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El objetivo del estudio fue determinar el porcentaje de viabilidad en espermatozoides epididimarios de alpaca, antes y después del proceso de criopreservación, mediante citometría de flujo. Se recolectaron 46 testículos de alpaca de un camal de Pasco, Perú y se utilizaron 41 de ellos con motilidad espermática ≥30% y concentración espermática ≥50x106 espermatozoides/ml. Los espermatozoides fueron recuperados de la cola del epidídimo con 1 ml de dilutor a base de leche descremada. separándose en dos alícuotas para evaluar la viabilidad antes y después del proceso de criopreservación. El dilutor fue retirado mediante lavados por centrifugación con PBS, los pellets fueron resuspendidos en 100 µl de PBS, agregándose 0.5 µl de SYBR-14 (100 nM) y 0.5 µl de ioduro de propidio – PI (12 µM) incubándose por 10 min a 38 °C. La evaluación de viabilidad espermática se realizó mediante citometría de flujo con analizador de imágenes, utilizando un láser de excitación de 488 nm y la fluorescencia emitida por el SYBR-14 y el PI fueron detectados por los canales Ch02 (505-560 nm) y Ch05 (642-740 nm), respectivamente. Los espermatozoides viables con membrana intacta emitieron fluorescencia verde (SYBR-14) y los espermatozoides no viables con membrana dañada emitieron fluorescencia roja (PI). La viabilidad antes del proceso de criopreservación (48.97 ± 11.47%) fue mayor (p

The objective of this study was to detect changes in intracellular reactive oxygen species (superoxide anion and hydrogen peroxide) production and lipid peroxidation during cryopreservation of alpaca spermatozoa. Twelve alpaca semen samples were conventionally cryopreserved. Intracellular superoxide anion and hydrogen peroxide were evaluated by fluorescence microscopy using dihydroethidium (DHE)/YO-PRO-1 and dichlorofluorescein diacetate (H2DCFDA)/propidium iodide (PI), respectively. Evaluations were performed during cooling curve at (1) 25°C, (2) 15°C, (3) 5°C/0 min, (4) 5°C/15 min, (5) 5°C/30 min and (6) after freezing/thawing. Evaluation of lipid peroxidation by measuring malondialdehyde (MDA) was performed at 25°C, 5°C/30 min and after thawing. Maximum percentages of total spermatozoa producing superoxide anion and hydrogen peroxide were found at 5°C/30 min (62.8 ± 6.3% and 30.5 ± 5.6%, respectively), and these results were higher (p .05) than initial (25°C: 10.8 ± 3.8% and 6.8 ± 0.7%, respectively) and after thawing (29.8 ± 9.5% and 7.5 ± 1.8%, respectively) values. However, considering only viable spermatozoa, production of superoxide anion and hydrogen peroxide during overall stabilization at 5°C (76% and91%, respectively) and after thawing (74.9 ± 5.0% and 78.9 ± 2.2%, respectively) was higher (p .05) than initial values at 25°C (38.7 ± 3.1% and 53.6 ± 2.0%, respectively). Lipid peroxidation at 25°C, 5°C/30 min, and post-thawing were 346.5 ± 99.8, 401.1 ± 64.8 and 527.7 ± 142.8 ng/ml MDA, respectively. These results showed that high percentage of viable alpaca spermatozoa produces intracellular reactive species oxygen (ROS) during the cryopreservation process of alpaca semen.

Although computer-assisted systems for sperm morphometry and morphological analysis are important tools in the study of male fertility, their use in extensive systems in alpacas is limited by factors such as the expense of equipment and the high altitudes of the Andean region. The objectives of this study were to evaluate alpaca sperm head morphometry using a nonautomated digital method and determine the frequency of sperm abnormalities based on strict criteria for sperm morphology in fertile male alpacas. Ejaculates (n = 15) from seven alpacas were collected, and sperm smears stained with modified Papanicolaou were processed. For morphometric analysis, 3,000 sperm (200 cells/sample) images were captured at 400× magnification and Quick Photo MICRO 3.0 software was used for manual measurement of basic (sperm head length, width, perimeter and area) and derived variables (ellipticity, shape factor, elongation and regularity). For morphology assessment, smears were observed at 1000× magnification according to WHO and strict criteria. Average morphometric parameters were length 5.48 μm, width 2.99 μm, perimeter 13.62 μm, area 12.43 μm2 , ellipticity 1.86, shape factor 1.20, elongation 0.29 and regularity 1.05. Significant between-individual and within-individual differences were found in morphometric parameters. Based on morphometric study, sperm heads were classified as elliptical or normal (49%), long (18%), short (2%), pyriform (12%), round (9%), large (6%) and small (4%). Morphological analysis found no additional sperm head defects in 49% of normal sperm obtained by morphometry, although a 4% incidence of neck/mid-piece defects and a 16% incidence of principal-piece defects were found. We conclude that sperm head morphometry assessment in fertile alpacas using a nonautomated digital method is feasible, and that defects in sperm heads constitute the main morphological alteration (>50% of the sperm population), based on WHO and strict criteria.

Spermatogonial stem cell (SSC) is known for its self-renewal capacity. We have studied the in vitro proliferation of isolated SSC from adult alpaca (Vicugna pacos) testes. A total of 107 samples were evaluated of which 31 were evaluated at baseline, 36 were cultivated in DMEM and 40 in STEMPRO media. Half of the cultivated samples was analysed after 14 days, and the rest after 21 days. Round cell subpopulations were identified with FITC-DBA by flow cytometry: strongly positive DBA (sDBA+) as SSC, weakly positive DBA (wDBA+) as in early differentiation and negative DBA as differentiated. At the beginning, 4.16% of the cells were SSC, 37.61% wDBA+ while 54.12% were DBA-. After 14 days, 42.28% of SSC, 44.68% wDBA+ and 11.07% DBA- were found in DMEM while 47.09% of SSC, 32.57% wDBA+ and 18.48% DBA- in STEMPRO. After 21 days 38.66% were SSC, 52.78% wDBA and 7.65% DBA- in DMEM and on STEMPRO media 47.92% SSC, 44.20% wDBA+, 4.93% DBA-. There is a significant difference between the number of initial and SSC cultivated, as well as between DBA- (p < 0.05), while there is no significant difference between the wDBA+ (p > 0.05). Our results suggest that both culture media are appropriate for the in vitro proliferation of alpacas SSC.

