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Introducción: La leche materna es el alimento ideal para el lactante. La distribución porcentual de los lípidos en la leche humana depende de la dieta. Los ácidos grasos poliinsaturados son sustratos importantes en la neurogénesis del lactante. Objetivo: Relacionar el perfil de ácidos grasos (AG) en membrana del glóbulo rojo (MGR) y leche de madres en período de lactancia (MPL), con el perfil de AG de membrana del glóbulo rojo de lactantes con lactancia materna exclusiva. Evaluar el consumo de grasas de las madres. Material y Métodos: Estudio observacional, analítico de corte transversal. Se analizaron muestras de leche y sangre de madres adultas; y sangre de sus lactantes, obtenidas a los 90 días pos-parto, durante el período 2016-19. Se determinó el porcentaje de AG por Cromatografía Gaseosa. Se realizó una encuesta de frecuencia de consumo de alimentosb precursores y fuente de ácidos grasos. Resultados: Se estudiaron 45 MGR mamá-bebé y 45 leches donadas por las mismas madres, que ofrecían lactancia materna exclusiva. Se halló un bajo porcentaje de ácido docosahexaenoico (DHA) [0,14 (0,12;0,2)] en las leches de las madres estudiadas, en concordancia con el bajo consumo de alimentos fuente de DHA. Se encontró una tendencia estadística positiva en la correlación (r=0,28; p=0,066) entre el DHA de la leche y el DHA de la MGR de la madre. También se halló una correlación positiva significativa entre el DHA de la leche y el DHA de la MGR del lactante. Cuando las leches presentaron un porcentaje de DHA mayor o igual a 0,20%, los lactantes tuvieron un aumento significativo del DHA en su MGR. Conclusión: Confirmamos que el consumo de AG de la dieta se relaciona con la distribución porcentual de AG en la MGR de la madre y la composición lipídica de la leche materna. El bajo consumo de alimentos fuente de DHA y la no suplementación resultaron en un bajo porcentaje de ω-3 en leche y MGR maternos. El aumento del porcentaje de DHA en la leche materna por sobre el 0,20% produjo un aumento significativo en el mismo AG correspondiente a la MGR del lactante., Facultad de Ciencias Médicas

The role of nutraceuticals in the treatment of glaucoma remains controversial. The aim of this study was to evaluate the effect of citicoline, vitamin C, and docosahexaenoic acid (DHA) in patients with glaucoma. Methods: This was a prospective, randomized study. Patients with glaucoma were randomized to one of four groups and treated for 3 months with vitamin C, DHA, citicoline, or a combination of DHA and citicoline. We conducted a complete ophthalmic examination and visual fields each month and calculated the slopes of field indices. Changes in visual field indices (VFIs) and their slopes were assessed in each group and compared. Results: Seventy-three persons were included in the study. Mean defect (MD) significantly improved (p = 0.001) from −9.52 ± 4.36 to −7.85 ± 4.36 dB during the study period in persons taking DHA + citicoline. Similarly, the mean VFI significantly improved (p = 0.001) in this group. The only treatment group showing a statistically significant improvement (p = 0.006) in the MD (from −0.1041 ± 0.2471 to 0.1383 ± 0.2544 dB/month) and VFI slope was the group treated with DHA+citicoline. Conclusions: The combination of oral treatment with DHA + citicoline significantly improved VF indices and their slopes in patients with glaucoma after 3 months of treatment.

Orientador: Rejane Maira Góes Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A reprogramação metabólica ao longo do processo carcinogênico confere suporte à alta demanda anabólica e energética. Este ajuste também é observado no câncer de próstata (CaP), em especial a desregulação mitocondrial e da lipogênese, vulnerabilidades exploradas como estratégias terapêuticas. O ácido docosahexaenóico (DHA) é um ácido graxo poli-insaturado ômega-3 com propriedade antiproliferativa em diferentes tipos tumorais, inclusive na próstata, cujos mecanismos ainda não estão esclarecidos, mas parecem envolver o metabolismo celular. Este trabalho avaliou a propriedade antitumoral do DHA em diferentes contextos androgênicos do CaP e os mecanismos subjacentes, associados à modulação do metabolismo tumoral. Primeiramente, avaliamos o potencial do DHA em reduzir o crescimento celular associado à regulação da via androgênica, de sensores metabólicos que co-regulam morte e proliferação celular, como também a mitocondrial. Para isso, foram utilizadas células epiteliais prostáticas humanas pré-maligna (PNT1A, AR-positiva) e tumorais resistentes à castração (CRPC) 22rv1 (AR-positiva) e PC3 (AR-negativa). O DHA (100µM, 48h) modulou o crescimento celular diferentemente, reduzindo a fase S e induzindo morte celular nas AR-positivas, enquanto provocou parada do ciclo em G2/M na AR-negativa. Nestas linhagens, este ômega-3 induziu estresse oxidativo, acúmulo lipídico e disfunção mitocondrial. A PNT1A mostrou-se mais responsiva quanto à regulação de genes envolvidos com o metabolismo, resposta a hormônios, estresse, como também na fisiologia mitocondrial. Apesar de menor quantidade, o DHA desregulou genes nas células malignas que estão frequentemente alterados de forma oposta no CaP. Na PNT1A, o ômega-3 ainda prejudicou a biogênese mitocondrial e provocou a fragmentação da sua rede. Em seguida, nas mesmas condições experimentais, foi avaliado o metabolismo lipídico em células tumorais malignas AR-positivas LNCaP, andrógeno-responsiva, C4-2 e 22rv1, ambas CRPC. O DHA induziu parada do ciclo celular em todas as linhagens, sendo incorporado em triacilgliceróis e ésteres de colesterol, como também em fosfolipídios com consequente aumento da insaturação na membrana celular, o que sensibiliza células a danos oxidativos. Tal incorporação foi acompanhada de menor regulação da via lipogênica, lipogênese a partir de glicose e redução proteica de FASN. Além disso, o DHA estimulou a oxidação de ácidos graxos, sendo que a linhagem 22rv1 apresentou preferência pelo ômega-3. A redução da lipogênese não ocorreu devido à regulação da via androgênica, mesmo com redução da expressão proteica de AR-FL e AR-V7. Tendo em vista os desafios terapêuticos do CRPC, avaliamos o efeito do DHA sobre o crescimento de organoides MSK-PCa3 e em modelo xenográfico com a linhagem 22rv1 (DHA 10mg/kg/dia/28 dias), o qual teve seu diâmetro reduzido e o crescimento tumoral inibido, respectivamente. Por fim, testamos o efeito simultâneo do DHA e inibidores da lipogênese (FASNi/ACCi-100nM/28 dias) e observamos potencialização na redução do diâmetro dos organoides. A administração de FASNi (100mg/mL/28 dias) e DHA reduziu o crescimento do tumor em mais de 80%. Em conclusão, o DHA é um agente antitumoral multialvo em diferentes contextos androgênicos por vias que culminam na parada do ciclo ou indução de morte celular, associadas ao metabolismo, sendo a mitocondrial prevalente em estágio inicial e o metabolismo lipídico em estágios avançados do CaP Abstract: Metabolic reprogramming during carcinogenesis supports the increased anabolic and energetic demand in proliferating cells. Such adjustment is also observed in the prostate cancer (PCa), mainly the dysregulation of mitochondria and lipogenesis, both vulnerabilities often explored as therapeutic strategies. Docosahexaenoic acid (DHA) is an omega-3 polyunsaturated fatty acid with antiproliferative property in different cancers, including prostate, but the mechanisms are not elucidated yet and seem to be related with cell metabolism regulation. This study evaluated the DHA antitumoral property on distinct androgenic contexts of PCa and the underlying mechanisms, associated with tumor metabolism. Firstly, we tested the DHA potential in decrease cell growth due to regulation of the androgenic pathway, metabolic sensors that also co-regulate death and proliferative pathways, in addition to induce mitochondria dysfunction. For this purpose, we incubated with DHA at 100µM for 48h human epithelial prostate cells from pre-malignant, (PNT1A, AR-positive) and castrated-resistant stage (CRPC) 22rv1 (AR-positive) and PC3 (AR-negative). DHA differently modulated the cell growth by reducing S-phase and inducing cell death in AR-positive while led AR-negative to cell cycle arrest in G2/M. In these cell lines, the omega-3 raised oxidative stress, lipid accumulation and mitochondrial dysfunction. PNT1A was more responsive regarding to regulation of genes related with metabolism, response to hormones and stress as well as mitochondrial physiology. In 22rv1 and PC3, DHA regulated less genes compared to PNT1A, but they are often altered in PCa samples. In PNT1A, the omega-3 also impaired mitochondrial biogenesis and led to its network fragmentation. Secondly, under same experimental conditions, we evaluated the lipid metabolism in AR-positive malignant cells LNCaP (androgen-responsive), C4-2 and 22rv1, both CRPC. DHA induced cell cycle arrest on these cell lines, being incorporated into triacylglycerol and cholesterol esters as well as phospholipids, which showed increase in unsaturation status hence in the cell membrane, turning cells prone to oxidative damage. Such incorporation was followed by downregulation of the lipogenic pathway, lipogenesis from glucose and reduction of FASN protein levels. Moreover, DHA stimulated fatty acids oxidation, being 22rv1 the cell line with preference for the omega-3 itself. Lipogenesis impairment was not due to androgenic pathway regulation, even though DHA decreased AR-FL and AR-V7 protein levels. Considering the therapeutic challenges of the CRPC stage, we evaluated the DHA effect on MSK-PCa3 organoids growth and 22rv1 xenografts (DHA 10mg/kg/day/28 days). It decreased the organoids diameter and suppressed tumor growth, respectively. Lastly, we tested the concomitant administration of DHA with lipogenesis inhibitors (FASNi/ACCi-100nM/28 days) and observed an enhancement in the reduction of organoids diameters. The FASNi (100mg/mL/28 days) and DHA administration reduced tumor growth in at least 80%. In conclusion, DHA is an antitumor agent at different androgenic contexts and has several targets that culminate in cell cycle arrest and cell death induction. The involved pathways are associated with the metabolism, being mitochondria the major one at early stages and the lipid metabolism in the advanced PCa Doutorado Biologia Celular Doutor em Biologia Celular e Estrutural CAPES 001 FAPESP 2018/21891-4

