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Las proteínas inactivadoras de los Ribosomas (RIPs), son enzimas con actividad N-glicosidasa que actúan removiendo una adenina específica de la subunidad mayor del ribosoma, interrumpiendo la síntesis proteica y causando la muerte celular. El descubrimiento de las RIPs ha sido motivo de múltiples trabajos de investigación que pretenden demostrar la función de este tipo de proteínas en el organismo productor, dicha investigación ha costado hasta ahora más de 100 años sin lograr el esclarecimiento total del rol desempeñado por las RIPs. Por tal circunstancia aun sigue abierta la posibilidad de proponer y demostrar hipótesis de su función. Además, aunque las RIPs son características de las plantas, actualmente existe un incremento constante en el hallazgo de nuevas RIPs en diversos organismos que van desde bacterias asta tejidos animales. Este hecho hace necesaria la razón de su prevalencia y ubiquidad en la naturaleza. Por otro lado, la actividad enzimática tan específica y letal de las RIPs, las hace ser atractivas en aplicaciones biotecnológicas tanto en medicina como en agricultura pues con ellas pueden diseñarse inmunotoxinas y conjugados en contra de células indeseables. Por su parte, los actinomicetos son bacterias gram-positivas aisladas del suelo, con alta capacidad en la síntesis de compuestos de interés industrial; su capacidad de producción hace que la búsqueda de nuevos metabolitos en dicha especie sea blanco importante para la investigación. Recientemente, nuestro grupo encontró dentro del genoma de Streptomces coelicolor un gen con similitud a las RIPs de plantas. Este gen ha sido estudiado y caracterizado a lo largo del presente trabajo. Los resultados obtenidos indican que el genoma de S. coelicolor codifica una Proteína Inactivadora de los Ribosomas, denominada RIPsc, con actividad N-glicosidasa sobre ribosomas procariontes y eucariontes. De manera adicional también se ha analizado la posible función de RIPsc para S. coelicolor por medio del estudio de su expresión en niveles de transcripción y traducción. Y finalmente, se propone una estrategia novedosa para la aplicación de RIPsc en la agricultura por medio del diseño y producción heterologa de conjugados específicos contra diversos fitopatógenos. Ribosome Inactivating Proteins are enzymes with N-glycosidase activity. They act by removing a specific adenine from the major subunit of the robosomes, thus preventing protein synthesis and causing cell death. Their Discovery stimulated to initiate many research projects looking for example to identify the importance of these proteins for the producer organism. Despite many efforts, the function of RIPs remains unclear. Due to that, several speculations and assumptions appeared. Most RIPs have been found in plants, but also in various other organisms, from bacteria to animal tissues, new RIPs have been and are still being detected. As such it remains intriguing to find the reason for the prevalence and ubiquity of RIPs in nature. On the other hand, the lethal and specific activity of RIPs is attractive for biotechnological apllications in medicine and agriculture. They can be used to develop immunotoxins and conjugates against specific targets as pathogens and cancer cells. Actinomycetes are Gram-positive soil bacteria. Several species are of major industrial importance as they have the capacity to synthesize industrially interesting compounds such as antibiotics and enzymes. As they have the capacity to produce many metabolites, new metabolites produced by these species are still sought. Recently, our group found in Streptomyces coelicolor genome a gene homologous to plant RIPs genes. This gene has been studied and characterized during the present work. The results show that S. coelicolor genome encodes a type 1 ribosome inactivating protein, nominated RIPsc, with N-blycosidase activity on both prokaryote and eukaryote ribosomes. Additionally, we looked for the posible function of RIPsc by analyzing its expression at transcription and translation level. Finally, we propose a novel strategy for RIPsc application to agricultura by the design of a heterologous production of specific conjugates against different phytopathogens.

Se evaluó el efecto de los exopolisacáridos (EPS) producidos por Streptococcus thermophilus SY-102 en la elaboración de queso mexicano tipo manchego. Como resultado principal, se encontró que la mencionada cepa filante mejoró la retención de agua y de grasa del queso, y por lo tanto, aumentó significativamente su rendimiento. Además, en el queso elaborado con cepa filante hubo mayor retención de humedad durante la maduración, lo que indica que los EPS se unen fuertemente al agua dentro de la matriz de proteínas del queso. Como parte del trabajo experimental se utilizó microscopía electrónica de barrido (SEM) para confirmar que los EPS unidos a la matriz de proteínas del queso produjeron una red densa que ayudó a aumentar la retención de agua y grasa. Esta retención generó una estructura más abierta en el queso que da como resultado final un producto más blando. La comparación de las micrografías SEM de las diferentes secciones del queso mostró mayor concentración de EPS en el centro respecto a las secciones exteriores. Esta diferencia de concentración indica que la producción de EPS continuó durante la maduración y que el ambiente de humedad y/o concentración de oxígeno en el centro del queso favoreció su producción. En el análisis de perfil de textura (APT) —que es un método instrumental— se encontró que el queso elaborado con cepa filante resultó ser menos duro, más cohesivo y menos elástico que el queso control; en cambio, los EPS no afectaron la masticabilidad. Los cambios en la textura se relacionaron con la composición. Se encontró que cuando la cantidad de agua y grasa disminuyen, se incrementa la dureza, mientras que la elasticidad disminuye cuando se incrementa la cantidad de grasa. También se observó que hubo un aumento en la cohesividad del queso elaborado con cepa filante debido a las interacciones de los EPS con la matriz proteica. Asímismo, se realizó una evaluación sensorial aplicando un Análisis Descriptivo Cuantitativo donde se midieron los mismos atributos que en el Análisis del Perfil de Textura, mediante un panel diez jueces entrenados. En este caso se obtuvo que el queso filante resultara ser menos firme y menos cohesivo en comparación con el queso control, mientras que la elasticidad resultó significativamente mayor. Por otro lado, no se percibieron diferencias significativas en la masticabilidad. Por todo lo dicho anteriormente podemos concluir que el uso de una cepa de Streptococcus thermophilus productora de EPS en la elaboración de queso tipo manchego ayudó a retener agua y grasa, lo cual influyó en un mayor rendimiento del mismo. También el uso de esta cepa modificó su textura resultando un queso menos duro. An exopolysaccharide (EPS)-producing a strain of Streptococcus thermophilus was evaluated in the production of Mexican manchego-type cheese. This ropy strain improved water and fat retention, significantly increasing cheese yield. Furthermore, the ropy strain cheese retained more moisture than control cheese during ripening, suggesting that EPS strongly bound water within the protein matrix of the cheese. Scanning Electron Microscopy (SEM) confirmed that EPS bound to the protein matrix of the cheese, producing a dense network that helped to increase water and fat retention and leading to a more open structure of the cheese that gave out a softer product, as confirmed by instrumental texture profile analysis (TPA) and sensory evaluation. Comparison of SEM micrographs of the different sections of the cheese showed higher concentration of EPS in the centre than in the outer sections, indicating that EPS production continued during ripening and that the environment at the centre of the cheese (moisture and/or oxygen concentration) favored EPS production. Instrumental TPA also demonstrated that the ropy strain cheese was more cohesive and less elastic than control; in contrast, EPS did not affect chewiness. The changes in texture could be correlated to composition, as hardness increased as water and fat decreased, while springiness decreased with increasing fat. The interactions of EPS with the cheese protein matrix had an effect on the increase in cohesiveness of the ropy strain cheese. Likewise, a sensorial evaluation was performed by applying a Quantitative Descriptive Analysis, where a board of ten trained judges measured the same features in the TPA. In this case, the results depicted that the ropy strain cheese was less solid and less cohesive, compared with the control cheese, while its elasticity was significantly greater. No meaningful differences in chewiness were perceived. As a result, an conclude that the use of a strain of Streptococcus thermophilus, producing EPS in the making of manchego-type cheese helped to retain water and fat, which influenced the production of a higher yield of the mentioned product. Also, the use of the EPS strain modified the texture of the cheese, resulting in a harder product.

"El contenido deficiente de microelementos (µE) en los efluentes acuícolas es una de las principales limitantes para su uso como solución nutritiva (SN) en sistemas hidropónicos, debido a que estos son requeridos por las plantas para lograr su potencial productivo máximo. En el manejo agronómico, la selección del sustrato es importante debido a que el rendimiento varía en función de las características fisicoquímicas de estos. El consumo de plantas ancestrales y cosmopolitas, como Chenopodium ambrosioides L. y Portulaca oleracea L. ha incrementado debido a sus propiedades culinarias y medicinales que permiten su comercialización internacional, por lo que se espera que su inclusión en los sistemas hidropónicos cultivados con efluentes acuícolas represente alternativas viables para los productores. En este estudio se determinó la respuesta fisiológica y morfométrica de dichas especies, así como el consumo y la calidad del efluente a dosis de µE (0, 20 y 100 %) de la SN de Hoagland y Arnon y dos tipos de sustratos (esponja y sustrato comercial + vermiculita) utilizando efluente acuícola de Orechromis niloticus durante un ciclo de 30 días en el sistema hidropónico. Los tratamientos se conformaron de la manera siguiente: 0ES, 0EE, 20ES, 20EE, 100ES, 100EE y 0VS, 0VE, 20VS, 20VE, 100 VS, 100VE (dosis de µE; E (C. ambrosioides) o V (P. oleracea); S (sustrato comercial + vermiculita) o E (esponja)). A los 30 días después de la adición de microelementos (DDAM) las variables morfométricas de plantas de C. ambrosioides mostraron los valores más altos (Tukey HSD, p≤0.05) en las variables biomasa fresca y seca, área foliar y longitud del tallo cuando se cultivaron en el tratamiento 100EE, mientras que en P. oleracea los valores mayores se presentaron en las plantas cultivadas con el tratamiento 100VS, destacando principalmente una diferencia en el crecimiento debido al sustrato utilizado. Las variables fisiológicas de plantas de C. ambrosioides mostraron los valores mayores (Tukey HSD, p≤0.05) de clorofila a y b cuando se cultivaron con los tratamientos 20EE y 100EE, mientras que las plantas de P. oleracea mostraron el potencial hídrico menor en las plantas cultivadas en el tratamiento 20VE..." "The deficient content of microelements (µE) in aquaculture effluents is one of the main limitations for its use as a nutrient solution (NS) in hydroponic systems since these are required by plants to achieve their maximum productive potential. In the agronomic management, the selection of the substrate is important because the yield varies depending on the physicochemical characteristics of substrates. The consumption of ancestral and cosmopolitan plants, such as Chenopodium ambrosioides L. and Portulaca oleracea L. has increased due to their culinary and medicinal properties that allow their international commercialization, so their inclusion in hydroponic systems grown with aquaculture effluents is expected to represent viable alternatives for producers. In this study, the physiological and morphometric response of these species was determined, as well as the consumption and quality of the effluent at doses of µE (0, 20 and 100 %) of the NS of Hoagland and Arnon and two types of substrates (sponge and commercial substrate + vermiculite) using Orechromis niloticus aquaculture effluent during a 30-day cycle in the hydroponic system. The treatments were made up as follows: 0ES, 0EE, 20ES, 20EE, 100ES, 100EE and 0VS, 0VE, 20VS, 20VE, 100 VS, 100VE (dose of µE; E (C. ambrosioides) or V (P. oleracea); S (commercial substrate + vermiculite) or E (sponge)). At 30 days after the addition of microelements (DDAM) the morphometric variables of C. ambrosioides plants showed the highest values (Tukey HSD, p≤0.05) in the variables fresh and dry biomass, leaf area and stem length when were cultivated in the 100EE treatment, while in P. oleracea the highest values were presented in the plants cultivated with the 100VS treatment, mainly highlighting a difference in growth due to the substrate used. The physiological variables of C. ambrosioides plants showed the highest values (Tukey HSD, p≤0.05) of chlorophyll a and b when they were grown with the 20EE and 100EE treatments, while the plants of P. oleracea showed the lowest water potential in the plants grown in treatment 20VE..."

"Los sistemas de monocultivo de camarón presentan grandes retos para continuar con su crecimiento sostenido, en parte debido a la dependencia en harina de pescado, la contaminación de las aguas costeras por las aguas residuales y los brotes de enfermedades emergentes. El desarrollo de sistemas acuícolas de integración multitrófica (IMTA, por sus siglas en inglés) representa una alternativa para el desarrollo de una acuicultura productiva y sostenible en México y el mundo. El principio radica en convertir los “desechos” de una especie que requiere ser alimentada con alimentos balanceados, en activos útiles para otras especies llamadas “filtrantes” de materia orgánica (p. ej. Crassostrea gigas) e inorgánica (p. ej. Ulva lactuca), ofreciendo mayor bioseguridad, diversificación de productos y bajo impacto ambiental. Por otro lado, el uso de ingredientes funcionales a base de macroalga como nueva fuente de proteína es una de las propuestas de la industria de alimentos acuícolas para sustituir la harina de pescado en los alimentos. Este proyecto de tesis se centró en desarrollar, optimizar y evaluar un sistema IMTA con P. vannamei, C. gigas y Ulva sp. con la finalidad de mejorar la productividad, eficientizar el uso de nutrientes y mejorar el control microbiológico, respecto a sistemas tradicionales de monocultivo. El sistema IMTA permitió una eficiencia de retención de nitrógeno y fósforo de 82% y 59.6% respectivamente, aumentando un 34% el crecimiento del camarón respecto al monocultivo y diversificando la producción con ostiones y macroalga; mientras el sistema de monocultivo de camarón retiene solamente 37% de nitrógeno y 13% de fosforo en la biomasa producida. De la biomasa generada de macroalga, se realizó una predigestión química, enzimática y biológica para producir detritos, los cuales se lograron incorporar al 20% como sustituto parcial de la harina de pescado en el alimento balanceado para camarón sin afectar el rendimiento productivo del camarón. La inclusión de este alimento en el sistema IMTA resultó en una mejora en el aprovechamiento de los nutrientes (90.3% del nitrógeno y 78% del fosforo) principalmente a favor de una mayor biomasa de macroalga. Finalmente, con el nuevo alimento y el cultivo integrado, se observó una modulación de la actividad digestiva de los organismos asociada a cambios significativos en su microbiota digestiva..." "Shrimp monoculture systems present great challenges to continue their sustained growth, in part due to dependence on fishmeal, to pollution of coastal waters by sewage, and to outbreaks of emerging diseases. The development of integrated multitrophic aquaculture systems (IMTA) represents an alternative for the development of a productive and sustainable aquaculture in Mexico and the world. The principle lies in converting the "waste" of a species that needs to be fed with balanced food, into useful assets for other species called "filtering" of organic matter (e.g., Crassostrea gigas) and inorganic (e.g., Ulva lactuca), offering greater biosecurity, product diversification and low environmental impact. On the other hand, the use of functional ingredients based on macroalgae as a new source of protein is one of the proposals of the aquaculture industry to replace fishmeal in diets. This PhD project focused on developing, optimizing and evaluating an IMTA system with P. vannamei, C. gigas and Ulva sp. in order to improve productivity, to make the use of nutrients more efficient and to improve microbiological control, compared to traditional monoculture systems. The IMTA system allowed an efficiency of nitrogen and phosphorus retention of 82% and 59.6% respectively, increasing shrimp growth by 34% compared to monoculture and diversifying production with oysters and macroalgae; while the shrimp monoculture system retains only 37% nitrogen and 13% phosphorus in the biomass produced. From the biomass generated from macroalgae, a chemical, enzymatic and biological predigestion was carried out to produce detritus, which was able to incorporate 20% as a partial substitute for fish meal in the balanced feed for shrimp, without affecting the productive performance of the shrimp. The inclusion of this food in the IMTA system resulted in an improvement in the use of nutrients (90.3% of nitrogen and 78% of phosphorus) mainly in favour of a greater macroalgae biomass. Finally, with the new diet and the integrated culture, a modulation of the digestive activity of the organisms associated with significant changes in their digestive microbiota was observed. In terms of microbiological control, the IMTA system made it possible to reduce the relative abundance of Vibrionaceae in the digestive tract of shrimp and in the digestive gland of oysters, as well as in shrimp fed with U. lactuca detritus..."

