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Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES A caprinocultura é uma atividade difundida mundialmente e no Brasil possui importante papel na economia. Infelizmente, a produção desses animais tem sido prejudicada por problemas associados a parasitos gastrintestinais que afetam o desenvolvimento do rebanho e consequentemente geram perdas econômicas. Como forma de controlar as infecções parasitárias, estratégias alternativas ao uso de antihelmínticos estão sendo pensadas. Nesse sentido, objetivou-se avaliar a resposta de caprinos machos às infecções naturais por parasitos gastrintestinais quando mantidos em regime de confinamento e alimentados com duas fontes de fibra dietética. Para isso 24 caprinos machos, sem padrão de raça definido, 12 castrados e 12 não castrados, alimentados com palma e bagaço de cana-de-açúcar ou palma e feno de capim elefante, foram avaliados semanalmente, por um período de 120 dias, através da contagem de ovos (OPG) e oocistos (oOPG) por grama de fezes, peso, volume globular (VG) e coprocultura. Após esse período, três animais de cada tratamento foram aleatoriamente escolhidos, abatidos e necropsiados para coleta do trato gastrintestinal e recuperação dos parasitos adultos. Não houve diferença significativa (p>0,05) quanto as características fenotípicas avaliadas. A contagem de células efetoras da resposta imune também não apresentou diferença significativa (p>0,05) entre os grupos estudados. Foram identificadas seis espécies distintas de Eimeria spp., sendo E. ninakohlyakimovae a espécie prevalente (29%). Para os helmintos, 1.251 parasitos adultos foram identificados, havendo prevalência para o gênero Oesophagostomum spp. (1.210), seguido por Haemonchus spp. (30), Trichostrongylus spp. (7) e Trichuris spp (4). Os animais alimentados com palma e feno de capim elefante, independente da condição sexual, foram os que apresentaram maior carga parasitária, o que reforça a importância de compreender as variações no manejo animal e como este pode interferir na infecção por endoparasitos em caprinos. Goat farming is a worldwide activity and in Brazil it has an important role in the economy. Unfortunately, the production of these animals has been impaired by problems associated with gastrointestinal parasites that affect the herd development and consequently generate economic losses. To control parasitic infections, alternative strategies to the use of anthelmintics are being thought. In this sense, the aim of this work was to evaluate the response of male goats to natural infections by gastrointestinal parasites kept in an confining regime and fed with two sources of dietary fiber. For this, 24 goats males, without defined breed standard, castrated and not castrated, fed with palm and sugarcane bagasse and elephant grass palm and hay, were evaluated weekly, for 120 days, by counting eggs (EPG) and oocysts (oOPG) per gram of feces, weight, packed cell volume (PCV) and feces culture. After this period, three animals from each treatment were randomly slaughtered and necropsied to collect the gastrointestinal tract and recover the adult parasites. There was no significant difference (p> 0.05) regarding to phenotypic characteristics evaluated. The number of effector cells of the immune response also did not show any significant difference (p> 0.05). Six distinct species of Eimeria spp. were identified, being E. ninakohlyakimovae the prevalent one (29%). A total of 1.251 adult parasites were recovered, with prevalence for Oesophagostomum spp. (1.210), followed by Haemonchus spp. (30), Trichostrongylus spp. (7) and Trichuris spp. (4). The animals fed with palm and elephant grass hay, regardless of castrated or not castrated, had highest parasitic load, which reinforces the importance of understanding variations in animal management and how it can interfere with endoparasite infection in goats.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES A resistência aos antimicrobianos e aos antineoplásicos é considerada um problema de saúde pública mundial sendo necessária a busca por novas moléculas que sejam mais eficazes ou que suplementem as terapias já existentes. Neste contexto, a Stigmurina, um peptídeo nativo da peçonha do escorpião Tityus stigmurus, apresentou atividade antibacteriana sobre bactérias gram-positivas, com efeito antiproliferativo em diferentes células cancerígenas, baixa toxicidade em eritrócitos humanos e atividade tripanocida sobre Trypanossoma cruzi. Com o intuito de ampliar o potencial do peptídeo nativo, peptídeos análogos a Stigmurina, foram planejados e analisados quanto a estrutura e diferentes atividades biológicas. A análise estrutural dos peptídeos análogos, denominados de StigA8 e StigA18, foi obtida por predição estrutural, modelagem molecular e dicroísmo circular (DC), sendo a biocompatibilidade in vitro avaliada em hemácias humanas, fibroblastos murinos e in vivo em larvas de Galleria mellonella. A atividade antibacteriana contra cepas gram-positivas e gram-negativas foi realizada por microdiluição em caldo e a ação antibiofilme em placa de cultura de células e por Microscopia Eletrônica de Varredura, bem como, o efeito antibacteriano in vivo sobre as larvas de G. mellonella infectadas com Staphylococcus aureus. A ação antiparasitária dos peptídeos análogos sobre as formas epimastigotas e tripomastigotas do T. cruzi foi avaliada por contagem das células viáveis e o efeito antiproliferativo em linhagens de células cancerígenas foi avaliado pelo método de redução do sal brometo de 3- (4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenil-tetrazólio (MTT). Experimentos in silico mostraram que StigA8 e StigA18 apresentaram maiores índices de cationicidade (+4 e +5, respectivamente) e momento hidrofóbico (0,652 e 0,708, respectivamente) em relação à molécula protótipo (+2 e 0,571, respectivamente), enquanto que experimentos de DC revelaram uma conformação majoritariamente em α-hélice em ambientes que mimetizam membranas biológicas. Além disso, revelaram atividade hemolítica de 11,5- 22% em uma faixa de concentração de 9,37-150 µM, com índice de citotoxicidade de 50% nos fibroblastos em 20 µM e 12,3 µM para StigA8 e StigA18, respectivamente. Adicionalmente, não foram observados sinais de toxicidade sobre as larvas na dose de 120 mg/kg. Ambos os peptídeos análogos apresentaram uma expressiva atividade antibacteriana em bactérias grampositivas e gram-negativas em concentrações que variaram de 0,93-9,37 µM, com ação antibiofilme contra S. aureus em concentrações de 7,5-12,5 µM, causando danos como destruição de matriz, invaginações na membrana celular, rugosidades e redução do diâmetro celular em 12,5 µM. StigA8 e StigA18 revelaram efeito antibacteriano in vivo, aumentando a sobrevida das larvas na dose de 120 mg/kg em 75% e 60%, respectivamente, no pico da infecção. Atividade tripanocida sobre as formas epimastigotas e tripomastigotas do T. cruzi foi observada em 6,25 µM para ambos os peptídeos e potencial antiproliferativo a partir da concentração de 2 µM para StigA8 e 4 µM para StigA18. Diante disso, StigA8 e StigA18 constituem moléculas com potencial para o desenvolvimento de novos medicamentos antimicrobianos e anticâncer. Resistance to antimicrobials and antineoplastic agents is considered a worldwide public health problem and the search for new molecules that are more effective or that supplement existing therapies is necessary. In this context, Stigmurin, a peptide native to the venom of the yellow scorpion Tityus stigmurus, showed antibacterial activity on gram-positive bacteria, with antiproliferative effect on different cancer cells, low toxicity in human erythrocytes,and trypanocidal activity on Trypanossoma cruzi. In order to expand the potential of the native peptide, analogs to Stigmurin were designed and analyzed for structure and different biological activities. The structural analysis of the analog peptides, named StigA8 and StigA18, was obtained by structural prediction, molecular modeling, and circular dichroism. In vitro biocompatibility was evaluated in human red blood cells, murine fibroblasts, and in vivo on Galleria mellonella larvae. The antibacterial activity against grampositive and gram-negative strains was performed by microdilution in broth, the antibiofilm activity in cell culture plate and analyzed by scanning electron microscopy, as well as the antibacterial effect in vivo on G. mellonella larvae infected with Staphylococcus aureus. The antiparasitic action of analog peptides on the epimastigote and trypomastigote forms of T. cruzi was evaluated by counting viable cells and the antiproliferative effect in cancer cell lines was evaluated by the 3-(4,5-dimethylthiazole-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium (MTT) salt reduction method. StigA8 and StigA18 showed higher rates of cationicity (+4 and +5, respectively) and hydrophobic moment (0.652 and 0.708, respectively) in relation to the lead molecule (+2 and 0.571, respectively) and a conformation mostly in α-helix in environments that mimic biological membranes. In addition, the peptides showed hemolytic activity of 11.5-22% in a concentration range of 9.37-150 µM, with a cytotoxicity index of 50% in murine fibroblasts at a concentration of 20 µM and 12.3 µM for StigA8 and StigA18, respectively. In addition, no signs of toxicity were observed on G. mellonella larvae at a dose of 120 mg/kg. Both analog peptides showed significant antibacterial activity in strains of gram-positive and gram-negative bacteria in concentrations ranging from 0.93-9.37 µM, with antibiofilm action against S. aureus in concentrations of 7.5-12.5 µM, causing damage such as matrix destruction, cell membrane invaginations, roughness, and reduction of the cell diameter by 12.5 µM. StigA8 and StigA18 showed antibacterial effect in vivo, increasing larval survival at 120 mg/kg by 75% and 60%, respectively, at the peak of infection. Trypanocidal activity on the epimastigote and trypomastigote forms of T. cruzi was observed at 6.25 µM for both peptides and antiproliferative potential from the concentration of 2 µM for StigA8 and 4 µM for StigA18. Therefore, StigA8 and StigA18 are molecules with the potential for the development of new antimicrobial and anticancer drugs.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq As parasitoses associadas a fatores, tais como, desnutrição e anemia podem determinar importantes impactos sobre o crescimento e o desenvolvimento de crianças, com efeitos que podem repercutir sobre toda a vida da pessoa. O objetivo deste trabalho foi estudar a prevalência das infecções por parasitos transmitidos por água e alimentos, associando-as aos fatores de risco e ao impacto sobre a saúde e desenvolvimento de crianças. O estudo incluiu crianças com idade variando de 11 meses a 12 anos e seis meses. Foram coletadas amostras biológicas (sangue e fezes) de 96 crianças, de três escolas situadas na zona oeste de Natal; foi realizada a avaliação nutricional pelos parâmetros peso para idade, altura para idade e altura para peso, de acordo com o padrão antropométrico do National Center for Health Statistic; e aplicado um questionário epidemiológico aos seus responsáveis. As amostras fecais foram analisadas através da técnica de sedimentação espontânea, técnica de Willis modificada e técnica de coloração de Ziehl-Neelsen modificado, para investigação de parasitos intestinais. As amostras de sangue foram utilizadas para a realização da técnica de hematócrito e obtenção do soro para realização do teste imunoenzimático (ELISA) visando a verificação de anticorpos anti-Toxoplasma gondii. Os dados foram analisados pelo teste qui quadrado, admitindo-se como nível de significância 0,05. Das 88 amostras de fezes analisadas, oito espécies de enteroparasitos foram identificadas, com uma prevalência geral de 52,2% (n=46). Os parasitos intestinais unicelulares mais frequentes foram: Blastocystis hominis (28,4%), Giardia lamblia (13,6%) e Entamoeba histolytica/E. dispar (12,5%). Duas espécies de helmintos foram diagnosticadas: Ascaris lumbricoides e Enterobius vermicularis, ambas com frequência de 3,4%. O parasitismo intestinal apresentou associação inversa significativa com a renda familiar (p=0,000). Condição de baixo peso para idade e obesidade ocorreu em 14,3% e 16,3% dos casos, respectivamente. A sororreatividade para T. gondii, foi de 11,5% (n=11), e o teste de avidez para os anticorpos anti-T. gondii indicou que todos os casos estavam na fase crônica da infecção. Das 96 amostras de sangue analisadas pela técnica do micro hematócrito, 44,8% (n=43) apresentaram anemia. As infecções por enteroprotozoários e T. gondii indicam que essas crianças vivem em ambientes insalubres. Para além disso, a anemia foi um achado relevante nesse estudo e deve ser determinada nessas crianças por outros fatores além do parasitismo. Parasitic diseases associated with factors such as malnutrition and anemia can determine important impacts on the growth and development of children, with effects that can have an impact on a person's entire life. The objective of this work was to study the prevalence of infections by parasites transmitted by water and food, associating them with risk factors and the impact on children's health and development. The study included children aged 11 months to 12 years and six months. Biological samples (blood and feces) were collected from 96 children, from three schools located on the west side of Natal; nutritional assessment was also carried out using the parameters weight for age, height for age and height for weight, according to the anthropometric standard of the National Center for Health Statistics; and an epidemiological questionnaire was applied to those responsible. Fecal samples were analyzed using the spontaneous sedimentation technique, modified Willis technique and modified Ziehl-Neelsen staining technique to investigate intestinal parasites. Blood samples were used to perform the hematocrit technique and to obtain the serum for performing the immunoenzymatic test (ELISA), aiming to verify the presence of antiToxoplasma gondii antibodies. The data were analyzed by the chi square test, with a 0.05 significance level. From the 88 feces’ samples analyzed, eight species of enteroparasites were identified, with an overall prevalence of 52.2% (n = 46). The most frequent unicellular intestinal parasites were Blastocystis hominis (28.4%), Giardia lamblia (13.6%) and Entamoeba histolytica/E. dispar (12.5%). Two species of helminths were also diagnosed, namely Ascaris lumbricoides and Enterobius vermicularis, both with a frequency of 3.4%. Intestinal parasitism showed a significant inverse association with family income (p = 0.000). Condition of low weight for age and obesity occurred in 14.3% and 16.3% of cases, respectively. The seroreactivity for T. gondii was 11.5% (n = 11) and the avidity test for anti-T gondii antibodies indicated that all cases were in the chronic phase of the infection. From the 96 blood samples analyzed using the micro hematocrit technique, 44.8% (n = 43) presented anemia. Infections with enteroprotozoa and T. gondii indicate that these children live in unhealthy environments. In addition, anemia was a relevant diagnosis detected in this study and must be determined in these children by other factors than parasitism.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES As infecções causadas por nematoides gastrintestinais levam a prejuízos na produção animal, em especial a ovinocultura, uma importante atividade socioeconômica. Compreender os mecanismos envolvidos na resposta imunológica desses animais a essas infecções são essenciais, uma vez que animais pertencentes a mesma raça e rebanho respondem de formas diferentes às infecções. A carência de trabalhos envolvendo essa diferenciação em ovinos leva a necessidade de compreender melhor esses mecanismos. Nesse sentido, o objetivo deste trabalho foi quantificar a expressão de citocinas (IFN-γ, TNF-α, IL-4, IL-13, IL-9, IL-22, TGF-β e IL-10) envolvidas na resposta imunológica a nematoides gastrintestinais de ovinos classificados fenotipicamente como resistentes e suscetíveis. Para isso foram utilizadas amostras do abomaso (AB), intestino delgado (ID) e grosso (IG) de 12 ovinos mestiços infectados naturalmente por nematoides gastrintestinais, sendo 6 animais resistentes e 6 suscetíveis. A partir dessas amostras, foi realizada a extração de RNA total dos tecidos, sintetizado o cDNA, que foi quantificado por qPCR para a determinação da expressão relativa, utilizando como controle, um gene referência para cada tecido (GAPDH, SDHA e RPL-19) e analisados pelo software REST©. Houve aumento na expressão de IL-4 e IL-13 em todos os tecidos do trato gastrintestinal do grupo resistente as infecções por nematoides comparado aos animais do grupo suscetível. No AB, ID e IG, respectivamente, houve aumento de 2,5x, 2,8x (P