El objetivo de este estudio fue demostrar, mediante la citometría de flujo, que el porcentaje de espermatozoides de alpaca con alto potencial de membrana mitocondrial (PMM) se reduce significativamente luego del proceso de criopreservación. Se trabajó con 41 testículos de alpacas obtenidos del Camal Municipal de Ninacaca, Pasco, Perú. Se recuperaron los espermatozoides de la cola de los epidídimos con un dilutor en base a leche descremada y se congelaron solo aquellas muestras con mínimos de 30% de motilidad y 50x10(6) espermatozoides/ml. La evaluación del PMM se realizó antes y después del proceso de criopreservación. Cada muestra se incubó durante 10 minutos a 38 °C con MitoTracker Deep Red (100 nM) para determinar el porcentaje de alto PMM, mediante citometría de flujo con imágenes. El efecto de la criopreservación en el porcentaje de espermatozoides con alto PMM fue evaluado mediante la prueba de T-student pareada. Así mismo, se correlacionaron los porcentajes de motilidad y espermatozoides con alto PMM. Se obtuvo un 49.82 ± 12.41 y de 34.97 ± 9.96% de alto PMM en muestras antes y después del proceso de criopreservación (p

El objetivo del estudio fue caracterizar el semen del Perro sin Pelo del Perú. Quince machos, de edades entre 1 a 5 años, inscritos en el Kennel Club Peruano fueron utilizados para colectar semen (un eyaculado por macho) mediante manipulación digital. Se realizó un espermatograma básico y se registraron características macroscópicas (volumen y color) y microscópicas (motilidad y concentración espermática, utilizando microscopía de campo claro). Adicionalmente, se realizaron pruebas de función espermática: viabilidad espermática (utilizando SYBR-14 y ioduro de propidio), potencial de membrana mitocondrial (PMM; utilizando MitoTraker Deep Red FM), e integridad acrosomal (utilizando FITC-PSA y ioduro de propidio), analizadas posteriormente mediante citometría de flujo con análisis de imágenes. Se encontraron los siguientes valores (medias ± IC 95%): 6.1 ± 2.7 ml de volumen, color blanquecino; 66.7 ± 10.5% de motilidad; 262.7 ± 20.4 x 106 espermatozoides/ml de concentración espermática; 77.7 ± 9.7% de viabilidad espermática; 85.9 ± 5.1% de alto PMM; 83.6 ± 14.9% de integridad acrosomal. Estos resultados representan el primer reporte sobre las características seminales de esta raza y podrían ser tomados como valores de referencia para una mejor selección de machos reproductores y para el diagnóstico de alteraciones reproductivas de la raza.

Epididymal alpaca sperm represent an alternative model for the study of alpaca semen. The objective of this study was to characterize the normal values of some functional variables in epididymal alpaca sperm using imaging flow cytometry. Alpaca testicles (n=150) were processed and sperm were recovered from the cauda epididymides. Only 76 samples with acceptable motility and sperm count were considered for assessment by imaging flow cytometry. Acrosome integrity and integrity/viability were assessed by FITC-PSA/PI and FITC-PNA/PI. Mitochondrial membrane potential (MMP) was assessed by MitoTracker CMXRos and MitoTracker Deep Red FM. Lipid peroxidation was evaluated using BODIPY 581/591 C11. Results show that the mean values for acrosome-intact sperm were 95.03±6.39% and 93.34±7.96%, using FITC-PSA and FITC-PNA, respectively. The mean values for acrosome-intact viable sperm were 60.58±12.12% with FITC-PSA/PI and 58.81±12.94% with FITC-PNA/PI. Greater MMP was detected in 65.03±15.92% and 59.52±19.19%, using MitoTracker CMXRos and MitoTracker Deep Red FM, respectively. Lipid peroxidation was 0.84±0.95%. Evaluation of acrosome-intact and acrosome-intact viable sperm with FITC-PSA/PI compared with. FITC-PNA/PI or MMP with MitoTracker CMXRos compared with MitoTracker Deep Red FM were correlated (P0.05). The MMP using MitoTracker CMXRos was the only variable correlated (P0.05) with sperm motility (r=0.3979). This report provides a basis for future research related to alpaca semen using the epididymal sperm model.

El objetivo del presente estudio fue determinar el efecto de la criopreservación sobre la integridad acrosomal en espermatozoides viables de alpaca. Se procesaron muestras de 46 testículos de alpaca que presentaron una motilidad >30% y concentración espermática >50x106 espermatozoides/ml. Los espermatozoides recuperados de la cola del epidídimo se separaron en dos alícuotas de 500 µl. La primera alícuota fue para la evaluación inicial en fresco y la segunda alícuota se congeló en pajillas que fueron almacenadas en nitrógeno líquido hasta el día de su evaluación. Para la evaluación de viabilidad e integridad acrosomal, 100 µl de cada muestra fueron incubadas con 2.5 µl de FITC-PSA (100 µg/ml) y 0.5 µl de ioduro de propidio (PI, 2.4 mM) por 10 min a 38 °C. Inmediatamente después, las muestras se evaluaron por citometría de flujo, adquiriéndose diez mil eventos compatibles con espermatozoides por muestra. FITC-PSA y PI fueron excitados con un láser de 488 nm, y la emisión de fluorescencia fue detectada utilizando los canales Ch02 (505-560 nm) para FITC-PSA y Ch05 (642-740nm) para PI. Se determinó el porcentaje de espermatozoides con integridad acrosomal (FITC-PSA negativos) de la población de espermatozoides viables (PI negativos). Se utilizó la prueba de los rangos con signos de Wilcoxon para determinar como la criopreservación afecta la integridad acrosomal en los espermatozoides viables. Se encontró que la integridad acrosomal de los espermatozoides viables frescos (98.25 ± 5.41%) fue similar a la de los espermatozoides viables pos-descongelamiento (98.75 ± 2.17%). Se concluye que los espermatozoides viables de alpaca antes y después del proceso de criopreservación mantienen un elevado porcentaje de integridad acrosomal.