La acuicultura de peces marinos es una actividad productiva que ha adquirido gran importancia durante las últimas décadas; sin embargo, su desarrollo enfrenta diversas problemáticas. Dentro de las más importantes se encuentran las alteraciones en la reproducción durante el cautiverio, sobre todo en las hembras. Para resolver estos problemas, desde hace varias décadas se ha recurrido al uso de terapias hormonales en diversas especies. En la actualidad se utilizan análogos de la hormona liberadora de las gonadotropinas (GnRHa) dado su resistencia a la degradación enzimática en comparación con la GnRH nativa. Sin embargo, aunque existen implantes para la liberación de GnRHa en peces, estos no son útiles para todas las especies de importancia comercial y los protocolos de preparación no son claros para su replicación en campo, lo que hace necesario el desarrollo de nuevos protocolos claramente descritos. El presente estudio tuvo como objetivo describir y comparar el perfil de liberación de GnRHa de implantes preparados con diferentes excipientes en pruebas in vitro: 1) colesterol-celulosa; 2) alginato- metil éter metacrilato de polietilénglicol (PEGMA) y 3) etilvinilacetato (EVAc). Para la elección de los implantes a probar en la liberación de GnRHa se elaboraron implantes con diferentes excipientes y se describió el perfil de liberación de albúmina de suero bovino (BSA) como proteína modelo. Todos los implantes estudiados mostraron una liberación tipo estallido que se presentó en diferentes tiempos. Por esta razón se eligieron los implantes que iniciaron la liberación después de 6 h y liberaron por un periodo más prolongado. Para los implantes de alginato adicionalmente se probaron diferentes recubrimientos: 1) 2-hidroxietilo de metacrilato (HEMA)- PEGMA y 2) EVAc; ambos recubrimientos redujeron significativamente (p

RESUMEN GENERAL El género Annona es el más importante en la familia de las Annonaceae. Tres de las siete especies (guanábana A. muricata, chirimoya A. cherimola Mill. y saramuyo Annona squamosa L.) que son producidas comercialmente, son apreciadas por un número creciente de consumidores en todo el mundo, debido a sus características tanto organolépticas como nutricionales; sin embargo, son frutos altamente perecederos y susceptibles a los daños por frío debido a las bajas temperaturas. Es necesario desarrollar tecnologías y manejo poscosecha de los frutos, para extender su vida poscosecha y conocer la respuesta de sus parámetros físicos, químicos y fisiológicos cuando son sometidos a temperaturas menores de 20 ºC. Se almacenaron frutos de guanábana, chirimoya y saramuyo a bajas temperaturas (4 – 18 ºC) y se maduraron a temperatura ambiente (22 - 26 ºC). Después de refrigerar los frutos de guanábana y chirimoya a temperaturas de 9 y 4 ºC se observó una menor respiración, poco cambio en los parámetros de color, se incrementó la actividad antioxidante, y el metabolismo de la vitamina C fue retrasado; estas variables están relacionadas con la sintomatología de los daños por frío. Mientras que, en los tratamientos de 14 y 11 ºC los frutos maduraron normalmente sin afectar negativamente la mayoría de sus variables. En los frutos de saramuyo, la respiración, la producción de etileno, el contenido de fenoles y de la actividad de peroxidasa se incrementaron en ambas temperaturas (18 y 7 ºC). En los frutos refrigerados a 7 ºC, los parámetros de color fueron similares a los frutos testigo; mientras que, en los frutos refrigerados a 18 ºC, se observaron cambios en los parámetros de color, al pasar de un verde amarillento a colores entre naranja y rojo con baja luminosidad y cromaticidad, característica relacionada más con la senescencia de los frutos que de daños por frío. Los frutos de saramuyo, específicamente los frutos provenientes de la península de Yucatán, es necesario evaluarlos a temperaturas más bajas con el fin de conocer los mecanismos inductores del daño por frío, y poder establecer las temperaturas y tiempos óptimos para su conservación ABSTRACT The genus Annona is the most important in the family of the Annonaceae. Three of the seven species (soursop A. muricata, cherimoya A. cherimola Mill. and sugar apple A squamosa L.) that are commercially produced, are appreciated by a growing number of consumers around the world due to their organoleptic and nutritional characteristics; however, they are highly perishable fruits and susceptible to chilling injury due to low temperatures. It is necessary to develop technologies and post-harvest handling of the fruits, to extend their post-harvest life and to know the response of their physical, chemical and physiological parameters when they are subjected to temperatures below 20 ºC. Soursop, cherimoya and sugar apple fruits were stored at low temperatures (4 - 18 ºC) and matured at room temperature (22 -26 ºC). After refrigerating the soursop and cherimoya fruits at temperatures of 9 and 4 ºC, less respiration was observed, little change in color parameters, antioxidant activity increased, and vitamin C metabolism was delayed. Variables related to the symptoms of chilling injury. Whereas the fruits exposed to 14 and 11 ºC the fruits matured normally without negatively affecting most of its variables. In sugar apple fruits, respiration, ethylene production, phenols content and peroxidase activity increased at both temperatures (18 and 7 ºC). In the fruits refrigerated at 7 ºC, the color parameters were like the control fruits; while, in the fruits refrigerated at 18 ºC, changes in the color parameters were observed, when going from a yellowish green to colors between orange and red with low luminosity and chromaticity, a characteristic related more to the senescence of the fruits than to damage by cold. The sugar apple fruits, specifically the fruits from the Yucatan peninsula, it is necessary to evaluate them at lower temperatures in order to know the mechanisms that induce chilling injury, and to be able to establish the optimum temperatures and times for their conservation.

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Instituto de Investigaciones Químico Biológicas. Maestría en Ciencias Químicas From the chemical study of essential oil (EO) of Trixis michuacana var. longifolia, its nature and chemical composition were determined; what's more; allowed to establish the chemotypes, of which it has three: germacrene, muurolene and caryophyllene, being mainly sesquiterpenes. This analysis represents the first report of the main components of the EO of the species, which is a relevant contribution to the chemistry of the genus Trixis. The chemical study of the apolar extracts and intermediate polarity of the aerial parts of the species Trixis michuacana var. longifolia, allowed the isolation and characterization of the secondary metabolites: sitosterol (23), stigmasterol (24), heptacosane (46), β-amyrin palmitate (68) and 4-hydroxy-3-methoxybenzaldehyde (69); being 23 and 24 the major metabolites in the hexane extract of stems. On the other hand, 46 and 68 are the main components of the dichloromethane extract of leaves and compound 69 of the dichloromethane extract of stems. Additionally, the chemical reactivity of phytosterols 23 and 24 was explored in a series of chemical reactions that led to obtaining the isomers of 5α-sitostan-3-ol (70,70a), 5α-sitostan-3-one (72) and finally to stigmastane thiosemicarbazone (76), the latter being a novel structure. Del estudio químico del aceite esencial (AEs) de Trixis michuacana var. longifolia, se logró determinar su naturaleza y composición química; además; permitió establecer los quimiotipos, de los cuales, posee tres: germacreno, muuroleno y cariofileno, siendo principalmente sesquiterpenos. Este análisis representa el primer reporte de los principales componentes del AEs de la especie, lo cual es un aporte relevante a la química del género Trixis. El estudio químico de los extractos apolares y polaridad intermedia de las partes áreas de la especie Trixis michuacana var. longifolia, permitió el aislamiento y caracterización de los metabolitos secundarios: sitosterol (23), estigmasterol (24), heptacosano (46), palmitato de β- amirina (68) y 4-hidroxi-3-metoxibenzaldehído (69); siendo 23 y 24 los metabolitos mayoritarios en el extracto hexánico de tallos. Por su parte 46 y 68, son los componentes mayoritarios del extracto de diclorometano de hojas y el compuesto 69 del extracto de diclorometano de tallos.Adicionalmente, se exploró la reactividad química de los fitosteroles 23 y 24 en una serie de reacciones químicas que llevó a la obtención de los isómeros del 5α-sitostan-3-ol (70,70a), a la 5α-sitostan-3-ona (72) y finalmente a la tiosemicarbazona de estigmastano (76), siendo esta última una estructura novedosa.

Instituto de Investigaciones Químico Biológicas. Maestría en Ciencias en Biología Experimental Pseudomonas aeruginosa is part of the group of pathogens that cause most of the nosocomial diseases and that are also generators of multi-resistance to antibiotics, called ESKAPE. This opportunistic pathogen is capable of acquiring resistance and increasing its virulence, through horizontal gene transfer, mediated by mobile elements such as plasmids and genomic islands. The plasmid pUM505 was isolated from a clinical strain of P. aeruginosa, it has a pathogenicity island that presents a mosaic-like structure, which consists of blocks of genes related in sequence and organization to the PAPI-1 and PAPI-2 islands of P. aeruginosa PA14, a highly virulent clinical isolate. pUM505 was transferred to the P. aeruginosa strain PAO1, which resulted, on the one hand, in a four-fold increase in virulence and, on the other, an increase in the level of resistance to quinolones such as ciprofloxacin, norfloxacin and moxifloxacin. To try to identify the genes responsible for this resistance, our working group selected orfs 35, 36 and 37, to determine their role in resistance to quinolones, finding that these orfs confer resistance to ciprofloxacin and levofloxacin, probably by a system of expulsion, when they are transferred to the Escherichia coli J53-2 strain, which does not occur when they are transferred to the P. aeruginosa PAO1 strain, these results suggested that the participation of additional genes is necessary to confer resistance. In this work it was determined that orfs 35, 36 and 37 are part of a 9-gene operon that includes orfs 34 to 42, an operon that is 9,218 bp in size. Pseudomonas aeruginosa forma parte del grupo de patógenos causantes de la mayor parte de las enfermedades nosocomiales y que además son generadores de multiresistencia a antibióticos, denominado ESKAPE. Éste patógeno oportunista, es capaz de adquirir resistencia e incrementar su virulencia, a través de la transferencia horizontal de genes, mediada por elementos móviles como plásmidos e islas genómicas. El plásmido pUM505, fue aislado de una cepa clínica de P. aeruginosa, posee una isla de patogenicidad que presenta una estructura tipo mosaico, que consiste en bloques de genes relacionados en secuencia y organización a las islas PAPI-1 y PAPI-2 de P. aeruginosa PA14, un aislado clínico altamente virulento. pUM505 fue transferido a la cepa de P. aeruginosa PAO1, lo que resultó, por un lado, en un incremento de cuatro veces en la virulencia y por el otro, un aumento en el nivel de resistencia a quinolonas como ciprofloxacina, norfloxacina y moxifloxacina. Para tratar de identificar los genes responsables de esta resistencia, nuestro grupo de trabajo seleccionó a los orfs 35, 36 y 37, para determinar su papel en la resistencia a quinolonas, encontrando que estos orfs confieren resistencia ciprofloxacina y levofloxacina, probablemente por un sistema de expulsión, cuando son transferidos a la cepa de Escherichia coli J53-2, lo cual no ocurre al ser transferidos a la cepa P. aeruginosa PAO1, estos resultados sugirieron que es necesaria la participación de genes adicionales para conferir la resistencia. En este trabajo se determinó que los orfs 35, 36 y 37 forman parte de un operón de 9 genes que incluye a los orfs del 34 al 42, operón que tiene un tamaño de 9,218 pb.

Instituto de Investigaciones Químico Biológicas. Maestría en Ciencias Químicas The synthesis of amino acids, especially non-proteinogenic ones, has been an area of much exploration in chemical synthesis, due to the potential that molecules derived from γ-aminobutyric acid (GABA) show to have pharmacological effects on various diseases associated with disorders of the Central Nervous System (CNS). However, one of the greatest challenges that arise in the synthesis of these compounds is to favor the formation of a single enantiomer, the search for synthetic methodologies that will generate significant enantiomeric excesses is continuous. Consequently, in the present work the synthesis of aryl γ-amino acids derived from GABA was made using reductive amination and catalytic reduction methodologies where the catalyst PdCl2-L-Pro was tested as an inducing agent of asymmetry, the derivatives obtained were evaluated using High Performance Liquid Chromatography (HPLC) to measure the enantiomeric excess generated. La síntesis de aminoácidos, en especial los no proteinogénicos, ha sido un área de mucha exploración en la síntesis química, esto debido al potencial que moléculas derivadas del ácido γ-aminobutírico (GABA) muestran al tener efectos farmacológicos sobre diversas enfermedades asociadas a desordenes del Sistema Nervioso Central (SNC). Sin embargo, uno de los mayores retos que se presentan en la síntesis de estos compuestos es el favorecer la formación de un solo enantiómero, la búsqueda de metodologías sintéticas que permitan generar excesos enantioméricos significativos es continua. En consecuencia, en el presente trabajo se hizo la síntesis de aril γ-aminoácidos derivados del GABA empleando metodologías de aminación reductiva y reducción catalítica donde se probó el catalizador PdCl2-L-Pro como agente inductor de asimetría, los derivados obtenidos se evaluaron mediante Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC) para medir el exceso enantiomérico generado.

Los hongos filamentosos son de interés biotecnológico por múltiples razones, siendo una de ellas la producción de metabolitos secundarios, los cuales suelen ser moléculas de alto valor agregado para el ser humano, tales como los antibióticos. El objetivo general de este trabajo fue caracterizar la función del gen PcSnt y conocer el fenotipo asociado al silenciamiento de su expresión. Se abordaron diferentes puntos, primero la obtención de cepas silenciadas mediante RNAi; un primer análisis fenotípico (cinética de conidiación, extensión radial y microcultivos); el análisis bioinformático se llevó a cabo utilizando un pipeline personalizado (Fbox) a partir del cual se identificaron genes que pueden estar regulados por PcSnt. Gracias al análisis de la ontología genética, fue posible observar los procesos en los que los genes regulados están involucrados. Los niveles en que una proteína juega un papel crucial para la célula son diversos, van del punto de lo que regula su transcripción, las interacciónes que tiene con otras proteínas (inclúyanse vías de transducción de señal) . Puesto que PcSnt, es una proteina multidominio, en este trabajo se sugiere que esta proteína media estrés oxidante y forma parte de diversos complejos en distintos momentos de la vida del hongo, así también se le considera un lector epigenético ya que interactua con diversas histonas e histonas acetil transferasas promoviendo la remodelación de la cromatina, por otro lado también se le encuentra como un inhibidor de la septación, cuya función también puede verse afectada por fuentes de carbono.

