluated by immunoassay Luminex. Expression of A1-R, A2A-R, JNK, VEGF, ERK, p38 MAPK and AMPK were assessed by Western blot. Macrophage infiltration was evaluated by immunochemistry (F4/80). Obese mice treated with CPA resulted in increased final weight and adiposity as compared with untreated obese controls. Animals treated with CGS 21680 and NECA had glucose levels reduced, but only treatment with CGS was able to reverse insulin resistance and reduce the insulin serum levels, suggesting an improvement of glucose homeostasis. All animal groups treated with agonists showed increased body metabolism. The lipolytic activity, evaluated by ex-vivo, was reduced in those animals treated with CPA 0.1, confirming previous published reports and indicating an anti-lipolytic activity mediated by A1 receptors. Animals treated with NECA, at lower dose, also showed reduced basal ex-vivo lipolysis. The macrophages infiltration, the monocyte chemoattractant protein (MCP) -1 production and tumor necrosis factor (TNF)-? were reduced in AT from animals treated with CGS. NECA and CPA also decreased MCP-1 expression in AT. The A2A receptor expression was unchanged in AT by obesity and the phosphorylation levels of p38 and ERK1/2 were increased by treatment with CGS. Systemically, only the production of plasminogen activator inhibitor (PAI)-1 was inhibited in CGS treated group. In conclusion, treatment of obese animals with adenosine agonists suggests that the A1 receptor activation results in anti-lipolytic effect that can cause weight gain, while A2A receptor activation results in anti-inflammatory effect on adipose tissue and improvement in glucose homeostasis. The use of non-selective agonist NECA results in isolated response, but it does not improve metabolic status, although we have observed a reduction of body weight and adiposity Doutorado Farmacologia Doutora em Farmacologia

Orientador: Licio Augusto Velloso Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, FAculdade de Ciencias Medicas Resumo: O consumo de dietas ricas em gordura é o mais importante fator ambiental que contribui para o aumento da prevalência de obesidade na sociedade moderna. Em modelos animais com obesidade, induzida por dieta, a ativação da resposta inflamatória no hipotálamo produz resistência molecular e funcional aos hormônios anorexigênicos insulina e leptina, o que resulta em defeitos no controle da ingestão alimentar e do gasto energético. Para explorar a hipótese de que ácidos graxos podem desencadear resposta inflamatória e aumentar a expressão de citocinas no hipotálamo por induzir a ativação de TLR2/4 e/ou estresse de RE, ratos foram canulados e submetidos ao tratamento, por via intracerebroventricular (icv), com ácido graxo saturado e em seguida o extrato de proteínas hipotalâmicas foi obtido para determinação da expressão de proteínas por imunoblot. A localização de marcadores inflamatórios foi obtida por imunohistoquímica. Observou-se que ácidos graxos saturados de cadeia longa ativam predominantemente TLR4, o que determina não só a indução da expressão local de citocinas, mas também promove estresse de RE. Ratos alimentados com dieta hiperlipídica rica em ácidos graxos monoinsaturados não desenvolveram resistência hipotalâmica à leptina, enquanto que a mutação com perda da função do TLR4 e a inibição imunofarmacológica do TLR4 protegeu os camundongos da obesidade induzida por dieta. O TLR4 age como um alvo molecular predominante para ácidos graxos saturados no hipotálamo, o que desencadea resposta inflamatória e resistência a sinais anorexigênicos. Assim, conclui-se que ácidos graxos saturados ativam as vias de TLR2/TLR4 e estresse de RE em hipotálamo sendo a ativação mais significativa para TLR4, o que, por sua vez, determina a indução de estresse de RE. O TLR4 é um importante mediador da disfunção hipotalâmica durante o desenvolvimento da obesidade, como esse é um fenômeno importante durante a instalação da obesidade, esse receptor é um alvo terapêutico atrativo para tal condição epidêmica Abstract: In animal models of diet-induced obesity, the activation of an inflammatory response in the hypothalamus produces molecular and functional resistance to the anorexigenic hormones insulin and leptin. The primary events triggered by dietary fats that ultimately lead to hypothalamic cytokine expression and inflammatory signaling are unknown. Here, we test the hypothesis that dietary fats act through the activation of Toll-like receptors 2/4 and endoplasmic reticulum stress to induce cytokine expression in the hypothalamus of rodents. Rats were treated icv with different types of fatty acids and hypothalamic protein extracts were obtained for determination of inflammatory and endoplasmic reticulum stress protein expression by immunoblot. Localization of inflammatory markers were performed by immunohistochemistry. Long-chain saturated fatty acids activate predominantly Toll-like receptor 4 signaling, which determines not only the induction of local cytokine expression but also promotes endoplasmic reticulum stress. Rats fed on a monounsaturated fat-rich diet do not develop hypothalamic leptin resistance, while Toll-like receptor 4 loss-of-function mutation and immunopharmacological inhibition of Toll-like receptor 4 protects mice from diet induced obesity. Toll-like receptor 4 acts as a predominant molecular target for saturated fatty acids in the hypothalamus, triggering the intracellular signaling network that induces an inflammatory response and determines the resistance to anorexigenic signals Doutorado Ciências Básicas Doutor em Clínica Médica

Orientador: Maria Helena de Melo Lima Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Enfermagem Resumo: Introdução: As queimaduras são feridas causadas pela exposição a um agente de origem elétrica, radioativa, química ou térmica, caracterizadas por atraso da resposta inflamatória. Evidências experimentais demonstraram que a insulina tópica acelera a reconstrução tecidual de feridas incisionais em ratos diabéticos. Todavia, não está totalmente esclarecido os mecanismos celulares e moleculares do processo de cicatrização e o uso da insulina em feridas por queimaduras. Objetivo: Analisar o efeito da insulina tópica no processo de cicatrização de queimaduras de segundo grau usando animais diabéticos induzidos com estreptozotocina. Material e métodos: Ratos machos foram divididos em quatro grupos: controles tratados com creme placebo (CP), controles tratados com insulina tópica (CI), diabéticos tratados com creme placebo (DP) e diabéticos tratados com insulina tópica (DI). A queimadura foi realizada por meio de um molde (1 cm2) aquecido à 120 °C, exposto na pele do dorso de cada animal, durante 20 segundos. Ratos queimados receberam tratamento tópico com creme placebo ou insulina, uma vez ao dia. Nos 7º e 14º dias após a indução da queimadura foi realizada a extração da área da ferida para seguintes análises: Elisa, imuno-histoquímica, imunoblotting e histológica. Resultados: No 7° dia pós-queimadura, os animais do grupo DI apresentaram maior expressão das citocinas pró-inflamatórias (IL-1ß e IL-6), quando comparado ao grupo DP (p

Orientador: Maria Helena de Melo Lima Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Enfermagem Resumo: Introdução: A gestão da úlcera de etiologia venosa consiste na aplicação da terapia de compressão associada às recomendações que envolvem mudanças do estilo de vida. As orientações são essenciais na redução de morbidades e fatores de riscos presentes nos pacientes, favorecendo o processo cicatricial e melhora da qualidade de vida. Objetivo: avaliar o efeito das estratégias de um programa de orientação do estilo de vida para pacientes com úlcera venosa. Método: Trata-se de um estudo experimental randomizado, controlado e unicego. Como desfecho primário foi realizado a análise da evolução da ferida no que se refere a redução da área em cm2 e suas características (aparência do leito e quantidade do exsudato) e, a avaliação da intensidade da dor e qualidade de vida, como desfecho secundário. Participaram do estudo 71 pacientes com úlcera de etiologia venosa aleatorizados em dois grupos: grupo controle e grupo intervenção com seguimento de 12 semanas. O grupo controle recebeu as orientações de rotina dos serviços de saúde. Enquanto o grupo intervenção recebeu orientações a cerca do estilo de vida, no que concerne a fisiopatologia da úlcera venosa, importância da terapia de compressão, prática de exercício físico e repouso, em quatro momentos presenciais e dois por contato telefônico. Resultados: Nos domínios de avaliação da qualidade de vida dentro e entre os grupos, houve diferença significante no domínio satisfação da qualidade de vida (p= 0,0300) para o grupo intervenção ao final do seguimento. Na avaliação da área da ferida, o grupo intervenção apresentou contração da área significante nos dias 30, 60 e 90 dias de seguimento em comparação ao controle (p=0,0197 p= 0,0472 e p= 0,0116), respectivamente. Para as comparações ao longo do seguimento entre os grupos, ocorreu melhora significante entre os tempos de ambos os grupos (p

Orientadores: Eliana Pereira de Araújo, Lício Augusto Velloso Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A obesidade e caracterizada pelo acumulo excessivo de gordura no organismo, podendo resultar em dano a saúde. Mudança socioeconômica, ocorrida nos últimos cinquenta anos tem contribuído para o aumento da prevalência da obesidade, a qual e hoje considerada um dos principais problemas de saúde publica no mundo. O acumulo progressivo de ácidos graxos no tecido adiposo, e eventualmente, em outros sítios anatômicos não especializados na estocagem de energia sob a forma de gordura como, por exemplo, o fígado e o músculo, e associado à ativação de uma resposta inflamatória subclinica que desempenha papel importante na indução da resistência a insulina. Esta, por sua vez, e considerada o mecanismo fisiopatogênico unificador de uma serie de doenças comumente associadas à obesidade, tais como o diabetes mellitus, a aterosclerose, a esteatohepatite nao-alcoolica, entre outros. A inflamação subclinica desempenha um papel central na indução da resistência a insulina em obesos. Atualmente o estresse de reticulo endoplasmático e a ativação da sinalização do TLR4 vêm sendo identificados como potenciais mecanismos ativadores da inflamação sub-clinica associada à obesidade. No ambiente intracelular a ativação dos sinais inflamatórios disparados por ambos, estresse de reticulo endoplasmático ou TLR4, podem associar-se, modulando ou sendo modulado por outros eventos. Um desses eventos e a autofagia que se caracteriza como um processo celular finamente regulado e desempenha um papel importante no controle de varias funções da célula, tais como, reciclagem de organelas, disponibilidade de nutrientes e diferenciação celular. Um estudo recente demonstrou a existência de aumento na atividade autofágica em tecido adiposo de pessoas obesas e propôs a associação causal entre autofagia e resistência a insulina. A redução da adiposidade e o mecanismo mais eficiente para reduzir à resistência a insulina em pessoas obesas. Entretanto, o impacto da redução de adiposidade sobre a regulação da autofagia no tecido adiposo não e conhecido. Neste estudo, a regulação da autofagia no tecido adiposo durante o emagrecimento foi observada em duas etapas distintas. Inicialmente, um modelo animal de obesidade induzida por dieta, submetido posteriormente, a restrição calórica de 40% durante quinze dias. Animais obesos alimentados ad libitum, apresentaram aumento dos marcadores de autofagia no tecido adiposo, o que foi revertido na restrição calórica. De forma diversa, a restrição ocasionou o aumento da autofagia nos animais magros. A reintrodução de alimentação ad libitum foi suficiente para reduzir a autofagia nos animais magros, mas não nos obesos, cuja supra-regulacao da autofagia foi mais uma vez observada. Na segunda parte do estudo, autofagia foi avaliada em fragmentos de tecido adiposo subcutâneo de pacientes obesos selecionados para cirurgia bariátrica colhidos no ato da cirurgia e apos um ano, aproximadamente. Foram incluídos no estudo nove pacientes obesos não-diabeticos e seis pacientes obesos diabéticos. Assim como no modelo animal, obesidade em humanos foi associada a um aumento dos marcadores de autofagia no tecido adiposo os quais foram reduzidos apos a perda de peso. Assim, na vigência da obesidade ocorre uma regulação anômala da autofagia, estando aumentada durante alimentação ad libitum e reduzindo-se com a restrição alimentar Abstract: Obesity, defined as abnormal or excessive fat accumulation that may impair life quality, is one of the major public health problems in modern world. It results from an imbalance between food intake and energy expenditure leading to the progressive accumulation of fatty acids in the adipose tissue and in some tissues that are not specialized in energy storage, such as liver and muscle. Insulin resistance is one of the main outcomes of obesity and is regarded as the main mechanism connecting diseases that are commonly associated with obesity, such as, type 2 diabetes mellitus, atherosclerosis, and non-alcoholic steatohepatitis, among others. Subclinical inflammation plays a major role in the induction of insulin resistance in obesity. Recently, endoplasmic reticulum stress and the activation of TLR4 signaling have been identified as potential triggering mechanisms for obesity-associated subclinical inflammation. At the intracellular environment activation of inflammatory signaling triggered by either endoplasmic reticulum stress or TLR4 signaling can integrate and modulate or be modulated by other cellular events. One such event is autophagy which is a highly regulated process that plays an important role in the control of a wide range of cellular functions such as organelle recycling, nutrient availability and tissue differentiation. A recent study has shown an increased autophagic activity in the adipose tissue of obese subjects, and a role for autophagy in obesity associated insulin resistance was proposed. Body mass reduction is the most efficient approach to tackle insulin resistance in over-weight subjects; however, the impact of weight loss in adipose tissue autophagy is unknown. In this study we used a two-step approach to evaluate adipose tissue autophagy during body mass reduction. First, a mouse model of diet-induced obesity and diabetes was submitted to a fifteen-day, 40% caloric restriction. At base-line, markers of autophagy were increased in obese mice as compared to lean controls. Upon caloric restriction, autophagy increased in the lean mice, while decreasing in the obese mice. The reintroduction of ad libitum feeding was sufficient to rapidly reduce autophagy in the lean mice and increase autophagy in the obese mice. In the second part of the study, autophagy was evaluated in the subcutaneous adipose tissue of nine obese-non-diabetic and six obese-diabetic subjects undergoing bariatric surgery for body mass reduction. Specimens were collected during the surgery, and approximately one year later. As in the mouse model, human obesity was associated with increased autophagy and body mass reduction led to an attenuation of autophagy in the adipose tissue. Thus, while caloric restriction leads to increased autophagy in the adipose tissue in lean subjects, in obesity, autophagy is defectively regulated, being increased during ad libitum feeding and reduced upon caloric restriction Doutorado Clínica Médica Doutora em Ciências

Orientador: Marcio Alberto Torsoni Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Sobrepeso e obesidade são caracterizados por um aumento de tecido adiposo corpóreo, que resulta da interação entre muitos fatores, incluindo genéticos, metabólicos, comportamentais e ambientais. A obesidade está relacionada ao desenvolvimento de diabetes mellitus do tipo 2 (DM2). O principal mecanismo envolvido na associação entre obesidade e DM2 é a indução de uma resposta inflamatória subclínica capaz de gerar resistência à insulina. Este fenômeno é caracterizado pela capacidade reduzida deste hormônio em promover a homeostase glicêmica. O músculo esquelético (SM) é considerado um dos principais tecidos para a homeostase da glicose, já que ele responde por cerca de 80 % da captação total de glicose estimulada pela insulina no corpo. Sendo assim, a resistência à insulina em músculo esquelético é o maior determinante da hiperglicemia e DM2. Por outro lado, a leptina apresenta função crucial na homeostase glicêmica por agir no cérebro e sua ação neste órgão requer a atividade da PI3K para modular a homeostase da glicose e o metabolismo periférico. Contudo, o mecanismo envolvido neste fenômeno não é completamente entendido. Neste estudo nós aventamos a hipótese que a atividade hipotalâmica da PI3K é importante para a modulação da via da quinase dependente de AMP (AMPK)/acetil-CoA carboxilase (ACC), PGC1? e AKT em músculo esquelético. Para investigar esta questão, injetamos leptina no ventrículo lateral do hipotálamo de ratos. A leptina (ICV) aumentou a fosforilação da JAK2 (80 %) e AKT (350 %) hipotalâmica, quando comparado ao grupo controle. A administração prévia de LY294002 (inibidor químico da PI3K) reduziu a fosforilação da AKT hipotalâmica, induzida por leptina ICV. Adicionalmente, a leptina (ICV) melhorou a tolerância à glicose no GTT (50 %), mas a administração prévia de propranolol (10 mg/kg IP) ou LY294002 (1nmol-ICV) reduziu este efeito. Em músculo soleus a fosforilação da AKT, estimulada pela insulina, foi maior no grupo leptina (200 %) do que no grupo controle, contudo a administração prévia de propranolol (IP) reduziu (50 %) este efeito. Como o propranolol a administração prévia de LY294002 (ICV) reduziu (45 %) o efeito da leptina (ICV) sobre a fosforilação da AKT em músculo esquelético. A fosforilação da JAK2, em músculo esquelético, foi maior no grupo leptina (ICV) do que no grupo controle, mas a administração prévia de LY294002 (ICV) bloqueou este efeito. Adicionalmente, a ação central da leptina aumentou a expressão de PGC1? e a fosforilação da AMPK e ACC em músculo soleus. A administração prévia de LY294002 bloqueou estes efeitos. Concluímos que a ativação da via da PI3K hipotalâmica, induzida pela leptina, é importante para a fosforilação da AKT, bem como para a ativação de vias catabólicas através da AMPK e PGC1? em músculo esquelético. Assim, um defeito na via de sinalização da PI3K no hipotálamo pode contribuir para a resistência periférica à insulina associada à obesidade induzida por dieta Abstract: Overweight and obesity are characterized by an increased body fat and result from the interaction of many factors, which include genetic, metabolic, behavioral, and environmental ones. Obesity is a clinical condition highly associated with type 2 diabetes mellitus (DM2). The major reason for the link between obesity and DM2 is the induction of a subclinical inflammatory response which leads to insulin resistance. This phenomenon is characterized by the reduced ability of the pancreatic hormone insulin to promote glucose homeostasis. Skeletal muscle (SM) is considered as one of the most important tissues in glucose homeostasis, because it accounts for 80 % of whole body insulin-stimulated glucose uptake. Therefore, skeletal muscle insulin resistance is a major determinant of hyperglycemia and DM2. In addition, leptin plays a central role in glucose homeostasis acting in the brain and its action in this organ requires PI3K activity to modulate glucose homeostasis and peripheral metabolism. However, the mechanism behind this phenomenon is not clearly understood. We hypothesize that hypothalamic PI3K activity is important for the modulation of AMP-activated protein kinase (AMPK)/acetil-CoA carboxylase (ACC) pathway, PGC1?, and AKT in skeletal muscle. To address this issue, we injected leptin into the lateral ventricle of rats. ICV leptin increased the phosphorylation of hypothalamic JAK2 (80 %) and AKT (350 %) when compared to the control group. Previous ICV LY294002 (chemical inhibitior of PI3K) administration reduced hypothalamic AKT phosphorylation, induced by ICV leptin. In addition, ICV leptin improved the clearance of glucose in GTT (50%), but the previous administration of propranolol (10 mg/kg bw-IP) or ICV LY294002 (1nmol-ICV) reduced this effect. In the soleus muscle, the AKT phosphorylation, stimulated by insulin, was higher in leptin group (200 %) than the control group, but the previous administration of propranalol (IP) reduced (50 %) this effect. Like propranalol the previous administration of LY294002 (ICV) reduced (45 %) the effect of ICV leptin on AKT phosphorylation in the skeletal muscle. JAK2 phosphorylation, in skeletal muscle, was higher in leptin (ICV) group than the control group, but the previous ICV administration of LY294002 blocked this effect. Additionally, the central action of leptin increased PGC1? expression, AMPK and ACC phosphorylation in the soleus muscle. Previous ICV administration of LY294002 blocked these effects. We conclude that the activation of hypothalamic PI3K pathway is important for leptin-induced AKT phosphorylarion, as well as for an active catabolic pathway through AMPK and PGC1? in skeletal muscle. Thus, a defective leptin signaling PI3K pathway in the hypothalamus may contribute to peripheral resistance to insulin associated to diet-induced obesity Doutorado Fisiologia Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Maria Helena Baena de Moraes Lopes Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Enfermagem Resumo: Introdução: A Dermatite Associada à Incontinência (DAI) é uma inflamação da pele comum em indivíduos incontinentes expostos a urina e ou fezes. Essa manifestação clínica pode causar dor em queimação e incômodo, agravando-se a cada episódio de eliminação urinária e fecal. Inicialmente a DAI se apresenta como vermelhidão, podendo evoluir com perda cutânea, acomete diferentes regiões do corpo e pode apresentar infecção fúngica oportunista. Estudos apontam elevada incidência e prevalência, muitas vezes subestimadas pela falta de identificação pelos profissionais de saúde. O uso de instrumento de avaliação, que identifique e avalie a gravidade da DAI é uma estratégia para assegurar a assistência prestada. Objetivos: Traduzir, adaptar e avaliar a validade de critério e usabilidade do instrumento The Incontinence-Associated Dermatitis and Its Severity Instrument (IADS-D.2). Métodos: As primeiras etapas foram tradução inicial para o português, síntese das traduções, retrotradução, avaliação por comitê de especialistas e pré-teste com 30 enfermeiros, como recomendado pela literatura internacional. Para o pré-teste foram usadas seis fotos de pacientes com DAI que foram avaliadas por um painel de especialistas tornando-se o padrão de referência (critério). Para a avaliação da validade de critério e usabilidade, a amostra foi composta por 60 enfermeiros de um hospital público de ensino. Foi explicado o objetivo da pesquisa e após o aceite, entregue o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido (TCLE). Em seguida foram entregues: a ficha de categorização sociodemográfica; a versão final do instrumento (IADS-D.2) e a folha de pontuação traduzidos, juntamente com cinco das seis fotos usadas no pré-teste (casos) para análise e o questionário likert de avaliação da usabilidade e da qualidade das fotos (casos). Os instrumentos preenchidos foram entregues pelos participantes logo após finalizarem sua avaliação. Na avaliação do perfil dos enfermeiros, da validade de critério, usabilidade do instrumento e qualidade das fotos foram calculadas as frequências absolutas (n) e relativas (%) das variáveis e respostas ao questionário likert. Para a validade de critério foi aplicado o teste de Wilcoxon para uma amostra, com nível de significância igual a 5%. Resultados: As etapas de tradução foram realizadas com necessidade de poucos ajustes, o que permitiu a equivalência entre as versões original e traduzida. No pré-teste, não houve necessidade de modificação do instrumento e uma foto (caso) foi excluída. Quanto à validade de critério, os escores estabelecidos pelos 60 enfermeiros não diferiu dos escores determinados pelos especialistas (critério). A grande maioria dos enfermeiros avaliou positivamente o instrumento traduzido quanto a usabilidade, bem quanto a qualidade das fotos usadas para análise (concordância parcial e total igual ou acima de 96,7%). Conclusões: A adaptação cultural do IADS-D.2 para o português do Brasil obteve resultados satisfatórios, o instrumento demonstrou ser uma ferramenta válida e de fácil uso para se avaliar a presença e gravidade da DAI Abstract: Introduction: Incontinence-associated dermatitis (IAD) is a common skin inflammation in individuals incontinent to urine and/or feces. This clinical manifestation can cause burning pain and discomfort that can be aggravated after each urinary and or fecal elimination. Initially the IAD presents as redness, being able to evolve with cutaneous loss. It may affect different regions of the body and may present opportunistic fungal infection. Studies point to high incidence and prevalence, often underestimated by the lack of identification by health professionals. The use of an assessment tool that identifies and assesses the severity of IAD is a strategy to ensure the assistance provided. Objectives: To translate, to adapt and to evaluate the criteria validity and the usability of the "Incontinence-Associated Dermatitis and Its Severity Instrument"(IADS-D.2). Methods: The first steps were translation to Portuguese, synthesis of translations and back translation for translation accuracy. Followed by an evaluation by a panel of experts and pre-testing with 30 nurses, as recommended in the literature. For the pre-test were used six photos of patients with IAD that were evaluated by a panel of specialists becoming the reference standard (criterion). For the evaluation of criterion validity and usability, the sample consisted of 60 nurses from a public teaching hospital. The purpose of the research was explained and, after acceptance, the Free and Informed Consent Form was given. Then, the socio-demographic categorization form; the final version of the instrument (IADS-D.2) and the scoring sheet translated, together with five of the six photos used in the pre-test (cases) for analysis and the likert questionnaire for assessing the usability and quality of the photos were delivered. Participants delivered the completed instruments as soon as they completed their evaluation. Results: The translation steps were carried out with the need for few adjustments, which allowed the equivalence between the original and translated versions. In the pre-test, there was no need to modify the instrument and a photo (case) was excluded. Regarding the criterion validity, the scores established by the 60 nurses did not differ from the scores determined by the specialists (criterion). The majority of the nurses evaluated positively the translated instrument for usability as well as the quality of the photos used for analysis (partial and total agreement equal or above 96.7%). Conclusion: The cultural adaptation of IADS-D.2 to Brazilian Portuguese obtained satisfactory results, the instrument proved to be a valid and easy-to-use tool to evaluate the presence and severity of IAD Mestrado Enfermagem e Trabalho Mestra em Ciências da Saúde

