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Orientador : Rosely Rocha Sharif Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Fora das regiões equatorias ocorrem variações sazonais nas condições climáticas. A suspensão e reativação do crescimento em sincronia com as estações sugerem que sinais do ambiente podem ser Interpretados e usados para controlar o desenvolvimento.Períodos de suspensão do crescimento sáo comuns à maioria das plantas sendo denominados de dormência e podem ser definidos como a habilidade de reter a viabilidade, mantendo baixa atividade metabólica, sem nenhum crescimento observável. Nos cerrados, dorméncia ocorre durante a estação seca,epoca em que os dias sáo mais curtos e as temperaturas mais baixas. Em plantas jovens de G. prostrata desenvolvendo-se no cerrado durante a primeira estação de crescImento, a entrada em dorméncia parece ocorrer como resultado de uma interaçáo entre encurtameno dos dias e a queda da temperatura no início do outono. Plantas adultas de GDmphrena prostra ta exibem um padrão fenológico marcadamente sazonal. Durante a primavera/verão, floração e brotação ocorrem de maneira sincronizada, apresentam uma periodicidade definida e são eventos aparentemente relacionados. Durante o outono/inverno, as plantas náo florescem nem brotam, embora não ocorra senescência da parte aérea. Durante a estação seca a dormência caracteriza-se como ausência de floração e brotação periódicas. As gemas nos xilopódios sào mantidas em dormência relativa, um processo de inibição correlativa exercida pela parte aérea.A entrada em dormência não está diretamente relacionada com as reduções da disponibilidade hídrica e da temperatura no Início do outono. Os resultados sugerem que a dormência é um como um fator modulador que sincroniza o ciclo do de fenômeno determinado primáriamente por um ritmo plantas. O fotoperíodo pode afetar este ritmo encurtamento dos dias no final do verão e início dormência com as estações favoráveis e desfavoráveis para o endógeno nas e assim, o outono age atividade e ou crescimento. Durante o outono/inverno, a dormência e mantida pelas condições ambientais que prevalecem neste período e o retorno das condições mais favoráveis para o crescimento na primavera podem quebrá-la. No entanto, sob condições naturais a quebra da dorméncia ocorre durante o inverno e parece depender das temperaturas baixas as quais as plantas são anualmente expostas, seguidas de um ligeiro aumento do fotoperíodo e da temperatura em julho. Com relaçáo a regulação hormonal da dorméncia dois mecanismos são propostos. Nos intervalos entre brotações sucessivas da primavera/verão e parte do outono/inverno, a dorméncia poderia ser mantida por dominância apical, um processo de inibição correlativa envolvendo auxinas. A quebra sincronizada da dorméncia no final do inverno pode envolver a participação glberelinas e acido abicisico Doutorado Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Marlies Sazima Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Neste trabalho foi realizada a revisão taxonômica, o estudo químico e micromorfológico das ceras epicuticulares, bem como estudados os processos de polinização e os polinizadores de representantes sul-americanos do gênero Cleistes. Foi, também, elaborada uma hipótese filogenética da subtribo Pogoniinae com base em caracteres morfológicos e moleculares, através do seqüenciamento das regiões ITS (nrDNA), e rps16 e trnL-F (cpDNA). O gênero Cleistes apresenta 17 espécies distribuídas entre as Américas Central e do Sul, ocorrendo principalmente em regiões de cerrado do Brasil central. Três dessas espécies foram descritas durante a elaboração do presente trabalho e estão aqui apresentadas. Através do estudo da hipótese filogenética de Pogoniinae foi verificado que essa subtribo apresenta dois clados bem sustentados. Um clado é norte-americano-asiático, e inclui os gêneros Pogonia, Isotria e as espécies norte-americanas de Cleistes. O outro é centro-sul-americano e inclui as espécies de Cleistes distribuídas entre as Américas Central e do Sul. Com o desenvolvimento do presente estudo, incluindo a maioria das espécies de Cleistes nas análises, pode ser demonstrado que esse gênero é parafilético, concordando com os dados publicados por Cameron & Chase (1999). As espécies norte-americanas de Cleistes estão mais relacionadas com os gêneros norte-americano-asiáticos Isotria e Pogonia do que com as espécies centro-sul-americanas de Cleistes. A subtribo Pogoniinae também é parafilética. O saprofítico gênero Pogoniopsis está mais relacionado com representantes dos gêneros Galeola e Cyrtosia (Galeolinae) do que com os demais gêneros pertencentes à subtribo Pogoniinae. Duckeella, um gênero endêmico da Amazônia e irmão das Pogoniinae, não apresenta os caracteres sinapomórficos que define essa subtribo, devendo ser transferido para a subtribo Duckeellinae. Espécies de Cleistes apresentam micromorfologia das ceras epicuticulares existentes nas folhas variando desde lisas, com grânulos, ou até formando placas. As ceras epicuticulares de Cleistes são constituídas principalmente por álcoois, ácidos e ésteres. A composição química das ceras epicuticulares das folhas de espécies de Cleistes é muito variável entre espécies, podendo ser usada na delimitação específica dentro do gênero. Espécies de Cleistes, assim como as demais Pogoniinae, são polinizadas principalmente por abelhas, embora C. libonii apresente beija-flores do gênero Phaethornis como co-polinizadores. Espécies sul-americanas de Cleistes apresentam picos de floração, em que todos os botões maduros de cada planta abrem simultaneamente no mesmo dia. As flores das espécies estudadas são pouco duráveis (geralmente um dia), e oferecem néctar aos polinizadores. O néctar é produzido em nectários glandulares da base do labelo das flores. Para os gêneros norte-americano-asiáticos esses nectários estão ausentes e as abelhas são atraídas às flores por engano. Esse estudo sustenta a hipótese de evolução de flores de engano para flores de néctar Abstract: The taxonomic revision, the micromorphological and chemical study of the epicuticular waxes, as well as the pollination processes and pollinators of the genus Cleistes were reported. A phylogenetic inference within Cleistes and among genera of subtribe Pogoniinae was also established, based on morphology and nrDNA (ITS) and cpDNA (trnL-F and rps16) sequence data, and using maximum parsimony. The genus Cleistes includes 17 species distributed among Central and South America, occurring mainly in ¿cerrado¿ areas of Central Brazil. Three of these species are new and were described in the present study. The phylogenetic study of Pogoniinae showed that this subtribe presents two well-supported clades. One clade is North-American-Asiatic and includes the genera Isotria, Pogonia and the North-American species of Cleistes. The other clade is Central-South-American and includes the species of Cleistes occurring in Central and South America. The genus Cleistes, in agreement to Cameron & Chase (1999), is paraphyletic. The North American species of Cleistes are more related to the North American-Asiatic genera Isotria and Pogonia than to the remaining species of Cleistes. The subtribe Pogoniinae is also paraphyletic. The saprophytic genus Pogoniopsis is more related with Galeola and Cyrtosia (Galeolinae) than to the remaining genera currently recognized within subtribe Pogoniinae. The Amazonian genus Duckeella, sister of all remainder of Pogoniinae, lacks the synapomorphic characters that define this subtribe, and should be transferred to the subtribe Duckeellinae. Species of the genus Cleistes present micromorphology of the epicuticular waxes of the leaves varying from a singular film to forming granules or platelets. The epicuticular waxes in Cleistes are constituted mainly by alcohols, acids and esters. The chemical compounds of epicuticular waxes of Cleistes were very variable among species, and may be used for specific delimitation within the genus. Species of Cleistes, as for remaining Pogoniinae, are pollinated mainly by bees, although C. libonii is co-pollinated by hermit hummingbirds. The South American species of Cleistes presents flowering peaks, in which all mature buds of each plant flowering simultaneously on the same day. The studied species produced short-lived flowers (generally one day), which offer nectar as reward produced by two nectariferous glands on the basis of the lip. For the North American-Asiatic genera these nectariferous glands are absent and the floral visitors are attracted by deceit. This study supports the evolution of deceptive flowers to nectar flowers Doutorado Biologia Vegetal Doutor em Biologia Vegetal

Orientadores: Eneida de Paula, Daniele Ribeiro de Araujo Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O controle da dor é de extrema importância em odontologia, já que a maioria dos procedimentos odontológicos envolve estímulos dolorosos. Com a descoberta dos anestésicos locais, que se caracterizam pela capacidade de abolir a dor sem a perda da consciência, deu-se um grande passo para o avanço da odontologia. Um anestésico local ideal deve apresentar ação anestésica duradoura (suficiente para os procedimentos operatórios) e baixa toxicidade. Várias pesquisas têm sido desenvolvidas com anestésicos locais objetivando prolongar a duração de seu efeito e diminuir sua toxicidade. Um caminho muito promissor foi aberto com o desenvolvimento de formulações anestésicas de liberação prolongada, utilizando carreadores como lipossomas, que mantêm o fármaco por mais tempo e em maior concentração no sítio de ação. Este trabalho teve por finalidade preparar formulações de liberação prolongada do anestésico local prilocaína, muito usado em odontologia. Objetivouse: (i) preparar prilocaína encapsulada em lipossomas; (ii) caracterizar físicoquimicamente essa formulação, (iii) avaliar a atividade terapêutica, com testes de nocicepção em animais e (iv) avaliar a formulação quanto à estabilidade e à toxicidade local. Após a preparação, testes de caracterização físico-química demonstraram a interação da prilocaína com os lipossomas. Com a técnica de Ressonância Paramagnética Eletrônica pôde-se observar um decréscimo de 11% no parâmetro de ordem da membrana lipossomal, em presença do anestésico local. Com a análise por espalhamento de luz quase-elástico (light scattering) observou-se que as vesículas lipossomais apresentaram diâmetro médio de 382nm (±30), que não sofreu variação significativa (p>0,05) após encapsulação da prilocaína. Ensaios de liberação in vitro evidenciaram taxa de liberação mais lenta para a prilocaína lipossomal (equilíbrio em 90 min) que para prilocaína em solução (60 min). Análises por light scattering (p>0,05), de peroxidação lipídica (p>0,05) e ressonância magnética nuclear de prótons (H1-NMR) mostraram que, após processo de esterilização em autoclave, a prilocaína lipossomal permaneceu estável por um período de 30 dias após a preparação. Esses experimentos não mostraram diferenças na estabilidade físico-química da prilocaína ou da preparação lipossomal, estéreis ou não. Testes de bloqueio do nervo infraorbital em ratos e de tail-flick em camundongos revelaram maior efeito analgésico para a prilocaína lipossomal em relação à prilocaína em solução (p0,05) para o efeito da prilocaína lipossomal. A avaliação da toxicidade local em ratos mostrou que a prilocaína lipossomal não provocou edema de pata, quando comparada com soluções controle: salina, tampão, prilocaína em solução e lipossoma (p>0,05). Na avaliação histológica da mucosa oral dos ratos, não houve diferença significativa (p>0,05) entre os animais tratados com prilocaína lipossomal e seus controles. Com esses resultados, pôde-se concluir que a encapsulação de prilocaína em lipossomas aumentou a duração do bloqueio nervoso sensorial sem induzir o aumento na toxicidade local, podendo ser considerada mais uma opção no arsenal já disponível para a anestesia local em odontologia Abstract: Pain control is an extremely important issue in dentistry since most of the dentistry procedures involve painful stimuli. The discovery of local anesthetics, which have the capability of abolishing the pain without loosing the consciousness, meant a major step in dentistry advance. An ideal local anesthetic must present lasting anesthetic action (long enough for surgery procedures) and low toxicity. Many researches have been developed with local anesthetics aiming at the prolongation of their anesthetic effect duration and decrease of their toxicity. A very promising path was open with the development of long-acting local anesthetics formulations, using carriers as liposomes that are able to enhance the bioavailability, to reduce the systemic toxicity and to increase the local anesthetic half-life in vivo. This present study comprised (i) the preparation of liposomal prilocaine ( a local anesthetic widely used in dentistry) formulation, (ii) the physicochemical characterization of the formulation, (iii) the assessment of its anesthetic efficacy and (iv) the evaluation of its physicochemical stability, as well as of its toxic effects. After preparation, the physicochemical characterization showed the prilocaine-liposome interaction. Electron spin resonance results showed a decrease in the order parameter of liposomal membrane, in presence of prilocaine. Laser light-scattering analysis revealed a vesicle population of liposomes with 382nm (± 30) diameter, without size changes after prilocaine incorporation. In the in vitro drug release assay, the liposomal formulation led to a slower release rate of prilocaine compared to its plain formulation. Equilibrium was delayed from 60 min (prilocaine in solution) to 90 min with the drug delivery system. Liposomal prilocaine was found to be stable up to 30 days after preparation, according to the analysis by laser light scattering (p > 0.05), thiobarbituric acid reactions (p > 0.05) and H1-nuclear magnetic resonance, once these assays did not show differences on physicochemical stability of prilocaine in solution or prilocaine liposomal, sterilized or not. Rat infraorbital nerve blockade and mice tail-flick tests revealed that a prolonged anesthetic effect was produced by liposomal prilocaine in comparison to prilocaine in solution (p0,05). Local toxicity evaluation in rats showed that the liposomal prilocaine did not evoke rat paw edema when compared to the control groups: saline, Hepes buffer, prilocaine in solution and liposome (p > 0.05). There were no statistical differences (p > 0.05) between lipossomal prilocaine and their controls, in histological evaluation of rat oral mucous. In conclusion, the prilocaine encapsulation in liposomes enhanced the nerve sensorial blockade, without increasing local toxicity. Liposomal prilocaine can, therefore, be considered an option to local anesthesia in dentistry Doutorado Bioquímica Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Louis Bernard Klaczko Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Foram estudados aspectos da distribuição espacial e temporal de populações de Drosophila, assim como da taxocenose como um todo, em dois sítios situados em diferentes remanescentes florestais do Estado de São Paulo: Fazenda Barreiro Rico (Anhembi) e Serra do Japi (Jundiaí). O objetivo central do trabalho foi o estudo da distribuição espacial das abundâncias de populações de diferentes espécies, em resposta a um gradiente de distância em relação a riachos. Para alcançar este primeiro objetivo, foi necessário o controle de algumas das fontes de ruído de reconhecida importância na amostragem de drosófilas. A padronização da metodologia incluiu o dsenvolvimento de uma nova armadilha que é aqui apresentada. As amostras resultantes permitem a abordagem de outros temas relacionados com ecologia destes organismos, como variações temporais nas densidades populacionais, e as resultantes mudanças na composição e na diversidade da taxocenose. Em cada sítio foram amostrados 30 pontos, incluídos em uma área de 9 ha. Estes pontos foram distribuídos entre 10 classes de distância em relação a riachos, a saber: 1,2,5, 5, 10,20,40, 60, 80, 120 e 160 metros. Em cada área foram realizadas 4 coletas, duas na estação quente e úmida e duas na ma e seca. Em cada coleta foram amostrados 3 dias consecutivos com métodos comparáveis. Todos os machos de Drosophila (25.900) foram identificados pela análise da terminália, e apenas os dados destes foram analisados. Foram encontradas 101 espécies no total; das quais 58 na Serra do Japi e 89 em Barreira Rico. Sessenta e quatro espécies puderam ser identificadas como espécies já descritas. Nove das espécies identificadas representam novas ocorrências para o Estado de São Paulo. Foram observadas grandes variações entre as coletas quanto às densidades das espécies e diversidade da taxocenose. Quanto às densidades relativas foram encontrados resultados concordantes com os padrões de variação sazonal descritos para os grupos tripunctata e willistoni. Uma análise exploratória revelou que a estimativa da riqueza do gênero, nestas florestas, pode ser problemática. A maior riqueza observada em Barreiro Rico pode ser inteiramente atribuída ao maior número de indivíduos analisados nesta localidade. Separando as amostras em perto e longe do riacho foi observado que o mesmo esforço revela mais espécies perto da água. Vinte das quarenta espécies analisadas, assim como o gênero como um todo, apresentaram resposta ao gradiente estudado. Dentre as que responderam ao gradiente quase todas foram mais abundantes próximo aos cursos d'água. Foram observadas diferenças entre as coletas de uma mesma área nas respostas ao gradiente, e estas foram mais freqüentes do que as diferenças entre as localidades. A resposta não variou entre dias consecutivos. Espécies aparentadas tenderam a apresentar resultados semelhantes. Foi observada uma associação nos taxa inftagenéricos entre a resposta à proximidade da água e ocupação de diferentes formações vegetais, sugerindo que os dois fenômenos tem causas comuns Abstract: Aspects of the spatial and temporal distribution of Drosophila populations, as well as of the entire taxocenosis, were investigated at two distinct forest tragments in the Brazilian State of São Paulo: Fazenda Barreiro Rico (Anhembi) and Serra do Japi (Jundiaí). The main purpose of this work was to study the spatial distribution of the abundance of different species related to a distance gradient trom streams. In order to accomplish the goal, it was necessary to minimize some well-known sources ofbias common to Drosophila collections. The methodological standardization included the development of a new trap, described here. The resulting samples provide an opportunity to explore other topics on the ecology of these organisms, such as the temporal and spatial variation in population densities, and resulting changes of composition and diversity of the taxocenosis. Thirty points per forest tragment, within a 9 ha area, were sampled on each collecting trip. The points were distributed among classes based on their distance to the stream: 1,2.5, 5, 10,20, 40,60, 80, 120 and 160 m. Four collections were carried out at each area, two in the hot and wet season, two in the cold and dry. Three consecutive days per collection were sampled with the same method. AlI male Drosophila collected (25.900) were identified by terminalia analyzes, this being the only data set analyzed. One hundred and one species were found, 58 at Serra do Japi and 89 at Barreiro Rico. Sixty-four species could be identified by comparisons with pictures available in the literature, and/or with the contribution ofProf Dr. Carlos R. Vilela. Nine ofthe identified species are new occurrences in São Paulo State. Remarkable differences in the availability of populations, as well as in taxocenosis composition and diversity, were observed between collections. The changes in reI ative frequencies of the tripunctata and willistoni species groups were in agreement with described patterns for seasonal fluctuation. Early analyses showed that richness estimations about the genera are problematic at the studied areas. Higher richness observed in Barreiro Rico could be explained by the higher numbers of identified individuais. It was also noticed that the same effort reveals more species when analyzing the samples collected elo ser to the stream. Twenty of the forty studied species, as well as the entire genera, showed response to the gradient. Almost alI species which responded to the gradient were more abundant elose to streams. Differences in response to the gradient between collections at the same area were observed, and were more frequent than differences between areas. The responses did not differ for samples collected in consecutive days. In general, related species presented similar results. An association of infrageneric taxa between responses to water proximity and use of different vegetation was established, suggesting that both phenomena could have common causes Mestrado Mestre em Ecologia

Orientador: José Mauro Granjeiro Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O objetivo do trabalho foi avaliar comparativamente a neoformação óssea e o perfil de gelatinases 2 e 9 durante o reparo de defeito crítico em crânio de ratos tratados com osso autógeno ou xenoenxerto desmineralizado. Um defeito ósseo de tamanho crítico (8 mm) foi confeccionado no crânio de 90 ratos Wistar (90 dias de vida), e preenchido com osso autógeno (grupo controle) obtido durante a confecção do defeito ou com matriz óssea bovina desmineralizada (grupo teste). Após os períodos de 7, 14, 21, 30 e 90 dias, os animais foram eutanasiados e as peças coletadas para análises histomorfométrica (em hematoxilina e eosina) e zimográfica. A análise paramétrica foi realizada utilizando análise de variância (teste de Tukey se p