El objetivo del presente estudio fue determinar el efecto de dos tipos (dimetilacetamida [DMA] y dimetilformamida [DMF]) y tres concentraciones (1, 3.5, 7%) de agentes crioprotectores sobre parámetros espermáticos durante el proceso de criopreservación de espermatozoides epididimarios de alpaca. Se empleó un diseño factorial 2 x 3 formado por los dos crioprotectores y las tres concentraciones. Se evaluaron los parámetros de viabilidad espermática (SYBR-14/PI) y potencial de membrana mitocondrial (MitoTracker Deep Red FM) mediante citometría de flujo y motilidad pos-descongelación por microscopía de muestras de material espermático de 40 epidídimos. Se encontró un mayor porcentaje de motilidad pos-descongelamiento con DMA (14%) que con DMF (10%) (p=0.001). Además, hubo efecto significativo de la concentración del crioprotector en todos los parámetros evaluados (p

The identification system of spermatogonial stem cell (SSC) was established in alpaca using the molecular expression as well as the reactivity pattern to Dolichos biflorus agglutinin (DBA) by flow cytometry. Twenty-four testicles with their epididymis were recovered from adult alpacas at the slaughterhouse of Huancavelica-Peru. Samples were transported to the Laboratory of Reproductive Physiology at Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Testes were selected for our study when the progressive motility of epididymal spermatozoa (ESPM) was above 30%. Isolation of SSC was performed with two enzymatic digestions. Finally, sperm viability was evaluated by means of the trypan blue vital stain in spermatogonial round cells. Samples with more than 80% viability were selected. Isolated cells cultured for 2 days were used for identifying the presence of SSCs by the expression of integrin beta1 (116 bp) and PLZF (206 bp) genes. Spermatogonia were classified according to the DBA reactivity. Spermatogonia with a strong positive to DBA (sDBA(+) ) were classified as SSC (Mean +/- SEM=4.44 +/- 0.68%). Spermatogonia in early differentiation stages stained weakly positive with DBA (wDBA(+) ) (Mean +/- SEM=37.44 +/- 3.07%) and differentiated round cells as DBA negative (Mean +/- SEM=54.12 +/- 3.18%). With the use of molecular and DBA markers, it is possible to identify easily the spermatogonial stem cells in alpaca.

The main objective was to study the effects, on sperm function, of the addition of two superoxide dismutase (SOD) analogues (Tempo and Tempol) to alpaca semen extender for cryopreservation. Twelve alpaca semen samples were collected using an artificial vagina and then diluted at a 1:3 ratio in an extender based on skim milk, egg yolk, and fructose. Each semen sample was divided into three equal parts to form the following groups: control, Tempo (1 mM), and Tempol (1 mM). Groups were cooled to 5 °C in 90 minutes (-1 °C in 3 minutes); when samples reached approximately 10 °C, SOD analogues were added to the respective groups. At 5 °C, ethylene glycol (final concentration, 0.1 M) was added to each group. After 30 minutes at 5 °C, samples were loaded in 0.25 mL plastic straws, placed in liquid nitrogen vapor for 15 minutes, and then plunged. Percentages of sperm motility, functional sperm membrane integrity, and viable sperm with intact acrosomes were evaluated before and after freeze-thaw using visual analysis, the hypoosmotic swelling test, and the double-stain trypan blue/giemsa technique, respectively. The Terminal deoxymucleotidyl transferase dUTP Nick End Labeling assay was performed for evaluation of sperm DNA fragmentation of frozen-thawed sperm. Sperm motility was higher (P < 0.05) in the Tempol and Tempo groups than in the control group (mean, 22.1%, 19.7%, and 11.2%, respectively), with similar results for functional sperm membrane integrity. Additionally, DNA fragmentation was lower (P < 0.05) in the Tempol group (16.7%) than in the control group (38.8%). Viable sperm with intact acrosomes were not affected by the use of SOD analogues. There was a negative correlation (r = -0.58) between DNA fragmentation of alpaca sperm and sperm motility after freeze-thawing, but DNA damage was neither related to functional membrane integrity nor viable sperm with intact acrosomes. We concluded that DNA fragmentation and loss of motility during cryopreservation of alpaca sperm could be partially prevented by supplementation of the semen extender with 1 mM Tempo or Tempol.