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2021. Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) e Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES). O vírus Zika (ZIKV) possui um intenso tropismo por células neurais e tem sido correlacionado com o desenvolvimento agravos neurológicos pós-infecção. Além disso, a infecção por este vírus está associada ao estabelecimento de uma neuroinflamação intensa, sendo esta majoritariamente orquestrada por células microgliais. O impacto negativo da infecção pelo ZIKV no Sistema Nervoso Central (SNC) é amplamente caracterizado na literatura. Contudo, a aplicação de moléculas capazes de proteger contra os efeitos citotóxicos causados por este vírus ainda é necessária. Neste contexto, tem sido extensamente demonstrado que o Ácido Docosahexaenoico (DHA), um ácido-graxo poli-insaturado de ômega-3, é altamente neuroprotetor e desempenha diferentes funções essenciais para a homeostase do SNC. Portanto, neste trabalho, nós investigamos o papel protetor do DHA contra a patogênese do ZIKV em células SH-SY5Y, utilizadas como neuronal-like cells, e em células microgliais humanas. Nossos dados demonstraram que o pré-tratamento com DHA foi capaz de aumentar a viabilidade e proliferação de células SH-SY5Y infectadas com ZIKV, bem como de reduzir a produção de citocinas pró-inflamatórias produzidas durante a infecção. O DHA também foi capaz de restaurar a função mitocondrial e prevenir contra o estresse oxidativo que foram induzidos pelo ZIKV. Em células microgliais, o DHA reduziu a proliferação, biogênese de corpúsculos lipídicos, produção de espécies reativas e produção de citocinas pró-inflamatórias durante a infecção do ZIKV. Além disso, o DHA modulou importantes marcadores de membrana associados à função regulatória e de apresentação de antígenos pela micróglia. Investigando acerca de alterações metabólicas durante a infecção, demonstramos que tanto o ZIKV como o DHA modulam intermediários do ciclo do ácido cítrico e o perfil metabólico global da micróglia. Ademais, o DHA foi capaz de reduzir a carga viral tanto das células microgliais, quanto das neuronais. Em conjunto, esses dados demonstram que o DHA possui um potencial neuroprotetor, imunomodulador e antiviral, sendo uma molécula promissora para intervenções terapêuticas contra a infecção do ZIKV. Zika virus (ZIKV) has a major tropism for neural cells and has been correlated with post-infection neurological syndromes. Furthermore, this viral infection can lead to the establishment of exacerbated neuroinflammation, which is mostly driven by microglial cells. The negative impact of ZIKV infection on the Central Nervous System (CNS) is widely characterized. However, the application of molecules capable of protecting against cytotoxic effects caused by this virus still is necessary. In this context, it has been extensively demonstrated that Docosahexaenoic Acid (DHA), a polyunsaturated omega 3 fatty acid, is highly neuroprotective and orchestrates essential functions for CNS homeostasis. Therefore, in the present work, we investigated the protective roles of DHA against ZIKV pathogenesis using SH-SY5Y, a neuronal-like cell, and human microglial cells. Our data showed that pretreatment with DHA prior to infection was able to improve viability and proliferation of SH-SY5Y cells, and to reduce cell death, pro-inflammatory cytokines and chemokines induced by ZIKV. DHA pretreatment was also able to restore mitochondrial function and prevent against oxidative stress that were induced by ZIKV infection. In microglial cells, DHA reduced proliferation, lipid droplet biogenesis, reactive species production and pro-inflammatory agents. In addition, DHA modulated important membrane markers associated with the regulatory function and presentation of peptide and lipid antigens by microglia. Investigating about metabolic shifts during ZIKV infection, we demonstrated that both ZIKV and DHA modulate citric acid cycle intermediates and the global metabolic profile of microglial cells. Furthermore, DHA was able to reduce viral load in both microglial and neuronal cells. Taken together, these data demonstrate that DHA has a neuroprotective, immunomodulatory and antiviral potential, being a promising molecule for therapeutic strategies against ZIKV infection.