La fitorremediación utiliza procesos biológicos con plantas para remover, degradar, transformar o estabilizar contaminantes. Los microorganismos benéficos asociados a la rizosfera de las plantas favorecen la eficiencia de la fitorremediación. Sin embargo, el papel e importancia de los microorganismos en la remoción de contaminantes orgánicos por las interacciones planta-microorganismo no están completamente esclarecidos. En el presente trabajo, se evaluó la capacidad de un hongo endófito transmitido vía semilla (identificado como Lewia sp. ACH-4) para mineralizar hidrocarburos, analizándose su efecto sobre el crecimiento, remoción y acumulación de hidrocarburos en Festuca arundinacea sobre suelo modelo (agrolita) y suelo contaminado artificialmente. Se utilizó una mezcla de hidrocarburos (MHC), constituida por dos hidrocarburos aromáticos policíclicos (HAP): fenantreno (PHE) y pireno (PYR), y un alifático: hexadecano (HXD). La concentración inicial de MHC fue 1500 mg kg-1 . Los experimentos se llevaron a cabo en el invernadero de la UAM-I durante 45 días. Las plantas inoculadas y no inoculadas se cultivaron en unidades experimentales (frascos de vidrio oscuros cilíndricos) con suelo modelo (40 g) o suelo (400 g). Para evaluar la supervivencia y efectividad en la remoción de hidrocarburos totales del petróleo (HTP) de la interacción Festuca arundinacea-Lewia sp., bajo condiciones experimentales de campo (4 Ton de suelo contaminado, con un tratamiento de remediación previo, provenientes de la Ex. Refinería 18 de Marzo de PEMEX), se desarrolló un experimento final que se mantuvo en observación durante 1.5 años. Al inocular con Lewia sp. se estimuló (100%) el crecimiento de las raíces de F. arundinacea en suelo modelo contaminado. La remoción de hidrocarburos fue mayor (25 ± 7.8%) en los suelos plantados que en los suelos sin plantar. La eficiencia de remoción de PYR fue significativamente diferente entre las plantas inoculadas (97.9%) y no inoculadas (91.4%) después de 45 días de crecimiento en suelo. Mientras, en el suelo modelo, la remoción de PYR fue 37 veces mayor con las plantas inoculadas que la obtenida con plantas no inoculadas. Nuestros resultados demuestran que Lewia sp. favorece la eficiencia de remoción de HAP por F. arundinacea, tanto en suelo modelo como en suelo, por lo que puede ser considerado como un hongo rizorremediador benéfico. La acumulación de PYR en raíces fue promovida significativamente después de 45 días de crecimiento en suelo modelo y suelo (318 y 1 603.4 mg kg-1 de raíces en base seca, respectivamente). Los mecanismos de fitorremediación estimulados por la interacción F. arundinacea - Lewia sp., fueron fitodegradación y rizodegradación. La supervivencia de F. arundinacea fue mayor (40%) en comparación con las plantas inoculadas con Lewia sp. (30%) cuando se sembró en suelo de la Ex. Refineria 18 de marzo (previamente remediado por empresas contratadas por PEMEX), bajo condiciones de campo. A los 120 días de cultivo las plantas inoculadas estaban más vigorosas y sanas que las no inoculadas. Finalmente, no se observaron diferencias significativas en la remoción de HTP por F. arundinacea inoculada y no inoculada con Lewia sp.

Actualmente existe una demanda de alimentos funcionales, los cuales se definen de acuerdo con el Instituto Internacional de Ciencias de la Vida (ILSI; International Life Sciences Institute), como aquellos alimentos que contienen un componente, nutriente o no nutriente, con efecto selectivo sobre una o varias funciones del organismo, con un efecto añadido por encima de su valor nutricional, donde sus efectos positivos justifican que puedan reivindicarse sus características funcionales o incluso saludables. Lo anterior implica que un alimento sea considerado funcional porque, además de destacar en sus propiedades nutritivas, contiene algunos elementos bioactivos que al consumirlos diariamente en una dieta equilibrada contribuyen a mantener o mejorar nuestro estado de salud y bienestar. Dentro de estos elementos bioactivos se pueden mencionar las vitaminas, ácidos grasos omega-3 -6 y -9, minerales, fibra dietética, flavonoides, entre otros. Éstos últimos son compuestos a los que se les han atribuido propiedades anticancerígenas, antiinflamatorias, antimutagénicas y antioxidantes; y debido a que el organismo humano no puede producirlos, éstos deben ser obtenidos a través de la dieta. Sin embargo, existen algunos inconvenientes en el uso extensivo de este tipo de compuestos en áreas de consumo humano; esto es debido a que las principales técnicas de extracción de estos compuestos son por medio del uso de solventes orgánicos, limitando su uso debido a la presencia de trazas de solventes remanentes en el extracto, además de su alta susceptibilidad a factores ambientales como luz, pH, temperatura y oxígeno, ocasionando la pérdida de sus propiedades funcionales en un corto tiempo. Por este motivo, surge la necesidad de protegerlos de su degradación, prolongando su funcionalidad en el tiempo y haciéndolos aptos para su aplicación en sistemas alimenticios, cosméticos y/o farmacéuticos. Una forma de contrarrestar las desventajas de las técnicas convencionales de extracción, es el uso de métodos de extracción con fluidos supercríticos, los cuales son considerados como métodos limpios debido a que no requieren el uso de solventes orgánicos tóxicos para la salud, proveen altos rendimientos de extracción, y pueden realizarse a temperaturas relativamente bajas (cercanas a la temperatura ambiente), permitiendo la extracción y conservación de dichos compuestos termolábiles. Debido a lo anterior, el objetivo de este proyecto fue extraer los compuestos flavonoides hidrófobos presentes en Equisetum arvense mediante extracción con fluidos supercríticos y protegerlos de su degradación mediante su encapsulación en nanoemulsiones de tipo o/w, a través del uso de distintos agentes tensoactivos con la finalidad de maximizar el rendimiento de encapsulación, mejorar la biodisponibilidad y prolongar el tiempo de vida útil de los compuestos flavonoides. Se encontró que los principales flavonoides presentes en el extracto de Equisetum arvense (EEA) fueron: quercetina 3-O-glucósido y kaempferol 3-O-glicósido en una concentración de 385 mg/gBS y 31.5 mg/gBS respectivamente. Dicho extracto presentó una actividad antioxidante mediante la inhibición del radical estable DPPH equivalente a una concentración de Trolox de 10.3mM TEAC en el extracto fresco. Los EEA se almacenaron a 4 y 25 °C, al monitorear su actividad antioxidante se observó una pérdida superior al 90 % al cabo de tres semanas independientemente de la temperatura a la cual fueron almacenados. El perfil de pérdida de actividad antioxidante se ajustó a un modelo cinético de primer orden por ser el que describió mejor su comportamiento (R2 > 0.96). Los parámetros cinéticos de dicha degradación fueron: constantes cinéticas de primer orden, k4= 0.661 sem-1 y k25=0.804 sem-1, con tiempos de vida media (t1/2) de 1.05 ± 0.03 y 0.86 ± 0.03 semanas para el EEA libre almacenado a 4 y 25 ºC respectivamente. La incorporación de los extractos en nanoemulsiones como forma de proteger y prolongar la funcionalidad de los compuestos bioactivos extraídos de Equisetum arvense se llevó a cabo mediante el desarrollo de los diagramas de fase ternarios para establecer los intervalos de concentración de cada uno de los componentes con los cuales se logra la formación de las nanoemulsiones (d≤100nm). Se realizaron cuatro diagramas de fases, en cada uno se mantuvo constante una relación tensoactivo:cotensoactivo (TEmix) (1:0, 1:0.2, 1:0.3 y 1:0.4), para cada diagrama se diseñaron 25 formulaciones, donde la fase oleosa (FO) estuvo compuesta por una relación EEA: AEN (aceite esencial de naranja) 4:1 y la fase acuosa (FA) por agua destilada y TEmix, el contenido de FO entre el 3 y 20% (p/p). Los resultados mostraron que el uso de etanol como co-tensoactivo favoreció la formación de las nanoemulsiones, debido a que promueve la reducción de estrés en los enlaces formados en la interfase agua-aceite. Los resultados obtenidos a partir de dichos diagramas ternarios mostraron que no hubo diferencias significativas en la formación de nanoemulsiones al utilizar relaciones de TEmix de 1:0.3 y 1:0.4, por lo que para experimentos posteriores se utilizó un TEmix de 1:0.3. Se realizó un ANOVA para determinar el efecto de las variables independientes y sus interacciones sobre el tamaño de gota de las nanoemulsiones o/w, y mediante un polinomio de segundo grado se generó una superficie de respuesta y una gráfica de contornos que permiten visualizar el efecto de los factores involucrados en el sistema. El modelamiento de los datos mostró que al aumentar la concentración de FO, el tamaño de gota aumentó y que al aumentar la concentración de tensoactivo el tamaño de gota disminuyó. Además se encontró la mejor formulación de la nanoemulsion, en la cual se logró encapsular la mayor concentración de FO con tamaño de gota menor o igual 100 nm, la cuál consistió de 19.98 % (p/p) de FO y 0.82 de FO/TEmix donde TEmix está compuesto por una mezcla de Tween 20 y etanol en la relación antes establecida. Esta nanoemulsión fue etiquetada como FMSR,O y presentó un porcentaje de eficiencia de encapsulación (EE%) de 97.5 ± 0.5 %, resultado similar al mostrado por FMSR,2 (97.2 ± 0.4 %) y FMSR,3 (97.0 ± 0.6 %), formulaciones que fueron elegidas al azar con la finalidad de corroborar los resultados obtenidos en FMSR,O, encontrando que no existe diferencia significativa (p < 0.05) entre las tres formulaciones. A las 3 formulaciones (FMRS,O, FMRS,2, y FMRS,3) se les evaluó la estabilidad durante el almacenamiento a 4 y 25 ºC, en base al cambio de tamaño de gota después de 12 semanas. Las nanoemulsiones almacenadas a 4 ºC no mostraron ningún cambio significativo al cabo de las 12 semanas, a diferencia de las nanoemulsiones almacenadas a 25 ºC, las cuales mostraron un aumento significativo en el tamaño a partir de la octava semana de almacenamiento. Por último se evaluó la protección de los compuestos flavonoides encapsulados en las nanoemulsiones encontrando que la FMSR,O mostró una pérdida gradual de la actividad antioxidante la cual fue más lenta que la del EEA libre. Después de las 12 semanas de almacenamiento, la pérdida de actividad antioxidante de la FMSR,O fue de 42.0 ± 1.9 % a 4ºC y de 50.5 ± 2.3 % a 25 ºC. En base a los resultados obtenidos podemos concluir que el diseño experimental permitió optimizar la formulación de las nanoemulsiones para lograr encapsular la mayor cantidad de fase oleosa posible con una alta eficiencia de encapsulación y un punto muy importante es que se logró extender el tiempo de vida de las propiedades antioxidantes del Extracto de Equisetum arvense encapsulado alrededor de once veces en comparación con el extracto libre.

Los efluentes de la industria de alimento para mascotas presentan contenidos grasos que los hacen difíciles de tratar. Los biorreactores de membrana representan una alternativa atractiva para el tratamiento de aguas residuales de industrias alimentarias. El modelado matemático de este tipo de sistemas es una herramienta práctica para el diseño, control y optimización de plantas de tratamiento. Entre los enfoques de modelado no existe un modelo matemático que tenga como característica el diseño específico para biorreactores de membrana y que capture la naturaleza jerárquica de estos sistemas. En este trabajo se desarrollan nuevos modelos matemáticos, a partir de las ecuaciones fundamentales de transporte de masa y cantidad de movimiento al nivel de escala del continuo. Mediante el uso del método del promedio volumétrico se deducen modelos de medio efectivo tanto para el tanque aerobio como para el tanque de membrana, los cuales son los componentes más importantes del sistema. Entre las características del enfoque de modelado usado aquí, se tiene la ventaja de que los coeficientes son predecibles, a partir de esquemas de cerradura, sin ser la solución de éstos computacionalmente demandante. Los modelos del biorreactor de membrana deducidos son deterministas, predicen las condiciones de diseño y operación más ventajosas, y permiten la simulación bajo condiciones específicas de operación, lo cual sirve como herramienta para analizar el impacto de cada parámetro sobre la concentración de ácidos grasos de cadena larga (AGCL) y oxígeno. Adicionalmente, las simulaciones numéricas de los modelos dan lugar al entendimiento de los mecanismos de transporte de masa involucrados en el tanque de membrana, mediante la predicción de la velocidad del fluido, de la dinámica del flux total de masa y de la concentración en cada punto del tanque. En el tanque aerobio se identifican como parámetros determinantes, para el transporte y oxidación de AGCL, el área interfacial por unidad de volumen y a la proporción de microorganismos dentro de éstos que oxidan a esta especie química. Mientras que para el transporte de oxígeno reflejan la importancia del flujo volumétrico de aire del reactor y la tasa de consumo de este sustrato sobre la concentración de oxígeno disuelto. No se encontró limitación de oxígeno bajo las condiciones que favorecen la degradación de AGCL. Se definen las mejores condiciones de diseño en cuanto a: áreas interfaciales por unidad de volumen, constantes cinéticas, fracciones volumétricas. Así también se reportan las mejores condiciones de operación: flujos volumétricos de aire y alimentación y números de Biot. Para el tanque de membrana, los factores que más influyen en el transporte de AGCL son: la capacidad retentiva de la membrana de ultrafiltración y la velocidad del fluido contenido en el tanque. En la mayor parte del fluido externo a los conjuntos de módulos de membrana (casetes), el transporte de masa está regido principalmente por la convección, mientras que en los casetes el transporte es predominantemente difusivo. Para este tanque se reportan las mejores condiciones de diseño en términos de las fracciones volumétricas; y las mejores condiciones de operación en términos de los números de Biot y el número de Péclet. Estas aportaciones son relevantes para trabajos experimentales futuros, tanto en cuestiones de diseño como para la proposición de potenciales mejoras a sistemas existentes.

El presente trabajo tuvo como objetivo determinar las mejores condiciones de operación para la transesterificación de acetato de isoamilo y la síntesis de oleato de etilo por lipasas producidas por Rhizopus homothallicus (13a) y Rhizopus microsporus (43aIV) respectivamente, en fermentación en medio sólido (FMS) en un reactor de tanque agitado. Se determinó el efecto de la concentración de sustratos, la velocidad de agitación, el flujo de alimentación de sustratos, entre otros, sobre la eficiencia y tasa de bioconversión de oleato de etilo. En la primera etapa de este trabajo se establecieron las condiciones de producción de lipasas por Rhizopus homothallicus (13a) y Rhizopus microsporus (43aIV) en FMS con agrolita como soporte inerte. A las 16 h de cultivo, se obtuvo la mayor producción de lipasas (con una actividad de hidrólisis de 75 U/gms) para las dos cepas utilizadas. Para la obtención de los biocatalizadores empleados en las reacciones de síntesis, se deshidrató la materia fermentada con aire seco hasta alcanzar una humedad menor al 1%. Los biocatalizadores obtenidos por FMS se utilizaron para llevar a cabo reacciones de transesterificación de acetato de isoamilo y síntesis de oleato de etilo. En el primer caso, la reacción se llevó a cabo con 50 mM acetato de etilo y 50 mM de alcohol isoamílico disueltos en hexano en viales de 1.5 mL sin agitación a 45 ºC; obteniéndose una conversión del 25% después de 48 h de reacción. Para esta reacción se evaluaron siete biocatalizadores producidos por las cepas de hongos termotolerantes: 13bIV, 19, 56cIV, 23aIV, 13a, 43aIV y 9a. El biocatalizador producido por Rh. microsporus (43aVI) logró la mejor conversión (80%) de sustratos en 48 h de reacción, siendo seleccionado para los estudios de esterificación de ácido oleico y etanol. Para la síntesis de oleato de etilo se realizaron estudios preliminares; primero en viales de 1.5 mL sin agitación y posteriormente, en un mini reactor de 10 mL con agitación magnética. En el mini reactor se logró prácticamente el 100% de conversión en 90 min con 1.5 g del biocatalizador a 45 °C, con una relación molar de sustratos 1:5 (50 mM de ácido oleico y 250 mM de etanol). Posteriormente, se estudió el efecto de la relación molar de sustratos, de la concentración de sustratos, de la cantidad del biocatalizador y de la temperatura de reacción. Conversiones cercanas al 100%, se alcanzaron en 60 min empleando ácido oleico 50 mM y etanol 250 mM, disueltos en hexano con 0.5 g de biocatalizador a 45 °C. Se realizaron dos experimentos, uno manteniendo la concentración de ácido oleico constante (50 mM) y otro manteniendo la concentración de etanol constante (250 mM). Con los resultados de estos experimentos y considerando el mecanismo de reacción enzimática Ping Pong Bi Bi se realizó una regresión no lineal para calcular los parámetros cinéticos, siendo éstos: Vmax=2.247 mmol/Lmin, Km(COOH)=19.529 mM, Km(OH)=101.997 mM y Ki(OH)=237.968 mM, con una R2=0.94. Se evaluó la reutilización del biocatalizador mediante lotes sucesivos, manteniendo constante durante todos los lotes la relación molar de sustratos 1:5. El biocatalizador mantuvo alrededor del 50% de conversión después de ocho ciclos de reacción de 60 min cada uno. Posteriormente, se evaluó el efecto de diferentes concentraciones de etanol (empleadas a partir del segundo lote), logrando más del 90 % de conversión con la relación molar de sustratos 1:2, la cual se mantuvo constante por cuatro ciclos de reacción. Finalmente, se estudió la síntesis en continuo de oleato de etilo en un reactor de tanque agitado, encontrando que para lograr el 90% de conversión fue necesario agregar 88 g/L de biocatalizador en 60 min de reacción. Posteriormente, se estudió el efecto de la velocidad de agitación y de la tasa de alimentación en la reacción de síntesis; así como la estabilidad operacional del biocatalizador. Con este sistema, se logró una conversión cercana al 90% por 25 h de operación en continuo. Los resultados obtenidos en este trabajo demuestran la factibilidad de usar los biocatalizadores producidos por FMS sin etapas de purificación e inmovilización, para su aplicación en sistemas de reacción en continuo.

