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Resumen La producción de fitoreguladores de crecimiento por bacterias promotoras de crecimiento vegetal (BPCV), actualmente es considerada como uno de los mecanismos más importantes mediante los cuales, los microorganismos promueven el crecimiento en plantas. La ruta biosintética más importante de producción de ácido indol acético (AIA) dependiente de triptófano (Trp) en BPCV es la del ácido indol 3-pirúvico (IPyA). Sin embargo, ésta depende del rol ecofisiológico que la bacteria ejerza en la planta. Entre los métodos disponibles para determinar la IAA y los compuestos relacionados en sobrenadantes bacterianos, se utilizan con mayor frecuencia los ensayos espectrofotométricos, de cromatografía de capa fina (TLC) y cromatografía de alta resolución (HPLC), siendo este último, un método efectivo para la determinación de estos compuestos. El objetivo del presente trabajo fue determinar la producción de AIA y la vía de biosíntesis de esta por RP-HPLC-MS/MS de bacterias rizosféricas y endófitas aisladas dePinus patulayPinus montezumae.

Universidad de Málaga. Campus de Excelencia Internacional Andalucía Tech. Las bacterias fitopatógenas del complejo Pseudomonas syringae son agentes causales de enfermedades en multitud de huéspedes leñosos y herbáceos. El ácido indol-3-acético (IAA) es una fitohormona tipo auxina cuya producción es frecuente en bacterias asociadas a plantas. Algunas cepas de P. syringae conjugan el IAA con L-lisina (L-Lys), obteniéndose el conjugado indol-3-acetil-ε-L-lisina (IAA-Lys), mediante la enzima IAA-Lys sintasa, codificada por el gen iaaL. El conjugado IAA-Lys es biológicamente menos activo que el IAA, por lo que su producción podría controlar los niveles de IAA libre en el citoplasma bacteriano y/o la secreción al tejido vegetal. Se han descrito tres alelos del gen iaaL en el complejo P. syringae (iaaLPsv, iaaLPsn, iaaLPto). Recientemente, identificamos un cuarto alelo (iaaLPsf) en el genoma de cepas aisladas de fresno (Fraxinus excelsior). Sin embargo, no se habían realizado hasta ahora análisis comparativos de las actividades bioquímicas y biológicas de las diferentes isoenzimas IaaL. En este trabajo analizamos el contexto génico de los cuatro alelos del gen iaaL en una colección de cepas del complejo P. syringae. Construimos cepas que sobreexpresan cada uno de estos alelos y analizamos su actividad biológica utilizando un ensayo de elongación radicular en Arabidopsis thaliana. Finalmente, expresamos estos alelos en E. coli, lo que permitió purificar las isoenzimas IaaL y analizar sus actividades específicas mediante un ensayo in vitro de acoplamiento enzimático. Nuestros resultados sugieren que la variación alélica del gen iaaL podría relacionarse con la adaptación de la concentración de IAA sintetizada por el patógeno y al huésped infectado.

Phytopathogenic bacteria of the Pseudomonas syringae complex are causal agents of diseases in a wide variety of woody and herbaceous plants with agronomic and ornamental interest. Indole-3-acetic acid (IAA) is an auxin phytohormone whose production is widely distributed among plant-associated bacteria. Some P. syringae strains can further metabolize IAA to the amino acid conjugate 3-indole-acetyl-ε-L-lysine (IAA-Lys), a process involving the enzyme IAA-Lys synthase, encoded by the iaaL gene. IAA-Lys is less biologically active than IAA, so it has been speculated that the conjugation of IAA with L-Lysine could allow the bacteria to control the levels of free IAA accumulated in the bacterial cytoplasm and/or secreted to the plant tissues. The iaaL gene is widespread in the P. syringae complex, and three different alleles (iaaLPsv, iaaLPsn and iaaLPto) have been described. Recently, we have identified a fourth allele (iaaLPsf) specifically encoded in the genome of strains isolated from Fraxinus excelsior. However, comparative analyses of the biochemical and biological activities of the different iaaL alleles have not been performed. In this work, the genomic context of these four alleles in a collection of P. syringae complex strains has been analyzed. In addition, we have constructed strains overexpressing each of these iaaL alleles and analysed their biological activities using an elongation assay of Arabidopsis thaliana roots. Finally, expression of these alleles in E. coli allowed the purification of these four IaaL proteins and the analysis of their specific activities using an in vitro enzymatic coupling assay. Universidad de Málaga. Campus de Excelencia Internacional Andalucía Tech.