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Universitário Egas Moniz Os ácidos gordos ómega-3, nomeadamente o ácido eicosapentaenóico e o ácido docosahexaenóico, encontram-se maioritariamente no pescado e possuem propriedades anti-inflamatórias reconhecidas, sendo precursores da síntese de eicosanóides, como as prostaglandinas, os leucotrienos e os tromboxanos, e de outros mediadores anti-inflamatórios, como as resolvinas, protetinas e maresinas. Devido aos seus efeitos anti-inflamatórios, estes ácidos podem ser benéficos no tratamento sintomatológico de doenças inflamatórias como as doenças reumáticas. Esta hipótese levaria a uma diminuição da utilização de medicamentos anti-inflamatórios por parte dos doentes e, consequentemente, dos seus efeitos adversos. O objetivo desta dissertação foi perceber de que forma os ácidos gordos ómega-3 podem exercer um papel importante na terapêutica das doenças reumáticas, evidenciando as patologias mais propensas à sua utilização. Para tal, foi efetuada uma revisão bibliográfica através de diversas bases de dados científicas, como o Pubmed, o ScienceDirect, a Cochrane Library e o Google Académico. Ao longo dos últimos anos foram realizados diversos estudos sobre os efeitos dos ácidos gordos ómega-3 nas doenças reumáticas, principalmente na artrite reumatóide. Muitos estudos demonstraram que a suplementação rica em ácidos gordos ómega-3 é benéfica como terapêutica adjuvante da artrite reumatóide, provocando uma diminuição dos principais sintomas da doença, como a dor, a inflamação nas articulações e a rigidez matinal e, consequentemente, uma redução da utilização de fármacos como anti-inflamatórios não esteróides. Adicionalmente, foram demonstrados efeitos positivos da suplementação de ácidos gordos ómega-3 na osteoartrose, na artrite idiopática juvenil, no lúpus eritematoso sistémico e na espondilite anquilosante, sendo os efeitos mais comuns a redução de marcadores inflamatórios e a diminuição da atividade da doença. Omega-3 fatty acids, like eicosapentaenoic and docosahexaenoic acids, are found mainly in fish products and have anti-inflammatory properties. These acids are precursors to the synthesis of eicosanoids, such as prostaglandins, leukotrienes and thromboxanes, and others anti-inflammatory mediators, like resolvins, protetins and maresins. Due to their anti-inflammatory effects, these fatty acids can be beneficial in the symptomatic treatment of inflammatory diseases such as rheumatic disorders. This hypothesis could decrease the anti-inflammatory drugs use, by patients and, consequently, their adverse effects. The goal of this work was to better understand how omega-3 fatty acids can play an important role in the treatment of rheumatic diseases, highlighting the disorders that would most likely benefit. A bibliographic review was carried using several scientific databases, such as Pubmed, ScienceDirect, Cochrane Library and Google Scholar. Over the past few years, several studies have studied the omega-3 fatty acids effects in rheumatic diseases, mainly in rheumatoid arthritis. The studies have shown that a rich supplementation of this fatty acids is beneficial as complement to the rheumatoid arthritis´s therapy. The omega-3 fatty acids can reduce several symptoms of the disease, like pain, joint inflammation and morning stiffness. As consequence, the use of drugs like non-steroidal anti-inflammatories would be less. Additionally, positive effects of omega-3 supplementation have been demonstrated on osteoarthritis, juvenile idiopathic arthritis, systemic lupus erythematosus and ankylosing spondylitis, with the most common effects being the reduction of inflammatory markers and decreased disease activity.

Orientador: Luiz Osório Leiria Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Em resposta a exposição ao frio, organismos endotérmicos ajustam seu metabolismo para indução da produção de calor a fim de manter a temperatura corpórea adequada. Para que essa modulação se dê de forma eficiente, os tecidos de um organismo se comunicam através de moléculas sinalizatórias. Os lipídeos, além de atuarem como fonte energética, também podem atuar como essas moléculas sinalizatórias, sendo, nesse contexto, chamados de lipocinas. Durante a exposição ao frio, o tecido adiposo libera ácidos graxos, através de lipólise, que são consumidos como substrato energético. Esse tecido também libera lipocinas, como o 12,13-diHOME e o 12-HEPE, os quais estimulam a captação de ácidos graxos e glicose de forma autócrina e endócrina. No entanto, pouco se sabe sobre a natureza de outras lipocinas liberadas pelo tecido adiposo. Devido a isso, e a dados preliminares do nosso grupo, que mostraram que a exposição ao frio em camundongos induz um aumento nos níveis de ácido docosahexaenoico (DHA) no fígado, ao mesmo tempo em que ocorre uma diminuição do mesmo no tecido adiposo, esse trabalho teve como objetivo investigar se o DHA pode agir como uma lipocina anti-lipogênica liberada pelo tecido adiposo durante a exposição ao frio. O trabalho indica que o DHA, captado no fígado, age para diminuir o acúmulo de triacilglicerois (TAG) nesse órgão pela regulação negativa da via responsável pela síntese de ácidos graxos a partir de carboidratos, via chamada de de novo lipogênese (DNL). Nossos dados também sugerem que esse DHA é proveniente de uma maior conversão de seu precursor, o ácido ?-linolênico (C18:3, ALA), devido ao aumento da expressão gênica de Fads2, enzima essencial nessa conversão, no tecido adiposo de animais expostos ao frio (4ºC). Para mostrar o papel do DHA como uma lipocina, utilizamos um experimento em time course, o qual camundongos foram expostos ao frio por diferentes períodos. Isso nos permitiu confirmar que o tempo necessário para que ocorresse o aumento dos níveis de DHA no fígado é o mesmo tempo necessário para que ocorresse a diminuição de ALA no tecido adiposo. Além disso, o tempo em que houve aumento de DHA no fígado também coincidiu com o tempo necessário para a diminuição da transcrição de genes relativos a DNL hepática, alvos conhecidos da ação do DHA. Adicionalmente, também obtivemos maiores consumos de oxigênios pelos complexos mitocondriais no fígado de animais expostos, o que sugere maior oxidação de ácidos graxos. Esses resultados parecem justificar a diminuição do acúmulo de TAGs mensurada nesse órgão. Com isso, nossos dados sugerem que o DHA é sintetizado e transportado do tecido adiposo ao fígado para modular negativamente a produção hepática de TAG durante a exposição ao frio Abstract: During cold exposure, endothermic organisms, such as mammals, fine tune their metabolism to induce a process called thermogenesis. The main purpose of thermogenesis is to convert chemical energy from macronutrients into heat, in order to maintain body temperature. For an efficient modulation of the metabolism, the different tissues of an organism communicate with each other through signaling molecules. In addition to their rule as an energy substrate, lipids can also act as signaling molecules. In this context, lipids are called lipokines. During cold exposure, adipose tissue releases fatty acids, through lipolysis, which are consumed as an energy substrate, and lipokines, such as 12,13-diHOME and 12-HEPE, which stimulate the uptake of fatty acids and glucose in an autocrine or endocrine manner. Therefore, this work aimed to investigate whether the docosahexaenoic acid (DHA), an omega-3 polyunsaturated fatty acid (n-3 PUFA), can act as lipokine release by adipose tissue during cold exposure. Our preliminary data indicates that mice exposed to cold show an increase in DHA levels in the liver and a decrease in DHA levels in adipose tissue. This suggested a transport of DHA from adipose tissue to the liver. Our work also indicates that DHA captured in the liver, acts to decrease the accumulation of triacylglycerols (TAG) in the liver by the downregulation of the metabolic pathway responsible for the synthesis of fatty acids from carbohydrates, pathway called de novo lipogenesis (DNL). In the adipose tissue, our data suggest that DHA is provided from a previous conversion of ?-linolenic acid (C18:3, ALA) into DHA in white adipose tissue, via Sprecher pathway, since we observed an increased expression in the Fads2 gene, an essential enzyme in this pathway. To show the role of DHA as a lipokine, we used a time course experiment, in which mice were exposed to 4o C at different periods. This experiment showed that the time required for the increase in DHA levels in the liver was the same time required for the decrease in ALA in adipose tissue and the increase in Fads2 expression. Also, at the same time-point, we found a decrease in the transcription of genes related to hepatic DNL, known targets of the action of DHA in the liver. Additionally, we also obtained higher oxygen consumption by the mitochondrial complexes in the liver of exposed animals, which suggests greater oxidation of fatty acids caused by the inhibition of DNL. These results seem to justify the decrease in the accumulation of TAGs measured in the liver. Thus, our data suggest that DHA is synthesized and transported from adipose tissue to the liver to downregulate hepatic TAG production during cold exposure Mestrado Bioquímica Mestre em Biologia Funcional e Molecular FAPESP 2018/25053-3 CNPQ 157274/2018-7 CAPES 001