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Tradicionalmente la obtención de la quitina y su derivado principal el quitosano implica la DM (desmineralización), DP (desproteinización) y desacetilación química del desperdicio de camarón, utilizando ácidos y bases fuertes en altas concentraciones, lo que provoca la depolimerización y la pérdida de otros productos de valor agregado tales como proteínas y pigmentos. Por otra parte, en este trabajo se evaluaron cuatro proteasas comerciales (Protamex, HT Proteolitic, Deterzyme y Proteasa N) en la obtención de quitina. Para este propósito, las enzimas comerciales se incubaron individualmente con quitina parcialmente purificada obtenida de una FAL (fermentación ácido láctica) del desperdicio de camarón. La Proteasa N mostró mayor actividad sobre la quitina. Una vez seleccionada la proteasa se evaluaron diferentes niveles de pH, temperatura y concentración de enzima. Los mejores resultados fueron obtenidos a un pH 7.5 a 40°C con una concentración de enzima de 0.5% (p/p). Bajo estas condiciones se obtuvo hasta un 99.3% de DP, recuperando quitinas biológicas con un 0.85 ± 0.16% de contenido de proteína. El proceso de desproteinización enzimática de la quitina es un método económicamente atractivo, ya que evita altos gastos de energía, agua y reactivos. En conjunto con la FAL se tiene un tratamiento biológico para la purificación total de la quitina, evitando que esta sufra daños en su estructura, al mismo tiempo que se busca obtener quitinas con mínimos residuos de proteína. La quitina obtenida por desproteinización enzimática fue caracterizada y desacetilada químicamente para obtener quitosano que a su vez fue caracterizado.

En este trabajo se realiza el estudio de transferencia de momento y masa en ausencia de reacción en un biorreactor de partición de tres fases con el objetivo de utilizar esta información para realizar un escalamiento descendente basado en criterios de similitud geométrica y el método π de Buckingham. Primero, se estudia el biorreactor de 1L, se describe el comportamiento hidrodinámico y de transferencia de masa mediante el uso de dinámica de fluidos computacionales (CFD) para la generación de valores para los coeficientes globales de transferencia de oxígeno, los cuales van de 19 a 210 h-1, y los coeficientes globales de transferencia de sustrato y producto que están entre 207-2174 y 4-411 h-1, respectivamente. Estos coeficientes se encontraron en el mismo orden de magnitud que los reportados en estudios experimentales para el mismo sistema de biorreacción. Posteriormente se realiza un escalamiento descendente del biorreactor de 1 L a un biorreactor de 100 mL. El sistema de 100 mL fue construido utilizando criterios de similitud geométrica, y fue operado con condiciones de operación obtenidas por un criterio basado en similitud hidrodinámica utilizando una relación consumo de potencia con aire por unidad de volumen (P/V) constante, que utilizó el número de potencia Np y el número de aeración Na. Estos criterios de similitud hidrodinámica y P/V constante para el escalamiento se corroboraron realizando simulaciones de CDF utilizando COMSOL Multhiphysics 3.4a. El primer paso fue observar si ambos biorreactores (1L y 100 mL) manejaban velocidades locales similares, para así realizar un estudio de transferencia de masa de oxígeno de la fase gaseosa a la acuosa mediante la obtención del coeficiente de transferencia de oxígeno (kLa). Las simulaciones hidrodinámicas y de transferencia de masa fueron similares en ambos biorreactores. Así también, los valores obtenidos de kLa mediante CFD para los dos biorreactores se compararon con los obtenidos mediante experimentos por el método dinámico. Los valores de kLa fueron similares con las dos aproximaciones, lo cual sugiere que el escalamiento descendente mediante los criterios establecidos puede ser utilizado con confianza bajo condiciones de reacción en un estudio futuro.

Las quitina desacetilasas (CDA) juegan un papel importante en el desarrollo de la pared celular y las interacciones planta-patógeno. Su acción es hidrolizar los enlaces N- acetamida de la quitina y producer su derivado desacetilado (quitosano). A pesar de los reportes de purificación de CDAs de hongos como Mucor rouxii, Absidia coerulea y Colletotrichum lindemuthianum, no existe información sobre la producción de Colletotrichum gloeosporioides, Colletotrichum acutatum y Fusarium solani. Por lo tanto, el objetivo de este trabajo fue evaluar la producción de CDAs de C. gloeosporioides, C. acutatum y F. solani en cultivo liquido (CL) y cultivo sólido (CS). Por otra parte, tuvimos el interés de identificar molecularmente los genes CDA. Las cinéticas de actividad CDA en CL y CS (usando espuma de poliuretano (PUF) como soporte inerte) fueron llevadas a cabo utilizando un medio a base de ácido glutámico y glucosa. Las actividades CDA de los extractos crudos enzimáticos de C. gloeosporioides, C. acutatum y F. solani fueron determinadas espectrofotométricamente. Se realizó microscopia electrónica de barrido (SEM) con el fin de observar estructuras infectivas. La identificación molecular de los genes fue realizada por PCR usando oligonucleótidos diseñados en regiones consenso encontradas en genes CDA de C. lindemuthianum y Magnaporthe grisae reportados en Genebank. C. gloeosporioides mostro actividad CDA en ambos tipos de cultivos, pero la actividad CDA fue mayor en CL que en CS. C. acutatum y F. solani solo presentaron actividad cuando fueron cultivados en CS, pero estas actividades fueron menores a aquellas obtenidas con C. gloeosporioides en CL. La producción de CDAs con C. acutatum y C. gloeosporioides en CS no fue significativamente diferente (α≤0.05). La caracterización microscópica mostró macrosesporas de C. gloeosporioides, C. acutatum y F. solani con longitud y morfología típica. C. gloeosporioides y F. solani solo mostraron desarrollo de apresorios en CS; mientras que C. acutatum desarrolló apresorios tanto en CS como CL, se sabe que a la formación de apresorios es seguida la producción de CDAs en algunos hongos y son estructuras infectivas, lo cual podría explicar la falta de actividad CDA en F. solani; y en C. acutatum la falta de actividad CDA podría tratarse de un efecto de represión catabólica que se manifiesta de manera evidente en CL. Tanto C. acutatum como C. gloeosporioides fueron seleccionados para la identificación molecular de los genes CDA, la secuenciación de la banda B1 de C. acutatum mostro una máxima identidad del 84% y del 98% a un gen CDA de C. lindemuthianum usando las herramientas BLAST y TBLASTX, respectivamente, mientras que la banda B2 de C. gloeosporioides mostro un 75% de máxima identidad a un gen CDA de M. grisea (BLAST) y un 71% de máxima identidad a una polisacárido desacetilasa de C. graminícola (BLASTX).

La demanda de proteínas recombinantes terapéuticas (PRT) de consumo humano se ha convertido en una realidad comercial y ha aumentado dramáticamente durante los últimos años, salvando un número incontable de vidas gracias a la casi accesibilidad ilimitada de estas proteínas. Más de 80 proteínas recombinantes están aprobadas para consumo humano. Aunque mucho se ha avanzado, la producción de proteínas recombinantes constituye un campo que necesita ser mucho más estudiado, más aún cuando los precios de muchos de estos medicamentos son altos y de difícil acceso en países en vías de desarrollo, por ello, uno de los mayores objetivos de la industria es maximizar la productividad, es decir, obtener altas concentraciones de producto en un menor tiempo y las altas concentraciones celulares (biomasa) son un prerrequisito para obtener una alta productividad de proteínas recombinantes. Debido a lo anterior, en el presente trabajo se propone el cultivo en medio sólido (CMS) como alternativa gracias a las ventajas que ofrece en comparación con el cultivo sumergido (CS) en la producción de biomasa y enzimas. Considerando que para la producción de biomasa en condiciones de cultivo en medio sólido es necesario favorecer la transferencia de O2, se decidió evaluar el uso de capas finas de poliuretano (EPU) como soporte para el crecimiento de Pichia pastoris. Además, se evaluó la concentración inicial de glucosa (50 a 150 g/L) sobre la producción de biomasa de P. pastoris. Estos experimentos demostraron que el rendimiento Yx/s (g/g) disminuye al aumentar la concentración de glucosa obteniéndose un Yx/s de 0.45 para una S0 = 50 g/L, valor muy cercano al teórico 0.5, lo cual demuestra que este sistema esta bien aireado, pero para S0 = 150 g/L se obtuvo un Yx/s de 0.28. El análisis del cambio del coeficiente respiratorio (CR), en función de diferentes concentraciones iniciales de glucosa y diferentes espesores de EPU, permitió determinar que con una concentración inicial de glucosa de 50 g/L y un espesor de 0.7 cm, el metabolismo respiratorio de la glucosa fue completo (CR > 0.9) y que el descenso del CR es debido al agotamiento de la glucosa. A concentraciones de glucosa superiores a 50 g/L y espesores de EPU de 0.3 y 0.5 cm el valor de CR fue menor a 0.9, de lo cual podemos asumir que al aumentar la concentración de glucosa o disminuir el espesor de la placa de EPU, no se realiza el metabolismo completo de la glucosa y se obtienen diferentes productos como ácidos orgánicos. Las conclusiones de este trabajo se pueden resumir en que el modelo de estudio propuesto para la producción de biomasa de Pichia pastoris a partir de glucosa como fuente de carbono y energía en un medio de cultivo impregnado en espuma de poliuretano bajo condiciones de cultivo en medio sólido, permitió demostrar que la producción de levaduras en placas de EPU con un espesor h = 0.7 cm y S0 = 50 g/L, es un sistema más simple que el cultivo sumergido, aireado y agitado por lote simple y produce rendimientos y concentraciones celulares similares (20 g/L). Incluso que si se permite un metabolismo mixto (aerobio y fermentativo) se puede alcanzar con S0 = 150 g/L, la concentración celular de 40 g/L, valor que ya calificaría en el límite inferior de los cultivos densos. Los cuales llegan a tener hasta más de 100 g/L de levaduras en cultivos sumergidos y controlados en forma de lote alimentado. Tambien se obtuvo que los efectos de grosor de las placas de EPU sobre el crecimiento de Pichia pastoris no son tan importantes como el efecto de la concentración inicial de glucosa. A nuestro conocimiento, éste es el primer trabajo en el que se evalúa el crecimiento de Pichia pastoris utilizando glucosa como fuente de carbono en cultivo en medio solido con EPU, lo cual es muy importante para la producción a nivel industrial de proteínas recombinantes con esta levadura.

Instituto de Investigaciones Agropecuarias y Forestales. Facultad de Biología. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Facultad de Agrobiología. Facultad de Químico Farmacobiología. Programa Institucional de Maestría en Ciencias Biológicas Red raspberry (Rubus idaeus L.) is a widespread berry round world, appreciated for its flavour and their benefits to human health by their high contents in bioactive compounds. Nevertheless, in Mexico, raspberry production means a major challenge, because of the scarce of local varieties, adapted to typical climate conditions. Therefore, anther culture is a strategy proposed to achieve such an objective: to develop a Mexico’s cultivar. Anther culture is widely used worldwide as one of the most advantageous techniques to reach homozygous plants in relatively short term, because abbreviation of breeding cycles is possible. For this purpose, anthers extracted from raspberry floral buds, were cold pre-treated (4 °C for 7 days) and then placed on two different induction culture media (Gamborg and Nitsch & Nitsch), supplemented with plant growth regulators (2,4-D and NAA) at several doses. After 8 weeks of cultivation, in completely dark conditions at 24 °C and 16 h of photoperiod, the effect of culture media and genotype was evaluated. It is shown in experiments that survival, oxidation and callus formation rates, varied from medium to medium and from genotype to genotype. Callus induction was observed only in two genotypes: Joan J and V-74, respectively 3.3 % and 2.7 % of callogenesis rates; but Gamborg induction medium had better performance than Nitsch & Nitsch medium: Gamborg reach a percentage of 89% of survival rate while Nitsch & Nitsch a percentage of 8.50 %. The best PGR combination, was achieved when Gamborg induction medium was supplemented with 0.4 mg L-1 of 2,4-D and 0.4 mg L-1 of NAA. Therefore, apparently genotype seems to be the most important factor affecting raspberry anther culture. In order to determine cell viability in raspberry calli, Evan’s Blue assay was performed. La frambuesa (Rubus idaeus L.) es una frutilla ampliamente distribuida y apreciada alrededor del mundo. Recientemente, su consumo ha ido en aumento debido a los beneficios que a la salud humana atrae por su alto contenido en compuestos bioactivos. Sin embargo, la producción en México, ha significado un reto ya que se cuenta con pocos cultivares propios adaptados a las condiciones climáticas locales. Por tal razón, el cultivo de anteras se ha propuesto como una alternativa en la obtención de variedades nacionales, ya que permite desarrollar plantas homocigóticas en poco tiempo. Para ello, anteras de frambuesa de dos genotipos comerciales (AD-1 y Joan J) y dos genotipos obtenidos en la Facultad de Agrobiología “Presidente Juárez” (UMC-702 y V-74), pretratadas en frío (4 °C) durante una semana, fueron sembradas in vitro en dos medios de cultivo (Gamborg y NN), suplementados con reguladores del crecimiento vegetal (2,4-D y ANA) para inducir androgénesis y mantenidos en condiciones de oscuridad a temperatura ambiente y fotoperiodo de 16/8 horas luz/oscuridad. Los resultados muestran que la sobrevivencia, oxidación y formación de callo fueron influenciados por el medio de cultivo y el genotipo. En el medio de cultivo Gamborg se observó un índice de sobrevivencia de hasta un 85 %, mientras que en el medio Nitsch & Nitsch un índice de solo un 8.05 %. Respecto a la formación de callo, sólo los genotipos Joan J y V-74 mostraron inducción androgénica, con una tasa de eficiencia de 3.3 % y 2.7 % respectivamente. La dosis de reguladores requeridos para conseguir la formación de callo se logró al combinar 0.4 mg L-1 de 2,4-D con 0.4 mg L-1 de ANA, en el medio Gamborg. Además, mediante tinción celular con Azul de Evan, se demostró que los callos obtenidos de anteras de frambuesa son viables.