Today, a micropropagation method for Agave angustifolia exists, but for the multiplication of propagules, more information is needed on the diverse components of the culture medium, cytokinins and auxins and their effect on organogenetic response. The objective of this study was to evaluate dosages of benzylaminopurine and indol-3-acetic acid (IAA) in a culture medium and their effect on the formation of new adventitious shoots (organogenesis). The explants used were clusters of shoots on a common base of A. angustifolia stem tissue. Clusters of three to four shoots were established in different variants of a Murashige and Skoog culture medium that had different concentrations of benzylaminopurine (BAP; 0.5, 1, 2, and 4 mg L−1) and IAA) (0.1, 0.3, and 1 mg L−1). After 16 wk, it was found that a higher proliferation of shoots was positively related to the concentration of growth regulators. Explants formed a greater quantity of shoots in a culture medium with an increase in BAP of up to 4 mg L−1 and in IAA of up to 1 mg L−1, and there was a synergistic effect with BAP to induce the formation of the greatest number of shoots. Resumen Actualmente existe una metodología para micropropagar a Agave angustifolia, y en la multiplicación de propágulos, se requiere mayor información sobre los diversos componentes del medio de cultivo, citocininas y auxinas en su efecto sobre la respuesta de organogénesis. Por lo que el objetivo fue evaluar las dosis de bencilaminopurina y ácido indol-3-acético (AIA) en el medio de cultivo, en su efecto para la formación de nuevos brotes adventicios (organogénesis). Se tomaron explantes que fueron racimos de brotes en una base común de tejidos de tallos de A. angustifolia. Se establecieron racimos de 3 a 4 brotes de A. angustifolia en diversas variantes de medio de cultivo MS que tenían diferentes concentraciones de bencilaminopurina BAP (0.5 1, 2, 4 mg L-1) y AIA (0.1, 0.3, 1 mg L-1). Transcurridas 16 semanas, se obtuvo que la mayor proliferación de brotes fue en relación positiva con la concentración de reguladores de crecimiento, en explantes establecidos en medio de cultivo con 4 mg L-1 BA + 1 mg L-1 AIA y explantos en MC con 0.5 mg L-1 BA + 0.1 mg L-1 AIA se formaron en promedio 32.8 y 7.8 brotes, con 45 y 24 hojas, respectivamente.

Embora os reguladores de crescimento do grupo das auxinas sejam comumente utilizados para induzir o enraizamento de estacas, nos últimos anos, as pesquisas têm voltado interesse para obtenção de métodos alternativos de indução da rizogênese em estacas de plantas de difícil propagação vegetativa, como a do pessegueiro cv. ‘Chimarrita’. Isso faz com que a tiririca, planta encontrada em larga escala em grande parte do mundo, apresente-se como uma alternativa para a promoção de enraizamento de estacas, por possuir compostos fenólicos que apresentam efeito sinergístico com a auxina endógena. Diante do exposto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a capacidade de enraizamento de estacas lenhosas de pessegueiro cv. ‘Chimarrita’ com a aplicação de diferentes concentrações do extrato aquoso de Cyperus rotundus L. em comparação com a aplicação do regulador de crescimento ácido indol-3-acético. Os tratamentos consistiram em diferentes concentrações de extratos aquosos do sistema radicular e de parte aérea de C. rotundus L. e do regulador de crescimento ácido indol-3-acético. Avaliou-se a percentagem de estacas vivas, de estacas enraizadas, de calos, o comprimento da raiz primária e a matéria seca do sistema radicular. O extrato aquoso de parte aérea e sistema radicular de C. rotundus L. não promove o enraizamento de estacas lenhosas de pessegueiro cv. ‘Chimarrita’ no período de 90 dias. A concentração de ácido indol-3-acético 500 mg L-1 é a que promove maior enraizamento de estacas lenhosas de pessegueiro.