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES A terapêutica antiparasitária para o tratamento e controle das doenças tropicais negligenciadas causadas por tripanosomatídeos é limitada devido a elevada toxicidade e baixa eficácia dos fármacos. Atualmente, não existe vacina disponível para o controle das doenças humanas causadas por tripanosomatídeos. Este estudo teve um caráter multidisciplinar e transversal cujo o objetivo principal foi a caracterização biológica e bioquímica de metaloprotease de tripanossomatídeos, com ênfase na pesquisa de potencias novos compostos com atividade inibitória sobre a proteína. Para isso, foram avaliados a atividade enzimática, identificação da metaloprotease e a capacidade hemolítica de diferentes extratos brutos dos tripanosomatídeos. Seguidamente, fez-se análises in silico e in vitro com os potencias novos inibidores da gp63. Através de ensaios de zimografia foi confirmado o perfil proteolítico das proteínas do extrato bruto de Leishmania spp. sobre o substrato gelatina e caseína. Trypanosoma cruzi exibiu um padrão proteolítico condicente com o perfil descrito na literatura para a cruzipaína, a cisteína protease. Em colaboração com o Instituto de Química da UFRN foi desenvolvido um ensaio fluorescente dependente da coordenação com íon Zn2+ . Os resultados evidenciaram a forte coordenação do composto L1 ao do Zn (II) presentes no extrato bruto de L. amazonensis. Além disso, os ensaios biológicos demostraram atividade hemolítica mediada pelo sistema complemento na presença do extrato de tripanosomatídeos. A pesquisa in silico demostrou a ancoragem molecular com energias favoráveis à interação entre os ligantes testados:L1> DETC>Doxiciclina>4TERP37. Ademais, resultado semelhante foi observado no cálculo, de balanço de energia final quântico. A validação in vitro dos compostos mostrou que L1 diminui significativamente, a viabilidade da forma promastigota de L. amazonensis (IC50 de 1,24 µM). O composto L1, não descrito na literatura, induziu a morte da forma promastigota pelo processo de necrose, análise estrutural revelou danos na membrana, pequenos orifícios na membrana, bem como o vazamento do conteúdo celular. Por outro lado, L1 apresentou alta índice de seletividade sobre as linhagens de células, 3T3 e RAW. Em conjunto, os resultados mostraram potencial efeito leishmaniocida do L1 contra L. amazonensis, agente etiológico da Leishmaniose difusa, a única forma clínica que não existe atualmente o tratamento. Paralelamente a este estudo, foi realizado a análise das proteínas variáveis de superfície (VSG) de Trypanosoma brucei onde verificou-se que as metaloproteases de matriz (MMPs) reconhecem moléculas de VSGs do parasita. Em conjunto, os resultados obtidos contribuem para o desenvolvimento futuro de nova abordagem terapêutica na doença causada por tripanosomatídeos. Contudo, estudos futuros, permitirão atestar os presentes resultados. Antiparasitic therapy for the treatment and control of neglected tropical diseases caused by trypanosomatids is limited due to their high toxicity and low drug efficacy. Currently there is no available vaccine for control of human diseases. This study had a multidisciplinary and cross-sectional character whose main objective was the biological and biochemical characterization of trypanosomatids metalloproteases (gp63) with emphasis on the research of news potential compounds capable of inhibition protein activity. Thus, the enzymatic activity, metalloprotease identification and hemolytic capacity of different Trypanosomatids crude extracts were evaluated. After that, in silico and in vitro analyzes were performed with the potential news gp63 inhibitors. Through, zymography assays the proteolytic profile was visualized from Leishmania spp. crude extract proteins on gelatin and casein substrate. Trypanosoma cruzi exhibited a proteolytic pattern consistent with the profile previous described for cruzipain, a cysteine protease. In collaboration with the Chemistry Institute of UFRN, a fluorescent assay dependent on Zn2+ ion coordination was developed. The results showed the strong coordination of compound L1 and Zn (II) present in the crude extract of L. amazonensis. In addition, biological assays demonstrated complement system mediated hemolytic activity in the presence of trypanosomatids extract. In silico approach demonstrated molecular anchoring with favorable energies for the interaction between the ligands tested: L1> DETC> Doxycycline> 4TERP37. Besides, a similar result was observed in the calculation of the quantum final energy balance. In vitro validation of the compounds showed that L1 significantly decreases the viability of the promastigote’s forms of L. amazonensis (IC50 of 1.24 µM). L1 compound, not described so far, induced promastigotes death by necrosis process and structural analysis, revealed that membrane damage, small holes in the membrane, as well as cell content. Differently, L1 showed a high selectivity index over cell lines, 3T3 and RAW. Together, the results showed a potential leishmaniocidal effect of L1 against L. amazonensis, the etiologic agent of diffuse leishmaniasis, the only clinical form that currently doesn´t exist treatment. In parallel to this study, Trypanosoma brucei surface variable protein (VSG) analysis was performed. It was found that matrix metalloproteases (MMPs) recognize parasite VSGs molecules. Although, both results represent a contribution to the future approach on development therapeutic in diseases caused by Trypanosomatids. However, more further studies will allow to attest the presents results.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Nos dias atuais, uma variedade de dispositivos m´oveis est´a dispon´ıvel e acess´ıvel `a popula¸c˜ao em geral, tornando-se um item indispens´avel para a comunica¸c˜ao e o uso de diversos servi¸cos. Nesta mesma dire¸c˜ao, esses dispositivos tornaram-se bastante ´uteis em diversas ´areas de atua¸c˜ao, incluindo a ´area m´edica. Com a integra¸c˜ao desses dispositivos e aplicativos, ´e poss´ıvel realizar um trabalho preventivo, ajudando a combater surtos e at´e mesmo evitar epidemias. De acordo com a Organiza¸c˜ao Mundial da Sa´ude (2017), a mal´aria ´e uma das doen¸cas infecciosas que mais causam letalidade no mundo, principalmente na regi˜ao da Africa Subsaariana, enquanto que no Brasil ´e mais frequente a ocorrˆencia de casos na regi˜ao ´ amazˆonica. Para a realiza¸c˜ao de diagn´ostico de mal´aria ´e imprescind´ıvel haver t´ecnicos treinados e com experiˆencia para identificar as esp´ecies e fases da doen¸ca, parte crucial para definir as dosagens ideais da administra¸c˜ao de medica¸c˜ao aos pacientes. Neste trabalho ´e proposto um sistema de diagn´ostico de mal´aria `a baixo custo utilizando dispositivos m´oveis, onde s˜ao aplicadas algumas t´ecnicas de segmenta¸c˜ao, processamento de imagens digitais e redes neurais convolucionais para realizar a contagem de c´elulas, estima¸c˜ao de parasitemia e classifica¸c˜ao de parasitos de Plasmodium nas esp´ecies P. falciparum e P. vivax na fase trofozo´ıta. Um prot´otipo com pe¸cas 3D e automa¸c˜ao eletrˆonica foi proposto para realizar a varredura e captura de imagens nas lˆaminas de sangue para integrar ao sistema mobile e realizar o diagn´ostico in loco, sem a necessidade de mudan¸ca de equipamentos microsc´opicos, assim sendo, compartindo da premissa de baixo custo. Foi obtido 93% de acur´acia em um modelo de redes neurais convolucionais. Diante disso, ´e poss´ıvel romper barreiras de acessibilidade em pa´ıses com poucos recursos na utiliza¸c˜ao de ferramentas de diagn´ostico/triagem de doen¸cas. Nowadays, a variety of mobile devices are available and accessible to the general population, making it an indispensable item for communication and use of various services. In this same direction, these devices have become quite useful in several areas of expertise, including the medical field. With the integration of these devices and applications, it is possible to perform preventive work, helping to combat outbreaks and even prevent epidemics. According to the World Health Organization (2017), malaria is one of the most lethal infectious diseases in the world, mainly in the region of sub-Saharan Africa, while in Brazil it is more frequent the occurrence of cases in the Amazon region. For the diagnosis of malaria it is essential to have trained and experienced technicians to identify the species and phases of the disease, a crucial part to define the ideal dosages of administering medication to patients. In this work, we propose a low-cost malaria diagnosis system using mobile devices, where some segmentation, digital image processing, and convolutional neural networks techniques are applied to perform cell counting, parasitemia estimation, and Plasmodium parasite classification in the species P.falciparum and P.vivax in the trophozoite step. A prototype with 3D parts and electronic automation was proposed to perform the scanning and imaging of blood slides to integrate with the mobile system and perform the on-site diagnosis, without the need for changing microscopic equipment, thus, based on the premise of low cost. A 93% accuracy was obtained in a convolutional neural network model. In view of this, it is possible to break barriers of accessibility in countries with few resources in the use of diagnostic tools and screening of diseases.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) A doença de Chagas ou Tripanossomíase americana é causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi. O tratamento atual compreende o uso de pelo menos dois fármacos o benzonidazol (BNZ) e o nifurtimox, que apresentam elevada toxicidade e ineficácia na fase crônica da doença, o que induz a busca de alternativas terapêuticas mais eficazes. Estudos têm demonstrado que a síntese verde de nanopartículas de prata com polissacarídeos tem potencializado a atividade biológica tanto dos polissacarídeos como da prata. Portanto, o polissacarídeo xilana foi extraído do sabugo de milho, utilizando um método amigável ao meio ambiente, e foi usado para a síntese de nanopartículas de prata (nanoxilanas - NX). Estudos de microscopia de força atômica verificaram que a NX apresentou formato esférico e tamanho médio (~ 40 nm). Espectroscopias de infravermelho e Raman e de Espectrometria de emissão atômica por plasma acoplado comprovaram a presença de prata (~19%) e xilana na NX. Parasitas T. cruzi perderam 95% da sua capacidade de reduzir o MTT (3- brometo (4,5- dimetiltiazol-2-il) -2,5- difeniltetrazólio) quando incubados com nanoxilana (100 µg/mL). Análise de citometria de fluxo mostrou que 98% dos parasitas estavam positivos para iodeto de propídeo quando incubados por 24 h com NX (100 µg/mL). Os dados mostram que a nanoxilana induz necrose dos parasitas e que é um forte candidato para estudos pré-clínicos com animais infectados com Trypanosoma cruzi. Chagas disease or American trypanosomiasis is caused by the protozoan Trypanosoma cruzi. The current treatment comprises the use of at least two drugs, benzonidazole (BNZ) and nifurtimox, which present high toxicity and inefficiency in the chronic phase of the disease, which induces the search for more effective therapeutic alternatives. Studies have shown that the green synthesis of silver nanoparticles with polysaccharides has potentiated the biological activity of both polysaccharides and silver. Therefore, the xylan polysaccharide was extracted from corn cob using an environmentally friendly method and was used for the synthesis of silver nanoparticles (NX). NX-verified atomic force microscopy studies showing spherical shape and mean size (~ 40 nm). Infrared and Raman spectroscopy and coupled plasma atomic emission spectrometry confirmed the presence of silver (~ 19%) and xylan in the NX. T. cruzi parasites lost 95% of their ability to reduce MTT (3-bromide (4,5- dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium) when incubated with nano xylan (100 µg/mL). Flow cytometric analysis showed that 98% of the parasites were positive for propidium iodide when incubated for 24 h with NX (100 µg/mL). The data show that nano xylan induces parasite necrosis and is a strong candidate for preclinical studies with animals infected with Trypanosoma cruzi.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) O Toxoplasma gondii consegue modular o funcionamento do sistema imune do hospedeiro, estabelecendo uma infecção persistente e contribuindo para o desenvolvimento de alterações cerebrais, com repercussões comportamentais. Neste contexto, o objetivo desse trabalho foi avaliar os efeitos da infecção pelo T. gondii na estrutura do tecido cerebral e sua repercussão sobre a resposta neuroimunopatogênica. Para tanto, camundongos das linhagens Balb/c e C57BL/6 foram infectados com cistos da cepa ME49 e acompanhados durante 30 dias. Após esse período, foi realizada dosagem de anticorpos IgG anti-T. gondii e citocinas IFNγ, IL-12, TNF-α, IL-10 e TGF-β. Os cérebros foram perfusionados e submetidos à imunohistoquímica para análise das redes perineuronais e dos cistos teciduais desenvolvidos. Os camundongos da linhagem C57BL/6 foram mais suscetíveis à infecção, exibindo maior perda de peso corporal e menor taxa de sobrevivência do que animais da linhagem Balb/c. Análise da produção de anticorpos IgG anti-T. gondii demonstrou que a linhagem C57BL/6 produziu níveis menores do que camundongos Balb/c. Enquanto os níveis séricos de IFN-γ mostraram-se elevados entre as linhagens, a produção de TNF-α e IL-12 foi mais elevada para a linhagem C57BL/6. Em contrapartida, a produção de TGF-β e IL-10 mostrou-se semelhante para as duas linhagens. A análise da distribuição de cistos pelo encéfalo demonstrou a maior suscetibilidade da linhagem C57BL/6 à invasão tecidual pelo parasito, evidenciada pelo número de cistos consideravelmente mais elevado do que o observado na linhagem Balb/c. Os camundongos da linhagem C57BL/6 exibiram maior comprometimento das redes perineuronais, exibindo uma perda de 65% da integridade estrutural do cérebro, enquanto a linhagem Balb/c exibiu uma redução de apenas 46%. Nossos resultados indicam que animais C57BL/6 são mais suscetíveis a infecção devido a elevada produção de citocinas inflamatórias (TNF-α e IL-12). Esse dado relaciona-se ao diferente padrão na distribuição dos cistos entre as linhagens, com C57BL/6 apresentando um número significativamente mais elevado, além de exibir um maior comprometimento da estrutura cerebral quando comparado a Balb/c. Neste contexto, torna-se possível estabelecer uma relação entre a resposta imune sistêmica com o desenvolvimento da patologia cerebral em camundongos suscetíveis (C57BL/6) e resistentes (Balb/c) à infecção. Toxoplasma gondii is able to manipulate the host's immune system to establish a persistent and efficient infection, contributing to the development of brain abnormalities with behavioural repercussions. In this context, the aim of this work was to evaluate the effects of T. gondii infection on the structure of brain tissue and its influence on the neuroimmunopathogenic response. C57BL/6 and Balb/c mice were infected with T. gondii ME49 strain tissue cysts and accompanied during 30 days. After this period, levels of antibody IgG anti-T. gondii and cytokines IFN-γ, IL-12, TNF-α, IL-10 e TGF-β were measured. After blood withdraw, mice were perfused and the brains submitted to immunohistochemistry for perineuronal nets and cyst quantification. Our results showed that C57BL/6 mice were more susceptible to infection than Balb/c animals, showing 40% and 100% survival, respectively. Increased body weight loss was also observed among infected C57BL/6 susceptible mice. Analysis of anti-T gondii IgG production demonstrated that C57BL/6 animals produce lower antibody levels than Balb/c mice. C57BL/6 mice showed high serum TNF-α and IL-12 production as well as TGF-β and IL-10 levels were similar between the two strains; C57BL/6 also had a higher number of cerebral cysts, with a higher occurrence of cysts in the caudal region of the brain when compared to Balb/c mice, which presented a more homogeneous cysts distribution. Immunohistochemistry analysis revealed greater loss of labeling for perineuronal networks in C57BL/6 animals when compared to Balb/c animals. These data raise a discussion about the ability of T. gondii influence the brain functioning and may be related to the development of neurological symptoms similar to those observed in well-known neuroinflammatory and neurodegenerative diseases. Our results indicate that C57BL/6 animals are more susceptible to infection due to high production of inflammatory cytokines (TNF-α and IL-12) and low production of regulatory cytokine (TGF-β). This data may be related to the different distribution pattern of cysts between the mice lineages, with C57BL/6 showing a significantly higher number besides showing a greater perineuronal networks impairment when compared to Balb/c.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) A toxoplasmose é uma zoonose presente em todo o mundo com capacidade de atingir qualquer animal homeotérmico, inclusive seres humanos. Essa doença é particularmente mais grave em imunocomprometidos e mulheres grávidas. A infecção primária em mulheres grávidas geralmente é assintomática e o Toxoplasma gondii, agente causador da doença, pode atravessar a placenta, infectar o feto, causando retinocoroidite, hidrocefalia, retardo mental, convulsões ou até mesmo morte fetal. Devido à importância da toxoplasmose na saúde pública, este estudo teve como objetivo caracterizar os aspectos epidemiológicos da infecção por T. gondii em gestantes atendidas nas unidades básicas de saúde (UBSs) do município de Santa Cruz-RN, bem como investigar os fatores de risco associados a essa infecção, incluindo fatores individuais, comportamentais e socioeconômicos. Nesse estudo foram avaliadas 184 gestantes e os resultados sorológicos para anticorpos IgG e IgM específicos para T. gondii foram obtidos por ELISA e Eletroquimioluminescência. A prevalência encontrada foi de 28,8% nas gestantes atendidas nas UBSs do município, mostrando que 71,1% das mulheres ainda se encontram suscetíveis a infecção. Das 6 áreas analisadas, os bairros Maracujá e Paraíso apresentaram maior percentual de gestantes com sorologia IgG positiva quando comparados aos outros bairros. Quando observadas apenas as mulheres com sorologia IgG negativa (suscetíveis) durante a primeira gestação e em idade reprodutiva, foi verificado que estas se apresentaram em maior número, caracterizando vulnerabilidade à infecção durante uma possível gestação posterior. Também foi observado que profissões/ocupações que possivelmente as expõem de forma contínua a fatores de risco para doença e hábitos como consumo de carne malpassada, práticas de jardinagem, consumo de água diretamente da torneira e de salada sem conhecimento sobre a procedência de higienização foram práticas comuns entre as gestantes avaliadas. A presença de reservatório de água totalmente ou parcialmente fechado, está se mostrando como um fator protetor à infecção nesse grupo. Portanto, dado o elevado número de mulheres em idade reprodutiva em risco para toxoplasmose no município, expostas a fatores que contribuem para infecção, se faz necessário a implementação de programas de prevenção e rastreio, principalmente durante a gestação. Toxoplasmosis is a zoonosis present worldwide with the ability to target any homeothermic animal, including humans. This disease is particularly serious in immunocompromised and pregnant women. Primary infection in pregnant women is usually asymptomatic and Toxoplasma gondii, the causative agent of the disease, can cross the placenta, infecting the fetus, causing retinocoriditis, hydrocephalus, mental retardation, seizures or even fetal death. Due to the importance of toxoplasmosis in public health, this study aimed to characterize the epidemiological aspects of T. gondii infection in pregnant women attended at the basic health units (BHUs) of the city of Santa Cruz-RN, as well as to investigate the risk factors associated with this infection, including individual, behavioral and socioeconomic factors. In this study, 184 pregnant women were evaluated and the serological results for IgG and IgM antibodies specific for T. gondii were obtained by ELISA and Electrochemiluminescence. The prevalence found was 28.8% in the pregnant women attending the UBSs of the city, showing that 71.1% of the women are still susceptible to infection. Of the 6 analyzed areas, the neighborhoods Maracujá and Paraiso presented a higher percentage of pregnant women with positive IgG serology when compared to the other neighborhoods. When only women with IgG negative serology (susceptible) were observed during the first gestation and at reproductive age, it was verified that they were present in greater number, characterizing vulnerability to infection during a possible later pregnancy. It was also observed that professions / occupations that possibly expose them continuously to risk factors for illness and habits such as poor meat consumption, gardening practices, consumption of water directly from tap and salad without knowledge about the origin of hygiene were practical among the pregnant women evaluated. The presence of a fully or partially enclosed water reservoir is proving to be a protective factor for infection in this group. Therefore, given the high number of women of reproductive age at risk for toxoplasmosis in the municipality, exposed to factors that contribute to infection, it is necessary to implement prevention and screening programs, especially during pregnancy.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa de Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. A infecção pelo Trypanosoma cruzi acomete milhares de pessoas pelo mundo e a eficácia dos fármacos disponíveis para eliminar este parasito é limitada à fase aguda da doença. A busca por moléculas mais efetivas contra o T. cruzi e de menor toxicidade para o hospedeiro é, portanto, uma prioridade para a saúde pública mundial. Neste contexto surgem as 1,8-dioxo-octahidroxanthenos ou xanthenodionas, compostos sintéticos derivados das xantonas que possuem inúmeras aplicações terapêuticas descritas, dentre elas atividades anti-inflamatória, tripanocida e cardioprotetora. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a ação tripanocida, in vitro, de compostos derivados das 1,8-dioxo-octahydroxantenos e sua influência, in vivo, na parasitemia e na alteração dos parâmetros inflamatórios durante a infecção murina. Para avaliar a toxicidade dos compostos in vitro utilizou-se testes colorimétricos (MTT) em formas tripomastigotas (cepa Y) e em macrófagos J774A.1, além de ensaios fluorimétricos (AlamarBlue) em células Vero com parasitos da cepa CL expressando uma proteína vermelho fluorescente (CLtdTomato) para determinação da CC50, IC50 e IS. Nesta etapa, doze compostos foram avaliados (MI17, MI18, MI24, MI25, MI39, MI45, MI68, MI73, MI78, MI79, MI80 e MI81) foram avaliados nesta etapa. O compostos MI80 (IC50=30.65) destacou-se por apresentar atividade anti-T. cruzi, com o melhor IS (170). Para avaliar in vivo o desempenho tripanocida e imunológico do composto MI80, camundongos Swiss foram infectados com as cepas Y (n = 10) e CL (n = 10) de T. cruzi utilizando um protocolo de tratamento por 10 dias com 50mg / kg de MI80. O MI80 reduziu 40% do pico de parasitemia em animais infectados com a cepa Y, enquanto reduziu, em ambas as cepas, o infiltrado inflamatório cardíaco. RankL, CCL2 e IFN-g foram mensurados no tecido cardíaco, mas o MI80 não foi capaz de modificar seu padrão em animais infectados com a cepa Y. No entanto, o MI80 aumentou o RankL e IL-10 em camundongos infectados com CL. Não foi observada toxicidade hepática e renal nos animais advindas do tratamento com o composto MI80. . Nossos achados mostraram que o 1,8-dioxo-octa-hidroxanteno tem um efeito anti-parasitário limitado e foi capaz de melhorar os parâmetros inflamatórios cardíacos relacionados à infecção por T. cruzi. Trypanosoma cruzi infection affects thousands of people worldwide and the efficacy of drugs available to eliminate this parasite is limited. The1,8-dioxo-octahydroxanthenos or xanthenediones are derivatives synthetic compounds from xanthones presenting considerable biological applications. The aim of this study was to assess the trypanocidal and inflammatory activities of 1,8-dioxo-octahydroxanthenes derivatives using the CL strain of T. cruzi expressing the tandem red fluorescent protein (tdTomato) to test in vitro 12 xanthenediones derivatives (MI17- 18, 24, 25, 39, 45, 68, 73, 78, 79, 80, 81). The killing assay showed that three compounds were able to eliminate this parasite: MI24 (Ic50=26.43μM), MI25 (Ic50= 14.11μM) and MI80 (Ic50=30.65). However, only MI80 was not toxic for Vero cells after the viability assay. To evaluate in vivo the tripanocidal and the immunological performance of the MI80, Swiss mice were infected with the Y (n=10) and CL (n=10) strains of T. cruzi using a treatment protocol for 10 days with 50mg/kg of MI80. MI80 reduced 40% of the parasitemia peak in animals infected with Y strain while reduced, in both strains, the cardiac inflammatory infiltration. RankL, CCL2 and IFN-g were measured in cardiac tissue, but the MI80 was not able to modify their pattern in Y-strain infected animals. However, MI80 increased the RankL and IL-10 in CL-infected mice. No hepatic and renal toxicity was observed with the MI80. Our findings showed that 1,8-dioxooctahydroxanthene has a limited anti-parasitic effect and it was capable to ameliorate the cardiac inflammatory parameters related to T. cruzi infection.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) A toxoplasmose é uma doença infecto-parasitária causada pelo Toxoplasma gondii (T. gondii), um parasito intracelular obrigatório capaz de determinar um equilíbrio delicado entre o parasitismo e a resposta imune do hospedeiro, a qual é modificada devido fatores ambientais e genéticos. Devido a isso, objetivamos investigar as frequências alélicas e genotípicas de SNPs específicos nos genes IL17A e IL17RA, bem como a produção de IL-17A, IL-33 e CCL2 em gestantes infectadas pelo T. gondii do Estado do Rio Grande do Norte, Brasil. Através das técnicas PCR-RFLP, foram avaliados dois SNPs implicados na modulação do perfil de resposta imune Th17, IL17A rs2275913 (G>A) e IL17RA rs4819554 (A>G) em mulheres grávidas, infectadas ou não pelo T. gondii e atendidas na Maternidade Escola Januário Cicco, Natal/RN. Estas mulheres também foram avaliadas quanto a produção de citocinas implicadas na modulação da resposta imune, CCL2, IL-33 e IL-17A, pelo método de ELISA direto. Os resultados mostraram que o alelo G do SNP rs2275913 (IL17A) pareceu se protetor nesta população, enquanto o alelo G do SNP rs4819554 (IL17RA) foi associado a uma maior susceptibilidade à infecção pelo T. gondii [P valor= 0,025; OR= 2,815 (1,118- 7,089); IC= 95%]. Quanto às citocinas, nenhuma delas teve influência sobre os parâmetros analisados (aborto e hipertensão). Diante destes resultados, esse estudo inédito traz importantes evidências imunogenéticas, em humanos, que apoiam a existência de uma parcela de contribuição do genótipo do hospedeiro no resultado da imunomodulação exercida pelo T. gondii; este ainda abre perspectivas para outras futuras abordagens da relação parasito-hospedeiro. Toxoplasma gondii (T. gondii) is a parasitic infectious parasitic disease that is an obligate intracellular parasite capable of determining a delicate balance between parasitism and the immune response of the host, which is modified due to environmental and genetic factors. Due to this, we aimed to investigate the allelic and genotype frequencies of specific SNPs in the IL17A and IL17RA genes, as well as the production of IL-17A, IL-33, and CCL2 in pregnant women infected with T. gondii from the State of Rio Grande do Norte, Brazil. Through PCR-RFLP techniques, two SNPs implicated in Th17 immune response, IL17A rs2275913 (G> A) and IL17RA rs4819554 (A> G) modulation were evaluated in pregnant women, infected or not by T. gondii and treated in Maternity School Januário Cicco, Natal / RN. These women were also evaluated for the production of cytokines involved in the modulation of the immune response, CCL2, IL-33, and IL-17A, by the direct ELISA method. The results showed that the G-allele of the SNP rs2275913 (IL17A) appeared to be protective in this population, while the rs4819554 (IL17RA) SNP G allele was associated with a greater susceptibility to T. gondii infection [P value = 0.025; OR = 2.815 (1.118-7.089); CI = 95%]. Regarding cytokines, none of them had any influence on the analyzed parameters (abortion and hypertension). In view of these results, this unpublished study brings important immunogenic evidence in humans that support the existence of a contribution of the host genotype to the immunomodulation result of T. gondii; this still opens perspectives for other future approaches of the parasite-host relationship.

