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[ES] ARMS/Kidins220 es una proteína adaptadora transmembrana cuya estructura y distribución le posibilitan participar en importantes funciones celulares. Hasta el momento se ha estudiado la implicación de ARMS en la señalización por neurotrofinas, en la actividad neuronal, y en la regulación del citoesqueleto, pero todavía existen muchas potenciales funciones por identificar para esta proteína. En 2013 se llevó a cabo una espectrometría de masas para identificar proteínas capaces de interaccionar con ARMS en neuronas corticales, con la finalidad de encontrar indicios de posibles nuevas funciones. Entre la extensa cantidad de datos que proporcionó el experimento se identificaron las proteínas HRS, STAM, TSG101 y VPS4, todas ellas miembros del complejo ESCRT, y fundamentales para la biogénesis de exosomas. El estudio de estas vesículas está creciendo exponencialmente en la última década debido a su importancia biológica y a su potencial terapéutico y los datos obtenidos parecían indicar que ARMS podría estar relacionado con su formación. Por todo ello, decidimos estudiar el papel de ARMS en la biogénesis y secreción de exosomas. Para ello en primer lugar comprobamos si existe una regulación e interacción entre ARMS y cuatro proteínas clave en la biogénesis de exosomas (HRS, STAM, TSG101 y CD63). Y más adelante analizamos la cantidad de exosomas secretados por distintas líneas celulares cuando se alteran los niveles de expresión de ARMS. La proteína ARMS se identificó por primera vez por su relación con los receptores de neurotrofinas y la señalización mediada por estas. Esta interacción ha sido estudiada en profundidad con respecto al receptor TrkA, sin embargo, su relación con los receptores TrkB y TrkC ha recibido mucha menos atención. Sabemos que ARMS se fosforila en respuesta a la estimulación por BDNF del receptor TrkB, y observaciones previas en el laboratorio nos sugerían que ARMS podría estar a su vez modulando la fosforilación del receptor. Teniendo todo esto en cuenta nos planteamos el objetivo de estudiar el papel de ARMS en la regulación de la activación de los receptores TrkB y TrkC e identificar de sus posibles mecanismos. Para ello caracterizamos la modulación de la activación dependiente de ligando de TrkB y TrkC dependiente de ARMS en neuronas corticales. Comprobamos si ARMS está modulando la cantidad de TrkB y TrkC en la membrana plasmática. Estudiamos si ARMS requiere de las balsas lipídicas para ejercer su modulación sobre la activación de TrkB y TrkC. Investigamos si las fosfatasas de tirosina están involucradas en la modulación que ejerce ARMS sobre la activación de TrkB y TrkC. Y analizamos el posible papel de la fosfatasa PTP1B en la modulación de la activación de TrkB por parte de ARMS. Durante el desarrollo de esta tesis doctoral se han dado los primeros pasos en la búsqueda de una posible nueva relación entre ARMS y la biogénesis de exosomas, mediante el estudio de la relación de ARMS con distintas proteínas involucradas en la biogénesis de exosomas y de los efectos que tiene en la liberación de exosomas un cambio en la expresión de ARMS. También hemos profundizado en la relación entre ARMS y los receptores TrkB y TrkC, revelando la existencia de un nuevo mecanismo de regulación temprana de la activación de estos receptores en neuronas corticales. Con este trabajo quedan abiertas las puertas para continuar el estudio de aspectos muy prometedores de la función de ARMS en las células. La relación descubierta de ARMS con CD63 y Flotilina podría revelar alguna función de ARMS en la selección del cargamento que recogerán las vesículas intraluminales. Esto podría asociar a ARMS tanto con la comunicación con otras células mediante exosomas como con el procesamiento de ciertas proteínas a través de los cuerpos multivesiculares. Con respecto al papel de ARMS en la activación de TrkB y TrkC, dilucidar cuál es el mecanismo por el cual ARMS es capaz de modular la intensidad de la activación de estos receptores podría ayudar a seguir caracterizando las diferencias en la señalización de los distintos miembros de la familia Trk. Así estaremos más de entender cómo receptores tan similares, con una cadena de señalización tan parecida, son capaces de desencadenar procesos tan diferentes en las células neuronales.