A melhoria da fertilidade do solo e a produtividade das culturas com redução dos impactos negativos dos fertilizantes químicos no ambiente é algo imprescindível para a agricultura moderna. Nesta vertente tem se observado um grande interesse pelo estudo de micro-organismos do solo que contribuam para a atividade agrícola, sobretudo melhorando a fertilidade do solo e sustentabilidade da agricultura. O processo de fixação biológica de nitrogênio permite que diferentes micro-organismos supram total ou parcialmente a demanda de nitrogênio da planta hospedeira. Este trabalho objetivou analisar parâmetros que possam indicar a eficácia de isolados bacterianos de nódulos radiculares de plantas de arroz de sequeiro quanto a sua eficiência na produção de biocompostos e promoção do crescimento vegetal. Foram avaliados parâmetros como o perfil de crescimento e produção de proteínas totais, formação de biofilme com a determinação da biomassa e da viabilidade celular, produção da auxina (ácido indol-3-acético), análise molecular da região espaçadora intergênica 16S-23S e teste de germinação com os cultivares de arroz Caiapó e Canastra. O comportamento das estirpes foi diferente nos três meios de cultura avaliados. O perfil de crescimento e produção de proteínas totais foram superiores no caldo batata a partir de 12 e 36 horas de incubação, respectivamente. Todas as cepas formaram biofilme com células viáveis associadas em níveis variáveis dependendo do meio e da estirpe em questão. Foi observado que o caldo batata propiciou uma melhor formação de biomassa associada ao biofilme, entretanto quando considerada a razão entre a formação de biofilme e a taxa de crescimento, a formação de biofilme foi maior nos meios RDM e YM. Todos os isolados produziram a auxina ácido indol-3-acético, com valores variando entre 0,207 μg.mL-1 a 33,212 μg.mL-1. Na caracterização molecular por meio da amplificação da região espaçadora intergênica 16s-23S foram observados fragmentos de produtos de PCR variando entre 787 a 9.045 pares de base (pb), com presença de 1 a 3 bandas separadas em gel de agarose, desta forma foi possível dividir as estirpes em nove grupos com 100% de similaridade, sendo o grupo II composto por nove cepas. No teste de germinação o genótipo Canastra sobressaiu em relação ao Caiapó para o número de ramificações, massa fresca da parte aérea e raiz e massa seca raiz e o genótipo Caiapó sobressaiu ao Canastra apenas para massa seca da parte aérea. Na avaliação geral por tratamento foram observadas diferenças significantes apenas para raiz e parte aérea, sendo que o isolado R5 foi o que apresentou melhores resultados. Improve soil fertility and crop productivity, reducing the negative impact of chemical fertilizers on the environment is something essential for modern agriculture. In this context it has been observed a constant interest in the study of soil microorganisms, which contribute to agricultural activity, especially improving soil fertility and for a sustainable agriculture. The process of biological nitrogen fixation allows that different microorganisms supplement totally or partially the nitrogen demand of the host plant. This study aimed to analyze parameters that can indicate the efficacy of bacterial isolates from root nodules of sequeiro rice plants, in relation their efficiency in the production of biocompounds and plant growth promotion. Were evaluated parameters as growth cellular profile, production of total proteins, biofilm formation with the determination of biomass and cell viability, production of auxin (indole-3-acetic acid), molecular analysis of intergenic spacer region 16S-23S and germination test with the cultivars Canastra and Caiapó. The behavior of the strains were different in the three culture mediuns. The growth profile and production of total proteins were greater in potato broth than another mediuns from 12 and 36 hours of incubation, respectively. All strains formed biofilm with viable cells associated, with levels depending on the medium and the strain in question. Was observed that the potato broth provide a better formation of the biofilm with associated biomass, however when the ratio between biomass and growth rate is considered the biofilm index was higher for RDM and YM medium. All isolates produced AIA, with values variation from 0.207 μg.mL-1 to 33.212 μg.mL-1. In molecular characterization by amplification of the spacer intergenic region 16S-23S were observed that PCR products fragments ranging from 787-9045 base pairs (bp) with presence of 1 to 3 separate bands in agarose gel, thus, it allowed share the strains into nine groups with 100% similarity, with group II compound for nine strains. In germination test, the Canastra genotype was better than Caiapó in relation of the number of ramifications, fresh mass for root and shoots and dry mass for root. Caiapó was better than Canastra only for dry mass of shoots. In the overall assessment by treatment, significant differences were observed only for root and shoot, and the isolated R5 showed the best results in these two parameters.