A maioria dos casos de malária grave humana é atribuída a infecções por Plasmodium falciparum, considerada o mais agressivo devido à hipóxia tecidual resultante de vários fatores, entre eles a anemia severa. Nesse sentido, este estudo avaliou o grau de hemólise mediada pelo sistema complemento em eritrócitos humanos sensibilizados com extratos proteicos de P. falciparum, através de ensaios hemolíticos autólogos in vitro, no intuito de estabelecer relações entre esta atividade e suas implicações para a patogênese da malária complicada. Os eritrócitos tratados com EBPf com a concentração mínima de 0.06 ug/mL foram hemolisados em cerca de 60% quando em presença do complemento, enquanto que na ausência deste o efeito foi reduzido para menos de 20%, indicando a sua participação. Nas hemácias do doador com traço falciforme (HbAS), houve uma pequena redução da hemólise em relação às hemácias normais, sugerindo uma imunoreatividade diferencial neste caso. Em comparação com o tratamento com a neuraminidase, os perfis de ação hemolítica foram similares aos obtidos com o EBPf, indicando que o P. falciparum provavelmente possui proteases com ação semelhante a esta enzima, clivando proteínas sialisadas na superfície da célula-alvo e valendo-se de vias alternativas de invasão sob determinadas condições. O gel de SDS-PAGE corado com nitrato de prata revelou um perfil de degração proteica equivalente entre os tratamentos dos eritrócitos com EBPf e neuraminidase, reforçando esta hipótese. Além disso, as proteases do parasito podem ser capazes de degradar estruturas proteicas da superfície eritrocitária como glicoforina A, enquanto outras são preservadas, como a aquaporina 1, podendo contribuir para a patogênese da doença. O ensaio de dose-resposta demonstrou uma redução da atividade hemolítica apenas a partir da concentração de 0.03 ug/mL, indicando que a elevada parasitemia não é fator estritamente crucial para a ativação do complemento, tratando-se, provavelmente, de um fenômeno biológico potencializado por outros fatores envolvidos no processo infeccioso. Desta forma, concluiu-se que extratos proteicos de P. falciparum induzem hemólise em eritrócitos humanos via complemento, sendo este um dos prováveis mecanismos responsáveis pela geração de um processo inflamatório exacerbado e perda da homeostasia do indivíduo. Most cases of severe human malaria are due to Plasmodium falciparum infections, considered the most aggressive due to tissue hypoxia resulting from several factors, including severe anemia. In this sense, this study evaluated the degree of hemolysis mediated by the complement system in human erythrocytes sensitized with protein extracts of P. falciparum through in vitro autologous hemolytic assays in order to establish relationships between this activity and its implications for the pathogenesis of complicated malaria. Erythrocytes treated with EBPf with the minimum concentration of 0.06 μg/ml were hemolyzed in about 60% when in the presence of the complement; whereas in the absence, the effect was reduced to less than 20%, indicating it’s participation. In cells donor with sickle cell trait (HbAS), there was a small reduction in hemolysis compared to normal red blood cells, suggesting a differential immunoreactivity in this case. In contrast to the treatment with neuraminidase, the hemolytic action profiles were similar to those obtained with EBPf, indicating that P. falciparum probably has proteases with a similar action to this enzyme, cleaving proteins sialisated on the surface of the target cell, using invasion alternatives pathways under certain conditions. The SDSPAGE gel stained with silver nitrate revealed an equivalent protein degradation profile between erythrocyte treatments with EBPf and neuraminidase, reinforcing this hypothesis. In addition, parasite’s proteases may be able to degrade erythrocyte surface protein structures such as glycophorin A, while others are preserved, such as aquaporin 1, and may contribute to the immunopathogenesis of the disease. The dose-response assay demonstrated a reduction in hemolytic activity only at the concentration of 0.03 μg/mL, indicating that the high parasitemia is not a strictly crucial factor for complement activation, probably due to a potentiated biological phenomenon by other factors involved in the infectious process. Thus, it was concluded that P. falciparum protein extract induce haemolysis in human erythrocytes via complement, being this one of the mechanisms responsible for the generation of an exacerbated inflammatory process and loss of the individual’s homeostasis.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) As infecções oportunistas são reconhecidas como uma das complicações mais comuns em pacientes imunocomprometidos, incluindo aqueles que são infectados pelo HIV, os quais estão em maior risco de doença crônica e debilitante. Nesse contexto, dois coccídeos intestinais, Cryptosporidium spp. e Cystoisospora spp., acometem pacientes HIV/AIDS e induzem quadros graves de diarreia e/ou um histórico de diarreia alternadamente com um intervalo assintomático. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar a frequência de Cryptosporidium spp. e Cystoisospora spp. em pacientes internados com HIV/AIDS no Hospital Giselda Trigueiro, no período de novembro de 2015 a março de 2017. Neste estudo foi aplicado questionário sócio-econômico, feita consulta dos prontuários, e também foram colhidas 72 amostras fecais para investigação parasitológica pelos métodos de concentração de Seather, Ritchie e Coloração Ziehl-Neelsen modificado; bem como, detecção de coproantígeno de Cryptosporidium spp. utilizando o ensaio imunoenzimático (ELISA). A amostra foi composta de 75% de homens e 25% de mulheres com idade variando entre 20 e 80 anos. A frequência de Cryptosporidium spp foi de 2,2%, através do ensaio imunoenzimático, e de Cystoisospora spp. foi de 6,9%, através dos métodos de Ritchie e coloração Zeehl-Neelsen modificado. Todos os pacientes faziam uso de Sulfametaxol e Trimetoprim e apresentavam no momento da coleta um quadro clínico de diarréia. Entre os pacientes positivos para estes coccídeos, a contagem de linfócitos T CD4+ foi abaixo de 200 células/mm3 de sangue. Opportunistic infections are recognized as one of the most common complications in immunocompromised patients, including those who are infected with HIV, who are at increased risk of chronic and illness.In this context, two intestinal coccidians, Cryptosporidium spp. and Cystoisospora spp., affect HIV / AIDS patients and induce severe diarrhea and / or a history of diarrhea alternately with an asymptomatic interval. Therefore, the objective of this study was to evaluate the frequency of Cryptosporidium spp. and Cystoisospora spp. in patients hospitalized with HIV/AIDS at the Hospital Giselda Trigueiro, between 2015 and 2017. In this study, a socioeconomic questionnaire was applied, and 72 fecal samples were collected for parasitological investigation using the methods of Seather, Ritchie and Modified Ziehl-Neelsen staining; as well as, detection of Cryptosporidium spp. coproantigen by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The sample consisted of 75% of men and 25% of women with ages ranging from 20 to 80 years. The frequency of Cryptosporidium spp. was 2.2%, through the immunoenzymatic assay, and Cystoisospora spp. was 6.9%, using Richie's methods and modified Ziehl-Neelsen staining. All patients used trimethoprim-sulfamethoxazole and presented diarrhea at the time of collection. Among the positive patients for these coccidians, the CD4 + T lymphocyte count was below 200 cells/mm3 of blood.