RESUMEN: Las necesidades de ácido docosahexaenoico (DHA), se incrementan en la mujer gestante para el desarrollo visual y neurológico del feto y el lactante. En este trabajo, se desarrolló y se evaluó un yogur adicionado con aceite de microalgas, que contribuyera a la recomendación dietaria de DHA en mujeres gestantes y lactantes. Se diseñaron tres formulaciones de yogur con 0,075; 0,125 y 0,175% de aceite de microalga y se compararon con una muestra control. Se evaluaron propiedades fisicoquímicas, sensoriales, microbiológicas, perfil de ácidos grasos, potencial antioxidante (ABTS, fenoles totales) y peroxidación lipídica (sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico [TBARS]). Los yogures adicionados con el aceite de microalga cubrieron en 30, 45 y 63% las recomendaciones de DHA para mujeres gestantes y lactantes por porción (200 mL). Se observó estabilidad del ácido graso, excepto en la muestra de mayor adición del aceite. La muestra con adición de 0,125% de aceite de microalga fue la de mejor calificación por el panel sensorial. Todas las muestras cumplieron con el estándar microbiológico y fisicoquímico para un yogur entero adicionado con dulce. Se observó potencial antioxidante promisorio en el yogur, capaz de proteger el DHA. Se concluye que las bebidas lácteas como el yogur son matrices adecuadas para la adición de aceite de microalga con la finalidad de aumentar el DHA en la dieta, especialmente en etapas en que las necesidades de este componente son más altas, como en periodo de gestación y lactancia. ABSTRACT: The needs for docosahexaenoic acid (DHA) are increased during pregnancy for the visual and neurological development of the fetus and the breastfed infant. In this study, a yogurt with microalgae oil added to contribute to the dietary recommendation of DHA in pregnant and breastfeeding women was developed and evaluated. Three yogurt formulations were designed with 0.075; 0.125 and 0.175 microalgae oil percentage and compared with a control sample. Fatty acid profile, antioxidant potential (ABTS, total phenols), lipid peroxidation (thiobarbitrical acid reactive substances [TBARS]), physicochemical, sensory, and microbiological properties were evaluated. Yogurts with microalgae oil added covered 30, 45 and 63% of DHA recommendations for pregnant and breastfeeding women per portion (200 mL). Fat acid stability was observed, except in the one with the greatest oil addition. The sample with 0.125% of microalgae oil added was rated the highest by the sensory panel. All samples met the microbiological and physicochemical standard for a whole yogurt added with sugar. Promising antioxidant potential capable of protecting DHA was observed in the yogurt. We conclude that dairy drinks such as yogurt are suitable matrices for adding microalgae oil in order to increase DHA in the diet, especially in stages where the needs of this component are higher as is the case during pregnancy and lactation periods. COL0000407