SANTOS, Pedro Henrique Queiroz Pereira dos - BIOTECHNOLOGICAL EVALUATION OF SEAWEEDS AS BIO-FERTILIZER.. Coimbra : [s.n.], 2016. Dissertação de Mestrado. The seaweeds contain several molecules and compounds which assist in the evolution of plants. The present study evaluates the effect of water extracts of the brown seaweeds Fucus vesiculosus and Saccorhiza polyschides as seaweed liquid fertilizer (SLF) on germination, growth, development and yield of tomato plants (Solanum lycopersicum). Different concentrations (5%, 10%, 15%, 20% and 25%) of SLF were prepared using distilled water and applied to evaluate their efficiency as plant growth regulator and the inhibiting (toxic) concentration. The seedlings treated with different concentration of SLF were monitored for various parameters such as radicle length, plumule length, total length, seedling vigor index and germination percentage, whereas the tomato plants were monitored root length, shoot length, total length, number of leaves, flowers and fruits. At the same time, had as objective to relate the presence and the role of the plant hormone auxin (indole-3-acetic acid or IAA) in the seaweed liquid fertilizer. Both species shown to have plant hormones, being Fucus vesiculosus the holder of higher concentrations: 331µg/mL, while Saccorhiza polyschides presented 80.314µg/mL. The study showed that the concentration required for optimum plant growth varies depending on their stage of development. In the germination test, applying 10 to 15% of SLF there was an increase in all parameters but an inhibition of nearly 50% in the plants treated with extracts of 25% SLF. Plants in a greenhouse, in a higher stage of development, when treated with 10% extracts to 25% increase the number of leaves by about 50% and plants treated with extracts from 20 to 25% accelerated fruit development, thus obtaining a better yield. Seaweeds are natural resources that when employed in a controlled way, are not harmful to plants and ever more, due to diverse scientific studies, this organisms are increasingly gaining importance and acceptance for use in sustainable crops. Beyond, seaweeds are fundamental because belonging to the basis of the food chain, thus, should be utilized responsibly and based on biology studies that do not influence the environment where were harvested. As algas possuem várias moléculas e compostos que auxiliam na evolução das plantas. O presente estudo avalia o efeito de extratos aquosos de algas castanhas (Fucus vesiculosus e Saccorhiza polyschides) como fertilizantes líquidos na germinação, crescimento, desenvolvimento e produtividade do tomateiro (Solanum lycopersicum). Diferentes concentrações (5%,10%,15%,20% e 25%) de extratos aquosos de algas foram preparados utilizando água destilada e aplicada para avaliar a sua eficiência como regulador de crescimento vegetal e a concentração em que ocorre inibição (toxicidade). As plântulas tratadas com diferentes concentrações de extratos de algas foram monitorizadas em vários parâmetros, tais como comprimento radicular, comprimento da plúmula , comprimento total, índice de vigor da plântula e percentagem de germinação; enquanto que para as plantas de tomateiro foram monitorados o comprimento