Orientador: Marcelo Menossi Teixeira Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O café é um dos principais produtos agrícolas mundiais. O Brasil é um dos maiores países produtores e consumidores de café. Assim sendo, a cafeicultura possui extrema importância econômica em nosso país. Um dos principais fatores que causam prejuízo à lavoura do café é o ataque do bicho mineiro (Leucoptera coffeella), pois Coffea arabica, principal espécie cultivada do café, é suscetível a essa praga. O Instituto Agronômico de Campinas (IAC) empreende um projeto de melhoramento de Coffea arabica, visando a resistência ao bicho mineiro, através de cruzamentos com C. racemosa, espécie naturalmente resistente a L. coffeella.Neste trabalho isolamos genes diferencialmente expressos durante o ataque do bicho mineiro a plantas de uma progênie híbrida derivada de cruzamentos entre Coffea arabica e C. racemosa. Foram construídos macroarranjos de DNA contendo 1536 ESTs de bibliotecas de subtração enriquecidas em genes preferencialmente expressos em plantas resistentes infestadas. Membranas foram hibridadas com sondas de cDNA obtidas a partir de RNA total de folhas suscetíveis e resistentes ao bicho mineiro, em diferentes momentos da infestação (controle não infestado, pósoviposição e pós-eclosão). Após análises estatísticas e clusterização hierárquica, 21 cDNAs induzidos em pelo menos um tratamento foram selecionados como diferencialmente expressos durante a infestação do bicho mineiro. A expressão diferencial de cinco genes (PR-8, CAX9, SPC25, psaH, BEL) foi confirmada através de RNA blot contendo RNA de um segundo experimento de infestação, demonstrando a eficiência dos macroarranjos de DNA na seleção de genes diferencialmente expressos. O padrão de expressão dos cinco genes citados foi verificado em diferentes órgãos do cafeeiro e durante o desenvolvimento do fruto do café. Nossos resultados sugerem que o mecanismo de resistência ao bicho mineiro é derivado de uma maior expressão basal de genes relacionados a defesa em plantas resistentes do que em plantas suscetíveis, e que plantas resistentes possuem um mecanismo de sinalização de defesa disparado pela oviposição de L. coffeella. Dentre os cDNAs selecionados, destacamos SSH101B04, cuja proteína deduzida é similar a inibidores de protease do tipo Kunitz STI (Soybean Trypsin Inhibitor). Devido a sua alta similaridade com proteínas do tipo miraculina, esse gene foi denominado CoMir (Coffea Miraculin). CoMir foi induzido após a oviposição em plantas resistentes, mas não foi induzido após a eclosão da lagarta do minador em plantas resistentes nem em plantas suscetíveis. Através de ensaios de RNA blot foi verificado que CoMir é expresso em folhas, botões florais verdes e brancos e em frutos verdes imaturos. Ensaios de hibridação in situ demonstraram que CoMir é expresso no metaxilema de folhas, de pétalas e do estigma, e no estômio, endotécio, tapete e feixe vascular da antera. Ensaios de localização subcelular demonstraram que a proteína CoMir localizou-se preferencialmente no apoplasma e no citoplasma de células de epiderme de cebola (Allium cepa). Nossos resultados sugerem que CoMir é uma proteína reguladora de proteólise durante o desenvolvimento do café, que é mobilizada para defesa após a oviposição de L. coffeella Abstract: Coffee is one of the most important crops in the world. Brazil is one of the biggest coffee producer and consumer countries. Therefore, coffee plantations have great relevance in our country. One of the main factors that affect coffee plantations is the attack of the coffee leaf miner (Leucoptera coffeella). This is due to the susceptibility of Coffea arabica, the main cultivated species. The Agronomic Institute of Campinas (IAC) develops a Coffea arabica breeding program aiming the resistance to the infestation of coffee leaf miner, using crosses with C. racemosa, a resistant species. In this work, we have isolated differentially expressed genes during L. coffeella attack to plants of a hybrid progenie between C. arabica and C. racemosa. We have produced cDNA arrays containing ESTs from subtracted cDNA libraries enriched in genes preferentially expressed in infested resistant plants. Arrays were probed with samples from susceptible and resistant leaves, in different treatments (control noninfested, after oviposition and after caterpillar eclosion). After statistical analysis and hierarchical clustering, 21 cDNA clones induced in at least one treatment were selected as differentially expressed during coffee leaf miner infestation. The differential expression of five genes (PR-8, CAX9, SPC25, psaH, BEL) was confirmed by RNA blot containing samples from a second infestation experiment, demonstrating the efficiency of DNA arrays in the identification of differentially expressed genes. The expression profile of these five genes was verified in different organs of coffee plants and during coffee fruit development. Our results suggest that the resistance mechanism against coffee leaf miner is derived from a higher basal expression of defense/stress genes in resistant plants, and that resistant plants have a defense signaling mechanism triggered by L. coffeella oviposition. Among the selected cDNAs, we identified SSH101B04, which deduced protein is similar to Kunitz STI (Soybean Trypsin Inhibitor) protease inhibitors. The gene was named CoMir due to its high similarity to miraculin-like proteins. CoMir was induced after oviposition in resistant plants, but it was not induced after larval eclosion in susceptible and resistant plants. RNA-blot experiments showed that CoMir was expressed in leaves, green flower buds, white flower buds and early green fruits. In situ hybridization showed that CoMir is expressed in the metaxylem vessels of leaves, petals and stigma and in the stomium, endothecium and vascular bundles of anthers. Subcellular localization assays demonstrated that CoMir was localized in the apoplasm and citoplasm of onion (Allium cepa) epidermal cells. Our results suggest that CoMir is a protein that regulates proteolysis during coffee development that is mobilized to defense after L. coffeella oviposition Doutorado Genética Vegetal e Melhoramento Doutor em Genética e Biologia Molecular

Orientador : Keith Spalding Brown Jr Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Analisou-se a mortalidade pupal de Brassolis sophorae e Opsiphanes invirae ao longo do gradiente centro-bairro da cidade de Campinas e localmente, considerando-se a altura de fixação da pupa, o local de fixação, e o tipo de uso do solo. A análise consistiu do exame das exúvias pupais coletadas periodicamente em 75 locais de amostragem na área urbana da cidade. Em cada um destes locais, foram estimados diversos parâmetros ambientais como cobertura vegetal, área construída e distância ao centro da cidade , tendo em vista analisar as possíveis relações destes parâmetros com a mortalidade dos lepidópteros estudados. Na área do campus na Unicamp, realizaram-se estudos sobre a mortalidade do adulto de Brassolis em áreas construídas dando especial ênfase à mortalidade desses insetos durante a ecdise.Obtiveram-se dados sobre a mortalidade dos inimigos naturais de Brassolis a partir da análise do conteúdo das pupas parasitadas. Coletaram-se aproximadamente 20.000 pupas de Brassolis e 1.200 pupas de Opsiphanes invirae. As principais conclusões foram: a) a análise de exúvias pupais demonstrou ser um excelente método para estimar a mortalidade devida a diferentes fatores de mortalidade. Em menos de 15% das pupas mortas não foi possível determinar o fator reponsável. b) a mortalidade no estágio pupal eliminou aproximadamente 50% dos indivíduos e portanto tem grande influência na regulação do tamanho das populações de Brassolis ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: Pupal mortality of Brassolis sophorae and Opsiphanes invirae was studied across a center-suburbs gradient in the city of Campinas in relation to the site of attachment od the pujpae (interaction, and the use of the soil in regional and local scales. The analysis consisted of the examination of the pupal exuviae, systematically collected at 75 sampling points in the urban area. In each point, several environmental parameters were estimated, such as percent plant cover, built up area and distance from the city center in order to evaluate their possible influence on the mortality of the lepidopterans studied. In the vicinity of the university campus studies on the adult mortality of Brassolis sophorae were undertaken emphasizing the mortality of these insects during ecdysis. Analysis of the contents of the parasitized pupae provided data on the mortality of the natural enemies of Brassolis (Spilochalcis morleyi-Chalcididae and Xanthozona melanopyga-Tachinidae). Approximately 19000 Brassolis pupae and 1200 Opsiphanes pupae were collected. The pincipal conclusions of this research are: a) Analysis of pupal exuviae proved to be an excellent method for assessing the different causes of pupal mortality the mortality agent could be surely determined in over 85% of the pupae studied ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations Doutorado Ecologia Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Ione Salgado Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O presente trabalho analisou a participação da enzima óxido nítrico sintase (NOS) na produção de fitoalexinas, como parte do mecanismo de defesa de soja ao ataque do fungo Diaporthe phaseolorum f. sp. meridionalis (Dpm), causador da doença do cancro da haste. A produção de fitoalexinas e a atividade NOS em cotilédones de soja eliciados com extrato do fungo Dpm foram comparadas com aquela induzida por nitroprussiato de sódio (SNP), uma molécula capaz de liberar óxido nítrico (NO). Os flavonóides produzidos foram identificados e quantificados utilizando Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) e padrões autênticos. A atividade NOS foi determinada pela síntese de L-[U_14C] citrulina a partir de L-[U-14C] arginina. A eliciação dos cotilédones de soja com o extrato de Dpm ou com SN P induziu intensa produção de fitoalexinas. Não foi observada produção de fitoalexinas quando o SNP foi substituído por ferricianeto que difere estruturalmente do primeiro apenas por não conter o NO. A produção de fitoalexinas induzida pelo extrato de Dpm, mas não aquela induzida por SNP, foi inibida quando os cotilédones de soja foram pré-tratados com inibidores característicos da enzima NOS de origem animal. A eliciação com Dpm induziu também atividade NOS nos tecidos em contato com o eliciador, atividade não observada nos tecidos eliciados por SNP. A atividade NOS induzida mostrou ser dependente de Ca2+ e NADPH e foi inibida por L-NAME [NG-nitro-L-arginina metil éster], AMG [Aminoguanidina] e L-NIL [L-N6-(1-iminoetil) lisina], inibidores característicos da NOS de origem animal. A indução de atividade NOS precedeu a ativação da produção de flavonóides nos cotilédones eliciados por Dpm. O acúmulo destes metabólitos foi mais precoce quando os cotilédones foram eliciados com SNP. O conjunto de resultados sugeriu que na eliciação por Dpm ocorreu a ativação de uma enzima do tipo NOS produzindo NO que foi capaz então de induzir a produção de flavonóides que apresentam atividade antimicrobiana. Não foram observadas diferenças significativas na produção de fitoalexinas pelos cotilédones entre os cultivares IAC-18 e IAC-14, resistente e suscetível ao Dpm, respectivamente. Estes resultados indicaram que ambos os cultivares seriam capazes de se defender ao ataque do patógeno nos estádios iniciais de desenvolvimento da planta Abstract: The formation of phytoalexin is part of the defense mechanism of soybeans against the fungus Diaporthe phaseolorum f. sp. meridionalis (Dpm), the causal agent of stem canker disease. In this work, the involvement of nitric oxide synthase (NOS) in phytoalexin production was examined. Phytoalexin formation and NOS activity in soybean cotyledons stimulated with a Dpm extract were compared with the levels in cotyledons exposed to sodium nitroprusside (SNP), a nitric oxide (NO) donor. The flavonoids were identified and quantified by High Performance Liquid Chromatography (HPLC) using authentic standards. NOS activity was determined by the biosynthesis of L-[U_14C] citrulline from L-[U_14C] arginine. Exposure of soybean cotyledons to the Dpm extract or SNP resulted in a high accumulation of phytoalexin, but this was not observed when SNP was replaced by ferricyanide, a structural analog of SNP devoid of the NO moiety. Phytoalexin production induced by the Dpm extract, but not by SNP, was prevented when the cotyledons were pretreated with NOS inhibitors. The Dpm extract also induced NOS activity in soybean cotyledon tissue proximal to the site of extract application. No such activity was observed with SNP. The induced NOS activity was Ca2+- and NADPH-dependent and was sensitive to the NOS inhibitors L-NAME [NGnitro-L-arginine methyl ester], AMG [aminoguanidine] and L-NIL [L-N6-(iminoethyl) Iysine]. The induction of NOS activity preceded the maximal accumulation of flavonoids in cotyledons exposed to the Dpm extract. The accumulation of these metabolites was faster in SNP than in Dpm treated cotyledons. These results suggest that Dpm extract induce NOS activity, with the formation of NO subsequently stimulating biosynthesis of flavonoids. There was no significant difference in the phytoalexin accumulation between cotyledons from cultivars IAC-18 and IAC-14 which are resistant and susceptible to Dpm, respectively. Thus, both cultivars should be able to defend themselves against attacks by pathogens in the earlier stages of plant development Mestrado Bioquímica Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador : Antonio Sergio Ramalho Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Doutorado Genética Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Maria do Carmo E. do Amaral Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O complexo Bifrenaria constitui os gêneros sul-americanos Adipe (=Stenocoryne), Bifrenaria (sensu stricto), Cydoniorchis e Rudolfiella, e pode ser caracterizado pela presença de pseudobulbos tetrangulares e unifolados, folhas plicadas, e por flores com um esporão preminente, com um estipe bifurcado. Os objetivos deste estudo foram investigar o monofiletismo do complexo Bifrenaria assim como dos gêneros Adipe (=Stenocoryne), Bifrenaria, Cydoniorchis e Rudolfiella, com base em caracteres morfológicos e macromoleculares; determinar as relações filogenéticas do complexo Bifrenaria; e reavaliar carateres morfológicos tradicionalmente utilizados para delimitar taxa. Dezesseis espécies referentes ao complexo Bifrenaria e seis gêneros relacionados foram amostrados. As matrizes foram analisadas sob o critério de parcimônia. As análises dos conjuntos de caracteres em separado resultaram em árvores com topologias ligeiramente distintas e, por este motivos, nós combinamos os diferentes conjuntos de dados. Os resultados suportam o monofiletismo do complexo Bifrenaria, excluindo-se Rudoljiella, que constitui um gênero distinto e monofilético. Nós consideramos Bifrenaria como um gênero monofilético englobando os gêneros Adipe (=Stenocoryne), Cydoniorchis e Bifrenaria (sensu stricto). Dentro de Bifrenaria, seus dois clados basais são altamente suportados: o clado referente às espécies amazônicas e o clado referentes às espécies do sul-sudeste brasileiro. O gênero Adipe é parafilético. Apesar do gênero Cydoniorchis ser monofilético e apresentar várias sinapomorfias morfológicas, seu reconhecimento demanda muitas mudanças nomenc1aturais e, por isso é proposto o reconhecimento amplo do gênero Bifrenaria. Os resultados também sugerem a origem amazônica do gênero Bifrenaria. A segunda parte deste estudo apresenta o estudo taxonômico do gênero Bifrenaria. Os principais objetivos foram apresentar uma sinopse taxonômica para o gênero Bifrenaria, determinando quais taxa devem ser reconhecidos, as distribuições e quais caracteres tradicionalmenete utilizados para reconhecer espécies são taxonomicamente informativos. São apresentadas chaves de identificação, descrições, mapas de distribuição e ilustrações Abstract: The Bifrenaria complex constitutes the South American genera Adipe (=Stenocoryne), Bifrenaria (sensu stricto), Cydoniorchis and Rudolfiella, which are characterized by four-angled, unifoliate pseudobulbs, plicate leaves, and by flowers bearing a conspicuous spur and a forked stipe. The aims of the present study were to investigate the monophyly of the Bifrenaria complex as well as the genera Adipe (=Stenocoryne), Bifrenaria, Cydoniorchis and Rudolfiella, based on morphology and DNA sequence data; to determine phylogenetic relationships within the Bifrenaria complex; and to reevaluate morphological characters traditionally used to delimit taxa. Sixteen species ITom the Bifrenaria complex and six related genera were sampled. Matrices were analysed using maximum parsimony. Separa te analyses of data partitions resulted in slight1y different topologies, therefore we combined alI the data sets. The results support the monophyly of the Bifrenaria complex, excluding Rudolfiella, which constitutes a monophyletic and distinct genus. Therefore we consider Bifrenaria a monophyletic genus comprising Adipe (=Stenocoryne), Cydoniorchis and Bifrenaria (sensu stricto). Within Bifrenaria, two clades are strongly supported: the Amazonian species clade and the southem Brazilian clade. The genus Adipe is a paraphyletic grade. Although the genus Cydoniorchis is monophyletic and presents many morphological synapomorphies, the acceptance of this genus would demand many nomenclatural changes. The results also suggest an Amazonian origin for Bifrenaria. In the second part of the study a taxonomic study for the genus Bifrenaria is presented. The main goals of this study were to present a taxonomic synopsis for the genus Bifrenaria, detennining which taxa should be recognized, their distributions and which characters traditionally used to discriminate species are taxonomically informative. Identification keys, descriptions, distribution maps, and illustrations of the species are also provided. Mestrado Biologia Vegetal Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Edi Lúcia Sartorato Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A perda auditiva é a deficiência sensorial mais frequente em humanos, atingindo aproximadamente 10% de toda a população mundial. A restrição da comunicação pela expressão oral resulta em alterações no desenvolvimento cognitivo e psicológico do indivíduo afetado. Em países desenvolvidos, um a cada 500 indivíduos apresenta perda auditiva neurossensorial bilateral profunda/severa. Já nos casos de indivíduos com até 5 anos, a porcentagem é maior, atingindo 0,27% de 1000 indivíduos, número que se torna maior ainda nos casos em jovens, chegando a 0,35%. Dentre as causas da perda auditiva, mais de 60% dos casos de perda auditiva congênita são genéticos. Até o momento já se tem conhecimento de 150 loci e 103 genes envolvidos com a perda auditiva, sendo que a maioria deles apresenta, no mínimo, 20 alterações (mutações de ponto, deleções, inserções, etc.) que podem causar a perda. O gene que apresenta maior número de alterações é o GJB2, codificador da conexina 26, uma proteína relacionada a trocas iônicas intercelulares, mantendo a homeostase de potássio do sistema auditivo, essencial para a audição. Apenas este gene apresenta mais de 302 alterações confirmadas até o presente momento, sendo o principal gene relacionado aos casos de perda auditiva de origem genética. Tendo em vista a grande heterogeneidade clínica e genética da perda auditiva e a importância do diagnóstico molecular correto dos indivíduos que apresentam perda auditiva hereditária, o presente trabalho propôs padronizar um layout para diagnóstico através de genotipagens utilizando uma tecnologia 'high-throughput' baseada em PCR (Polymerase Chain Reaction) em tempo real denominada TaqMan® OpenArrayTM Genotyping. Com esta, foi desenvolvido um layout das placas de genotipagem de OpenArrayTM, sendo possível analisar 32 alterações de 96 indivíduos simultâneamente por placa. Ao todo, foram analisados 376 indivíduos, sendo 94 deles controles ouvintes, totalizando 4 placas em duplicata. Todas as 31 alterações analisadas estavam presentes nos genes nucleares GJB2, GJB6, CRYL1, TMC1, SLC26A4, miR-96, OTOF e nos genes mitocondriais 12S rRNA e MT-TR1. As reações foram validadas posteriormente por técnicas previamente estabelecidas (sequenciamento direto, PCR Multiplex e RFLP-PCR) nos testes utilizados para o diagnótisco molecular da perda auditiva do Laboratório de Genética Humana do Centro de Biologia Molecular e Engenharia Genética (CBMEG) da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Ao total, foram realizadas 11.656 reações de genotipagem. Apenas 353 reações falharam, representando, aproximadamente, 3,03% das reações. Dentre as reações que falharam, estavam as amostras de nove indivíduos que não obedeciam aos requisitos mínimos de concentração, pureza e integridade do DNA para a realização dos experimentos. Com isso, calculou-se o rendimento médio das placas de genotipagem utilizando as placas de OpenArrayTM, que apresentou acurácia de, aproximadamente, 96,97%. Tais resultados comprovam a ótima acurácia, o baixo custo e a fácil reprodutibilidade da técnica, tornando este layout customizado para a plataforma TaqMan® OpenArrayTM Genotyping uma ferramenta ótima e confiável a ser empregada nos teste de diagnóstico molecular da perda auditiva no nosso país Abstract: Hearing loss is the most common sensory deficit in humans, affecting approximately 10% of the entire world population. The restriction of communication by the oral expression results in changes in cognitive and psychological development of the affected individual. In developed countries, one in every 500 individuals has severe/profound bilateral sensorineural hearing loss. In cases of individuals with up to 5 years, the percentage is higher, reaching 0.27% of 1000 individuals, that number becomes even greater in cases where young people, reaching 0.35%. Among all the causes of hearing loss, more than 60% of congenital hearing loss is genetics. So far already aware of 150 loci and 103 genes involved in hearing loss, and most of them have at least 20 changes (point mutations, deletions, insertions, etc.) which may cause the loss. The gene that has the higher number of changes is the GJB2, encoding connexin 26, a protein related to ion exchange intercellular maintaining homeostasis potassium auditory system, essential for hearing. Only this gene has over 302 changes confirmed so far, being the main gene related to cases of hearing loss with genetic origin. Due to the great clinical and genetic heterogeneity of hearing loss and the importance of correct molecular diagnosis of individuals with hereditary hearing loss, this work proposes standardize a layout to the diagnosis by a genotyping technology using a high-throughput technique based on real-time PCR called TaqMan® OpenArrayTM Genotyping. With this, we customized a layout to the OpenArrayTM genotyping plates, being possible to analyze 32 changes of 96 individuals per plate simultaneously. Were analyzed 376 individuals, being 94 of them controls listeners, totaling 4 plates in duplicate. All 31 changes analyzed were present in the nuclear genes GJB2, GJB6, CRYL1, TMC1, SLC26A4, miR-96, OTOF and in the mitochondrial genes 12S rRNA and MT-TR1. Reactions were subsequently validated by previously established techniques (direct sequencing, multiplex PCR and RFLP-PCR), tests used for the molecular diagnostic of the hearing loss at Human Genetics Laboratory of the Center for Molecular Biology and Genetic Engineering (CBMEG), located at State University Campinas (UNICAMP). In total, 11.656 reactions of genotyping were performed using this platform. Only 353 reactions failed, representing approximately 3.03% of the reactions. Among the reactions that failed, were samples of nine individuals who did not meet the minimum concentration, purity and integrity of the DNA for the experiments. With this, was calculated the average income of the OpenArrayTM genotyping plates, which showed an accuracy of approximately 96.97%. These results and the comparative analysis of the costs among OpenArrayTM platform and the others molecular techniques demonstrated the great accuracy, low cost and easy reproducibility of the technique, making this layout customized for the platform TaqMan® OpenArrayTM Genotyping a good and reliable tool to be used in the molecular diagnostic of hearing loss in our country Mestrado Genética Animal e Evolução Mestre em Genética e Biologia Molecular

Orientador: Liana Maria Cardoso Verinaud Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Mestrado