Orientador: Eliana Pereira de Araújo Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Enfermagem Resumo: O aumento da prevalência de obesidade é atualmente um dos maiores problemas de saúde pública no mundo. Entretanto, até o momento o tratamento de pacientes obesos e/ou com sobrepeso consiste na mudança no comportamento alimentar e aumento da atividade física. Estudos recentes têm mostrado que os regimes de substituição de refeições são seguros e estão associados com a maior perda de peso do que os planos de dieta individualizados. O suplemento pode ser utilizado como substituto de refeição, pois possui propriedades que favorecem a perda de peso e o controle de diversos parâmetros metabólicos. As isoflavonas da soja são fitoestrógenos não-esteróides, que podem se ligar aos receptores de estrógenos e mimetizar suas ações. Vários estudos em humanos e animais sugerem que a soja desempenha um papel benéfico na redução da obesidade e, portanto, no diabetes mellitus tipo 2. Os objetivos deste trabalho são avaliar e relacionar marcadores inflamatórios séricos, parâmetros metabólicos e antropométricos de pacientes obesos e diabéticos submetidos à dieta com proteína de soja e comparar aos pacientes que receberam orientações sobre alimentação e mudanças no estilo de vida. No decorrer de um ano, a cada dois meses, foram acompanhados em avaliações 38 pacientes obesos e portadores de diabetes mellitus tipo 2 tratados apenas com hipoglicemiantes orais. Os pacientes foram randomicamente divididos em dois grupos: O grupo ILS (Intervention of Life Style, ou intervenção no estilo de vida) recebeu orientação nutricional para uma dieta de 2000 kCal/dia e aconselhamento sobre mudanças no estilo de vida. O grupo SR (Soya Replacement, ou substituto de soja) recebeu as mesmas orientações, porém com substituição completa de uma das refeições por um composto rico em proteína de soja. Foi detectado que a substituição dietética com o composto rico em proteína de soja resultou em redução significativa da massa corporal e da adiposidade acompanhados pela redução dos níveis sanguíneos de hemoglobina glicada e dos marcadores inflamatórios séricos TNF-? e MCP-1. Pacientes do grupo ILS não apresentaram modificação significativa dos parâmetros testados. Apesar de a substituição dietética com composto rico em proteína de soja ter promovido redução de adiposidade e de marcadores inflamatórios, tais parâmetros variaram de forma independente. Em conclusão, a substituição dietética por composto rico em proteína de soja, juntamente com o acompanhamento e orientações oferecidos em consultas de enfermagem, devem ser considerados como abordagem eficaz no controle de peso, de parâmetros metabólicos e inflamatórios em pacientes obesos com diabetes mellitus tipo 2 Abstract: The increasing prevalence of obesity is currently one of the major public health problems in the world. However, by the time the treatment of obese patients and/or overweight patients is the change in feeding behavior and increased physical activity. Recent studies have shown that meal replacement plans are safe and associated with greater weight loss than the individualized diet plans. Soya suplement may be used as a meal replacement, because it has properties that promote weight loss and control of various metabolic parameters. Soya isoflavones are non-steroidal phytoestrogens, which can bind to estrogen receptors and mimic their actions. Several studies in humans and animals suggest the beneficial role of soya in reducing obesity and therefore in diabetes mellitus type 2. The aims of this study are to evaluate and relate serum inflammatory markers, metabolic parameters and anthropometric parameters of obese and diabetic patients undergoing diet with soya protein, and compare to patients receiving guidance on diet and lifestyle changes. Over the course of a year, every two months, were accompanied in consultation 38 obese and diabetic patients in treatment with oral antidiabetics only. Patients were randomly divided into two groups: the ILS Group (Intervention of Life Style) received nutritional guidance to a diet of 2000 kCal/day and advice on changes in lifestyle. The SR Group (Soya Replacement) received the same guidelines, but with complete replacement of one of the meals by a compound rich in soya protein. It was detected that the dietary substitution with the compound rich in soya protein resulted in a significant reduction in body weight and adiposity accompanied by reduction in blood levels of glycated haemoglobin and serum inflammatory markers of TNF-? and MCP-1. Patients from ILS showed no significant modification of all parameters tested. Although dietary substitution with compound rich in soya protein have promoted reduction of adiposity and of inflammatory markers, such parameters were varied independently. In conclusion, dietary substitution by compound rich in soya protein, along with tracking and guidance offered in nursing consultations, should be regarded as effective approach in controlling weight, metabolic and inflammatory parameters in obese patients with diabetes mellitus type 2 Mestrado Enfermagem e Trabalho Mestra em Ciências da Saúde CAPES

Orientador: Maria Helena de Melo Lima Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Enfermagem Resumo: O processo de cicatrização é complexo e muito se sabe sobre o mecanismo molecular e celular da cicatrização de feridas agudas, mas pouco sobre as feridas crônicas, tais como as úlceras por pressão (UP). A UP ocorre em áreas de proeminência óssea, por compressão física externa, fricção e cisalhamento associados ao envelhecimento, imobilidade, doenças neurológicas, incontinência e desnutrição. O Objetivo deste estudo foi avaliar o tecido desvitalizado de UP categorias III e IV por meio da Reação em cadeia da polimerase (PCR). As amostras de pele saudável foram obtidas de pacientes submetidos a cirurgia plástica e as amostras de tecido desvitalizado de úlceras por pressão categorias III e IV de pacientes por meio do desbridamento instrumental conservador. Após a coleta dos tecidos eles foram congelados em nitrogênio líquido e submetidos a método RT2 Profiler PCR Arrays®. O estudo atendeu as normas nacionais e internacionais de ética em pesquisa envolvendo seres humanos, parecer n0 1.069.054 de 2015. A região predominante das UP foi a sacra com dimensões acima de 12 cm2 de área, o esfacelo foi coletado do centro da lesão e provenientes de três pacientes. A análise da expressão gênica identificou cinco genes com aumento da expressão no tecido desvitalizado: Quimiocina (C-X-C motif) ligante 1 (CXCL1), Quimiocina (C-X-C motif) ligante 2 (CXCL2), Interleucina 1 beta (IL-1?), Ciclooxigenase 2 (PGTS2) e Família NLR (NLRP3). O tecido de esfacelo de UP categorias III e IV mostrou a presença de quimiocinas, interleucina, ciclooxigenase e inflamassomo, concluindo-se que clinicamente a expressão destas proteínas indica a persistência da fase inflamatória e reforça que o desbridamento é a chave para o preparo do leito da ferida. A pesquisa translacional para melhor compreensão do processo de cicatrização de feridas crônicas irá favorecer condutas mais efetivas para o seu tratamento Abstract: The healing process is very complex and much is known about the molecular and cellular mechanisms involved in healing acute wounds but little in the case of chronic wounds, such as pressure ulcers (PU).PU occur in areas with bony prominence, as a result of external physical compression, friction and shear associated with aging, immobility, neurological disorders, incontinence and malnutrition. The purpose of this research was to evaluate the devitalized tissue of category III and IV PU, by means of polymerase chain reactions (PCR). Healthy skin samples were obtained from patients undergoing plastic surgery and samples of devitalized tissue from patients with category III and IV pressure ulcers, using conservative debridement instruments. After collecting the tissues, they were frozen in liquid nitrogen and subjected to method RT2 Profiler PCR Arrays®. The study met the national and international standards of ethics in research involving human subjects, as established in nº 1.069.054 of 2015. The predominant localization of PU was in the sacral region, with sizes exceeding 12 cm2, and slough was collected from the lesion sites of three patients. The gene expression analysis identified five genes with increased expression of devitalized tissue: Chemokine (CXC motif) ligand 1 (CXCL1), chemokine (CXC motif) ligand 2 (CXCL2), Interleukin 1 beta (IL-1?), Cyclooxygenase 2 (PGTS2) and NLR Family (NLRP3). The presence of chemokines, interleukin, cyclooxygenase and inflammasome were found in the slough tissue of Category III and IV PU, leading to the conclusion that the clinical expression of these proteins demonstrates the persistence of the inflammatory phase and reinforcing the conclusion that debridement is the key to wound bed preparation. Translational research to better understand the chronic wound healing process will be beneficial for discovering more effective treatments Mestrado Enfermagem e Trabalho Mestra em Ciências da Saúde

Orientador: Eliana Pereira de Araújo Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Enfermagem Resumo: Obesidade é uma grande preocupação na saúde pública mundial nos dias de hoje. Sua freqüente associação com algumas doenças, como: DM tipo 2, HAS, aterosclerose e alguns tipos de câncer, contribui para o comprometimento da qualidade de vida e longevidade. Estudos epidemiológicos indicam que em várias regiões do planeta crianças e jovens estão sendo acometidos precocemente por essa doença, fazendo com que suas projeções futuras sejam ainda piores. A obesidade materna tem sido implicada com distúrbios metabólicos da prole, porém, pouco se sabe a respeito de como o ambiente gestacional de uma mãe obesa pode determinar o desenvolvimento de doenças na vida adulta de sua prole. Objetivo: avaliar a expressão de citocinas inflamatórias (TNF-?, INF-?,TGF-1? ) e quimiocinas (MCP-1 e MCP-2) no sangue de cordão umbilical de bebês de mães com sobrepeso e obesidade, e correlacionar estes marcadores com o peso do bebê por volta dos 9 meses de idade. Métodos: estudo transversal de abordagem quantitativa. Os dados antropométricos das mães e dos bebês foram coletados do cartão de pré-natal da gestante e do prontuário do binômio, sendo registrados em impresso próprio. Foram coletadas 104 amostras de sangue de cordão umbilical, sendo: 54 do grupo 1 (mães com sobrepeso e obesidade) e 50 do grupo 2 (mães com peso adequado e baixo peso). As citocinas TNF-?, INF-?,TGF-1? e quimiocinas MCP-1 e MCP-2 foram avaliadas por meio de ELISA, segundo a orientação do fabricante de cada kit. Os lactentes foram localizados posteriormente através de contato telefônico com a mãe para informar os dados antropométricos e idade atual das crianças, conforme registro em cartão de acompanhamento pediátrico. As correlações entre as proteínas e o IMC materno foram estimadas por meio do coeficiente de correlação de Spearman. Já as comparações envolvendo os grupos de mães com sobrepeso e obesidade (grupo 1) e peso adequado e baixo peso (grupo 2) com relação às proteínas foram realizadas por meio do teste não-paramétrico de Mann-Whitney, considerado um nível de significância igual a 5%. Resultados: Somente a concentração da citocina TNF-? no sangue do cordão teve relação com o IMC materno, sendo aproximadamente duas vezes mais elevada em mães obesas e com sobrepeso do que em mães com peso adequado ou com baixo peso. Houve uma correlação inversa entre a concentração de TGF-1? no sangue de cordão e o peso do bebê ao nascimento. Conclusão: Apesar de não termos encontrado um marcador biológico que permita prever um maior ganho de peso de bebês durante os primeiros anos de vida, este estudo fornece informação adicional a respeito do risco proporcionado pela obesidade materna, uma vez que expõe o bebê a níveis mais elevados de uma citocina inflamatória desde etapas muito precoces da vida Abstract: Nowadays, obesity is a major concern in global public health. Its frequent association with certain diseases, such as type 2 diabetes, hypertension, atherosclerosis and some cancers, contributes to reduced quality of life and longevity. Epidemiological studies indicate that in many parts of the world, children and young people are being affected early by this disease, making their future projections are even worse. Maternal obesity has been implicated in offspring¿s metabolic disorders, however, few studies have been done about how the gestational environment of obese mother can determine the development of diseases in offspring¿s adult life. Objective: To evaluate the expression of inflammatory cytokines (TNF-?, IFN-?, TGF-1?) and chemokines (MCP-1 and MCP-2) in the babies¿ umbilical cord blood of mothers with overweight and obesity, and correlate these markers with the baby's weight at around 9 months of age. Methods: Cross-sectional study with a quantitative approach. Anthropometric data of mothers and babies were collected from antenatal card¿s pregnant and the medical records of the binomial, being recorded in own form. It was collected 104 umbilical cord blood samples, as follows: 54 in group 1 (mothers with overweight and obesity) and 50 in group 2 (mothers with normal weight and underweight). The cytokines TNF-?, INF-?, TGF-1? and chemokines MCP-1 and MCP-2 were evaluated by ELISA according to manufacturer's instruction of each kit. The infants were later located by telephone with their mother to inform the anthropometric data and the current age of the children, as recorded in pediatric card. The correlations between proteins and maternal BMI were estimated using the Spearman correlation coefficient. The comparisons involving groups of mothers with overweight and obesity (group 1), normal weight and underweight (group 2) in relation to proteins, were performed using the non-parametric Mann-Whitney test, with a significance level equal 5%. Results: Only the concentration of TNF-? cytokine in cord blood was related to maternal BMI, being about twice as high in obese and overweight mothers than mothers with normal weight or underweight. There was an inverse correlation between the concentration of TGF-1? in cord blood and the baby¿s birth weight. Conclusion: Although we have not found a biological marker to forecast a baby¿s weight gain during the first year of life, this study provides additional information regarding risk provided by maternal obesity, since it exposes the baby to high levels of inflammatory cytokines from early stages of life Mestrado Enfermagem e Trabalho Mestra em Ciências da Saúde

Orientador: Gabriel Forato Anhê Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A prevalência de esteato hepatite não alcólica (NASH) aumenta de 20% em indivíduos magros para 80% em pacientes obesos com inflamação hepática caracterizada por elevados níveis de TNF-alfa. Um dos eventos que caracteriza a evolução para NASH é a marcante morte de hepatóciotos resultante da ação do excesso de ácidos graxos livres circulantes. O mecanismo pelo qual o palmitato induz a apoptose é dependente, entre outros parâmetros, do aumento dos níveis de espécies reativas de oxigenio (EROS). O objetivo do presente trabalho foi avaliar se a apoptose de hepatócitos induzida pelo palmitato é dependente do aumento da produção de TNF-alfa. Para testar tal hipótese, utilizamos o Infliximabe, um anticorpo monoclonal específico anti-TNF-alfa, como ferramenta farmacológica para reverter as injúrias provocadas pelo palmitato. Foi observado que após 6 horas de tratamento com o palmitato houve um aumento de expressão de mRNA de TNF-alfa levando a um aumento de apoptose 24 horas após à exposição com o ácido graxo. Este fenômeno concordou temporalmente com um aumento na fosforilação das proteínas IkK, IKbeta e JNK, indicativo de ativação da via de sinalização do TNF-alfa. A apoptose induzida pelo palmitato foi revertida pela adição de um inibidor geral de síntese proteica (Ciclohexamida) ou de um anticorpo neutralizante para o TNF-alfa circulante. Além disso, a produção de EROs e a disfunção mitocondrial induzidas pelo palmitato também foram revertidos por estas estratégias farmacológicas. Com base em tais resultados, concluímos que a apoptose, o acúmulo de EROs e da disfunção mitocondrial induzidas pelo palmitato em células HepG2 são dependentes da produção de TNF-alfa Abstract: In the last three decades, the prevalence of overweight and obesity has been continuously increasing. Obesity is a risk factor for developing a series of diseases such as whole-body insulin resistance and type 2 diabetes mellitus. Adipose tissue, originally considered merely energy storage, today is recognized as an endocrine organ able of secreting a variety of cytokines, hormones and other substances with specific biological activities, such as saturated fatty acids. Both long chain saturated fatty acids, like palmitate, and the proinflammatory cytokines, as TNF-alfa, are known to activate signaling pathways that promote apoptosis. The mechanism by which the palmitate induces apoptosis is dependent on cell type, for example, human hepatocellular carcinoma line (HepG2) treated with palmitate led lipotoxicity and to increased levels of reactive oxygen species (ROS). Thus, the objective of this study was to evaluate whether apoptosis in HepG2 cells is dependent on increased production of TNF-alfa induced by treatment with palmitate. To test this hypothesis, we used the Infliximab, a monoclonal antibody anti-TNF-alfa, as a pharmacological tool to reverse injuries caused by palmitate. We observed that palmitate increased the mRNA for TNF-alfa and phosphorylation of IkK, Ikbeta and JNK, all indicative of activation of inflammatory signaling pathways. Apoptosis induced by palmitate was suppressed by simultaneous treatment with cycloheximide or infliximab. Furthermore, the production of ROS and mitochondrial dysfunction induced by palmitate were also suppressed by these two pharmacological strategies. Based on these results, we conclude that apoptosis and related events such as increased ROS production and mitochondrial dysfunction induced by palmitate in HepG2 cells are dependent on autocrine action of TNF--alfa Mestrado Farmacologia Mestra em Farmacologia