Cães são os reservatórios primários dos parasitos do gênero Leishmania. Receptores da imunidade inata fazem a detecção precoce do parasito e conduzem a imunidade adaptativa específica na tentativa de controlar a infecção. Entretanto, poucos estudos tem investigado a correlação entre a expressão de receptores da imunidade inata e a resistência ou susceptibilidade em cães infectados por Leishmania infantum. O objetivo deste estudo foi correlacionar os achados clínicos em cães naturalmente infectados por L. infantum à expressão de receptores da imunidade inata (Toll Like Receptors-TLRs e Nod Like Receptors-NLRs). Inicialmente, o soro de 76 cães foi coletado no Centro de Controle de Zoonoses de Natal, Rio Grande do Norte, Brasil. A positividade dos cães para L. infantum foi confirmada pela reatividade nos testes de ELISA e DPP®. Os cães foram clinicamente avaliados e classificados como sintomáticos (n=19), oligossintomáticos (n=19), assintomáticos (n=19) e não infectados (n=19). Os cães naturalmente infectados por L. infantum e controles não infectados foram eutanasiados e fragmentos de fígado foram coletados para quantificação da expressão de RNAm de TLRs (TLR1-9), NLRs (NOD1, NOD2, NLRP1 e NLRP3) citocinas (IL1β, IL-6, IL-12, IL-10, TNFα, IFN-γ) e iNOS com auxilio da técnica de PCR em tempo real. Os resultados demonstram o aumento na expressão da maioria dos receptores do tipo Toll e do tipo Nod nos cães naturalmente infectados por L. infantum, comparado a animais não infectados. Entretanto, cães sintomáticos apresentaram maior expressão de TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR7, TLR8, NLRP1, NLRP3, NOD1 e IL-1β quando comparado a animais assintomáticos, mostrando significante aumento na transcrição destas moléculas com a progressão da doença. Por outro lado, cães assintomáticos apresentaram maior expressão de RNAm de citocinas (IFN-γ, IL-12) e iNOS quando comparado a animais oligossintomáticos e sintomáticos. Este estudo gerou novos conhecimentos envolvendo receptores da imunidade inata (TLRs, NLRs) na leishmaniose visceral canina (LVC), podendo servir de base para o melhor entendimento dos mecanismos de resistência ou susceptibilidade à infecção por L. infantum em cães, bem como dar subsídio a estratégias profiláticas para o controle da LVC. Dogs are the primary reservoirs of parasites of the Leishmania genus. Innate immune receptors perform early detection of the parasite and lead to specific adaptive immune response in attempt to infection control. However, few studies have investigated a correlation between the expression of innate immunity receptors and the resistance or susceptibility pattern in dogs naturally infected with Leishmania infantum. The aim of this study was to correlate the clinical status of dogs naturally infected with L. infantum with the mRNA expression levels of innate imune receptors (Toll like receptors-TLRs and Nod Like Receptors-NLRs). Initially, serum of 76 dogs was collected at the Zoonoses Control Center in Natal, Rio Grande do Norte, Brazil. The L. infantum infection in dogs was confirmed by ELISA and DPP® tests. Subsequently, animals were clinially evaluated and classified as asymptomatic (n=19), oligosymptomatic (n=19), symptomatic (n=19) and uninfected (n=19). Dogs naturally infected by L. infantum and uninfected controls were euthanasied and liver samples were collected to quantify mRNA expression of TLRs (TLR1-9), Nod Like receptors-NLRs (NOD1, NOD2, NLRP1, NLRP3), cytokines (IL1β, IL-6, IL-12, IL-10, TNFα, IFN-γ) and iNOS using real-time PCR. The results demonstrate the increased expression of almost all TLRs and NLRs in dogs naturally infected by L. infantum compared with uninfected animals. However, symptomatic dogs showed higher expression of TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR7, TLR8 NLRP1, NLRP3, NOD1 and IL-1β than asymptomatic animals, revealing significant up regulation of transcription with disease progression. On the other hand, asymptomatic dogs presented greater cytokine mRNA expression (IFN-γ, IL-12) and iNOS when compared to oligosymptomatic and asymptomatic animals. This study unveil new knowledge involving innate immunity receptors (TLRs, NLRs) and cytokines in canine visceral leishmaniasis and may be used as a basis for better understanding of resistance or susceptibility mechanisms in dogs infected with L. infantum, as well as prophylactic strategies to control canine visceral leishmaniasis.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) O Toxoplasma gondii é o principal agente etiológico responsável pelo acometimento do SNC em pacientes HIV/Aids. A triagem de pacientes portadores de HIV/Aids em relação à positividade para T. gondii, associada à determinação do número de linfócitos TCD4, pode auxiliar na redução da morbi-mortalidade relacionada a esta co-infecção. O presente estudo teve como objetivo geral avaliar a frequência da infecção pelo T. gondii em pacientes HIV positivos e correlacionar aos aspectos clínicos, sorológicos e epidemiológicos. Para isto, foram avaliados 179 pacientes HIV positivos acompanhados no Hospital Giselda Trigueiro. As análises sorológicas foram realizadas através da técnica de ELISA, enquanto que as análises clínicas e epidemiológicas ocorreram por meio da pesquisa em prontuários e aplicação de questionário, respectivamente. Além disso, foi realizada análise molecular a partir de PCR em amostras de sangue periférico de 11 pacientes HIV internados com neurotoxoplasmose (suspeita ou confirmação). Nossos resultados indicam alta taxa de infecção por T. gondii entre pacientes portadores de HIV/Aids (83,8%), sendo detectadas a neurotoxoplasmose (11,7%) e a toxoplasmose ocular (3,35%). A presença de gatos e a ingestão de salada crua foram fatores de risco identificados, aumentando a chance de adquirir a infecção em 2,6 e 3,4 vezes, respectivamente. As manifestações clínicas mais frequentes entre todos os pacientes acometidos pela toxoplasmose cerebral consistiram em: paresia/hemiparesia (65,62%), cefaleia (37,50%) e alterações da consciência (28,12%). Além disso, entre os pacientes HIV/Aids internados, a neurotoxoplasmose foi decorrente de reativação da infecção latente. A avaliação molecular apresentou limitações quanto ao diagnóstico da neurotoxoplasmose. Conclui-se que a realização deste trabalho permitiu uma caracterização epidemiológica e clínica da toxoplasmose em pacientes HIV/Aids do Rio Grande do Norte, sendo um estudo pioneiro na região. Toxoplasma gondii is the main etiological agent responsible for central nervous system involvement in HIV / AIDS patients. The screening of patients with HIV / AIDS related to the positivity for T. gondii, associated to the determination of the number of CD4+ T lymphocytes, may help to reduce the morbidity and mortality related to this co-infection. The present study had as general objective to evaluate the frequency of T. gondii infection in HIV positive patients and to correlate clinical, serological and epidemiological aspects. For this, 179 HIV positive patients were evaluated at the Hospital Giselda Trigueiro. Serological tests were performed using the ELISA technique, while the clinical and epidemiological analyzes occured through research in medical records and questionnaire application, respectively. In addition, molecular analysis was performed by PCR in peripheral blood samples from 11 HIV patients hospitalized with neurotoxoplasmosis (suspected or confirmed). Our results indicate a high rate of T. gondii infection among patients with HIV / AIDS (83.8%), being detected neurotoxoplasmosis (11.7%) and ocular toxoplasmosis (3.35%). The presence of cats and raw salad ingestion were identified as risk factors, increasing the chance of acquiring the infection in 2.6 and 3.4 times, respectively. The most frequent clinical manifestations among all patients affected by cerebral toxoplasmosis consisted of: paresis / hemiparesis (65.62%), headache (37.50%) and changes in consciousness (28.12%). Besides that, among hospitalized HIV / AIDS patients, neurotoxoplasmosis was due to latent infection reactivation. The molecular evaluation presented limitations on the diagnosis of neurotoxoplasmosis. It is concluded that the accomplishment of this work allowed an epidemiological and clinical characterization of the toxoplasmosis in HIV / AIDS patients of Rio Grande do Norte, being a pioneer study in the region.