Facultad de Ciencias Agropecuarias. Maestría Interinstitucional en Agricultura Protegida The tomato is the most important vegetable in the world and the one with the highest economic value. Its demand increases continuously and with it its cultivation, production and trade. In the region of Apatzingán, Michoacán, only tomatoes are produced under the open sky, there is no information on studies of this crop under shade mesh conditions, nor on the effect of bottom fertilization and the application of silicon. That is why, during the months of December 2019-April 2020, at the Michoacana University of San Nicolás de Hidalgo, in the Faculty of Agricultural Sciences, this work was carried out, with the aim of evaluating the response of tomato varieties (Solanum lycopersicum L.) with bottom fertilization and silicon application on fruit production under shade mesh conditions. The experiment was carried out in a shade house, covered with 50% shade mesh, with the roof and sides with anti-aphid mesh of 25 * 40 threads per square inch. The indeterminate variety Patricia and the determined variety Gabriela were grown. The sowing was carried out in styrofoam trays of 200 cavities with peat moss, to later transplant them at 29 days. The bottom fertilization used was 113 kg ha-1 of N, 50 kg ha-1 of P and 110 kg ha-1 of K. The experiment consisted of 8 treatments that resulted from the combination of two levels of silicon (with and without), two genotypes (Gabriela determined genotype and Patricia indeterminate genotype) and background fertilization (with and without). El jitomate es la hortaliza de mayor importancia en todo el mundo y la de mayor valor económico. Su demanda aumenta continuamente y con ella su cultivo, producción y comercio. En la región de Apatzingán, Michoacán solo se produce jitomate a cielo abierto, no se cuenta con información de estudios de este cultivo bajo condiciones de malla sombra, ni del efecto de la fertilización de fondo y la aplicación del silicio. Es por ello, que durante los meses de diciembre 2019-abril 2020, en la Universidad Michoacana de San Nicolás de Hidalgo, en la Facultad de Ciencias Agropecuarias, se realizó el presente trabajo, con el objetivo de evaluar la respuesta de variedades de jitomate (Solanum lycopersicum L.) con fertilización de fondo y aplicación de silicio sobre la producción de fruto bajo condiciones de malla sombra. El experimento se realizó en una casa sombra, cubierta con malla sombra al 50%, con el techo y laterales con malla antiafidos de 25*40 hilos por pulgada cuadrada. Se cultivó la variedad indeterminada Patricia y la variedad determinada Gabriela. La siembra se realizó en charolas de unicel de 200 cavidades con peat moss, para posteriormente trasplantarlas a los 29 días. La fertilización de fondo empleada fue de 113 kg ha-1 de N, 50 kg ha-1 de P y 110 kg ha-1 de K. El experimento consistió en 8 tratamientos que resultaron de la combinación de dos niveles de silicio (con y sin), dos genotipos (genotipo determinado Gabriela y genotipo indeterminado patricia) y fertilización de fondo (con y sin).

Instituto de Investigaciones Químico Biológicas. Maestría en Ciencias en Biología Experimental Diabetes mellitus (DM) is a metabolic disorder of multiple etiology, the main characteristic is that occurs with chronic hyperglycemia, due to insulin deficiency or resistance, or a combination of both, leading to alterations in carbohydrates, lipids and proteins metabolism. With the development over several years, DM causes different complications that affect practically all tissues and organs. One of the organs most affected by the complications of DM is the brain because DM is closely related to an increase in the production of reactive oxygen species (ROS), an imbalance of the cellular antioxidant defense system and mitochondrial dysfunction. It has been reported that the brain is highly susceptible to oxidative stress. With the course of the disease, all the factors mentioned above play a fundamental role in developing various complications at the brain level, such as the development of Alzheimer's, cognitive decline, alterations in neurotransmission, neuroinflammation, apoptosis, and necrosis, among others. On the other hand, traditional medicine has emerged as an alternative in the treatment of various diseases, including DM; one of the plants used in traditional medicine to treat diabetes is Eryngium carlinae, which has already been experimentally shown to have hypoglycemic, antioxidant and hypolipidemic properties, which makes it very promising to be used as an antidiabetic treatment. Moreover, new strategies have been sought to ensure a rapid and effective administration of drugs in recent years. One of these strategies is using green synthetic nanoparticles, which combine the use of plant extracts with metallic nanoparticles that ensure a more significant biological effect. The objective of this work was to compare the effect of the extract and its combination with silver nanoparticles (AgNP) on glucose levels and mitochondrial function. La diabetes mellitus (DM) es un desorden metabólico de etiología múltiple, cuya principal característica es hiperglucemia crónica, debida a la deficiencia o resistencia a la insulina, o una combinación de ambas y que conduce a alteraciones en el metabolismo de carbohidratos, lípidos y proteínas. A largo plazo, la DM produce diferentes complicaciones que afectan prácticamente todos los tejidos y órganos. Uno de los órganos más afectado por las complicaciones de la DM es el cerebro, debido a que la DM está estrechamente relacionada con un incremento en la producción de especies reactivas de oxígeno (ERO), un desbalance de los sistemas antioxidantes y la disfunción mitocondrial. Se ha reportado que el cerebro es altamente susceptible al estrés oxidativo, y con el transcurso de la enfermedad, todos los factores anteriormente mencionados juegan un papel fundamental en el desarrollo de diversas complicaciones a nivel cerebral, como desarrollo de Alzheimer, decline cognitivo, alteraciones en la neurotransmisión, neuroinflamación, apoptosis, necrosis, entre otras. Por otro lado, la medicina tradicional ha surgido como una alternativa en el tratamiento de diversas enfermedades, entre ellas la DM; una de las plantas usadas en la medicina tradicional para tratar la diabetes es Eryngium carlinae, la cual ya ha demostrado experimentalmente tener propiedades hipoglucémicas, antioxidantes e hipolipidémicas, que la hacen muy prometedora para ser usada como un tratamiento antidiabético. Por otro lado, en años recientes se han buscado nuevas estrategias para asegurar una rápida y eficaz administración de fármacos, una de estas estrategias es el uso de nanopartículas de síntesis verde, que combinan el uso de extractos vegetales con nanopartículas metálicas que aseguren un mayor efecto biológico. El objetivo de este trabajo fue comparar el efecto del extracto de Eryngium carlinae y su combinación con nanopartículas de plata (AgNP) en los niveles de glucosa, y la función mitocondrial.

Instituto de Investigaciones Químico Biológicas. Maestría en Ciencias Químicas To face the obstacles related to fossil fuel depreciation and clean energy needs, explorations about new alternatives in photovoltaic technology have been boarded recently. Thus, a wide variety of solar cells from different materials are currently available. Solar cells are classified into first, second and third generation according to material nature used for photoactive layer synthesis, being the latter dye-sensitized solar cells. In the present work, third generation cells were synthesized using TiO2 and maturine acetate (1) and its derivatives 2-5 as sensitizing agents. Compound 1 was extracted from Psacalium peltatum whose chemical derivatization provided the respective semicarbazone 2 and thiosemicarbazone 3 derivatives. Further chemical reactions using Pd(II) as metal source and compounds 2 and 3 as ligands yielded the coordination complexes 4 and 5, respectively. This type of compounds highlights in solar cell research due to sustainable and ecofriendly advantages. This is the first study about the usability of 1 and its derivatives 2-5 in third generation solar cells. The chemical and morphological characterizations of all compounds were carried out by physical and spectroscopic data, including NMR, IR, UV / Vis, MS and SEM. Sensitizing properties of synthesized photovoltaic cells were also determined, where efficiency was increased in two magnitude order when thiosemicarbazone 3 was used as the sensitizing agent, with respect to TiO2 cells. Frente a la rápida depreciación de los recursos de combustibles fósiles y la creciente demanda de energía limpia, el ser humano se ha dedicado a explorar nuevas alternativas en la tecnología fotovoltaica. Actualmente, existe una amplia variedad de celdas solares, que utilizan diferentes tipos de materiales. Con base en el tipo de material utilizado en la capa fotoactiva, las celdas solares se clasifican en primera, segunda y tercera generación, en esta última se encuentran las celdas solares de TiO2 sensibilizadas con tintes. En el presente trabajo, se sintetizaron celdas de tercera generación empleando acetato de maturina (1) y sus derivados 2-5 como agentes sensibilizantes. El compuesto 1 fue extraído de Psacalium peltatum, cuya derivatización química permitió la obtención de las respectivas semicarbazona 2 y tiosemicarbazona 3. Posteriores reacciones de derivatización empleando Pd(II) como fuente metálica y los compuestos 2 y 3 como ligantes permitieron la obtención de los respectivos complejos de coordinación 4 y 5. Este tipo de compuestos son importantes en celdas solares por ser sustentables y amigables con el medio ambiente, y no existen reportes de su aplicación en celdas solares. La caracterización química y morfológica de estos derivados se llevó a cabo mediante técnicas físicas y espectroscópicas, e incluyeron RMN, IR, UV/Vis, EM y MEB. También fue posible determinar las propiedades sensibilizadoras de las celdas fotovoltaicas generadas, donde se alcanzó un incremento en dos órdenes de magnitud empleando a la tiosemicarbazona 3 como agente sensibilizante, con respecto a TiO2.

Instituto de Investigaciones Químico Biológicas. Maestría en Ciencias en Biología Experimental Diabetes mellitus is a metabolic disorder characterized by a state of hyperglycemia, which contributes to the maintenance of an oxidizing environment. One of the complications derived from diabetes that has been overlooked is non-alcoholic fatty liver disease, since it has been reported that under hyperglycemic conditions the liver is one of the main organs that is subject to dysfunction and cell death due to oxidative stress and inflammation. Therefore, oxidative stress and inflammation can be considered therapeutic targets for the treatment of diabetes. The present study was carried out in order to determine the antioxidant and anti-inflammatory effect of the secondary metabolites present in the ethyl acetate extract of Eryngium carlinae inflorescences on streptozotocin-induced diabetic rats. In vitro assays were carried out to know the potential of the extract using DPPH• assay to measure anti-radical activity and reducing power to measure reducing capacity. In addition, the group of the major secondary metabolites present in the extract responsible for the antioxidant activity was determined. Once the in vitro activity was verified, in vivo studies were carried out using 32 male Wistar rats around 300 g, which were randomly divided into 4 experimental groups: diabetic and normoglycemic control; and diabetic and normoglycemic + E. carlinae. The induction of diabetes was carried out by a single intraperitoneal injection of STZ (45 mg / kg). Rats with blood glucose levels >250 mg/dL were selected to be part of the diabetic groups. La diabetes mellitus es un desorden metabólico que se caracteriza por un estado de hiperglucemia, la cual contribuye al mantenimiento de un ambiente oxidante. Una de las complicaciones derivadas de la diabetes que ha sido pasada por alto es la enfermedad de hígado graso no alcohólica, ya que se ha reportado que bajo condiciones de hiperglucemia el hígado es uno de los principales órganos que está sujeto a la disfunción y muerte celular mediante el efecto del estrés oxidante y el estado de inflamación. Por lo que el estrés oxidante y la inflamación pueden considerarse blancos terapéuticos para el tratamiento de la diabetes. El presente estudio se llevó a cabo con el fin de determinar el efecto antioxidante y antiinflamatorio de los metabolitos secundarios presentes en el extracto de acetato de etilo de inflorescencias de Eryngium carlinae en un modelo de ratas con diabetes experimental inducida con estreptozotocina. Para ello, se realizaron pruebas in vitro para conocer el potencial del extracto empleando los ensayos DPPH• para medir la actividad antiradical y poder reductor para la cuantificación de la capacidad reductora. Asimismo, se determinó el grupo de metabolitos secundarios mayoritarios presentes en el extracto responsables del efecto antioxidante. Una vez que se comprobó la actividad in vitro se realizaron estudios in vivo utilizando 32 ratas macho Wistar de un peso promedio de 300 g, las cuales se dividieron de forma aleatoria en 4 grupos experimentales: diabético y normoglucémico control; y diabético y normoglucémico + E. carlinae. La inducción de diabetes se realizó mediante una única inyección intraperitoneal de STZ (45 mg/kg). Las ratas que presentaron niveles de glucemia >250 mg/dL se seleccionaron para formar parte de los grupos diabéticos.

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La tirosinasa es la enzima clave de la melanogénesis en la cual el producto final es la melanina. La melanina es la responsable de proteger la piel contra el daño inducido por luz ultravioleta, pero el exceso de producción de melanina está relacionado con trastornos dermatológicos tales como la hiperpigmenación post-inflamatoria y melasma. Por ello en la industria cosmética se han buscado inhibidores de tirosinasa para dar tratamiento a estos padecimientos de la piel, pero muchos de ellos no han mostrado ser eficientes. La Hidroquinona (HQ) es uno de los inhibidores sintéticos más eficientes, sin embargo se ha visto que la actividad inhibitoria de tirosinasa se debe a la destrucción de los melanocitos, por lo que es considerada como citotóxica y su uso es muy limitado, solo para tratamientos de melasma. En al caso de inhibidores de fuentes naturales se ha encontrado que son poco estables con la formulación y/o tienen poca penetración en la piel por lo que sus efectos son muy lentos. Estudios previos han mostrado que el uso de extractos de plantas (hoja, tallo y fruto) tienen actividad inhibitoria de tirosinasa la cual se ha relacionado con la presencia de polifenoles. La actividad inhibitoria también ha sido relacionada con la capacidad quelante del ion Cu²⁺ (CuCA), ya que la tirosinasa tiene en su sitio activo este metal que favorece la oxidación de su sustrato (L-tirosina) y así desencadenar la serie de reacciones que forman la melanina. Por ello el objetivo de este estudio es probar diferentes extractos de fuentes naturales como potenciales inhibidores de tirosinasa y evaluar su capacidad quelante de Cu²⁺, tales como las proteínas e hidrolizados del grano de amaranto (Amaranthus hypochondriacus), hidrolizados del material lignocelulósico del tallo de amaranto y extractos de las diferentes plantas de muérdago Cladocolea loniceroides. Los cuales han mostrado tener gran cantidad de polifenoles. Para ello fueron aisladas la albúmina 1, globulina y glutelinas del grano del amaranto, posteriormente fueron liofilizadas e hidrolizadas con alcalasa (E/S = 0.8 UA/g proteína; pH 7.4; T = 50°C) a diferentes tiempos (3, 21, 30, 36 y 48 h). Para conocer el avance de la reacción se midió el grado de hidrolisis con la reacción de TNBS la cual se fundamenta con la cuantificación de los grupos amino libres. La actividad de la tirosinasa fue medida utilizando L-tirosina (1 mg/ml), tirosinasa de champiñón (Sigma-Aldrich T3824-50KU) 96 U/ml y las muestras en DMSO al 5%. La reacción fue monitoreada por la formación de dopacromo (cromóforo estable que absorbe a λ=475 nm), cada minuto durante un periodo de 10 mín. La albúmina 1, globulina y glutelina no fueron utilizadas como sustrato por la tirosinasa, resultados similares fueron encontrados en caseína y ovoalbúmina, por lo que se esperaría que fueran potenciales inhibidores de la enzima. Sin embargo todas estas proteínas no tienen actividad inhbitoria de tirosinasa, por el contrario mejoran su actividad. Todos los hidrolizados de las proteínas del amaranto, caseína y ovoalbúmia también incrementaron la actividad. Todos los hidrolizados de las proteínas del amaranto fueron separados por filtración en gel (Sephadez G-15) de los cuales solo rindieron una fracción de 0.8 kDa obtenida de albúmina 1, la cual pudo inhibir la actividad en 25±2.29 %. Esta propiedad fue explicada por la baja capacidad quelante de Cu²⁺ la cual no fue suficiente para inhibir la actividad de la tirosinasa. La actividad inhibitoria de tirosinasa de la fracción de 0.8kDa no fue dependiente de la concentración (0.027 – 0.16 mg/ml). En el caso de los hidrolizados del material lignocelulósico del tallo de amaranto, no se mostró efecto de inhibición ni de activación, sin embargo dichos hidrolizados presentan capacidad quelante de Cu²⁺, lo cual podría indicar que la CuCA no necesariamente está relacionada con la actividad inhibitoria de tirosinasa. En el estudio con la planta de muérdago Cladocolea loniceroides (Frutos verdes y maduros, hoja y tallo) utilizando diferentes solventes (agua, etanol, metanol, acetato de etilo, cloroformo y hexano), para la obtención de extractos, se logró obtener la mayor cantidad de polifenoles con agua, etanol y metanol. Siendo en estos mismos solventes en donde se presentó la mayor actividad inhibitoria de tirosinasa Etanol - Fruto Verde (75.26±0.25 %), Agua - Fruto Maduro (76.14±0.57 %), Metanol -Tallo (90.49±1.96 %). Confirmando que la actividad inhibitoria de tirosinasa podría estar muy relacionada con la presencia de compuestos polifenólicos. Todos los extractos presentan buena capacidad quelante de Cu²⁺, sin embargo al realizar el ensayo de la cinética al extracto acuoso de muérdago que fue el que presentó el menor valor de IC ₅₀ (0.34 mgeq.Ác. Gálico/ml), se encontró que presenta inhibición no competitiva. Por lo que los extractos no compiten con el sustrato por el sitio activo, uniéndose a otro sitio de la enzima. Posiblemente no puedan entrar al sitio activo por impedimento estérico, como ocurrió en el caso de los hidrolizados de las proteínas del grano de amaranto, ya que los hidrolizados no lograron inhibir la actividad de la tirosinasa pero al fraccionar los hidrolizados se obtuvieron péptidos de menor tamaño que lograron inhibir la actividad en 25±2.29 %.