Orientador: Eliana Pereira de Araujo Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Enfermagem Resumo: A cicatrização é um processo complexo no qual orquestram-se vários tipos celulares assim como proteínas estruturais. O Fibrinogênio (F1), proteína principal da matriz provisória na ferida, é responsável por ocluir a área lesionada, dando início ao processo cicatricial. A Fibronectina (FN) é uma proteína que se liga ao F1 e assim, estabiliza-se a matriz na área da ferida. Uma vez estabilizada, ocorrem processos de migração celular ao leito da lesão como também ligação do F1 ao colágeno da pele ilesa circundante. No entanto, a maioria dos estudos descrevem que a ligação do F1 a FN acontece apenas em situações patológicas como infecções ou doenças inflamatórias, embora, um estudo recente descreveu a purificação do complexo de F1 ligado FN a partir de plasma humano de indivíduos saudáveis. Este trabalho trata-se de estudo in vitro e in vivo, no qual foi avaliada a velocidade de cicatrização, morfologia da ferida, modulação de genes envolvidos no processo de cicatrização, proliferação e migração celular em animais, tratados diariamente por via tópica com o Fibrinogenio (F1) e Fibronectina (FN). Também avaliamos o uso das matrizes de F1 e FN em modelos in vitro de cicatrização. As feridas foram foto documentadas sistematicamente e as amostras foram extraídas nos dias 2, 6 e 11 após a excisão. Estas amostras foram analisadas por meio de PCR em tempo real, imunofluorescência, microscopia óptica e de luz polarizada. Nossos resultados mostraram que o complexo ???F1: pFN acelera significativamente o proceso cicatricial, formação de tecido de granulação, e estimula a reepitelização em feridas na pele de camundongos. Além disso, o uso da mistura de F1 e FN em feridas feitas em pele humana equivalente também estimulou o proceso cicatrizial. Para análise estatística, os grupos foram comparados utilizando test t student para dois grupos e 2-way ANOVA com o teste Bonferroni para três grupos ou mais. O nível de significância adotado foi de p

Orientador: Eliana Pereira de Araújo Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Enfermagem Resumo: O consumo excessivo de gordura desencadeia uma resposta inflamatória no hipotálamo, que depende, entre outras coisas, da ativação dos astrócitos e da microglia, que liberam várias citocinas inflamatórias, fatores de crescimento, e quimiocinas no parênquima hipotalâmico. Quando a dieta hiperlipídica persiste por várias semanas, células mieloides periféricas são recrutadas para o hipotálamo. Neste trabalho, (1) investigamos se a expressão do fator de crescimento TGF-?1 no hipotálamo afeta a homeostase energética, (2) avaliamos se a ativação da microglia está envolvida no recrutamento de células mielóides periféricas para o hipotálamo, e (3) analisamos a morfologia dessas células. Para isso, reduzimos os níveis de TGF-?1 no núcleo arqueado do hipotálamo (ARC) de camundongos C57BL/6J Unib, alimentados com uma dieta hiperlipídica por 14 dias, e avaliamos vários parâmetros metabólicos e inflamatórios nestes animais. Para ativar as células da microglia do ARC, utilizamos a técnica de DREADD em camundongos CX3CR1-cre alimentados com dieta padrão. Amostras do ARC desses animais foram analisadas por PCR quantitativo e o tecido neural por imunofluorescência. Também utilizamos camundongos CX3CR1GFP/+CCR2RFP/+ para investigarmos as características das células mieloides periféricas que migram para o hipotálamo. Como resultado, a redução da expressão de TGF-?1 no ARC dos camundongos alimentados com dieta hiperlipídica resultou em menor ganho de massa corporal e adiposa, diminuiu a inflamação hipotalâmica, atenuou a lipohipertrofia do tecido adiposo marrom, aumentou a atividade locomotora e reduziu a esteatose hepática e os níveis séricos de triglicérides. A ativação da microglia do ARC resultou em inflamação e recrutamento de células mieloides periféricas para o hipotálamo, independente do conteúdo de gordura na dieta e da ativação de outras células. A análise das características das células infiltrantes mostrou que células CCR2+ e CD169+ são morfologicamente distintas após infiltrarem-se no parênquima hipotalâmico. Em conclusão, a redução de TGF-?1 no ARC atenua a inflamação hipotalâmica resultando em melhora do metabolismo energético. O recrutamento de células mieloides periféricas para o parênquima hipotalâmico depende da ativação da microglia. Essas células infiltrantes apresentam diferenças morfológicas entre si, entretanto, as funções que cada tipo celular exerce na resposta inflamatória permanecem desconhecidas Abstract: Excessive consumption of fat triggers an inflammatory response in the hypothalamus, which depends on the activation of astrocytes and microglia, which release various inflammatory cytokines, growth factors, and chemokines in the hypothalamic parenchyma. When the high-fat diet (HFD) persists for several weeks, peripheral myeloid cells are recruited to the hypothalamus. In this work, (1) we investigate whether the expression of the growth factor TGF-?1 in the hypothalamus affects energy homeostasis, (2) we assess whether microglial activation is involved in the recruitment of peripheral myeloid cells to the hypothalamus, and (3) we analyze the morphology of these cells. For this, we reduced the levels of TGF-?1 in the arcuate hypothalamic nucleus (ARC) of C57BL/6J Unib mice, fed a 14-day HFD, and evaluated several metabolic and inflammatory parameters in these animals. To activate the ARC microglia cells, we used the DREADD technique in CX3CR1-cre mice fed a standard diet. ARC samples from these animals were analyzed by quantitative PCR and the neural tissue by immunofluorescence. We also used CX3CR1GFP/+ CCR2RFP/+ mice to investigate the characteristics of peripheral myeloid cells that migrate to the hypothalamus. As a result, the reduction of TGF-?1 expression in the ARC of mice fed a HFD resulted in reduced body weight and fat mass gain, decreased hypothalamic inflammation, attenuated lipohypertrophy of brown adipose tissue, increased locomotor activity and reduced hepatic steatosis and serum triglyceride levels. The activation of the microglia in the ARC resulted in inflammation and recruitment of peripheral myeloid cells to the hypothalamus, regardless of the fat content in the diet and the activation of other cells. The analysis of the characteristics of the infiltrating cells showed that CCR2 + and CD169 + cells are morphologically distinct after infiltrating the hypothalamic parenchyma. In conclusion, the reduction of TGF-?1 in the ARC attenuates hypothalamic inflammation resulting in an improved energy metabolism. The recruitment of peripheral myeloid cells to the hypothalamic parenchyma depends on the activation of the microglia. These infiltrating cells have morphological differences between them, however, the functions that each cell type plays in the inflammatory response remain unknown Doutorado Cuidado e Inovação Tecnológica em Saúde e Enfermagem Doutora em Ciências da Saúde FAPESP 2016/17810-3; 2017/22511-8

Orientador: Maria Helena de Melo Lima Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Enfermagem Resumo: O reparo tecidual é um processo biológico, complexo e dinâmico. Na presença do Diabetes Mellitus (DM), o processo de cicatrização sofre uma alteração devida principalmente a respostas imunológicas locais e sistêmicas prejudicadas. Neste contexto, o uso tópico de insulina é um tratamento promissor, pois pode i) modular a fase inflamatória, ii) estimular a proliferação de fibroblastos, e iii) favorecer outras fases do processo de cicatrização, acelerando o processo e melhorando a qualidade do tecido cicatricial. OBJETIVO: Analisar os mecanismos moleculares e celulares do reparo tecidual de camundongos hiperglicêmicos em tratamento tópico com gel de insulina. MATERIAIS E MÉTODOS: estudo realizado com animais hiperglicêmicos (n=48) com lesões cutâneas divididos em dois grupos: 1. grupo controle (CTRL), tratados com gel placebo sem insulina; e 2. grupo insulina (INS), tratados com gel de insulina. O DM foi induzido com estreptozotocina 5x50mg intraperitoneal e as lesões na região dorsal foram tratadas diariamente. Os tecidos da região lesada foram retirados no 4°, 7°, 10º e 14° dias pós-lesão para análises. O processo de cicatrização foi avaliado por: 1. morfometria das feridas; 2. histologia (hematoxilina & eosina); 3. presença de fibras de colágeno usando a coloração de PicroSirius; 4. expressão das citocinas anti-inflamatórias IL4 e IL-10, e das citocinas pró-inflamatórias IL-1ß , IL-6, TNFa e MCP-1 por Bioplex; 5. expressão do VEGF rec1, VEGF e Arginase I por Western Blot; 6. quantificação das proteínas da via de sinalização de insulina IR-ß, IRS-1, p44/42MAPK, AKT123 e GSK3 por Western Blot; e 7. pela imunomarcação dos anticorpos Arginase I e TNFa As análises estatísticas foram realizadas por meio do teste t-Student, considerando um nível de significância de p

Orientador: Thaís Moreira São João Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Enfermagem Resumo: A ulceração em extremidades tem sido compreendida como a complicação mais frequente em pessoas com diabetes mellitus (DM), representa um grave problema de saúde, que interfere nos âmbitos social e econômico do cenário mundial. Há evidências de que a qualidade de vida relacionada à saúde (QVRS), por sua vez, se agrava conforme a pessoa apresenta maiores complicações nos pés. Ela pode ser avaliada por meio de instrumentos de medida, os quais são escassos na população brasileira. Dentre aqueles disponíveis na literatura estrangeira, destaca-se o Diabetic Foot Ulcer Scale (DFS), por sua aplicabilidade, aceitabilidade e satisfatórias evidências de propriedades de medida em países distintos. Assim, este estudo teve como objetivo disponibilizar para a comunidade científica brasileira o instrumento Diabetic Foot Ulcer Scale - Short Form (DFS-SF) e avaliar suas propriedades de medida. Tratou-se de estudo metodológico, composto por etapas de: 1) validação linguística, conduzida com base em diretrizes da literatura internacional: tradução, retrotradução, avaliação pelo comitê de especialistas e pré-testagem junto aos pacientes alvo; e 2) avaliação de suas propriedades de medida, por meio de avaliação da confiabilidade, aceitabilidade, praticabilidade, efeito teto e chão, responsividade e validade de construto estrutural. O estudo foi realizado em Ambulatório de Pé Diabético, localizado em uma cidade do interior do estado de São Paulo. Foram incluídas pessoas com DM, em seguimento no referido serviço, com ferida característica. Participaram do estudo 290 pessoas com pé diabético em seguimento ambulatorial regular. A confiabilidade foi avaliada pela consistência interna, utilizando-se o coeficiente alfa de Cronbach e pela confiabilidade composta. Os efeitos teto e chão foram avaliados por meio da percentagem de participantes que pontuaram os 15% piores (chão) e 15% melhores (teto) possíveis resultados da escala. A validade foi testada por meio da correlação dos valores do instrumento com os dos domínios da versão brasileira do Short Form Health Survey (SF-36). A responsividade (n=34) foi acessada por meio da área da ferida obtida por fotografia e avaliada pelo programa Image J Features e pelo escore do DFS-SF em dois momentos, com um intervalo de quatro semanas entre eles. O instrumento apresentou boas evidências de confiabilidade, demonstrados por meio de consistência interna adequada (alfa de Cronbach nos domínios > 0.70) e confiabilidade composta (0.84 > CC > 0.92); e de validade convergente, por meio de correlações significantes positivas de moderada a forte magnitude com o SF-36. A validade de construto estrutural foi examinada pela aplicação da análise fatorial confirmatória do DFS-SF, que demonstrou que a versão brasileira do instrumento está adequadamente ajustada à estrutura dimensional do original. A análise de efeito teto e chão evidenciou que não houve efeitos teto ou chão. A responsividade foi observada na área da ferida, mas não nos escores do DFS-SF nos tempos. A versão brasileira do DFS-SF demonstrou evidências de validade e confiabilidade, sugerindo que este instrumento é uma ferramenta com evidências de validade para avaliar a qualidade de vida de pessoas com pé diabético na população brasileira Abstract: Ulceration in the extremities has been understood as the most frequent complication in people with diabetes mellitus (DM), it represents a serious health problem, which interferes in the social and economic spheres of the world scenario. There is evidence that health-related quality of life (HRQoL), in turn, worsens as the person has major foot complications. It can be assessed using measurement instruments, which are scarce in the Brazilian population. Among those available in foreign literature, the Diabetic Foot Ulcer Scale (DFS) stands out, for its applicability, acceptability and satisfactory evidence of measurement properties in different countries. Thus, this study aimed to make the Diabetic Foot Ulcer Scale - Short Form (DFS-SF) instrument available to the Brazilian scientific community and to evaluate its measurement properties. It was a methodological study, consisting of steps of: 1) linguistic validation, conducted based on guidelines from the international literature: translation, back-translation, evaluation by the expert committee and pre-testing with the target patients; and 2) evaluation of its measurement properties, through the evaluation of reliability, acceptability, practicality, ceiling and floor effect, responsiveness and structural construct validity. The study was carried out in a Diabetic Foot Clinic, located in a city in the interior of the state of São Paulo. People with DM were included in the service, with a characteristic wound. 290 people with diabetic foot participated in the study in regular outpatient follow-up. Reliability was assessed by internal consistency, using Cronbach's alpha coefficient and by composite reliability. Ceiling and floor effects were assessed using the percentage of participants who scored the worst 15% (floor) and 15% best (ceiling) possible results of the scale. The validity was tested by correlating the values of the instrument with those of the domains of the Brazilian version of the Short Form Health Survey (SF-36). Responsiveness (n = 34) was accessed through the wound area obtained by photography and assessed by the Image J Features program and the DFS-SF score in two moments, with an interval of four weeks between them. The instrument presented good evidence of reliability, demonstrated by means of adequate internal consistency (Cronbach's alpha in the domains> 0.70) and composite reliability (0.84> CC> 0.92); and convergent validity, through significant positive correlations of moderate to strong magnitude with the SF-36. The structural construct validity was examined by applying the confirmatory factor analysis of the DFS-SF, which demonstrated that the Brazilian version of the instrument is properly adjusted to the dimensional structure of the original. The ceiling and floor effect analysis showed that there were no ceiling or floor effects. Responsiveness was observed in the wound area, but not in the DFS-SF scores at the time. The Brazilian version of the DFS-SF demonstrated evidence of validity and reliability, suggesting that this instrument is a tool with validity evidence to assess the quality of life of people with diabetic foot in the Brazilian population Doutorado Cuidado e Inovação Tecnológica em Saúde e Enfermagem Doutora em Ciências da Saúde

Orientador: Eliana Pereira de Araújo Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Enfermagem Resumo: Tem sido estudado que o ácido piperonílico, molécula presente na pimenta negra (Piper nigrum L) e na pimenta longa (Piper longum L), é capaz de ativar o Receptor do Fator de Crescimento Epidermal (EGFR) e assim desencadear sinalização intracelular levando a transcrição de genes responsáveis pela proliferação e sobrevivência celular, principalmente em queratinócitos, células cruciais na manutenção da homeostase cutânea e na barreira epidérmica principalmente quando a pele é lesionada. Portanto, nossa hipótese é que o ácido piperonílico é capaz de melhorar o processo de cicatrização de feridas cutâneas. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do tratamento tópico com ácido piperonílico na cicatrização de feridas em modelo animal. Trata-se de um estudo experimental em camundongos C57BL6/J machos submetidos a feridas cutâneas dorsais provocadas por um punch de 6mm e tratadas topicamente com ácido piperonílico ou veículo. As feridas foram avaliadas macro e microscopicamente e foram coletadas amostras de tecido para imunofluorescência e PCR em tempo real, nos dias 6, 9 e 19 pós lesão. Os resultados deste estudo mostram que o tratamento tópico de feridas com o ácido piperonílico levou ao aumento da velocidade de cicatrização a partir do dia 6 pós lesão, até o fechamento. Esse estudo sugere que esse fenômeno ocorreu por meio da ativação do EGFR e modulação da expressão de queratinócitos. Ademais, o ácido piperonílico foi capaz de modular a expressão gênica de proteínas como IL-6, IL-1?, TNF-?, IL-10 e MCP-1, importantes para o processo de cicatrização. E no dia 19 pós lesão, o novo tecido formado apresentou maior deposição de colágeno do tipo I e morfologia mais próxima da pele intacta, com maior presença de papilas dérmicas e folículos pilosos. Portanto, os resultados sugerem que o ácido piperonílico é ser uma opção viável para o tratamento de feridas cutâneas Abstract: The Epidermal Growth Factor (EGF) stimulates growth, cell proliferation and survival in various tissues. Recently, It has been described that piperonylic acid, a molecule present in black pepper (Piper nigrum L) and long pepper (Piper longum L), is able to activate the Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) and thus trigger a cascade of intracellular signaling leading to gene transcription responsible for cell proliferation and survival, especially in keratinocytes. Keratinocytes are fundamental cells in maintaining cutaneous homeostasis and they are the first to be injured in case of wounds. Therefore, our hypothesis is that piperonylic acid can improve the healing process of skin wounds. The aim of this work was to evaluate the effect of topical treatment with piperonylic acid on wound healing in an animal model. This is an experimental study in male C57BL6 / J mice submitted to dorsal skin wounds caused by a 6mm punch and treated topically with piperonylic acid or vehicle. The wounds were evaluated macro and microscopically and tissue samples were collected for immunofluorescence and real time PCR, on days 6, 9 and 19 after the injury. Student's t test was used for statistical analysis of independent samples and ANOVA for more than two variables. The level of significance for rejection of the null hypothesis was 5% (p

Orientador: Eliana Pereira de Araújo Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Enfermagem Resumo: A progressão mundial do diabetes e as complicações associadas à hiperglicemia evidenciam a ocorrência de feridas crônicas, que resultam em amputação, e impulsionam a busca por novas tecnologias no tratamento dessas lesões. Receptores GPR120 e GPR40 são potenciais alvos terapêuticos no tratamento de distúrbios metabólicos, por exercerem efeitos anti-inflamatórios e sobre a estimulação da proliferação celular. O objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito do GW9508, um agonista duplo dos receptores GPR120 e GPR40, na cicatrização de feridas em modelo experimental. Foram utilizados camundongos C57/BL6J machos, adultos não diabéticos e diabéticos induzidos por baixas doses de estreptozotocina. Os animais foram submetidos a confecção de duas feridas excisionais de 6mm na região dorsal. A retração da pele foi estabilizada com prótese de silicone. Após serem aleatoriamente divididos em veículo ou GW9508, receberam tratamento tópico com 20µL de gel de carbopol incorporado ao veículo ou GW9508 a 100µM, uma vez ao dia até 5º ou 12º dia pós-lesão, quando o tecido foi coletado. Os grupos foram comparados quanto a retração macroscópica das feridas, morfologia do tecido cicatricial e expressão gênica por RT-PCR. Para as análises estatísticas aplicamos o teste t de Student em amostras independentes e para mais de duas variáveis, análise de variância (ANOVA), considerando p

