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El alfaherpesvirus equino 1 (EHV-1) produce enfermedad respiratoria, abortos, muerte perinatal y desórdenes neurológicos en miembros de la familia Equidae. Las glicoproteínas de la envoltura viral son los antígenos inmunodominantes que generan respuesta inmune en animales infectados. La infección natural y las vacunas disponibles proporcionan protección parcial y de corta duración contra la reinfección. En este trabajo se expresó la glicoproteína C viral utilizando un baculovirus recombinante y se analizó la capacidad de inducir inmunidad protectora en ratones BALB/c al ser desafiados con el virus. Se evaluaron diferentes rutas de administración y distintos adyuvantes. La glicoproteína C indujo una respuesta IgG específica en suero; sin embargo, no logró evitar la entrada del virus al pulmón ni la aparición de signos clínicos, los cuales fueron variables entre los diferentes grupos de ratones. En todos los grupos inmunizados se retrasó la entrada del virus al pulmón y, cuando se utilizaron adyuvantes, el título viral fue significativamente menor que en el grupo control, así como en el grupo inmunizado por vía intranasal. Se concluye que la glicoproteína C producida indujo protección parcial frente al desafío viral según el adyuvante y la vía de inmunización., Equid alphaherpesvirus 1 (EHV-1) causes respiratory disease, abortions, perinatal death and neurological disorders in horses. Envelope glycoproteins are the most immunodominant antigens in infected animals. Natural infection and available vaccines provide partial and short-term protection against reinfection. In this study, EHV-1 glycoprotein C was expressed with a recombinant baculovirus and the ability to induce protective immunity in BALB/c mice challenged with the virus was analyzed. Different routes of administration and adjuvants were evaluated. Glycoprotein C induced a specific IgG response in serum. However, it failed to prevent entry of the virus into the lung or the appearance of clinical signs, which were variable among different treatment groups. Entry of the virus into the lung was delayed in all immunized groups. The viral titer was significantly lower when adjuvants were used, as well as in the intranasally immunized groups compared to the control group. Therefore, glycoprotein C induced partial protection against the challenge with the virus, depending on the adjuvant and the route of immunization., Facultad de Ciencias Veterinarias

Equid alphaherpesvirus 1 (EHV-1) is an important pathogen of horses, associated with respiratory, neurological disease and abortions. As vaccination is not always effective, anti-herpetic therapy may represent an alternative to prevent the losses caused by the infection. We herein investigated the activity of ganciclovir (GCV), an anti-herpetic human drug, in rabbits experimentally infected with EHV-1. Thirty-days-old New Zealand rabbits were allocated in three groups (6 animals each) and submitted to different treatments: G1 (non-infected controls), G2 (inoculated with EHV-1) - 107 TCID50 intranasally - IN) and G3 (inoculated IN with EHV-1 and treated with GCV - 5mg/kg/day for 7 days) and monitored thereafter. All animals of G2 developed systemic signs (moderate to severe apathy, anorexia), ocular discharge and respiratory signs (serous to mucopurulent nasal discharge), including mild to severe respiratory distress. Viremia was detected in all rabbits of G2 for up to 11 days (mean duration = 6.5 days). One animal died after severe respiratory distress and neurological signs (bruxism, opistotonus). In addition, these animals gained less weight than the control (G1) and GCV-treated rabbits (G3) from days 4 to 14pi (p