El objetivo del presente trabajo fue determinar el porcentaje de integridad acrosomal en espermatozoides epididimarios de alpaca utilizando Arachis hypogaea (PNA) y Pisum sativum (PSA), conjugadas con isoticionato de fluoresceína (FITC). Se recolectaron 45 testículos de alpaca obtenidos del Camal Municipal de Ninacaca, provincia de Pasco (Perú) y se utilizaron 29 muestras recuperadas de la cola del epidídimo con motilidad mayor de 30% y concentración mayor de 50x106 espermatozoides/ml. Los espermatozoides fueron suspendidos con 1 ml de solución Tris base, se lavaron por centrifugación a 600 g por 8 min y los pellets fueron re-suspendidos en 300 μl de PBS. Cada muestra fue dividida en dos alícuotas e incubadas por 8 min a 38 °C con FITC-PNA (0.5 μg/ml) o FITC-PSA (2.5 μg/ml), junto con un marcador de vitalidad (ioduro de propidio [PI], 0.5 μg/ml). Las muestras fueron evaluadas mediante citometría de flujo, utilizando un láser de excitación de 488 nm y canales detectores de emisión de fluorescencia de 505-560 nm (Canal 02 para FITC) y de 642-740 nm (Canal 05 para PI). Los espermatozoides que emitieron fluorescencia verde en el Canal 02 fueron considerados con daño acrosomal, mientras que los que emitieron fluorescencia roja en el Canal 05 fueron considerados muertos. Se obtuvo 59.17 ± 4.84 y 61.13 ± 4.35% de espermatozoides vivos con integridad acrosomal para FITC-PNA y FITC-PSA, respectivamente. Los resultados presentan un indicador de la integridad acrosomal en espermatozoides epididimarios de alpaca, que podría constituir una base para el estudio de la fisiología espermática en esta especie., The aim of this study was to determine the percentage of epidydimal sperm acrosome integrity using alpaca Arachis hypogaea (PNA) and Pisum sativum (PSA), combined with fluorescein isothiocyanate (FITC). Testicles (n=45) were obtained at Ninacaca municipal slaughterhouse (Pasco, Peru). Only 29 samples with motility higher than 30% and concentration higher than 50x106 sperm/ml were used. Sperm from cauda epididymis were recovered with 1 ml of Tris base solution, and then, washed by centrifugation at 600 g for 8 min and pellets were re-suspended in 300 μl of PBS. Each sample was divided into two aliquots and incubated for 8 min at 38 °C with FITC-PNA (0.5 μg/ml) or FITC-PSA (2.5 μg/ mL) together with propidium iodide (PI, 0.5 μg/ml) as a viability marker. Samples were evaluated by flow cytometry using a laser excitation 488 nm and emission detector channels 505-560 nm fluorescence (channel 02 for FITC) and 642-740 nm (Channel 05 for PI). Sperm emitting green fluorescence on Channel 02 were considered with acrosome damage while sperm emitting red fluorescence on Channel 05 were considered dead. The results showed 59.17 ± 4.84 and 61.13 ± 4.35% of live sperm with acrosome integrity when using FITC-PNA and FITC-PSA respectively. These results are an indicator of epididymal sperm acrosome integrity in alpaca and can provide the basis for studying sperm physiology in this specie.

The objective was to evaluate the effect of different cryoprotectant agents in the cryopreservation of Peruvian Paso horse semen. Twenty semen samples were collected from five Peruvian Paso horse stallions. Each sample was divided into 12 parts to form the groups: dimethylacetamide (DMA), dimethyl sulfoxide (DMSO), ethylene glycol (EG) and glycerol (GLY), at 3%, 4% and 5%. Samples were frozen using a rate-controlled freezer. Sperm parameters evaluated were motility and viability/acrosomal status. After thawing, progressive motility in DMA group was higher (p

El objetivo del presente estudio fue determinar la concentración óptima de glicerol, etilenglicol y dimetil sulfóxido (DMSO) en la criopreservación de espermatozoides epididimarios de alpaca. En el experimento 1 se evaluó el efecto de ocho concentraciones de glicerol, etilenglicol y DMSO: T1 (0 M), T2 (0.25 M), T3 (0.5 M), T4 (0.75 M), T5 (1 M), T6 (1.25 M), T7 (1.5 M) y T8 (1.75 M). Se utilizó un modelo de regresión polinomial quíntuple para determinar la mejor concentración de cada crioprotector, resultando concentraciones óptimas para glicerol, etilenglicol y DMSO de 1.16, 1.02 y 0.9 M, respectivamente. En el Experimento 2, se comparó el efecto de las concentraciones óptimas entre glicerol, etilenglicol y DMSO sobre la motilidad, integridad de membrana plasmática y viabilidad e integridad acrosomal en los espermatozoides epididimarios de alpaca. Los resultados mostraron promedios de 35.8, 51.8 y 38.3% para DMSO (0.9 M) y de de 30.8, 45.0 y 33.8% para glicerol para las variables motilidad, integridad de membrana plasmática y viabilidad e integridad acrosomal, respectivamente, y sin diferencias significativas entre estos crioprotectores. Sin embargo, fueron significativamente mejores (p

El objetivo del presente estudio fue determinar el patrón de glicosilación del endometrio uterino en alpacas con y sin tratamiento de superovulación. Se utilizaron cinco alpacas no superovuladas con folículos ováricos menores de 4 mm y cinco alpacas que fueron sometidas a un tratamiento de superovulación en base a FSH, GnRH y hCG. Se tomaron muestras del cuerpo del útero y de ambos cuernos uterinos y se trabajaron con las técnicas histoquímicas PAS y Azul Alcián y con la técnica de lectinhistoquímica. Para esta última se utilizaron 14 lectinas, de las cuales PNA, RCA-I, ConA, DBA, WGA, sWGA, GS, LCA, SJA y PHA-L presentaron un patrón de glicosilación diferente entre ambos grupos, sugiriendo que el tratamiento hormonal influenció en la expresión de los glicoconjugados que se unen a estas lectinas. Asimismo, las lectinas PNA, SJA, SBA, ConA, LCA y PSA presentaron diferencias entre el cuerno derecho y el cuerno izquierdo, lo que sugiere que los glicoconjugados de unión a estas lectinas podrían participar en generar un ambiente propicio para la implantación, que por lo general se da en el cuerno izquierdo en la alpaca. Se concluye que la alpaca tiene un patrón de glicosilación que puede variar con tratamientos hormonales de superovulación., The aim of this study was to determine the glycosylation pattern in the uterine endometrium of alpacas with and without superovulation treatment. Uterine tissues were obtained from five non-treated alpacas with ovarian follicles less than 4 mm and five superovulated alpacas where FSH, GnRH and hCG was used. Samples from the uterus and uterine horns were analyzed by histochemistry (PAS and alcian blue) and lectinhistochemistry techniques. Fourteen lectins were used and PNA, RCA-1, ConA, DBA, WGA, Swga, GS, LCA, SJA and PHA-L showed different glycosilation patterns in the endometrium between both groups, indicating that the hormonal treatment could affect the expression of glycoconjugates that have affinity for these lectins. Lectins PNA, SJA, SBA, ConA, LCA and PSA showed different glycosilation patterns between the two uterine horns, indicating that the glycoconjugates that have affinity for these lectins can be implicated in the uterine environment during the implantation, which in most cases in the alpaca take place on the left horn. In conclusion, the glycosylation pattern in the alpaca can change due to superovulation hormone therapy., Facultad de Ciencias Veterinarias