Se evaluó la actividad fijadora de hierro, fijadora de calcio y antitrombótica de leche fermentada con Lactobacillus casei Shirota bajo diferentes condiciones de fermentación. Las fermentaciones se llevaron a cabo aplicando una combinación de pH, temperatura y tiempo de fermentación de acuerdo a un diseño factorial 3x3x2. Las combinaciones de las condiciones de fermentación que condujeron a una mayor fijación de hierro (α=0.05) fueron: a las 12 horas de fermentación, pH 6.0/42 ºC, pH 6.25/42 ºC, pH 6.0/39.5 ºC y a las 20 horas de fermentación, pH 6.5/42 ºC; con valores de actividad de entre 2.35•10-4 y 4.62•10-4 mmol de hierro fijado/mg de proteína. En tres de estas cuatro combinaciones destacó la temperatura de 42 ºC, reportada como óptima para la actividad de la proteinasa de pared celular de Lb. casei. La máxima actividad antitrombótica (α=0.05) se encontró con las siguientes combinaciones: a las 12 horas de fermentación, las combinaciones pH 6.0/39.5 ºC, pH 6.25/37 ºC, pH 6.5/37 ºC, y a las 20 horas de fermentación, las combinaciones pH 6.25/37 ºC y pH 6.5/42 ºC; con porcentajes de inhibición de entre 67.6 y 134.0% de inhibición de coágulo/mg de proteína respectivamente. Se observó la influencia de la temperatura como factor independiente, con un máximo de actividad antitrombótica a 39.5 °C, únicamente cuando el pH fue de 6.0, tanto a 12 como a 20 horas de fermentación. No se encontró influencia (α=0.05) sobre la actividad fijadora de calcio con ninguno de los tratamientos estudiados.

Bajo las condiciones probadas no se comprobó la participación de las peroxidasas tipo DyP en la decoloración del azul ácido 74, lo cual se demostró aplicando el extracto obtenido del M4 en la decoloración del efluente. También se probó la decoloración del colorante utilizando un producto comercial con actividad lacasa (Biolite®), en este caso la decoloración fue de 98% en 1.3 h. El análisis por RMN 1H del efluente decolorado con el extracto obtenido del M2 o con la lacasa comercial reveló la presencia de ácido isatín-5-sulfónico (AIS) como principal producto de la degradación enzimática del colorante. Los efluentes decolorados con el ECE de Fomes sp. EUM1 (M2) y con el producto comercial Biolite® fueron sometidos a un tratamiento anaerobio para complementar el proceso de degradación. El efluente decolorado con Biolite® fue tratado en un reactor en continuo de tipo UASB (carga orgánica volumétrica: 1 kg DQO m⁻³ d⁻¹ ). El sistema presentó una eficiencia de remoción de la DQO del 77 % con una tasa de degradación de 0.77 kg m-3 d⁻¹ . Bajo estas condiciones la producción de metano fue de 233.4 l CH₄ m⁻³ d⁻¹ con un rendimiento de 303.3 l CH₄ kg-1 DQO removido. Al final de la operación del reactor, se realizó un análisis por DGGE de las poblaciones de bacterias y arqueas en el lodo inoculado durante la puesta en marcha del UASB y del lodo aclimatado obtenido a los 412 días de operación. Los perfiles de bandas en los geles de DGGE reflejaron las poblaciones dominantes en cada muestra. Al comparar los perfiles entre el lodo inoculado y el lodo aclimatado, se hizo evidente la desaparición de varias bandas y la aparición de bandas nuevas tanto en el análisis de arqueas como en el de bacterias. Este fenómeno sugiere que el efluente decolorado ejerció una presión de selección sobre las poblaciones del lodo inoculado, alterando su dinámica poblacional. De esta manera, la modificación de las poblaciones pudo favorecer la aclimatación de los microorganismos y por tanto aumentar su eficiencia para degradar el efluente. Para comprobar si el tratamiento anaerobio también era eficiente para degradar el efluente decolorado con el ECE de Fomes sp. EUM1, el efluente decolorado con dicho extracto fue sometido a un tratamiento anaerobio en lote utilizando como inóculo el lodo obtenido al final de la operación del reactor UASB. La contaminación del agua es uno de los mayores problemas del mundo contemporáneo. En los últimos años el deterioro de los recursos hídricos se ha intensificado debido a la liberación de compuestos xenobióticos provenientes principalmente de las actividades industriales; en donde la industria textil y sus efluentes residuales juegan un papel fundamental. En búsqueda de alternativas para el tratamiento de los efluentes textiles se ha dirigido la atención al aprovechamiento de las capacidades degradativas de las oxidasas fúngicas y su aplicación en la degradación de colorantes textiles. Sin embargo, aunque se conocen ampliamente los factores que afectan los procesos de decoloración enzimática, es claro que estas enzimas no catalizan la mineralización de estos compuestos, sino solo su bio-transformación en moléculas incoloras o menos coloreadas que pueden permanecer en solución. Además, poco se sabe sobre la identidad de los intermediarios producidos por la acción enzimática, la toxicidad de éstos y la estrategia idónea para lograr su eliminación. Por lo tanto, en este trabajo se propuso la utilización de un sistema secuencial enzimas oxidativas – digestión anaerobia para estudiar la degradación de un efluente simulado de la industria textil contaminado con el colorante azul ácido 74. La producción de enzimas oxidativas (lacasas y peroxidasas) se realizó mediante el cultivo en medio sólido del hongo ligninolítico Fomes sp. EUM1 utilizando cuatro medios de cultivo distintos (M1: Rastrojo de maíz; M2: Rastrojo de maíz con salvado de trigo (80:20 p/p); M3: Rastrojo de maíz con glucosa y extracto de levadura y M4: Rastrojo de maíz, salvado de trigo, glucosa y extracto de levadura. La máxima producción de lacasas se observó a los 6 días en el M2 (3.9 UI gss⁻¹ ) y la de peroxidasas tipo DyP también a los 6 días, pero en el M4 (107 mU gss⁻¹ ). Los resultados sugirieron que la producción de estas dos enzimas se encuentra regulada por mecanismos distintos. Los extractos enzimáticos (ECE) obtenidos del M2 (mejor medio para la producción de lacasas) y del M4 (mejor medio para la producción de peroxidasas tipo DyP), se aplicaron en la decoloración del efluente simulado. El ECE obtenido del M2 consiguió una decoloración del 98% en 5 h, la tasa inicial de decoloración fue de 27.1 mg l⁻¹ h⁻¹ . El sistema presentó una eficiencia para remover la DQO inicial del 86 ± 1.5 % a los 8 días utilizando concentraciones crecientes de DQO inicial (300, 650 y 1000 mg l⁻¹ ). El porcentaje de metano registrado fue de 78.2, 75 y 72.5 % al trabajar con una DQO inicial de 300, 650 y 1000 mg l⁻¹ , respectivamente. Estos datos indicaron que no se presentó inhibición metabólica de la biomasa al tratar el efluente decolorado con el ECE de Fomes sp. EUM1. Con el objetivo de determinar si el ácido isatín-5-sulfónico, (identificado como producto de la oxidación del azul ácido 74), podía ser degradado por el lodo obtenido del reactor UASB, se realizaron pruebas específicas de degradación en lote utilizando este compuesto como única fuente de carbono y energía. Al trabajar con una concentración de ácido isatín-5-sulfónico de 20 mg l⁻¹ , la eficiencia de remoción del compuesto fue superior al 85 % a los 10 días. La eficiencia de eliminación de la DQO fue de 71.5 ± 10.6% con producción de metano como evidencia de mineralización; el porcentaje de metano en el biogás fue de 68 ± 11 %. Por otra parte, a concentraciones de 50 y 100 mg l⁻¹ , las eficiencias de remoción fueron de 57.7 ± 1.9 y 35.5 ± 11.3 %, respectivamente, con una proporción de CO₂ en el biogás superior al 90 %. Lo que sugiere que el aumento en la concentración inicial del ácido isatín-5-sulfónico ocasionó una inhibición en el metabolismo de la biomasa. Finalmente, se evaluó el potencial eco-toxicológico del efluente simulado a su paso por el tratamiento secuencial. Los ensayos se realizaron por tres métodos utilizando los siguientes organismos de prueba: Saccharomyces cerevisiae, Sorghum vulgare y Daphnia magna. Los tres ensayos revelaron que la decoloración enzimática con la lacasa comercial Biolite® no disminuye la toxicidad del efluente sino que la aumenta. Para comprobar si este fenómeno se debía a la formación del AIS o a la toxicidad inherente al producto comercial, se estudió específicamente la toxicidad del compuesto y del producto Biolite® por separado. Los ensayos se realizaron utilizando a Daphnia magna como organismo de prueba. El AIS en un intervalo de concentraciones entre 0 y 1 g l⁻¹ no exhibió efectos tóxicos, mientras que el producto comercial mostró los mismos efectos tóxicos que el efluente decolorado. Debido a que se ha reportado la presencia de mediadores redox (frecuentemente tóxicos) en preparaciones comerciales de este tipo, es probable que la toxicidad del efluente decolorado se encuentre asociada con ello. No obstante, cabe resaltar que el tratamiento anaerobio del efluente simulado permitió disminuir su toxicidad en un 50 %.

El fruto senescente presentó la mayor concentración de proteína total, sin embargo, esta concentración es baja comparada con otras fuentes vegetales similares. Se realizó electroforesis de la extracción de proteína total y de las albúminas obtenidas por ambos métodos. En los tres estados de madurez y bajo cualquier condición de extracción se presentaron grupos de proteínas (bandas) con perfiles electroforéticos semejantes, lo que sugiere que por cualquier método de extracción se obtuvieron las mismas proteínas. Más adelante, se evaluó la actividad proteolítica de los extractos con la finalidad de conocer si la baja concentración de proteína se debe a una reacción de proteólisis durante el almacenamiento del fruto, sin embargo, se encontró que esta reacción no pudo haber ocurrido bajo las condiciones de refrigeración mantenidas previas al estudio de los frutos. Por último, se aplicaron tratamientos sobre cultivos de 2 líneas celulares de cáncer de mama (MCF7 y MDA-MB-231) y una línea no cancerosa (MCF10A) a diferentes concentraciones de extracto acuoso de fruto rojo para determinar el efecto que éste presenta sobre la muerte celular, utilizando la concentración letal al 50% (CL50). La línea más resistente fue MCF10A (no cancerosa), ya que mostró una mayor CL50 (59.64 µg EAG/mL) mientras que la línea MCF7 fue la más sensible (CL50 = 26.4 µg EAG/mL). Se demostró que el extracto acuoso del fruto de C. loniceroides, que contiene polifenoles, flavonoides, taninos y alcaloides, es capaz de disminuir la viabilidad in vitro de las líneas celulares de cáncer de mama estudiadas, con menor efecto sobre la línea celular no cancerosa, por lo que se recomiendan estudios posteriores para identificar mecanismos de acción y de purificación del extracto que permitan la obtención de una solución estandarizada que pueda usarse en el tratamiento del cáncer de mama humano. El muérdago es una planta parásita que absorbe del hospedero agua y sales a través de haustorios hasta causarle la muerte. No hay un control químico para evitar la propagación de la plaga de muérdago, por lo que solo se podan las ramas o árboles infestados. Sin embargo, se ha demostrado en trabajos previos que la especie Cladocolea (C.) loniceroides, endémica de México, contiene compuestos antioxidantes que pueden presentar efectos benéficos contra el cáncer de mama, posiblemente a través de mecanismos que regulan el estrés oxidativo. El objetivo de este trabajo fue analizar la composición química del fruto de C. loniceroides en diferentes estados de madurez, así como evaluar el efecto que presenta el extracto acuoso de fruto sobre la muerte de cultivos celulares de cáncer de mama. Para lograr esto, se separó el fruto en sus tres estados de madurez en verde, rojo y senescente y se realizaron extractos acuosos para cuantificar los principales compuestos. Con una marcha fitoquímica se detectó la presencia de polifenoles, flavonoides, leucoantocianidinas, hidroxilos fenólicos, alcaloides, aminoácidos y taninos en los tres estados de madurez. Posteriormente, se determinó la concentración de polifenoles totales, misma que es mayor conforme madura el fruto, alcanzando una concentración máxima en el fruto rojo, lo que se refleja también en la mayor concentración de flavonoides observada en el mismo. En el fruto verde se encontró una mayor concentración de taninos que desciende conforme éste madura siendo fruto verde>rojo>senescente. La concentración de alcaloides fue significativamente mayor en el senescente. Se realizó la hidrólisis de taninos de los extractos acuosos en sus tres estados de madurez donde el fruto verde presentó la concentración mayor. Posteriormente se compararon tres métodos distintos de extracción de proteína, donde la fracción proteínica que se aisló en mayor concentración fueron las albúminas.

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Existe la idea de que los microorganismos son fisiológicamente monofuncionales. Se asume que los consorcios operan bajo el mismo criterio, de ser monofuncionales, razón por la cual el arranque de los reactores para tratamiento de las aguas residuales toma mucho tiempo, hasta que se haya aclimatado la microflora responsable del proceso de interés. Desde hace décadas se tienen datos de que las condiciones ambientales son de mayor importancia para el control de los procesos microbiológicos que la presencia de las cepas conocidas como específicas. Este trabajo tiene como propósito presentar evidencias que muestran que el metabolismo de cepas aisladas puede cambiar de acuerdo con la composición del medio de cultivo como variable independiente. Esto es, obtener evidencias de la flexibilidad metabólica de los microorganismos, tanto de consorcios (lodos para el tratamiento de aguas residuales) como de cultivos axénicos. Se puso en régimen estacionario un reactor continuo de tanque agitado (RCTA) bajo condiciones desnitrificantes inoculado con lodo metanogénico de una planta industrial. El lodo producido se utilizó para realizar aislamientos de algunas cepas, con base en la morfología celular y de Gram. Fueron propagadas en un medio de cultivo con características cualitativamente similares al medio desnitrificante en el RCTA, pero cuantitativamente diferentes, con una relación C/N de 7. Al lodo desnitrificante producido en el RCTA se le inoculó en medios de cultivo desnitrificante, metanogénico, y sulfato reductor y se realizaron cinéticas de los cultivos de cada proceso respiratorio. A tres de las cepas aisladas (denominadas J, P, R) se le hicieron los mismos estudios en lote, esto es, a cada cepa se le cultivó en los tres medios antes mencionados. Los cultivos fueron evaluados en términos de eficiencia de consumo [E%, (mg de sustrato consumido (NO₃ - , SO₄ ²- o C₂H₃O₂ - )/mg sustrato alimentado)*100)], rendimientos de producción [Yp, mg de producto (N₂, HSo CH₄) /mg sustrato consumido] y velocidades específicas de producción [q, (mg de producto/g SSV d)]. Los resultados mostraron que el lodo fue metabólicamente capaz de realizar los tres procesos respiratorios con rendimientos en la producción de N₂, CH₄ y SHde 0. 9± 0.1, 0.1 ± 0.01, 0.4 ± 0.1 respectivamente. En los cultivos axénicos se observó la capacidad de desnitrificar y sulfato reducir con rendimientos cercanos a 0.1 mg N₂/mg NO₃ - y 0.4-1.0 mg SH- /mg SO₄ ²- , sin embargo bajo las condiciones de ensayo o se detectó capacidad metabólica para metanizar. Los resultados del trabajo mostraron que ni las cepas aisladas, ni el consorcio microbiano fueron monofuncionales y que el metabolismo observado fue consecuencia de las condiciones de cultivo. La investigación realizada evidenció que la flexibilidad metabólica está presente en muchos microorganismos.