das raízes, comprimento da parte aérea, comprimento total, número de folhas, flores e frutos. Ao mesmo tempo, teve como objetivo relacionar a presença e o papel da hormona vegetal auxina (ácido indol-3-acético) nos fertilizantes à base de algas. As duas espécies de algas mostraram possuir a hormona citada, sendo Fucus vesiculosus a que apresentou uma concentração mais elevada: 331 µg/mL, enquanto Saccorhiza polyschides teve uma concentração de 80,314 µg/mL. O estudo mostrou que a concentração necessária para um crescimento ótimo da planta varia de acordo com seu estágio de desenvlvimento. No teste de germinação, a aplicação de 10% a 15% de extrato de algas provoca um aumento em todos os parâmetros e uma inibição de aproximadamente 50% nos extratos de 25% de algas. As plantas em estufa, que estão em uma fase mais avançada de desenvolvimento, quando tratadas com 10% a 25% de extratos de algas, aumentam o número de folhas em cerca de 50%, e as plantas tratadas com extratos de 20% a 25% aceleram o desenvolvimento dos frutos, obtendo-se um melhor rendimento na produção. 13 As algas são recursos naturais que, quando utilizadas de forma controlada, não são prejudiciais para as plantas e cada vez mais, devido a diversos estudos científicos, estes organismos estão a ganhar cada vez mais importância e aceitação para uso em culturas sustentáveis. Além disso, as algas são seres fundamentais porque pertencentem à base da cadeia alimentar, assim, devem ser utilizadas de forma responsável e com base em estudos biológicos que não influenciem o meio ambiente em que foram colhidas.

Dissertação de Mestrado em Bioquímica, apresentada ao Departamento de Ciências da Vida da Faculdade de Ciências e Tecnologia da Universidade de Coimbra.

An in vitro culture procedure was developed to induce shoots and roots of Guarianthe skinneri (Orchidaceae) plantlets regenerated from seed-derived protocorms on a Murashige and Skoog (MS) médium supplemented with 6-benzyladenine (BA), indole-3-acetic acid (IAA), a-naftalenacetic acid (NAA) and gibberellic acid (GA3). A máximum of 10.6 shoots was obtained with 16.1 μM NAA, 17.1 μM IAA, 6.3 x 10-9 μM GA3 and 0.0023 μM BA. A máximum of 4.0 roots on each shoot with 5.4 μM NAA, 17.1 μM IAA, 0.001 μM AG3 and 4.6 x 10-9 μM BA. Máximum shoot and root length was obtained with a minimum of GA3, but a máximum IAA. GA3, was the main factor controlling shoot and root induction and elongation. Se desarrolló un procedimiento para el cultivo in vitro para inducir brotes y raíces en las plántulas de Guarianthe skinneri (Orchidaceae) regeneradas a partir de protocormos derivados de semillas en un medio de Murashige & Skoog (MS) complementado con 6-benziladenina (BA), ácido indol-3-acético (AIA), ácido a-naftalenacético (ANA) y ácido giberélico (GA3). Se obtuvo un máximo de 10,6 brotes con 16,1 μM de ANA, 17,1 μM de AIA, 6,3 x 10-9 μM de GA3 y 0,0023 μM de BA. Un máximo de 4,0 raíces en cada brote se obtuvo con 5,4 μM de ANA, 17,1 μM de AIA, 0,001 μM de AG3 y 4,6 x 10-9 μM de BA. La longitud máxima de brotes y raíces se obtuvo con la más baia concentración de GA3, y la mayor concentración de AIA. El GA3, fue el factor principal que controló la inducción y la elongación de los brotes y raíces.