Looking for alternative sources in animal nutrition, microalgae began to be explored, gaining space in commercial production. The aim of this review is to present available information about the use of microalgae in animal nutrition, as well as its effect and applications. Many microalgae are important sources of polyunsaturated fatty acids (PUFA), mainly eicosapentaenoic acid (EPA) and docosahexaenoic acid (DHA). These PUFA is poorly synthesized by animals, so they should be included in their diet. In addition, they are a rich source of almost all of the important minerals as well as vitamins. Additionally, some microalgae generally have a high protein content and high digestibility. In this context, microalgae already available on the market, become an alternative replacing conventional ingredients. To our knowledge, the use of small amounts of microalgae biomass in the feed can benefit the physiology of the animals, improving the immune response, resistance to diseases, antiviral and antibacterial action, intestinal function, and stimulation of probiotic colonization. In general, the addition of these compounds to the diets of animals enhances their overall health and immune status, productivity, and the quality and stability of the resulting animal products. Although the use of microalgae is increasingly directed towards many types of animals: cats, dogs, ornamental fish, horses, poultry, swine, sheep, and cow, studies still need to be explored. En la búsqueda de fuentes alternativas en la nutrición animal, se comenzaron a explorar las microalgas, ganando terreno en la producción comercial. El objetivo de esta revisión es presentar la información disponible sobre el uso de microalgas en la nutrición animal, así como su efecto y aplicación. Muchas microalgas son fuentes importantes de ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga (AGCL), principalmente ácido eicosapentaenoico (EPA) y docosahexaenoico (DHA). Estos AGCL son mal sintetizados por los animales, por lo que deben incluirse en la dieta diaria. Además, son una rica fuente de casi todos los minerales fundamentales, también de ser abundantes en vitaminas. Adicionalmente, algunas microalgas suelen tener un alto contenido de proteínas, además de una alta digestibilidad. En este contexto, las microalgas ya disponibles en el mercado, se convierten en una alternativa a la sustitución de ingredientes convencionales. Hasta donde sabemos, el uso de pequeñas cantidades de biomasa de microalgas en la alimentación puede beneficiar la fisiología de los animales, mejorando la respuesta inmune, la resistencia a enfermedades, la acción antiviral y antibacteriana, la función intestinal y estimulando la colonización prebiótica. En general, la adición de estos compuestos a las dietas de los animales mejora la salud general y el estado inmunológico, la productividad y la calidad y estabilidad de los productos animales resultantes. Aunque el uso de microalgas está cada vez más dirigido a diferentes tipos de animales: gatos, perros, peces ornamentales, caballos, aves de corral, cerdos, ovejas y vacas, aún quedan por explorar estudios. Em busca por fontes alternativas na nutrição animal, as microalgas começaram a ser exploradas, ganhando espaço na produção comercial. O objetivo desta revisão é apresentar as informações disponíveis sobre o uso de microalgas na alimentação animal, bem como seu efeito e aplicação. Muitas microalgas são fontes importantes de ácidos graxos poliinsaturados (PUFA), principalmente ácido eicosapentaenóico (EPA) e ácido docosahexaenóico (DHA). Esses PUFA são mal sintetizados pelos animais, por isso devem ser incluídos na dieta diária. Além disso, eles são uma fonte rica em quase todos os minerais importantes, além de serem abundantes em vitaminas. Além disso, algumas microalgas geralmente apresentam alto teor de proteínas, além de alta digestibilidade. Nesse contexto, as microalgas já disponíveis no mercado, passam a ser uma alternativa em substituição aos ingredientes convencionais. Até onde sabemos, a utilização de pequenas quantidades de biomassa de microalgas na ração pode beneficiar a fisiologia dos animais, melhorando a resposta imune, resistência a doenças, ação antiviral e antibacteriana, função intestinal e estímulo à colonização probiótica. Em geral, a adição desses compostos às dietas dos animais melhora a saúde geral e o estado imunológico, a produtividade e a qualidade e estabilidade dos produtos animais resultantes. Embora o uso de microalgas seja cada vez mais direcionado a diversos tipos de animais: gatos, cães, peixes ornamentais, cavalos, aves, suínos, ovelhas e vacas, estudos ainda precisam ser explorados.

Se realizó una revisión de los trabajos publicados sobre los efectos del consumo de ácidos grasos omega-3, (ácido alfa-linolénico (AAL), ácido docosahexaenoico (ADH) y ácido eicosapentaenoico (AEP)) sobre la salud de las personas en diferentes periodos de la vida. Se discuten los beneficios obtenidos en el ámbito de la salud sobre los sistemas circulatorio y nervioso. Se mencionan diferentes fuentes alimenticias de origen animal y vegetal en las que se encuentran disponibles los ácidos grasos omega-3, especialmente ADH y AEP. Se encontró que muchos de los tratamientos actuales de trastornos del sistema nervioso y de problemas cognitivos involucran el consumo de ácidos grasos omega-3, dando resultados positivos en diversos cuadros clínicos.

The objective was to reduce saturated fatty acids (SFA) and increase conjugated linoleic acid (CLA, cis- 9, trans -11 C18:2), α-linolenic (cis- 9, cis- 12, cis- 15 C18:3) and docosahexaenoic (DHA, C22:6) contents in milk from confined dairy cows in order to promote a healthier option. The work was carried out in a commercial farm (Talar) located in Laguna del Sauce, Maldonado (Uruguay). Twenty four cows were assigned to one of two treatments (12 cows per treatment) over a 6 weeks experimental period. Treatments consisted in a control total mixed ration (C-TMR) without supplementary lipids (L) or the same TMR with the addition of 0.144 kg/cow∙day of algae and 0.72 kg/cow∙day of soybean oil (L-TMR). Chemical composition of the TMR (44.27% DM) averaged 15.94% for crude protein (CP), 38.20% neutral detergent fiber (NDF), 20.36% acid detergent fiber (ADF), 5.56% fat, 5.30% ash and 28.6% nonstructural carbohydrate (NSCH) with 1.81 Mcal/kg of net energy for lactation (NEL). After 39 days of feeding, individual milk samples were collected during three consecutive days. From the total milk collected, 20 ml were immediately used for chemical composition (Milko Scan) and 80 ml for analysis for milk FA profile. From week 3 onwards, milk production (kg/cow∙day) resulted higher (P < 0.001) in L-TMR (36.9) compared to C-TMR (35.2). At week 6 of trial, the difference in milk production averaged 5.14% for L-TMR. Supplementary lipids reduced (P < 0.002) milk fat concentration (g/100g) from 3.36 in C-TMR to 2.40 in L-TMR without effect (P = 0.43) on milk protein content (C-TMR = 3.20; L-TMR = 3.07 g/100g). Milk lactose (C-TMR = 4.86, L-TMR = 4.69 g/100g) and urea nitrogen contents (C-TMR = 21.18, L-TMR = 17.33 g/100g) tended (P < 0.056) to decrease in L-TMR as well as fat corrected milk output (C-TMR = 30.89, L-TMR = 29.49 kg/cow∙day, P < 0.098). Lipid supplementation reduced (−23%) milk content of C12:0 to C16:0 FA averaging 45.19 in C-TMR and 34.74 g/100g in L-TMR (P < 0.001). The atherogenic index (AI) of milk decreased (P < 0.001) from 2.69 in C-TMR to 1.50 in L-TMR (−44.2%). Concentration (g/100g) of elaidic (C18:1 trans -9) (0.23) and C18:1 trans -10 (0.44) FA increased (P < 0.001) in L-TMR milk. Milk vaccenic acid (trans- 11 C18:1, VA) increased from 1.08 in C-TMR to 2.56 g/100g of FA in L-TMR (P < 0.001). Milk CLA content (cis- 9, trans- 11 C18:2) increased (127%) from 0.62 in C-TMR to 1.41 g/100g FA in L-TMR milk. Content of α-linolenic acid resulted 20% higher (P < 0.001) in L-TMR milk (0.35 g/100g FA) compared to C-TMR (0.30 g/100g FA). Milk DHA increased from 0 in C-TMR to 0.14 g/100g FA in L-TMR. The omega-6/-3 ratio in C-TMR milk (9.61) was reduced (P < 0.001) to 6.78 in L-TMR milk. Milk oleic acid (cis -9 C18:1) resulted higher (P < 0.001) in L-TMR (23.65) than in C-TMR (19.75 g/100g FA). The nutritional value of milk fat from confined cows was naturally improved by feeding polyunsaturated FA in the ration, obtaining a reduction of saturated FA and increased levels of healthy FA (CLA, DHA and α-linolenic). Fil: Gagliostro, Gerardo Antonio. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Balcarce. Area de Producción Animal; Argentina. Fil: Antonacci, Liliana Elisabet. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Balcarce. Area de Producción Animal; Argentina. Fil: Perez, Carolina Daiana. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto Tecnología de Alimentos; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Fil: Rossetti, Luciana. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto Tecnología de Alimentos; Argentina. Fil: Carabajal, Augusto. Establecimiento Agroindustrial Talar. Laguna del Sauce. Departamento de Maldonado; Uruguay

En la revisión de la solicitud presentada respecto al producto dietético ácidos grasos poliinsaturados omega3 (ácido docosahexaenoico (DHA) y eicosapentaenoico (EPA)) tableta, debe indicarse que éste no está considerado como medicamento sino como un suplemento dietético nutricional y dada su naturaleza no se corresponde su evaluación en el marco de este proceso; por este motivo el Equipo Técnico acuerda desestimar la solicitud.