El zacatuche (Romerolap diazi), es una especie endémica del Eje Neovolcanico Transversal ubicado en el centro del país y se encuentra actualnrente considerada en peligro de extinción. La destrucción del hábitat de esta especie ha tenido como consecuencia la reducción de su número poblacional, esto provoca un aumento en el número de apareamientos entre individuos emparentados, produciendose a su vez depresión genética que puede llegar a amenazar la supervivencia de una población pequeña, debido a la pérdida de la variabilidad genética, la variabilidad individual, la reducción en la resistencia; a enfermedades, a los parásitos y a los retos que plantea su medio ambiente. Conocer el estado genético que guardan las poblaciones silvestres y en cautiverio de Romerolagus diazi ayudará a un mejor manejo genético de éstas y tratar de evitar las consecuencias deletéreas de una reducida variabilidad genética. En este estudio se estimó la variabilidad genética de individuos silvestres y en cautiverio utilizando el método RAPD (Amplificación al Azar de DNA Polimorfico), una técnica basada en PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa). La técnica RAPD amplificó 31 loci del ADN de Romerolugus diuz. Se observó que las dos poblaciones presentan diferencias genéticas en 8 loci (Pc0.05) y la población silvestre presentó mayor variabilidad genética que la de Chapultepec. De los 31 loci amplificados, 12 se han fijado en ambas poblaciones, 1O no son estadisticamente significativos 6 se han perdido en los individuos estudiados. de Chapultepec que aun permanecen en la población silvestre, 2 han perdido el 88 % de su variabilidad en la colonia de Chapultepec con relación a los individuos silvestres y 1 locus presenta mayor variabilidad en la Colonia de Chapultepec en relación con la población silvestre. Se postula que la introducción de individuos de la zona de Parres D.F. es posible y permitiría aumentar la variabilidad genética de la población de Chapultepec.

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Instituto de Investigaciones Agropecuarias y Forestales. Facultad de Biología. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Facultad de Agrobiología. Facultad de Químico Farmacobiología. Programa Institucional de Maestría en Ciencias Biológicas The study of the scorpions of the genus Centruroides of the "Infamatus" complex (Scorpiones:Buthidae) included a morphological analysis using 122 males, 151 females and 42 immature corresponding to 17 populations included in the present study, the updated diagnosis of Centruroides infamatus was made taking the original description of Koch (1845), the redescription as subspecies C. i. infamatus by Hoffman (1932) and later contributions in order to have a complete reference on the distinctive characters of the species, with the purpose of having clarity on the morphological delimitation of the species, the populations of the region of León Guanajuato and surroundings of the municipality were used as the representatives of Centruroides infamatus Koch sensu stricto. Direct comparison was made with samples of males and females from the other localities included in this work; the result is presented as a diagnosis of each of the populations that, due to the differences observed, were considered as probable new species. DNA was extracted from these populations and the 16S mRNA gene was amplified by PCR; 39 sequences were obtained for molecular analysis in this study. The populations analyzed can be morphologically differentiated into five groups, and this is consistent with the genetic divergence between the representative sequences of each group. In addition, three different methods are presented for phylogenetic reconstruction, which together provide sufficient evidence to suggest the existence of five new species for the subgroup "infamatus" in Mexico, which should be described. El estudio de los escorpiones del género Centruroides del complejo “Infamatus” (Scorpiones:Buthidae) incluyó un análisis morfológico se utilizaron 122 machos, 151 hembras y 42 juveniles correspondientes a 17 poblaciones incluidas en el presente estudio, se hizo la diagnosis actualizada de Centruroides infamatus tomando la descripción original de Koch (1845), la redescripción como subespecie C. i. infamatus de Hoffman (1932) y las aportaciones posteriores a fin de tener una referencia completa sobre los caracteres distintivos de la especie, con la finalidad de tener claridad sobre la delimitación morfológica de la especie, se utilizaron las poblaciones de la región de León Guanajuato y alrededores del municipio como las representantes de Centruroides infamatus Koch sensu stricto. Se hizo la comparación directa con las muestras de los machos y hembras de las otras localidades comprendidas en este trabajo; el resultado se presenta como diagnosis de cada una de las poblaciones que por las diferencias observadas se consideraron como probables nuevas especies. De estas poblaciones se extrajo ADN y se utilizó el gen 16S RNAm que se amplificó mediante PCR; se obtuvieron 39 secuencias para el análisis molecular en el presente estudio Las poblaciones analizadas se pueden diferenciar morfológicamente en cinco grupos, y esta es consistente con la divergencia genética entre las secuencias representativas de cada grupo, además para la reconstrucción filogenética se presentan tres diferentes métodos, en conjunto se presenta evidencia suficiente que sugiere la existencia de cinco nuevas especies más para el subgrupo “infamatus” en México, las cuales deben ser descritas.

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Los protocolos que actualmente se llevan a cabo para establecer el diagnóstico de ERC incluyen pruebas de diversa índole, siendo las invasivas aquellas que ofrecen informacion acerca del grado de daño al riñón en esta afeccion, es por ello, que encontrar estrategias o alternativas menos invasivas o no invasivas que nos permitan relacionar directamente la presencia de un biomarcador con los niveles de daño presentes en el riñón del paciente. Esta es una de las metas en las estrategias de pruebas diagnóstico y que abre la posibilidad de aprovechar el potencial del papel de la citocina TGF-β con los niveles de daño renal asociado a fibrosis. Los vNAR son moléculas inmunes provenientes de especies marinas que desempeñan un papel en la opsonización de diversos antígenos, en nuestro equipo de trabajo se cuenta con uno que es especifico a TGF-β, es por ello que a través de su clonación y expresión en vectores pET28a+(expresión con etiqueta de histidina simple) y pET32a+ (expresión con doble etiqueta de histidina) se logró evaluar su expresión, capacidad de reconocimiento antigénico, linealidad y reconocimiento en una matriz biológica (suero humano). Los resultados nos muestran que la expresión en el sistema de expresión E. coli BL21 D3 con el vector pET32a+ se obtienen niveles mayores en comparación con la cantidad expresada en pET28a+. Así mismo la capacidad de reconocimiento resulta más especifica a la isoforma 1 del TGF-β, demostrándose una aceptable correlación lineal entre la respuesta analítica y concentración de citocina en la prueba de ELISA desarrollada, aún es necesario realizar mas evaluaciones empleando sueros de pacientes con enfermedad que implique procesos fibróticos por lo que los resultados de las evaluaciones en suero dan la pauta para continar con las evaluaciones y posterior validación de esta prueba analítica.

Las melaninas son polímeros de indoles oxidados presentes en gran parte de los seres vivos del planeta, en mamíferos son las responsables de dar color al pelo, ojos y piel, mientras que en plantas y hongos son el resultado del oscurecimiento enzimático, algo que en los productos agroindustriales no es deseado. Estas moléculas tienen una alta complejidad en su estructura química, por este motivo no han sido estudiadas tan a fondo. Sin embargo, existen estudios en donde se ha probado que éstos poseen propiedades que podrían tener resultados favorecedores en la salud humana como lo son la actividad antioxidante, el efecto quelante de algunos metales, su capacidad para precipitar proteínas, su capacidad como semiconductor eléctrico en equipos biomédicos entre otras, estos compuestos ya son utilizadas en la industria cosmética y alimenticia como pigmento oscuro en diferentes productos. En este proyecto se trabajó con dos productos agroindustriales de los cuales se buscaron las condiciones para aislar los polifenoles y que funcionen como el sustrato de los extractos crudos enzimáticos con actividad polifenol oxidasa, en ambos casos se buscaron las condiciones óptimas que nos permitieran tener una mejor síntesis de las melaninas. El primero es una planta, Amaranthus hypochondriacus L., se analizaron distintas partes de dicha planta como las hojas, el tallo de la planta fresca y rastrojo, que es el producto de desecho de la cosecha del amaranto, por otro lado, se utilizó el hongo, Pleourotus ostreatus, del que se hicieron las mismas pruebas. Para el caso de los extractos crudos con actividad polifenol oxidasa se hicieron pruebas con tres distintos sustratos, ejemplos de polifenoles comunes dentro de alimentos como lo son la tirosina, el catecol y la rutina, con los que fueron comparados los extractos crudos con actividad polifenol oxidasa obtenidos de diferentes partes de la planta, primero las hojas, el tallo, el tallo con las hojas y el rastrojo, mientras que del hongo se evaluó deshidratado y fresco. El extracto crudo que mostró los parámetros cinéticos más elevados con todos los sustratos y, en consecuencia, el que se podría considerar como el mejor fue el obtenido del hongo fresco teniendo una velocidad mayor con el catecol como sustrato, siendo esta de 33.333 ± 0.032 µmol/ (mL s) con una Km fue de 96.3 ± 0.5 µmol. Posteriormente en todos los casos se realizó una prueba de Tukey para comparar y agrupar las medias de velocidad y en esta los datos dieron prueba suficiente de que el conjunto era independiente y tenía diferencia significativa con un valor P

Los péptidos bioactivos son capaces de ejercer actividades reguladoras en el organismo humano. Estos se encuentran encriptados e inactivos en las proteínas de la leche y una manera de liberarlos es mediante la fermentación de la leche a través del sistema proteolítico de las bacterias ácido lácticas. El objetivo de este trabajo fue determinar los péptidos con actividad biológica (antihipertensiva y antitrombótica) y bacteriocinas producidos durante la fermentación de la leche con Lactobacillus rhamnosus GG, Lactobacillus delbrueckii sp. bulgaricus NCFB 2772 y su co-cultivo. La máxima actividad antihipertensiva se obtuvo en el sobrenadante de 24 horas de las tres fermentaciones en un rango de 74.86-79.10%. La actividad antitrombótica encontrada en los sobrenadantes de 24 horas de cada una de las fermentaciones se situó en un rango de 49.49-73.58%. Respecto a la producción de bacteriocinas solo Lb. delbrueckii sp. bulgaricus NCFB 2772 produjo compuestos que inhiben el crecimiento de E. coli sp. pero no el de Listeria innocua ATCC 33090 y Micrococcus luteus CD-BBB1018.