Hydrogen cyanamide (HC) has been used to break bud and seed dormancy and to improve rooting in several species, responses usually associated with the action of plant hormones. However, very few studies have measured endogenous hormones after HC treatment. Therefore, pea (Pisum sativum L.) seedlings with two fully developed internodes above the first leaf were sprayed with 0, 0.1 and 0.3% (v/v) HC. Endogenous concentration of indole-3-acetic acid (IAA), abscisic acid (ABA), zeatin/zeatin riboside and N6(Δ2-isopentenyl) adenine/ N6(Δ2-isopentenyl) adenosine were measured by radioimmunoassay 31 and 80 h after HC treatment. A significant increase in ABA and cytokinin (CK) levels was observed 31 h after treating the plants with 0.3% HC. Small necrotic spots were also noticed in this treatment, thus revealing a toxic effect of this treatment. Additionally, at 80 h, a significant increase in IAA was found for both HC concentrations applied. The action of HC upon ABA, CKs and IAA endogenous levels is discussed. A cianamida hidrogenada (CH) tem sido usada para quebrar a dormência de sementes e estimular o enraizamento em várias espécies, respostas estas usualmente associadas com a ação de hormônios de plantas. Todavia, em muito poucos estudos se tem avaliado os níveis endógenos de hormônios após a aplicação de CH. Portanto, plântulas de ervilha (Pisum sativum L.), com dois internódios completamente desenvolvidos acima da primeira folha, foram pulverizadas com soluções de CH a 0; 0,1; e 0,3% (v/v). Concentrações endógenas de ácido indol-3-acético (AIA), ácido abscísico (AAB), zeatina/ribosídeo de zeatina e N6(Δ2-isopentenil) adenina/ N6(Δ2-isopentenil) adenosina foram medidas por radioimunoensaio após 31 e 80 h da aplicação de CH. Observaram-se aumentos significativos nas concentrações de AAB e citocininas 31 h após o tratamento das plantas com 0,3% de CH. Verificaram-se pequenas manchas necróticas nas plantas desse tratamento, que se revelou, pois, tóxico. Adicionalmente, observou-se um incremento na concentração de AIA após 80 h da aplicação de CH, tanto a 0,1 como a 0,3%. Discute-se a ação da CH sobre as concentrações endógenas de AAB, AIA e citocininas. UCR::Vicerrectoría de Investigación::Unidades de Investigación::Ciencias Agroalimentarias::Centro para Investigaciones en Granos y Semillas (CIGRAS)

El desarrollo floral es una secuencia de numerosos pasos, cada uno con requerimientos específicos afectados directamente por las condiciones químicas y ambientales. La luz desempeña un papel central en la iniciación del desarrollo floral. Solidago x luteus (M. L. Greene) Brouillet y Semple (= x Solidaster hybridus, x S. luteus) responde a los días largos (DL) para la inducción floral y a los días cortos (DC) para el desarrollo de la flor. En este trabajo se recolectaron muestras de hojas y botones florales de plantas de S. x luteus crecidas en diferentes condiciones fotoperiódicas: DC (8 h) y DL (18 h). A través de diferentes bioensayos, se detectó la actividad promotora e inhibidora de sustancias presentes en la fracción ácida de los extractos vegetales. Posteriormente, las concentraciones de AIA y de ABA presentes en los extractos se determinaron a través de cromatografía líquida de alta eficiencia. Los resultados mostraron la ausencia de actividad giberelínica en los tratamientos estudiados; entretanto, se constató una mayor concentración de AIA en hojas y botones florales en plantas en condiciones de DL, en comparación con plantas de DC, lo que podría estar relacionado con la mayor velocidad de antesis floral en plantas en DC. Las mayores concentraciones de ABA, con relación al inicio de los tratamientos fotoperiódicos, ocurrieron en hojas y botones florales de plantas en DC; así, en el balance AIA:ABA, éstos se encontrarían en concentraciones opuestas, principalmente en el botón floral en DC, en el que se observó la mayor cantidad de ABA y la ausencia de AIA.

