Search

غاسول صابونی دارای ایزوفرم های مختلف پروتئین ساپورین می باشد. ساپورین جزء پروتئین های غیر فعال کننده ریبوزومی (RIPs) است. ایزوفرم SO9 ساپورین ها، آدنین 4324 موجود در توالی حفاظت شده GAGA را دپورینه کرده و باعث اختلال در پروتئین سازی می‌گردد. در این مطالعه بیان ایزوفرم SO9 در باکتری E. coli و بررسی تیتر آنتی بادی آن در موش سوری انجام شد. روش بررسی: ژن SO9 سنتز شده، از پلاسمید pUC57-SO9 نوترکیب توسط آنزیم های محدود کننده BamH1 و Sal1 جدا و در وکتور بیانی pET28a(+) زیر همسانه سازی شد. بیان پروتئین نوترکیب با IPTG القا گردید. پروتئین SO9 نوترکیب به وسیله کروماتوگرافی تمایلی نیکل خالص سازی شد. برای تایید پروتئین نوترکیب از تکنیک Western blotting استفاده شد. واکسیناسیون موش های سوری با پروتئین تخلیص شده به صورت صفاقی انجام و تیتر IgG سرم به وسیله ELISA بررسی شد.نتایج: زیر همسانه سازی ژن SO9 در وکتور بیانی pET28a(+) به وسیله واکنش PCR و هضم آنزیمی تایید شد. حضور باند پروتئینی 29 کیلودالتون در SDS-PAGE، بیان بالای پروتئین نوترکیب را نشان داد. پروتئین نوترکیب SO9 به وسیله آنتی بادی پلی کلونال شناسایی شد. بعد از تزریق پروتئین در گروه های تست نسبت به گروه های کنترل، میزان تیتر آنتی بادی تولید شده به وسیله تست ELISA اندازه گیری شد.نتیجه گیری: خاصیت ادجوانتی و ایمنوژنی آنتی ژن SO9 نوترکیب تخلیص شده سبب می‌شود که از این آنتی بادی برای شناسایی میزان حضور SO9 در گیاه غاسول صابونی، به عنوان کاندید واکسن، تهیه کیت تشخیصی و در مطالعات ضد سرطانی سلول های انسانی استفاده گردد.

اهداف عفونت حاد روده‌ای که توسط باکترهای شیگلا و اشرشیاکلی ایجاد می‌شود به عنوان عامل بیوتروریستی شناخته شده است. پروتئین IpaD و STx نقش مهمی در تهاجم و بیماری‌زایی شیگلاها دارد. با ممزوج‌کردن IpaD با STxB می‌توان کاندیدای واکسن مناسب تهیه کرد. در این مطالعه ایمنی‌زایی پروتئین‌های نوترکیب نانوذره‌ای STxB-IpaD ممزوجی و STxB به صورت خوراکی و تزریقی در موش بررسی شده است. مواد و روش ها در این مطالعه تجربی، از وکتورهای (+)pET28a دارای ژن‌های stxB-ipaD و stxB استفاده شد که به درون باکتریE.coli BL21 DE3 ترانسفورم شدند. این باکتری روی محیط آنتی‌بیوتیک رشد داده شد و با روش PCR مستقیم و بیان پروتئین و ژل SDS-PAGE تأیید شد. پروتئین‌های نوترکیب توسط ستون نیکل تخلیص و توسط ژل SDS-PAGE و ایمنوبلاتینگ تأیید شدند. پروتئین‌های نوترکیب STxB-IpaD و STxB با روش ژله‌ای‌شدن یونی با پلیمر کیتوسان نانویی شدند و تصویربرداری آن با میکروسکوپ الکترونی نگاره (SEM) انجام گرفت. تجویز خوراکی و تزریقی آنتی‌ژن‌های نانوذره‌ای STxB-IpaD و STxB در چهار نوبت متوالی به موش‌های سوری انجام و تیتر آنتی‌بادی و ایمنی‌زایی آن‌ها بررسی شد. یافته ها با انجام آزمایش الایزا تیتر آنتی‌بادی IgG در حالت تزریقی مشاهده شد، ولی درحالت خوراکی مشاهده نشد. ممکن است به علت ازبین‌رفتن ساختار نانوذره و آنتی‌ژن توسط محیط اسیدی معده و آنزیم تریپسین باشد. موش‌های ایمن‌شده با پروتئین‌های نوترکیب STxB و STxB-IpaD با روش ژله‌ای‌شدن یونی نانویی توانستند به ترتیب تا هفت و ده برابر LD50 شیگا توکسین E.coli O157:H7 را تحمل کنند. نتیجه گیری می‌توان از نانوذره پروتئینی STxB-IpaD و STxB به عنوان اجوانت تزریقی برای ایمنی‌زایی در برابر شیگا توکسین E.coli O157:H7 استفاده کرد.