Essa tese trata de duas pesquisas com diferentes naturezas conceituais no campo da modelagem molecular, porém baseadas em semelhantes princípios teóricos da física quântica e da química computacional. No primeiro estudo, as estabilidades dos sistemas ERα-OHT (Receptor α de Estrógeno-Hidroxitamoxifeno), ERα-RAL (Receptor α de Estrógeno-Raloxifeno) e Integrina αvβ3-Cilengitide foram determinadas em termos energéticos a partir da técnica de fracionamento molecular com capuzes conjugados (MFCC) e no escopo da teoria do funcional da densidade (DFT) seguindo o esquema GGA-PBE-Grimme para calcular a interação energias dos sistemas estudados. No primeiro estudo, foi possível predizer a relevância individual dos aminoácidos Glu, Asp, Arg, Lys no sistema com o Tamoxifeno e Glu, Asp e Lys com o Raloxifeno. Para isso ser possível, as forças de atração e repulsão dos resíduos que compõem os sistemas foram calculadas. Cada um desses resíduos apresentou uma energia de interação que variou dependendo da natureza química da sua cadeia lateral, do ambiente de microsolvatação que o envolve e dos contatos intermoleculares que estabelece. O estudo pioneiro da estabilidade conformacional em termos energéticos de uma região livre de aminoácidos incitará pesquisas centradas no desenvolvimento e síntese de novos antagonistas utilizados no tratamento de diversas patologias comuns na população geral. No segundo estudo, foram determinadas as propriedades energéticas do sistema Integrina αVβ3-Cilengitide, cuja estrutura cristalográfica apresenta cátions Mn+2. Observou-se a importâncias dos aminoácidos Ser, Asp, Leu, Arg, Lys, Ala e Pro na interaçao da integrina com o fragmento RGD (R: arginina; G: glicina; D: ácido aspártico) do cilengitide. A importância da integrina com o fragmento RGD no mecanismo de adesão de diversas células envolvidas nas doenças cancerígenas e também na implantação embrionária permitirá o desenvolvimento de novas terapias impactantes na sobrevida de pacientes portadores de diversas neoplasias e na reprodução humana. This thesis deals with two researches with different conceptual nature in the field of molecular modeling based on similar theoretical principles of quantum physics and computational chemistry. In the first study the stabilities of ERα-OHT (Receptor α Estrogen co-crystalyzed with Hydroxytamoxifen), ERα-RAL (α-Estrogen Receptor co-crystalyzed with Raloxifene) and integrin αvβ3 co-crystalyzed with cilengitide systems were determined in terms of energy from the Molecular Fractionation Technique Caps Conjugates (MFCC), and the scope of the Density Functional Theory (DFT) following GGA-PBE-Grimme scheme for calculating the interaction energy of the systems studied. In the first study, it was possible to predict the relevance of individual amino acids Glu, Asp, Arg, Lys in the system with Tamoxifen and Glu, Asp and Lys in Raloxifene system. For this to be possible, the attraction and repulsion forces of the residues that comprise the systems were calculated. Each of these residues had an energy of interaction that varied depending on the chemical nature of the side chain, the microsolvation environment that surrounds and intermolecular contacts establishing. The pioneer study of conformational stability in terms of energy of free amino acid region will encourage research focusing on the development and synthesis of new antagonists used in the treatment of several common diseases in the general population. In the second study, we determined the energetic properties of Integrin αVβ3-cilengitide system, whose crystallographic structure has Mn+2 cations. It was noted the importance of amino acids Ser, Asp, Leu, Arg, Lys, Ala and Pro in integrin interaction with the RGD fragment (R: arginine; G: glycine; D: aspartic acid) of cilengitide. The importance of integrin with the RGD fragment in the adhesion mechanism of various cells involved in cancers and in embryo implantation allows the development of new therapies impacting on survival of patients with various forms of neoplasms and in human reproduction.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) A resistência aos antimaláricos disponíveis no mercado leva à necessidade do desenvolvimento de novos compostos com novos alvos farmacológicos. Os derivados de naftoquinonas são descritos como compostos líderes promissores para o desenvolvimento de fármacos antimaláricos. Em vista disso, nós avaliamos a atividade antiplasmodial in vitro de três derivados de hidroxinaftoquinonas contra o estágio intraeritrocítico assexuado de Plasmodium falciparum, assim como parâmetros toxicológicos in vitro e in vivo e investigamos um provável mecanismo de ação relacionado à via dos isoprenóides através de marcações metabólicas de precursores da via com trítio radioativo, complementado com estudos de docking com um template da octaprenil pirofosfato sintase. Os derivados de hidroxinaftoquinonas analisados tiveram boa atividade antiplasmodial, com IC50 menor que 20 μM para a cepa 3D7 e menor que 50 μM para a cepa Dd2. A janela terapêutica é segura, com índice de seletividade variando entre 36,7 e 143,0. Os compostos não causaram hemólise nas doses testadas (10 e 50 vezes maiores que as respectivas IC50), e não desencadearam sinais de toxicidade no teste de toxicidade aguda in vivo apesar de o composto 4a ter promovido esteatose hepática e hemorragia no tecido renal. Considerando um provável mecanismo de ação, os derivados de hidroxinaftoquinonas parecem inibir a síntese dos precursores isoprênicos, principalmente a menaquinona e o tocoferol e os estudos de docking revelaram nove possíveis interações com alta energia em quatro sítios de ligação diferentes com um template da octaprenil pirofosfato sintase. Em nossos resultados, o composto 4c foi o mais promissor, visto que possuiu o menor IC50 no teste antiplasmodial in vitro, menor citotoxicidade in vitro e toxicidade aguda in vivo, além de ter inibido os três produtos da via dos isoprenóides testados, podendo ser considerado um candidato padrão para o processo de “hit-to-lead. The resistance to antimalarial drugs available on the market leads to the need for the development of new compounds with novel pharmacological targets. The naphthoquinone derivatives are described as promising compounds leading to the development of antimalarial drugs. That said, we evaluated the antiplasmodial in vitro activity of three derivatives of hydroxy-naphthoquinones against asexual intraeritrocitic stage of Plasmodium falciparum, as well as toxicological in vitro and in vivo parameters and investigate a possible mechanism of action related to the isoprenoid pathway through metabolic markers via the precursors of radioactive tritium, complete with docking studies with a template of octaprenil pyrophosphate synthase. Hydroxy-naphthoquinones derivatives analyzed had good antiplasmodial activity with IC50 less than 20 μM for 3D7 strain and less than 50 μM for Dd2 strain. The therapeutic window is safe with selectivity index ranging between 36.7 and 143.0. The compounds did not cause hemolysis at the doses tested (10 and 50 times greater than their IC50), and not triggered signs of toxicity in acute toxicity test in vivo even though the compound 4a have promoted hepatic steatosis and haemorrhage in kidney tissue. Whereas a likely mechanism of action, the hydroxy-naphthoquinones derivatives appear to inhibit the synthesis of isoprenic precursors, especially menaquinone and tocopherol and docking studies revealed nine possible interactions with high energy in four different binding sites with a template of octaprenil pyrophosphate synthase. In our results, the compound 4c was the most promising, since it possessed the lowest IC50 in antiplasmodial test in vitro, lower cytotoxicity in vitro and in vivo acute toxicity, and has inhibited the three via the tested isoprenoid products, might be considered a standard candidate for the process "hit-to-lead.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) A toxoplasmose tem como agente etiológico o protozoário Toxoplasma gondii e geralmente causa infecção assintomática em indivíduos imunocompetentes. Entretanto, na transmissão congênita pode gerar quadros graves e morte, representando um sério problema de saúde pública. Em pacientes grávidas reativas para IgM anti-T. gondii recomenda-se diagnóstico molecular do líquido amniótico utilizando a metodologia de PCR qualitativa com o iniciador B1. Porém, seu diagnóstico utilizando esta metodologia pode ser ineficiente principalmente na detecção de cepas híbridas encontradas na América Latina. Nesse contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a eficiência dos métodos sorológicos e da técnica de Nested-PCR utilizando o iniciador GRA7 na detecção do Toxoplasma gondii na transmissão congênita. O estudo foi realizado em 71 gestantes, atendidas no Centro de Saúde Anita Garibaldi (CSAG), Macaíba-RN no período de 2011 a 2015, com idades gestacionais variáveis e faixa etária entre 15-49 anos, submetidas a procedimentos de rotina durante o exame pré-natal tratando-se, portanto, de um estudo de delineamento observacional transversal de acurácia. Foram coletadas amostras de sangue periférico e líquido amniótico. Inicialmente foi realizado o diagnóstico sorológico para toxoplasmose com o auxílio das técnicas de ELISA e Imunofluorescência indireta (IFI) para a detecção de IgG e IgM anti-T. gondii. Posteriormente, as gestantes que apresentaram testes sorológicos reativos para IgM foram selecionadas para a realização da técnica de Nested-PCR utilizando os iniciadores RE e GRA7. A sororeatividade detectada pela presença de IgG e IgM anti-.T gondii pelas técnicas de ELISA e IFI foram, respectivamente, 91,55% e 14,08%, 76,06% e 5,63%. A positividade total para IgM quando associado as técnicas de ELISA e IFI foi de 15,49% (11/71). Entretanto, a análise da positividade com a utilização da Nested-PCR foi de 0% (0/11), 9,09% (1/11) e 54,5% (6/11) utilizando os iniciadores RE, B1 e GRA7 respectivamente. Os resultados indicam que o iniciador GRA7 proposto é mais eficiente na detecção do T. gondii no líquido amniótico que o iniciador B1 e RE, quando utilizada a técnica de Nested-PCR. Toxoplasmosis is the etiologic agent protozoan Toxoplasma gondii and usually cause asymptomatic infection in immunocompetent individuals. However, congenital transmission can lead to serious and death, representing a serious public health problem. In pregnant patients reactive to IgM anti-T. gondii is recommended molecular diagnosis using amniotic fluid qualitative PCR method with the primer B1. However, the diagnosis using this approach can be inefficient mainly for detection of hybrid strains found in Latin America. In this context, the objective of this study was to evaluate the effectiveness of serological methods and nested PCR technique using the primer GRA7 the detection of Toxoplasma gondii congenital transmission. The study was performed in 71 pregnant women seen at the Anita Garibaldi Health Center (CSAG), Macaíba-RN in the period 2011 to 2015, aged gestational variables and age group 15-49 years, subjected to routine procedures during the examination prenatal the case, therefore, a study of cross-sectional observational design accuracy. Samples of peripheral blood and amniotic fluid was collected. Initially it performed the serological diagnosis of toxoplasmosis with the help of ELISA and indirect immunofluorescence (IIF) for the detection of IgG and IgM anti-T. gondii. Subsequently, patients showed reactive serologic tests for IgM were selected to perform the nested PCR technique using the RE and GRA7 initiators. The seroreactivity detected by the presence of anti-IgG and IgM. T. gondii by the ELISA and IFA techniques were respectively 91.55% and 14.08%, 76.06% and 5.63%. Total positivity for IgM when combined the techniques of ELISA and IFA was 15.49% (11/71). However, analysis of positive using the nested PCR was 0% (0/11), 9,09% (1/11) and 54.5% (6/11) using the primers RE, B1 and GRA7 respectively. The results indicate that the proposed GRA7 initiator is more efficient in the detection of T. gondii in amniotic fluid B1 and RE primer, when using the nested PCR technique.

Atualmente, 4 vírus podem ser veiculados pelo Aedes aegypti, sendo estes o da Febre amarela urbana, Chikungunya, Zika e o Dengue, este ultimo, é atualmente o causador de uma das principais doenças reemergente do mundo. Cerca de 3 bilhões de pessoas encontram-se sob o risco de se infectarem pelos vírus. O controle dessas enfermidades é feito através do combate ao inseto transmissor, o A. aegypti, por meio da utilização em ampla escala de inseticidas químicos, os quais são altamente tóxicos para o meio ambiente e para outros animais. Outrossim, estudos mostram que o inseto passou a desenvolver resistência a vários desses produtos. Estudos com produtos provenientes de plantas vêm mostrando-se como uma alternativa às medidas de controle, uma vez que apresentam baixa toxicidade para mamíferos, reduzido impacto ambiental e, em geral, podem ser facilmente obtidos. No presente estudo analisamos os extratos salinos das sementes das plantas Prosopis juliflora (Sw.) DC. Adenanthera pavonina L.; Clitoria fairchildiana R. A. Howard; Delonix regia (Bojer ex Hook) Raf.; Canavalia ensiformis L. (DC.) e Leucaena leucocephala (Lam.) Wit sobre alguns aspectos importantes no ciclo de A. aegypti. Todos os extratos estudados foram capazes de interferir na vibilidade dos insetos, em algum momento do seu desenvolvimento (ovo, larva e/ou adulto). Complementarmente, a adição dos extratos de sementes nas ovitrampas atuaram de forma repelente à postura de ovos por fêmeas grávidas de A. aegypti, de maneira dose dependente. Os extratos de P. juliflora e C. fairchildiana também foram atrativos à postura até a concentração de 10%. Todos os extratos testados apresentaram toxicidade para o cladócero Cerodaphinia dubia. Não obstante se tratar de um material biodegradável foi demonstrado que a fervura dos extratos reduziu a toxicidade, podendo funcionar como método de descarte. Nenhum dos extratos testados apresentou atividade pupicida, indicando que os mecanismos de ação inseticida são dependentes da ingestão de compostos bioativos. Proteínas com potencial bioativos, tais como lectinas, proteínas ligantes a quitina e inibidores de enzimas digestivas foram identificadas em todos os extratos, no entanto, a fervura dos mesmos apenas eliminou a atividade larvicida do extrato de P. juliflora, indicando que as proteínas, não são fundamentais para a atividade inseticida dos demais extratos. Mais estudos deverão ser realizados para confirmar a eficácia dos extratos em ensaios de semi-campo e campo, bem como a participação das proteínas bioativas e componentes do metabolismo secundário para que então possam ser indicados no controle do inseto A. aegypti.

Fundação de Apoio à Pesquisa no Estado do Rio Grande do Norte (FAPERN) Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) A Toxoplasmose é uma zoonose cosmopolita causada pelo protozoário Toxoplasma gondii. Os ovinos, dentre os animais de produção, configuram-se como uma das espécies que apresentam uma maior susceptibilidade a este parasito, sendo um importante agente envolvido na ocorrência de abortos entre animais ruminantes, provocando perdas econômicas significantes e repercussões na saúde pública, uma vez que o consumo de produtos de origem ovina constituem-se como uma importante fonte de infecção para o homem. Neste estudo foram coletadas amostras de sangue de 90 ovinos em 02 fazendas situadas nos municípios de Macaíba e de Ceará Mirim, região metropolitana de Natal, Estado do Rio Grande do Norte. Os animais incluídos nesse estudo foram selecionados sorologicamente por ELISA e HAI e a resposta imune humoral dos ovinos imunizados com adenovírus recombinantes codificando SAGs foi avaliada por ELISA. A soroprevalência encontrada na Escola de Jundiaí foi de 50%, enquanto que na Fazenda Lanila foi de 25,6%.Provavelmente o manejo dos animais nessas fazendas está associado com a diferença de positividade observada.Os resultados preliminares mostram que nosso protocolo de imunização, avaliado 30 dias após a primeira dose, mostrou capacidade em estimular a produção de IgG total específicos contra os antígenos SAGs de T.gondii e que são importantes mecanismos de defesa principalmente do ponto de vista congênito e durante fase crônica da doença, especificamente AdSAG1, bem como não foram observadas alterações clínicas relevantes entre os animais vacinados. Estudos mais específicos são necessários para esclarecer de forma mais específica o impacto que tal regime de imunização exerce tanto na capacidade de proteção contra a parasitose e sobretudo se acarreta ou não algum dano a saúde do animal. A Toxoplasmose é uma zoonose cosmopolita causada pelo protozoário Toxoplasma gondii. Os ovinos, dentre os animais de produção, configuram-se como uma das espécies que apresentam uma maior susceptibilidade a este parasito, sendo um importante agente envolvido na ocorrência de abortos entre animais ruminantes, provocando perdas econômicas significantes e repercussões na saúde pública, uma vez que o consumo de produtos de origem ovina constituem-se como uma importante fonte de infecção para o homem. Neste estudo foram coletadas amostras de sangue de 90 ovinos em 02 fazendas situadas nos municípios de Macaíba e de Ceará Mirim, região metropolitana de Natal, Estado do Rio Grande do Norte. Os animais incluídos nesse estudo foram selecionados sorologicamente por ELISA e HAI e a resposta imune humoral dos ovinos imunizados com adenovírus recombinantes codificando SAGs foi avaliada por ELISA. A soroprevalência encontrada na Escola de Jundiaí foi de 50%, enquanto que na Fazenda Lanila foi de 25,6%.Provavelmente o manejo dos animais nessas fazendas está associado com a diferença de positividade observada.Os resultados preliminares mostram que nosso protocolo de imunização, avaliado 30 dias após a primeira dose, mostrou capacidade em estimular a produção de IgG total específicos contra os antígenos SAGs de T.gondii e que são importantes mecanismos de defesa principalmente do ponto de vista congênito e durante fase crônica da doença, especificamente AdSAG1, bem como não foram observadas alterações clínicas relevantes entre os animais vacinados. Estudos mais específicos são necessários para esclarecer de forma mais específica o impacto que tal regime de imunização exerce tanto na capacidade de proteção contra a parasitose e sobretudo se acarreta ou não algum dano a saúde do animal.