Orientadores: Eliana Pereira de Araujo, Joseane Morari Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Enfermagem Resumo: O restabelecimento de populações neuronais hipotalâmicas por meio da neurogênese tornou-se perspectiva de controle da obesidade através da mobilização de células progenitoras neurais (NPCs ou neural progenitor cells) hipotalâmicas. Evidências indicam que algumas citocinas podem regular a diferenciação de NPCs em neurônios. A interleucina 6 (IL-6) possui diversas funções no sistema nervoso central, relacionadas à redução da apoptose, diferenciação neuronal e neuroproteção. No entanto, não existem evidências da influência da IL-6 na proliferação e diferenciação de NPCs hipotalâmicas. O objetivo do trabalho é determinar se a IL-6 é capaz de atuar em etapas do processo de neurogênese hipotalâmica (proliferação e/ou diferenciação celular). Utilizou-se modelos murinos (Camundongos Swiss albinus, camundongos knockout para IL-6 (KOil6-/-), e camundongos C57BL6/J) que foram expostos a dieta hiperlipídica, a injeções de palmitato, e a injeções de IL-6 em diferentes tempos. Além disso, utilizou-se culturas celulares (linhagens e culturas primárias) que foram expostas a IL-6 em diferentes tempos e concentrações. Os tecidos e células foram analisados por reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) e imunofluorescência. Primeiramente, camundongos Swiss que ingeriram menor quantidade de dieta hiperlipídica num intervalo de 24 horas apresentaram maior expressão hipotalâmica de Il-6 e Sox6 (fator de transcrição neurogênico). Após uma semana de dieta hiperlipídica, camundongos tratados com IL-6 intraperitoneal apresentaram menor ingestão e ganho de peso. Para camundongos desafiados com injeção central de ácido graxo, observou-se aumento na expressão hipotalâmica de Il6, seguido de aumento de fatores de transcrição Sox2 (relacionado a proliferação), Sox6 e Ascl1 (expressos em progenitores neuronais). Quando tratados com IL-6 intraperitoneal, camundongos Swiss em dieta padrão apresentaram aumento hipotalâmico de Il6, Sox2 e Sox6, além de aumento da proliferação celular em núcleo arqueado. Em contexto de ausência de IL-6, camundongos KOil6-/- adultos apresentaram maior peso, e reduzida expressão do neuropeptídeo anorexigênico proopiomelanocortina (Pomc) no hipotálamo. Além disso, camundongos KOil6-/- com sete dias de vida apresentaram maior expressão gênica de Gfap, marcador de astrócitos. Em cultura, células de KOil6-/- neonatos apresentaram elevada capacidade proliferativa, além de expressão anômala de Pomc e do neuropeptídeo orexigênico Npy durante a diferenciação. Quando tratadas com IL-6, NPCs hipotalâmicas de KOil6-/- apresentaram modulação de genes relacionados à proliferação, e aumento da expressão de doublecortina (Dcx) e NeuroD1. Além disso, houve redução da expressão de Pomc e Npy em NPCs tratadas com IL-6 durante a diferenciação. Nossos resultados sugerem que a IL-6 está relacionada ao controle do ganho de peso e a expressão de fatores relacionados à neurogênese no hipotálamo. A ausência da IL-6 está relacionada a diferenças na expressão gênica de neuropeptídeos e de genes expressos em astrócitos e em células quiescentes hipotalâmicas ao longo do desenvolvimento. Portanto, nossos dados sugerem que a IL-6 induz a diferenciação neuronal ao modular o nicho neurogênico hipotalâmico Abstract: The reestablishment of hypothalamic neuronal populations through neurogenesis has become a perspective for obesity control through mobilization of hypothalamic neural progenitor cells (NPCs). Evidence indicates that some cytokines may regulate the differentiation of NPCs in neurons. Interleukin 6 (IL-6) has several functions in the central nervous system, related to reduced apoptosis, neuronal differentiation and neuroprotection. However, there is no evidence of the influence of IL-6 on the proliferation and differentiation of hypothalamic NPCs. The aim of this work is to determine if IL-6 is able to act in stages of the process of hypothalamic neurogenesis (cell proliferation and / or differentiation). Murine models (Swiss albinus mice, IL-6 knockout mice (KOil6-/-), and C57BL6/J mice) were exposed to high fat diet, palmitate injections, and IL-6 injections in different times. In addition, cell cultures (strains and primary cultures) that were exposed to IL-6 at different times and concentrations were used. Tissues and cells were analyzed by real time polymerase chain reaction (qPCR) and immunofluorescence. Firstly, Swiss mice that ate a lower amount of high fat diet within 24 hours showed higher hypothalamic expression of Il-6 and Sox6 (neurogenic transcription factor). After one week of high fat diet, mice treated with intraperitoneal IL-6 showed lower food intake and weight gain. For mice challenged with central fatty acid injection, increased hypothalamic expression of Il6 was observed, followed by increased transcription factors Sox2 (proliferation-related), Sox6 and Ascl1 (expressed in neuronal progenitors). When treated with intraperitoneal IL-6, Swiss mice fed with chow diet showed hypothalamic increase of Il6, Sox2 and Sox6, as well as increased cell proliferation in arcuate nucleus. In the context of absence of IL-6, adult KOil6-/- mice showed higher weight, and reduced expression of proopiomelanocortin (Pomc) anorexigenic neuropeptide in the hypothalamus. In addition, one-week old KOil6-/- mice showed higher Gfap gene expression, astrocyte marker. In culture, neonatal KOil6-/- cells showed high proliferative ability, as well as anomalous expression of Pomc and the orexigenic neuropeptide Npy during differentiation. When treated with IL-6, KOil6-/- hypothalamic NPCs showed modulation of proliferation-related genes, and increased expression of doublecortin (Dcx) and NeuroD1. In addition, there was reduction of Pomc and Npy expression in IL-6 treated NPCs during differentiation. Our results suggest that IL-6 is related to weight gain control and expression of factors related to neurogenesis in the hypothalamus. The absence of IL-6 is related to differences in gene expression of neuropeptides and genes expressed in astrocytes and hypothalamic quiescent cells throughout development. Therefore, our data suggest that IL-6 induces neuronal differentiation by modulating the hypothalamic neurogenic niche Doutorado Cuidado e Inovação Tecnológica em Saúde e Enfermagem Doutora em Ciências da Saúde CAPES 01-P-1752/2016 FAPESP 2015/17717-0

Orientadores: Valéria Helena Alves Cagnon Quitete, Mário Roberto Maróstica Junior Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Considerando a íntima relação entre o envelhecimento, sobrepeso e o aparecimento de disfunções metabólicas e prostáticas, o presente trabalho teve como objetivo desenvolver extrato da casca da jaboticaba (ECJ) e avaliar seu efeito em parâmetros metabólicos e prostáticos frente à senescência e consumo de dieta hiperlipídica (DH). Um total de 70 camundongos FVB foram divididos nos seguintes grupos experimentais: JV (jovem¿3 meses), SE (senescente¿11 meses), SHP (senescente + DH), SJI (senescente + 2,9g/Kg ECJ), SJII (senescente + 5,8g/Kg ECJ), SHJI (senescente + DH + 2,9g/Kg ECJ) e SHJII (senescente + DH + 5,8g/Kg ECJ). Após 60 dias, os animais foram eutanaziados com posterior coleta de plasma, fígado e do lobo ventral da próstata. O ECJ demonstrou grande quantidade e variedade de compostos bioativos, além de alta atividade antioxidante in vitro. Considerando-se parâmetros metabólicos, o ECJ reduziu o ganho de peso, consumo energético, melhorou perfil lipídico e glicêmico, além de reduzir esteatose e marcadores de inflamação no fígado de camundongos senescentes que consumiram ou não DH. O efeito dose-dependente do ECJ no metabolismo, foi evidenciado considerando que promoveu a redução da glicose de jejum, intolerância à glicose e redução de marcadores inflamatórios no fígado de camundongos senescentes que consumiram ou não DH. As análises realizadas no lobo ventral prostático mostraram que o ECJ interferiu, de maneira geral, reduzindo o desequilíbrio hormonal, angiogênese, inflamação e estresse oxidativo em camundongos senescentes que consumiram ou não DH. Entretanto, o tratamento com a dose mais elevada de ECJ mostrou-se mais efetivo na regulação dos níveis dos marcadores destes processos avaliados na próstata, permitindo maior preservação da morfologia desta glândula associado a redução de lesões pré-malignas. Além disso, foi observado que o consumo de DH durante o envelhecimento intensificou as alterações metabólicas, hepáticas e prostáticas avaliadas neste período, contribuindo para aumento na incidência de lesões. Dessa forma, a ação anti-inflamatória, hipoglicemiante e a capacidade de interferir no metabolismo de lipídeos, atribuída ao ECJ, contribuíram para a prevenção do pré-diabetes e da doença hepática gordurosa não alcoólica nos modelos experimentais avaliados. Considerando-se parâmetros prostáticos, o ECJ exerceu efeito dose-dependente positivo reestabelecendo o equilíbrio hormonal, inflamatório, angiogênico e oxidativo. Estes efeitos possivelmente possibilitaram melhor interação entre epitélio e estroma prostático, contribuindo para a recuperação do microambiente desta glândula alterado pelo envelhecimento associado ou não ao consumo de DH. Dessa forma, o ECJ pode ser indicado como uma terapia potencial na prevenção de alterações metabólicas, hepáticas e prostáticas durante o envelhecimento associado ou não ao sobrepeso Abstract: Considering the close relationship between aging, overweight and the appearance of metabolic and prostatic dysfunctions, the objective of this study was to develop the patented jaboticaba peel extract (PJE) and to evaluate its effect on metabolic and prostatic parameters of aged or high-fat-fed aged mice. A total of 70 FVB mice were divided into the following experimental groups: YG (young-3 months), SE (senescent-11 months), HfSE (senescent + high-fat diet (HFD), JSEI (senescent + 2.9g/kg PJE), JSEII (senescent + 5.8 g/kg PJE), HfJSEI (senescent + HFD + 2.9g/kg PJE) and HfJSEII (senescent + HFD + 5.8g/kg PJE). After 60 days, the animals were euthanized with subsequent plasma, liver and ventral prostate lobe removal. The PJE demonstrated a large amount and variety of bioactive compounds, in addition to high antioxidant activity in vitro. Considering metabolic parameters, the PJE interfered reducing weight gain, energy consumption, improving lipid and glycemic profile, as well as reducing steatosis and inflammatory markers in the liver of aged mice or HFD-fed aged mice. The dose-dependent effect of PJE on the metabolism was evidenced by considering the reduction of fasting glucose, glucose intolerance and the decreased liver inflammatory markers levels in aged mice or HFD-fed aged mice. The analyzes performed on the prostatic ventral lobe showed that the PJE interfered, in general, reducing hormone imbalance, angiogenesis, inflammation and oxidative stress in aged mice or HFD-fed aged mice. However, the treatment with the highest PJE dose was more effective in regulating the levels of the markers of these processes in the prostate, allowing a greater preservation of the morphology of this gland associated with a reduction of premalignant lesions. In addition, it was observed that the HFD intake during aging intensified the metabolic and prostatic changes verified in this period, contributing to an increased lesions incidence. Thus, the PJE anti-inflammatory and hypoglycemic action, as well as its ability to interfere in lipid metabolism, contributed to the pre-diabetes and nonalcoholic fatty liver disease prevention in these experimental animal models. Considering the prostatic parameters, the PJE exerted a positive dose-dependent effect reestablishing the hormonal, inflammatory, angiogenic and oxidative balance. These effects, improved the epithelium and stroma interactions, contributing to the recovery of the prostate microenvironment altered by aging or HFD intake. Thus, the PJE can be indicated as a potential therapy in the prevention of metabolic, hepatic and prostatic changes due to aging associated or not with overweight Doutorado Biologia Celular Doutora em Biologia Celular e Estrutural CNPQ 141766/2015-8 FAPESP 2015/25714-1

Orientador: Hosana Gomes Rodrigues Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Aplicadas Resumo: A inflamacao e a primeira fase do processo de cicatrizacao de feridas e esta pode ser dividida em resposta inflamatoria inicial e tardia. A resposta inflamatoria tardia e essencial ao controle de mediadores pro-inflamatorios e resolucao da inflamacao, sendo determinante ao inicio da proxima fase de formacao de tecido ou proliferacao. Acidos graxos poli-insaturados das familias 'omega'-6 e 'omega'-3, modulam o perfil inflamatorio, sendo cada vez mais estudados no processo de reparo tecidual. Assim, buscando compreender o papel destes acidos graxos na fase inflamatoria tardia do processo de cicatrizacao de feridas, utilizamos como objeto de estudo, camundongos transgenicos denominados FAT-1, capazes de produzir endogenamente, acidos graxos 'omega'-3 a partir de acidos graxos 'omega'-6. Para verificar a composicao lipidica destes camundongos, avaliamos por cromatografia gasosa, o plasma e o tecido cicatricial, 3 dias apos a inducao da ferida. No plasma, os camundongos transgenicos reduziram a concentracao do acido graxo araquidonico (AA) e aumentaram a concentracao dos acidos graxos alfa-linolenico (ALA), eicosapentaenoico (EPA) e docosahexaenoico (DHA), reduzindo a proporcao 'omega'-6/'omega'-3 em 32,9%, quando comparados ao grupo wild type (WT). Ja no tecido cicatricial, estes camundongos apresentaram reducao da porcentagem de AA nas classes lipidicas teciduais de fosfatidilcolina (PC) e fosfatidiletalonamina (PE) e, aumento dos acidos graxos docosapentaenoico (DPA) e DHA nas classes lipidicas teciduais de PC, PE e de triacilglicerol (TAG). Com isto, os camundongos transgenicos obtiveram uma reducao da proporcao 'omega'-6/'omega'-3, equivalente a 56,4% em PC, 55,1% em PE e 39,1% em TAG, em relacao ao grupo WT. Em analise do fechamento da ferida pelo programa Image J, os camundongos FAT-1 mantiveram a area da ferida maior desde o 1¿ dia apos a inducao, sendo que no ultimo dia de analise (14¿ dia), a area da ferida era duas vezes maior que a do grupo WT (p

Orientador: Eliana Pereira de Araújo Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Enfermagem Resumo: Título: Suporte social percebido, autocuidado e o controle glicêmico de pacientes com diabetes tipo 2 O diabetes é um dos maiores problemas de saúde pública ao redor do mundo. Conhecer as características dos indivíduos diabéticos e sua relação com a doença é de extrema importância para o desenvolvimento de estratégias que auxiliem no tratamento desta população. Este trabalho teve o objetivo de avaliar o grau de suporte social e sua relação com o autocuidado e o controle glicêmico dos usuários diabéticos tipo 2. Trata-se de um estudo transversal de abordagem quantitativa cujos dados foram obtidos por meio do Questionário do Suporte Social, Questionário de Autocuidado em Diabetes e de um instrumento para obtenção dos dados sociodemográficos e clínicos. A pesquisa foi realizada nas Unidades de Atenção Primária à Saúde de um município do interior de Minas Gerais. A amostra foi por conveniência, constituída por 154 indivíduos. Foram incluídos no estudo os usuários diabéticos tipo 2 com idade igual ou superior a 18 anos, que tinham capacidade de comunicação oral e de compreensão do conteúdo dos questionários. Foram excluídos gestantes, indivíduos com dificuldade visual ou motora que os impedisse de desenvolver as atividades da vida diária ou ainda aqueles com incapacidades que interferissem na compreensão das perguntas contidas nos questionários. Para análise dos dados foi utilizado os programas Excel e Statical Package for Social Sience versão 20.0®. Os entrevistados foram predominantemente do sexo feminino, (62,34%) com idade média de 63,7 anos, cuja média de hemoglobina glicada ficou acima do índice desejável (7,75%). Nessa população predominou comorbidades como a hipertensão arterial (83,12%), dislipidemia (74,68%), obesidade (51,95%) e doenças ósteo-articulares diversas (61,69%). Além disso, 64,94% dos indivíduos tinham diagnóstico de neuropatia advindas da doença. A média do número de pessoas reconhecidas como suportivas foi 1,21 por indivíduo e o grau de satisfação com o apoio social recebido mostrou uma mediana de 5,69 de um índice máximo de 6. Quando relacionamos estes dados ao controle glicêmico, verificamos que os indivíduos que mantiveram a glicemia em níveis inadequados são os que apresentaram hipertensão arterial (60,94%) (p < 0,0136), obesidade (67,50%) (p < 0,0042), nefropatia (85,71%) (p < 0,0207) e depressão (84,21%) (p < 0,0092). Não houve relação significante entre o autocuidado, suporte social e controle glicêmico. Desta forma, podemos concluir que embora os indivíduos tenham informado estar satisfeitos com o suporte social que recebem e realizarem aspectos importantes do autocuidado, isso não foi o suficiente para apresentarem controle glicêmico satisfatório. Esses resultados mostram que novas atitudes e estratégias devem ser desenvolvidas por parte da equipe de saúde para que o indivíduo com diabetes tenha o suporte necessário para cuidar da saúde de forma efetiva. Descritores: Diabetes Mellitus; Apoio Social; Autocuidado; Enfermagem. Linha de Pesquisa: Processo de Cuidar em Saúde e Enfermagem Abstract: Diabetes is one of the biggest public health problems around the world. Understand the characteristics of diabetic individuals and their relationships with the disease are the extreme importance for the development of strategies that can help treating this population. This work aimed to evaluate the degree of social support and its relationship with self-care and glucose control of type 2 diabetic individuals. This is a cross-sectional study of a quantitative approach whose data were obtained through the Social Support Questionnaire, Self-care in Diabetes Questionnaire and from an instrument to obtain the socio-demographic and clinical data. The survey was performed in the primary health care units of a city in Minas Gerais state countryside. The sample was, by convenience, formed by 154 individuals. Type 2 diabetics aged 18 years or more were included, those who had oral communication ability and comprehension of the questionnaires content. Pregnant women, individuals with visual or motor difficulty that would stop them from developing activities of daily living or those with disabilities that interfere with understanding of questions contained in the questionnaires were excluded from the study. For analysis of the data it was used the Excel and Statistical package software for social science version 20.0. Respondents were predominantly female (62.34%) with mean age of 63.7 whose glycated hemoglobin got above the index desirable (7.75). In this population were present comorbidities such as arterial hypertension (83.12%), dyslipidemia (74.68%), obesity (51.95%) and several osteo-articular diseases (61, 69%). In addition, 64.94% of the individuals showed neuropathy from DM. In addition, 64.94% of the individuals showed neuropathy from DM. The average number of people recognized as supportive was 1.21 per individual and the degree of satisfaction on social support received showed a median of 5, 69% a maximum index 6. When we related clinical aspects with the glucose control, we realized that the individuals who maintained blood sugar in inadequate levels were the ones who showed arterial hypertension 60.94% (p < 0.0136), obesity (67.50%) (p < 0.0042), neuropathy (87.71%) (p < 0.0207), and depression (84.21%) (p < 0.0092). Surprisingly, there was no significant relation among self-care, social support and glucose control. Therefore, we can conclude that although individuals reported being satisfied with the social support received and having performed important aspects of self-care, it was not enough to reflect on a satisfactory glucose control. These results show us that new attitudes and strategies should be developed by the healthcare staff so that the individual with diabetes can have the necessary support to take care of health effectively. Key words: Diabetes Mellitus; Social Support; Self-Care; Nursing Doutorado Enfermagem e Trabalho Doutora em Ciências da Saúde CAPES 2303800222120142

