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Estudiamos el canal iónico CFTR y el canal de sodio ENaC en ovocitos de Xenopuslaevis. Las corrientes iónicas se estudiaron con la técnica de voltage clamp y la expresiónde las proteínas analizada con técnicas corrientes de biología molecular. Los cuatroobjetivos fueron: 1) evaluar la expresión y funcionalidad heteróloga del canal de cloruro CFTR, 2) analizar el efecto de la inhibición de xShroom1 sobre el canal CFTR, 3) investigarlos mecanismos por los cuales xShroom1 se relaciona con CFTR, 4) estudiar la relaciónentre CFTR, ENaC y xShroom1. Los principales resultados fueron: El canal CFTR seexpresa y es funcional en los ovocitos de Xenopus laevis inyectados con su ARNc. Lasupresión de la proteína xShroom1 resultó en un incremento marcado en las corrientes de CFTR al promover un aumento en la vida media del canal en la membrana plasmática. Estosería debido a una reducción en la vía degradativa, aunque no descartamos un cambio enla probabilidad de apertura de CFTR. Tanto el CFTR como la supresión de xShroom1produjeron una reducción en las corrientes de sodio sensibles al amiloride. La inhibición de ENaC por CFTR es mayor cuando xShroom1 es suprimido, debido al aumento en lacorriente de CFTR. En conclusión, logramos conocer la relación y mecanismos involucradosdel CFTR con la proteína Shroom en ovocitos de Xenopus laevis. Ionic channel CFTR and the sodium channel ENaC were studied in Xenopus laevisoocytes. Ion channel activity was recorded with voltage clamp technology and theexpression of the proteins was studied with current techniques of molecular biology. Fourmain objectives were planned: 1) to evaluate the expression and heterologous functionalityof the chloride channel CFTR; 2) to analize the effect of xShroom1 downregulation on CFTRchannel; 3) to investigate the mechanisms by wich xShroom1 is related to CFTR; 4) to studythe relationship between CFTR, ENaC and xShroom1. The main results were: CFTRchannel is expressed and functional in Xenopus laevis oocytes injected with CFTR cRNA.xShroom1 suppression results in the increment of CFTR currents by promoting the increaseof the half-life of CFTR in the plasma membrane. This would be due to a reduction in thedegradative pathway, although we do not discard a change in the openings of the CFTRchannels. CFTR and the xShroom1 downregulation decrease amiloride sensitive sodiumcurrents. ENaC inhibition by CFTR is higher when xShroom1 is suppressed, due to anincrease in CFTR current. In conclusion we were able to know the relationship and themechanisms between CFTR and Shroom protein in Xenopus laevis oocytes. Fil: Palma, Alejandra Graciela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Estudiamos los canales aniónicos ORCC y CFTR y el canal de sodio ENaC en la línea BeWo derivada de trofoblasto humano. La actividad iónica fue estudiada con la técnica de patch clamp en las configuraciones de canal único (inside out y cellattached) y célula entera (whole cell). La expresión de las proteínas fue analizada con técnicas corrientes de biología molecular. Los tres objetivos fueron: 1) identificar y caracterizar la actividad de esos canales con la ayuda de agentes farmacológicos, 2) estudiar la expresión de las proteínas de los canales clonados; 3) analizar la participación de esos canales en la proliferación, y la migración celular por medio del modelo de cierre de la herida. Los principales resultados fueron: Las células BeWo tienen canales aniónicos y catiónicos funcionales que se expresan en la membrana. Las corrientes de Na+ por el canal ENaC sensible al amiloride y las corrientes transportadas por el ORCC y CFTR participan en la migración o proliferación celular. La aldosterona que estimula la metilación de ENaC juega un papel importante en el mecanismo por el cual el ENaC participa en la migración celular. En conclusión, fuimos capaces de aislar y caracterizar canales aniónicos y catiónicos en las células BeWo y establecer su papel en la migración y proliferación celular. Anion channels such as ORCC and CFTR and the sodium channel ENaC were studied in the human trophoblastic cell line BeWo. Ion channel activity was recorded in the cell attached and inside out and in the whole cell configurations with patch-clamp technology and the expression of the proteins were studied with current techniques of molecular biology. Three main objectives were planned: 1) to identify and characterize the activity of these channels with pharmacological tools; 2) to study the expression of the cloned channels in the cell membranes; 3) to analyze the participation of these channels in the cellular processes and migration with the aid of a wound healing model. The main results were: BeWo cells have functional anionic and cationic channels and they are expressed in the membranes. Na+ currents mediated by the amiloride sensitive ENaC and currents transported by CFTR and ORCC are involved in either cell migration or cell proliferation. Aldosterone which stimulates protein methylation of ENaC seems to play an important role in the mechanism of action of ENaC in the migration process. In conclusion we were able to identify clearly anionic and cationic channels in BeWo cells and to establish their participation in the migration and proliferation processes. Fil: Marino, Gabriela Inés. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.