El desarrollo floral es una secuencia de numerosos pasos, cada uno con requerimientos específicos afectados directamente por las condiciones químicas y ambientales. La luz desempeña un papel central en la iniciación del desarrollo floral. Solidago × luteus (M. L. Greene) Brouillet y Semple (= ×Solidaster hybridus, × S. luteus) responde a los días largos (DL) para la inducción floral y a los días cortos (DC) para el desarrollo de la flor. En este trabajo se recolectaron muestras de hojas y botones florales de plantas de S. × luteus crecidas en diferentes condiciones fotoperiódicas: DC (8 h) y DL (18 h). A través de diferentes bioensayos, se detectó la actividad promotora e inhibidora de sustancias presentes en la fracción ácida de los extractos vegetales. Posteriormente, las concentraciones de AIA y de ABA presentes en los extractos se determinaron a través de cromatografía líquida de alta eficiencia. Los resultados mostraron la ausencia de actividad giberelínica en los tratamientos estudiados; entretanto, se constató una mayor concentración de AIA en hojas y botones florales en plantas en condiciones de DL, en comparación con plantas de DC, lo que podría estar relacionado con la mayor velocidad de antesis floral en plantas en DC. Las mayores concentraciones de ABA, con relación al inicio de los tratamientos fotoperiódicos, ocurrieron en hojas y botones florales de plantas en DC; así, en el balance AIA:ABA, éstos se encontrarían en concentraciones opuestas, principalmente en el botón floral en DC, en el que se observó la mayor cantidad de ABA y la ausencia de AIA.

Brotações de macieira (Malus domestica, Borkh), cv. Fred Hough, oriundas do processo de multiplicação in vitro, foram inoculadas em meio MS e MS/2, testando-se os reguladores de crescimento: ácido indol-3-acético (AIA); ácido indolbutírico (AIB) e ácido naftaleno acético (ANA), nas concentrações de 0, 1, 3 e 5 miM com o objetivo de observar o efeito dessas auxinas sobre o enraizamento da cultivar. Foram acrescentadas aos meios as vitaminas MS mio-inositol (100 mg/L) e sacarose (30 g/L) em meio de ágar (6 g/L). O pH do meio foi ajustado para 5,8 e a cultura foi incubada a 25 ± 2º C e 16 horas de fotoperíodo a 2.000 lux, permanecendo por 30 dias. Os tratamentos foram repetidos cinco vezes e cada repetição constou de cinco explantes inoculados em frasco de 250 mL contendo 40 mL do meio. O meio MS/2 em todas as concentrações testadas foi melhor que o MS. O ANA e o AIB, ambos na concentração de 3 miM, em meio MS/2, tiveram comportamento semelhante na porcentagem de enraizamento e no número de raízes produzidas; no entanto, o ANA provocou efeitos indesejáveis na qualidade destas, havendo formação de calo na base das brotações e raízes grossas. O AIA obteve melhor resposta nas altas concentrações, mas não foi melhor que o AIB e ANA. Apple shoots (Malus domestica, Borkh), cv. Fred Hough derived from in vitro multiplication process were inoculated in MS and MS/2 basal media added by growth substances indol acetic acid (IAA); indol butiric acid (IBA) and naphtalene acetic acid (NAA) at 0, 1, 3 and 5 µM. The media also included: MS vitamins, myo-inositol (100.0 mg/L); sucrose (30.0 g/L); agar (6.0 g/L). The pH was adjusted to 5.8 before autoclaving. The treatments were incubated in a growth room at 25±2ºC, 16 hours photoperiod under light intensity of 2,000 lux during 30 days. The treatments were replicated five times. Each replicate was composed by a 250 mL flask containing 40 mL medium with five explants. The medium MS/2 in all the tested concentrations was better than MS. The NAA and IBA, both at 3.0 µM on MS/2 showed similar effects as percentage of rooting and number of roots are concerned. However, NAA treated explants presented a higher callus incidence at the base of shoots along with thicker roots. IAA had a better response when used in higher concentrations but it did not achieve the performance of IBA ou NAA.