Orientador: Maria Helena de Melo Lima Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Enfermagem Resumo: Objetivo: Avaliar a efetividade da estratégia educativa de higiene do sono e exposição à luz sobre a qualidade do sono, o estresse emocional e o controle glicêmico em pessoas com diabetes mellitus tipo 2. Materiais e Métodos: Trata-se de um ensaio clinico pragmático randomizado, com duração de 3 meses de seguimento, realizado com 91 participantes. Os participantes foram adultos, com idades entre 33 e 65 anos, em acompanhamento em Unidades de Saúde da Família de um município do Sul de Minas Gerais, em tratamento há pelo menos 6 meses com antidiabéticos orais e/ou insulina, maus dormidores segundo o Índice de Qualidade do Sono de Pittsburgh (PSQI) e com cognição preservada, de acordo com o Mini Exame do Estado Mental. As pessoas que faziam uso de medicamentos que interferiam no sono e que eram trabalhadoras noturnas foram excluídas. Houve randomização em dois grupos: grupo 1 (G1), que recebeu estratégia educativa de higiene do sono e exposição à luz, e grupo 2 (G2), que recebeu orientações educativas em diabetes mellitus. A coleta de dados ocorreu no período de setembro de 2015 a setembro de 2016, com a aplicação dos seguintes instrumentos: Instrumento de caracterização sociodemográfica e clínica, PSQI, para avaliação da qualidade do sono e Diabetes Distress Scale (DDS), para avaliação do estresse emocional relacionado ao diabetes. Ambos os grupos receberam orientações individuais presenciais, com intervalos de um mês, e reforços telefônicos a cada semana, com exceção do último mês. A monitorização telefônica foi conduzida pela pesquisadora, com duração média de 20 minutos, em horários previamente acordados com os participantes, de acordo com sua disponibilidade. Durante as ligações, a pesquisadora preenchia um instrumento de controle (Apêndice 7), com perguntas relacionadas às dúvidas sobre as intervenções, reforço das mesmas, quantidade de dias que seguiu as orientações e questionamento sobre a ida ao próximo encontro. Os participantes foram avaliados na linha de base e após 3 meses de seguimento. Foram descontinuados nove participantes, que iniciaram o uso de medicamentos que interferiam no sono, durante a coleta de dados. O estudo recebeu parecer favorável do Comitê de Ética em Pesquisa da Universidade Estadual de Campinas. Todos os participantes arrolados assinaram o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido, conforme determinado pela Resolução 466/12 do Conselho Nacional de Saúde e pela Declaração de Helsinki. Os dados foram analisados com suporte do software Statistical Analysis System (SAS), versão 9.4. Para as análises estatísticas, foram utilizados modelos lineares de efeitos mistos e modelo de regressão linear múltipla, além de estatística descritiva. Para todas as análises, foi adotado o nível de significância de 5% (p0,05). Resultados: A qualidade do sono mostrou diferença significante no G1 quando comparada ao G2 ao longo do seguimento (p=0,0272). Ambos os grupos apresentaram melhora estatisticamente significante na qualidade do sono e no estresse emocional 3 meses após o seguimento. O G2 apresentou também melhora estatisticamente significante no controle metabólico (p=0,0228). Modelo de regressão linear explicou em 31% a variabilidade da qualidade do sono. Conclusões: Estratégia educativa realizada por meio de medidas de higiene do sono e exposição à luz solar em indivíduos com diabetes mellitus tipo 2 considerados maus dormidores proporcionou melhora na qualidade do sono e no estresse emocional relacionado ao diabetes, com diminuição dos valores da HbA1c. Por outro lado, orientações educativas em diabetes mellitus possuem efeito positivo na melhora da qualidade do sono, do estresse emocional e do controle glicêmico em pessoas com diabetes mellitus tipo 2 Abstract: Objective: To evaluate the efficacy of sleep hygiene educational strategy and light exposure on sleep quality, emotional stress and glycemic control in people with type 2 diabetes mellitus. Materials and Methods: A 3-month follow-up randomized pragmatic clinical trial with 91 participants. The participants were adults with ages between 33 and 65 years, being assisted in family care units of a city in south Minas Gerais, under treatment for at least 6 months with oral antidiabetics and/or insulin, with poor sleep quality, according to the Pittsburgh Sleep Quality Index (PSQI) scores and with preserved cognition, according to the Mini-Mental State Examination. People taking medication that interferes with the sleep and night workers were excluded. They were randomized into two groups: group 1 (G1), which received orientation about sleep hygiene therapies and exposure to light, and group 2 (G2), which received educational orientations in diabetes mellitus. The data collection process was carried out between September 2015 and September 2016 and the following instruments were used: Sociodemographic and clinical characterization tool, (PSQI), for sleep quality evaluation and Diabetes Distress Scale (DDS), for type 2 diabetes-related emotional stress evaluation. Both groups received individual face-to-face orientations every month for three months and follow-up calls every week with exception of the last month. Telephone monitoring was conducted by the researcher, with an average duration of 20 minutes, at times previously agreed with the participants, according to their availability. During the telephone calls, the researcher filled out a control tool (Appendix 7), with questions related to doubts about interventions, reinforcement of them, number of days that followed the guidelines and questioning if will go to the next meeting. The participants were evaluated at baseline and after three months of follow-up. Nine people were discontinued from the study because during the data collection phase they started taking medication that interfered with the sleep. This study was acknowledged by the Research Ethics Committee of the State University of Campinas. All the people enrolled signed the Consent Term in accordance with the resolution 466/12 of the National Health Council and the Declaration of Helsinki. The data were analyzed with Statistical Analysis System (SAS) software version 9.4 support. Linear mixed-effects models and multiple linear regression model as well as descriptive statistics were used for statistical analysis. Results: Sleep quality showed a significant difference in G1 when compared to G2 during follow-up (p=0.0272). Both groups showed statistically significant improvement in sleep quality and emotional stress 3 months after follow-up. The G2 also showed statistically significant improvement in the metabolic control (p=0.0228). Linear regression model explained in 31% the variability of sleep quality. Conclusion: Educational strategy performed through measures of sleep hygiene and exposure to light in people with type 2 diabetes considered to be bad sleepers provided na improvement in sleep quality and emotional stress related to diabetes, with a decrease in HbA1c levels. In the other hand, educational orientations in Diabetes Mellitus have a positive effect on the improvement of sleep quality, emotional stress and glycemic control in people with type 2 diabetes Doutorado Enfermagem e Trabalho Doutora em Ciências da Saúde

Orientadores: Mário Roberto Maróstica Junior, Carla Evelyn Coimbra Nuñez Dissertação (mestrado) ¿ Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: A obesidade é caracterizada pelo acúmulo excessivo de tecido adiposo branco corporal, com etiologia complexa e multifatorial. Dentre os mecanismos fisiopatológicos da doença, sabe-se que a hipertrofia e hiperplasia dos adipócitos desencadeia um quadro de inflamação crônica de baixo grau, com consequências sistêmicas. Estas alterações, geradas pelo aumento do estresse celular podem ser verificadas por meio de alterações moleculares importantes, sendo um dos processos afetados a autofagia, um processo de degradação fundamental à homeostase, com efeitos distintos em diferentes células. No tecido adiposo, o aumento da autofagia pode estar relacionado à hipertrofia e hiperplasia dos adipócitos, ao estresse celular e à inflamação. Desta forma, a investigação de compostos que possam contribuir na diminuição deste processo no tecido parece ser uma estratégia de combate à obesidade. Neste cenário, inserem-se os benefícios do consumo das substâncias bioativas presentes em alimentos. A jabuticaba (Myrciaria sp.), fruta nativa da América do Sul, é rica em flavonoides em sua casca, o que resulta em efeitos positivos à saúde, como a redução do estresse oxidativo, da peroxidação lipídica e benefícios cardiovasculares. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da suplementação de casca de jabuticaba liofilizada, na dieta ou na forma de extrato, sobre a modulação do processo autofágico em tecido adiposo de camundongos C57BL/6J alimentados com dieta hiperlipídica ou normolipídica. A suplementação foi realizada por duas vias: por meio de suplementação de 4% de casca em dieta, por 4 semanas, ou através da administração diária de extrato hidroetanólico da casca, via gavagem (aproximadamente 10mL/kg de peso de animal ao dia), por 6 semanas. Com base nos resultados obtidos, verificou-se que a administração de casca de jabuticaba foi efetiva na redução da sinalização da autofagia (menor concentração das proteínas Beclin-1 e LC3BII e aumento da concentração da proteína SQSTM/p62) em tecido adiposo epididimal, nas duas formas de tratamento, em animais alimentados com dieta hiperlipídica. Contudo, a dose diária necessária de extrato foi inferior à quantidade de casca de jabuticaba ingerida pela suplementação, o que torna o consumo do extrato mais potente. Além da modulação autofágica em tecido adiposo, verificou-se que o extrato de casca de jabuticaba melhorou o perfil lipídico e aumentou a sensibilidade à insulina em camundongos alimentados com dieta hiperlípidica Abstract: The obesity is characterized by excessive accumulation of white adipose tissue, with complex and multifactorial etiology. Among the disease¿s physiopathological mechanisms, the adipocyte hypertrophy and hyperplasia is known to trigger a chronic low-grade inflammation, with systemic consequences. These alterations, generated by the increase in cellular stress can be verified with the help of important molecular changes. One of the processes affected is the autophagy, a fundamental mechanism of cellular degradation important to the homeostasis and with different effects in each cell type. In adipose tissue, increased autophagy is related to adipocyte hypertrophy and hyperplasia, cellular stress and inflammation. In this way, the investigation of compounds that may contribute to the reduction in this process could be a strategy for obesity combat. In this way, the benefits of bioactive compounds consumption presents in food are inserted. Jaboticaba (Myrciaria sp.) is a native fruit from South America rich in phytochemicals in peel, whose consumption results in improved health effects, such as reduction of oxidative stress, lipid peroxidation and cardiovascular benefits. The objective of this study was to evaluate the effect of freeze-dried jaboticaba peel or its extract under the autophagy modulation in adipose tissue of C57BL/6 mice fed with high-fat or normocaloric diet. The supplementation was performed by two ways: through whole freeze-dried jaboticaba peel in diet, for 4 weeks, or through gavage of freeze-dried jaboticaba peel hydroethanolic extract (approximately 10mL/kg mice weight). The results showed that jaboticaba peel was effective in the reduction of autophagy signalization (reduction in the concentration of Beclin-1 and LCBII protein and increase in the concentration of SQSTM/p62 protein) in epididymal adipose tissue, in both forms of treatment, in animals fed with high-fat diet. However, the dose required for extract was lower than amount of jaboticaba peel ingested by supplementation, what do the extract consumption more potent. In addition to autophagy modulation in adipose tissue, jaboticaba peel extract improved the lipid profile and increased the insulin sensitivity in mice fed a high-fat diet Mestrado Nutrição Experimental e Aplicada à Tecnologia de Alimentos Mestra em Alimentos e Nutrição CNPQ 131099/2015-1 FAPESP 2015/20766-3

Orientadores: Eliana Pereira de Araujo, Maria Helena Melo Lima Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Enfermagem Resumo: Feridas crónicas de pacientes diabéticos, além de comprometer a qualidade de vida, são um grave problema de saúde pública. O Topiramato (TPM) tem sido usado topicamente para tratar feridas e mostrou acelerar o processo de cicatrização, mas o efeito num modelo de feridas diabético e os mecanismos moleculares pelos quais age não foi ainda elucidado. O objetivo deste estudo foi investigar o efeito macroscópico e molecular do TPM tópico no processo de cicatrização de feridas de camundongos diabéticos e não diabéticos. Comprovada a hiperglicemia, foi realizada duas lesões excecionais no dorso dos animais e logo tratadas cada dia com creme enriquecido com Topiramato ao 2% ou placebo como controle. Nos dias 1, 3, 7 e 14 os animais foram sacrificados e o tecido foi extraído para processamento e analise. Os resultados indicam que o tratamento tópico com TPM acelera o tempo de cicatrização de feridas em camundongos diabético, porém não acelera nos animais não diabéticos. No dia 14 o tratamento com TPM aumenta as citocinas anti-inflamatórias IL-10 e fatores de crescimento e quimioatractores TGF e SOX-2. Neste dia, o TPM ativa a via de insulina a traves da fosforilação de IRS- 1 e AKT. Neste sentido, podemos concluir que o uso do creme enriquecido com TPM ao 2% mostrou-se eficaz na aceleração da cicatrização no modelo de feridas diabético com aumento do da ativação da sinalização de insulina e melhora da expressão de fatores de crescimento e quimioatractores na fase de remodelação Abstract: Chronic wounds of diabetic patients, in addition to compromising quality of life, they are a serious public health problem. Topiramate (TPM) has been used topically to treat wounds and has been shown to accelerate the healing process, but the effect on a diabetic wound model and the molecular mechanisms by which it acts has not yet been elucidated. The aim of this study was to investigate the macroscopic and molecular effect of TPM topical treatment in the wound healing process on diabetic non-diabetic and mice. Once hyperglycemia was confirmed, two excisional lesions were performed on the dorsum of the animals and then treated each day with 2% TPM cream or placebo cream as a control. On days 1, 3, 7 and 14 the animals were sacrificed and the tissue was extracted for processing and analysis. The results demonstrated that topical treatment with TPM cream accelerates wound healing time in diabetic mice, but does not in non-diabetic animals. On day 14, the treatment with TPM increased the anti-inflammatory cytokines IL-10, growth factors, and chemoattractants TGF and SOX2. On this day, TPM activates the insulin pathway through the phosphorylation of IRS-1 and AKT. Therefore, we conclude that the use of 2% TPM cream shown to be effective in accelerating the wound healing time in the diabetic wound model with increased activation of insulin signaling and improved expression of growth and chemoattractants factors in the remodeling phase Mestrado Enfermagem e Trabalho Mestre em Ciências da Saúde FAPESP 2013/07607-8

Orientador: Dennys Esper Corrêa Cintra Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Aplicadas Resumo: A obesidade representa um dos maiores problemas de saúde no Brasil e no mundo, e constitui o pilar para o desenvolvimento de diversas outras doenças correlatas como diabetes mellitus tipo 2, hipertensão e aterosclerose. Produto de um balanço energético positivo, a obesidade vai muito além do peso. Reconhecer que o excesso de adiposidade inicia e propaga um estado de inflamação crônica e de baixo-grau estendeu a compreensão de como a obesidade é capaz de deflagrar comorbidades associadas. Através de mecanismos distintos, mas com interações entre suas respectivas vias de sinalização, a ativação do receptor TLR4 e o estresse de retículo endoplasmático parecem compor o alicerce que sustenta o início do desenvolvimento de doenças cardiovasculares associadas à obesidade. O disparo e integração destas vias que, em última análise, corroboram na gênese dos distúrbios metabólicos característicos dessa doença e do processo aterosclerótico tornaram-se alvo terapêutico. Hoje sabe-se que a patogênese da obesidade repousa sobre um assoalho inflamatório que atua como causa e consequência de anormalidades do metabolismo glicídico e lipídico. Apontados há muitos anos como adjuvantes ao tratamento de dislipidemias e doenças cardiovasculares, os ácidos graxos ômega-3 (?3) ainda não apresentam seus mecanismos de ação totalmente definidos. A recente descrição de receptores de membrana, como o GPR120 (FFAR4) e GPR40 (FFAR1), capazes de reconhecer e serem ativados por estes ácidos graxos, identificou uma nova rota anti-inflamatória deflagrada por estes lipídeos. Em condições de obesidade, foram demonstrados no sistema nervoso central auxiliando a recuperação do controle da fome exercido pelo hipotálamo e em tecidos periféricos no resgate da homeostase metabólica. No âmbito do sistema cardiovascular, o projeto em questão apresenta resultados que demonstram a remissão, em parte, da inflamação e do estresse de retículo endoplasmático na aorta de camundongos Swiss obesos alimentados com dieta hiperlipídica com parcial substituição da banha por óleo de linhaça (fonte de ?3). Evidenciou-se agonismo do receptor GPR120 neste tecido, contudo, não houve atenuação significativa na redução do acoplamento entre TAB1 e TAK1, pertencentes à cascata de sinalização do TLR4. No entanto, foram observadas reduções significativas na expressão proteica de proteínas pró-inflamatórias e de estresse de retículo endoplasmático. Ainda, demonstrou-se a recuperação da sinalização da insulina e melhora significativa no perfil de lipídeos séricos, ambos com ações hemodinâmicas de particular interesse nas doenças cardiovasculares. A espectrometria de massa detectou a incorporação do ácido graxo ?-linolênico na aorta dos animais que receberam dieta enriquecida com óleo de linhaça e atestou melhora no padrão do perfil dos ácidos graxos componentes deste tecido. Em camundongos LDLr knockout, a ativação do receptor GPR120 não demonstrou ser a principal via pelo qual os ácidos graxos ?3 promovem sinais de remissão da inflamação e de estresse de retículo endoplasmático. Assim como observado nos animais Swiss, houve melhora significativa no padrão de lípides séricos nos animais que receberam maior oferta destes ácidos graxos insaturados, indicando que seus efeitos cardioprotetores parecem ter íntima associação com a melhora destes parâmetros metabólicos Abstract: Obesity is one of the most important health issue worldwide and many obesity-related disorders such as type 2 diabetes mellitus, hypertension and atherosclerosis exarcebates the problem. Many studies have suggested the chronic and low-grade inflammatory status of obesity as the major factor to development of metabolic disorders. The synergism between the activation of TLR4 and endoplasmatic reticulum stress pathways has been showed to be key process in the progress and development of obesity-associated cardiovascular diseases, mainly during the first steps of atherogenesis, becoming upstream pathogenic targets in cardiometabolic diseases. The cardiovascular benefits of omega-3 consumption are attributed to it¿s hypotriclyceridemic and antiinflammatory effects, but the celular mechanisms of action of this lipids are not fully understood. Recently, several membrane receptors such as GPR120 and GPR40 were reported as free fatty acid receptors and it¿s activation are able to trigger antiinflammatory signaling. Experimental studies showed expression and activation of GPR120 by omega-3 in central nervous system and peripheric tissues of obese mice and this stimulation abolishes inflammation, restoring the control of food intake, leptin and insulin sensitivity. In this study, the activation of GPR120 in aorta did not attenuates TAB1 and TAK1 interaction, but was observed significantly decreasing of inflammatory and endoplasmatic reticulum stress markers in aorta of obese Swiss mice with flaxseed oil-enriched hyperlipidic diet (FS). The FS group improved insulin signaling in this tissue and ameliorates the serum lipid profile. The mass spectrometry detected the incorporation of ALA in FS group and showed enhanced lipid content in aorta, with higher prevalence of unsaturated fatty acids than high fat diet group. In LDLr knockout mice, the GPR120 activation did not seems to be fundamental to decrease inflammation and endoplasmatic reticulum stress, and the results also showed improved serum lipids in FS group. In short, the cardioprotection effects exercised by omega-3 appear to be attributed to decreasing in inflammatory pathways and improvement in metabolic parameters, without direct dependence of GPR120 Mestrado Nutrição Mestre em Ciências da Nutrição e do Esporte e Metabolismo FAPESP 2013/25742-0

Orientador: Marco Antonio de Carvalho-Filho Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Introdução: O reconhecimento precoce da sepse é crucial para o tratamento adequado e a melhora no desfecho clínico. O diagnóstico de sepse é estabelecido quando um paciente com infecção suspeita ou comprovada apresenta pelo menos dois sinais de síndrome da resposta inflamatória sistêmica (SRIS) - taquicardia, taquipnéia, alteração da temperatura, ou alteração na contagem de leucócitos (leucocitose, leucopenia ou percentual de formas jovens acima de 10%). Em pacientes afebris a sepse pode ser subestimada, mesmo em pacientes com um critério de SRIS. Objetivo: O objetivo deste estudo foi identificar a presença de sinais e sintomas capazes de predizer a sepse, em pacientes afebris admitidos no departamento de emergência, com suspeita de infecção e apenas um critério de SIRS (taquicardia ou taquipnéia), e que, portanto, dependiam da contagem de leucócitos para o diagnóstico da sepse. Materiais e métodos: Avaliamos prospectivamente pacientes afebris, admitidos no departamento de emergência, com suspeita de infecção e taquicardia (frequência cardíaca acima de 90/minuto) ou taquipnéia (frequência respiratória acima de 20/ minuto). Todos os pacientes foram submetidos a contagem de leucócitos, e foram considerados sépticos se apresentassem leucócitos acima de 12.000 células/mm3 ou abaixo de 4.000 células/mm3 ou formas jovens acima de 10%. Resultados: Setenta pacientes foram incluídos no estudo. Trinta e sete (52.86%) apresentaram os critérios de sepse. Na análise univariada, o relato de febre aferida apresentou razão de chances (RC) de 5.4 (IC 95% 1383-21215; P=0.0153), e o relato de febre percebida uma RC de 2.5 (IC 95% 0.977-6.746; P=0.0559). Na análise multivariada, o relato de febre aferida apresentou uma RC de 5.9 (IC 95% 1.450-24.295; P=0.0133), e valores maiores da pressão de pulso (PP) uma RC de 1.4 (IC 95% 1.004-1.964; P=0.0471). Observamos aumento exponencial da probabilidade da sepse de acordo com o aumento da frequência cardíaca, e quando a frequência cardíaca foi incluída na análise univariada (RC=1.5; IC 95% 1.130-1.178; P=0.0072) e na análise multivariada (RC=2.1; IC 95% 1.400-3.188; P=0.0004) houve aumento do risco de sepse associado a intensidade da taquicardia. Todos os achados clínicos apresentaram baixa especificidade (16.2%-59.3%). O relato de febre aferida e a pressão arterial menor que 70 mmHg apresentaram ambas altas especificidades (90.9%) e altas razões de verossimilhança positiva (RV) de 3.86 e 2.08, respectivamente. Os outros achados apresentaram RV de aproximadamente 1. O nomograma da relação entre o relato de febre aferida e a sepse demonstrou aumento na chance de sepse de 53% (pré-teste) para aproximadamente 80% (pós-teste). Conclusões: O reconhecimento do relato de febre aferida, o aumento da PP e a intensidade do aumento da frequência cardíaca em pacientes afebris que se apresentam no departamento de emergência, pode melhorar o reconhecimento da sepse em pacientes com suspeita de infecção com taquicardia ou taquipnéia. Esses resultados são particularmente de interesse em serviços de saúde onde o hemograma não esteja prontamente disponível, como em áreas remotas, no atendimento ambulatorial, em departamentos de emergência lotados e com poucos recursos, ou em países subdesenvolvidos Abstract: Introduction: Prompt sepsis recognition is crucial to adequate treatment and improved clinical outcomes. Sepsis diagnosis is stablished when a patient with suspected or proven infection presents at least two systemic inflammatory response syndrome (SIRS) signals - tachycardia, tachypnea, altered temperature, or changes in leukocyte count (leukocytosis, leukopenia or percentage of young forms above 10%). In afebrile patients, sepsis may be underestimated, even in patients with one SIRS criteria. Objective: The objective of this study was to identify the presence of signs and symptoms capable of predicting sepsis, in afebrile patients admitted to the emergency department, with suspected infection and only one SIRS criteria (tachycardia and tachypnea), and therefore, depended on leukocyte count to diagnose sepsis. Materials and methods: We prospectively evaluated afebrile patients admitted to the emergency department, with suspected infection and tachycardia (heart rate above 90/minute) or tachypnea (respiratory rate above 20/min). All patients were subjected to leukocyte count, and were considered septic if they presented leukocyte count above 12,000 cells/mm3 or below 4,000 cells/mm3 or young forms percentage above 10%. Results: Seventy patients were included in the study. Thirty-seven (52.86%) met sepsis criteria. On univariate analysis, self-measured fever showed an odds ratio (OR) of 5.4 (95% CI 1383-21215; P=0.0153), and self-reported fever an OR of 2.5 (95% CI 0.977-6.746; P=0.0559). On multivariate analysis, self-measured fever showed an OR of 5.9 (CI 95% 1.450-24.295; P=0.0133), and increased pulse pressure (PP) an OR of 1.4 (CI 95% 1.004-1.964; P=0.0471). It was observed an exponential increase of sepsis probability according to the increase of heart rate, and when heart rate was included in univariate (OR=1.5; 95% CI 1.130-1.178; P=0.0072) and multivariate analysis (OR=2.1; CI 95% 1.400-3.188; P=0.0004) there was an increased risk of sepsis associated to the intensity of tachycardia. All findings performed low sensitivities (16.2%-59.3%). Self-measured fever and MAP less than 70 mmHg performed both high specificities (90.9%) and high positive likelihood ratios (LRs) of 3.86 and 2.08, respectively. Other findings performed positive LRs close to 1. The nomogram of the relationship between self-measured fever and sepsis showed an increase of sepsis chance from 53% (pre-test) to approximately 80% (post-test). Conclusions: The recognition of self-measured fever, increased PP and the intensity of the increase in heart rate in afebrile patients presenting to the ED, may improve sepsis recognition in patients with tachycardia or tachypnea. These results are of particular interest to health facilities where white blood cell counts are not readily available, such as in remote areas, ambulatory settings, crowded and low-resources emergency departments, or in low income countries Mestrado Clínica Médica Mestra em Clínica Médica