Equid alphaherpesvirus 1 (EHV-1) infection causes abortion, respiratory disease, perinatal deaths and neurological disorders in horses. The natural infection and available vaccines provide only partial and short-lived protection against reinfections. In the present study, we analyzed the ability of purified baculovirus-expressed glycoprotein D (gD) administered by different routes to induce protective immunity in BALB/c mice after challenge with the EHV-1 AR8 strain. Clinical signs varied among the different groups of mice immunized by parenteral routes, and, although gD induced a specific serum IgG response, it did not prevent the virus from reaching the lungs. Intranasally immunized mice showed no clinical signs, and virus isolation from lungs, histological lesions and antigen detection by immunohistochemistry were negative. In addition, by this route, gD did not stimulate the production of serum IgG and IgA. However, a specific IgA response in the respiratory tract was confirmed in intranasally immunized mice. Thus, we conclude that the mucosal immune response could reduce the initial viral attachment and prevent the virus from reaching the lungs. Our findings provide additional data to further study new immunization strategies in the natural host. La infección con alfaherpesvirus equino 1 (EHV-1) causa abortos, enfermedad respiratoria, muertes perinatales y desórdenes neurológicos en equinos. La infección natural y las vacunas disponibles solo proporcionan protección parcial y de corta duración contra las reinfecciones. En el presente estudio se analizó la inducción de inmunidad protectiva de la glicoproteina D (gD) expresada en baculovirus y purificada al ser administrada por diferentes rutas en ratones BALB/c desafiados con la cepa AR8 de EHV-1. Los signos clínicos fueron variables entre los grupos de ratones inmunizados por rutas parenterales y, aunque la gD indujo respuesta especifica de IgG en suero, no logró prevenir la llegada del virus al pulmón. En los ratones inmunizados intranasalmente no se observaron signos clinicos ni lesiones histopatológi-cas, y el aislamiento viral y la detección de antigenos por inmunohistoquímica en pulmón fueron negativos. Además, por esta ruta la gD no estimuló la producción de IgG y de IgA en suero. Sin embargo se confirmó la respuesta de IgA especifica en el tracto respiratorio de ratones inmunizados intranasalmente. Esta respuesta inmune mucosal podría haber reducido la unión inicial del virus a la célula huésped y, de este modo, prevenir la llegada del virus al pulmón. Nuestros hallazgos proporcionan un aporte para continuar estudiando nuevas estrategias de inmunización en el huésped natural.

El alfaherpesvirus equino 1 produce alteraciones reproductivas que ocasionan importantes pérdidas económicas, además de las que suceden a nivel respiratorio y nervioso. En esta tesis se utilizó el modelo murino BALB/c para estudiar algunos cambios en el útero y las placentas de ratonas preñadas y experimentalmente infectadas que pudieran producir la pérdida de continuidad del conceptus. Se describieron las lesiones en los pulmones, el útero y las placentas y se estudiaron los cambios vasculares y en la proliferación y muerte celular por inmunohistoquímica. Se analizaron los niveles en la expresión de algunas citoquinas por qPCR, citometría de flujo y por ELISA. Las ratonas infectadas manifestaron signos clínicos respiratorios y en sus pulmones lesiones histopatológicas típicas, con aislamiento viral y detección de ADN positivos. En las placentas infectadas el aislamiento viral y detección de ADN fueron negativos. Sin embargo, presentaron congestión vascular, ocasionales trombos en pequeños vasos de las capas de espongiotrofoblasto y decidua, aumento en el área del laberinto, y reducción significativa en el endotelio capilar fetal. También se redujo significativamente la proliferación celular, mientras que la apoptosis fue significativamente mayor. La regulación local de la expresión de IL-10, TNF-α, IFN-γ, Foxp3 e IL-4 también difirió en el útero y las placentas del grupo infectado con respecto al control. Hubo un fuerte incremento de la respuesta Th1, mayormente representado por IFN-γ, acompañada por una respuesta Th2 tolerogénica, cuyo fin podría ser restaurar el balance homeostático ante la infección. Los datos obtenidos permiten afirmar que se producen cambios celulares y moleculares a nivel de la respuesta inmune local debido a la infección. La comprensión del impacto inmunológico de la infección sistémica y local por el virus en el modelo murino ayudará a abordar estudios en equinos para mejorar las estrategias profilácticas y terapéuticas., Facultad de Ciencias Veterinarias