Complicações trombóticas são a segunda causa de morte em pacientes com câncer e a terapia anticoagulante com heparina tem sido amplamente indicada. Além de prevenir a ocorrência de tromboembolismo, a heparina também é capaz de inibir passos importantes da progressão tumoral, contribuindo para a redução da agressividade do tumor. Entretanto, seu aproveitamento clínico é limitado especialmente pela ocorrência de hemorragias, o que tem estimulado a pesquisa por análogos de heparina (heparinoides) com efeitos colaterais reduzidos. O presente trabalho descreve as características estruturais e o potencial anticoagulante e antitumoral de um heparinoide com baixo risco hemorrágico isolado do cefalotórax do camarão Litopenaeus vannamei. A molécula foi obtida após proteólise, tratamento com acetona e purificação por cromatografias de troca-iônica e gel filtração. O heparinoide do camarão apresentou uma massa molecular média de ~ 15 kDa e as análises por despolimerização enzimática e RMN revelaram que o composto compartilha características estruturais com a heparina, como o alto grau de N- e 6-O-sulfatação, além do baixo grau de N-acetilação, e também com o heparam sulfato (HS), como o alto conteúdo de ácido glucurônico. Além de inibir a formação de coágulo pelo ensaio de aPTT, o heparinoide foi capaz de promover a estabilização térmica da antitrombina, o que pode justificar suas atividades anti-Xa e anti-IIa. Semelhante à heparina de mamíferos, o composto de L. vannamei foi capaz de induzir a síntese de HS antitrombótico por células endoteliais (ECs) em todas as concentrações testadas. Quando avaliado com relação a seu efeito sobre as etapas da progressão tumoral, foi demonstrado que o composto isolado do camarão reduz mais de 80% da formação de estruturas tubulares em matrigel, e 86% da migração de células de melanoma murino (B16F10) por uma membrana permeável. Embora tenha sido incapaz de inibir a proliferação dessas células durante um período de 24 h, a molécula em estudo apresentou um importante efeito antiproliferativo em longo prazo, reduzindo cerca de 80% da clonogenicidade das células tumorais nas concentrações de 50 e 100 µg/mL (p

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) A caprinocultura é uma atividade amplamente explorada nos países tropicais e apresenta grande importância social e econômica. A despeito disso, muitas doenças afetam os caprinos dentre as quais, as parasitoses. Nesse contexto, alguns parasitos do filo Apicomplexa são de grande importância, devido às altas prevalências, impacto sobre a produtividade e a reprodução dos animais, além do caráter zoonótico de algumas espécies. O objetivo desse trabalho foi monitorar as infecções por Eimeria spp.,Criptosporidium spp.e Toxoplasma gondii em matrizes caprinas da raça Canindé, criadas em regime semi-intensivo, na Estação Experimental Terras Secas, Pedro Avelino, Rio Grande do Norte. As colheitas das amostras de fezes e de sangue foram realizadas no período de agosto de 2010 a julho de 2011. Para monitorar a infecção por Eimeria spp. foi realizada a contagem de oocistos por grama de fezes (OoPG) e a identificação das espécies com base em parâmetros morfológicos e morfométricos dos oocistos esporulados. A infecção por Cryptosporidium spp. foi verificada pela pesquisa de oocistos em esfregaços fecais corados pela técnica de Zielh-Neelsen modificado. Para monitorar as infecções por T. gondii foi realizado o teste ELISA convencional e de avidez. A análise estatistica para a correlação entre a média de eliminação de oocistos e a intensidade de chuvas foi verificada através do teste t para os coeficientes de regressão. E para a correlação entre a eliminação de oocistos e o estado reprodutivo das matrizes, foi feito uma analise de variância. As análises estatísticas foram feitas utilizando o programa R Core Team, versão 2015, admitindo-se nível de significância de 0,05%. Os oocistos de Eimeria foram detectados em 85,24% das amostras de fezes. Foram identificadas nove espécies de Eimeria: E. alijevi, E. arloingi, E. apsheronica, E. caprovina, E. christenseni, E. hirci, E. joechijevi, E. ninakohlyakimovae e E. caprina. A intensidade da precipitação mostrou relação com a eliminação de oocistos. Nos meses em que a intensidade pluviométrica foi superior a 100 mm houve maior eliminação de oocistos nas fezes (p=0,00). As matrizes gestantes e paridas eliminaram mais oocistos de Eimeria do que as secas, sendo essa diferença estatisticamente significante (p=0,00). Dos 405 esfregaços fecais examinados, nove apresentaram oocistos de Cryptosporidium spp., representando 2,20% das amostras; sendo os oocistos presentes em uma amostra colhida em agosto, uma em janeiro, três em fevereiro, três em março e uma em junho. Das 215 amostras de soro testadas pelo teste ELISA, 93 (43,26%) foram consideradas reativas para T.gondii. A maior taxa de reatividade foi verificada no mês de julho de 2011 (94,10%). Nas amostras consideradas reativas, foi realizado o teste ELISA de avidez de anticorpos das quais 65 (69,90%) apresentaram anticorpos de alta avidez, indicativo de infecção crônica e 28 (30,10%) apresentaram anticorpos de baixa avidez, indicativo de infecção aguda. A infecção por Eimeria spp. se constitui um problema para o rebanho já que as cinco espécies consideradas patogênicas para caprinos foram observadas com alta prevalência, ao longo de todo o período do estudo. A infecção por Cryptosporidium spp. apresenta baixo risco, mas este é contínuo, já que a eliminação de oocistos de Cryptosporidium spp. ocorreu em diversos momentos ao longo de tempo do estudo. O risco de transmissão vertical de T. gondii pode ser considerado alto, já que aproximadamente um terço dessas matrizes estava na fase aguda da infecção. The goat production is a widely exploited activity in tropical countries and has great social and economic importance. Despite this, many diseases affect goats among which, parasitosis. In this context, some parasites of the phylum Apicomplexa are of great importance, due to high prevalence, impact on productivity and reproduction of animals, in addition to zoonotic's characteristics of some species. The aim of this study was to monitor the infections by Eimeria spp., Cryptosporidium spp.e Toxoplasma gondii in goats matrices of Canindé breed, raised in semi-intensive regime at the Experimental Station Terras Secas, Pedro Avelino, Rio Grande do Norte. Crops of stool samples and blood were carried out from August 2010 to July 2011. To monitor Eimeria spp. Infection it was realized the oocyst count per gram of feces (OoPG) and the identification of species based on morphological and morphometric parameters of sporulated oocysts. The infection by Cryptosporidium spp. was verified by oocyst's search in fecal smears stained with modified Zielh- Neelsen technique. To monitor infection by T. gondii was performed the conventional ELISA and avidity. The statistical analysis of the correlation between the average oocysts disposal and intensity of rainfall was verified by the t test for the regression coefficients. And the correlation between the oocysts shedding and reproductive status of matrices, it was made an analysis of variance. Statistical analyzes were performed using the R Core Team program, version 2015, assuming a significance level of 0.05%. Eimeria oocysts were detected in 85.24% of feces samples. Nine species of Eimeria have been identified: E. alijevi, E. arloingi, E. apsheronica, and. caprovina, E. christenseni, E. hirci, E. joechijevi, E. Ninakohlyakimovae e, E. caprina. The intensity of rainfall is related to the elimination of oocysts in the months in which the rainfall intensity was greater than 100 mm there was a greater elimination of oocysts in the feces (p = 0.00). Pregnant and calved matrices tend to eliminate more oocysts of Eimeria than dry, and this difference was statistically significant (p = 0.00). Of 405 fecal smears examined, nine were Cryptosporidium spp, representing 2.20% of the samples.; being the oocysts present in a sample taken in August, one in January, three in February, three in March and one in June. Of the 215 serum samples tested by ELISA, 93 (43.26%) were considered reactive to T. gondii. The greater reactivity rate was observed in July 2011 (94.10%). In the samples considered reactive, it was performed the ELISA test of antibody avidity of which 65 (69.90%) had high avidity antibodies, indicative of chronic infection and 28 (30.10%) had low avidity, indicative of acute infection. The infection by Eimeria spp. constitutes a problem for the flock since the five considered pathogenic species for goats were observed with high prevalence throughout the study period. The infection by Cryptosporidium spp. a low risk, but this is continuous, since the elimination of Cryptosporidium spp. It occurred at several points over the study time. The risk of vertical transmission of T. gondii can be considered high, since approximately one third of matrices were in the acute phase of infection.

Macroalgas marinhas constituem uma fonte extremamente rica de compostos bioativos, dentre eles, polissacarídeos sulfatados. Sargassum filipendula (SF), alga pertencente à ordem Phaeophycea, é fonte de heterofucanas conhecidas pela capacidade de modular uma série de funções biológicas. Considerando a necessidade de encontrar fármacos mais eficientes no combate a infecções microbianas, as heterofucanas de SF foram avaliadas como agentes imunomoduladores e antimicrobianos. As heterofucanas SF0.5V, SF0.7V e SF1.0V apresentaram uma forte atividade imunomoduladora intensificando a liberação de óxido nítrico (NO) por macrófagos murinos (RAW 264.7), bem como, por macrófagos originados de monócitos primários humanos. Além disso, quando macrófagos humanos foram infectados por Leishmania infantum e tratados com SF0.5V, SF0.7V e SF1.0V ocorreu um aumento significativo na liberação extracelular de NO. Como a citotoxicidadede de macrofágos contra a forma intracelular de leishmanias é mediada pela produção de NO, avaliamos a atividade leishmanicida sobre a forma amastigota intracelular de L. infantum e observamos que macrófagos infectados e tratados com SF0.5V, SF0.7V e SF1.0V se tornaram menos susceptíveis à infecção. As heterofucanas que se mostraram com capacidade de induzir a atividade anti-leishmania também apresentaram melhor taxa de produção de NO, porém os dados de correlação levaram a observação que este não é o principal mecanismo de ação das fucanas de SF no combate a esse protozoário. A heterofucana SF0.5V também apresentou atividade inibitória da formação de biofilme (~ 50%) frente a bactéria Staphylococcus epidermidis. Já SF0.7V e 1.0V inibiram quase que totalmente a replicação do protozoário Trichomonas vaginalis. Resultados como esse refletem o espectro de ação desses polissacarídeos sulfatados obtidos de SF e mostram o seu potencial como agentes imunomoduladores e microbicidas. Fucans, sulphated polysaccharides that contain L-fucose in its constitution, obtained from species of Phaeophyceae of the Sargassum kind, display several biological activities. Heterofucans from Sargassum filipendula are bioactive molecules that contain strong antiproliferative and antioxidant activity. However, their immunomodulatory and antimicrobial activities have not yet been examined. In this context, the aim of this research was to evaluate the heterofucans as for their immunomodulatory capacity and antimicrobial action against Leishmania infantum, Trichomonas vaginalis, Staphylococcus epidermidis and Klebsiella pneumonia (KPC). The five heterofucans obtained from S. filipendula show activities that are distant as stimulants of the immune system and microbial agent. The SF0.5V, SF0.7V amd SF1.0V heterofucans were capable of acting in the activation of murine and human macrophages. In addition to that, SF0.5V has shown antibiofilm activity of S. epidermides and SF0.7V and 1.0V almost completely inhibited the survival of the protozoan T. vaginalis. Results such as this one, reflect the broad range of action of the sulphated polysaccharides obtained from seaweeds, especially from the species S.filipendula

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Entre os tipos mais incidentes de câncer no Brasil, o câncer cervical é o quarto tipo mais comum entre as mulheres, com mais de 99,7% dos casos associados à infecção pelo Papilomasvírus Humano (HPV), tipos 16 e 18 principalmente. A resposta limitada dos tumores malignos à quimioterapia convencional levou ao desenvolvimento de novas estratégias farmacológicas baseadas no conhecimento de novos alvos terapêuticos. Considerando a diversidade dos escorpiões e serpentes da fauna brasileira, esses animais peçonhentos possuem um potencial farmacológico em seu veneno, sendo de grande interesse na pesquisa e desenvolvimento de novos fármacos a partir do veneno bruto ou frações. Desta forma, frente a esses venenos abre-se uma expectativa na busca de novos compostos com ação terapêutica no tratamento do câncer. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito citotóxico e apoptótico do veneno bruto do escorpião Tityus serrulatus (TSR) e das serpentes Bothrops jararaca (BJ) e Bothrops erythromelas (BE) em linhagens de carcinoma cervical SiHa e HeLa, tranformadas pelos HPV 16 e 18, respectivamente. Em relação à viabilidade celular pelo método de MTT, obteve-se citotoxicidade nas linhagens tumorais desafiadas com os venenos das serpentes BJ e BE quando comparada ao veneno TSR. De forma similar, o processo de morte celular, avaliada por citometria de fluxo, foi superior quando desafiados com BJ e BE. Portanto, os venenos Bothrops demonstraram uma ação citotóxica e apoptótica nas linhagens estudadas, de maneira dose tempo-resposta dependentes. O presente trabalho sugere, pela primeira vez, um papel citotóxico e apoptótico dos venenos das serpentes B. jararaca e B. erythromelas em linhagens de carcinoma cervical. Among the types of cancer incidents in Brazil, cervical cancer is the fourth most common type among women, with more than 99.7% of cases associated with infection by human papillomaviruses (HPV) types 16 and 18 mainly. The limited of malignant tumors to conventional chemotherapy response led to the development of new pharmacological strategies based on knowledge of new therapeutic targets. Considering the diversity of scorpions and snakes of Brazilian fauna, these poisonous animals have a pharmacological potential in their venom, being of great interest in the new drugs research and development from raw or fractions poison. Thus, faced with these poisons opens an expectation in the search for new compounds with therapeutic action in the treatment of cancer. The objective of this study was to evaluate the cytotoxic effect and apoptosis of the poisons of the scorpion Tityus serrulatus (TSR), Bothrops jararaca (BJ) and Bothrops erythromelas (BE) in cervical carcinoma cell lines SiHa and HeLa, tranform by the respective HPV 16 and 18. In relation to cell viability by MTT method was obtained challenged cytotoxicity in tumor cell lines with the poisons of snakes BJ and BE compared to the TSR poisons. Similarly, the process of cell death was greater when challenged with BJ and BE. Therefore, Bothrops poisons showed a cytotoxic and apoptotic action on the lines studied, dose-dependent and time-response manner. This study suggests for the first time, a cytotoxic and apoptotic role of poisons of snakes B. jararaca and B. erythromelas in cervical carcinoma cell lines.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) A caprinocultura e a ovinocultura mostram-se como atividades agropecuárias de grande importância para o semiárido nordestino. No entanto, a produção de caprinos e ovinos se faz com várias dificuldades. Dentre elas as infecções parasitárias, em especial as helmintoses do trato gastrintestinal, a eimeriose e a toxoplasmose; esta relacionada com problemas na reprodução. Em virtude disso, este trabalho teve como objetivo fazer o levantamento da ocorrência e de alguns determinantes das parasitoses que acometem os rebanhos de pequenos ruminantes das microrregiões Natal, Macaíba, Litoral Sul, Angicos, Vale do Açu e Borborema Potiguar. Para isso foram aplicados instrumentos epidemiológicos com produtores, tratadores ou responsáveis pelos rebanhos e também realizadas colheitas de amostras de sangue e fezes dos animais em oito propriedades, localizadas em sete municípios dessas microrregiões. A carga parasitária dos animais foi determinada através da contagem de ovos e oocistos por grama de fezes OPG e OoPG, respectivamente. Além disso, foi feita a recuperação de larvas infectantes. Com as amostras de sangue foram feitas a mensuração do volume globular e a pesquisa de IgG anti-Toxoplasma gondiino soro sanguíneo dos ovinos, por meio do teste imunoenzimático (ELISA). Para as variáveis discretas, a análise estatísticafoi feita por regressão de Poisson, com nível de significância menor que 0,05.A análise dos instrumentos epidemiológicos permitiu observar que a ivermectina é o antihelmíntico utilizado em 85,71% das propriedades. Do total de amostras de fezes dos ovinos (n=179) 53,07% apresentaram positividade para ovos de helminto e 48,04% mostraram-se positivas para oocistos de Eimeria. Das amostras de fezes dos caprinos (n=133), 72,18% foram positivas para ovos de helmintos e 96,99% para oocistos de Eimeria. A menor contagem de OPG e de OoPG foi observada na microrregião Angicos. A maior contagem de OPG foi encontrada na microrregião Litoral Sul e a de OoPG na microrregião Borborema Potiguar.Para ambos os casos, a diferença foi estatisticamente significante (p0,000). O gênero de helminto mais prevalente foi Haemonchus, presente em 49,87% dos ovinos e em 80,42% dos caprinos. A média do hematócrito variou de 22,91 a 33,25 nos ovinos e de 22,62 a 28,25 nos caprinos. A prevalência de IgG anti-Toxoplasma gondii variou de 63,33% a 100,00%. Os caprinos mostraram-se mais susceptíveis às infecções por parasitos do trato gastrintestinal do que os ovinos. Em todas as propriedades foi observada elevada prevalência de infecção por T. gondii, sendo as menores porcentagens registradas nas microrregiões Angicos e Borborema Potiguar. The goat and sheep industry shows up as an agricultural activity of great importance for the semiarid Northeast. However, the sheep and goats production is made with various difficulties. Among them, parasitic infections, particularly helminth infections of the gastrointestinal tract, the eimeriosis and toxoplasmosis; this one related to problems in reproduction. For this reason, the aim of this study is to to make a survey of the occurrence and some determinants of parasitic diseases that affect small ruminant flocks of the microregions Natal, Macaíba, Litoral Sul, Angicos, Vale do Açu and Borborema Potiguar. Thereunto, epidemiological tools were applied with producers, keepers or guardians of herds and also held collections of blood and feces of animals in eight properties located in seven municipalities of these microregions. The parasite load of the animals was determined through eggs and oocysts counting per gram of feces EPG and OPG, respectively. In addition, the recovery of infective larvae was made. Blood samples were used to measure the globular cell volume and the search for anti-Toxoplasma gondii IgG in sheep serum, by Enzyme Linked Immune Sorbent Assay (ELISA). For categorical variables, the statistical analysis was performed using Poisson regression, with significance level of 0.05. The analysis of the instruments showed that ivermectin is the anthelmintic used in 85,71% of properties. From the total of feces samples of the sheep (n = 179), 53,07% were positive for helminth eggs and 48,04% were positive for oocysts of Eimeria. From the samples of faeces of goats (n = 133), 72,18% were positive for helminth eggs and 96,99% for oocysts of Eimeria. The lowest EPG and OPG count was observed in the micro region of Angicos. Most of the EPG count was found in the micro region Litoral Sul and the OPG count in the micro-region Borborema Potiguar. Both cases the difference was statistically significant(p- value0,000)The most prevalent helminth genus found was Haemonchus, present in 49,87% of the sheep and 80,42% of goats. The average of hematocrit ranged from 22,91 to 33,25 in sheep and from 22,62 to 28,25 in goats. The prevalence of anti-Toxoplasma gondii IgG ranged from 63,33% to 100,00%. The goats showed to be more susceptible to infections by parasites of the gastrointestinal tract than the sheep. In all the properties was observed high prevalence of infection by T. gondii, with the lowest percentages recorded in the micro regions Angicos and Borborema Potiguar.