Orientadores: Eliana Pereira de Araujo, Lício Augusto Velloso Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: O consumo de dietas ricas em gorduras saturadas ativa uma resposta inflamatória no hipotálamo e danifica neurônios envolvidos na regulação da ingestão calórica e do gasto energético. Não se sabe a razão pela qual o hipotálamo médio basal é o principal alvo da inflamação cerebral induzida pela dieta rica em gordura. Neste estudo aventamos a hipótese que a barreira hemato-encefálica na eminência mediana é particularmente sensível às gorduras alimentares. Nós mostramos que a exposição à dieta rica em gordura por curtos períodos é suficiente para aumentar a expressão de citocinas inflamatórias e fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF) na eminência mediana, precedendo alterações em outros órgãos circunventriculares. O consumo de gorduras na dieta leva a uma perda precoce da organização estrutural de tanicitos-?1 nas proximidades da interface entre a eminência mediana e o hipotálamo médio basal. Tal fenômeno se acompanha de uma oscilação dos níveis de expressão do BDNF, que inicialmente se eleva e em seguida se reduz a níveis inferiores aos de base. A imunoneutralização do BDNF acentua os danos estruturais e funcionais induzidos pela dieta na barreira hemato-encefálica da eminência mediana, acompanhado de aumento do ganho de peso e da inflamação hipotalâmica. Assim, a barreira hemato-encefálica na eminência mediana é afetada nos níveis funcional e estrutural logo após a introdução de uma dieta com elevado teor de gordura. O BDNF proporciona uma proteção contra os danos no início, que se perde após a persistência do consumo de grandes quantidades de dietas ricas em gorduras Abstract: The consumption of large amounts of dietary fats activates an inflammatory response in the hypothalamus damaging key neurons involved in the regulation of caloric intake and energy expenditure. It is currently unknown the reason why the medium-basal hypothalamus is the main target for diet-induced brain inflammation. Here, we hypothesized that the medium eminence blood brain barrier is particularly sensitive to dietary fats. We show that as early as one week exposure to large amounts of dietary fats is suficient to increase the expression of inflammatory cytokines and brain-derived neurotrophic factor in the medium eminence, preceding changes in other circumventricular blood-brain barrier regions. The consumption of dietary fats leads to an early loss of the structural organization of ?1-tanycytes nearby the interface between the medium eminence and the medium-basal hypothalamus. This is accompanied by an early increase in the hypothalamic expression of brain-derived neurotrophic factor, which is succeeded by a sharp reduction of its expression after two and four weeks on a high-fat diet. The immunoneutralization of brain-derived neurotrophic factor worsens diet-induced functional damage of the medium eminence blood-brain barrier, increases diet-induced hypothalamic inflammation and increases body mass gain. Thus, the medium eminence blood-brain barrier is affected at the functional and structural levels early after introduction of a high-fat diet. Brain-derived neurotrophic factor provides an early protection against damage, which is lost upon persistence of consumption of large amounts of dietary fats Agência de fomento: Doutorado Clínica Médica Doutora em Ciências CAPES 01P-02208-2012 FAPESP FAEPEX CNPQ

Orientador: Antonio Carlos Boschiero Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Citocinas pró-inflamatórias (CYT) contribuem para a morte de célula beta, em parte, via ativação de NF-?B. A Prolactina (PRL) tem sido descrita por proteger essas células contra apoptose induzida por CYT. Portanto, nesse trabalho nós investigamos o potencial efeito protetor da PRL sobre a morte de célula beta induzida por CYT e os mecanismos envolvidos nessa proteção. Células INS-1E tratadas por 24 h com PRL (0.5 ?g/ml) ou veículo, seguida da exposição à IL-1? (10 U/ml) ou TNF-? (1600 U/ml) combinadas com IFN-? (100 U/ml) foram usadas para viabilidade celular, análise da expressão gênica e protéica e atividade de NF-?B. Análises estatísticas foram feitas por teste t ou ANOVA, seguida de Bonferroni. p< 0,05 foi adotado como critério de significância, (n=4-6). Tanto IL-1?+IFN-? quanto TNF-?+IFN-? aumentaram a apoptose em células INS-1E, o que foi parcialmente prevenido pela PRL. A proteção induzida pela PRL é, ao menos em parte, mediada pela STAT3, pois esse efeito benéfico foi perdido com a inibição dessa proteína. Além disso, a PRL promoveu a modulação diferencial das proteínas anti e pró-apoptóticas da família BCL-2, induzindo um aumento da expressão de BCL-XL e reduzindo a expressão de proteínas pró-apoptóticas PUMA e bim-s, reguladas pela via JNK/c-JUN/DP5, a qual é induzida por CYT. A ativação de NF-?B bem como a expressão de seus genes alvo foram reduzidas pela adição de PRL, indicando que a PRL tem um papel na modulação da inflamação induzida por CYT em células beta. Dessa forma, observamos que a PRL exerce um efeito protetor sobre morte de célula beta induzida por CYT. Isso é mediado, pelo menos em parte, pela ativação de STAT3, modulação de proteínas pró e anti-apoptóticas e redução da ativação de NF-?B Abstract: Type I diabetes is caused by an autoimmune assault that induces progressive ?-cell dysfunction and apoptosis. Pro-inflammatory cytokines (CYT) such as interleukin-1? (IL-1?), tumor necrosis factor-? (TNF-?) and interferon-? (IFN-?), contribute to ?-cell death, at least partly via activation of the transcription factor nuclear factor-?B (NF-?B). Prolactin (PRL) is an important mediator for the increase of ?-cell mass and has been reported to protect insulin-producing cells against CYT-induced apoptosis. We have presently investigated the potential protective effects of PRL against cytokine-induced ?-cell death and the mechanisms involved in this protection. Cell viability, NO measurement and protein expression in INS-1E cells were performed after a 24 h pretreatment with PRL (0.5?g/mL) or vehicle and subsequent 24 h exposure to IL-1? (10 U/mL) or TNF-? (1600 U/mL) in combination with IFN-? (140 U/mL), with or without the knockdown of STAT3. INS-1E cells exposed to IL-1?+IFN-? were also used for western blot and NF-?B promoter reporter assay in time course studies. Comparisons between groups were carried out either by unpaired t test or ANOVA followed by Bonferroni correction. A P value

Orientador: Bruno Geloneze Neto Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Embora as funções do sono não estejam completamente esclarecidas, há evidências de que o sono exerce um efeito modulador sobre os sistemas metabólicos, endócrinos, cardiovasculares e imunológicos. Vários estudos epidemiológicos sugerem uma ligação entre o curto período de sono e diminuição da sensibilidade à insulina (SI) em adolescentes. No entanto, a nosso conhecimento, não há estudos até à presente data que investigaram se a privação de sono reduz a sensibilidade à insulina avaliada por métodos acurados, tais como os estudos de clamp hiperglicêmico em adolescentes. Os objetivos foram comparar a distribuição de marcadores clínicos, antropométricos e de laboratoriais de resistência à insulina em adolescentes com privação de sono ( ou =8 horas / noite) e investigar se a privação de sono está associada a redução da sensibilidade à insulina avaliada pelo clamp hiperglicêmico. É um estudo multicêntrico transversal com 484 adolescentes (10-19 anos idade), ambos os sexos, com obtenção de dados clínicos, antropométricos, composição corporal, bioquímicos e tempo de sono noturno. A SI foi avaliada pelos índices do modelo de avaliação da homeostase (HOMA) e pela taxa de infusão de glicose ajustado para a massa magra (GIRFFM) obtida no clamp hiperglicêmico (N = 81). Os adolescentes com privação de sono, em comparação com aqueles com sono adequado tinham uma idade mais elevada (16,1 anos [14,5-17,2] versus 13,2 anos [11,7-16,0]), pressão arterial sistólica (110 mmHg [100-120] versus 110 mmHg [100-117]) e pressão arterial diastólica (70 mmHg [61-80] versus 70 mmHg [60-70]), circunferência da cintura [CC] (86,8 cm [75,0-98,0] versus 79,1 cm [68,0-91,8]), razão de CC-altura (0,52 [0.46- 0,60] versus 0,50 [0,43-0,58]), o diâmetro abdominal sagital [DAS] (18,5 cm[15,8-21,4] versus 17,0 cm [15,0-20,0]), razão DAS-altura (0,113 [0,097-0,130] versus 0,107 [0,094 -0,126]), circunferência do pescoço [CP] (34,8 cm [32,5-37,0] versus 32,6 cm [30,0-35,0]), razão CP-altura (0,210 [0,198-0,222] versus 0,205 [0,194-0,218]), a gordura corporal (30,3 % [21,8-36,3] versus 27,7 % [20,5-33,6]) e ácido úrico (5,10 mg/dL[4,10-6,05] versus 4,50 mg/dL [3,70-5,50]), respectivamente; P or = 8 hours/night) and 2) investigate whether sleep deprivation is associated with reduction of insulin sensitivity assessed by hyperglycemic clamp. It is a cross-sectional multicenter study including 484 adolescents (10-19 years olds). Clinical data, anthropometric, body composition, biochemical and sleep duration were evaluated. The IS was assessed by the evaluated indices of homeostasis model assessment (HOMA) and by the glucose infusion rate adjusted for fat free mass (GIRFFM) obtained in the hyperglycemic clamp (N = 81).Adolescents with sleep deprivation compared to those with adequate sleep had a higher age (16.1 [14.5-17.2] versus 13.2 [11.7-16.0]), systolic (110 mmHg [100-120] versus 110 mmHg [100-117]) and diastolic blood pressure (70 mmHg [61-80] versus 70 mmHg [60-70]), waist circumference [WC] (86.8 cm [75.0-98.0] versus 79.1 cm [68.0-91.8]), WC-to-height ratio (0.52 [0.46-0.60] versus 0.50 [0.43-0.58]), sagittal abdominal diameter [SAD] (18.5 cm [15.8-21.4] versus 17.0 cm [15.0-20.0]), SAD-to-height ratio (0.113 [0.097-0.130] versus 0.107 [0.094-0.126]), neck circumference [NC] (34.8 cm [32.5-37.0] versus 32.6 cm [30.0-35.0]), NC-to-height ratio (0.210 [0.198-0.222] versus 0.205 [0.194-0.218]), body fat (30.3 % [21.8-36.3] versus 27.7 % [20.5-33.6]) and uric acid (5.10 mg/dL [4.10-6.05] versus 4.50 mg/dL [3.70-5.50]), respectively; p

Orientadores: Adriana Souza Torsoni, Marciane Milanski Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Aplicadas Resumo: O estilo de vida moderno tem levado ao aumento na prevalência de obesidade e suas co-morbidades em gestantes e na população cada vez mais jovem. Muitos dos efeitos do consumo direto de dieta hiperlipídica (DH) no metabolismo de glicose e lipídios já são bem estabelecidos. No entanto, considera-se importante avaliar se o consumo de DH durante períodos críticos do desenvolvimento seria capaz de ativar mecanismos epigenéticos, perpetuando mudanças no metabolismo da prole e criando um ciclo vicioso que não poderia ser interrompido. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito potencial da programação metabólica em prejudicar a sinalização de insulina na prole recém desmamada de mães alimentadas com dieta hiperlipídica durante a gestação e lactação. Além disso, investigamos se a exposição precoce a um ambiente obesogênico seria capaz de exacerbar o prejuízo no metabolismo de glicose na vida adulta de animais reexpostos à dieta hiperlipídica. Para isso, camundongos fêmeas da linhagem Swiss foram alimentados com dieta controle ou DH durante os períodos de adaptação, gestação e lactação, e os tecidos da prole macho foram analisados nos dias 28 e 82. Os resultados mostram que a prole de mães obesas (HC-O) apresentou maior ganho de peso, adiposidade e ingestão alimentar que a prole de mães controle (CC-O). Além do mais, apresentou prejuízos na sinalização de insulina em tecidos periféricos como fígado, adiposo e músculo, e centrais, como o hipotálamo, provavelmente devido à maior ativação de vias inflamatórias. A reexposição à DH parece agir como um fator agravante para o desenvolvimento do fenótipo obeso, levando a resistência sistêmica à insulina e hiperleptinemia. É válido ressaltar que o tecido adiposo parece ser o tecido mais afetado na prole adulta após a reexposição da dieta (HH-O), o que pode contribuir para a desregulação metabólica observada. Em conjunto, nossos resultados sugerem que o consumo materno de dieta hiperlipídica durante a gestação e lactação pode ocasionar alterações no metabolismo glicídico da prole tanto em animais recém desmamados quanto adultos. Por fim, a obesidade materna leva à maior susceptibilidade ao desenvolvimento de obesidade e prejuízos na sinalização de insulina na prole que não podem ser revertidos pelo consumo de uma dieta controle, no entanto, podem ser agravados especialmente quando os animais são reexpostos à DH Abstract: Modern lifestyle has resulted in an increase in the prevalence of obesity and its comorbidities in pregnancy and young population. Many effects from direct consumption of a high-fat diet (HFD) on glucose and lipid metabolism are well established. However, it is important to assess whether maternal consumption of HFD during critical periods of development can trigger epigenetic mechanisms, perpetuating changes in offspring metabolism and creating a vicious circle that cannot be broken. This study evaluated the potential effect of metabolic programming in impairing the insulin signaling in recently weaned offspring of obese dams. In addition, we investigated if early exposure to obesogenic environment is able to exacerbate the impairment of glucose metabolism in adult life in response to a high-fat diet. For this, Swiss female mice were fed with Stardard chow (SC) or HFD before and during mating, gestation and lactation. Tissues from male offspring were obtained at d28 and d82 to analyze activation of key proteins of inflammatory and insulin signaling pathways by Western Blot. Offspring of obese dams (HC-O) showed greater weight gain, adiposity and food intake than offspring of control dams (CC-O). Furthermore, they showed impairment in insulin signaling in central and peripheral tissues, associated to increased activation of inflammatory pathways. The HFD re-exposure seems to be an aggravating factor in development of obese phenotype leading to systemic insulin resistance and hyperleptinaemia. Moreover, adipose tissue was ultimately the most affected tissue in adult offspring after HFD rechallenged (HH-O) which may have contributed to the metabolic deregulation observed. Together our results suggest that maternal consumption of high-fat diet during pregnancy and lactation can cause changes in glucose metabolism of offspring in both weaned and adult animals. Additionally, maternal obesity leads to increase susceptibility to the development of obesity and impairment in insulin signaling in offspring that cannot be reversed by SC consumption, but can be aggravated especially when re-exposed to HFD Mestrado Metabolismo e Biologia Molecular Mestra em Ciências da Nutrição e do Esporte e Metabolismo FAPESP CNPQ

Orientador: Maria Helena de Melo Lima Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Enfermagem Resumo: A papaína é uma enzima proteolítica derivado de planta Carica papaya, utilizada no tratamento de lesões há vários anos, com o objetivo de desbridamento de tecido necrótico e acelerar o processo de cicatrização, podendo ser utilizada nas diversas fases do reparo tecidual e em diferentes concentrações. Sabe-se que as feridas tratadas com papaína apresentam maior número de fibroblastos com melhor organização da matriz de colágeno, o que auxilia na força de tensão e integridade no local da reparação. No entanto, os mecanismos envolvidos no processo de cicatrização da papaína não são totalmente conhecidos. Este estudo teve como objetivo avaliar o efeito do tratamento tópico do gel de papaína a 3%, por meio da expressão dos fatores de crescimento e citocinas em lesões agudas de camundongos saudáveis. Trinta camundongos Black (C57BL) saudáveis e adultos (10 semanas de idade, 25 g) foram divididos aleatoriamente em dois grupos: animais tratados com gel de papaína 3% e os animais tratados com o gel placebo. Foi investigada a expressão de fatores de crescimento por meio de PCR em tempo real e imunohistoquímica. Três e sete dias após a lesão, os animais foram sacrificados e as lesões coletadas. As amostras foram processadas com base no protocolo de PCR em Tempo Real e os cortes foram corados com hematoxilina-eosina e Picrosirius red e também submetidos ao processo de imunohistoquímica. No exame macroscópico, o grupo tratado com papaína 3% apresentou menor área da lesão em menor tempo quando comparado ao grupo placebo. Adicionalmente, no exame microscópico no sétimo dia, o grupo tratado com gel de papaína 3% apresentou maiores taxas de contração da ferida, quantidades menores de células inflamatórias, aumento na neovascularização e uma síntese acelerada das fibras de colágeno em comparação com o grupo placebo. As fibras colágenas apresentaram melhor e mais adiantada organização no grupo tratado com papaína 3% quando comparado ao grupo placebo. Houve um aumento significativo da expressão de IL-6 no terceiro dia e de TGF? no sétimo dia, no grupo tratado com papaína 3% quando comparado com o grupo tratado com placebo(p