RESUMEN El estudio focalizado en dilucidar el rol neuroprotector del ARA y del DHA a lo largo del ciclo vital ha cobrado cada vez más interés puesto que se continúan descubriendo mecanismos mediante los cuales estos ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga (AGPICL) modulan el metabolismo. Tanto el ARA como el DHA se encuentran depositados en los lípidos de las membranas de las células que forman la materia gris y representan aproximadamente el 25% del contenido total de ácidos grasos cerebrales. El ARA y el DHA tienen efectos sobre el crecimiento y la diferenciación neuronal a través de la modulación de las propiedades físicas de la membrana, de la transducción de señales asociada a proteínas G y la modulación de la expresión génica, adquiriendo un rol relevante en la neuro-génesis y el desarrollo cerebral. Además, se les atribuye un rol neuroprotector en patologías neurodegenerativas como la enfermedad de Alzheimer y la enfermedad de Parkinson, pudiendo disminuir la disfunción mitocondrial, la neuro-inflamación y el estrés oxidativo, expresiones características de estas patologías. La presente revisión analiza y discute acerca del rol del ARA y del DHA en la neuro-protección y en la neurodegeneración a través de una visión integradora.

RESUMEN: Algunas bacterias marinas, como Moritella marina, son capaces de producir ácido docosahexaenoico (DHA) gracias a un complejo enzimático llamado complejo Pfa. Este complejo expresado en Escherichia coli es capaz de producir DHA. El objetivo de esta tesis es encontrar las condiciones genéticas y metabólicas para mejorar la producción de DHA en E. coli u otros organismos. Primeramente, se estudió el patrón de expresión de los promotores nativos, que fueron reemplazados por promotores fuertes e inducibles con el objetivo de incrementar la expresión de los genes, y finalmente de DHA. En segundo lugar, se estudió la alteración de los flujos metabólicos y se optimizó la disponibilidad de sustratos mediante la adición del inhibidor cerulenina, y la deleción del gen fabH. En tercer lugar, se implementaron distintos mecanismos de acumulación del producto final. Por último, se mejoró el crecimiento de E. coli a bajas temperaturas mediante el uso de chaperoninas psicrófilas con el objetivo de restaurar la actividad chaperona. Todas estas aproximaciones han incrementado la eficiencia final del proceso de síntesis de DHA y otros ácidos grasos poliinsaturados. ABSTRACT: Some marine bacteria, such as Moritella marina, are able to produce certain amounts of the nutraceutical docosahexaenoic acid (DHA) thanks to a specific enzymatic complex called Pfa synthase. Moreover, Escherichia coli heterologously expressing this pfa gene cluster from M. marina is also able to produce DHA. The aim of this study was to find genetic or metabolic conditions to improve DHA production in E. coli or any other microorganism. Firstly, we studied native promoter expression pattern in E.coli and replaced these promoters by inducible pBAD system in order to increase the production of the final product. Secondly, we altered the canonical carbon flux in E.coli to improve the availability of substrates for Pfa complex by two strategies: using the exogenous compound cerulenin, and deleting the main initiation enzyme of a competing pathway. Both strategies exploit a substrate competition mechanism between the native fatty acid synthase from E.coli and the heterologous Pfa complex from M.marina. Finally, we improved E.coli growth at low temperature by introducing two psychrophilic chaperonins, Cpn10 and Cpn60 from Oleispira antarctica, in order to improve protein folding. These approaches have increased the overall efficiency of this process, and could be used for biotechnological optimization in different organisms to synthesize DHA or other polyunsaturated fatty acids. El presente trabajo ha sido realizado entre el Departamento de Biología Molecular de la Universidad de Cantabria y el Departamento de Microbiología y Genómica del Instituto de Biomedicina y Biotecnología de Cantabria, bajo la dirección del Dr. Fernando de la Cruz Calahorra y el Dr. Gabriel Moncalián Montes, gracias a un contrato de la Universidad de Cantabria asociado a los proyectos “Ingeniería Genética de Escherichia coli para mejorar la producción de lípidos ricos en ácidos Grasos omega-3” (TF16-XX-003 - SODERCAN/FEDER) y “Producción de ácidos grasos omega-3 a partir de microorganismos” (2014) en colaboración con la empresa Biomar Microbial Technologies.

RESUMEN El estudio focalizado en dilucidar el rol neuroprotector del ARA y del DHA a lo largo del ciclo vital ha cobrado cada vez más interés puesto que se continúan descubriendo mecanismos mediante los cuales estos ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga (AGPICL) modulan el metabolismo. Tanto el ARA como el DHA se encuentran depositados en los lípidos de las membranas de las células que forman la materia gris y representan aproximadamente el 25% del contenido total de ácidos grasos cerebrales. El ARA y el DHA tienen efectos sobre el crecimiento y la diferenciación neuronal a través de la modulación de las propiedades físicas de la membrana, de la transducción de señales asociada a proteínas G y la modulación de la expresión génica, adquiriendo un rol relevante en la neuro-génesis y el desarrollo cerebral. Además, se les atribuye un rol neuroprotector en patologías neurodegenerativas como la enfermedad de Alzheimer y la enfermedad de Parkinson, pudiendo disminuir la disfunción mitocondrial, la neuro-inflamación y el estrés oxidativo, expresiones características de estas patologías. La presente revisión analiza y discute acerca del rol del ARA y del DHA en la neuro-protección y en la neurodegeneración a través de una visión integradora. ABSTRACT The study focused on elucidating the neuro-protective effects of ARA and DHA throughout the life cycle has become of increasingly interest since the continue discovering of mechanisms by which these long-chain polyunsaturated fatty acids (LCPUFA) modulate the metabolism. Both ARA and DHA are deposited into the membrane lipids of the cells that form the gray matter of the brain and represent approximately 25% of the total content of cerebral fatty acids. ARA and DHA have effects on the growth and neuronal differentiation through the modulation of the physical properties of the membrane, the signal transduction associated to G proteins and by the modulation of gene expression, acquiring a relevant role in neurogenesis and brain development. In addition, it is attributed to these fatty acids a neuro-protective role in neurodegenerative pathologies such as Alzheimer's disease and Parkinson's disease by decreasing the mitochondrial dysfunction, neuroinflammation and oxidative stress, characteristic of these pathologies. This review analyzes and discusses the role of ARA and DHA in neuro-protection and neuro-degeneration through an integrative vision.