As doenças inflamatórias intestinais são enfermidades onde a tolerância e homeostase da resposta inflamatória estão comprometidas, gerando lesões teciduais e favorecendo o surgimento de neoplasias. Há dois importantes exemplos de doenças inflamatórias intestinais, a colite ulcerativa, foco do modelo desse estudo, e a doença de Crohn. Os medicamentos utilizados no tratamento dessas doenças desencadeiam diversos efeitos adversos; além disso, em alguns pacientes, eles não são eficazes. Os extratos de algas têm demonstrado várias atividades biológicas, entre elas a atividade anti-inflamatória. Os extratos das algas do gênero Caulerpa foram utilizados em vários estudos, onde modelos inflamatórios foram analisados, entre eles o modelo de colite ulcerativa. A utilização do extrato metanólico da C. mexicana como terapêutica nesse modelo atenuou o quadro clinico desenvolvido pelos animais. Sendo assim, o presente estudo teve como objetivo analisar a ação terapêutica da Caulerpina (CLP), extraída da C. racemosa, no modelo murino de colite ulcerativa. Camundongos C57BL/6 machos foram expostos a uma solução de Dextrana Sulfato de Sódio (DSS) a 3% por sete dias. A partir do primeiro dia de exposição ao DSS os animais foram tratados em dias alternados com a CLP nas doses de 4 e 40 mg/kg e com a dexametasona (3 mg/kg) por via oral. O desenvolvimento da doença foi analisado através do índice de atividade da doença (IAD), que leva em consideração a perda de peso corporal, a consistência e a presença de sangue nas fezes. Após a eutanásia, o cólon foi removido e mensurado, e amostras do tecido colônico foram destinadas a análise histológica e à cultura para dosagem de citocinas. Os níveis de citocinas no sobrenadante da cultura do cólon foram mensurados por ELISA. O tratamento com a CLP (4 mg/kg) desencadeou significativa melhora quanto à perda de peso corporal e ao IAD, e atenuou o encurtamento do cólon em resposta ao DSS. Tal dose foi capaz de reduzir os níveis de citocinas pró-inflamatórias analisadas (TNF-, IFN-, IL-6, IL-17), mas não teve efeito significativo nas citocinas anti-inflamatórias IL-10 e TGF-. O tratamento com a CLP (40 mg/kg) não foi eficaz quanto a perda de peso e ao IAD, além de não ter atenuado a redução do cólon em resposta ao DSS. Essa dose conseguiu reduzir os níveis das citocinas pró-inflamatórias, porém não os níveis de IL-6. O tratamento com a dexametasona obteve melhora discreta quanto à perda de peso corporal e ao IAD, porém não atenuou a redução do cólon em resposta ao DSS. Esse tratamento também conseguiu reduzir todas as citocinas pró-inflamatórias testadas. Deste modo a CLP (4 mg/kg) demonstrou ser uma alternativa promissora no tratamento da colite ulcerativa, em razão dos seus efeitos benéficos sobre parâmetros clínicos, morfológicos e moleculares do modelo em estudo

do milhões dessas todos os anos. A malária e a toxoplasmose são as principais doençasparasitárias do mundo, a primeira é causada pelo Plasmodium, um parasito constantementeligado a casos de resistência aos tratamentos convencionais, a segunda é uma protozoonosede prevalência mundial causada pelo Toxoplasma gondii, que tem em seu tratamentouma importante causa de efeitos adversos. A natureza e principalmente as plantasvem nos fornecendo compostos medicinais a milhares de anos, sendo ela a principal fontede isolamento de moléculas bioativas de baixo peso molecular. A Bidens pilosa, uma plantamuito conhecida na etnofarmacologia devido a sua vasta utilização por povos indígenas brasileiros.Recentemente a Bidens pilosa teve sua ação antimalárica comprovada, entretanto,suas moléculas bioativas se mostraram lábeis e por isso surgiu a necessidade de estabilizaressas moléculas utilizando-se excipientes farmacológicos. Sendo assim, nosso objetivo éavaliar o potencial antiparasitário dos extratos complexados obtidos da Bidens pilosa utilizandomodelos de malária e toxoplasmose, bem como a segurança da utilização dessesnovos extratos. Para isso foram feitos testes de citotoxicidade (MTT) com a célula Hela S5(1x104 células/poço) com os extratos bruto (Bp.Ra.Liof) e complexados (Bp.Ra.Bc eBp.Ra.At) da raiz de Bidens pilosa nas concentrações que variaram de 5000 a 80 µg/ml.Toxicidade aguda in vivo, seguindo o protocolo da OECD/OCDE de 2001. Teste in vivo desusceptibilidade da cepa ME49 do Toxoplasma gondii. Os extratos Bp.Ra.Liof., Bp.Ra.Bc eBp.Ra.At foram utilizados nas concentrações de 200, 300 e 400 mg/kg e o controle com sulfadiazina200 µg/kg, os animais tiveram mortalidade e a morbidade acompanhadas ao longode 30 dias. A susceptibilidade do Plasmodium foi avaliada in vitro com o Plasmodium falciparumcom os extratos de Bp.Ra.liof (50 a 3,12 µg/ml), Bp.Ra.At. (75 a 4,7 µg/ml) eBp.Ra.Bc (100 a 6,25 µg/ml) e in vivo com o Plasmodium berghei com os extratos Bp.Ra.Bc(50, 200, 800 mg/kg), Bp.Ra.At (37,5, 150, 600 mg/kg) e Bp.Ra.liof (25, 100, 400 mg/kg). Ostestes de citotoxicidade para a célula HeLa S5 e toxicidade aguda in vivo mostraram quetodos os extratos testados (Bp.Ra.Liof, Bp.Ra.Bc e Bp.Ra.At) possuem toxicidade baixa esem diferença significativa entre si. O teste antitoxoplasma mostrou que os extratos nãoampliaram de maneira significativa a sobrevida dos animais. Os testes antimaláricos in vivoe in vitro os extratos complexados se mostraram mais eficiência que o extrato bruto tanto naredução da mortalidade no teste in vivo, como também na redução da parasitemia nos testesin vivo e in vitro. Parasitic diseases affecting hundreds of millions of people worldwide, killing millions of these every year. The malaria and toxoplasmosis are the major parasitic dis-eases of the world, the first is caused by Plasmodium, a parasite constantly connected to cases of resistance to conventional treatments, the second is a pro-tozoonose prevalence worldwide caused by Toxoplasma gondii, which has in its treatment of an important cause adverse effects. The nature and plants comes mainly in providing medicinal compounds for thousands of years, she being the main source of isolation of bioactive molecules of low molecular weight. The Bidens pilosa, a plant well known in ethnopharmacology due to its wide use by indigenous peoples bra-ian. Recently the Bidens pilosa had proven its antimalarial action, however, their bioactive molecules proved labile and therefore became necessary to stabilize these molecules using pharmacological excipients. Therefore, our objective is to evaluate the potential antiparasitic complexed extracts obtained from Bidens pilosa Zando-used models of malaria and toxoplasmosis, as well as the safe use of these new extracts. For this test was done cytotoxicity (MTT) with Hela cell S5 (1x104 cells / well) with crude extracts (Bp.Ra.Liof) and complexed (Bp.Ra.Bc and Bp.Ra.At) Root Bidens pilosa at concentrations ranging from 5000 to 80 mg / ml. Acute toxicity in vivo, following the protocol of OECD / OECD 2001. Testing in vivo susceptibility of the ME49 strain of Toxoplasma gondii. Extracts Bp.Ra.Liof., And Bp.Ra.Bc Bp.Ra.At were used in concentrations of 200, 300 and 400 mg / kg and control with South fadiazina 200 mg / kg, the animals showed high mortality and morbidity monitored over 30 days. The susceptibility of Plasmodium were evaluated in vitro with Plasmodium falci-parum with extracts Bp.Ra.liof (50 to 3.12 / ml), Bp.Ra.At. (75 to 4.7 g / ml) and Bp.Ra.Bc (100 to 6.25 ug / ml) and in vivo in Plasmodium berghei with extracts Bp.Ra.Bc (50, 200, 800 mg / kg ) Bp.Ra.At (37.5, 150, 600 mg / kg) and Bp.Ra.liof (25, 100, 400 mg / kg). Tests for cytotoxicity to HeLa cell S5 and acute toxicity in vivo showed that all the extracts tested (Bp.Ra.Liof, and Bp.Ra.Bc Bp.Ra.At) have low toxicity and no significant difference between them. The toxoplasma test showed that the extracts did not significantly increased survival of the animals. Tests antimalarials in vivo and in vitro extracts complexed proved more efficient that the crude mortality reduction both in the in vivo test, but also in the reduction of parasitemia in tests in vivo and in vitro.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Toxoplasmosis is a zoonosis of worldwide distribution caused by the protozoan Toxoplasma gondii, triggering dangerous complications in immunocompromised patients and pregnant women, as well as having great economic impact for the livestock. So far the control of toxoplasmosis is made primarily by chemotherapy. However, most drugs used routinely have some limitations. In order to control this disease, several research groups, including ours, has been working to develop a medical-veterinary vaccine based on parasite antigens, vectors and protocols of immunization. In this study were implemented and standardized methodologies for amplification and cloning of recombinant immunogens in the system for the development of a prototype vaccine, based on the surface antigens of T. gondii and recombinant adenovirus encoding these antigens. Genes encoding BAG1, GRA2 and SAG1 proteins were amplified. We established a strategy for cloning SAG1, SAG2, SAG3 and TgAMA1- genes in recombinant system. The genes encoding SAG1 and SAG2 were cloned and their sequences showed high similarity with sequences from GenBank. The virtual translation of these proteins showed polymorphisms in the amino acid sequence, which can be correlated with levels of antigenicity. Simultaneously, the adenovirus encoding the SAGs (HAdSAGs) were expanded, purificated and characterizated. Immunization of C57bl/6 mice, using viral supernatant was not enought to elicit immune responses at high levels, being required HAdSAGs titration for future immunizations. Therefore, this study allowed the cloning of the two genes important for the development of a prototype vaccine. Besides, implementations methodologies that permit advancements in the development of a vaccine against toxoplasmosis using adenovirus to express proteins of the parasite A toxoplasmose é uma zoonose de distribuição mundial causada pelo protozoário Toxoplasma gondi podendo desencadear graves complicações em pacientes imunossuprimidos e gestantes; bem como acarretando grande impacto econômico para a pecuária. Até o momento o controle da toxoplasmose é feito basicamente pela quimioterapia. Contudo, a maioria das drogas utilizadas na rotina apresentam alguma limitação. No intuito do controle dessa parasitose, diversos grupos de pesquisas, inclusive o nosso, vêm trabalhando para o desenvolvimento de uma vacina médico-veterinária com base em antígenos do parasito, vetores e protocolos para imunização. Nesse estudo foram implantadas e padronizadas metodologias para amplificação e clonagem de imunógenos em sistema recombinante visando o desenvolvimento de um protótipo vacinal, tendo como base os antígenos de superfície de T. gondii e adenovírus recombinante codificando esses antígenos. Os genes que codificam as proteínas BAG1, GRA2 e SAG1 foram amplificados. Foi estabelecida uma estratégia de clonagem dos genes SAG1, SAG2, SAG3 e TgAMA-1 em sistema recombinante. Os genes que codificam SAG1 e SAG2 foram clonados e suas sequências apresentaram grande similaridade com sequências depositadas no GenBank. A tradução virtual dessas proteínas apresentou polimorfismos no nível de aminoácidos, que poderão ser correlacionadas com níveis de antigenicidade. Paralelamente, foi realizada a expansão, purificação e caracterização dos adenovírus que codificam as SAGs (HAdSAGs). A imunização de camundongos C57BL/6, utilizando o sobrenadante viral, não foi suficiente para desencadear respostas imunológicas em altos níveis, sendo necessária a titulação dos HAdSAGs para futuras imunizações. Portanto, esse estudo permitiu a clonagem de dois genes importantes para o desenvolvimento de um protótipo vacinal, além de implementações de metodologias que permitirão avanços para o desenvolvimento de uma vacina contra a toxoplasmose usando adenovírus que expressem proteínas do parasito