El estudio tuvo como objetivo evaluar la respuesta superovulatoria y la tasa de concepción al aplicar la técnica no quirúrgica de transferencia de embriones en vacas lecheras de un establo comercial de la cuenca de Lima. Se utilizaron ocho vacas donadoras, distribuidas en dos años de trabajo. Estas fueron sincronizadas con estrógenos, progestágenos y agentes luteolíticos, superovuladas con 400 mg de FSHe inseminadas con dos dosis de semen congelado. Se utilizaron 28 receptoras, también distribuidas en dos años. En el primer año se sincronizaron con el protocolo Pre-synchy en el segundo año con el protocolo CIDR-synch. Se hizo coincidir el día esperado del celo de las donadoras y receptoras. Los embriones fueron recolectados en el día siete del servicio, se clasificaron y se transfirieron de inmediato a las receptoras. Eldiagnóstico de gestación se realizó mediante ultrasonografía transrectal al día 28 postransferencia. Se obtuvieron 23 embriones, siendo la tasa de recuperación de 36.5% con gran variación entre años. Se transfirieron 17 embriones obteniéndose una tasa de concepción de 40.0%, con gran variación entre años (22.2 y 66.7%). La variada respuesta individual de las donadoras afectó la tasa de recuperación de embriones y el protocolo de sincronización afectó la tasa de concepción., The study aimed to evaluate the superovulatory response and conception rate byapplying the technique of non-surgical embryo transfer in dairy cows of a commercialfarm in the Lima milkshed. Eight donor cows were used and distributed in two workingyears. Donors were synchronized with estrogens, progestagens and luteolitic agents,superovulated with 400 mg of FSH, and inseminated with two doses of frozen semen. Therecipient animals (n=28) were also distributed in two years. The Pre-synch protocol wasused for estrus synchronization in the first year and the CIDR-synch protocol in thesecond year. The expected day of heat presentation coincided for both donors andrecipients. The recovery of embryos was done seven days post service where embryoswere classified and immediately transferred. Pregnancy diagnosis by transrectalultrasonography was done at day 28 post transfer. A total of 23 embryos were obtained.The embryo recovery rate was 36.5% with high variation between years. Seventeenembryos were transferred and the conception rate was 40% with high variation betweenyears (22.2 and 66.7%). The varied individual response of the donors affected the embryorecovery rate and the synchronization protocol affected conception rate.

High levels of reactive oxygen species (ROS), which may be related to reduced semen quality, are detected during semen cryopreservation in some species. The objectives of this study were to measure the oxidative stress during ram semen cryopreservation and to evaluate the effect of adding 2 antioxidant mimics of superoxide dismutase (Tempo and Tempol) during the cooling process on sperm motility, viability, acrosomal integrity, capacitation status, ROS levels, and lipid peroxidation in frozen and/or thawed ram spermatozoa. Measuring of ROS levels during the cooling process at 35, 25, 15, and 5 °C and after freezing and/or thawing showed a directly proportional increase (P < 0.05) when temperatures were lowering. Adding antioxidants at 10 °C confered a higher motility and sperm viability after cryopreservation in comparison with adding at 35 °C or at 35 °C/5 °C. After freezing and/or thawing, sperm motility was significantly higher (P < 0.05) in Tempo and Tempol 1 mM than that in control group. Percentage of capacitated spermatozoa was lower (P < 0.05) in Tempo and Tempol 1 mM in comparison with that in control group. In addition, ROS levels and lipid peroxidation in group Tempo 1 mM were lower (P < 0.05) than those in control group. These results demonstrate that ram spermatozoa are exposed to oxidative stress during the cooling process, specifically when maintained at 5 °C and that lipid peroxidation induced by high levels of ROS decreases sperm motility and induces premature sperm capacitation. In contrast, the addition of Tempo or Tempol at 0.5 to 1 mM during the cooling process (10 °C) protects ram spermatozoa from oxidative stress.

Se evaluo la estabilidad del ADN en espermatozoides de alpaca mediante citometria de flujo en muestras congeladas con antioxidantes analogos de superoxido dismutasa (Tempo y Tempol). Doce muestras de semen de alpaca fueron congeladas utilizando un dilutor en base a leche descremada, fructosa, yema de huevo y etilenglicol. Cada muestra fue dividida en tres porciones: grupo control, grupo Tempo (1 mM) y grupo Tempol (1 mM). Los antioxidantes fueron agregados al dilutor durante la curva de enfriamiento (10 °C). Las muestras fueron descongeladas y fijadas en una solucion de formaldehido al 2% y permeabilizadas utilizando una solucion de Triton X-100 al 0.8%. La integridad del ADN espermatico se evaluo con la tecnica de TUNEL y una sonda fluorescente para determinar la viabilidad celular (Ioduro de propidio [PI]). Los espermatozoides marcados con la sonda del TUNEL y PI fueron considerados celulas permeabilizadas con el ADN fragmentado. Las muestras fueron analizadas mediante citometria de flujo utilizando un laser de 488 nm, contando un minimo de 10 000 celulas por muestra y utilizando microscopia de fluorescencia. La frecuencia de espermatozoides con ADN fragmentado en el grupo control (38.8 ± 16.2%) fue significativamente mayor (p