زمینه و هدف: شیگلوز عفونت حادّ روده‌ای حاصل از شیگاتوکسین و توکسین‌های شبه شیگاست که توسط باکتری شیگلا و باکتری اشرشیا کلی انتروهموراژیک (EHEC) و اشرشیا انتروتوکسینوژنیک (ETEC) ایجادمی‌شود. این بیماری، میزان شیوع بالایی در جهان دارد و به‌عنوان یک عامل بیوتروریستی شناخته می‌‌شود. هدف از این مطالعه بررسی ایمنی‌زایی پروتئین نوترکیب STxB و نانوالیاف حاوی پروتئین STxB به صورت تجویز نازالی و تزریقی می‌باشد. مواد و روش‌ها: در این مطالعه تجربی، وکتور pET28a(+) دارای ژن stxB در اختیار قرارگرفت، این وکتور به درون باکتری DE3 E. Coli BL21 ترانسفورم شد. این باکتری روی محیط آنتی بیوتیک رشد داده شد و با روش PCR مستقیم، بیان پروتئین و ژل SDS-PAGE مورد تایید قرارگرفت. پروتئین نوترکیب توسط ستون نیکل تخلیص و توسط ژل SDS-PAGE و ایمنوبلاتینگ نیز تاییدشد. نانوالیاف کایتوسان حاوی پروتئین STxB توسط دستگاه الکتروریسی سنتز شد. تجویز نازالی و تزریقی پروتئین STxB و نانوالیاف حاوی پروتئین STxB در چهار نوبت متوالی به موش‌های سوری انجام و تیترآنتی بادی آنها بررسی شد. یافته‌ها: با انجام آزمایش الایزا، افزایش تیتر آنتی بادی IgG علیه پروتئین STxB، درحالت تزریقی و نازالی مشاهده و درحالت نازالی برای نانوالیاف حاوی پروتئین STxB مشاهده نشد که ممکن است به علت عدم جذب آنتی ژن توسط سلول‌های اپیتلیالی بینی موش باشد. موش‌های ایمن شده توانستند تا پنج برابر LD50 شیگا توکسین E. coli O157:H7 را تحمل نمایند. نتیجه گیری: نتایج بدست آمده از این تحقیق بیانگر آن است که با تجویز نازالی و تزریقی پروتئین STxB موش‌های ایمن شده می‌توانند شیگا توکسین E. coli O157:H7 را تحمل نمایند.

Introduction: The bacterium Burkholderia Pseudomallei is the cause of melioidosis disease. BLF1 plays an important role in the pathogenesis and infection of B. Pseudomallei. STxB has an adjuvant and carrier role and can be produced by mixing vaccine-candidate antigens with this adjuvant to produce a suitable vaccine. This study aimed to construct and evaluate the immunogenicity of trimethyl chitosan nanoparticles containing BLF1-stxB protein by subcutaneous injection. Material & Methods: In this study, the expression of recombinant BLF1-stxB protein was induced in the expression host, and the protein was purified by affinity chromatography. Then, nanoparticles were fabricated by ion gelation method and the size and shape of nanoparticles were assessed by electron microscopy and injected subcutaneously into mice four times. Antibody titration was evaluated by indirect ELISA. BLF1 toxin was used for immunogenicity. (Ethic code: 6272) Findings: The results of this study showed that protein-containing nanoparticles have higher size and PDI, and lower zeta potential than protein-free nanoparticles. The protein charge in nanoparticles was about 65%. The highest antibody titer belonged to the group receiving protein without nanoparticles. The results showed a 75% conservation challenge of the nanoparticle-free protein group. Discussion & Conclusion: This study showed that the nanoparticle form containing this recombinant protein leads to a weaker immune response, compared to the non-nanoparticle form by injection. The results of the challenge showed that this recombinant chimeric protein provides better protection when subcutaneously injected with an adjuvant. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Copyright of Koomesh: Journal of Semnan University of Medical Sciences is the property of Koomesh: Journal of Semnan University of Medical Sciences and its content may not be copied or emailed to multiple sites or posted to a listserv without the copyright holder's express written permission. However, users may print, download, or email articles for individual use. This abstract may be abridged. No warranty is given about the accuracy of the copy. Users should refer to the original published version of the material for the full abstract. (Copyright applies to all Abstracts.)