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq Cães são os reservatórios primários dos parasitos do gênero Leishmania. A resposta imune induzida pela infecção por Leishmania infantum nestes animais não está completamente elucidada, e poucos estudos tem investigado a correlação entre a expressão de citocinas e quimiocinas e as manifestações clínicas dos animais portadores de leishmaniose visceral canina (LVC). O objetivo deste estudo foi correlacionar os achados clínico em cães naturalmente infectados por L. infantum (das áreas rurais do município de Mossoró, Estado do Rio Grande do Norte, Brasil) com os níveis de expressão de citocinas (IFN-γ, TNF-α, IL-10 e IL-17), iNOS, quimiocinas (CCL1, CCL2, CCL3, CCL4 , CCL5, CCL17, CCL20, CCL24, CCL26, CXCL9, CXCL10), receptores de quimiocinas (CXCR3, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR8), e parasitismo no fígado e no baço. Inicialmente, foi realizado levantamento soroepidemiológico de cães de 12 assentamentos rurais de Mossoró-RN, totalizando 398 cães examinados. A positividade dos cães para o parasito foi determinada pela reatividade em dois testes sorológicos (RIFI e ELISA). Todas as localidades rurais apresentaram cães positivos para L. infantum, com positividade variando entre 6,6% a 49% dos animais examinados por localidade, e um total de 27% de cães de todas as localidades. Posteriormente, vinte e um cães foram clinicamente avaliados e classificados como assintomáticos (n = 11) ou sintomáticos (n = 10). A infecção foi confirmada pela realização de imprint no baço, e observação de formas amastigotas. Esplenomegalia, perda de peso e onicogrifose foram os sinais clínicos mais frequentes. No fígado, os níveis de expressão de RNAm de citocinas (IFN-γ, TNF-α, IL-10 e IL-17), iNOS e quimiocinas (CCL1, CCL17, CCL26, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, e CCR8) foram mais baixos nos animais sintomáticos do que nos animais assintomáticos. Em comparação com os animais não infectados, cães sintomáticos obtiveram níveis mais baixos de expressão de quase todas as moléculas analisadas. Além disso, foi observada alta carga parasitária e baixa inflamação hepática em animais sintomáticos, quando comparado aos assintomáticos. Conclui-se que a diminuição da expressão de citocinas, quimiocinas e receptores de quimiocinas resultaria na migração e ativação deficiente de leucócitos, dificultando o controle do parasitismo e conduzindo ao desenvolvimento da doença. Dogs are the primary reservoirs of the parasites of the genus Leishmania. The immune response induced by infection with Leishmania infantum in these animals is not completely understood, and few studies have investigated the correlation between the expression of cytokines and chemokines and clinical manifestations of animals with canine visceral leishmaniasis (CVL). The aim of this study was to correlate the clinical status of dogs naturally infected with L. infantum (rural municipality of Mossoro, Rio Grande do Norte, Brazil) with the expression levels of cytokines (IFN-γ, TNF-α, IL-10 and IL-17), iNOS, chemokines (CCL1, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL17, CCL20, CCL24, CCL26, CXCL9, CXCL10), chemokine receptors (CXCR3, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR8), and parasitism in the liver and spleen using real-time PCR. Initially, we conducted seroepidemiological survey of dogs from 12 rural settlements from Mossoró-RN, totaling 398 dogs examined. The positivity of dogs for the parasite was determined by reativity in two serological tests (ELISA and IFA). All rural localities showed dogs positive for L. infantum, with positivity varying between 6,6% and 49% of the animals examined by location, totalizing 27% of dogs from all settlements. Subsequently, Twenty-one dogs were clinically evaluated and classified as asymptomatic (n = 11) or symptomatic (n = 10). The infection was confirmed by performing imprint in the spleen, and observation of amastigotes. Splenomegaly, weight loss and onychogryphosis were the most frequent clinical signs. In the liver, levels of mRNA expression of cytokines (IFN-γ, TNF-α, IL-10 and IL-17), iNOS and chemokines (CCL1, CCL17, CCL26, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR8 and) were lower in symptomatic animals than in asymptomatic animals. In comparison with uninfected animals, symptomatic dogs had lower levels of expression of almost all molecules tested. In addition, the parasitic load was observed high and low symptomatic hepatic inflammation in animals when compared to asymptomatic. In conclusion, the decreased expression of cytokines, chemokines and chemokine receptors result in poor migration and activation of leukocytes, hindering control of parasitism and leading to the development of the disease.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Plukenetia volubilis conhecida popularmente como sacha incha ou amendoa lopo, é uma planta oleaginosa e trepadeira, pertecente a família Euphorbiaceae. Suas sementes apresentam alto valor nutritivo e suas folhas são utilizadas pela população amazônica para tratar doenças de pele, contudo essa ação não é comprovada cientificamente. Dentro deste contexto, o presente trabalho prevê uma prospecção química e biológica de diferentes extratos obtidos das folhas de P. volubilis. : extrato aquoso (EA), metanólito (EM), etanólico (EE), clorofórmico (EC) e hexânico (EH). A triagem fitoquímica foi realizada por meio de reações químicas de identificação e análise por cromatografia em camada delgada (CCD), utilizando diferentes eluentes e reveladores. Como parte das análises de constituição química dos extratos, foram realizadas dosagens de compostos fenólicos, açúcares totais e proteínas. Em relação às atividades biológicas, foi avaliada a capacidade antioxidante dos extratos e seus efeitos sob células tumorais e normais. Com os resultados obtidos foi possível detectar por meio das reacoes a presença de compostos fenólicos, flavonoides, saponinas e alcaloides. Por meio da análise por CCD foi possível verificar a presença de compostos com estruturas de terpenos, polifenóis e flavonóides. O extrato metanólico (EM) apresentou uma banda de coloração verde e Rf 0,65 similar ao padrão de flavonóide canferol. Com as metodologias de dosagem química foi observado uma elevada quantidade de açúcares totais nos extratos de P. volubilis. Os testes para avaliação da atividade antioxidante revelaram que todos os extratos apresentam capacidade antioxidante. No teste de capacidade antioxidante total (expresso como equivalente em ácido ascórbico, EEA/g), os extratos apresentaram valores que variaram entre 59,31 a 97,76 EAA/g. Para o teste de DPPH os valores de sequestro variaram de 88,3% a 62,8%. O teste de viabilidade celular, verificado por meio da redução do composto MTT possibilitou observar que os extratos foram capazes de diminuir a viabilidade das células cancerígenas HeLa e A549, sendo mais eficazes para linhagem HeLa. Os extratos EM e EH (250 µg/mL) apresentaram redução da proliferação de HeLa para 54,3 e 48,5%, respectivamente. Enquanto que os extratos EH e EA induziram de forma significativa a proliferação de fibroblastos normais 3T3, cerca de 70% a mais que o controle. Resultado semelhante foi observado em macrófagos Raw, onde foi verificado que a proliferação dessas células tratadas com os extratos EM, EC e EA foi a duas vezes mais que o controle. Nenhum efeito foi observado nas células CHO quando tratadas com os extratos. Outra abordagem utilizada foi a de citometria de fluxo de modo a avaliar marcadores de morte celular em células HeLa quando expostas aos extratos de P. volubilis. Os resultados destes ensaio mostraram que os extratos induziram a morte celular via apoptose. Portanto, esses resultados sugerem que os extratos das folhas de P. volubilis são potenciais alvos para serem utilizados futuramente no desenvolvimento de fármacos com ação antioxidante, proliferativa e antitumoral

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Malaria is a disease of global distribution, recognized by governments around the world as a serious public health problem, affecting more than 109 countries and territories and endangering more than 3.3 billion people. The economic costs of this disease are also relevant: the African continent itself has malaria-related costs of about $ 12 billion annually. Nowadays, in addition to chloroquine, Plasmodium falciparum is resistant to many drugs used in the treatment of malaria, such as amodiaquine, mefloquine, quinine and sulfadoxine-pyrimethamine; resistance of Plasmodium vivax to treatments, although less studied, is also reported. Nature, in general, is responsible for the production of most known organic substances, and the plant kingdom is responsible for the most of the chemical diversity known and reported in the literature. Most medicinal plants commercialized in Brazil, however, are of exotic origin, which makes the search for endemic medicinal plants, besides a patent necessity, a fascinating subject of academic research and development. This study aimed to: (i) verify the antimalarial activity of ethanolic and hydroalcoholic extracts of Boerhavia paniculata Rich. And acetonic extract of Clethra scabra Pers. in Swiss albino mice infected by Plasmodium berghei NK65, (ii) observe possible combined effects between the course of infection by P. berghei NK65 and administration of these extracts in Swiss albino mice, and (iii) conduct a preliminary study of the acute toxicity of these extracts in Swiss albino mice. All extracts notable pharmacological activities - with parasite infections inhibitions ranging from 22% to 54%.These characteristics suggest that the activities are relevant, although comparatively lower than the activity displayed by the positive control group (always above 90%). The general framework of survival analysis demonstrates an overall reduction in survival times for all groups. Necroscopy has not pointed no change in color, shape, size and/or consistency in the evaluated organs - the only exception was the livers of rats submitted to treatment to hydroalcoholic extracts: these organs have been presented in a slightly congestive aspect with mass increasing roughly 28% higher than the other two groups and a p-value of 0.0365. The 250 mg/Kg ethanolic group has been pointed out by the Dunn s post test, as the only class with simultaneous inequalities (p

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Toxoplasmosis is a zoonosis caused by Toxoplasma gondii, a protozoan that has a cosmopolitan geographic distribution and low host specificity. Usually a benign and selflimiting, infection can manifest itself in a severe systemic becoming overwhelming in fetuses and patients with immunosuppression. Domestic fowl are considered one of the most important hosts in the epidemiology of toxoplasmosis, since they are potential sources of infection for humans, in addition to playing the role of important indicators of environmental contamination by oocysts of T. gondii. We studied the prevalence of infection by the protozoan in chickens of different breeding systems mesoregions from the states of Rio Grande do Norte and Paraiba: broilers from commercial farms (200/PB) and free-range chickens of small farms (322/RN and PB). Were standardized IFAT and ELISA techniques for detecting specific antibodies in blood samples of birds, and commercial kit was used to determine the prevalence by IHAT. There was no seropositive reaction by T. gondii in the samples of broilers tested, indicating that the particularities of intensive management limit the chances of infection for these animals. Among the hens, the frequency of IgG anti-T. gondii diagnosed by the techniques of IHAT, IFAT and ELISA, respectively, were 3.73% (12/322), 37.88% (122/322) and 40.37% (130/322), for both young and adult animals. Amongst the seropositive samples by IFAT, 33 (27.05%) were positive at a dilution of 1:16, in 1:32, 31 (25.41%), in 1:64, 24 (19.67%), 15 (12.29%) in 1:128, and 19 presented titer greater than or equal to 1:256 (15.57%). The evaluation of the presence of anti-T. gondii should be careful, and reagents IHAT provided erratic results in this measure for the specie studied. This suggests the need for own standardization of the kit before the use in epidemiological studies in animal species. On the other hand, substantial agreement observed between IFAT and ELISA techniques (Kappa = 0.62) enables these methods as effective methodologies for the diagnosis of toxoplasmosis in chickens. The high prevalence of specific antibodies among poultry in the region studied attempts to the potential risk of transmission of toxoplasmosis to humans A toxoplasmose é uma zoonose causada pelo Toxoplasma gondii, protozoário que tem distribuição geográfica cosmopolita e pouca especificidade parasitária. Comumente de curso benigno e autolimitante, a infecção pode manifestar-se de forma sistêmica grave, tornando-se gravíssima em fetos e pacientes com imunodepressão. Galinhas domésticas são consideradas um dos mais importantes hospedeiros na epidemiologia da toxoplasmose, uma vez que são potenciais fontes de infecção para humanos, além de desempenharem o papel de importantes indicadores da contaminação ambiental por oocistos de T. gondii. Neste trabalho, estudou-se a frequência da infecção pelo protozoário em galináceos de diferentes sistemas de criação provenientes de mesorregiões dos estados do Rio Grande do Norte e Paraíba, tanto frangos de corte de granjas comerciais (200/PB), como galinhas caipira de pequenas propriedades rurais (322/RN e PB). Foram padronizadas técnicas de RIFI e ELISA para a detecção de anticorpos séricos específicos nas amostras sanguíneas das aves, e foi utilizado kit comercial para determinação dessa prevalência pelo HAI. Não foi observada infecção por T. gondii em nenhuma das amostras de frango de corte analisada, indicando que particularidades do manejo intensivo limitam as chances de infecção para esses animais. Entre as galinhas caipira, a frequência de anticorpos IgG anti-T. gondii diagnosticada pelas técnicas de HAI, RIFI e ELISA foi, respectivamente, 3,73% (12/322), 37,88% (122/322) e 40,37% (130/322), analisando animais jovens e adultos. Das amostras soropositivas pela RIFI, 33 (27,05%) foram reagentes na diluição 1:16; em 1:32, 31 (25,41%); em 1:64, 24 (19,67%); 15 (12,29%) em 1:128 e 19 apresentaram titulação maior ou igual a 1:256 (15,57%). A avaliação da presença de anticorpos anti-T. gondii deve ser criteriosa, sendo que os reagentes do HAI forneceram resultados erráticos nesta medida, para a espécie estudada, sugerindo a necessidade de padronização própria dos kits para diagnóstico antes do uso em estudos epidemiológicos em espécies animais. Por outro lado, a concordância substancial observada entre as técnicas RIFI e ELISA (Kappa = 0,62) capacita estas metodologias como técnicas eficazes no diagnóstico da infecção pelo protozoário em galináceos. A alta frequência de anticorpos específicos observada entre as aves da região estudada atenta para o risco potencial de transmissão da toxoplasmose para o homem

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico T. gondii is an obligate intracellular protozoan and the main cause of retinochoroiditis in humans. The aim of this study was to evaluate the effect of the antipsychotic drugs haloperidol and clozapine on the course of infection by T. gondii of cultured embryonic retinal cells. Embryo retinas of Gallus gallus domesticus (E12) were used for the preparation of mixed monolayer cultures of retinal cells. Cultures were maintained on plates of 96 and 24 wells by 37°C in DMEM medium supplemented with 5% fetal bovine serum for 2 days. After this period, cultures were simultaneously infected with tachyzoites of T. gondii and treated with the antipsychotics haloperidol and clozapine for 48 hours. Treatment effects were determined by both assessing cell viability with the MTT method and evaluating infection outcomes in slides stained with Giemsa. The treatment with haloperidol and clozapine cells infected with T. gondii resulted in higher viability of these cells, suggesting a possible prevention of neuronal degeneration induced by T. gondii. Additionally, intracellular replication of this protozoan in cells treated with haloperidol and clozapine were significantly reduced, possibly by modulation of the parasite s intracellular calcium concentration T. gondii é um protozoário intracelular obrigatório e a principal causa de retinocoroidite em humanos. Este estudo foi conduzido para avaliação do efeito do tratamento com as drogas antipsicóticas haloperidol e clozapina sobre a infecção de T. gondii em cultura de células retinianas embrionárias. Retinas de embriões de Gallus gallus domesticus de doze dias (E12) foram usados para preparação de culturas mistas de células retinianas em monocamada. As culturas foram mantidas em placas de 24 e 96 poços à 37°C em meio DMEM suplementado com 5% de soro fetal bovino durante 2 dias. Após este período, as culturas foram simultaneamente infectadas com taquizóitas de T. gondii e tratadas com os antipsicóticos haloperidol e clozapina por 48 horas. Os efeitos dos tratamentos das drogas sobre a infecção deste parasito foram determinados pela avaliação da viabilidade celular pelo método de MTT e avaliação de parâmetros de infecção em lâminas coradas pelo método de giemsa. O tratamento com clozapina e haloperidol de células infectadas com T. gondii resultou em menor prejuízo da viabilidade destas células, o que sugere uma possível prevenção de degeneração neuronal induzida por estes antipsicóticos. Adicionalmente, a replicação intracelular deste protozoário, em células tratadas com clozapina e haloperidol foi significantemente reduzida, possivelmente pela modulação da concentração intracelular de cálcio deste parasito