Supplementary data to this article can be found online at https:// doi.org/10.1016/j.jff.2020.103969., This work supports the massive presence of potential immunomodulatory peptides in the human gut metaproteome. These peptides were identified through the MAHMI database as potentially anti-inflammatory, and sixteen of them synthesized for characterize their mechanism of action. From them, peptide HM14 was encrypted in an extracellular protein produced by Bifidobacterium longum, a common member of the human microbiota, and displayed the highest anti-inflammatory capability. Molecular mechanism of action of HM14 pointed to a specific interaction between this immunomodulatory peptide and antigen presenting cells, which resulted in a higher formation of iTreg cells. Moreover, HM14 was effective in decreasing pro-inflammatory parameters in PBMCs isolated from a cohort of Crohns patients. Finally, non-targeted metabolomics confirmed the ability of HM14 to modulate the metabolic activity of PBMCs to fulfil its energy and biosynthetic requirements. Overall, our combined in silico/multiomics approach supports the human gut metaproteome as a source for immunomodulatory peptides., Our work is supported by the Spanish “Programa Estatal de Investigación. Desarrollo e Innovación Orientada a los Retos de la Sociedad” (grants AGL2013-44761-P and AGL2016-78311-R); the Asociación Española Contra el Cancer (“Obtención de péptidos bioactivos contra el Cáncer Colo-Rectal a partir de secuencias genéticas de microbiomas intestinales”, Grant PS-2016), by the Asturias Regional Plan I + D + i for research groups (FYCYT-IDI/2018/000236) and by the Autonomic “Investigadores Emerxentes do Sistema Universitario de Galicia” (Grant EM2014/046). This work was partially supported by the Consellería de Educación. Universidades e Formación Profesional (Xunta de Galicia) under the scope of the strategic funding of ED431C2018/55-GRC Competitive Reference Group. Finally, the authors wish to thank Jaume Morales and Rubén García form Agilent Technologies for technical support., info:eu-repo/semantics/publishedVersion

[EN]The seed is the main reproductive organ of the vast majority of higher plants and can be defined as the mature product of a fertilized egg. The seed formation is a unique adaptation process in the life cycle of higher plants, combining the development of the embryo with a variety of physiological processes aimed at ensuring the survival of the species, being necessary to coordinate the spatial and temporal the growth of various cells and tissues, regulation at the molecular and biochemical level, and strict control by both hormonal and environmental factors. These physiological processes include the accumulation of reserve substances to be used by the embryo when germination starts, and a resting metabolic state complete with drainage, which allows the seeds to survive for long periods until conditions are favorable , restoring growth and then coming to form a new plant., [ES]La semilla es el principal órgano reproductivo de la gran mayoría de las plantas superiores y puede definirse como el producto maduro de un óvulo fecundado. La formación de las semillas constituye un proceso de adaptación único en el ciclo vital de las plantas superiores, ya que combina el desarrollo del embrión con una serie de procesos fisiológicos encaminados a asegurar la supervivencia de la especie, siendo necesaria una coordinación espacial y temporal en el crecimiento de las distintas células y tejidos, una regulación a nivel molecular y bioquímico, y un estricto control por parte de factores tanto hormonales como ambientales. Estos procesos fisiológicos incluyen la acumulación de sustancias de reserva que serán utilizadas por el embrión cuando comience la germinación, y un estado de reposo metabólico que se completa con la desecación, lo cual permite a las semillas sobrevivir durante largos periodos hasta que las condiciones sean favorables, restableciéndose entonces el crecimiento y llegando a formar una nueva planta.

Introducción La resistencia a insulina se ha relacionado con un aumento de la expresión y/o actividad de proteínas tirosina fosfatasas, especialmente PTP1B, tanto a nivel central como periférico. Las ratas viejas presentan resistencia central a insulina debido a múltiples alteraciones en su vía de señalización. En este trabajo hemos estudiado el posible papel de las PTPs en la resistencia central a insulina durante el envejecimiento y su relación con la restricción nutricional. Material y métodos En extractos hipotalámicos de ratas Wistar macho de 3 y 24 meses de edad, y de 24 meses sometidas a restricción nutricional crónica se determinó: la actividad fosfatasa total utilizando PNPP y la capacidad de desfosforilar a un péptido fosforilado en tirosina en los sitios de autofosforilación de la cadena [beta] del receptor de insulina mediante el kit PTP assay kit 1; la activación de la PTP1B y su asociación con el receptor de insulina (RI) mediante inmunoprecipitación y western blot. Resultados A pesar de que la actividad fosfatasa total no se modifica en extractos hipotalámicos de ratas viejas, la capacidad de estos extractos para desfosforilar el péptido con la secuencia de autofosforilación en tyr del RI aumentó significativamente en ratas viejas. Además se observó un aumento de la fosforilación en tyr de PTB1B así como de su asociación con el RI en extractos hipotalámicos de ratas viejas. La restricción nutricional crónica ligeramente revirtió estos parámetros. Conclusiones En hipotálamos de animales viejos el aumento de la actividad de la PTP1B y de su asociación con el RI podría estar implicado en la menor capacidad del receptor de insulina para activarse en respuesta a insulina. Estos cambios son parcialmente restaurados con una restricción nutricional. Ciencias de la Salud III