Introduction: To date, many vaccines have been developed for anthrax but not yet an ideal vaccine. In this study, chimeric protein containing domain 1 lethal factor and domain 4 protective antigens of Bacillus anthracis in copolymer nanocapsules were used to solve the problems caused by existing vaccines and to increase the efficiency of the proposed vaccine. Materials and Methods: In this experimental study, dual solvent evaporation method was used to produce nanocapsules containing chimeric recombinant protein of protective antigen and lethal factor of Bacillus anthracis. Zeta potential of nanoparticles, nanoparticle loading efficiency, recombinant protein release pattern, potential effect of poly (lactic acid)-poly (ethylene glycol) nanoparticle (PLA-PEG) production on the viability of recombinant proteins were investigated. Mice were used as test and control samples for antibody production and immune response evaluation. Results: The mean antibody titer produced against chimeric proteins loading was significantly different from that of free antigens. Correspondingly, the difference in antibody titer was significant between the groups of one and two times' injection of loading and free antigens and the most antibody titer was related to two times injections of loading antigens. In addition, there was a significant difference between one times injection of loading and the free antigens. This suggests that the loading chimeric antigen on PLA-PEG nanoparticles and one time injection (instead of four times injections) could produce more antibodies. Conclusion: The results of this study showed that the domain 4 protective antigens and the domain 1 lethal factor of Bacillus anthracis could chimeric with each other and produced the active antigen. This chimeric antigen (LFD1-PA4) is active and able to inducing the animal's immune system. In addition, nanocarriers containing controlled release antigens can induce the immune system of the animal. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Shigella dysenteriae as the primary cause of epidemic diarrhea have been reported. Shigellosis is an infectious disease caused by Shigella. The IpaD protein is one of the most important virulence factors in Shigella. For production of recombinant protein, coding sequence of ipaD+stxB cloned to pET28(a) exprsson vector and cloned gene confimed by PCR and restriction enzyme digestions. Coding sequence expressed in E. coli (BL21) was confirmed by SDS-PAGE, ELISA and Western blot. The recombinant protein accounted for about 54.87% of total bacterial proteins. Plant exprssion vector constructed via Golden Braid method. Transient expression of ipaD+stxB in lettuce performed with agrobacterium C58 strain and was confirmed at the level of transcriptome and protein through RT-PCR and ELISA assay. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

The increased areas under cultivation of genetically modified plants have proponents and opponents in the international arena. According to potentially usefulness and harms of these products, organizations have established regulatory rules to safety use of them for feeding humans and livestock. Hence, genetically modified products have been distinguished from non-GMOs through labeling. Two more applicable genetic elements in plant transformations, 35S promoter and nos terminator, were considered as targeted elements for detection of GMO products in this research. Three maize grain cultivars, one soybean meal sample, and three bird’s food samples were used as experimental materials. The two-targeted genetic elements were detected in all samples. The Invertase and Lectin sequences as endogens were used for determining the presence of corn and soybean genomes as criteria. The two endogens were identified in all those of samples, which have the related genomes. In accordance to accepting of Cartagena Protocol in Iran, it’s been hopped that labeling rules of GMO products follow more seriously. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Background and aims: Vibrio cholerae is a gram-negative bacterial pathogen that causes diarrheal disease. One of the most important factors in the pathogenesis is Vibrio cholera. Pili also is co-regulated with toxin, which is necessary for bacterial colonization in intestine. The aim of this study was to examine recombinant protein expression and TcpA bioinformatics. Methods: TcpA gene was studied for rare Codons existence and gene optimization conducted using bioinformatics software. Primers designed for amplification of synthetic tcpA gene. Synthetic gene was cloned in vector pET32a (+). The recombinant plasmid pET32a (+)-tcpA was transformed to E.coli strain BL21 (DE3). TcpA gene expression was induced by IPTG 1mM. Recombinant protein expression was evaluated using SDS PAGE and Western blotting. Ni-NTA affinity chromatography was used for purification of recombinant protein. Results: Codon adaptability index of naive tcpA gene was 0.6, while optimized gene had Codon adaptability index of 0.9. The prevalence ratio Codons increased to 75 percent through Codon optimization. Enzyme analysis approved tcpA gene cloning in pET32a (+) expression vector. A protein with a molecular weight of 38.6 kD was seen on SDS-PAGE and its reaction with the antihistidine antibodies was confirmed by Western blot. The purified protein amount was 11.533milligram per liter. Conclusion: Optimization led to the expression of recombinant tcpA. Regarding tcpA antigenicity, this protein is a good candidate to develop immunity against cholera gene. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Background and Objectives: Bacillus anthracis is the cause of the fatal anthrax. Use of vaccine is one of the effective ways to combat anthrax. Vaccines should be biocompatible and non-toxic. The purpose of this study was to investigate the cytotoxicity effect of free and encapsulated forms of Bacillus anthraise recombinant protective antigen by double-block PLA-PEG and PCL-PEG copolymers on the epithelial cell line of the African green monkey (Vero). Subjects and Methods: In this experimental study, the Bacillus anthraise recombinant protective antigen (PA63) was expressed in E. coli and purified by nickel column affinity chromatography. Subsequently PA63 was encapsulated by PLA-PEG and PCL-PEG double-block copolymers using water-in-oil-in-water solvent evaporation method. Finally, PA63 and nanoparticles cytotoxicity test were performed using the standard MTT test on the Vero cell line. Results: Results of the MTT test revealed the non-toxicity of the candidate vaccine. Also, the mortality rate of the cells tested against the encapsulated antigen in the nanoparticles was lower than the free antigen. Conclusion: The nano-vaccine formulation can be used to reduce the toxicity of a vaccine produced and eventually acquire an effective and biocompatible recombinant vaccine. [ABSTRACT FROM AUTHOR]