Orientador : Gil Martins Felippe Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Neste trabalho foi investigado o crescimento lento que ocorre na parte aérea de Kielmevera coriacea, característica esta que parece ser comum em espécies perenes dos cerrados. O estudo foi realizado em plântulas mantidas em casa de vegetação (UNICAMP) e em câmara de crescimento (Universidade de Edinburgo), assim como em árvores no campo (região de cerrado no município de Itirapina, SP). Os dados de TCR obtidos em plântulas mantidas em condições de casa de vegetação apresentaram valores baixos. Aparentemente, as diferenças de TCR com outras espécies lenhosas, em intervalos de tempo semelhantes, dizem respeito à velocidade de crescimento que cada espécie apresenta durante o seu primeiro ano de vida. Os valores de TCR para plântulas de K. coriacea mantidas em casa de vegetação não são muito diferentes do que os obtidos para plântulas de outras espécies arbóreas do cerrado, tampouco para a mesma espécie, quando as plântulas foram mantidas em condições diferentes. O padrão das curvas de TCR em casa de vegetação e câmara de crescimento foi semelhante e com valores maiores que em plântulas crescendo no cerrado. A TAL mostrou padrões semelhantes em casa de vegetação e câmara de crescimento, sendo diferentes e com valores menores em plântulas de cerrado. Os padrões de RAF entre casa de vegetação e câmara de crescimento foram semelhantes e com valores maiores que em plântulas no cerrado. Diferenças no crescimento relativo poderiam ser explicadas através das condições de germinação e desenvolvimento inicial diferentes entre as plântulas mantidas em casa de vegetação e câmara de crescimento. Além disso, o teor de umidade da terra de cerrado nos sacos plásticos das plântulas foi diferente e poderia ser a responsável pela melhor resposta de crescimento das plântulas em casa de vegetação, quando comparadas com as plântulas no cerrado. Os valores superiores em TCR, TAL e RAF das plântulas mantidas em câmara de crescimento, em relação às que cresceram em casa de vegetação, no final dos dois experimentos, podem estar relacionados com a quantidade de nutrientes disponíveis no sistema de plantio utilizado para as plântulas em casa de vegetação. Em termos absolutos, o crescimento de plântulas em casa de vegetação mostrou que em comprimento, as raízes cresceram mais rapidamente que a parte aérea. O número de órgãos foliares visíveis foi baixo, comparado com o de plântulas mantidas em condições controladas. As plântulas em câmara de crescimento mostraram também ser mais eficientes como produtoras de área assimiladora, área esta que é distribuída entre um número maior de órgãos foliares produzidos, tornando-os visíveis. Os valores de extensibilidade das paredes celulares das duas primeiras folhas foram muito semelhantes quando feitas as comparações durante suas fases de crescimento. Isto parece indicar que as propriedades mecânicas das paredes celulares em crescimento seriam as mesmas nas duas folhas. Tanto a extensibilidade total como a extensibilidade plástica aumentaram inicialmente, declinando depois até o final da expansão da lâmina. A extensibilidade elástica foi praticamente constante nas duas folhas. Pelas dosagens de ABA feitas nas folhas 1 e 2 em plântulas de K. coriacea mantidas em câmara de crescimento observou-se um conteúdo elevado no 50 dia. Como o crescimento destas duas folhas parece ter ocorrido de maneira independente desse aumento, tal pico poderia ser um sinal enviado pelo sistema radicular para uma diminuição do crescimento da parte aérea. O ABA atuaria provavelmente como um mediador do crescimento entre a parte aérea e o sistema radicular, inibindo o crescimento da parte aérea. Primórdios foliares não se desenvolveram na mesma proporção em que foram sendo produzidos. Com isso, a lentidão do crescimento da parte aérea das plântulas seria conseqüência não só da baixa produção de primórdios foliares, mas também reforçado pelo atraso do desenvolvimento de tais primórdios, pelo menos em plântulas com até 60 dias de idade. O plastocrono entre os primórdios 1 e 2 destas plântulas foi de aproximadamente 21 dias. Este valor foi baixo comparado com outras espécies de cerrado. O crescimento em termos de comprimento dos ramos produzidos por árvores de K. coriacea no cerrado mostrou-se bastante lento pois a contribuição anual em comprimento dos laterais não passou de 14,O cm. Os padrões de brotamento e sincronia na perda de folhas parecem sofrer influência das variações sazonais do ambiente. A permanência de folhas parece estar relacionada com as baixas tempereturas que ocorrem no inicio da estação seca. Primórdios foliares em ramos de K. coriacea já estão presentes nos ápices caulinares vegetativos após o término de produção foliar do ano. Estes primórdios devem ser de catafilos, já que eles são os primeiros a serem produzidos. O aparecimento de folhas reduzidas no fim de um período de crescimento foliar é comum em muitos arbustos de regiões tropicais, sendo este fenômeno considerado como regressão foliar. Em ramos de K. coriacea podem-se distinguir dois processos distintos durante o crescimento das últimas folhas N: o surgimento de brácteas em ramos induzidos para a floração e o aparecimento de folhas com regressão foliar em ramos não induzidos. Em árvores de K. coriacea, a queda da maioria das folhas B, bem como a interrupção abrupta no crescimento das folhas B remanescentes, parecem indicar que existe uma relação nutricional envolvida na interrupção do crescimento meristemático, como parece ocorrer em plantas das savanas neotropicais. O período de brotamento normal dos ramos laterais de K. coriacea foi ao redor de 50 dias e as folhas N, concluíram o seu crescimento entre 30 e 85 dias. Elas permanecem fotossinteticamente ativas por um período longo, em torno de 8 a 9 meses. A espécie pode ser definida como intermediária entre brevidecídua e verdadeiramente decidua. As plantas adultas de K. coriacea tem folhas grandes e podem ser consideradas como sendo escleromorfas através dos resultados da razão área foliar/peso. Esse escleromorfismo foliar estaria relacionado com deficiências minerais. K. coriacea possui estômatos em ambas as faces das folhas N, o que indicaria que esta espécie não tem restrição à perda de água, ou, em última análise, para a fotossíntese. O número de estômatos das folhas N foi superior ao observado para plântulas desta espécie. Os níveis de açúcares solúveis em folhas de K. coriacea realmente aumentaram somente perto da senescência foliar. Já no período em que as folhas N começaram a cair, o conteúdo de açúcares diminuiu bastante. Os valores da taxa fotossintética das folhas de K.coriacea foram baixos, quando comparados com os dados de plantas C3, porém, ainda dentro da faixa observada para outras de regiões tropicais e temperadas. Estes foram também semelhantes aos encontrados em espécies de cerrado e savanas neotropicais. As folhas de K. coriacea mostraram variações no conteúdo de clorofila entre os meses estudados. Altos níveis foram observados durante a expansão foliar e uma queda pôde ser vista apenas um pouco antes da senescência; o conteúdo de clorofila, porém, é praticamente estável ao longo da vida das folhas. Podemos dizer que K. coriacea é uma espécie que não possui limitações para a realização da fotossíntese, ou, pelo menos para a captação de C02, e que, pelo menos aparentemente, os carboidratos produzidos não são estocados nas folhas. Com isso, os fotoassimilados seriam transportados e estocados nos xilopódios, como acontece em plântulas desta espécie ou em outras espécies dos cerrados. Os fotoassimilados poderiam ainda contribuir no crescimento secundário das plantas, em épocas fora do brotamento e crescimento foliar Doutorado Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Gil Martins Felippe Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Foram estudados os efeitos da secagem artificial e de diversas condições de armazenamento na germinação e manutenção de viabilidade de sementes de limão cravo (Citrus reticulata var. austera Hib. -Swingle), respectivamente. A influência de fatores ambientais (temperatura e luz) e dos tegumentos das sementes na germinação foi analisada, bem como as relações entre as mudanças de níveis hormonais endógenos nas diferentes fases do armazenamento com a manutenção ou a queda da viabilidade das sementes. A secagem artificial de sementes causou um pequeno decréscimo inicial de germinação, mas estatisticamente diferente quando comparado com as sementes frescas. Entretanto, com a evolução do período de armazenamento, as sementes secas mantiveram a mesma porcentagem de germinação (em torno de 80%), enquanto que as sementes frescas perderam rapidamente o poder germinativo, que atingiu zero aos 8 meses. Estes resultados foram corroborados por testes de tetrazólio. Através de testes de germinação em condições de laboratório mostrou-se que a secagem das sementes até 6% de umidade, seguida de enlatamento hermético e conservação sob temperatura de '4 GRAUS'C foi a melhor das condições de armazenamento testadas, resultado este confirmado posteriormente em condições de campo e em testes de tetrazólio. Sob temperaturas constantes de 5, 10, 40 e '45 GRAUS'C não ocorreu a germinação de semente... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: Germination and viability maintenance of limão cravo (Citrus reticulata var. austere Hib. ? Swingle) seeds under artificial drying and several storage conditions, respectively, were studied. Environmental factors as temperature and light, and presence / absence of seed coats (testa and tegmen) were analysed as to their influences on seed germination as well as the relationships between hormonal level changes throughout the several storage periods studied and seed viability losses. Artificial drying induced a slight but significant However, dried seeds were able to maintain high germination percentages (about 80%) throughout the storage period while fresh seeds had their germination percentagens drastically reduced, reaching zero after 8 months storage. These results have been corroborated by tetrazolium tests. The best storage conditions were found to be those in which seed were dried to 6% moinsture content, hermetically sealed in cans and subsequently stored at '4 GRAUS'C. these findings were later confirmed by tetrazolium tests and field trials. No seed germination at constant temperatures of 5, 10, 40 and '45 GRAUS'C was observed. On the other hand constant temperatures of 25, 30 and '35 GRAUS'C induced high germination percentages while seed germination was delayed at constant temperatures of 15 and '20 GRAUS'C... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations Mestrado Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientadores: Antonio Carlos Boschero, Fernanda Ortis Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital. Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations. Mestrado Fisiologia Mestra em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Eliana Maria Zanotti-Magalhães Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Este trabalho teve por objetivo verificar a ação da inoculação de hemolinfa total, hemolinfa livre de células e suspensão dc amebócitos no desenvolvimento do /..__. mansoni da linhagem BH em B. g/abrata melânica. Os parâmetros avaliados foram: taxa de infecção, taxa de mortalidade, período pré-patente, reação tecidual em tomo das larvas de S. mansoni, atividade fagocitária dos amebócitos e nÚmero de amebócitos na hemolintà. Para a determinação da taxa de infecção, taxa de mortalidade, período pré-patente, atividade fagocitária e número de amebócitos circulantes os moluscos foram infectados com 10 miracídios do tremalódeo. A reação tecidual foi observada em moluscos expostos a 100 miracídios. Os resultados indicaram que, a inoculação de hemolintà total provocou a facilitação da infecção observando-se diminuição do período pré-patente, aumento da taxa de mortalidade, pequena atividade fagocitária dos amebócitos e discreta reação amebocitária em tomo do esporocisto de ,)_. mansoni. A inoculação de hemolintà livre de células provocou um retardamento do desenvolvimento do parasita com o aumento do período pré-patente, e reação tecidual mais intensa em tomo do esporocisto de S. mansoni. A inoculação de suspensão de amebócitos produziu uma reação mais efetiva contra o parasita com aumento do período pré-patente, diminuição da mortalidade dos moluscos, aumento da atividade fagocitária, aumento das células estreladas na hemolinfa circulante e aumento das reações amebocitárias no tecido em tomo dos csporocistos. A inoculação de suspensão de células produziu maior resistência ao desenvolvimento do S. mansoni. Abstract: The main purpose of this work was to verify the effects from the inoculation of diftercnt kinds of hemolymph on the development of SdÚS/OSOlIIll IIIlf/l lli in pigmcnted Biomphalaria glahrata. The S. mansoni belongs to the BH strain. The types of hemolymph were: complete hemolymph, cells-fTee hemolymph and amoebocyte suspenslOn. In order to achieve our purpose the following variables vere considered: intection rate, death rate, pre-patent period, tissue reactions arollnd S mansoJli larval, phagocytosis activity and number of amoebocytes in the circlIlation hemolymph R. [;/ahrala snail were infected with 10 miracidia trom the trematodes. The tissue reaction was observed on the snails that were exposed to 100 miracidia. The results have indicated that the inoculation of the complete hemolymph facilitated the infection with decrease on the pre-patent period as well as the increase on the death rate little phagocytosis activity on the amoebocytes and slight reaction around sporocyst of the S. mansoni. The inoculation of cells-tl'ee hemolymph postponed the parasite development with the increase of the pre-patent period and more intense tissue reaction arollnd sporocyst of S. mansoni. The inoculation of the amoebocytes slIspcnsion caused a more ctrcctive reaction against the parasite with the increase the pre-patent period, the decrease snails mortality, the increase phagocytosis activity the increase 01' granulocytes in the circulating hemolymph and the increase of amoebocytes reactions around sporocysts of S mansoni. The inoculation of the amoebocytes suspension produccd greater resistance to the S. mansoni development. Doutorado Parasitologia Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: José Angelo Camilli Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Cimentos de fosfato de cálcio (CFC) a base de ?-TCP, que originam como processo final de cura uma hidroxiapatita deficiente em cálcio (CDHA) são muito utilizados como biomateriais para osso, por possuírem similaridade estrutural e química à porção inorgânica do tecido ósseo. Porém o uso dos CFC se restringe a pequenos defeitos bucomaxilofaciais e recobrimento de próteses metálicas, em função do déficit considerável de suas propriedades mecânicas. Visando melhorar as propriedades mecânicas dos CFCs estudos têm sido direcionados à aplicação de fibras de vários materiais, como as fibras de carbono, as fibras de vidro, as de carboneto, entre outras. No entanto, muitas dessas fibras introduzidas se mostraram tóxicas às células, impedindo sua aplicação clínica. Recentemente, os "whiskers" (fibras curtas de monocristal) de biocerâmicas vêm sendo estudados como outro tipo de reforço, cujos resultados têm se mostrado promissores por melhorarem as propriedades mecânicas e biológicas dos materiais. Nesse trabalho, a resposta biológica das CDHA pura e contendo 5 e 10% de "whiskers" de wollastonita, foram estudadas através de um sistema de cultivo celular com células osteoblásticas, o qual tem sido muito utilizado para elucidar a resposta celular em biomateriais. Porém cultivar células em CDHAs não é uma tarefa fácil, pois o processo de hidrólise sofrido por esses materiais promove a liberação de íons para o meio de cultura, o que acarreta na mudança de pH e concentração iônica do meio. Essas mudanças promoveram a morte das células após 48h de cultivo. Foi possível manter as células viáveis ao longo do tempo realizando a lavagem dos discos de CDHA com DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium) antes da semeadura e também com a troca diária do meio de cultura. Nossos resultados demonstraram que as CDHA contendo "whiskers" foram capazes de estimular a proliferação celular quando comparadas com a placa de poliestireno e a CDHA pura. No ensaio de MEV foi possível observar uma densa camada celular na superfície da CDHA contendo 10% de "whiskers". A atividade da fosfatase alcalina (FAC) foi significativamente maior nas CDHAs contendo "whiskers", sendo proporcional a concentração de "whiskers" wollastonita nas amostras, o ensaio de mineralização corroborou com o ensaio de FAC, no qual a CDHA contendo 10% de "whiskers" apresentou maior produção de matriz mineralizada. Tendo-se em vista os presentes resultados pode-se dizer que as CDHA contendo "whiskers" de wollastonita são biomateriais promissores para engenharia tecidual óssea, pois foram capazes de estimular a proliferação e diferenciação celular, além da resistência mecânica melhorada pela adição dos "whiskers" Abstract: Calcium phosphate cements (CFCs) are widely used as biomaterials for bone because they have chemical and structural similarity to the inorganic portion of bone tissue. But the use of CFCs is restricted to maxillofacial small defects and coating metallic prostheses, due to the considerable deficit of its mechanical properties. In order to improve the mechanical properties of CFCs studies have focused on the application of fibers of many materials such as carbon fibers, glass fibers, carbide fibers among others. However, many of these fibers are shown toxic to the cells, preventing their clinical application. Recently, the "whiskers" (short crystal fibers) of bioceramics have been studied as another type of reinforcement and the results have shown promise for improving the mechanical and biological properties of materials. In this work the biological response of hydroxyapatites deficient in calcium (CDHA) pure and containing 5 and 10% "whiskers" of wollastonite, were studied using a cell culture system with osteoblastic cells, which has long been used to elucidate the cell behavior in biomaterials. However cultivating cells in CDHAs is not an easy task because the hydrolysis process undergone by such materials promotes the release of ions to the culture medium, which results in the change of pH and ionic concentration of the medium. These changes promoted cell death after 48 h of cultivation. Cell viability was maintained for 14 days by a simple washing of CDHA discs with DMEM before cell culture and also with daily changes of culture medium. Our results demonstrate that CDHA containing "whiskers" were able to stimulate cell proliferation when compared to the polystyrene plate and CDHA pure. In the assay by SEM was possible to see a dense cell layer on the surface of the CDHA containing 10% "whisker." The alkaline phosphatase activity (ALP) was significantly higher in CDHAs containing "whiskers" being proportional to the concentration of "whiskers" wollastonite samples. The mineralization assay corroborated with ALP assay in which the CDHA containing 10% " whisker "showed higher production of mineralized matrix. In summary the CDHAs containing "whiskers" of wollastonite are excellent biomaterials for bone tissue engineering, because they were able to stimulate cell proliferation and differentiation, as well as mechanical strength improved by the addition of "whiskers" Mestrado Biologia Celular Mestra em Biologia Celular e Estrutural