Orientador: Carla Beatriz Collares Buzato Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Tem havido um grande interesse na determinação das vias envolvidas na proliferação das células beta pancreáticas e a aplicação deste conhecimento em terapias moleculares e celulares da diabetes. Em especial, a via de sinalização da Wnt/beta-catenina (ou via Wnt canônica) tem sido pouco investigada no pâncreas endócrino. Em determinados tecidos/órgãos, é sabido que a proteína beta-catenina constitui não somente um componente estrutural das junções de adesão, mas também é uma molécula sinalizadora juntamente com a Wnt, participando de vários processos celulares, tais como diferenciação e proliferação. Hiperplasia da célula beta parece ocorrer em certas condições experimentais e in vivo, como no estado de resistência periférica à insulina. Entretanto, as vias intracelulares envolvidas nesse processo ainda permanecem desconhecidas. Os objetivos desta Dissertação de Mestrado foram: 1) verificar se as alterações metabólicas induzidas pela exposição à dieta hiperlipídica (DHL) por um curto período de tempo (60 dias) são acompanhadas por alterações morfométricas compensatórias do pâncreas endócrino de camundongos C57BL/6; 2) investigar o possível envolvimento da via de sinalização da Wnt/beta-catenina no processo de proliferação da célula beta neste modelo, analisando-se a localização celular (por imunofluorescência indireta), o conteúdo proteico (por immunoblotting) e a expressão gênica (por PCR de Tempo Real ou qPCR) de proteínas associadas à via Wnt/beta-catenina (a saber, beta-catenina, Ciclina D1/2, c-Myc, GSK-3? e Axina2 e, 3) analisar a expressão da proteína beta-catenina não fosforilada (forma ativa da via) em ilhotas não hiperplásicas de animais tratados com a DHL por apenas 30 dias. Nossos resultados demonstraram que, após 60 dias de tratamento com DHL, os animais se tornaram obesos e apresentaram acentuadas alterações metabólicas, tais como hiperglicemia em jejum e pós prandial, hiperinsulinemia em jejum e pós-prandial e, ainda, uma significativa resistência periférica à insulina (administrada intraperitonealmente), sendo esses animais, portanto, caracterizados como pré-diabéticos. Este quadro foi acompanhado por um aumento significativo da massa relativa de células beta e do seu número por ilhota, o que indica hiperplasia deste tipo celular no pâncreas endócrino, provavelmente compensatória ao quadro de resistência periférica à insulina apresentado pelos animais do grupo tratado. Como mostrado por immunoblotting, houve um aumento significativo na expressão de proteínas ativadoras ou alvo da via, como beta-catenina ativada (não fosforilada) e Ciclina D1/2 em ilhotas dos animais pré-diabéticos. Quanto às proteínas Axina2 e GSK-3? (inibidoras da via), não foi observada alteração significativa na expressão de Axina2, mas supreendemente houve aumento do conteúdo celular de GSK-3? nas ilhotas do grupo pré-diabético. A imunofluorescência para beta-catenina ativada mostrou a presença desta proteína tanto na região de contato intercelular como no citoplasma e núcleo das células beta para ambos os grupos. As outras três proteínas relacionadas à via, Ciclina D1/2, GSK-3? e Axina2, por sua vez, apresentaram uma distribuição exclusivamente citoplasmática nas células endócrinas das ilhotas pancreáticas, o que está de acordo com as suas respectivas funções. A análise por qPCR não revelou alteração significativa no conteúdo celular de RNAm de ?-catenina, mas uma tendência de aumento na expressão gênica de Ciclina D1 e c-Myc, genes alvo da via, em ilhotas hiperplásicas dos animais pré-diabéticos. Ainda, por immunoblotting para beta-catenina ativada, não observamos aumento significativo da expressão proteica dessa proteína em ilhotas do grupo tratado com DHL por apenas 30 dias, os quais não desenvolveram hiperplasia do pâncreas endócrino. Em conclusão, nossos dados sugerem que a via Wnt/beta-catenina parece estar ativada na pré-diabetes experimental, e provavelmente participa do processo de hiperplasia compensatória das células beta pancreática neste estado metabólico Abstract: The role of the Wnt/beta-catenin signaling pathway (as known as the canonical Wnt pathway) in the endocrine pancreas physiology has not been thoroughly explored. In certain tissues/organs, it is known that beta-catenin, besides being a structural component of adhesion junctions, participates as a key protein in the Wnt signaling pathway, therefore being involved in crucial cellular processes such as differentiation and proliferation. Beta cell hyperplasia appears to occur under certain experimental conditions, and in vivo during the peripheral insulin resistance state. However, the intracellular pathways involved in this process are still unknown. The objectives of this Master's Dissertation were as follows: 1) to investigate whether the metabolic changes induced by exposure of adult male C57BL/6 mice to a high-fat diet (HFD) for a relatively short period of time (30 or 60 days) are accompanied by compensatory morphometric changes of the endocrine pancreas indicative of beta cell hyperplasia; and 2) to study the possible involvement of the pathway Wnt/?-catenin signaling in the process of beta cell proliferation in this animal model. For this, we carried out the analysis of the cellular localization (by indirect immunofluorescence), the protein cell content (by immunoblotting) and the gene expression (by PCR or Real-Time qPCR) of proteins associated to the Wnt/beta-catenin pathway (i.e., ?-catenin, Cyclin D1/2, c-Myc, Axin2 and GSK-3?). Our results showed that, after 60 days of treatment with HFD, the animals became obese, as well as, hyperglycemic, hyperinsulinemic (both at fast and fed states) and resistant to intraperitoneally injected insulin, being therefore characterized as prediabetic. This metabolic condition was accompanied by a significant increase in the relative mass of beta cells and the number of beta cells per islet, which indicates hyperplasia of this pancreatic endocrine cell, probably compensatory to the relatively higher insulin demand presented by the HFD-treated animals. As shown by immunoblotting, there was a significant increase in islet expression of the activator and target proteins, such as the active (unphosphorylated) beta-catenin and Cyclin D1/2 in prediabetic animals. Regarding Axina2 and GSK- 3? proteins (antagonists of the pathway), no changes were observed concerning Axin2 islet content between the experimental groups, but surprisingly there was a significant increase in cellular content of GSK-3? in islet homogenates from the prediabetic group. The immunofluorescence for active beta-catenin showed the presence of this protein at the intercellular contact region as well as within the cytoplasm and nucleus of beta cells in both groups. Meanwhile, Cyclin D1/2, GSK-3? and Axin2 displayed an exclusively cytoplasmic distribution in pancreatic endocrine cells, which is in accordance with their respective functions. The qPCR analysis revealed no significant change in mRNA expression of ?-catenin, but a tendency of increase in gene expression of Cyclin D1 and c-Myc, target genes of the pathway, in hyperplastic islets of the prediabetic animals. Additionally, the immunoblotting of active beta-catenin in homogenates of non-hyperplastic islets, isolated from mice fed a HFD for only 30 days, showed no significant change in expression this protein as compared to the control group. In conclusion, our data suggest that the Wnt/beta-catenin pathway may be activated during the process of compensatory hyperplasia of the beta cells seen in our animal model of obesity-associated prediabetes Mestrado Biologia Celular Mestra em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Gabriel Forato Anhê Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: O resumo poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: The complete abstract is available with the full electronic document Doutorado Farmacologia Doutora em Farmacologia

Orientador: Eliana Pereira Araújo Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Enfermagem Resumo: O processo cicatricial é um fenômeno complexo e altamente especializado, onde é necessário a integração de vários tipos de células, fatores de crescimento e enzimas. O processo ocorre através de várias fases: formação do coágulo; inflamação; reepitelização; angiogênse; formação do tecido de granulação; contração da ferida; formação da cicatriz; e, remodelamento do tecido. Estudos recentes revelaram que o receptor acoplado a proteína G, GPR120, é ativado por ácidos graxos insaturados de cadeia longa e é importante sinalizador relacionado com vários aspectos da função celular, incluindo o efeito anti-inflamatório exercido através da ligação do GPR120 com estes ácidos graxos. Nosso objetivo foi avaliar a expressão e atividade do GPR120 em pele íntegra e em feridas cutâneas de ratos Wistar tratados com o ácido docosahexaenóico (DHA). Tal estudo se justifica pela importância do melhor entendimento dos mecanismos imunoreguladores e inflamatórios da cicatrização de feridas que levem a abordagens terapêuticas mais efetivas. Para tal, pele íntegra e feridas cutâneas de ratos Wistar foram avaliadas por imunohistoquímica, imunoblot e PCR em tempo real. Nós encontramos que o GPR120 é expresso na pele e em tecido cicatricial de Wistar, fato ainda nunca relatado na literatura. Além disso, o GPR120 foi co-localizado em queratinócitos importante células nativas da epiderme. O tratamento tópico das feridas com DHA acelerou a cicatrização. Os efeitos moleculares deste tratamento na ferida foram: a associação de GPR120 e 'beta'-arrestina; diminuição de Interleucina-1 Beta (IL-1'beta'); aumento do Fator Transformador Beta (TGF-'beta') e Ivolucrin (IVL), um marcador de queratinócitos Abstract: Wound healing is a complex process and highly specialized, where it is necessary to integrate various types of cells, growth factors and enzymes. The healing process involves several phases: clot formation, inflammation, reepithelialization, angiogenesis, formation of granulation tissue, wound contraction, scar formation, and tissue remodeling. Recent studies have shown that the G protein-coupled receptor, GPR120 is activated unsaturated long chain, such as docohexaenoic acid, and are important signaling relating to various aspects of cellular function, including inflammatory effect exerted by connecting the GPR120 with these fatty acids. Our objective was to evaluate the expression and activity of the GPR120 in intact skin and in skin wounds in rats treated with docosahexaenoic acid (DHA). This study is justified by the importance of better understanding of inflammatory and immunoregulatory mechanisms of wound healing leading to more effective therapeutic approaches. For this purpose, intact skin and wounds of rats were evaluated by immunohistochemistry, immunoblotting and real-time PCR. We found that GPR120 is expressed in the skin and scar tissue of Wistar fact still never been reported in the literature. Additionally, the GPR120 co-located important native keratinocyte cells of the epidermis. The topical treatment of wounds with DHA accelerated healing. The molecular effects of this treatment on the wound were: the association of 'beta'-arrestin and GPR120; decreased interleucin - 1 beta ( IL - 1'beta'), increasing the Transformer Factor Beta (TGF - 'beta') and Ivolucrin (IVL), a marker of keratinocyte Mestrado Enfermagem e Trabalho Mestra em Enfermagem

Orientador: Maria Helena de Melo Lima Texto em português e inglês Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Objetivo: Caracterizar o modelo animal de ferida por queimadura de segundo grau e avaliar o efeito cicatrizante do creme enriquecido com insulina em ratos com diabetes induzido por estreptozotocina. Método: Ratos machos foram divididos em quatro grupos: ratos controles e ratos diabéticos que receberam o tratamento tópico com o creme enriquecido com insulina e o creme placebo. A queimadura foi realizada com um molde aquecido. Nos dias 1º, 7º, 14º, 26º e 32º pós-lesão amostras do tecido da ferida do animal foram extraídas para análise histológica e immunoblotting. Resultados: Confirmado que a lesão induzida corresponde a uma queimadura de segundo grau no 1º dia pós-lesão. O tratamento tópico com insulina foi capaz de reverter o parâmetro das células inflamatórias nos animais diabéticos a valores semelhantes aos animais controle (diâmetro da ferida no 26ºd: vehice control, topical insulin control e topical insulin STZ-DM 0.0 mm ± 0.1, vehicle STZ-DM 5.2 mm ± 0.5, P < 0.01; de acordo com 2-way (ANOVA) e o pós-teste de Bonferroni, P

Orientador: Maria Helena de Melo Lima Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Enfermagem Resumo: A cicatrização de feridas em pele é um processo biológico complexo e dinâmico, que envolve eventos como inflamação, proliferação, e remodelamento. Estudos recentes mostraram que estatinas, por meio de efeitos pleiotrópicos independentes da ação hipolipemiante, são novas opções terapêuticas para tratamento de diferentes patologias por suas ações anti-inflamatórias, antioxidantes, sobre vasodilatação, neoangiogênese e na redução da disfunção endotelial. O objetivo deste estudo foi investigar a ação da atorvastatina no reparo tecidual em lesões agudas em animais saudáveis. Os animais foram distribuídos em quatro grupos: placebo (P); atorvastatina tópica (AT); atorvastatina oral (AO); atorvastatina tópica e oral (ATO). Sob anestesia, a lesão na região dorsal foi confeccionada com punch de 8mm. As lesões foram fotografadas nos dias 0, 1, 3, 7, 10 e 14 pós-lesão e amostras destas extraídas nos dias 1, 3, 7 e 14, para análise da expressão de proteínas PI3K, Akt, GSK-3, eNOS, VEGF, TGF-?, ERK, IL- 10, IL-1?, IL-6 e TNF-?. Na avaliação macroscópica, houve melhora significativa quanto à redução das áreas das lesões nos grupos AT, AO e ATO em relação ao placebo. Na avaliação da expressão de proteínas, no 1o dia houve aumento da expressão PI3K, Akt, GSK-3, eNOS e IL-10 nos grupos AT e AO, em relação ao placebo. No 3o dia, houve aumento da expressão das proteínas PI3K, Akt, GSK-3 e IL-10 e no 7o dia, houve aumento da expressão da PI3K, Akt, GSK-3, IL-10, eNOS, VEGF e ERK em todos os grupos tratados com atorvastatina, em relação ao placebo. No 1o, 3o e 7o, houve redução na expressão das citocinas IL-6 e TNF-? em todos os tratados em relação ao placebo. Concluímos que atorvastatina acelera o reparo tecidual em modelo de lesões agudas em ratos e modula a expressão das proteínas nas vias de crescimento celular e citocinas Abstract: Wound healing in skin is a complex and dynamic biological process, involving events such as inflammation, proliferation, and remodeling. Recent studies have shown that statins, through pleiotropic effects independent of its lipid lowering action, are new therapeutic options for the treatment of different diseases for their anti-inflammatory and antioxidant actions, on vasodilation and neoangiogenesis and reduction of endothelial dysfunction. The aim of this study was to investigate the effect of atorvastatin in tissue repair after acute injury in healthy animals. The animals were divided into four groups: placebo (P); topical atorvastatin (AT); oral atorvastatin (AO); topical and oral atorvastatin (ATO). Under anesthesia, a lesion in the dorsal region in the animal was made with 8mm punch. The lesions were photographed on days 0, 1, 3, 7, 10 and 14 post-injury and the samples drawn on days 1, 3, 7 and 14 for protein expression analysis of PI3K, Akt, GSK-3, eNOS VEGF, TGF-?, ERK, IL-10, IL-1?, IL-6 and TNF-?. At macroscopic examination, there was significant improvement in the reduction of the lesion areas in groups AT, AO and ATO relative to placebo. Evaluating the expression of proteins on day 1, there was an increased expression of PI3K, Akt, GSK-3, eNOS and IL-10 in AT and AO groups, when compared to placebo. At day 3, there was increased expression of PI3K, Akt, GSK-3 and IL-10 and in the day 7, there was increased expression of PI3K, Akt, GSK-3, IL-10, eNOS, VEGF and ERK in all atorvastatin-treated groups versus placebo. In the days 1, 3 and 7, there was a reduction in the expression of IL-6 and TNF-? in all atorvastatin-treated versus placebo. We conclude that atorvastatin accelerates tissue repair in a model of acute lesions in rats and modulates expressions of proteins in cell growth pathways and cytokines Mestrado Enfermagem e Trabalho Mestra em Ciências da Saúde

Orientador: Eliana Pereira de Araujo Texto em português e inglês Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: O desenvolvimento de métodos que tem por objetivo acelerar e melhorar a qualidade do processo de cicatrização de feridas tem impacto positivo na condução de distúrbios de cicatrização associados a inúmeras condições médicas. Neste estudo, avaliamos os efeitos moleculares, celulares e clínicos da aplicação tópica de 5-azacitidina na cicatrização de feridas em ratos. De acordo com estudos pregressos, a 5-azacitidina reduz a expressão de folistatina, que é um regulador negativo das ativinas. Estas, por sua vez, promovem o crescimento de células em diferentes tecidos, incluindo a pele. Ratos Wistar machos com oito semanas de vida foram submetidos a um ferimento cutâneo com punch de oito milímetros na região dorsal. A seguir os ratos foram aleatoriamente separados em grupo controle (veículo) ou submetidos à aplicação tópica de 5-azacitidina (10 mM), uma vez por dia por até 12 dias, iniciando-se no terceiro dia após a lesão. A documentação fotográfica e coleta de amostras ocorreram nos dias 5, 9 e 15. O emprego desta droga resultou em aceleração da cicatrização da ferida, (99,7±7,0% versus 71,2±2,8% no dia 15, p

Orientador: Dennys Esper Corrêa Cintra Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Aplicadas Resumo: A obesidade é uma doença metabólica absolutamente fora de controle. As condições primárias associadas são hipertensão arterial, dislipidemias, diversos tipos de câncer, resistência à insulina (RI) e principalmente o diabetes mellitus tipo 2 (DM2). Dentre as características secundárias, esteatose hepática e síndrome do ovário policístico figuram entre as principais. Tais doenças acometem número cada vez maior de indivíduos e sobrecarregam sistemas públicos mundiais de saúde. A inflamação crônica e de baixo grau, designada "meta-inflamação", por acometer todo o organismo, parece ser o pano de fundo principal do processo obesogênico, resultando no descontrole da ingestão alimentar e na predisposição ao surgimento da RI podendo progredir para o DM2. Diante da ineficiência de terapêuticas farmacológicas atuais para o controle da obesidade, o investimento em estratégias anti-inflamatórias tem sido incentivado. Nesse intuito, ácidos graxos insaturados (AGIs), especialmente os ômega-3 (?3) e ômega-9 (?9) têm-se mostrado eficientes em atenuar a inflamação por meio da ativação do receptor GPR120, e em recuperar a sensibilidade à insulina em diversos tecidos. O objetivo deste trabalho foi avaliar as ações e mecanismos anti-inflamatórios dos AGIs ?-linolênico (?3) e oléico (?9), presentes em elevadas concentrações no óleo de semente de linhaça e oliva respectivamente, em tecidos periféricos metabolicamente ativos de animais obesos e diabéticos induzidos por dieta rica em gordura (HF), e suas repercussões na regulação glicêmica do organismo. O tratamento via dieta HF com substituição em 10% da fração saturada pelos respectivos óleos, foi eficiente em restabelecer o controle da fome dos animais que consequentemente ganharam menos peso em relação aos seus controles obesos. Dados fisiológicos obtidos por meio de medições de glicemia de jejum e dos testes de tolerância à insulina (ITT) e à glicose (GTT) evidenciaram melhoras na homeostase glicêmica, confirmado em nível molecular pelo aumento da atividade das principais proteínas envolvidas na via da insulina como o IR, IRS-1 e Akt. Possivelmente esses resultados deram-se em virtude da redução da expressão de peptídeos pró-inflamatórios como TNF-?, IL-6 e IL-1?, seguidos pelo aumento da expressão da IL-10, de caráter anti-inflamatório. No fígado, a melhora na sensibilidade à insulina, resultou em inibição da enzima GSK-3 propiciando o restabelecimento do controle hepático sobre o metabolismo da glicose. Análises por hematoxilina/eosina (HE) e imunohistoquímica evidenciaram menor acumulação lipídica e redução da infiltração de macrófagos M1 no parênquima hepático, resultando em melhora do fenótipo de esteatose hepática macrovesicular e recuperação funcional deste tecido. Houve diminuição da hipertrofia dos adipócitos, fato que contribuiu com a remissão da inflamação. Foi verificada a presença do receptor GPR120 nestas células, permitindo, portanto a entrada dos AGIs. A técnica de espectrometria de massa atestou a incorporação dos AGIs de interesse no fígado, sustentando a hipótese de que os efeitos benéficos encontrados ocorreram em decorrência das ações destes nutrientes. Esses achados permitem concluir que fontes alimentares dos AGs ?3 e ?9 modulam de forma potente a resposta inflamatória no organismo. Tais ações são controladas pelo GPR120, receptor comum a esses AGs, e parecem ocorrer de maneira tecido-específica com repercussões sistêmicas, positivas para o controle glicêmico Abstract: Obesity is characterized as a metabolic disease absolutely out of control which nowadays reaches epidemic levels. The diseases associated to thiscomorbid as hypertension, dyslipidemia, several kinds of cancer, insulin resistance (IR), type 2 diabetes (DM2) and secondary conditions as hepatic steatosis and polycystic ovary syndrome affect a large number of people,burdening the public health system. The low grade chronic inflammation seems to be the main cause of the obesogenic processes, resulting in an uncontrolled food intake and the predisposition for insulin resistance (IR), which can lead to type II diabetes. Once there is no effective pharmacological therapy to treat obesity so far, the investment in anti-inflammatory approaches has been encouraged. In this regard, unsaturated fatty acid, mostly 3-omega (?3) and 9-omega (?9) have been shown effective in decreasing the inflammatory process by activating its common receptor, the GPR120, by recuperating the insulin sensibility in several tissues resulting in improvements in the systemic glucose homeostasis. The purpose of this study was to evaluate the potential antiinflammatory effects of the fatty acids ?-linolenic(?3) and oleic (?9), found in high concentrations in flaxseed and olive oil respectively on active metabolic tissue as liver, skeletal muscle and white adipose tissue of obese and diabetic animals induced by high fat diet, as well as its effects on insulin signaling and glycemic regulation. The high fat treatment with 10% replacement of the saturated portion by ?3 or ?9 oil was effective in restoring the control of food intake in the animals, which consequently gained less weight compared to the obese group. Physiological data from fasting glycemic measure, insulin and glucose tolerance test (ITT and GTT) have showed improvements in the glycemic homeostasis, which was molecularly confirmed by the increase in the activity of the main proteins involved in the insulin signaling pathway as the IR, IRS-1 and AKT. We believe that these results are due to the decrease in proinflammatory peptides expression as TNF-?, IL-6 and IL-1? and increase in the IL-10 expression, known by its anti-inflammatory effects. Improvements in insulin sensitivity in liver resulted in GSK-3 inhibition culminating in the glucose hepatic metabolic reestablishing which contributes to restore the control of plasma glucose levels. Hematoxilin/Eosin (HE) and Immunohistochemistry analysis showed lower lipid accumulation and decreased macrophage infiltration in hepatic parenchyma corroborating the reducing in macrovesicular steatosis and functional recovering of this tissue. There was reduction in adipocyte size, which contributed to "meta-inflammation" remission. We could note the presence of GPR120 receptor in membrane of these cells probably allowing the ?3 and ?9 entry. Mass spectrometry technique attested high incorporation of these fatty acids in liver suggesting the beneficial effects found were due to these nutrients actions. These findings allow us to conclude that alimentary sources of ?3 and ?9 fattty acids modulate effectively the systemic inflammatory response, resulting in the insulin sensibility restoration and in the glucose tolerance improvement. Such nutrients have shown to be important therapeutic nutrigenomic tools against obesity and its associated comorbidities Mestrado Nutrição Mestra em Ciências da Nutrição e do Esporte e Metabolismo