Se emplearon 32 muestras de semen procedentes de cuatro ovinos a fin de ser criopreservadas con la adición dos antioxidantes: Tempo (2,2,6,6 tetrametil-1-piperidiniloxil) y Tempol (4-hidroxi 2,2,6,6 tetrametil-1-piperidiniloxil), en concentraciones de 0.5, 1.0 y 2.5 mM, para evaluar el efecto postdescongelamiento que pudieran tener sobre la motilidad progresiva, la viabilidad e integridad acrosomal y la capacitación espermática prematura. En cada concentración de los dos antioxidantes y del grupo control se utilizó un dilutor en base a Tris, realizándose ocho repeticiones, cada una con cuatro muestras de semen. Los resultados obtenidos demuestran que la adición de Tempo a una concentración de 0.5 mM mejora significativamente la calidad del semen criopreservado en comparación con el grupo control (p, Thirty-two semen samples from four rams were frozed using two antioxidants, Tempo (2,2,6,6 tetramethyl-1-piperidinyloxyl) and Tempol (4-hidroxi 2,2,6,6 tetramethyl-1- piperidinyloxyl), each one in concentrations of 0.5, 1.0, and 2.5 mM, to evaluate the effects on post-thawing motility, viability, acrosomal integrity, and earlier sperm capacitation. Eight replications for each antioxidant concentration and control group, were done using four semen samples per replication. Semen samples were diluted on a Tris extender. Results showed that Tempo 0.5 mM improved frozen semen quality in comparison with control group (p

El objetivo del estudio fue determinar el tiempo máximo para recuperar y criopreservar espermatozoides obtenidos de la cola del epidídimo de caninos post orquiectomía. Se obtuvo testículos de 20 caninos entre 1 y 8 años de edad. Los testículos se colocaron en cloruro de sodio al 0.9% y se almacenaron a 5 ºC durante 0, 24, 48 y 72 horas. Los espermatozoides fueron recuperados al cortar la cola del epidídimo en un dilutor en base a Tris-citrato-fructosa. Para el proceso de criopreservación, se añadió yema de huevo (20%) y glicerol (5%) a la muestra diluida (espermatozoides + dilutor). La nueva dilución fue envasada en pajillas de 0.5 ml y sometidas a una curva de enfriamiento para luego ser colocadas en nitrógeno líquido. Se evaluó motilidad total, motilidad progresiva e integridad funcional de membrana. Previo a la criopreservación, la motilidad total varió significativamente después de 24 y 72 horas de almacenamiento a 5 ºC (p, The aim of the study was to determine the maximum time to recover and cryopreservespermatozoa from the tail of canine epididymis post orchiectomy. The testes were obtainedthrough orchiectomy from 20 dogs aged 1 to 8 years. The testis were placed in sodiumchloride 0.9% and stored at 5 °C for 0, 24, 48 and 72 hours. Spermatozoa were recoveredby cutting the tail of the epididymis in an extender based on Tris-citrate-fructose. For the cryopreservation process, egg yolk (20%) and glycerol (5%) was added to the dilutedsample (sperm + dilutor). The new dilution was packaged in 0.5 ml straws, which weresubjected to a cooling curve and then placed in liquid nitrogen. Total motility, progressivemotility and functional integrity of the membrane were evaluated. Beforecryopreservation process, total motility after 24 and 72 hours of storage at 5 ºCdecreased (p

El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto del momento de adición del glicerol durante el proceso de enfriamiento sobre la calidad espermática del semen canino. Se utilizaron 15 eyaculados de 4 perros adultos. Cada muestra de semen fue dividida en alícuotas para someterlas a tres métodos de adición de glicerol (T1: al inicio; T2: al inicio y final; T3: al final de la curva de enfriamiento). El semen se envasó en pajillas de 0.5 ml y se congeló en nitrógeno líquido. Se evaluó la motilidad progresiva y la integridad funcional de membrana posdescongelamiento. No se encontró diferencia estadística entre los tres métodos de adición del glicerol, pudiéndose simplificar el proceso de criopreservación al añadir todo el glicerol al inicio de la curva de enfriamiento., The objective of the study was to evaluate the timing of adding glycerol during thecooling process on sperm quality of canine semen. Fifteen ejaculates from 4 mature dogswere used. Each sample was divided in aliquots and three methods of adding glycerolwere used (T1: at the beginning; T2; at the beginning and at the end; T3: at the end of thecooling process). Semen samples were packed in 0.5 ml straws and frozen in liquid nitrogen.The post-thawing progressive motility and the functional integrity of membrane wereevaluated. None statistical difference was observed due to the three treatments, indicatingthat the process of cryopreservation can be simplified by adding all the glycerol at thebeginning of the cooling curve.

El presente trabajo tuvo por finalidad conocer el tipo y frecuencia de agresividad del perro hacia el humano, así como las situaciones o contexto que las producen. Se encuestó a 405 propietarios de pacientes caninos, sin alteraciones neurológicas aparentes, de la Clínica de Animales Menores de la Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima. Se determinó que el 27.2% de los perros mostraron algún tipo de agresividad, mayormente de tipo leve y media, siendo la de tipo dominante la más frecuente (50.0%). Se encontró una asociación entre los tipos de agresividad dominante, territorial y predatoria con el sexo del perro (p