Orientador : Roberto de Andrade Martins Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Doutorado Genética e Evolução Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Paulo Maria Ferreira de Araujo Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: As imunoglobulinas humanas IgG e IgM séricas e IgA de colostro foram submetidas à ação da proteinase de padrões do extrato de epimastigotas (Araújo, 1979) foi purificada 56 vezes e contendo 1825 unidades/mg. As preparações de imunoglobulinas resultantes do tratamento enzimático em condições ótimas de pH (pH 7.0 e pH 3.1) e os controles adequados, foram analisados em eletroforese em gel de poliacrilamida com SDS (SDS 1% e DTT 100 mM), imunoeletroforese simples e bidimensional frente a imunessoros específicos. A degradação da molécula de IgG foi observada na eletroforese em gel de poliacrilamida, na comparação entre a preparação controle e a tratada com a enzima, onde a banda correspondente à cadeia pesada desaparece, havendo concentração de fragmentos de baixo peso molecular em nova banda de proteínas. A imunoeletroforese com os soros anti-IgG e anti-'delta¿, comprovam o comprometimento da molécula, pois desaparece a reatividade da cadeia pesada com o soro ant-'delta¿. Com as preparações de IgA, tratadas ou não com a enzima, não foi detectada fragmentação da molécula de imunoglobulina, nem nos testes de eletroforese em gel de poliacrilamida, nem nas reações de precipitação das imunoeletroforeses. Pouca ou nenhuma ação da proteinade sobre a IgA secretória ter ocorrido. ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: Not informed. Mestrado Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Ana Maria Goulart de Azevedo Tozzi Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: No Mato Grosso do Sul (Centro-Oeste do Brasil), a floresta estacional semidecídua é a terceira formação vegetacional mais representativa, porém, atualmente estas formações encontram-se fragmentadas devido à intervenção antrópica intensiva. Este trabalho teve como objetivos o estudo florístico e fitossociológico do componente arbóreo de um fragmento florestal no município de Dourados, na região sul do Mato Grosso do Sul (¿Mata de Dourados¿, Fazenda Paradouro, com 300 ha.), e estabelecer relações de similaridade com outras florestas estacionais semidecíduas sul-mato-grossenses e de regiões próximas, e também com outras formações vegetacionais. A Mata de Dourados tem sido referida como uma área onde ocorre interposição de províncias vegetacionais. O levantamento florístico foi realizado através de caminhadas, quinzenalmente, de junho de 1997 a outubro 1997 e de junho de 1999 a outubro de 2000. Foram estabelecidas 36 parcelas contíguas, em duas faixas paralelas selecionadas pelo seu estado de conservação, formando dois retângulos de 18 parcelas em cada faixa, no sentido Leste ¿ Oeste, perfazendo um total de 3.600 m2 amostrados. Nas 36 parcelas de 10 X10m os critérios de inclusão utilizados foram os de árvores com mais de 2 m de altura e de diâmetro maior ou igual a 5 cm à altura do peito (DAP). Através de uma matriz de presença e ausência de espécies, foram comparadas as espécies coletadas com sua ocorrência em outros levantamentos florísticos de diversas regiões (51 selecionados). A partir desta matriz binária, foram calculados os índices de Distância Euclidiana e Bray-Curtis e, para avaliar o nível de similaridade entre as formações vegetacionais selecionadas, os resultados foram agrupados pela média aritmética da similaridade (UPGMA) e pelo Escalonamento Multidimensional (MDS). Os dados obtidos nas parcelas foram submetidos ao índice de associação de Distância Euclidiana e agrupados pelo método de Ward. O levantamento florístico registrou 83 espécies (66 gêneros, 30 famílias). Das famílias amostradas no levantamento, as que apresentaram maior número de espécies foram Leguminosae (17 espécies), Lauraceae (6), Meliaceae (6), Rutaceae (5), Anacardiaceae (4), Boraginaceae (4), Euphorbiaceae (4). Das demais famílias, quatro apresentaram três espécies, seis apresentaram duas espécies e 13 famílias apenas uma espécie cada. Dentre as Leguminosae, Mimosoideae foi a mais numerosa com 10 espécies, seguida por Caesalpinioideae e Papilionoideae, com quatro e três espécies, respectivamente. Os 585 indivíduos inventariados nas 36 parcelas, pertencentes a 43 espécies arbóreas (24 famílias), apresentaram índice de diversidade de Shannon (H¿) de 2,987 nats.indivs-1, valor equiparado ao encontrado em algumas outras florestas estacionais semidecíduas. Nove espécies com maiores Índices de Valor de Importância (IVI) representaram 62,93% do IVI total; 13 ocorreram apenas uma vez (5,38% do total). Diatenopteryx sorbifolia Radlk apresentou o maior IVI (29,28%) e a maior Dominância Relativa (14,26%). A ¿Mata de Dourados¿ contém espécies em comum com as de florestas estacionais semidecíduas ribeirinhas, florestas estacionais semidecíduas submontanas, florestas estacionais decíduas, florestas ombrófilas e savanas florestadas, sugerindo a ocorrência de interposição de províncias vegetacionais. Por outro lado, a maior similaridade do fragmento estudado foi verificada com as florestas estacionais semidecíduas ribeirinhas e as florestas estacionais semidecíduas submontanas. Pequena similaridade foi verificada entre as florestas ombrófilas e florestas estacionais semidecíduas montanas. A comparação da composição florística do componente arbóreo do fragmento estudado da Fazenda Paradouro com outras florestas estacionais semidecíduas submontanas sul-mato-grossenses não indicou muitas espécies em comum. Na análise de similaridade entre as 36 parcelas, os grupos com maior nível de fusão foram formados pelas amostras que continham árvores com áreas basais maiores, geralmente posicionadas no interior do fragmento. A interrupção nas classes de perímetro acima de 145 cm sugere a ocorrência de extração seletiva. O predomínio de classes inferiores a 145 cm de diâmetro nas distribuições de freqüência, com grande número dos indivíduos nos estratos inferiores e com freqüência absoluta menor que 20% em todas as espécies, sugere que a floresta da Fazenda Paradouro está passando por uma fase recente de regeneração Abstract: Seasonal semideciduous forests are the third representative biome at Mato Grosso do Sul (Central-Western Brazil). However, intensive human intervention at the last decades has been accelerated fragmentation processes of these vegetation communities. In this work were carried out floristic and phytosociological study of arboreous strata in a forest fragment in Dourados municipality, Southern Mato Grosso do Sul (¿Mata de Dourados¿, Paradouro Farm, with 300 ha.), and established floristic relationships between the studied area and other seasonal semideciduous forests from Mato Grosso do Sul and other vicinities regions, and between different forest physiognomies from these and farther regions. There are references that ¿Mata de Dourados¿ is influenced by the interference of distinctive phytogeographical provinces. The floristic survey was carrying out through assystematic routes, from July 1997 to October 1997, and from July 1999 to October 2000, fortnightly. A total of thirty-six permanent plots were sampled randomly, at Eastern ¿ Western direction in an area of 3.600 m2, distributed in two parallel strips of 18 plots, to do the phytosociological survey. In the 36 plots of 10 x 10 m, trees with diameter of breast height (DBH) equal or higher than 5.0 cm, and taller than 2.0 m were sampled. The sampled species at the floristic survey were compared with tree species from others studies (51 selected), through a binary matrix (species presence and absence). The data obtained were submitted to Bray-Curtis and Euclidian Distance Association Index was calculated through this binary matrix, and the Multidimensional Scaling (MDS) and the Arithmetic average clustering (UPGMA), to evaluate the similarity level between the vegetation formations selected. The data obtained in the 36 plots were submitted Euclidian Distance Association Index, and grouped through Ward Method. There were registered 83 species (66 genera, 30 families). The floristic survey showed that the richest families were Leguminosae (17 species), Lauraceae (6), Meliaceae (6), Rutaceae (5), Anacardiaceae (4), Boraginaceae (4), Euphorbiaceae (4). Among the other sampled families, four presented three species, and six families presented two species, and 13 families presented only one species. Considering the family Leguminosae, Mimosoideae was the richest, with 10 sampled species; Caesalpinioideae presented four species, and Papilionoideae, three species. The 585 tree individuals sampled at the phytosociological survey belong to 43 species (24 families). The species Shannon¿s diversity index (H¿) was 2.987 nats.individuals-1. The species H¿ value was quite similar to those found at others seasonal semideciduous forests fragments. Nine species with higher importance value index (IVI) represented 62.93% from total IVI; 13 species were showed only once (5.38% from the total of sampled species). Diatenopteryx sorbifolia Radlk presented the greatest IVI value (29.28%), and Relative Dominance (14.26%). The ¿Mata de Dourados¿ contains tree species from riparian forests, seasonal semideciduous forests, seasonal deciduous forests, ombrophyllous forests and forest savanna, and this fact suggests the occurrence of vegetation provinces interposition. However, the biggest through the high similarity index between riparian forests, seasonal semideciduous forests. The seasonal semideciduous forests presented lower similarities between ombrophyllous and montane tropical forests. The comparison of the floristic composition of the Paradouro Farm tree community with other seasonal semideciduous forests from Mato Grosso do Sul did not evidence a strong species similarity. At the similarity analysis between the 36 plots, the groups with the higher fusion level were formed by the plots, which presented trees with largests basal areas, generally at the interior of the forest fragment. The discontinuance of perimeter classes higher than 145 cm suggests the selective wood extraction. Through the predominance of inferior diameter than 145 cm classes at the frequencies distribution, with great number of the individuals at the inferior stratum, and absolute frequency lower than 20% showed for the total of sampled species, we suggest that the Paradouro Farm forest community was sampled in its initial natural regeneration stage (secondary succession) Doutorado Doutor em Biologia Vegetal

Orientador : Fernando Roberto Martins Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Com o objetivo de contribuir para o conhecimento da vegetação e flora das áreas da caatinga hiperxerofila e esclarecer possíveis relações dessas com o clima e os solos, foram realizadas análises da flora arbustivo-arbórea das caatingas dos municípios de Poço Redondo e Canindé do São Francisco. Foram identificadas 46 espécies arbóreas e arbustivas em 150 parcelas de 5mx10m, amostradas aleatoriamente em cinco subáreas de caatinga hiperxerofila arbórea remanescente, onde foram identificados os solos: Regossolo Eutrófico profundo, Solonetz Solodizado, Cambissolo Eutrófico raso, Cambissolo Eutrófico profundo e Bruno não cálcico vertico. Dos métodos usuais de taxonomia numérica foram aplicados: o programa de parcelas para parâmetros fitossiológicos, a análise das médias recíprocas, a.análise dos componentes principais e a analise de aglomerados... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: The studyaims at contributing to the knowledge of the flora and vegetation of the hyperxerophilous caatinga areas, as well at clarifying their possible relation with climate and soils, the shrubby-arboreous flora of the caatingas in the counties of Poço Redondo and Canindé do São Francisco, State of Sergipe northeastern Brasil were analyzed. Forty-six arboreous and shrubby species were identified in 150 5mx10m plots, sampled at random in five subareas of remaining hyperxerophilous arboreous caatinga. The following soils were identified: Eutric Regosol deep phase, Solodized Solonetz, Eutric Cambisol shallowphase, Eutric Cambisol deep phase and Vertic Non Calcic Brown. The following methods of numeric taxonomy were applied: parcel program, reciprocal average analysis, principal component analysis, cluster analysis, statistical analysis... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations Doutorado Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Fernando Roberto Martins Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A sucessão secundária de um trecho da Mata Santa Genebra (22º49¿45¿¿S e 47º06¿33¿¿W) foi analisada após a ocorrência do fogo de 1981. Para a análise foram usadas 42 parcelas de 5 x 5m, distribuídas ao longo de uma transação, em áreas de diferentes intensidades de fogo. Em cada parcela foram amostrados os indivíduos acima de 0,5m de altura, nos anos de 1984 e 1987. Os dados florísticos e de organização da vegetação foram analisados comparativamente, nas diferentes intensidades de fogo e entre os dois anos de observação. As análises empregadas foram as de parâmetros fitossociológicos, de classes de diâmetro e multivariadas (aglomerados, PCA, RA e DCA)... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: The secondary succession of a stretch of Santa Genebra Forest (22º49¿45¿¿S and 47º06¿33¿¿W) was analysed after occurrence of fire in 1981. Forty two 5 x 5m plots distributed along a transect through areas of different intensities of fire were used for analysis. In each plot, all individuals with height greater than 0.5m were sampled in the years 1984 and 1987. For floristic composition and plant organization were analysed comparatively for the different intensities of fire and for the two years. The data were analysed using phytosociological parameters, diameter classes and multivariate analyses (cluster, PCA, RA and DCA)... Note: The complete abstract is available with the full eletronic digital thesis or dissertations Doutorado Ecologia Doutor em Ciências Biológicas

Orientador : João Vasconcellos Neto Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A pesca artesanal é a atividade mais importante na praia do Pântano do Sul, localizada no sul da llha de Santa Catarina. Um estudo sob o enfoque ecológico, econômico e social com a população pesqueira local foi conduzido durante o período de agosto de 1998 a jullio de 1999, a partir de entrevistas com pescadores e acompanhamento das pescarias. O levantamento sócio-econômico demonstrou que a maior parte dos pescadores começou a pescar sob o ensinamento de seus pais e avós, com idade média de 13 anos. Sessenta e quatro por cento vivem exclusivamente da pesca. Mesmo considerando a pesca industrial o principal problema (41 % dos entrevistados), a maior parte deles (64%) trabalhou nessa fiota em média 12 anos. A falta de incentivo econômico e a ausência de fiscalização da frota industrial e artesanal são outros problemas enfrentados pelos pescadores. Nenhum dos pescadores entrevistados gostaria que seu filho fosse pescador, devido à baixa produtividade e rentabilidade (50%) e por considerar a pesca uma atividade muito sofrida e trabalhosa (35%). Durante o período de coleta foram registrados cerca de 340 t de pescados, divididos em 12 pescarias. A pesca com cerco flutuante (modelo japonês) foi responsável por 70% da produção total e 35% do rendimento total, estimado em U$ 129.255,30. Enquanto que a pesca com redes de deriva, mesmo participando com apenas 9% da captura total, foi responsável por 31 % do rendimento total da população pesqueira local. Além dos problemas apontados pelos pescadores, o desenvolvimento do turismo também pode ser considerado uma ameaça às comwúdades pesqueiras. A falta de informações precisas sobre a produção pesqueira local e regional ameaçam quaisquer tentativas de elaboração de planos de manejo adequados para a pesca. A comwúdade local possui um importante conhecimento etnológico do ecossistema marinho e da ecologia dos recursos pesqueiros. É primordial que futuros planos de manejo incorporem esse conhecimento, no interesse de incentivar as práticas sustentáveis de extração de recursos adotadas pelos pescadores. As cooperativas podem ser uma importante maneira de proporcionar ao pescador um maior controle da comercialização da pesca. As universidades, centros de extensão pesqueira e demais instituições afins poderiam promover cursos de capacitação aos pescadores, incentivando a cultura local e a atividade de pescador. O sucesso de qualquer plano de manejo pesqueiro dependerá, primeiramente, de um programa de recuperação da auto-estima do pescador, para os filhos de pescadores possam ver na profissão de seus pais, uma das alternativas para escolha da profissão, fato que não ocorre nos dias de hoje. A comunidade de pescadores artesanais do Pântano do Sul é uma das últimas comunidades do litoral catarinense que tem a maior parte de sua riqueza natural e cultural preserva. Dessa forma, deve ser prioridade para os govemantes investir na sua preservação e sustentabilidade Abstract: The present study with its ecologica1, economic and social approach was conducted in order to investigate the artisanal fishing conununity of Pântano do Sul, located at southern Santa Catarina Island (Florianópolis). The data were collected during August 1st of 1998 up to Ju1y 31 st of 1999, utilizing interviews .with fishermen and by observing the fishery on board. The social and economic SUfVey demonstrated that most of interviewed fishermen had learnt fishing through their parents and grandfathers, with an average of 13 years old. Fishing is the main source ofincome for 64% ofinterviewed fishermen. The Most of(64%) was engaged at industrial fleet during 12 years, in spite of considering it the main problem faced by them (41 % of the interviewed ones). The lack of economic incentive and the absence of enforcement of the industrial and artisanal fleet are other problems faced by the fishermen. None of the interviewed would like to have bis son as a fisherman, due to the low productivity and )'ield of fishery (50%) and for considering fishing a very suffered and laborious activity (35%). Fish total catch was about 340 t, divided in 12 different fisheries. Pound-net fishery (Japanese model) was responsible for 70% oftotal production and 35% of the total income, estimated in U$ 129,255.30. While driftnet fishery, although representing only 9% of the total catch, it was responsible for 31 % of the total income ofthe local fishing population Mestrado Mestre em Ecologia

Orientador: Aldo Focesi Junior Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Alguns aspectos comparativos entre hemoglobinas de duas espécies de peixes do rio Amazonas foram analisados com a finali¬dade de estabelecer as bases moleculares de suas propriedades funcionais, bem como as interações entre estas proteínas com outras moléculas e íons. As espécies estudadas possuíam diferentes características fisiológicas de respiração, atividade metabólica e meio ecológico. A hemoglobina de Osteoglossum bicirrhossum por eletroforese em poliacrilamida apresentou-se como um componente único com pronunciado efeito Bohr e efeito Root. Os valores de "n" na equação de Hill, mostraram variações apreciáveis com o pH, tanto na presença como na ausência de ATP 10-3M, com a menor afinidade a pH 7,4. As hemoglobinas de Pterygoplicthys pardalis no hemolisado total não apresentaram efeito Bohr, contudo os quatro componentes separados mostraram propriedades funcionais diferentes. O primeiro HbI, isolado por coluna DEAE-SEPHADEX mostrou pequeno efeito Bohr reverso e uma acentuada influencia de ATP 10-3M em pH baixo sobre este efeito tornando-o normal, enquanto que os três outros componentes apresentaram efeito Bohr normal e nenhuma influencia de ATP sobre ele. Dos achados foi possível estabelecer que o Osteoglossum bicirrhossum, peixe muito ativo, de águas superficiais, com respiração branquial, apresenta uma única hemoglobina com alto efeito Bohr e Root enquanto que Pterygoplicthys pardalis, peixe lento, de águas profundas, com respiração branquial e aerea facultativa, possuem duas famílias de hemoglobinas bastante diferentes em suas propriedades funcionais. Nossos resultados mostraram claramente a capacidade de adaptação molecular das hemoglobinas de peixe às condições fisiológicas e ambientais que eles estão sujeitos Abstract: Two species of fish hemoglobin from Amazon river were ànalized in order to establish the relationship between their molecular and physiological properties as well as their interactions with others molecules and ions. The species were different regarding respiration, metabolic actívity and habitat. The polyacrylámide electrophoresis pattern of Osteoglossum bicirrhossum hemoglobin showed only one component and pronounced Bohr and Root effect and the Rill coefficient showed significant variation with the pH in the presence or not of 10-3M ATP, with the lowestaffinity at pH 7.4. The total hemolisate of Pterygoplicthys pardalis presented no Bohr effect neverthless the four isolated components showed different functional properties thus the HbI component, isolated by DEAE-SEPHADEX showed small reverse Bohr effect that normal in the presence of 10-3M ATP at low pH. The other becomes three omponents presented normal Bohr effect and ATP does not change this effect. From these findings was possible to establish that the Osteoglossum bicirrhossum, a very active fish that lives iu stream with water-breathing type of respiration exihibits only one hemoglobin with high Bohr and Root effect while Pterygoplícthys pardalis a bottom físh both air and water breathing types of respiration have two family of hemoglobins with different functional properties. These results clearly show the capacity of molecular adaptation of fish hemoglobin to adapt to both the metabolic requirements and environment variations of the animals Mestrado Bioquímica Mestre em Ciências Biológicas

Orientadores: Maria do Carmo Alberto-Rincon, Paulo Pinto Joazeiro Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A utilização de biomateriais para a reparação de tecidos tem exigido o entendimento de seu comportamento in vivo. Com o intuito de avaliar a interação célula-polímero in vivo e in vitro, membranas de PLLA contendo 7% de plastificante tri-etil-citrato foram obtidas para análise pelo método de evaporação de solvente. Discos desse material foram implantados no tecido subcutâneo dorsal de ratos e retirados após um período de 2 a 180 dias de implante, processados para embebição em: a) parafina, para detecção de fibras reticulares; imunocitoquímica, utilizando-se anticorpos anti-vimentina, a-actina de músculo liso e anti-colágeno III; e análise morfométrica da incidência temporal de células gigantes; e b) resina k4M, para detecção ultraestrutural de filamentos de vimentina. Quanto à análise in vitro, fibrocondrócitos de menisco de coelhos foram extraídos e cultivados em membranas de PLLA e em lamínulas para avaliar a viabilidade da aplicação dessas membranas como substrato para crescimento celular. A análise in vitro foi realizada após 3, 8, 12, 15 e 18 dias de cultivo através de microscopia de luz e eletrônica de varredura. Os resultados da análise in vivo mostraram a deposição de fibras reticulares no interior da membrana, presença de grande número de fibroblastos e células endoteliais marcadas com anti-vimentina, além de células gigantes com expressão diferencial de vimentina e miofibroblastos na cápsula. Os resultados estatísticos da análise morfométrica da incidência temporal dessas células mostrou aumento gradual do número de células gigantes, bem como de núcleos ao longo do tempo, atingindo um platô nos períodos mais tardios após a implantação. A análise in vitro mostrou que os fibrocondrócitos aderem, diferenciam-se principalmente em células condrocíticas, e produzem grande quantidade de elementos fibrilares da matriz extracelular para formar um tecido fibroso altamente organizado que ocupa principalmente as bordas laterais e lisas da membrana. Na cultura de fibrocondrócitos em lamínulas, notou-se que as células adquirem uma morfologia predominantemente do tipo fibroblástica, com deposição de elementos fibrilares. Membranas de PLLA mostraram sustentar por um período maior a viabilidade de fibrocondrócitos in vitro, estimulando a formação de um tecido fibroso organizado, quando comparado a sistemas de cultivo em lamínulas Abstract: The use of biomaterials for tissue repair has been demanding the understanding of his in vivo behavior. To evaluate the in vivo and in vitro polymer-cell interaction, PLLA membranes containing 7% of plasticizer were obtained by casting. Discs of this material were introduced in the subcutaneous dorsal tissue of mice and withdrawn after a period from 2 to 180 days of implant, processed by embedding in: a) paraffin, for detection of reticular fibers; immunocytochemistry, by using antibodies against vimentin, smooth muscle¿s a-actin, and type III collagen; and morphometric analysis of the temporary incidence of giant cells; and b) resin k4M for ultrastructural detection of vimentin filaments. For the in vitro analysis, fibrochondrocytes of rabbit¿s meniscus were extracted, and cultivated in membranes of PLLA and in glass coverslips to value the viability of the application of these membranes as substrate to cellular growth. The in vitro analysis was carried out after 3, 8, 12, 15 and 18 days of cultivation through light and electron microscopy. The results of the in vivo analysis showed the deposition of reticular fibers inside the membrane, presence of great number of fibroblasts and endothelial cells marked with anti-vimentin, besides giant cells with differential expression of vimentin, and myofibroblasts in the capsule. The statistical results of the morphometric analysis of the temporary incidence of these cells showed gradual increase of the giant cells number, as well as of nucleus number in these cells along the time, reaching a plateau in the late periods after the implantation. The in vitro analysis showed that the fibrochondrocytes adhere to the membrane, and that they differentiates mainly in chondrocytic cells, and produce large amount of extracellular matrix fibers to form a highly organized fibrous tissue that occupies principally the side and smooth edges of the membrane. In the fibrochondrocytes culture in glass coverslips, it was noticed that the cells acquire a predominantly fibroblastic-like morphology, with deposition of matrix fibers. Membranes of PLLA sustained the in vitro fibrochondrocytes viability for a bigger period of time, stimulating the formation of a fibrous organized tissue when compared to glass coverslips cultivation systems Doutorado Histologia Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador : Anibal Eugenio Vercesi Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Com o objetivo de acrescentar dados que pudessem ajudar a esclarecer algumas particularidades da fisiologia de mitocôndrias de plantas, foram investigadas algumas das características do funcionamento de mitocôndrias isoladas de milho, batata e beterraba. Numa primeira parte de deste trabalho foram estudados alguns aspectos relacionados ao transporte de 'Ca IND. 2+¿, em mitocôndrias isoladas de coleóptiles de milho. Foi possível observar que o fosfato é estequiometricamente acumulado com o 'Ca IND. 2+¿, mantendo uma razão 'Ca IND. 2+¿/Pi próxima a 1,5 e que a atividade do transportador é independente da idade dos coleóptiles utilizados ... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: The first part of this work was dedicated to some aspects related to 'Ca IND. 2+¿ transport by corn coleoptile mitochondria. It was observed that the activity of the 'Ca IND. 2+¿ carrier is independent of the coleoptile age and that phosphate is accumulated together with 'Ca IND. 2+¿ keeping a 'Ca IND. 2+¿/Pi ratio near to 1.5 ... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations Doutorado Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Paulo Mazzafera Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Mestrado Mestre em Biologia Vegetal