RESUMEN OBJETIVOS: Evaluar los efectos del consumo de ácidos grasos omega 3 en forma de suplementos, complementos o alimentos sobre la función cognitiva de los adultos. MÉTODOS: Se realizó una revisión de la literatura en las bases de datos Medline y Embase, buscando ensayos clínicos, estudios observacionales, revisiones sistemáticas y estudios experimentales que relacionaran los ácidos grasos omega 3 con función cognitiva y Alzheimer. RESULTADOS: La mayoría de los estudios relacionó la suplementación de cápsulas con omega 3, el consumo de pescado u otros alimentos con contenido de omega 3, con resultados en pruebas de función cognitiva, desenlace de enfermedad o imágenes diagnósticas, encontrando en general efectos benéficos, que parecen ser mayores en personas sanas y con mejor función cognitiva de base. Hubo diferencias en los resultados encontrados en los ensayos clínicos y revisiones sistemáticas, que podrían atribuirse a la variabilidad en las dosis de la suplementación, el tiempo de seguimiento y la manera en que se midió la función y el deterioro cognitivo. CONCLUSIÓN: El consumo de ácidos grasos omega 3 en forma de suplementos, complementos o alimentos ricos en estos como el pescado parece tener efectos benéficos en la función cognitiva de las personas adultas. SUMMARY OBJECTIVES: To evaluate the effects of omega 3 fatty acids consumption in the form of dietary supplement, complement or food-products presentation on adult cognitive function. METHODS: A literature review in two databases (Medline and Embase) was undertaken, searching for clinical trials, observational studies, systematic reviews and experimental studies concerning omega-3 fatty acids and their relation with cognitive function and Alzheimer's disease. RESULTS: Most studies linked supplementation with omega-3 capsules and consumption of fish and other omega-3 containing foods with results in cognitive function testing, outcomes in diseases or diagnostic imaging and found beneficial effects, which seem to be stronger in healthier persons with better cognitive function at baseline. There were differences in the results found in clinical trials and systematic reviews, which could be attributable to the variability in the supplementation dose, the length of follow-up and the methods used to assess cognitive function and decline. CONCLUSION: The use of omega-3 fatty acids in supplement, complement or food-products presentation seems to have beneficial effects in the cognitive function of healthy adults.

O objetivo deste trabalho foi determinar a dinâmica do perfil de ácidos graxos e a composição de lipídeos no músculo de fêmeas, ovócitos, larvas recém-eclodidas (LRE) e larvas na primeira alimentação (LPA) de Brycon orthotaenia e Prochilodus argenteus. Em B. orthotaenia, o lipídeo total manteve-se constante em ovócitos e larvas em diferentes estágios de desenvolvimento. A concentração de lipídeo polar (LP) foi abundante em ovócitos e LRE, enquanto para lipídeo neutro (LN) foram maiores no músculo e menores em ovócitos e LRE. Em lipídeo neutro (LN) menores percentuais de C18:2n 6, maiores de C20:4n 6 (AA ácido araquidônico) e C22:6n 3 (DHA ácido docosaexaenóico) foram encontrados em LPA (P0,05). O SFA foi maior (P0.05). The SFA was higher (P

Orientador: Rejane Maira Góes Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Os ésteres de ftalatos tais como o di-n-butil ftalato (DBP), o di-(2-etilhexil) ftalato (DEHP) e o seu metabolito ativo, mono-(2-etilhexil) ftalato (MEHP), podem exercer efeitos adversos nos hormônios reprodutivos e nas células germinativas fetais e neonatais de maneira espécie-específica. Por outro lado, o ácido docosahexaenoico (DHA - 22:6 n-3), um ácido graxo polinsaturado de cadeia longa (PUFA) ¿ abundantemente encontrado em fontes oleosas ¿ tem se mostrado benéfico para a produção de testosterona, para a espermatogênese e para a motilidade espermática. Sabe-se, também, que o MEHP e o DHA atuam nas mesmas vias metabólicas envolvidas na síntese de colesterol/lipídeos, mas de maneiras antagônicas. O presente estudo avaliou a exposição materna ao DBP sob o desenvolvimento do testículo do gerbilo da Mongólia, nas seis primeiras semanas do desenvolvimento pós-natal. Além disso, avaliou os efeitos in vitro do DHA sozinho ou em combinação com o MEHP sob o testículo fetal de camundongo, utilizando o sistema de cultura organotípica. Para tanto, os testículos de gerbilos machos nascidos de mães controle (C) ou expostas, durante a gestação, ao óleo mineral (O) ou ao DBP (100 mg/kg, do dia 8 ao dia 23 pós-concepção) foram avaliados nas idades de 1, 7, 14, 28, 35 e 42 dias. Também foram realizadas análises in vitro de testículos de camundongos de 13,5 dias pós-concepção cultivados apenas em meio de cultura (controle), seja com DHA (50?M), seja com MEHP (20?M) ou com ambos (50?M de DHA e 20?M MEHP), após 24 ou 72 horas. Nossos resultados indicaram que o DBP comprometeu a densidade de figuras mitóticas no nascimento e o número total de gonócitos (NG) aos 7 dias, além de aumentar a atividade esteroidogênica no final da primeira semana de vida do gerbilo. O óleo mineral, por sua vez, diminuiu os níveis plasmáticos de testosterona e elevou os de estrógeno nos 7o e 28o dias, respectivamente. As análises in vitro indicaram que o MEHP não alterou o número de gonócitos. No entanto, o DHA estimulou a secreção de testosterona após 72h. Esse lipídeo também induziu o extravasamento marcante de gonócitos para o tecido intersticial, um efeito pró-apoptótico das populações de células no estroma da gônada e alterações morfológicas nos cordões testiculares, após 3 dias de cultura. Sendo assim, os experimentos in vivo demonstraram que a primeira semana de vida pós-natal do gerbilo é mais sensível aos efeitos deletérios do ftalato, no tocante ao número de células germinativas e à esteroidogênese. As análises in vitro, por conseguinte, indicaram que o desenvolvimento testicular foi prejudicado pela exposição ao DHA, a qual induziu alterações degenerativas nas células de Sertoli, intensificadas quando em combinação com o MEHP Abstract: Phthalate esters such as di-n-butyl phthalate (DBP), di-(2-ethylhexyl) phthalate (DEHP) and its active metabolite, mono-(2-ethylhexyl) phthalate (MEHP), may exert adverse effects on reproductive hormones and on fetal/neonatal germ cells in a species-specific manner. On the other hand, the docosahexaenoic acid (DHA - 22:6 n-3), a long-chain polyunsaturated fatty acid (PUFA) abundantly found in oily fish sources, seems to be beneficial for testosterone production, spermatogenesis and sperm motility. It is also known that MEHP and DHA act on the same metabolic pathways involved in cholesterol/lipid synthesis but in antagonistic ways. Thus, the present study evaluated whether the maternal exposure to DBP interferes with the development of the Mongolian gerbil testis during the first six weeks of postnatal development. It evaluated the action of DHA alone or in combination with MEHP on the mouse fetal testis as well, using the organotypic culture. For this, testis of male gerbils born from control (C) or exposed pregnant mothers to mineral oil (O) or DBP (100 mg/kg from 8 to 23 days post conception) were checked at the ages of 1, 7, 14, 28, 35 and 42 days. It was also conducted in vitro analysis of mice testes at 13.5 days post-conception (dpc) cultured in medium only (controls), DHA (50µM), MEHP (20µM) or both (50µM DHA/20µM MEHP) for 24 or 72 hours. As demonstrated by our results, DBP impaired the density of mitotic figures at birth and the total number of gonocytes (NG) at 7 postnatal days, besides increasing steroidogenic activity at the end of the first week of life, in the gerbil. The mineral oil, on the other hand, decreased testosterone and raised estrogen plasmatic levels at 7 and 28 days, respectively. In vitro analisys indicated that MEHP did not change the NG. Nevertheless, DHA stimulated testosterone secretion after 72h. This lipid also induced a marked extravasation of gonocytes into the interstitial tissue, a pro-apoptotic effect of cell populations in the stroma of the gonad and morphological alterations in the testicular cords after 3 days of culture. In conclusion, the present indications provided by in vivo experiments demonstrated that the first week of the gerbil postnatal life is more sensitive to deleterious effects of phthalate on the number of germ cells and steroidogenesis. In vitro experiments, therefore, indicated that the testicular development, for the mouse, was impaired by expose to DHA, which induced degenerative alterations in the Sertoli cells, worsened when combined with MEHP Doutorado Biologia Celular Doutora em Biologia Celular e Estrutural FAPESP 2013/19591-9 BEPE