Se evaluó el efecto del tratamiento superovulatorio en las dos fases del ciclo ovárico sobre la respuesta folicular y la calidad embrionaria en 45 llamas hembras adultas. Se incluyeron en el estudio aquellos animales que a la ecografía presentaron un folículo preovulatorio >7 mm. Los animales se distribuyeron en tres grupos: T0 (no estimulado), T1 (tratamiento superovulatorio en fase no luteal) y T2 (tratamiento superovulatorio en fase luteal). Los animales de T1 y T2 recibieron 1 ml de LH (día 0) para sincronizar la onda folicular y 1000 UI de eCG (día 3) como tratamiento superovulatorio. Se utilizaron esponjas vaginales impregnadas con progesterona entre el día 3 y 7 para simular la fase luteal en el T2. La inducción de la ovulación se hizo mediante monta natural y aplicación de 1 ml de GnRH (día 8). La colección y evaluación de embriones se realizó 7 días post cópula (día 15) en T1 y T2. En el grupo T0 se realizó monta natural y aplicación de GnRH y 7 días después se realizó la colección de embriones. El número de folículos preovulatorios fue mayor en T1 (11.07 ± 7.53) y T2 (6.13 ± 7.11) con respecto a T0 (1.07 ± 0.26) (p7 mm follicle, observed by ultrasonography, were selected and allocated into 3 groups: T0 (non-stimulated), T1 (superovulatory treatment during the non luteal phase), and T2 (superovulatory treatment during the luteal phase). Animals in groups T1 and T2 received 1 ml of LH (day 0) for synchronization of the follicular wave and 1000 IU of eCG (day 3) as superovulatory treatment. Vaginal sponges impregnated with progesterone were used on days 3 to 7 in T2 to simulate the luteal phase. The induction of the ovulation (day 8) was done through natural mating and the application of GnRH (1 ml). Embryo recovery was done 7 days after natural mating (day 15) on T1 and T2. Similarly, embryo recovery was done 7 days after natural mating and application of GnRH in T0. The number of preovulatory follicles was larger in T1 (11.07 ± 7.53) and T2 (6.13 ± 7.11) than in T0 (1.07 ± 0.26) (p

El objetivo del estudio fue evaluar el efecto de tres dilutores y cuatro combinaciones de dos agentes crioprotectores permeantes más dos no permeantes sobre la calidad del semen ovino post-descongelamiento. Para esto, en una primera fase se evaluaron entre tres dilutores (A, B y C) y el más adecuado se usó en una segunda fase, donde se evaluaron las siguientes combinaciones de agentes crioprotectores permeantes y no permeantes: 1) Glicerol - Trehalosa, 2) Glicerol - Sacarosa, 3) Etilenglicol - Trehalosa y 4) Etilenglicol - Sacarosa. En el experimento 1, se encontró que el Dilutor A mantenía mejor la motilidad progresiva, viabilidad e integridad acrosomal post-descongelamiento en comparación con los dilutores B y C, por lo que el Dilutor A se empleó en el experimento 2. En este ensayo se encontró que la motilidad progresiva, la viabilidad e integridad acrosomal, la termoresistencia y la integridad de membrana plasmática postdescongelamiento fue mejor en los grupos con glicerol-sacarosa y glicerol-trehalosa en comparación con los grupos con etilenglicol-sacarosa y etilenglicol-trehalosa. Esto demuestra que el glicerol es un mejor crioprotector permeante en comparacion con el etilenglicol; sin embargo, no hubo diferencia en el uso de sacarosa o trehalosa. Se concluye que un dilutor con las características del dilutor A, utilizando glicerol más trehalosa o sacarosa, constituye una buena alternativa para la criopreservación de semen ovino., The objective of the study was to evaluate the effect of three extenders and four combinations of two permeant and two non permeant cryoprotectant agents on the quality of post thaw ram semen. In Experiment 1, three extender were evaluated (A, B, and C) in order to select the best for the next step. In Experiment 2, different combinations of cryoprotectant agents were evaluated as follow: 1) Glycerol–Trehalose, 2) Glycerol– Sucrose, 3) Ethylene glycol-Trehalose, and 4) Ethylene glycol–Sucrose. In experiment 1, motility, viability and acrosomal integrity in extender A were higher than in extender B and extender C, and therefore, extender A was used for experiment 2. In this assay, motility, viability and acrosomal integrity, thermoresistance, and plasmatic membrane integrity were higher in groups Glycerol-sucrose and Glycerol-trehalose in comparison with groups Ethilene glycol-sucrose and Ethilene glycol-trehalose. However, there were not significative differences between sucrose or trehalose. In conclusion, an extender with characteristics of extender A using glycerol plus trehalose or sucrose constitute a good alternative for cryopreservation of ram semen.

Aim: To evaluate two extenders and two cryoprotectant agents (CPA) for alpaca semen cryopreservation. Methods: Semen samples were obtained from four adult alpacas (Lama pacos) and frozen using extender I (TRIS, citrate, egg yolk and glucose) or extender II (skim milk, egg yolk and fructose), each containing either glycerol (G) or ethylene glycol (EG) as CPA. Consequently, four groups were formed: 1) extender I-G; 2) extender I-EG; 3) extender II-G; and 4) extender II-EG. Semen was diluted in a two-step process: for cooling to 5 °C (extenders without CPA), and for freezing (extenders with CPA). Viability and acrosome integrity were assessed using trypan blue and Giemsa stains. Results: When compared, the motility after thawing was higher (P < 0.05) in groups II-EG (20.0 % ± 6.7 %) and II-G (15.3 % ± 4.1 %) than that in groups I-G (4.0 % ± 1.1 %) and I-EG (1.0 % ± 1.4 %). Viable spermatozoa with intact acrosomes in groups II-EG (18.7 % ± 2.9 %) and II-G (12.7 % ± 5.9 %) were higher than that in groups I-G (5.7 % ± 1.5 %) and I-EG (4.0 % ± 1.0 %). Conclusion: The skim milk- and egg yolk-based extenders containing ethylene glycol or glycerol to freeze alpaca semen seems to promote the survival of more sperm cells with intact acrosomes than the other extenders. (Asian J Androl 2005 Sep; 7: 303–309)