Orientador : Rosely Rocha Sharif Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Datura stromonium L. é uma Solanaceae invasora, possui flores brancas ou roxas, contém grande quantidade de alcalóides, sendo que atropina e escopolamina estão presentes nas folhas e sementes. A planta adulta apresenta no seu eixo principal duas folhas cotiledonares e cerca de cinco a sete folhas alternas, um fruto terminal na forma de cápsulas deiscentes, com espinhos e dois ramos sUb-apicais que crescem pouco vegetativamente, apresentando a seguir, como o eixo principal, um botão terminal e dois ramos sUb-apicais, este padrão de crescimento continua sucessivamente. Cada uma das folhas do eixo principal, inclusive as cotiledonares, possui uma gema axilar que não se desenvolve na presença do ápice vegetativo. Durante a fase reprodutiva, quando estruturas reprodutivas basais se desenvolvem, estruturas apicais abscidam ainda na fase inicial de seu crescimento. o presente trabalho objetivou estudar o envolvimento do ápice vegetativo e das estruturas reprodutivas na inibição e liberação do crescimento das gemas axilares do eixo principal, bem como o envolvimento dos botões florais e frutos em desenvolvimento com a abscisão das estruturas reprodutivas jovens. A presença do ápice na fase vegetativa da planta inibe o crescimento de todas as gemas axilares individuais ou o conjunto (somatório do comprimento das gemas). Esta inibição é via auxina. As folhas cotiledonares inibem o crescimento das gemas G1 e G2 i as folhas F1 e F2 juntas, inibem as gemas cotiledonaresi a folha F1 inibe G2 e a F2 inibe as gemas cotiledonares e G1. Os eixos secundáriosem crescimento inibem todas as gemas axilares. Embora o botão A e eixos secundários inibam todas as gemas axilares, a remoção apenas de A não é capaz de liberar as gemas. A remoção de A, A e B ou A, B e C não libera o crescimento das gemas axilares. IAA a 1% em substituiçãoaos botões mantém as gemas inibidas. TIBA a 0,50% aplicado no pedúnculo de A e B libera as gemas axilares. TIBA a 0,25% aplicado no pedúnculo de A e B não libera as gemas axilares, mas quando aplicado nos eixos secundários promove o seu crescimento. As estruturas reprodutivas basais, por exemplo A e B, em desenvolvimento prejudicam a iniciação de novos botões como os D, e promovem a abscisão desses botões. A remoção somente dos eixos secundários, ou dos eixos secundários e botão A promove a iniciação de estruturas reprodutivas nas gemas axilares desenvolvidas. Enquanto que os botões que se iniciam, se desenvolvem e se estabelecem apenas no tratamento envolvendo remoção dos eixos e botão A. lAA a 1% em substituição a A e B não reduz a abscisão de C, mas promove iniciação e também reduz a abscisão de D. A aplicação de TIBA a 0,50% no pedúnculo de A e B mostra que o transporte basipeto de auxina é necessário para o estabelecimento dos botões. éTIBA a 0,50% aplicado nos pedúnculos de A e B e TIBA a 0,25% aplicado nos eixos secundários não reduzem a abscisão de C, mas promovem a iniciação e reduzem a abscisão de D. lAA (57 x 10-3M) aplicado sobre o botão A não reduz a abscisão dos botões apicais. A aplicação de lAA sobre o botão C não promove o estabelecimento desta estrtura, mas apenas promove a iniciação de D. BAP (0,22 x 10-3M) aplicado só ou concomitantemente com lAA (57 x 10-3M) sobre o botão C reduz a abscisão de C e de D, além de promover iniciação de D. -4 ¿3 Enquanto CEPA (10 e 10 M) aplicado sobre o botão A, promove a abscisão de A e de B, nitrato deprata (10-5M) aplicado sobre o botão C, reduz a abscisão de C, mostrando que a abscisão dos botões em Datura pode ser induzido por etileno. ABA (10-4 e 10-5M) não promove a abscisão dos botões tratados, porém antecipa a sua antese, BAP (0,22 x 10-3M) aplicado sobre o botão C, em plantas cujos botões B e folhas logo acima deste botão receberamABA (10-4M),reduz a abscisão dos botões C. ABA (10-4M), ainda, promove aumento na concentração de amido, reduz a de aminoácidos e proteinas do botão ou folha tratados. Portanto, uma análise final permite resumir: que a presença do ápice, tanto na fase vegetativa como reprodutiva, em desenvolvimento promove a inibição das gemas axilares individuais e também o conjunto; que o estabelecimento dos botões está relacionado com o transporte basipeto de auxina e requer imento de citocinina, e o etileno induz a abscisão, enquanto ABA promove elevação na concentração de carboidratos e redução de proteínas Doutorado Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Michel Georges Albert Vincentz Tese (outorado) - Universidade Estaulal de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Na planta modelo eudicotiledónea A. thaliana quatro genes para fatores de transcrição do tipo bZIP que são homólogos a Opaco-2 (O2) do milho, uma monocotiledônea, foram identificados. O2 é um regulador chave do metabolismo coordenado de carbono e nitrogênio e da síntese de prolaminas de reserva durante o desenvolvimento da semente. Estes quatro genes, AtbZIP9, o par de parálogos AtbZIP10 e AtbZIP25, e AtbZIP63, o provável ortólogo de O2, formam o Grupo C de genes bZIP de Arabidopsis. Sabe-se que AtbZIP9 provavelmente desempenhe um papel no processo de desenvolvimento do floema, AtbZIP10 está associado com e resposta à estresses, além de, junto com AtbZIP25, participar na regulação de genes de proteínas de reserva na semente e que AtbZIP63 pode estar envolvido com o balanço energético da planta. Para acrescentar novas informações relevantes sobre a função dos bZIPs do Grupo C e, a longo prazo, entender como a função de O2 evoluiu em angiospermas, iniciou-se neste trabalho uma caracterização detalhada da regulação dos membros do Grupo C em resposta a diversos sinais hormônais e a açúcares. Mostramos que apenas as hexoses glicose e manose e o ácido abscísico (ABA) regulam de maneira transiente a expressão dos genes bZIP do Grupo C, sugerindo que eles representam intermediários mediando as respostas a estes sinais. A glicose reprime a expressão de AtbZIP9 e de AtbZIP63 e induz a expressão de AtbZIP25, ABA reprime a expressão de AtbZIP63 e manose reprime a expressão de AtbZIP25 e de AtbZIP63. Em Arabidopsis, a hexoquinase1 (HXK1) é um sensor da glicose que ativa a síntese e sensibilidade ao ABA para inibir o desenvolvimento da plântula em resposta a glicose. Reportamos aqui que as repressões em curto prazo de AtbZIP9 e AtbZIP63 por glicose e de AtbZIP25 e AtbZIP63 por manose estão mediadas por vias de sinalização independentes de HXK1 e envolvem elementos relacionados a ABA. AtbZIP25 apresenta uma indução por glicose dependente de ABI5 e repressão por manose dependente de ABA2 e ABI4. A repressão de AtbZIP63 por glicose envolve uma via dependente de ABA2 e de ABI5 que é reprimida por ABI4. Já a repressão de AtbZIP63 por manose e de AtbZIP9 por glicose estão inseridas em vias independentes de ABA2, ABI4 e ABI5. A dependência diferencial de ABI5 e de ABI4 na regulação por glicose e manose de AtbZIP25 e de AtbZIP63, permite inferir que ambas hexoses atuam através de vias de transdução distintas e enfatiza a importância de manose como sinal metabólico de regulação. Observou-se ainda que ação conjunta de ABA e glicose apresenta um efeito sinérgico na repressão de AtbZIP63, provavelmente refletindo regulações pós-transcricionais da expressão deste gene. Os dados sugerem que AtbZIP63 representa um importante nó da comunicação entre a sinalização por ABA (estresse abiótico) e por glicose (nível energético) permitindo adequar eficientemente a resposta a estresse abiótico que seja compatível com o estado energético da organismo. Abstract: In the model eudicot organism A. thaliana (Arabidopsis), four genes encoding bZIP transcription regulatory factors that are homologous to the maize Opaque-2 (O2) locus were identified. O2 is a key regulator of the carbon to nitrogen balance and of the prolamine type storage proteins synthesis during seed development. The Arabidopsis genes, AtbZIP9, the two paralogues AtbZIP10 and AtbZIP25 and AtbZIP63, the most probable O2-ortholgue, together form group C bZIP genes. AtbZIP9 is likely to be involved in phloem development while AtbZIP10 is related to stress responses but is also required for the regulation of seed storage protein genes very much like AtbZIP25. Finally, AtbZIP63 seems to be involved in the control of the energetic balance. In order to get new and relevant information about the role of the group C bZIP genes and consequently obtain new insight into the evolution of the O2-related functions in angiosperms, we initiated a detailed characterization of the regulation of group C members in response to hormonal signals and sugars. We show here that two hexoses, glucose and mannose as well as abscisic acid (ABA) are the only signals that transiently modulated the expression of group C bZIP genes, suggesting they are players in the response induced by these signals. While glucose is shown to repress the expression of AtbZIP9 and AtbZIP63 and to induce AtbZIP25 expression ABA is able to repress the expression of AtbZIP63 and mannose represses the expression of AtbZIP25 and AtbZIP63. In Arabidopsis, hexokinase1 (HXK1) is a glucose sensor that may trigger abscisic acid (ABA) synthesis and sensitivity to mediate glucose-induced inhibition of seedling development. We report that the short term regulation of the expression of AtbZIP9, AtbZIP63 by glucose and the repression of AtbZIP25 and AtbZIP63 by mannose are HXK1-independent and for AtbZIP25 and AtbZIP63, these regulations partly rely on ABA synthesis. It also shown that the activation of AtbZIP25 expression by glucose relies on ABI5 while its repression by mannose appears to be ABA2- and ABI4-dependent. Glucose repression of AtbZIP63 expression seems to involve an ABA2- and ABI5-dependent pathway which is repressed by ABI4. We also reveal that the regulations of AtbZIP63 by mannose and of AtbZIP9 by glucose do not require ABA, ABI4 or ABI5. The differential dependence of glucose and manose-induced regulation of AtbZIP63 and AtbZIP25 expression for ABI5 and ABI4 indicates that both hexoses act through distinct transduction pathways and highlights the importance of mannose as a regulatory metabolite. A synergetic repression of AtbZIP63 by ABA and glucose, which possibly reflects a post-transciptional regulatory scheme of AtbZIP63 expression, was uncovered. Together, the data suggests that AtbZIP63 is a key nod of the ABA (abiotic stress) and glucose (energetic balance) crosstalk network allowing to efficiently adjust the response to abiotic stresses according to the energetic status of the organism. Doutorado Genética Vegetal e Melhoramento Doutor em Genética e Biologia Molecular

Orientador: Thomas Michael Lewinsohn Tese (doutorado) - Universidade Estadualde Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Comunidades de vespas escavadoras tropicais apresentam várias caracteristicas em comum com as das comunidades temperadas. Diferentes espécies frequentemente se agregam em "manchas" de nidificaçao em solos arenosos, desprovidos de vegetação e completamente expostos à luz solar. A sucessão nessas manchas pode ter um padrão previsivel, devido à tendência das espécies em nidificar nos mesmos microhabitats onde nasceram e à sincronização fenológica com as suas presas. Há também uma tendência de especializaçâo em microhabitats e em presas o que pode facilitar a coexistência das espécies e ser importante em estrutural'estas comunidades. Embora grande parte das espécies estudadas tenha uma ampla distribuição geográfica, suas ocorrências locais tendem a ser restritas. Isto porque a riqueza de espécies e composição de comunidades locais são influenciadas pelo grau de especialização em microhabitats e presas. A composição e diversidade de espécies de parasitas e cleptoparasitas é diferente em comunidades tropicais e temperadas. Comunidades temperadas parecem mais ricas em parasitas do que as tropicais. Portanto, caso parasitas sejam importantes na estruturaçao de comunidades, seu papel será localmente diferenciado. As fenologias e atividades diárias das espécies são influenciadas pelos padrões locais de temperatura. Há uma sazonal idade evidente nas comunidades porém, algumas espécies que coocorrem no tempo e espaco, além de serem especialistas em presas e microhabitats de nidificaçgo, pertencem geralmente a gêneros distintos. Entretanto, basear-se apenas na especialização e em dados de ocorrência sintópica de espécies congenéricas, pode não ser suficiente para atribuir a exclusão competitiva, como geralmente é feito, o papel principal na estruturacão de comunidades de vespas escavadoras. As comunidades não são diferenciadas por grande parte dos atributos comportamentais investigados, devido à ampla convergência da maior parte destes atributos entre as diferentes espécies coexistentes Abstract: Not informed. Doutorado Ecologia Doutor em Ciências Biológicas

Orientador : João Lucio de Azevedo Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: o presente trabalho foi conduzido com a f1nali-dade de se estudar através do método de Foster, a seleçao de Aspergillus niger, para produção de ácidos, utilizando radiação gama.Também foi estudada a produção de ácidos em meio líquido para confirmação do método de Foster na seleção de melhores produtores.Por fim, procurou-se conhecer possível efeito da radiação gama sobre a instabilidade da linhagem utilizada. Para isso, foi empregada uma linhagem industrial, usada na produção de ácido cítrico. Foram feitos três ciclos de seleção, sendo que cada população foi analisada quant1tativamente quanto ao caráter produção de ácidos, através do fator índice ácido. Dos experimentos realizados, os seguintes resultados a conclusões foram obtidos: a) - Com uma dose de radiação gama de 80 Kr obteve-se 1,61% de sobreviventes. A curva de sobrevivência indicou a existência de conídios binucleados e conídios não irradiados apresentaram porcentagem de sobrevivência inferior a 100%. Por esses resulta-dos foi possível concluir-se que a dose acima citada se presta bem a indução de mutações em A. niger e que a baixa sobrevivência nos conídios pode ser atribuída a existência de mutação letal em um dos núcleos conídiais. b) - Foi encontrada uma correlação negativa entre o índice Ac1do e o diâmetro das colônias em todas as populações irradiadas, o que permitiu concluir que a seleção para produção de ácidos através de altos índices ácidos pode-se selecionar também colônias de crescimento menor. c) - Houve uma diferença estatisticamente significante entre colônias produzidas a partir de conídios irradiados quando comparados com colônias vindas de conídios não irradiados com relação ao índice ácido. A média obtida para o índice ácido aumentou após cada irradiação sendo que o maior valor foi obtido após a terceira irradiação. Os resultados permitiram concluir que a radiação gama como esperado provocou efeitos provavelmente genéticos na linhagem empregada. A população irradiada mostrou maior variabilidade do que a população não irradiada com relação ao Índice ácido, mostrando que irradiação é um efetivo processo de aumento de variabilidade, indispensável para posterior seleção. Conclui-se também através do progresso obtido pela seleção de isolados mais produtivos com relação ao Índice ácido, que o método de seleção empregado foi eficiente. Finalmente o aumento geral no valor de Índice ácido após irradiação foi atribuído a existência de conídios heterocarióticos contendo um núcleo normal e outro contendo um recessivo letal. d) - Não houve correlação entre os valores de Índice ácido em meio de Foster e os resultados obtidos em meio líquido de fermentação. Esses resultados permitem concluir que seleção para Índice ácido em meio de Foster não é condição Sine qua non para que alinhagem tenha alta produtividade em condições industriais. e) - Ensaio de estabilidade das linhagens irradiadas através do número de setores, revelou que a linha-gem que sofreu a primeira irradiação mostrou-se mais estável do que as com segunda e terceira irradiação. Concluiu-se portanto que a obtenção de linhagens estáveis e portanto de interesse industrial poderá ser facilmente conseguida com doses menores de radiação, do que com múltiplas irradiações ou mesmo altas doses do irradiação, embora a explica-ção do fenômeno ainda permaneça obscura Mestrado Mestre em Biologia

Orientador : Hilton Silveira Pinto Tese (doutorado) - Universidade Estadualde Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Com o objetivo de contribuir para a viabilização da mini-enxertia da seringueira, foram desenvolvidas pesquisas abordando alguns aspectos fisiológicos e biometeorológicos relacionados com a obtenção de brotações para a enxertia e com o comportamento das plantas enxertadas nas condições de campo. Foram alterados alguns aspectos da técnica de mini-enxertia, incluindo modificações no sistema de fixação do enxerto e no esquema de irrigação. Também foi aplicada uma técnica de desinfecção das brotações que reduziu a mortalidade dos enxertos causada por fungos. Os tratamentos de quebra da dominância apical em plantas envasadas e cultivadas em casa de vegetação resultaram no caso das plantas com o ápice excisado e para as plantas podadas acima do quarto lançamento foliar, no ¿efeito da distância¿ com a brotação das gemas imediatamente abaixo do ponto de corte. Devido ao vigoroso crescimento das brotações foi observada uma tendência de recuperação do peso seco e da área foliar no caso das plantas podadas que, no entanto, como no caso das plantas que tiveram o ápice excisado, apresentaram uma senescência das folhas no extrato inferior do caule. Os tratamentos não alteraram os teores de açúcares solúveis totais na casca mas, no caso das plantas aneladas observou-se um acúmulo de amido na porção superior do caule...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: With the aim of contributing for the technical viability of rubber tree mini-grafting, studies were developed concerning some physiological and biometeorological aspects related to sprout production for grafting and the behaviour of the grafted plants under field conditions. Some aspects of the mini-grafting technics were altered, including modifications on the graft fixation system and on the irrigation squeme. A technic for sprouting disinfection was also applied, which reduced the graft mortality caused by fungus. The break of apical dominance treatments in potted plants cultivated in greenhouse resulted, in the case of plants with excised apex and for the plants pruned above the fourth leaf flushing, on a ¿distance effect¿,with the sprouting occurring immediately under the cutting point. Due to the vigorous sprouting growth, a tendency for the recovery of the dry weight and leaf area was observed for the pruned plants, which, however, as in the case of the excised apex plants, presented a senescence of the leaves from the lower portion of the stem. The treatments did not alter the amount of total soluble sugars in the bark but, in the case of the girdling plants an accumulation of starch in the upper portion of the stem was observed...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations Doutorado Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Ione Salgado Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O NO é uma molécula sinalizadora versátil muito importante em diversos processos em plantas. Uma de suas principais atuações é na sinalização celular durante o processo de defesa contra o ataque de patógenos. Plantas de Arabidopsis thaliana do genótipo mutante nia1 nia2, deficientes para os dois genes estruturais que codificam para a enzima nitrato redutase (NR), são susceptíveis à bactéria Pseudomonas syringae. Foi sugerido que a resposta de defesa prejudicada no mutante NR-deficiente seria resultante de seus reduzidos níveis de NO, quando comparados àqueles do genótipo selvagem. Em um trabalho recente de nosso grupo, empregando microarranjo de DNA, foi observado que a fumigação com gás NO no mutante nia1 nia2 foi capaz de modular diversos genes relacionados à defesa, alguns dos quais não previamente documentados como responsivos a esse radical. Neste trabalho se analisou por PCR em tempo real o efeito do gás NO na expressão de genes relacionados à defesa em plantas selvagem e no mutante nia1 nia2 infectados com uma linhagem avirulenta da bactéria P. syringae. Genes de defesa, como PR1, foram induzidos pela bactéria e a expressão destes foi maior no genótipo selvagem quando comparado ao nia1 nia2, o que é consistente com a susceptibilidade do mutante. A fumigação com NO também modulou genes relacionados à biossíntese de lignina (CAD1) e à sinalização de auxina (TIR1, ILL1, GH3) e etileno (ACCS7). Análises de quantificação de lignina mostraram uma pequena redução desse composto no genótipo mutante em relação ao selvagem, além de uma diferença em sua composição. Ademais, a fumigação com NO atenuou a expressão de PR1 e outros genes relacionados à via do ácido salicílico em plantas inoculadas e preveniu o crescimento bacteriano em folhas nia1 nia2. Já foi demonstrado que a inoculação do patógeno no mutante induz uma baixa produção de NO e no presente trabalho observou-se uma alta produção de H2O2 comparado ao selvagem. O H2O2 potencializou o efeito microbicida do NO fumigado na suspensão de bactéria. Os resultados sugerem que um efeito microbicida direto do NO, em conjunto com H2O2, pode resultar na atenuação da resposta de defesa na planta, reduzindo o gasto de energia associado à transcrição de genes relacionados à defesa Abstract: NO is an important signaling and versatile molecule which plays important roles in many processes in plants. One of its main actions is in cell signaling during defense response against pathogen attack. Arabidopsis thaliana plants of the nia1 nia2 mutant genotype, deficient in the two structural genes encoding for the enzyme nitrate reductase (NR), are susceptible to the avirulent bacteria Pseudomonas syringae. It has been suggested that the impaired defense response in the NR-deficient mutant would result from their low NO levels when compared to those of the wild type. Indeed, in a recent study from our group, it was observed through a DNA microarray that fumigation of nia1 nia2 mutant with NO gas was able to modulate many genes related to defense, some of which not previously documented as responsive to this radical. In this work we analyzed by real-time PCR the effect of NO gas on the expression of genes related to defense in the wild type and nia1 nia2 mutant infected with an avirulent strain of Pseudomonas syringae. Defense genes such as PR1 were induced by the bacteria and its expression was higher in wild type when compared to nia1 nia2, which is consistent with the susceptibility of the mutant. NO fumigation also modulated genes related to the biosynthesis of lignin (CAD1) and the auxin (Tir1, ILL1, GH3) and ethylene pathways (ACCS7). Analysis of lignin showed a reduction of this compound in the mutant genotype compared to wild type, and a difference in its composition. In addition, fumigation with NO attenuated the expression of PR1 and other genes related to salicylic acid signaling in infected plants and prevented bacterial growth in nia1 nia2 leaves. Furthermore, pathogen infection is known to induce a low production of NO in nia1 nia2 and here we also observed that there is a higher production of H2O2 in the mutant compared to the wild type. H2O2 potentiated the microbicidal effect of NO fumigated in bacterial suspensions. The results suggest that a direct microbicidal effect of NO, together with H2O2, may result in attenuation of the defense response in the plant, reducing energy expenditure associated with the transcription of genes related to defense Mestrado Biologia Vegetal Mestra em Biologia Vegetal

