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The defence against infections is the essential function of the immune system of all Vertebrates. Fish present an efficient and developed immunologic response and in the case of Teleosts, with some similarities to the higher vertebrates. It can be divided into two types: innate or non specific and adquired or specific, both with a humoral and cellular compartments. Their relative importance can change according to the age of fish and is always under the influence of different factors. The most relevant components are mentioned here. There are two factors in fishes which strongly influence the immune response and antibody production, seasonal changes and temperature. The main lymphoid organs are described here: the thymus, the kidney and the spleen, as well as the lymphocyte ontogenic process. Some advances in knowledge were published during the last years, however it is still necessary to develop new studies in basic immunology in different species to caracterize effector cell populations and their functions. La función esencial del sistema inmune en todos los vertebrados es la defensa contra las infecciones. Los peces presentan una respuesta inmunológica bien desarrollada e integrada, y en el caso de los Teleósteos, con algunas similitudes respecto a los vertebrados superiores. Puede ser dividido en dos tipos: innato o inespecífico y adquirido o específico, ambos compuestos por una parte humoral y celular. Su importancia puede variar con la edad del pez y está influenciada por distintos factores. Se mencionan aquí sus componentes más relevantes. En los peces existen dos factores que influencian notoriamente la respuesta inmune y la producción de anticuerpos, que son los cambios estacionales y la temperatura. Se describen los principales órganos linfoides, el timo, el riñón y el bazo, así como el proceso ontogénico linfocitario. Si bien se ha avanzado mucho en los últimos años, todavía se necesitan estudios de inmunología básica en las distintas especies que ayuden a caracterizar las poblaciones efectoras y sus mecanismos de acción

Un ensayo de Electroinmunotrasferencia para detectar anticuerpos contra Sarcocystis aucheniae (SA) de alpacas fue desarrollado para el diagnostico en vivo de sarcocistiosis en camelidos domesticos. El antigeno consiste en un extracto soluble obtenida de macroquistes SA (MSA) de alpacas naturalmente infectadas. Una de SDS-PAGE (15%) analisis electroforetico revelado en quince peptidos de 25-127 kDa. Electroinmunotrasferencia sera un ensayo de transferencia de los conejos inmunizados MSA detectando tres peptidos en 58-50 kDa, mientras que los sueros de SA diagnostican la reaccion de alpacas contra cuatro bandas de proteinas. Los sueros de alpacas neonatas y de alpacas no infectados SA no mostro reactividad frente a los peptidos de MSA. Reactividad inmune especifica de los anticuerpos contra alpaca SA con cuatro peptidos de MSA por un ensayo de Electroinmunotrasferencia queda documentado.

El objetivo del presente estudio fue determinar la persistencia del virus del colera porcino (VCP) en el sistema nervioso central (SNC) y tejidos linfoides de lechones con infeccion subclinica de colera porcino a traves de la deteccion del antigeno viral mediante la prueba de inmunofluorescencia e inmunoperoxidasa. Con este fin se estudiaron 28 lechones de 1 a 20 dias de edad procedentes de 10 granjas tecnificadas del Valle de Lima. Al momento del muestreo los lechones fueron de apariencia normal (n=7), otros presentaron diarrea (n=5), neumonia (n=S) crecimiento retardado (n=6) y algunos murieron por aplastamiento (n=5). De todos los lechones se obtuvieron: tonsilas, bazo, nodulos linfaticos regionales para realizar cortes congelados para la prueba de inmunofluorescencia (IF). El encefalo incluyendo la glandula pituitaria de cada uno de los lechones fueron fijados en formalina al l0% para posterior identificacion del antigeno del VCP mediante la prueba de inmunoperoxidasa (IP). El antigeno estuvo presente en las tonsilas, bazo y nodulos linfaticos, asi como, en el SNC en el 42.9% (12/28) de los lechones estudiados. En el SNC fue detectado en neuronas o grupos de neuronas de las diferentes areas del encefalo. El 100% (12/12) de los lechones presentaron antigeno en la corteza cerebral, en el cerebelo 83.3% (10/12), en el talamo e hipotalamo 41.75 (5/12), en el hipocampo 33.3% (4/12), en la medula oblonga 16.7% (2/12) y el 50% (6/12) en la glandula pituitaria. El antigeno viral no fue detectado en las celulas de la leptomeninge ni plexo coroideo de los ventriculos laterales y tercer ventriculo. Solo el 20% (2/10) de los lechones de 1 a 5 dias de edad fueron positivos al VCP incrementandose progresivamente la presencia del antigeno en los lechones de mayor edad. Este incremento del antigeno viral evidencia transmision postnatal de las cepas de baja virulencia. La presencia de cepas de baja virulencia es corroborada al detectarse que el 100 y 60% de los lechones diarreicos y neumonicos, asi como, el 40 y 33.3% de los lechones con crecimiento retardado y muertos por aplastamiento presentaron antigeno viral. Los resultados indican que cepas de VCP de baja virulencia persisten en el SNC y glandula pituitaria ademas de los tejidos linfoides y que es prevalente en granjas porcinas tecnificadas muestreadas en el Valle de Lima. Los lechones con problemas diarreicos y respiratorios tuvieron antigeno del VCP evidenciando el rol inmunodepresor del virus.