Simultaneous ammonium and 2-chlorophenol (2-CP) consumption by a nitrifying sludge was evaluated in two SBR reactors fed with 60 mg 2-CP-C/L and different initial concentrations of ammonium. The physiological, kinetic and molecular analysis was carried out, as well as their possible relationship through 13 operating cycles: one with 100, three with 200, three with 300, three with 400 and three cycles with 500 mg NH4 + -N/L. The physiological behavior of the sludge was assessed using the ammonium (ENH4 + -N) and 2-CF (E2-CP-C) consumption efficiencies and the nitrate production yield (YNO3 - -N) whereas the kinetic behavior was evaluated by the specific rates of ammonium (qNH4 + -N) and 2-CF (q2-CP-C) consumption and nitrate generation (qNO3 - -N). The molecular and population dynamic analysis of the nitrifying sludge were determined by means a DGGE of the DNA of bacteria at the end of each operation cycle. An ecological index of species richness (S) and evenness (J) were calculated. Likewise, the most representative DGGE bands were sequenced. Finally, different correlations were conducted between the nitrifying behavior and the molecular response. Throughout the operation cycles and regardless to the increase in the ammonium concentration, the sludge presented a complete nitrification in 14 days of culture, obtaining ENH4 + -N close to 99% and YNO3 - -N between 0.93 and 0.99 g NO3 - -N/g NH4 + -N consumed. Likewise, the sludge was able to fully consume the 2-CP in 7 days with E2-CP-C of 100%. The increase in the ammonium concentration throughout the operating cycles provoked in cycle 13 of operation a respectively increase in qNH4 + -N, qNO3 - -N and q2-CP-C (values of 189.3, 148.9 and 69.1 mg/g of protein d in cycle 13 respectively) of up to 5.1, 5.2 and 3.1 times regarding to cycle 1. A direct and significant relationship between the qNH4 + -N and q2-CP-C with a correlation coefficient of 0.83 was determined, showing effect of the increase in ammonium concentration on the cometabolic 2-CP consumption. Batch assays conducted with the sludge inoculated into the reactors in presence of allylthiourea as specific inhibitor of the ammonium monooxygenase enzyme (AMO), resulted in a decrease of 34.2±4.7% in q2-CP-C, evidenced the participation of the AMO in the consumption of 2-CP. When these assays were carried out with the sludge obtained after 13 operating cycles in the SBR reactors, a higher participation of the AMO in 2-CP consumption was noticed with a decrease of 52.3±7.7% in q2-CP-C. According to experimentation, changes in the S index were observed with a decreasing tendency. The bacterial community showed a tendency to homogeneity as an initial J index of 0.89 was calculated whereas a J value of 0.99 was determined at the end of experimentation. This behavior might be associated with the stability of the nitrifying process. The identified species were grouped as β-proteobacteria (45%), acidobacteria (30%), γ-proteobacteria (10%) and deinococcus-thermus (15%). The simultaneous consumption of ammonium and 2-CP could be attributed to the detection and permanence of species of ammonium oxidizing bacteria (AOB). Complete nitrification could be attributed to the presence of a NOB specie and 2-CP consumption to the presence of heterotrophic bacteria of Acidobacteria group, γ-proteobacteria and deinococcus-thermus group. The decrease in S and the tendency to homogeneity (J = 0.99) was associated with the ammonium concentration increase and the operating cycles (r of -0.56 and -0.61 and of 0.82 and 0.89 respectively). On the other hand, homogeneous community (J) was associated with the physiological and kinetic response of the nitrifying process (r>0.60). Furthermore, the decrease in S and the tendency to homogeneity were only associated with q2- CP-C (r of -0.65 and 0.85; r of -0.45 and 0.28 respectively). In the same sense, when relating the band intensity of the species obtained of DGGE (interpreted as the proportion of species present) with the nitrifying response, it was established that the increase in the proportion of individuals of the different species obtained from DGGE of nitrifying sludge was associated with ammonium concentration and operating cycles. It was established that the increase in the proportion of individuals of AOB species were associated with ENH4 + -N values higher than 99%; with the increase in qNH4 + -N and the increase of q2-CP-C. It was established that the increase in the proportion of individuals of heterotrophic species were associated with the increase in q2-CP-C. According to these results, at the end of the experimentation with 60 mg of 2-CP-C/L and 500 mg of NH4 + -N/L, a homogeneous bacterial community was obtained. Under these conditions an increase in proportion of individuals of some species might contribute achieve a physiologically stable nitrifying process with high q and a cometabolic 2-CP consumption enhanced by the AMO enzyme. The use of nitrifying SBR systems could be considered as a suitable alternative for increasing the cometabolic consumption of recalcitrant compounds such as 2-CP besides treating effluents highly contaminated with ammonium. El consumo simultáneo de amonio y 2-clorofenol (2-CF) por un lodo nitrificante se evaluó en dos reactores SBR alimentados con 60 mg C-2-CF/L y diferentes concentraciones iniciales de amonio. Se llevó a cabo el análisis fisiológico, cinético y molecular, así como su posible relación a través de 13 ciclos de operación: un ciclo con 100, tres ciclos con 200, tres ciclos con 300, tres ciclos con 400 y tres ciclos con 500 mg N-NH4 + /L. El comportamiento fisiológico y cinético de los lodos se evaluó mediante la eficiencia de consumo de amonio (ENNH4 + ) y 2-CF (EC-2-CF), el rendimiento de producción de nitrato (YN-NO3 - ) y las velocidades específicas de consumo de amonio (qN-NH4 + ) y 2-CF (qC-2-CF) y producción de nitrato (qNNO3 - ). La dinámica poblacional y el análisis molecular del lodo nitrificante se determinó mediante un DGGE del ADN de bacterias al final de cada ciclo de operación. Se calcularon los índices ecológicos de riqueza de especies (S) y equitatividad (J), también se secuenciaron las bandas más representativas del DGGE. Por último, se llevaron a cabo diferentes correlaciones entre las variables de respuesta fisiológicas y cinéticas nitrificantes con la respuesta molecular. A lo largo de los ciclos de operación e independientemente del aumento en la concentración de amonio, el lodo presentó una nitrificación completa en 14 días de cultivo, obteniéndose ENNH4 + cercanas al 99% y YN-NO3 - entre 0.93 y 0.99 g N-NO3 - /g N-NH4 + consumido. Asimismo, el lodo fue capaz de consumir completamente el 2-CF en 7 días con EC-2-CF del 100%. El aumento en la concentración de amonio a lo largo de los ciclos provocó un incremento en las qN-NH4 + , qN-NO3 - y qC-2-CF (valores de 189.3, 148.9 y 69.1 mg/g de proteína d en el ciclo 13 respectivamente) de hasta 5.1, 5.2 y 3.1 veces respectivamente en el ciclo 13 de operación con respecto al ciclo 1. Se determinó que existe una relación directa y significativa entre las qNNH4 + y qC-2-CF con un coeficiente de correlación de 0.83 entre ambas velocidades, mostrando el consumo cometabólico de 2-CF. En ensayos en lote utilizando aliltiourea como inhibidor específico de la enzima amonio monooxigenasa (AMO), se encontró que, con el lodo inoculado a los reactores, la qC-2-CF disminuyó 34.2±4.7%, mostrando la participación de la AMO en el consumo del 2-CF. Cuando se realizó la misma prueba con el lodo proveniente de los reactores SBR después de 13 ciclos de operación, se observó una mayor participación de la actividad amonio oxidante con una disminución del 52.3±7.7% en la qC-2-CF A lo largo de la experimentación y de acuerdo al DGGE, se presentaron cambios en el índice S, con una tendencia a la disminución. Se inició con un índice J de 0.89 y terminó en 0.99. La comunidad bacteriana tuvo una tendencia a la homogeneidad y podría estar asociada a la estabilidad del proceso nitrificante. Las especies encontradas se agruparon como βproteobacteria (45%), acidobacteria (30%), γ-proteobacteria (10%) y deinococcus-thermus (15%). El consumo simultáneo de amonio y 2-CF se podría atribuir a la detección y permanencia de especies de bacterias amonio oxidantes (AOB). La nitrificación completa, se podría atribuir a la presencia de especies de bacterias nitrito oxidantes (NOB) y el consumo de 2-CF a bacterias heterotróficas de los grupos Acidobacteria, γ-proteobacteria y deinococcus-thermus. La disminución en S y la tendencia a la homogeneidad (J = 0.99) se puede asociar con la concentración de amonio y los ciclos de operación (r de -0.56 y -0.61 y de 0.82 y 0.89 respectivamente). Por otro lado, la comunidad homogénea (J) se asocia con la respuesta fisiológica y cinética del proceso nitrificante (r>0.60). Además, la disminución en S y la tendencia a la homogeneidad se asocia con la qC-2-CF, p pero no con la EC-2-CF (r de -0.65 y 0.85; r de -0.45 y 0.28 respectivamente). En el mismo sentido, al relacionar la intensidad de banda de las especies obtenidas del DGGE (interpretada como la proporción de especies presentes) con la respuesta nitrificante, se estableció que el aumento en la proporción de individuos de las diferentes especies obtenidas del DGGE del lodo nitrificante se asocian con la concentración de amonio y los ciclos de operación. Se determinó que el aumento en la proporción de individuos de especies de AOB se asocian con la EN-NH4 + , con el incremento de la qN-NH4 + y qC-2-CF. Se estableció que el aumento en la proporción de individuos de especies heterotróficas se asocia con el incremento de la qC-2-CF. De acuerdo a estos resultados, Al final de la experimentación con 60 mg C-2-CF/L y una concentración de 500 mg de N-NH4 + /L, se obtuvo una comunidad bacteriana homogénea con el aumento en proporción de individuos de algunas especies, que contribuyeron a un proceso fisiológicamente estable con q altas y un consumo cometabólico de 2-CF por la enzima AMO. El uso de sistemas SBR con lodos nitrificantes puede ser una buena alternativa para aumentar el consumo cometabólico de compuestos recalcitrantes como el 2-CF y tratar efluentes contaminados con altas concentraciones de amonio.

Los coproductos agroindustriales pueden ser utilizados como fuente de ingredientes funcionales para el desarrollo de alimentos funcionales. La producción de granada en México se estima en 5,000 toneladas, y hay diversos estudios que muestran que la cáscara es fuente de compuestos como fibra y polifenoles. El objetivo de este trabajo fue estudiar la harina de cáscara de granada como fuente de ingredientes funcionales (fibra y polifenoles) para la utilización en un producto cárnico. Este trabajo se dividió en 2 etapas: en la primera, se caracterizó a la harina de cáscara de granada, en su contenido de polifenoles, actividad antioxidante, fibra y actividad prebiótica. En la segunda parte se adicionó la harina de cáscara de granada encapsulada por secado por aspersión, esto debido al pH ácido de la harina que hace que se rompa la emulsión. Se realizaron tres formulaciones: la formulación 1 correspondió al control, que no contenía la harina de cáscara de granada y tenía 15% de grasa dorsal. El tratamiento 1 tenía 10% de grasa dorsal y el tratamiento 2 contenía 20% de grasa dorsal. A los 2 tratamientos se les adicionó 5% de las cápsulas de la harina de granada. Las salchichas se cocieron hasta alcanzar una temperatura interna de 72°C se empaquetaron al vacío y se almacenaron a 4°C. A los días 1, 6, 12 y 18 se les realizaron los siguientes análisis fisicoquímicos: pH, Aw, Rendimiento de la cocción, humedad liberada, humedad exprimible, grasa liberada durante la cocción, color, textura y rancidez oxidativa, al día 1 se realizó una evaluación sensorial con un panel no entrenado y utilizando una escala semiestructurada. Los resultados mostraron que la harina de cáscara de granada contiene una gran cantidad de polifenoles totales extraíbles (177.8 ± 1.8 mg eq de ácido gálico/ g de muestra) taninos condensados (134 ± 2.2 mg eq de catequina/ g de muestra). Proantocianidinas no extraíbles (106.8 ± 3.5 mg / g de muestra). Los resultados de la actividad antioxidante mediante la inhibición del radical DPPH con un extracto metanólico fue de 85.9% ± 0.8 y para el extracto acetónico fue de 44.7% ± 1.7. El contenido de Fibra total fue de 33% ± 2.5, correspondiendo 5.8% para la fibra soluble 27.2% para la fibra insoluble. La actividad prebiótica de la harina de cáscara de granada utilizando a L. rhamnosus GG vs. E. coli fue de 0.42. La segunda parte consistió en la adición de la harina de cáscara de granada en un producto cárnico emulsionado. La harina tuvo que ser encapsulada (mediante secado por aspersión) ya que posee un pH bajo, que hace que se rompa la emulsión. Los resultados mostraron que no se encontraron diferencias significativas entre los tratamientos para la Humedad Exprimible, Actividad de agua, Color, Análisis del perfil de textura y Rancidez oxidativa (TBA). Sin embargo, si se encontraron diferencias significativas para la Humedad liberada, en donde el mejor tratamiento fue el 2 que contenía la mayor cantidad de lardo, en la Grasa liberada durante la cocción el mejor tratamiento fue el 1. Con respecto al pH, el mejor tratamiento fue el tratamiento 1 presentando un valor de 5.77, mientras que en el tratamiento 2 fue de 5.56 muy cercano al punto isoeléctrico de las proteínas miofibrilares. Con respecto al análisis sensorial se encontró que los jueces no encontraron diferencias significativas entre los tratamientos. De manera general se encontró que las cápsulas de harina de cáscara no tienen efecto significativo sobre las propiedades fisicoquímicas del producto cárnico. Se puede concluir que, la harina de cáscara de granada es una fuente importante de compuestos como fibra y polifenoles que pueden aportar características prebióticas y antioxidantes a un producto funcional siempre y cuando vaya encapsulada, sin modificar sus características fisicoquímicas. Agro-industrial co-products can be used as a source of functional ingredients for the development of functional foods. The production of pomegranate in Mexico is estimated at 5,000 ton, and there are various studies that show that the peel is a source of compounds such as fiber and polyphenols. The objective of this work was to study pomegranate peel flour as a source of functional ingredients (fiber and polyphenols) for use in a meat product. This work was divided into 2 stages: in the first, the pomegranate peel flour was characterized in its polyphenol content, antioxidant content, fiber and prebiotic activity. In the second part, the encapsulated pomegranate peel flour was added by spray drying, this due to the acid pH of the flour that causes the emulsion to break down. Three formulations were made: formulation 1 corresponded to the control, which did not contain pomegranate peel flour and had 15% back fat. Treatment 1 had 10% back fat and treatment 2 contained 20% back fat. To the 2 treatments, 5% of the pomegranate flour capsules were added. The sausages were cooked to an internal temperature of 72°C, vacuum packed and stores at 4°C. On days 1, 6, 12, and 18, the following physicochemical analyzes were performed: pH, Aw, cooking performance, moisture released, fat released during cooking, color, texture and oxidative rancidity, on day 1 it was performed a sensory evaluation with an untrained panel and using a semi-structured scale. The results showed that pomegranate peel flour contains a large amount of total extractable polyphenols (177.8 mg eq of galllic acid/g of sample) condensed tannins (134 mg eq of catechin/g of sample). Nom-extractable proanthocyanidins (106.8 mg/g sample). The results of the antioxidant activity by inhibiting the radical DPPH with a methanolic extract was 85.9% and for the acetonic extract it was 44.7. The total fiber content was 33% corresponding to 5.8% for soluble fiber and 27.2% for insoluble fiber. The prebiotic activity of pomegranate peel flour using L. rhamnosus GG vs. E. coli was 0.42. The second part consisted of adding pomegranate peel flour to an emulsified meat product. The flour had to be encapsulated (by spray drying) since it has a low pH, which causes the emulsion to break down. The results showed that no significant differences were founded between the treatments for squeezable moisture, water activity, color, texture profile analysis and oxidative rancidity (TBA). However, if significant differences were found for the moisture released, where the best treatment was the 2 that contained the highest amount of back fat, in the fat released during cooking the best treatment was 1. With respect to pH, the best was treatment 1 presenting a value of 5.77, while in treatment 2 it was 5.56 very close to the isoelectric point of myofibrillar proteins. Regarding the sensory analyses, it was founded that the judges did not find significant differences between the treatments. In general, it was found that the shell flour capsules have not significant effects on the physicochemical properties of the meat product. It can be concluded that pomegranate peel flour is an important source of compounds such as fiber and polyphenols that can provide prebiotic and antioxidant characteristics to a functional product as long as it is encapsulated, without modifying its physicochemical characteristics.

Lecanicillium lecanii is an entomopathogenic fungus used commercially as a biocontrol alternative in agriculture and horticulture. Inside the infection process enzymes and proteins such as chitinases, proteases, lipases and hydrophobins are produced. In the classification of chitinases are β-N-acetylglucosaminidases; which are enzymes capable of hydrolyzing at the non-reducing ends of N-acetylD-glucosamine (GlcNAc) residues of chitin oligosaccharides, releasing GlcNAc monomers. In addition to hydrolyzing Hex has been found to be capable of carrying out transglycosylation (TGA), transferring an oligosaccharide to a suitable acceptor to form a new glycosidic bond; Thus, obtaining oligosaccharides with a specific degree of polymerization and acetylation. Therefore, the objective of the present work was to purify the Hex and hydrophobins of Lecanicillium lecanii in submerged culture. In the first experimental stage, the Hex was purified obtaining a pure enzyme of 50 kDa. Its TGA activity on donor substrates was evaluated, producing transglycosylated oligosaccharides with a degree of polymerization between 2 and 6 with various degrees of acetylation. In the second experimental stage, the Hex peptides were identified and sequenced, which presented identity with a Rhizopus oligosporus chitinase. Additionally, different substrates were evaluated from those used in the first stage, to carry out TGA, where Hex was able to transglycosylate without requiring an acceptor substrate, producing oligosaccharides with a degree of polymerization of 3 to 6. In the third experimental stage, by circular dichroism spectroscopy, it was observed that there are no changes in the secondary structure of Hex, when carrying out the hydrolysis reaction or TGA evaluating different temperatures and pH values, which was attributed to local changes. in the amino acids of the active site. Finally, in the fourth stage, it was possible to purify a hydrophobin class I of 12 kDa from the biomass obtained from the submerged culture, this protein allowed modifying hydrophobic and hydrophilic surfaces. Lecanicillium lecanii es un hongo entomopatógeno utilizado comercialmente como una alternativa de biocontrol en agricultura y horticultura. Dentro del proceso de infección se producen enzimas y proteínas tales como quitinasas, proteasas, lipasas e hidrofobinas. En la clasificación de las quitinasas se encuentran las β-N-acetilglucosaminidasas; que son enzimas capaces de hidrolizar en los extremos no reductores de los residuos de N-acetil-Dglucosamina (GlcNAc) de los oligosacáridos de quitina, liberando monómeros de GlcNAc. Se ha visto que las Hex además de hidrolizar son capaces de llevar a cabo transglicosilación (TGA), transfiriendo un oligosacárido a un aceptor adecuado para formar un nuevo enlace glucosídico; obteniendo así oligosacáridos con grado específico de polimerización y acetilación. Por lo anterior, el objetivo del presente trabajo fue purificar las Hex e hidrofobinas de Lecanicillium lecanii en cultivo sumergido. En la primera etapa experimental, se purificó la Hex obteniendo una enzima pura de 50 kDa. Se evaluó su actividad TGA sobre sustratos donadores, produciendo oligosacáridos transglicosilados con un grado de polimerización entre 2 y 6 con varios grados de acetilación. En la segunda etapa experimental se identificaron y secuenciaron los péptidos de Hex, los cuales, presentaron identidad con una quitinasa de Rhizopus oligosporus. Adicionalmente, se evaluaron sustratos diferentes a los empleados en la primera etapa, para llevar acabo TGA, donde Hex fue capaz de transglicosilar sin requerir un sustrato aceptor, produciendo oligosacáridos con grado de polimerización de 3 a 6. En la tercera etapa experimental, mediante espectroscopía de dicroísmo circular se observó que Hex no sufre cambios en su estructura secundaria al llevar acabo la reacción de hidrolisis y/o la TGA, o incluso evaluando diferentes temperaturas y valores de pH, lo que se atribuyó a cambios locales en los aminoácidos del sitio activo. Finalmente, en la cuarta etapa, se logró purificar una hidrofobina de clase I de 12 kDa a partir de la biomasa obtenida del cultivo sumergido, esta proteína permitió modificar superficies hidrofóbicas e hidrofílicas.