Orientadores: Hiroshi Aoyama, Celso Eduardo Benedetti Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Em nosso laboratório foram purificadas quatro isoformas de fosfatases ácidas, a partir de sementes de soja quiescentes, tendo sido também estudadas suas propriedades cinéticas e físico-químicas. Estudos físicos e estruturais destas enzimas requerem uma grande quantidade da proteína pura, o que exigiria várias purificações convencionais, que, em geral, são bastante trabalhosas. Devido a este fato e a existência de poucas de tais proteínas clonadas e expressas, nos propusemos a clonar e expressar uma proteína tirosina fosfatase (PTP) de soja. O estudo da cinética da PTP recombinante revelou que esta enzima possui características típicas de uma fosfatase e maior especificidade para tirosina-fosfato em relação a outros substratos analisados. Foi feito o estudo de desnaturação térmica da enzima, através de dicroísmo circular, que mostrou que a enzima recombinante apresenta baixa estabilidade térmica. Identificamos por western blot a presença da GmPTP nos diferentes tecidos de soja, germinados tanto no claro como no escuro. Estes resultados, confrontados com os obtidos no PCR quantitativo, mostram uma expressão aumentada do tecido raiz, quando comparada aos outros tecidos avaliados, que está em concordância com o encontrado na literatura, referente à importância fisiológica da enzima neste tecido. Níveis adequados de fósforo são necessários para o crescimento e desenvolvimento de todos os organismos para o bom funcionamento de funções como estrutura molecular, geração de energia e regulação metabólica. A demanda por fósforo e sua conseqüente absorção do solo pelas raízes, aumenta dramaticamente durante o período de rápido crescimento e divisão, por exemplo, na germinação de sementes. Sendo assim, como supridores importantes de fósforo para o metabolismo da planta, podemos citar as fitases e fosfatases, que, além de contribuírem para prover nutrientes, as fosfatases também desempenham papel importante no controle de diferentes funções da planta, particularmente na regulação das cascatas de transdução de sinal. Utilizamos microarranjos de quinases como ferramenta para avaliação do quinoma da raiz nas plântulas de soja germinadas na presença e ausência de luz. Assim, concluímos que fatores ambientais, como a presença de luz e disponibilidade de nutrientes fazem com que diferentes vias estejam ativas e que diferentes fitormônios estejam agindo predominantemente. Relacionando as condições de germinação das plântulas de soja com esses fatores e às quinases mais ativadas no chip, propomos um modelo de sinalização onde o hormônio ácido abscísico responde ao estresse através da ativação de vias como as de MAPKs e de cálcio, causando modulação da atividade de fosfatases e quinases, resultando em respostas como proliferação e rearranjo do citoesqueleto das raízes. Neste trabalho, nós descrevemos a clonagem, expressão de uma de soja, sua caracterização cinética, localização tecidual e investigação da possível relação com a sinalização disparada pela presença ou ausência de luz. A investigação e caracterização de PTPs em plantas podem fornecer informações relevantes no campo de pesquisa do metabolismo vegetal. Sendo assim, nós disponibilizamos dados bioquímicos relevantes os quais sugerem que as plântulas de soja contêm PTP típicas que são principalmente expressas em raízes e aparentemente desempenham papel importante durante a germinação da semente. Abstract: Our group previously described the purification and characterization of four acid phosphatase isoforms obtained from mature soybean seeds, and determined the kinetic and physico-chemical properties of these enzymes. Structural and physical studies demand high amounts at purity levels of these enzymes, requiring efforts in laborious conventional purifications. Due to this fact and to the existence of few plant proteins that already has been cloned and expressed, we proposed to clone and express a protein tyrosine phosphatase (PTP) from soybean. The kinetic studies of the recombinant PTP revealed an enzyme with phosphatase typical features and higher specificity toward Tyr-phosphate when compared to other analysed substrates. The analysis of thermal inactivation of the enzyme was carried out by circular dichroism, which showed that GmPTP had low thermal stability. The immunolocalization of GmPTP, by western blot, identified the enzyme in different soybean tissues, which were germinated in the presence and absence of light. These results are in agreement with those obtained from the quantitative PCR results, that showed a higher expression of GmPTP in roots when compared with other evaluated tissues. The physiological importance of this tissue to the plant metabolism corroborates our results, because adequate levels of phosphorus are required for the good operation of metabolic functions, as growth and development. The phosphorus demand and the consequent soil absorption through the roots dramatically increase in periods of high growth rate, for instance, during germination. Therefore, phytases and phosphatases are important suppliers for plant metabolism and besides the contribution to provide nutrients, phosphatases could play an important role in regulation of signal transduction cascades. Kinase microarrays were employed as a strong tool to analyse the root kinome in soybean plantlets germinated in light and dark conditions. We concluded that abiotic factors as light presence and nutrients availability were responsible for the activation of different pathways and different phytormones prevalence. Relating the germination conditions of soybean plantlets to these factors and to the analysis of the most activated kinases on the chip, we propose a signaling model to explain that, when the hormone abscisic acid is the main response of stress stimuli, it triggers the activation of MAPK and calcium signaling, and the resulting modulation of kinases and phosphatases activities led to proliferation and cytoskeleton rearrangement in roots. In this work, we described the cloning and expression of a soybean PTP, its kinetic characterization, tissue distribution and investigation of a putative relationship with the signaling pathway triggered by light and dark. The investigation and characterization of PTPs from plants can add relevant information in the plant metabolism research field. Therefore, we provided a wealth biochemical data which suggest that soybean plantlets contain typical PTP, which is mainly expressed in roots and apparently plays a critical role during germination. Doutorado Bioquímica Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Marcos Silveira Buckeridge Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Galactomananos são polissacarídeos de reserva da parede celular, compostos por uma cadeia principal de manoses P-(1_4), com ramificações simples de galactose, ligadas 0:-(1 _6) à cadeia principal. São compostos típicos de sementes em espécies da família Leguminosae e os estudos feitos até o momento indicam que este seja uma molécula bifuncional, exercendo um papel no controle da embebição no início da germinação e posteriormente servindo como reserva de carbono para o crescimento inicial da plântula. As sementes de Sesbania marginata (Leguminosae-Faboideae) acumulam galactomanano no endosperma (21 % da massa de matéria seca da semente), o qual é completamente degradado após a germinação, por ação de três enzimas: 0:galactosidase, endo-p-mananase, e exo-p-mananase (ou p-manosidase). Os produtos da degradação são transferidos para os cotilédones e eixo embrionário em crescimento, acumulando amido, que é posteriormente degradado ao longo do crescimento da plântula. No presente traballho foi verificado que o ácido abscísico (ABA 10-4M) é capaz de retardar a germinação das sementes de S.marginata e inibir significativamente o crescimento do embrião. O acompanhamento das variações das massas fresca e seca mostrou que o ABA tem um efeito transitório na massa seca, apresentando um efeito drástico no ganho de massa fresca, sugerindo que sua ação seja na absorção de água pelo embrião em crescimento. Um efeito parcial do ABA foi verificado sobre a degradação do galactomanano, sendo este efeito também caracterizado pela inibição do aumento na atividade de uma das enzimas de degradação, a 0:galactosidase. Em experimentos em que o ABA foi aplicado antes e/ou depois da protrusão da radícula (que sinaliza o início da degradação do galactomanano) foi verificado que o hormônio tem efeito sobre a degradação do galactomanano principalmente quando aplicado antes da protusão da radícula ou durante as 144h do experimento e menor quando aplicado depois da protusão da radícula. Os efeitos sobre a massa fresca do embrião foram idênticos em intensidade aos observados para o endosperma. No entanto, não houve efeito sobre a massa seca do embrião. Quando endosperma e embrião foram isolados e tratados de forma similar, observou-se efeito do ABA sobre a degradação do galactomanano nas condições experimentais, mas sobre massa fresca do embrião o efeito só foi verificado quando o ABA foi mantido durante 144h e não houve qualquer efeito sobre a massa seca. Como ocorreu uma grande diferença em massa do embrião, quando o endosperma foi retirado, conclui-se que o galactomanano funciona mais como uma reserva de água que de carbono para o embrião e que o efeito do ABA parece ser principalmente na degradação do galactomanano, com consequências para o embrião. Assim, o ABA atua mais como um modulador que como inibidor do processo de degradação de reservas e seu aproveitamento pelo embrião em crescimento Abstract: Galactomannans are storage cell wall polysaccahrides found In endospermic seeds of legumes. They are thought to be storage polymers, since it has been observed for a few species (among them Sesbania marginata) that it is completely broken down after germination and its products are transferred to the growing embryo. We examined the effect of ABA (10-4M abscisic acid) on the degradation of galactomannan in isolated endosperms and intact seeds of S.marginata. We found that after seed germination the initial embryo growth was retarded by ABA. Ultrastructural analysis showed that the embryo is completely surrounded by an endosperm which displays very thick galactomannan containing cell walls. Although an inhibitory effect has been observed on the increase of fresh weight of the embryo, the effect of ABA on the dry weight was weaker and transítory (from 48 to 96h). Endosperm dry weight and galactomannan degradation were significantly inhibited and the activity of a-galactosidase was strongly inhibited by ABA. The addition of ABA before and/or after mobilisatíon ín íntact seeds or isolated endosperm, showed that whereas addítion of ABA before mobilisation did not affect dry weight decrease in intact seeds, it was strongly affected in isolated endosperms. On the other hand, whereas ABA affected embryo fresh weight íncrease in intact seeds, but not in isolated embryos, no significant effect was observed on dry weight. This results suggest that ABA affects galactomannan degradation and by doing 50, prevents water absorption by the embryo, rather than affect its dry weight. As ABA has been detected in the endosperm os seeds of S.marginata, it ís proposed that it probably acts as a modulator of galactomannan mobilisation and consequently sinchronises it with early growth of the embryo Mestrado Biologia Celular Mestre em Biologia Celular

Orientador : Hermogenes de Freitas Leitão Filho Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: o gênero Lychnophora, como circunscrito no presente trabalho, consta de 68 espécies, em oposição aos 11 táxons registrados na última revisão. Destas, 27 espécies são novas para a ciência. Das demais, algumas espécies representam novas combinações, bem como táxons excluídos ou sinonimizados na última revisão. Não foi reconhecida nenhuma categoria infraespecífica, e as anteriormente descritas foram sinonimizadas. As espécies L. damazoi, L. itatiaiae, L. unicaulis e L. vanisschoti foram excluídas do gênero. Foi aceita a inclusão dos gêneros Lychnocephalus e Lychnophoriopsis em Lychnophora, como em trabalhos anteriores. Os gêneros Chronopappus, Haplostephium, Paralychnophora e Episcothamnus foram considerados como sinônimos, com suas espécies combinadas em Lychnophora. Parte das espécies de Piptolepis e duas espécies de Eremanthus (R. leucodendron e R.veadeiroensis) foram também combinadas no presente gênero. O gênero foi subdividido em seis seções: Lychnophora, Lychnophoriopsis, Lychnophorioides, Lychnocephaliopsis, Sphaeranthus e Chronopappus. Com base nas observações de campo e estudo de amplo material examinado de Herbários, foram propostas novas terminologias referentes aos hábitos, folhas e inflorescências. Além disto, novos caracteres morfológicos foram observados, sendo aqui referidos pela primeira vez. Desta forma, os caracteres distintivos de Lychnophora foram ampliados, bem como a sua variabilidade, para uma melhor circunscrição do gênero e seu real limite em relação aos demais gêneros da tribo Vernonieae. Lychnophora é considerado um gênero endêmico do Brasil, tendo as suas espécies uma distribuição restrita aos complexos rupestres de quartzito da Bahia, Goiás e Minas Gerais. As espécies apresentaram cinco padrões de distribuição, podendo ser encontradas: nas formações rupestres dos três Estados (L. salicifolia); em Minas Gerais e Goiás (L. ericoides); em Minas Gerais e Bahia (L. granmogolense, L. passerina e L. rosmarinifolia). As demais espécies ocorrem nos complexos rupestres de um determinado Estado ou são microendêmicas de uma localidade. Excluindo aquelas de distribuição restrita as espécies de Lychnophora geralmente apresentam populações disjuntas em várias localidades. As espécies de distribuição ampla revelaram-se mais polimórficas e as de distribuição restrita mais uniformes na sua macromorfologia. Foram relacionados os ambientes onde ocorre Lychnophora e são descritas as suas adaptações à seca, ao fogo e às geadas, que podem ocorrer nestes habitats. Considerações sobre as populações de Lychnophora bem como dados sobre a dispersão de aquênios são discutidos Abstract: The genus Lychnophora, as here circumscribed, comprises 68 species, in contrast to the 11 taxa recognized in the last revision. There are 27 species new to science and some others represent new combinations and excluded or synonymized taxa from the previous revision. Infraspecific taxa were not recognized and those previously described were synonymized here. L. damazoi, L. itatiaiae, L. unicaulis and L. vanisschoti were excluded from the genus. The inclusion of the genera Lychnocephalus and Lychnophoriopsis in Lychnophora was accepted in agreement with previous studies. Beside these, Chronopappua, Haplostephium, Paralychnophora and Episcothamnus were also placed under Lychnophora. Some species of Piptolepsia and two species of Eremanthus (E.leucodendron e E.veadeiroenais) were also transfered to Lychnophora. Six sections are recognized: Lychnophora, Lychnophoriopsis, Lychnophorioides, Lychnocephaliopsis, Sphaeranthus and Chronopappus. On the basis of field observations and extensive studies of herbarium material, a new terminology is proposed for habit, leaf and inflorescence morphology. Moreover, new macromorphological characters were studied and are described here for the first time. Based on this new evidence, the generic circumscription of Lychnophora was widened and its boundaries redefined in relation to other genera of the tribe Vernonieae, making the genus a more natural assemblage. Lychnophora is a brazilian endemic genus and its species have a restricted distribution in the inland quartzite "rupestre" complex from Bahia, Goiás and Minas Geraie states. Five distribution patterns were recognized: species distributed in alI three states (L. salicifolia); species from Minas Gerais and Goiás (L. ericoides); species from Minas Gerais and Bahia (L. granmogolenae, L. passerina e L. rosmarinifolia); species that are restricted to one of the states and species microendemic to a given locality. The more widely distributed species usually have disjunct populations occurring in many localities. The more widely distributed species showed a broader range of macromorphological polymorphism whereas species with more restricted distributions had a more uniform morphological pattern. The environments where Lychnophora species occur and adaptation of these species to drought, fire and frost are discussed. The nature of Lychnophora species populations and achene dispersion are also discussed. Doutorado Biologia Vegetal Doutor em Ciências Biológicas

Orientadores: Nilson Ivo Tonin Zanchin, Beatriz Gomes Guimaraes Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: As GTPases da família Rab regulam o transporte intracelular de vesículas em eucariotos. Cada Rab atua em uma via de transporte específica e seu mecanismo de ação se dá através da realização de um ciclo de ligação e hidrólise de GTP. Neste trabalho, foi determinada a estrutura cristalográfica das formas inativa (ligada a GDP) e ativa (ligada a GppNHp) da GTPase Rab11b, um membro da subfamília Rab11 que está envolvida na reciclagem de proteínas dos endossomos para a membrana plasmática, no tráfego de vesículas da rede trans-Golgi para a membrana plasmática e na fagocitose. Os resultados foram confrontados com os dados estruturais da Rab11a descritos anteriormente. A Rab11b inativa cristalizou como um monômero, o que gera conflitos a respeito da formação de dímeros funcionais pela Rab11a. A Rab11b e a Rab11a ativas divergiram em relação à posição e à interação da serina 20, que é importante na hidrólise de GTP, mas apresentaram taxas hidrolíticas semelhantes in vitro. Visando uma investigação mais ampla da família Rab, a GTPase Rab21 também foi cristalizada, mas os cristais difrataram até 2.90 Å de resolução. Ensaios de desnaturação térmica revelaram que a Rab21 é estruturalmente mais instável do que a Rab11, talvez pela presença de cisteínas que estão susceptíveis à oxidação, contribuindo para a agregação e precipitação da proteína. A Rab11 é bastante estável, e possivelmente forma estruturas do tipo beta-amilóide em altas temperaturas. Este trabalho envolveu também o estudo funcional da interação entre a proteína TIP41 humana (TIPRL) e o fator de transcrição MafB. A TIPRL é uma proteína conservada que foi identificada como uma ativadora de MAP quinases enquanto sua homóloga em levedura foi caracterizada como um antagonista da via de sinalização da quinase TOR que regula o crescimento celular. A MafB está envolvida no controle transcricional em diversos processos de desenvolvimento, mas seus reguladores ainda não estão bem estabelecidos. A interação direta entre a TIPRL e a MafB inteira, ou seu domínio bZIP isolado, foi confirmada através de ensaios de ligação in vitro. As proteínas co-localizaram no núcleo de células HEK293 e nossos resultados preliminares mostram que a TIPRL inibe a atividade transcricional da MafB in vivo, embora apenas interfira na ligação in vitro do domínio bZIP da MafB ao seu DNA-alvo mediante a estabilização do complexo TIPRL-bZIP. A TIPRL pode, portanto, constituir um novo regulador da atividade de MafB Abstract: GTPases of the Rab family are responsible for the intracellular transport of vesicles. Each family member acts on a specific transport pathway and their function is regulated by GTP binding and hydrolysis, cycling between inactive (GDP-bound) and active (GTP-bound) forms. In this work, we describe the crystal structure of inactive and active forms of the GTPase Rab11b, a member of the Rab11 subfamily which is involved in recycling of proteins from endosomes to the plasma membrane, in polarized transport in epithelial cells, in the transport of molecules of the trans-Golgi network to the plasma membrane and in phagocytosis. The Rab11b structure showed several differences from the Rab11a isoform previously described. Inactive Rab11b crystallized as a monomer, contradicting the hypothesis about functional dimers formed by Rab11a. Active Rab11b differ from Rab11a relative to the position of the serine 20 sidechain, which is involved in GTP hydrolysis, although both GTPases show similar GTP hydrolysis rates in vitro. In order to obtain structural information on Rab GTPases, Rab21 was also crystallized, but the crystals diffracted to a relatively low resolution (2.90 Å). Rab21 is a cysteine rich protein, showing a higher instability relative to Rab11b. Thermal unfolding followed by circular dicroism confirmed this hypothesis. Both Rab11b and Rab11a show a relatively high thermal stability and circular dicroism analysis indicate that they undergo conversion to structures rich in beta-strands upon thermal denaturation. This work includes also studies on the function of TIPRL in regard to its interaction with the transcription factor MafB. TIPRL is a conserved human protein identified as an activator of MAP kinases whereas its yeast counterpart Tip41 functions as an antagonist of the TOR kinase pathway. MafB is a large member of the Maf family of bZIP transcription factors controlling developmental processes in vertebrates. Regulation of MafB is critical, for example, during erythroid differentiation. A direct interaction between TIPRL and full length MafB and the bZIP domain of MafB was confirmed by in vitro interaction assays. TIPRL is localized throughout the whole cell and overlaps with MafB in the nucleus of HEK293 cells. Preliminary assays showed that TIPRL inhibits transcriptional activation mediated by MafB in HEK293 cells, although MafB shows a higher binding affinity to its target DNA relative to TIPRL in vitro. This evidence indicates that TIPRL may control MafB activity in vivo Doutorado Genética Animal e Evolução Doutor em Genética e Biologia Molecular