Orientadores: Rejane Maira Góes, Fernanda Ramos Gadelha, Marina Guimarães Gobbo Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O câncer de próstata está entre as cinco principais causas de morte no mundo e um dos fatores que contribuem para esse alto índice de mortalidade são as limitações no diagnóstico precoce. Neste sentido, tem-se buscado estratégias de redução dos riscos de desenvolver a patologia pela quimioprevenção. O ácido docosahexaenóico (DHA) e a melatonina (MLT) têm sido investigados como agentes antitumorais e existem fortes evidências do envolvimento das mitocôndrias nesse processo, o que até o momento não foi completamente elucidado. Neste sentido, na tentativa de testar o potencial preventivo, nosso objetivo foi avaliar se o DHA reduz a proliferação e sobrevivência de células PNT1A mediado pelo aumento do estresse oxidativo, como também se a MLT exerce o mesmo efeito modulando a bioenergética mitocondrial. Além disso, testamos também se combinados têm efeito amplificado. Primeiramente, observamos que: (1) O DHA apresentou comportamento hormético, de forma que estimulou a proliferação em menores concentrações, mas diminuiu na maior molaridade testada de 100µM para os tempos 48 e 72h; (2) a MLT exibiu efeito anticlonogênico a partir de 1µM, o que foi amplificado na co-incubação com o lipídio. O efeito antiproliferativo do DHA (100µM) e da MLT (1µM) com 48h de exposição indicaram que: (3) o ômega-3 elevou o estresse oxidativo acompanhado de aumento da área e perímetro mitocondrial, parâmetros reduzidos pela MLT; (4) a indolamina sozinha ou combinada com o lipídio melhorou a fosforilação oxidativa e recuperou a capacidade das células de responderem a situações de estresse, provocado pelo DHA; (5) A MLT estimulou e o DHA reduziu o acúmulo de glicogênio intracelular; (6) isolados ou em combinação, os tratamentos inativaram AKT, sendo que o hormônio individualmente inibiu a via do mTOR e na presença do DHA ativou a via ERK1/2; (7) o hormônio co-incubado com o DHA aumentou a expressão de GSTP1; (8) ambos os compostos não alteraram a expressão de AR, mas a MLT aumentou a captação de testosterona pelas células PNT1A; e (9) os efeitos da indolamina observados não foram dependentes de receptores MTR1 e MTR2. Por outro lado, constatamos que o DHA estimulou da proliferação celular (50µM por 48h) na maior concentração, provavelmente devido à retenção citoplasmática do PPAR?. Em conclusão, esses resultados sugerem cautela na suplementação com DHA, tendo em vista seu papel supressor ou estimulador da proliferação. Além disso, a propriedade quimiopreventiva de ambos, isolados ou em combinação, ficou evidenciada e coloca o estresse oxidativo, em especial as mitocôndrias, como importantes alvos na redução da sobrevivência de células epiteliais prostáticas com alterações pré-malignas Abstract: Prostate Cancer (PCa) is among the five main causes of death in world scenario and early diagnosis limitations may contribute to this higher mortality index. In this line, strategies have been investigated with focus on prevention and decrease of risks to develop PCa. Docosahexaenoic acid (DHA) and melatonin (MLT) have been suggested as antitumor agents and there are strong evidences of mitochondria role in their effects, but is not completely elucidated. In this context, our aim was to evaluate chemoprevention potential of DHA in decrease survivor and proliferation of PNT1A cells mediated by increase of oxidative stress, as well as if MLT exert same effect by modulating mitochondria bioenergetics. Moreover, we tested if combined they exhibited amplified effect. Firstly, we conclude that: (1) DHA exerted hormetic behavior by stimulating at lower concentrations cell proliferation and decreasing at highest molarity 100µM when exposed for 48h and 72h; (2) MLT displayed anticlonogenic effect from 1µM which was amplified when co-incubated with lipid. Antiproliferative effect of DHA (100µM) and MLT (1µM) at 48h indicated that: (3) omega-3 increased oxidative stress followed by area and mitochondrial perimeter, parameters reduced by MLT; (5) indole alone or in combination with fatty acid ameliorated oxidative phosphorylation and recovered cell capacity to respond to stress situation provoked by DHA; (5) MLT increased and DHA reduced intracellular glycogen accumulation; (6) isolated or combined, treatments inactivated AKT, MLT alone suppressed mTOR and when co-incubated activated ERK1/2 pathway; (7) hormone co-incubated with DHA increased GSTP1 expression; (8) treatments did not change AR expression, but MLT stimulated testosterone uptake by PNT1A cells; and (9) indole effects observed in our study were not dependent of MTR1 and MTR2 receptors sensitization. On the other hand, DHA increased cell proliferation (50µM-48h, the highest rate achieved), probably due to citoplasmatic retention of PPAR?. In conclusion, our results suggest wariness with DHA supplementation with regard to lipid role in encourage or inhibit cell proliferation. Besides that, both chemopreventive property, isolated or in combination, was revealed and point to oxidative stress, mainly mitochondria, as relevant targets in decrease of survivor of prostatic epithelial cells with pre-malignant alterations Mestrado Biologia Celular Mestre em Biologia Celular e Estrutural FAPESP 2015/13371-2 CAPES