El efecto de la progesterona exógena (P4) sobre el desarrollo de la onda folicular fue estudiado en 25 hembras adultas, las cuales fueron distribuidas en 5 grupos: G0(control); G1(30mg de P4/dìa por 2 dìas); G2(30mg P4/ dìa por 4 dìas); G3(50mg P4/ dìas por 2 dìas) y G4(50mg P4/ dìa por 4 dìas). El desarrollo de los folìculos dominante(_> 7mm) y subordinados (>3mm y, The effect of the exogenous progesterone (P4) on the development of follicular waves in llamas was studied in twenty-five females. According to dose and regimen for P 4 administration, animals were allocated to 5 groups (n=5): 00 (control group ), G 1 (30 mg P /day for 2 days); G2 (30 mg P/day for 4 days); G3 (50 mg P /day for 2 days) and G4 (50 mg P /da y for 4 days ). Development of dominant ():. 7 mm) and subordinated follicles (>3 mm and < 7 mm) were monitored daily by transrectal ultrasonography. The minimun size reachedbythedorninantfollicleingroupsGl (4.6±0.9mm), G3(5.1±1.5 mm) andG4(5.3 ± 1.6 mm) were smaller (P< 0.05) than group 00 (8.5 ± 1.0 mm). The whole follicular regression of the dominant follicle in groups G 1 (5.5 ± 2.0 mm), G2 (5.9 ± 1.4 mm) and G3 (5.3 ± 3. 3 mm) were larger (P< 0.05) than group 00 (0.9 ± 1.4 mm). The number of subordinated follicles hada significative increase (P< 0.05) in groups G 1 and G4, on days 2 and 3 in relation to days 7 and 8 post-treatment. Results demonstrate that exogenous progesterone inhibits the development of the dominant and subordinate follicles in lla-mas during treatment days; however, immediately after the end of the treatment, the · number of subordinate follicles increases, due to the regression of the dominant follicle in order to allow the emergence of a new follicular wave.

El objetivo del presente trabajo fue estudiar el efecto de dos fuentes energéticas (fructosa y glucosa) y dos crioprotectores (glicerol y etilenglicol) sobre la calidad seminal luego del proceso de criopreservación en un arreglo factorial de 2 x 2. Se evaluó la motilidad progresiva, la viabilidad y la integridad acrosomal. La motilidad fue superior con el uso de glicerol (65.5%) en comparación con el uso de etilenglicol (49.0%) (p

Se evaluó el efecto la glucosa, fructosa, trehalosa y sacarosa, como componentes del diluyente, sobre la viabilidad espermática en semen canino refrigerado a 5 °C. La fracción espermática de 16 eyaculados de perro fue distribuida en cinco alícuotas conteniendo un diluyente a base de Tris - ácido cítrico - yema de huevo, pero con un azúcar distinto, además del control sin azúcar. Los cinco tratamientos se evaluaron a las 24, 48, 72 y 96 horas de refrigeración en base a motilidad progresiva e integridad funcional de membrana mediante la prueba hipoosmótica (HOS). En todos los grupos, a excepción del grupo control, la motilidad espermática se mantuvo dentro de rangos aceptables durante el estudio (90% en el día 0 hasta cerca de 60% en el día 4). Sin embargo, la integridad de membrana se mantuvo ligeramente superior en los grupos con azúcar (87-90%) en comparación con el grupo control (83-85%). La glucosa y sacarosa mostraron mejores resultados de motilidad y HOS. Se concluye que no se genera un daño significativo sobre la membrana espermática durante la refrigeración a 5 °C del semen canino, y que la utilización de cualquiera de los azúcares como sustrato energético para los espermatozoides, en especial glucosa y sacarosa, es de gran importancia para el mantenimiento de niveles apropiados de motilidad espermática e integridad funcional de membrana. The effect of glucose, fructose, trehalose, and sucrose, as components of the extender, was evaluated on canine sperm viability during refrigeration at 5 °C. The spermatic fraction of 16 dog ejaculations were distributed in 5 aliquots containing an extender based on Tris - citric acid - egg yolk, but differing in the presence of one of the sugars, plus a control without sugar. The five treatments were evaluated after 24, 48, 72, and 96 hours of refrigeration in relation to progressive motility and functional integrity of the membrane by the hypoosmotic swelling test (HOS). All groups, with the exception of the control group, the sperm motility maintained within acceptable ranges during the study (90% on day 0 and 60% on day 4). The integrity of the membrane remained slightly superior in groups with sugar (87-90%) in comparison with the control group (83-85%). The glucose and sucrose showed the best results in motility and HOS. It is concluded that no significant damage occurred on the sperm membrane while keeping semen at 5 °C, and that the use of any of the tested sugars as energy-giving substrate for the sperm cells (especially glucose and sucrose) is of great importance for the maintenance of appropriate levels of sperm motility and functional integrity of the membrane.

El objetivo de este trabajo fue determinar la morfología y cinética de crecimiento de un aislado de células primarias de los pasajes 1-3 del corion de placenta de alpaca (CpCPa) como precursores de células madre. Se procesaron cinco placentas de alpaca por disgregación mecánica enzimática para el aislamiento primario de células nucleadas, evaluándose la forma, longitud, ancho y cinética de dichas células, además de la población de células obtenidas por gramo de tejido del corion placentario. Los resultados en aislamiento celular dieron de rendimiento 6x105 células nucleadas/g de tejido del corion. La morfometría evaluada desde el pasaje 0 al pasaje 3 mostró elongamiento longitudinal que va desde los 110.99 ± 27.16 μm hasta los 298.24 ± 52.06 μm, respectivamente, mientras que la medida del ancho celular abarcó desde los 30.97 ± 8.53 μm hasta los 48.17 ±11.27 μm y la cinética de crecimiento expresada en nivel de doblaje poblacional acumulativo por número de pasaje fueron 2.07, 1.65, 1.06 y 0.30. Las características de morfología y cinética de crecimiento de los primeros pasajes del cultivo de las CpCPa denotaron características similares a las células madre de especies domésticas reportadas. Esta información preliminar es importante para futuros estudios de caracterización y expansión de las CpCPa con fines de terapia regenerativa para los camélidos sudamericanos.