Orientador : Hiroshi Aoyama Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O objetivo central do presente trabalho foi avaliar a estabilidade conformacional da fosfatase ácida de sementes quiescentes de soja. Através de estudos de desnaturação térmica, verificou-se uma temperatura de transição (TM) de 65 oC que mostra uma resistência incomum frente à temperatura. Observaram-se efeitos da concanavalina A (lectina) e de molibdato (inibidor) no perfil de desnaturação enzimática com alterações na TM. A desnaturação enzimática por dodecilsulfato de sódio (SDS) foi muito pouco significativa em presença do fosfoenolpiruvato (PEP) como substrato. Essa insensibilidade ao agente desnaturante pode ser explicada pela alta afinidade apresentada pela fosfatase em relação ao substrato em questão. A desnaturação térmica da enzima em presença do PEP revelou que este substrato produz uma mudança significativa no perfil de desnaturação, induzindo uma diminuição na temperatura de transição (TM) que representa um efeito antagônico àquele observado na desnaturação por SDS. A análise de aminoácidos revelou informações valiosas que explicam propriedades como o pI relativamente baixo (5,0), e o número expressivo de resíduos ácidos pode estar relacionado à estabilidade conformacional da enzima. Os estudos sistemáticos da desnaturação reversível por uréia e cloreto de guanidínio (GuaCl) foram realizados utilizando-se a fluorescência como técnica de monitoramento. O cálculo da Estabilidade Conformacional (deltaG H2O) foi feito tomando-se os deslocamento nos comprimentos de onda de máxima emissão de fluorescência como parâmetro e o valor obtido foi de 2,48 kcal/mol -1. Os cálculos de centro de massa foram tomados em função da concentração do agente desnaturante em ambos os casos. A análise de carboidratos, realizada por HPLC revelou a presença de manose, glicosamina e galactosamina e a remoção da fração de carboidratos não foi possível mesmo após tratamento com 300 mU das endoglicosidases endo-H, endo-F e endo-F1 Abstract: The central aim of the present work was to evaluate the conformational stability of an isoform of soybean seeds acid phosphatase. Through thermal denaturation studies, the transition temperature (TM) value determined (65 oC), indicated an unusual resistance of the enzyme under high temperatures. Effects of strongly binding compounds such as concanavalin A (lectin) and molybdate (inhibitor) on the denaturation profile and transition temperature values were also observed. Enzymatic denaturation by sodium dodecyl sulfate (SDS) was insignificant in presence of phosphoenolpyruvate (PEP) which might be explained by the high affinity of the enzyme for this substrate. Thermal denaturation studies in presence of PEP showed both a significant change on the denaturation profile and a reduction on the transition temperature value. Aminoacid analysis contributed to important informations that are in accordance with some properties of the enzyme such as the relatively low isoelectric point (pI): 5.0. Furthermore, the expressive number of acid residues seems to be related to the conformational stability of the polypeptidic chain. Systematic studies of reversible denaturation by urea and guanidinium chloride (GuaCl) were carried out using fluorescence as a monitoring technique. Conformational Stability calculations were made based on the wavelengths corresponding to the maximum fluorescence emission as a parameter and the value obtained was 2.48 kcal.mol-1. Calculations of the centre of mass were made as a function of the denaturating agent concentration in both cases. Carbohydrate analysis was carried out by using High Performance Liquid Chromatography (HPLC) revealed mannose, glucosamine and galactosamine as main carbohydrates in the glycoconjugated structure. Carbohydrate removal was not possible even after treatment with 300 mU/mL of the endo-beta-N-acetylglucosaminidases-H, F and F1 Mestrado Bioquímica Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientadores: Gonçalo Amarante Guimarães Pereira, Juan Lucas Argueso Gomes de Almeida Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Nos últimos anos, a busca por fontes renováveis de energia tem sido intensificada em todo o mundo e, atualmente, o processo fermentativo de produção de bioetanol destaca-se como uma alternativa energética economicamente viável e menos poluente do que os combustíveis fósseis. Diferentes etapas do processo de produção desse biocombustível vêm sendo aprimoradas e, recentemente, o melhoramento genético de linhagens da levedura Saccharomyces cerevisiae é apontado como um ponto chave para tornar a produção do bioetanol ainda mais rentável. No Brasil, a linhagem JAY270/PE-2 é amplamente utilizada pelo setor industrial devido a sua elevada produtividade e robustez, consideravelmente superiores em relação à linhagem padrão de laboratório S288c. Em busca da compreensão das características genéticas associadas ao fenótipo da linhagem JAY270/PE-2, nosso grupo de pesquisa realizou o sequenciamento de um isolado haploide dessa linhagem, denominado JAY291, o qual revelou um total de 21 genes preditos não identificados no genoma da linhagem S288c. As significativas diferenças fenotípicas observadas entre essas linhagens motivou a investigação do envolvimento destes genes nas características de interesse industrial da linhagem JAY270/PE-2. Para isso, foi realizada uma investigação funcional de 4 desses genes, por meio da avaliação fenotípica de linhagens knockout, testadas quanto às suas principais características de interesse industrial. A partir dos testes realizados, não foi possível correlacionar estes genes a uma função específica. Apesar disso, a anotação dessas sequências, a conservação desses genes em outras linhagens industriais e, adicionalmente, a observação de que alguns deles apresentam-se diferencialmente expressos ao longo de uma fermentação industrial forneceram fortes indícios de que os mesmos apresentam um papel importante para a fisiologia da linhagem em condições industriais. Dessa forma, os dados gerados por este trabalho deverão servir como base para futuros estudos focados na elucidação do papel desses genes, a qual é de fundamental importância, tanto para a geração de conhecimento básico acerca da biologia dessa espécie, como para a identificação de potenciais alvos para o melhoramento genético da linhagem JAY270/PE-2 Abstract: In the past years, the search for renewable energy sources has increased worldwide and, recently, the bioethanol fermentation process rises as an economically viable and less pollutant alternative supply. Several steps of the production process have been enhanced and the genetic improvement of Saccharomyces cerevisiae strains plays a key role on that effort. In Brazil, the yeast strain JAY270/PE-2 is widely used in the industrial sector due to its high productivity and robustness, being remarkably superior to the reference laboratory strain S288c. In order to shed light to the genetic characteristics underlying these traits, our group sequenced the genome of the derivative haploid JAY291, which unveiled a total of 21 predicted genes absent in the S288c reference genome. The substantial differences observed between these strains motivated us to investigate the relationship between these predicted genes and the industrially relevant phenotype of JAY270/PE-2 strain. Thus, we accomplished the functional investigation of 4 putative genes through phenotypic evaluation of knockout strains. It was not possible to correlate those genes to a specific function. Although, considering their functional annotation, their conservation between industrial strains and also their differential expression during an industrial fermentation strengthens their potential to be related to these industrially valuable traits. Therefore, this study might work as a backbone for the future functional characterization of these genes. This knowledge is of cardinal importance for a comprehensive understanding of the biology of this specie and could possibly provide new targets for the genetic manipulation of the industrial strain JAY270/PE-2 Mestrado Genética de Microorganismos Mestra em Genética e Biologia Molecular

Orientador: William Jose da Silva Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Os resultados dos estudos sobre a herança da tolerância ao 'Al.ind.3¿ em mIlho, são controvertidos. Esse assunto foi abordado no presente trabalho na tentativa de se avaliar genótipos de milho quanto à tolerância à toxidez do 'Al.ind.3¿, de se obter informações adicionais sobre o tipo de herança e de se esclarecer alguns aspectos genético-fisiol6gicos da tolerância ao 'Al.ind.3¿ em milho. Foram utilizados linhagens homozigóticas e híbridos de endosperma flint e dentado. O estudo de trinta linhagens flints 'Cateto' e dentadas 'Tuxpeffo', em solução nutritiva, revelou que o comprimento líquido da radícula, CLR, e. a porcentagem de redução da radícula, na presença de 'Al.ind.3¿ (%R), foram mais eficientes do que o comprimento relativo da radícula, CRR, para a avaliação da tolerância ao 'Al.ind.3¿ em milho. Os dados sugerem, ainda, que a raça 'Cateto' é uma excelente fonte de genes para a tolerância ao 'Al.ind.3¿ em milho. O estudo da distribuição de freqüência do CLR e CRR, em quatro gerações F2, de cruzamentos entre linhagens tolerantes e sensíveis, nos níveis zero; 2,25; 4,5; 6,75 e 9,0 ug 'Al.ind.3¿ / m I , indicou uma resposta fenotípica contínua e unimodal. ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: The results of inheritance studies of aluminum tolerance in maize are controverted. The present. study was undertaken to evaluate toxicity in maize genotypes, in an attempt to obtain additional information about the Inheritance mechanism and to characterize some physiological-genetics aspects of 'Al.ind.3¿ in corn. In one set. three flint. and three dent inbred lines and their flint., dent and semi-dent hybrids were evaluated. At. another set a total of thirty 'Cateto' flint. And 'Tuxpeffo' dent inbreds were analyzed in a comparative study in nutrient solution. The net seminal root length, CLR and the reduction percent age of the seminal root. In 'Al.ind.3¿ presence

Orientadores: Gonçalo A. Guimarães Pereira, Francisco Javier Medrano Martin Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A doença Vassoura-de-bruxa do cacaueiro (Theobroma cacao) é causada pelo fungo basidiomiceto Moniliophthora perniciosa e atualmente constitui um dos maiores problemas fitopatológicos do Brasil. Análises do genoma de M. perniciosa permitiram identificar três genes codificadores para proteínas indutoras de necrose e etileno (NEPs) descritas em oomicetos, bactérias e alguns fungos ascomicetos. Os genes codificadores das proteínas NEP de M. perniciosa (MpNEPs) parecem estar localizados no mesmo cromossomo e foram nomeados 1 e 2 (o terceiro gene está incompleto) segundo a descoberta no genoma (1) ou em uma biblioteca de cDNA de interação M. perniciosa-cacaueiro (2). Os genes codificadores para estas proteínas foram clonados, e expressos usando um sistema de expressão heterólogo em E. coli produzindo proteínas de fusão a cauda de histidinas. As proteínas recombinantes foram purificadas usando colunas de afinidade a metais. MpNEP1 e MpNEP2 apresentam alta similaridade em sua seqüência de aminoácidos e são capazes de induzir necrose e síntese de etileno tanto em folhas de tabaco quanto em cacau. Ambas as MpNEPs apresentam perfis de expressão diferencial nas fases de vida do fungo: MpNEP1 é expressa de forma similar nas fases biotrófica e saprofítica enquanto que MpNEP2 é mais expressa na fase biotrófica. Importantes diferenças no comportamento físico das proteínas foram detectadas: MpNEP1 se comporta como um agregado (dímero ou trímero) em solução e é sensível a tratamento térmico enquanto que MpNEP2 se comporta como monômero e mantém a atividade de necrose depois de submetida a altas temperaturas. Estas diferenças sugerem que estas proteínas podem ter funções complementares durante o desenvolvimento da doença. Esta é a primeira vez que se descreve a presença desta família de proteínas em fungos basidiomicetos e seu estudo pode ser de grande importância para a compreensão dos mecanismos da doença Vassoura-de-bruxa Abstract: The hemibiotrophic basidiomycete Moniliophthora perniciosa is the causal agent of Witches¿ broom disease of Theobroma cacao, which constitutes one of the main phytopathological problems of Brazil. An analysis of the M. perniciosa draft genome led to the identification of three putative genes encoding Necrosis and Ethylene inducing Proteins, which have been described in oomycetes, bacteria, and some species of ascomycetous fungi. The NEP proteins of M. perniciosa (MpNEPs) are apparently located on the same chromosome and were named 1 and 2 according to their discovery in the genome (1) or in a cDNA library containing transcripts from the interaction M. perniciosa-cacao (2). The genes codifying MpNEPs were cloned and expressed using a heterologous expression system in E. coli producing recombinant proteins with a minimal N-terminal His-tagged fusion peptide. MpNEPs were purified using nickel affinity columns. MpNEP1 and 2 have highly similar amino acid sequences and are able to induce necrosis and ethylene emission in both tobacco and cacao leaves. These MpNEPs showed different expression profiles according to the developmental stage of the fungus: MpNEP1 was expressed in a similar way in the biotrophic and saprotrophic mycelias, while MpNEP2 was preferentially expressed in the biotrophic phase. Furthermore, important differences were also detected in the physical properties of these two proteins. MpNEP1 in solution behaves as an oligomer (dimer or trimer) and is very sensitive to temperature. On the other hand, MpNEP2 in solution behaves as a monomer and is able of rapid renaturation after boiling, thus keeping its necrotic activity. These differences indicate that these highly similar NEPs may have complementary roles during disease development. This is the first report of NEP1-like proteins in basidiomycetes and their study will be of great importance in order to acquire a better understanding of the molecular mechanisms underlying Witches¿ broom disease Doutorado Bioquímica Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientadores: Tereza Cristina Samico Cavalcanti, Ana Neuza Vieira-Matos Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A anemia sem hemorragia em ratos portadores do tumor de Walker 256 (W256) é um sintoma característico observado durante a progressão do câncer. Resultados preliminares mostraram duas atividades opostas no sangue total de portadores deste tumor. Uma delas diminui e a outra aumenta a fragilidade osmótica (FO) das hemácias de ratos. A diminuição da FO de hemácias foi obtida quando ratos foram inoculados com a variante A (agressiva) do W256 e o efeito oposto quando foi usada a variante AR (regressiva). O objetivo deste trabalho foi o de confirmar estes resultados e, se possível, isolar os componentes plasmáticos responsáveis pelas mudanças na FO de hemácias de ratos portadores de tumor. Ratos machos Wistar com 8 semanas de vida foram submetidos ao modelo de crescimento tumoral (4 inoculações subcutâneas (sc) simultâneas com 5x106 células A ou AR/sítio) usado para simular o estágio metastático terminal do câncer. Todos os animais foram esplenectomizados e inoculados no dia zero. Amostras de sangue total dos ratos portadores dos tumores A ou AR foram coletados aos O, 4 e 10 dias pós-esplenectomia e inoculações. Alíquotas dos plasmas foram fracionadas com sulfato de amônio. Com isto foram obtidas as frações sobrenadante 60% (560), precipitado 60% (P60) e precipitado 60-80% (P60-80). A FO foi determinada aos O, 4 e 10 dias no sangue total dos portadores de tumor ou nas hemácias provenientes de rato normal incubada a 37°C durante 30, 120 e 240 minutos, com o plasma total e suas frações. Finalmente, o plasma total e frações foram submetidos a SDS-PAGE para identificação de prováveis componentes protéicos responsáveis pelas alterações da FO das células vermelhas. Todas as comparações foram realizadas contra o plasma total e frações de ratos controles. Assim, foi observado que o modelo usado é muito adequado para simular a fase metastática do câncer. O aumento da FO das hemácias não estava associado com o desenvolvimento da anemia produzido por ambas as variantes celulares do W256. Visto que, na fase grave da doença (10 dias), quando a anemia nos portadores da variante A (5,2±0,4 gHb/dL) foi maior do que a dos portadores da variante AR (6,7 ± 0,8 gHb/dL) não foi observado aumento na FO de hemácias de ratos portadores da variante A do W256. O fracionamento com o sulfato de amônio mostrou dois componentes protéicos capazes de induzir aumento significante (P 116). O aumento destas bandas em ambos os portadores do W256 bem como as suas alterações temporais impediram o estabelecimento da correlação entre as mudanças da FO de hemácias de rato e o câncer experimental Abstract: Anemia without hemorrhage in tumor-bearing Walker 256 (W256) rats is a characteristic symptoms observed during cancer progression. Previous results showed two opposite activities in the total blood of tumor bearers. One of them decreases and another increases the osmotic fragility (OF) of rat red blood cells (RBC). The decrease of RBC osmotic fragility was obtained when rats were inoculated with A variant (aggressive) of W256 and the opposite effect when AR variant (regressive) was used. The aim of this work was to confirm these data and, if possible, to isolate the plasmatic components responsible by changes in RBC osmotic fragility of the tumor bearers. Eight-week-old male Wistar rats were submitted to multifocal model of tumor growth (4 subcutaneous simultaneous inoculations with 5x1 06 A or AR cells/site) used to simulate cancer terminal metastatic dissemination stage. Ali animals were splenectomized and inoculated at zero day. Total blood samples from A or AR tumor-bearing rats were collected at 0,4 and 10 days post-splenectomy and inoculations. Plasma aliquots were partitioning with ammonium sulfate. Herewith was obtained supernatant 60% (S60), precipitated 60% (P60) and precipitated 60-80% (P60-80) fractions. The OF was determined at O, 4 and 10 days in total blood of tumor bearers or using RBC from normal donor rat incubated, at 37°C during 30, 120 and 240 minutes, with total plasma or fractions. Finally, total plasma and fractions were submitted to the SDS-PAGE for identification of probable protein components responsible by RBC osmotic fragility alterations. All comparison was make against total plasma and fractions of control rats. Thus, was observed that used model is very adequate to simulate metastatic phase of cancer. O aumento da FO das hemácias não estava associado com o desenvolvimento da anemia produzido por ambas as variantes celulares do W256. Visto que, na fase grave da doença (10 dias), quando a anemia nos portadores da variante A (5,2± 0,4 gHb/dL) foi maior do que a dos portadores da variante AR (6,7± 0,8 gHb/dL) não foi observado aumento na FO de hemácias de ratos portadores da variante A do W256. The increase of red blood cells OF was not associated with anemia developed produced by both W256 variant cells. Thus, in grave phase of disease (10 days), when anemia in tumor-bearing A (5.2± 0.4 gHb/dL) rats was higher than observed on that AR cells bearers (6.7± 0.8 gHb/dL), none OF increase in RBC of A rats was observed. Ammonium sulfate partitioning showed two protein components capable to induced OF significant increase (P 116). The increase of these bands in both W256-bearers as well its temporal alterations, objected the establishment of the correlation between rat RBC osmotic fragility and experimental cancer Mestrado Bioquímica Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: G. M. Felippe Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Poucos trabalhos têm sido realizados no Brasil sobre germinação de esporos de pteridófitas, apesar da grande variedade de espécies existentes. Neste trabalho foi estudada a germinação de esporos de Trichipteris corcovadensis (Raddi) Cople, sob várias condições de luz, temperatura, pH e substâncias de crescimento; foram verificados também o conteúdo total de lipídios e proteínas solúveis dos esporos. Foi feito também um estudo palinológico de esporos coletados de vários exemplares, visando encontrar alterações que pudessem ser associadas aos resultados de germinação. Foram coletados esporos de cinco exemplares (11066-A, B, C, D e E) de T. corcovadensis, de ocorrência natural na mata do Instituto de Botânica de São Paulo. O consumo de oxigênio dos esporos do exemplar A foi determinado pelo aparelho de warburg. A viabilidade dos esporos dos cinco exemplares foi verificada pelo método do carmim-acético. Os experimentos de germinação foram feitos em câmaras de crescimento com luz e temperatura controladas. Utilizou-se como meio de cultura soluções de Knop autoclavada e acrescida de fungicida. Verificou-se o efeito de várias temperaturas constantes e pares de temperaturas alternadas na germinação dos esporos. Ácido indolil-3-acético, ácido giberélico, 6-benziladenina e ácido 2-etilfosfônico foram testados em concentrações de 0 até 100 'mu¿g.¿ml POT. ¿1¿. Foram verificados os efeitos de várias intensidades luminosas e fotoperíodos sobre a germinação... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: Not informed. Mestrado Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Luiz Augusto Magalhães Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Estima-se que a esquistossomose, infecte cerca de 200 milhões de pessoas em 75 países em desenvolvimento no mundo. A larga dispersão dos moluscos transmissores e a relevância da migração interna como fator de instalação da esquistossomose mansônica tem sido um importante fator para se delinear estratégias de prevenção e controle. Do ponto de vista epidemiológico, é importante conhecer quais são as espécies de planorbídeos presentes em determinada região e seu potencial para instalação da doença. O objetivo desse estudo foi avaliar o panorama de distribuição de criadouros de moluscos planorbídeos no município de Monte Mor, SP, através de um levantamento malacológico em coleções de água doce, sua positividade para o Schistosoma mansoni, testar a suscetibilidade dos moluscos encontrados frente a linhagens distintas do trematódeo e como pesquisa complementar análise de fezes de indivíduos oriundos de áreas endêmicas de todo o país, que trabalham na agricultura local. O estudo de campo foi realizado com coletas de mosluscos pelo período de 4 meses em coleções de água doce, através de coletas exaustivas em coleções acessíveis. O material coletado foi analisado e identificado no Laboratório de Helmintologia da Unicamp. Através deste estudo foi possível concluir que existe uma vasta distribuição de moluscos no município de Monte Mor composta pelas espécies: Biomphalaria tenagophila, B. straminea, B. intermedia, B. occidentalis, B. peregrina; além de exemplares dos gêneros: Physa, Lymnaea, Melanoides, Drepanotrema, Pomacea e Achatina. Entre os exemplares coletados de moluscos todos se apresentaram negativos ao S. mansoni e outras larvas de trematódeos. Descendentes dos moluscos planorbídeos do gênero Biomphalaria coletados foram submetidos à exposição individual por 10 miracídios de Schistosoma mansoni das cepas BH, SJ, Pernambuco, Sergipe e Bahia. Neste experimento, espécies de B. tenagophila e B. straminea se infectaram com S. mansoni de Pernambuco. Outras espécies de moluscos se mostraram negativas para a infecção pelo Schistosoma mansoni. As análises complementares de fezes dos trabalhadores locais não apresentaram resultados parasitológicos positivos, o que não descarta sua relevância na transmissão da doença frente ao fluxo anual de diferentes trabalhadores para o trabalho na agricultura local Abstract: It is estimated that schistosomiasis, infects about 200 million people in 75 countries in the developing world. The wide dispersal of snails transmitters and relevance of internal migration as a factor installation schistosomiasis has been an important factor in order to outline strategies for prevention and control. From the epidemiological point of view, it is important to know what are the snails species present in a given region and its potential for desease onset. The aim of this study was to find a picture of the situation of the distribution of breeding of freshwater snails in the municipality of Monte Mor, SP, throughout a malacological in collections of freshwater, its positivity Schistosoma mansoni, test the susceptibility clam found against distinct strains of S. mansoni and how complementary research scat analysis of individuals from endemic areas throughout the country, working in local agriculture. The field study was conducted with snails collections for a period of four months in collections of freshwater through exhaustive collections of collections accessible. The collected material was analyzed and identified in the laboratory of Helminthology UNICAMP. Through this study it was concluded that there is a wide distribution of snails in the municipality of Monte Mor composed by species: Biomphalaria tenagophila, B. straminea, B. intermedia, B. peregrina e B. occidentalis, besides copies of genres: Physa, Lymnaea, Melanoides, Drepanotrema, Pomacea e Achatina. Among the species collected shellfish all were negative to S. mansoni and other trematode larvae. Descendants of freshwater snails of the genus Biomphalaria collected underwent solo exhibition by 10 miracidia of S. mansoni strains Belo Horizonte, São José dos Campos, Pernambuco, Sergipe e Bahia, where they were checked positivity rates of 13.33% from the line of Pernambuco for species B. tenagophila and 3.33% strain Pernambuco for the species B. straminea. Other species of snails were negative for infection with S. mansoni. The complementary analyzes of feces of local workers did not show positive results parasitological, which does not rule out its relevance in disease transmition across the annual flow of different workers to work in local agriculture Mestrado Parasitologia Mestre em Parasitologia