Orientador: Edson Antunes Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A obesidade e a asma são doenças prevalentes e crescentes, e ambas têm impacto significativo na saúde pública mundial. O aumento simultâneo da prevalência da asma e da obesidade tem levado investigadores a sugerir que a obesidade possa ser um fator importante no desenvolvimento da asma, ou até piorar um quadro de asma pré-existente. Numerosos estudos populacionais conduzidos em todo o mundo indicam que a prevalência de asma é maior em indivíduos obesos versus magros. Além disso, diversos estudos prospectivos, tanto em adultos quanto em crianças, indicam que o risco relativo da incidência de asma aumenta com o índice de massa corporal (IMC). A obesidade também piora o controle medicamentoso da asma e a gravidade desta doença. Recentemente, diversos dados emergiram indicando que a inflamação associada à obesidade pode aumentar a propensão para o desenvolvimento de asma. Acredita-se que a resistência à insulina associada à obesidade desempenha importante papel no desenvolvimento da asma, explicando, ao menos em parte, a associação da asma com obesidade. Relatos recentes indicam uma alta prevalência de resistência à insulina em pacientes obesos e asmáticos versus obesos não asmáticos, sugerindo que a resistência à insulina possa contribuir com este fenótipo. Baseado nestas informações, o objetivo deste trabalho foi verificar se doenças metabólicas associadas à obesidade, tal como a resistência à insulina, podem estar envolvidas na exacerbação da asma associada à obesidade. No presente estudo observamos que o tratamento de camundongos obesos com metformina corrige a resistência à ação sistêmica da insulina. Além disso, metformina normaliza o trânsito dos eosinófilos da medula óssea até o lúmen em animais obesos e desafiados com OVA. Essa normalização parece ser mediada pela ativação da AMPK no pulmão e diminuição das concentrações de TNF-? e NOx no LBA e inibição da expressão de iNOS induzida pelo fator de transcrição NF-?B no pulmão. Além disso, ao normalizar o tráfego de eosinófilos da região peribronquiolar para a luz das vias aéreas, o tratamento com metformina induz concomitante diminuição do acúmulo de eosinófilos na medula óssea devido à regulação positiva da expressão de moléculas de adesão VLA-4 e Mac-1 na superfície das células e posterior aumento da resposta adesiva à ICAM-1 e VCAM-1. Os resultados descritos neste estudo parecem confirmar a hipótese que a resistência à insulina, resultante da obesidade, medeia a exacerbação da resposta inflamatória pulmonar observada em animais obesos. Dessa forma, ao corrigir a resistência à insulina sistêmica através da ativação da AMPK, camundongos sensibilizados obesos aceleram o início do processo de resolução da inflamação pulmonar alérgica Abstract: Obesity and asthma are prevalent and increasing diseases, and both have significant impact on global public health. The increase in prevalence of asthma and obesity has led researchers to suggest that obesity may be an important factor in the development of asthma, or even worse the pre-existing asthma. Numerous populational studies conducted around the world indicate that the prevalence of asthma is higher in obese versus lean person. In addition, several prospective studies, both in adults and in children, indicate that the relative risk of incident asthma increases with body mass index (BMI). Obesity also worsens the drug therapy of asthma and the severity of this disease. Recently, several data emerged showing that the inflammation associated with obesity increase the propensity for development of asthma. It is believed that insulin resistance associated with obesity plays an important role in the development of asthma, explaining, at least in part, asthma associated with obesity. Recent reports indicate a high prevalence of insulin resistance in obese asthmatics versus obese non-asthmatics patients, suggesting that insulin resistance may contribute to this phenotype. Based on this information, the purpose of this study was to determine whether metabolic diseases associated with obesity such as insulin resistance, are involved in asthma exacerbation associated with obesity. In the present study we observed that obese mice treated with metformin, impairs the resistantance to the systemic action of insulin. Furthermore, in obese mice challend with OVA, metformin normalizes the transit of eosinophils from bone marrow to the lung lumen. This normalization is mediated by AMPK activation in the lung, as well as decreased concentrations of TNF-? and nitrite and nitrate in BAL fluid accompanied by the inhibition of NF-?B induced iNOS expression in the lung. Furthermore, by normalizing the eosinophils trafficking from peribronchiolar region to airway lumen, metformin treatment induces concomitant reduction in the accumulation of eosinophils in bone marrow through the upregulation of adhesion molecules VLA-4 and Mac-1 on cell surface and subsequent increase in the adhesive response to plates coated with ICAM-1 and VCAM-1. Our data seem to confirm the hypothesis that insulin resistance resulting from obesity mediates the exacerbation of airway inflammation in high fat-diet mice. Thus, by normalizing the systemic insulin resistance through the atictivation of AMPK, obese sensitized mice progress to resolution of allergic airway inflammation Doutorado Farmacologia Doutora em Farmacologia

Orientador: Everardo Magalhães Carneiro Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A glutamato desidrogenase (GDH) é uma enzima mitochondrial que cataliza a reação reversível de glutamato a ?-cetoglutarato. Nas ilhotas pancreáticas, está associada com a secreção de insulina por aumentar a concentração de ATP. Ratos alimentados com dieta hipoprotéica apresentam secreção de insulina diminuída. A suplementação com leucina (LEU) aumenta a secreção de insulina em resposta a agentes insulinotrópicos. O presente estudo investigou a influência da suplementação com LEU na expressão da GDH e seu envolvimento com a secreção de insulina em ratos desnutridos e suplementados com LEU. Ratos machos foram alimentados com dietas normo- (17%, NP) ou hipoprotéicas (6%, LP) por oito semanas. Após, foram divididos e suplementados com LEU (1,5%) na água de beber (NPL e LPL) pelas quatro semanas seguintes. O conteúdo protéico de GDH no cérebro, fígado, rim e músculo esquelético não diferiu entre os grupos. Nas ilhotas LP, a expressão da GDH estava diminuída e a suplementação com LEU aumentou a expressão de RNAm restaurando o conteúdo protéico a valores similares a NP. A secreção de insulina estimulada por agentes insulinotrópicos ou inibidores, combinados ou não, estava diminuída em ilhotas LP comparada com NP. A suplementação com LEU aumentou a secreção de insulina a valores similares a NP, exceto quando as ilhotas LPL foram incubadas com EGCG. Ilhotas LP tiveram diminuição na [Ca2+]i quando expostas a GLN+BCH. A suplementação com LEU restaurou esses parâmetros aos valores de NP. Frente a esses resultados, podemos concluir que a diminuição na expressão da GDH induzida pela dieta LP foi central ao pâncreas endócrino e está associada à redução da secreção de insulina observada nas ilhotas LP. A suplementação com LEU foi capaz de restaurar a expressão da GDH, contribuindo para o aumento da secreção de insulina observado nas ilhotas LPL. Além disso, a GDH pode, ainda, estar associada com a secreção de insulina pelo acoplamento estímulo/secreção via regulação da [Ca2+]i Abstract: Glutamate dehydrogenase (GDH) is a mitochondrial matrix enzyme that catalyzes the reversible reaction of glutamate to ?-ketoglutarate. In the pancreatic islets, this enzyme is associated with insulin secretion by augmenting ATP levels. Protein malnourished rats displayed reduced insulin secretion. Leucine (LEU) supplementation augments the insulin secretion response to insulinotropic agents. The present study investigated the influence of LEU supplementation on GDH expression and its involvement with insulin secretion in malnourished rats supplemented with LEU. Male rats were fed normal- (17%, NP) or low-protein diet (6%, LP) for eight weeks. Half of rats of each group were supplemented with LEU (1.5%) in drinking water for the following four weeks (NPL and LPL groups). GDH protein content in brain, liver, kidney and skeletal muscles was not different in any group. GDH RNAm and protein content was reduced in LP islets and LEU supplementation augmented RNAm expression restoring protein content similar to NP. Insulin secretion was reduced in LP islets compared with NP when stimulated by insulinotropics agents or inhybitors, combinaned or not. LEU supplementation augmented insulin secretion to similar values as NP, an effect that was blunted when LPL islets were incubated with EGCG. LP islets showed lower [Ca2+]i when exposed to GLN+BCH. LEU supplementation augmented these patterns similar to NP. Taken together, we may conclude that diminution in GDH expression induced by LP diet was central to endocrine pancreas and was associated with reduced insulin secretion observed in LP rats. LEU supplementation was able to restore GDH expression and it was capable to restore insulin secretion via GDH restoration. Yet, GDH may contribute to insulin secretion via Ca2+ regulation stimulus/secretion coupling Doutorado Fisiologia Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Renato Passini Júnior Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Introdução: A prematuridade é definida como o nascimento que ocorre antes da 37º semana de gestação, sendo responsável por 75% da morbidade e mortalidade no período neonatal. Situações de risco para o desfecho da gestação influenciam de modo negativo a percepção de uma mulher sobre a qualidade de vida. Objetivo: Avaliar a qualidade de vida durante a gestação associada ao risco para parto prematuro. Método: revisão de literatura, seguida de estudo de corte transversal e comparativo, com três grupos de 54 gestantes (Grupo 1: sem risco atual para parto prematuro; Grupo 2: com fatores de risco para parto prematuro; Grupo 3: com trabalho de parto prematuro), totalizando 162 mulheres, realizado entre abril de 2008 a agosto de 2009 em maternidade de alto risco e unidade básica de saúde da cidade de Campinas (SP). Após assinatura de Termo de Consentimento Livre e Esclarecido foram verificadas informações sociodemográficas e obstétricas das mulheres e para avaliação da qualidade de vida foi aplicado o instrumento MOS-SF 36. Os dados foram analisados utilizando frequências, média e desvio-padrão. A homogeneidade entre os grupos foi avaliada pelos testes qui-quadrado de Pearson e exato de Fisher, para as variáveis categóricas e Kruskall-Wallis, seguido de Mann-Whitney para as variáveis contínuas. Ajustou-se um modelo de análise de variância (Anova) para comparar os domínios do SF-36 entre os grupos, contendo as variáveis: idade, renda familiar, número de gestações e número de abortos, seguido pelo teste de Bonferroni. O nível de significância adotado foi 5% e o software SAS, versão 9.1.3, foi utilizado na análise estatística. Resultados: há poucos estudos abordando a qualidade de vida durante a gestação. No estudo de corte os grupos apresentaram diferenças significativas em relação à idade e renda familiar (1X2 e 2X3); entre as gestantes dos Grupos 2 e 3, o principal antecedente obstétrico foi o trabalho de parto prematuro e a prematuridade foi a principal causa de filhos mortos; no Grupo 2 a insuficiência istmo-cervical foi a condição mórbida mais frequentemente encontrada. As características obstétricas que apresentaram diferença significativa entre os grupos (1X2 e 2x3) foram idade gestacional, número de gestações e aborto. Nos aspectos da Qualidade de Vida, verificamos, no total das gestantes analisadas, que o Estado Geral de Saúde foi o domínio de maior escore (71,9 pontos) enquanto que o item Aspectos Físicos foi o de menor escore (30,1). Na comparação entre grupos houve diminuição progressiva dos valores dos escores dos domínios do SF - 36, do Grupo 1 em relação ao 2 e deste em relação ao 3, com exceção da Capacidade Funcional, que foi menor no Grupo 2. Diferenças estatisticamente significativas foram observadas entre os Grupos 1 e 2 nos domínios Capacidade Funcional, Dor e Aspectos Sociais e entre os Grupos 1 e 3 nos domínios Capacidade Funcional, Aspectos Físicos, Dor, Aspectos Sociais, Aspectos Emocionais e Saúde Mental. Entre os Grupos 2 e 3 não houve diferenças entre os domínios. Conclusão: Gestantes de baixo risco (Grupo 1) apresentam melhor qualidade de vida quando comparadas com as de risco de parto prematuro (Grupos 2 e 3); a qualidade de vida entre as gestantes em trabalho de parto prematuro não foi diferente daquelas com fatores de risco de parto prematuro Abstract: Introduction: Preterm birth occurs before 37 weeks' gestation, and accounts for 75% of neonatal morbidity and mortality. Situations of risk for the outcome of pregnancy would adversely affect a woman's perception on the quality of life. Objective: To evaluate the quality of life during pregnancy associated with risk for preterm delivery. Methods: literature review, followed by was a cross-sectional and comparative study, with three groups of 54 patients (group 1: no current risk for preterm delivery, group 2: with risk factors for preterm delivery and group 3, with preterm labor), totalizing 162 women, conducted from April 2008 to August 2009 in a high-risk maternity and in a primary care unit in Campinas (SP). After signing the consent form, demographic and obstetric information were collected, and the instrument MOS SF-36 was applied to evaluate quality of life. Data were analyzed using frequencies, mean and standard deviation. Homogeneity between groups was assessed using the Pearson chi-square test and Fisher exact test for categorical variables and Kruskall-Wallis followed by Mann-Whitney test for continuous variables. A model of analysis of variance (ANOVA) was set up to compare the domains of the SF-36 between groups, containing the variables: age, family income, number of pregnancies and abortions, followed by Bonferroni test. The level of significance was 5% and SAS software, version 9.1.3, was used for statistical analysis. Results: there are few studies addressing quality of life during pregnancy. In cross-sectional study groups showed significant differences on the subject of age and family income (1 versus 2 and 2 versus 3); among groups 2 and 3, main obstetric history was preterm labor and preterm birth was the main cause of child deaths; in group 2 cervical insufficiency was the most frequent morbid condition; obstetric characteristics that showed significant differences between groups (1 versus 2 and 2 versus 3) were gestational age, number of pregnancies and abortion. Regarding quality of life, among all women tested, General State of Health was the area of highest score (71.9 points) while Physical Aspects had the lowest scores (30.1). In the comparison between groups, there was a progressive decrease in scores in the domains of the SF - 36, group 1 compared to 2 and this in relation to 3, with the exception of Functional Capacity, that was lower in group 2. Statistically significant differences were observed between groups 1 and 2 in the domains Functional Capacity, Pain and Social Aspects and between groups 1 and 3 in the domains Functional Capacity, Physical Aspects, Pain, Social Aspects, Emotional Aspects and Mental Health. Between groups 2 and 3 there was no statistically significant difference in any of the domains. Conclusion: low risk pregnant women (group 1) had better quality of life compared to women who had risk factors or who were in preterm labor (group 2 and 3); quality of life among women in preterm labor was not different from those with risk factors for preterm birth Doutorado Saúde Materna e Perinatal Doutor em Ciências da Saúde

Orientador: Carla Beatriz Collares Buzato Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O objetivo central dessa tese foi estudar o papel das junções comunicantes (GJs) no processo de maturação da célula B e na patogênese da diabetes tipo 2. Para isso, foram utilizados dois modelos animais. No modelo in vivo de maturação da célula B e do processo secretório de insulina foram empregados ratos em vários estágios do desenvolvimento (fetal, neonatal, jovem e adulto). No modelo de diabetes tipo 2 foram utilizados camundongos C57BL/6, wild-type e knockout para o gene do receptor de LDL (LDLR -/-), alimentados com dieta hiperlipídica. No primeiro modelo de estudo, observamos, por técnicas morfológicas (imunocitoquímica) e de biologia molecular (Western Blot, RT-PCR semi-quantitativo e qPCR) que a expressão gênica e protéica de Cx36 e Cx43, se altera durante o desenvolvimento. Os dados de microinjeção intracelular de traçadores confirmam tais resultados que sugerem que ilhotas de ratos recém-nascidos apresentam menor número de canais intercelulares associados à membrana e, conseqüentemente, um menor acoplamento intercelular mediado pelas junções comunicantes em comparação às ilhotas de adultos. Esses resultados estão de acordo com a observação de que a célula B durante o período perinatal mostra uma menor resposta secretória à glicose e sugerem a participação da comunicação intercelular mediada pelas junções comunicantes no processo de maturação da célula B. No caso do modelo in vivo de diabetes tipo 2, o estudo iniciou com a caracterização do quadro metabólico e de aspectos da morfologia e morfometria do pâncreas endócrino de animais submetidos ao tratamento com a dieta hiperlipídica. Os dados obtidos demonstram que os animais submetidos a essa dieta por um curto período de tempo já apresentam alterações metabólicas típicas da fase inicial da diabetes (hiperglicemia moderada, hiperinsulinemia, intolerância á glicose e resistência à insulina), bem como modificações de parâmetros da morfometria do pâncreas endócrino. Posteriormente, foi analisada a expressão e localização celular das proteínas juncionais (Cx36, Cx43 e ZO-1) e o aspecto funcional dos canais formados pela GJ, através da microinjeção de marcadores intracelulares. Observamos que os animais tratados com dieta hiperlipídica apresentam tendência de diminuição de expressão de Cx36 acompanhada por alteração no padrão de marcação para essa proteína. Esses dados estão de acordo os de microinjeção que revelam uma pequena diminuição do grau de acoplamento celular após o tratamento com a dieta hiperlipídica. As alterações observadas para Cx36 foram acompanhadas por modificações no grau de expressão e de localização celular de ZO-1, proteína envolvida em processos como a organização dos canais intercelulares da GJ na membrana e no turnover de vários subtipos de conexina. Esses resultados indicam que a comunicação intercelular, particularmente a mediada por canais formados pela Cx36 parecem desempenhar importante papel na patogênese da diabetes tipo 2, desde sua fase inicial. Abstract: Intercellular communication and adhesion among pancreatic B-cells are crucial for a proper insulin biosynthesis and secretion. The aim of this work was to investigate the role of gap junction (GJ) mediated-intercellular communication in the processes of maturation and dysfunction of B-cells. It is well known that fetal and neonatal rat pancreatic B-cells exhibit a reduced insulin secretory response to glucose and to other secretagogues as compared to adult ones. Based on this finding, we have used Wistar rats at different stages of development (fetal, neonatal, young and adult) as a model of B-cell maturation. As a model of type 2 diabetes, C57BL/6 mice (wild-type) and LDL receptor-deficient mice were fed a high fat diet up to 60 days. The cellular expression of GJ connexin (Cx) subtypes found in the endocrine pancreas (Cx36, Cx43 and Cx45) was assessed by immunohistochemistry, Western Blot, quantitative and semi-quantitative RTPCR. Our results indicate that young and adult endocrine pancreas express relatively high levels of Cx36 on B-cells in comparison with the other groups. Meanwhile, fetal and neonatal islets express predominantly Cx43 on non B-cells located at the islet periphery. Islet microinjection of GJ tracers revealed that neonatal B-cells display lower intercellular exchange of the cationic molecule Ethidium Bromide (EB) in comparison with the adult ones, which is in accordance with their differences in Cx36 expression. No significant differences were found in expression and localization of Cx45 among all animal groups. Regarding the animal type 2 diabetic model, a metabolic characterization showed that the high-fat diet for 60 days induces glucose intolerance, insulin resistance, hyperinsulinemia and moderate hyperglycemia in both mice groups (LDLr knockout and wild-type groups). High-fat fed mice showed a subtle decrease in Cx36 islet expression and in the B-cell intercellular exchange of EB in comparison with the chow-fed group (control). We also observed an alteration in the pattern of Cx36 labeling in immunohistochemistry assays. The high-fat diet induced a redistribution of Cx36 within the islets from a disorganized pattern (more commonly seen in control mice) to a sub domain-pattern where Cx36 plaques demarcate groups of B-cells. These changes in Cx36 islet distribution observed in high-fat fed mice were accompanied by a similar pattern of immunolabeling for ZO-1, but an increase in its islet expression, a tight junctional protein that seem to be involved in Cx turnover and membrane organization of Cx-made channels. Taken all together, these findings suggest that cell-cell coupling mediated by GJ may play an important role in the pancreatic B-cell maturation observed during endocrine pancreas development as well as in the early stages of type 2 diabetes pathogenesis. Doutorado Histologia Mestre em Biologia Celular e Estrutural