Orientador: Jorg Kobarg Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A hepatite B constitui um grave problema de saúde pública. Dados epidemiológicos estimam que aproximadamente 350 milhões de pessoas são portadores do vírus da hepatite B (HBV). Admite-se que a infecção evolui para a cura em média 95% dos casos, entretanto nos portadores crônicos a infecção pode evoluir para cirrose e carcinoma hepatocelular (HCC). Há um crescente acúmulo de evidências que relaciona a proteína HBx do HBV ao desenvolvimento do HCC. A maioria dos estudos sobre a função da proteína HBx sugere que ela é uma proteína reguladora de funções pleiotrópicas com a capacidade de induzir o crescimento tumoral. Isso é possivelmente devido à sua capacidade de interagir com uma vasta gama de proteínas celulares. No presente estudo investigamos os aspectos moleculares da estrutura e função da proteína HBx e os resultados foram contextualizados no processo de transformação celular. Observamos pela primeira vez a capacidade da proteína HBx em se ligar ao RNA contendo seqüências ricas em adenina e uracila (AU), que são presentes em alguns proto-oncogenes como c-myc e c-fos. A geração de proteínas truncadas permitiu mapear a região de interação entre HBx e RNA. Realizamos ensaios de mutação sítio-dirigida em HBx e substituímos todas as cisteínas por serinas. Nossos resultados sugerem que as cisteínas na proteína HBx são de menor importância para a sua interação com o RNA e com as proteínas humanas p53 e RXR. Descobrimos ainda uma nova proteína humana que interage com HBx: E4F. Este fator de transcrição humano está relacionado com o controle do ciclo celular, com a segregação cromossômica e com a embriogênese. Ensaios em leveduras e in vitro mostraram que HBx selvagem, bem como as suas formas mutadas, foram capazes de interagir e regular a função de E4F, indicando um possível novo mecanismo para a transformação celular e a regulação da transcrição viral, uma vez que E4F exibiu uma capacidade de interagir com a região ¿enhancer II¿ do genoma do HBV Abstract: Viral hepatitis is an important global public health problem. Epidemiological data show that worldwide 350 million people are chronically infected with the hepatitis B virus. About 95% of the infections cure spontaneously, but the chronically infected patients may develop liver cirrhosis or even hepatocellular carcinoma (HCC). A large body of evidence points to the viral onco-protein HBx as the principal cause for the cellular transformation. The majority of studies on HBx function suggest that it is a regulatory protein with pleiotropic functions and its capacity to induce tumor growth may be due to its ability to interact with a diverse array of cellular proteins. In the present study we investigated molecular and structural aspects of the function of the HBx protein in order to be able to shed light on the process of cellular transformation. We were able to demonstrate that HBx protein has the ability to bind to an AU-rich RNA sequences present in the mRNAs of certain proto-oncogenes such as c-myc and c-fos. The generation of truncated proteins allowed to map the region of interaction of HBx with the RNA. Furthermore, we performed site directed mutagenesis studies of HBx protein and substituted all of its cysteine residues with serines. Our data suggest that the cysteine residues in the HBx protein are of minor importance for its interaction with RNA, p53 and RXR proteins. Finally, we discovered in E4F a new human interacting protein partner for the HBx protein. The transcription factor E4F has been functionally implicated in the control of the cell cycle, the chromosomal segregation and embriogenesis. In studies using the yeast we further showed that wild-type HBx, as well as its mutated forms, can physically interact with the E4F protein and regulate its function. This indicates a possible new mechanism of cellular transformation and the regulation of the viral transcription, since the human protein E4F demonstrated the capacity to bind to the enhancer II region of the HBV genome Doutorado Bioquímica Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador : Gil Martins Felippe Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Neste trabalho foram estudados diversos aspectos envolvendo o fruto, a semente e plântulas de Copaifera langsdorffii. Foram coletados frutos em diferentes estádios de desenvolvimento, de árvores crescidas em ambiente de mata, das quais foram retiradas as sementes. Também foi acompanhado o crescimento das sementes. Sementes maduras destas arvores e de arvores crescidas em ambiente de cerrado foram comparadas quanto à germinação em diferentes condições de temperaturas e fotoperíodo, assim como quanto ao conteúdo de substâncias cumarínicas. Também foi acompanhado o crescimento de plântulas oriundas de sementes da mata e do cerrado e dosada a quantidade de substancias cumarínicas nos órgãos destas plântulas. C. langsdorffii floresceu entre dezembro e março. A partir de fevereiro já podiam ser vistos frutos jovens, que cresceram até fins de setembro quando se iniciou a dispersão das sementes. Ao longo de 5 meses (de abril a setembro), o crescimento dos frutos e das sementes foi acompanhado através de coletas quinzenais. Em dez coletas feitas em 6 árvores, foram analisados 873 frutos, dos quais apenas 584 (66,9%) continham sementes sadias. Os demais continham sementes atacadas por larvas de inseto (21,5%) ou mortas (11,6%). Frutos e sementes sadios foram medidos para a análise de crescimento. De acordo com o peso, os frutos foram classificados em 12 classes e as sementes em 38 classes. Do primeiro estádio analisado até a época de dispersão, o comprimento médio dos frutos variou em 50,9% a largura 58,3% e a espessura 292,2% . Este maior aumento da espessura deveu-se, principalmente, ao crescimento da semente. O peso médio de matéria úmida do fruto variou de 742 a 6902mg no período. Foi demonstrada a existência de uma correlação direta e positiva entre o produto dos valores das 3 dimensões e o peso de matéria úmida dos frutos. As sementes tiveram um aumento médio de comprimento em 219,66%, da largura em 225,34% e da espessura em 705,12%. O peso médio da matéria úmida variou de 46,38 a 3002,49, dos quais o arilo correspondia, respectivamente, cerca de 52,4 a 39,3% enquanto o peso médio da matéria seca variou de 2,40 a 572,12mg, dos quais o arilo correspondia, respectivamente, cerca de 240,8 a 49,9%. A umidade das sementes variou cerca de 89% nos primeiros estádios a 59% na época da dispersão. As sementes também apresentam uma correlação direta e positiva entre o produto e suas dimensões e o peso da matéria úmida. A germinação das sementes de cerrado ocorreu a porcentagens elevadas nas temperaturas contínuas de 15, 20, 25 e 30ºC, não germinando a 35ºC, enquanto a de mata diferiram por apresentarem germinação baixa à temperatura de 15ºC. Em temperaturas alternantes e fotoperíodo de 12 horas a germinação também foi elevada entre 25-15, 25-20, 30-20 e 30-25ºC para as sementes de cerrado. As de mata germinaram menos nas alternantes 25-15ºC. A exsudação de cumarina das sementes de C. langsdorffii inibiu a germinação de sementes de alface e de picão-preto. A longevidade das sementes de C. langsdorffi pode ser estendida por mais de 36 meses quando armazenadas em câmara fria a 4ºC. O crescimento das plântulas de sementes de cerrado e de mata não difere entre si em relação à altura, área foliar e pesos de matéria úmida e seca. Apresentam, porém uma elevada correlação entre a altura e área foliar. A quantidade de óleo presente no pericarpo chega ser de 180mg (17% do peso da matéria seca). A cumarina e umbeliferona estão presentes nas sementes imaturas e maduras e nas plântulas de C. langsdorffii. A quantidade de cumarina presente nas sementes imaturas de mata aumenta com o aumento do tamanho e peso da semente, chegando a corresponder a mais de 6% do peso de matéria seca. O mesmo ocorre com a umbeliferona, porém com valores muito menores que os de cumarina. Nas sementes maduras a cumarina está presente na concentração de 0,63% nas sementes de mata e 0,52% nas sementes de cerrado. As plântulas apresentam cumarina nas raízes, parte aérea e cotilédones. A quantidade de cumarina presente nos cotilédones diminui à medida que aumenta no eixo embrionário Doutorado Doutor em Ciências

Orientador : Jacques M. E. Vielliard Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Resumo: O presente trabalho teve como objetivo central o estudo do repertório sonoro e as circunstâncias biológicas em que as vocalizações foram emitidas para as sete espécies de andorinhas comuns da região de São Paulo (Notiocelidon cyanoleuca, Tachycineta leucorrhoa, Tachycineta albiventer, Progne chalybea, Phaeoprogne tapera, Stelgidopteryx ruficollis e Alopochelidon fucata). Estas espécies foram consideradas simpátricas e sintópicas por compartilharem os mesmos habitats e espaços aéreos para sua alimentação e reprodução. Foram descritas, analisadas e classificadas as estruturas físicas de cada uma das vocalizações e comparadas àquelas que tinham uma função biológica comum, estabelecendo-se os graus de similaridade entre elas. ... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: The central purpose of this study was the examination ot he vocal repertories of seven species os swallows (Notiocelidon cyanoleuca, Tachycineta leucorrhoa, Tachycineta albiventer, Progne chalybea, Phaeoprogne tapera, Stelgidopteryx ruficollis e Alopochelidon fucata) and the biological contexts in which they employed in the region of São Paulo. The swallows were considered sympatric and syntopic in that they shared the same habitats and the same aerial areas for feeding and breeding.The physical characteristics of each vocalization was analysed, classified and compared with those having a common biological function, thereby establishing the degree of similarity among them.. ... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations Doutorado Ecologia Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Marlies Sazima Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A biologia floral de algumas espécies ocorrentes em vegetação de caatinga foi estudada, com ênfase nas interações das plantas com a fauna local nos processos de polinização. Também foram estudados aspectos de fenologia floral e sistema reprodutivo. As observações e os trabalhos de campo foram realizados em Alagoinha ('8 GRAUS¿ 27' S e ¿36 GRAUS¿ 46' W), zona agreste de Pernambuco, esporadicamente durante os anos de 1984, 1985, 1986 e intensivamente durante o ano de 1987, estendendo-se até março de 1988. A região apresenta clima quente, semi-árido, com temperaturas médias anuais compensadas de '23,5 GRAUS¿ C e valor médio anual de precipitação pluviométrica entre 600 a 700 mm. A vegetação local é caracterizada pela predominância de representantes arbustivos. De modo geral, o período de floração da maioria (65%) das espécies ocorre durante a estação chuvosa ou no final da estação seca, e o restante (30%) durante a estação seca, 5% das espécies florescem tanto na estação seca como na chuvosa. Notou-se uma tendência das espécies arbóreas em florescerem durante a época seca. Com relação ao espectro de visitantes florais, verificou-se que as abelhas participaram como polinizadores em 77,4% das espécies estudadas ... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: The floral biology of some "caatinga" vegetation species was studied with emphasis on the interactionsbetween the plants and the local fauna in relation to the pollination processo Aspects of floral phenology and reproductive system were also abserved. The field research was conducted in Alagoinha ('8 DEGREES¿ 27' S and '36 DEGREES¿ 46' W), in the "agreste" zone of Pernambuco, Northeast of Brazil, at irregular intervals from 1984 to 1986 and intensively during 1987 and the first three months of 1988. The area has a hot, semi-arid climate, with annual average temperature of '23,5 GRAUS¿ C and annual rainfall between 600-700 mm, and in its vegetation predominate the shrub representatives. Most of the species (65%) flowered during the rainy or at the end of the season, while the other 30% flowered along the dry period. Five percent of the species flowered as well in the dry as in the rainy season. It was noticed that the trees tend to flower in the dry season ... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations Doutorado Biologia Vegetal Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Aldo Focesi Junior Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A caracterização de três dos quatro componentes das hemoglobinas de Pipa pipae obtidos pela cromatografia em DEAE-sephadex mostrou que os três componentes bem como o hemolisado de eritrócitos apresentam uma afinidade pelo oxigênio na ordem de 4 mm de Hg quando em tampão bis-tris lactato 0,05M pH 7.0. A afinidade dessas moléculas pelo ligante CO apresenta uma afinidade 50 vezes maior que a apresentada pelo oxigênio e o efeito Bohr estudado nos equilíbrios com CO mostra-se praticamente nulo nas hemoglobinas isentas de cofatores e um aumento desse efeito para ¿ 0,3 é encontrado quandona presença de ATP ¿10 POT. ¿3¿M, sugerindo a existência de sítios de fosfato nos três componentes estudados. A cinética de desnaturação por benzoato de sódio 1M e uréia 7M mostra existir uma grande resistência da molécula quando isenta de cofatores e existir sensibilidade quando em presença do efetor alostérico. Com o agente desnaturante SDS a 1%, tanto a forma oxi como a forma deoxi se comportam de maneira semelhante à deoxihemoglobina humana, que sofre desnaturação de 20% das moléculas com esse tratamento, ao contrário da oxihemoglobina humana, que desnatura cerca de 80% das moléculas. Suspeitando ser as hemoglobinas de Pipa pipae estabilizadas na forma T (do modelo MWC) mesmo após a saturação, foi estudado seu comportamento frente ao ligante CO dentro dos parâmetros do esquema de Adair calculando-se as constantes intrínsecas de associação... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: Three out of the four components of hemoglobin of Pipa pipae, obtained by DEAE-sephadex chromatography, were studied. The three components and the whol hemolisated showed an oxygen affinity around 4mm of HG when in bis-0,05M bis-tris-lactant buffer pH 7,0. the affinity of the molecules to CO binding is 50 times greater than that of the oxygen, the Bohr effect, studied in CO equilibria is, in practice, equal to zero in hemoglobins without cofactors. An increase of that effect of zero to ¿0,3 is observed in the presence of ¿10 POT. ¿3¿M of ATP, which indicates the existence of phosphate sites in the three components. The kinetics of denaturation by 1 M sodium benzoate and 7 M urea shows that there is a strong resistance of the stripped molecule to denaturation and there is sensibility when in the presence of the allosteric effector. With the denaturating agent SDS (1%) where both the oxy form and the deoxy form behave as the human deoxyhemoglobin which shows denaturation of 20% of the molecules, with the same treatment. Supposing that the hemoglobins of Pipi pipae are estabilezed in the T form (MWC model) even after te saturation, their behavior in the presence of the CO ligands was studied according to Adair¿s theory... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations Doutorado Doutor em Ciências Biológicas

Orientador : Ricardo Ribeiro Rodrigues Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Composição florística e estrutura fitossociológica do estrato herbáceosubarbustivo em duas áreas de Floresta Ombrófila Densa, Paraná, Brasil. Realizou-se o estudo florístico e o fitos sociológico do estrato herbáceo-subarbustivo em duas áreas de Floresta Ombrófila Densa (FOD) no período entre janeiro de 1999 e fevereiro de 2000. As áreas encontram-se localizadas na encosta do morro Bento Alves (Ilha do Mel) e na do morro Facãozinho (Morretes), ambas no Paraná. Os objetivos do trabalho foram listar as espécies de Magnoliophyta e Pteridophyta presentes no estrato herbáceo-subarbustivo, realizar o estudo fitossociológico deste estrato e determinar se o mesmo poderia ser utilizado para caracterizar cada subformação da FOD. Para o estudo florístico foram realizadas coletas quinzenais utilizando-se técnicas usuais de coleta e herborização e, para a determinação das espécies, foram utilizadas bibliografia específica, consultas à especialistas e comparações com exsicatas de herbários. Para o estudo fitossociológico foram alocadas 120 parcelas de 2 x 2m no morro Bento Alves (MBA) e 160 no morro Facãozinho (MF A), incluindo indivíduos herbáceos e subarbustivos com altura igual ou inferior a 1,5m. Foram determinadas a freqüência, a cobertura (absoluta e relativa) e a importância relativa (IR) de cada uma das espécies. Além disto, determinou-se o índice de diversidade de Shannon (H') e o de similaridade de Jaccard entre as áreas estudadas e outras áreas florestais nas quais foram realizados estudos que abordaram o estrato inferior. No MBA foram registradas 99 espécies, 71 gêneros e 36 famílias. Destacaram-se nesta área com os maiores números de espécies Dryopteridaceae (9), Orchidaceae (8) e Piperaceae (8). Para o MF A foram registradas 108 espécies, 66 gêneros e 39 famílias. Destacaram-se nesta área com os maiores números de espécies Dryopteridaceae (15) e Araceae (7). Na análise fitossociológica do MBA foram registradas 59 espécies, 48 gêneros e 29 famílias; e no MF A 57 espécies, 38 gêneros e 27 famílias. Em ambas as áreas destacaram-se no estudo fitossociológico com os maiores números de espécies Dryopteridaceae, Araceae, Piperaceae e Acanthaceae. Foram registradas em média 13 espécies por parcela com cobertura igual a 30,62% na área do MBA, enquanto que no MFA 6 espécies por parcela com 32,75% de cobertura. A diferença de cobertura entre uma e outra área ocorreu principalmente devido ao porte das espécies, as quais foram maiores no MF A. Destacaram-se com os maiores valores de IR no MBA Cyathea corcovadensis, Monstera adansonii e Calathea sp.; e no MFA Philodendron ochrostemon, Stigmatopteris heterocapa e Polybotrya cy/indrica. Os valores de similaridade para as duas áreas de FOD estudadas foram baixos e os dois locais por isto foram considerados diferentes com relação aos seus estratos herbáceosubarbustivos. O estrato inferior parece ser muito diferente do restante da floresta, sugerindo que os fatores que influenciam este estrato possam ser muito diferentes daqueles que influenciam a própria floresta. No entanto, uma explicação das causas destas diferenças ainda permanece desconhecida. Este estudo é importante para ilustrar que a dinâmica que influencia a estrutura de uma comunidade vegetal pode variar enormemente, e que uma formação vegetal aparentemente estável pode apresentar regionalmente comunidades herbáceas-subarbustivas diferenciadas Abstract: A comparison of the floristic composition and structure of the herbaceous and small shrub layer in two Dense Ombrophilous Forests, Parana, Brazil. In two areas of Atlantic Coastal Wet F orest, the herbaceous and small shrub layers were compared tloristically and structurally from March 1999 to February 2000. The areas were located at mount Bento Alves (Ilha do Mel) and mount Facãozinho (Morretes), in the state of Paraná. The goal of the study was to identify and compare the Magnoliophyta and Pteridophyta and to study the structure of this vegetation layer, and determine whether this vegetation layer is indicative of this forest, or whether local variation is significant. Plants were identified to the species level, using literature, herbarium specimens, or authorities as necessary. Quadrats at Bento Alves (n=120) were compared with quadrats at Facãozinho (n=160), in which specie¿s frequency, cover (absolute and relative), indexes of diversity (Shannon) and similarity (Jaccard) were estimated and compared. In Bento Alves 99 species, 71 genera in 36 families were found. The most speciose families were Dryopteridaceae (9), Orchidaceae (8) and Piperaceae (8). In Facãozinho, 108 species, 66 genera in 39 families were recorded. Here the most species rich families were Dryopteridaceae (15) and Araceae (7). In the quadrats, at Bento Alves, 59 species, 48 genera in 29 families were recorded while at Facãozinho, 57 species, 38 genera in 27 families were found. The most species rich families in both study sites were Dryopteridaceae, Araceae, Piperaceae and Acanthaceae. The average number of species per quadrant was 13 in Bento Alves, with 30,62% cover, and six species with 32,75% cover in Facãozinho. The difference in cover in the two areas was due to the size difference of plants in the two areas, which were larger in Facãozinho. The most important species were Cyathea corcovadensis, Monstera adansonii and Calathea sp. in Bento Alves, and Philodendron ochrostemon, Stigmatopteris heterocapa e Polybotrya cylindrica in Facãozinho. Similarity of the two sites was very low, as calculated by the J accord index, and so the two sites were considered to be very different in their herbaceous and shrub under story. The understory appears very different while the forest type remains constant, suggesting that factors that influence forest under story may be very different than those which influence the forest itself. However, the causal explanations for these differences remain unknown. This study is important in that it illustrates that the dynamics that influence plant community structure may vary widely, which suggests that an apparently very stable forest type may harbor a very dynamic and regionally variable under story community Mestrado Mestre em Biologia Vegetal