El objetivo del presente estudio fue determinar la asociación del virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino (VPRRS) con la presentación de neumonías en porcinos de 23 granjas tecnificadas del Valle de Lima, a través de la detección de antígenos del VPRRS y lesiones histopatológicas en muestras de pulmones y nódulos linfáticos mediastínicos (NLM) con lesiones (n=102) y sin lesiones (n=69) de animales de 20 a 22 semanas de edad colectados durante su beneficio en mataderos de Lima Metropolitana. El antígeno viral fue detectado mediante la prueba de inmunofluorescencia empleando anticuerpos monoclonales contra el VPRRS, y su asociación con las neumonías fue mediante la prueba estadística de Chi Cuadrado. El antígeno del VPRRS fue detectado en 14.7% (15/102) de las muestras de pulmones con lesiones neumónicas y/o NLM. El virus fue más prevalente en pulmones (47%) seguido por ambos pulmones y NLM (33%) y NLM solo (15%). El 26% (6/23) de las granjas muestreadas estuvieron infectadas por el VPRRS y del total de las muestras (n=29) procedentes de estas granjas reactoras, el 51.7% (15/29) presentaron antígeno del VPRRS. Las predominantes lesiones histopatológicas fueron bronconeumonía supurativa aguda y subaguda. La presencia de antígeno del VPRRS y las lesiones neumónicas tuvieron una asociación estadística significativa (p

Se ha desarrollado la extracción y purificación de la fracción antigénica F1 de Yersinia pestis que se utilizará en la producción de un kit para el diagnóstico de peste. El proceso se realizó a partir de biomasa de una cepa patógena de Yersinia pestis, aislada en Chiclayo (1999), cuyos factores de virulencia fueron comprobados con la finalidad de determinar la presencia del antígeno en mención. La biomasa bacteriana fue inactivada con acetona fría, y la purificación parcial del antígeno se realizó mediante procesos de precipitación con sales y diálisis. Para confirmar la pureza del antígeno, éste se sometió a una electroforesis en gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) al 15% y se evidenció la presencia de una banda de 17 kDa. Se sensibilizó glóbulos rojos de carnero, con la fracción antigénica F1, para la titulación de un suero Anti-F1 por hemaglutinación pasiva e inhibición de la hemaglutinación. The extraction and purification of Fraction-1 (F1) antigen of Yersinia pestis has been implemented to be used in the production of a plague diagnosis kit. The process was conducted from the biomass of a pathogenic strain of Yersinia pestis isolated in Chiclayo (1999), whose virulence factors were confirmed in order to determine the presence of the above-mentioned antigen. The bacterial biomass was inactivated in cold acetone and the antigen partial purification was performed by precipitation with salts and dialysis. To confirm the purity of the antigen, it was subject to SDS-polyacrylamide gel electrophoresis in 15% gel and a 17 kDa band was shown. Red blood cells from sheep were sensitized with purified fraction 1 antigen to titer an anti-F1serum by passive hemaglutination and hemaglutination inhibition.

Se elaboró extractos de antígenos solubles de Leishmania (leishmanina), a partir de formas promastigotes de Leishmania (Viannia) peruviana y Leishmania (Viannia) braziliensis. Los antígenos fueron evaluados respecto a su sensibilidad, especificidad y efectos colaterales. Los ensayos se llevaron a cabo en una área de transmisión de la "uta" (leishmaniasis andina), en un área de transmisión de la "espundia"(leishmaniasis selvática), y en pacientes atendidos en Lima. El antígeno de Leishmania (Viannia) peruviana, 25 µg/ml, resultó adecuado para la detección de la reacción de hipersensibilidad cutánea tardía en pacientes con lesiones cutáneas y/o cutáneo-mucosas activas, encontrando una sensibilidad promedio de 95,9%. La misma sensibilidad, pero con reacciones más intensas (potentes) fue observada con el antígeno homólogo de 30 µg/ml. Los antígenos de Leishmania (Viannia) braziliensis de 25 y 30 µg/ml mostraron similar sensibilidad y potencia a las dosis equivalentes de Leishmania (Viannia) peruviana.La sensibilidad y la potencia de la reacción se incrementaron mínimamente con el incremento en la concentración de proteínas. No se observaron efectos colaterales como vesiculación y ulceración en el sitio de inoculación. Los antígenos demostraron ser altamente específicos. La especificidad en el grupo control alcanzó el 100,0%, mientras que en el grupo control endémico fue 95,7%. Extracts of Leishmania soluble antigens (leishmanina) were made from Leishmania (Viannia) peruviana and Leishmania (Viannia) braziliensis promastigotes.Antigens were evaluated for sensitivity, specificity and side effects. Assays were perfomed in transmission areas for "uta" (andean leishmaniasis), "espundia" (sylvatic leishmaniasis), and also in patients seen in Lima. Leishmania (Viannia) peruviana antigen, 25 µg/ml, was adequate to detect late skin hypersensitivity reaction among patients with active cutaneous and/or mucocutaneous lesions, with an average sensitivity of 95,9%. The same sensitivity, but with more intense (potency) reactions were observed with the homologous 30 µg/ml antigen. Antigens of Leishmania (Viannia) braziliensis, 25 and 30 µg/ml, showed similar sensitivity and potency to the equivalent doses of Leishmania (Viannia) peruviana. The reaction’s sensitivity and potency increase minimally with increased protein concentration. No side effects, such as vesiculation and ulceration on the site of the innoculation, were observed. Antigens showed high specificity. Specificity in the control group reached 100,0% whereas in the endemic control group, it was 95,7%.

Some proteins of the Toxoplasma gondii are recognized by IgG, IgM and IgA antibodies in patients with acute and chronic toxoplasmosis, depending on the strain and stage of the Toxoplasma. Sixty-nine sera from immunocompetent individuals were studied through the Western-Blot Test: 20 has an acute infection, 29 has a chronic toxoplasmosis infection and 20 were healthy (seronegatives). The protein analysis revealed by IgG and IgM antibodies were performed through the Immunoplot method in order to know their recognition frequency (f) and be valued as infection markers. In the acute phase, the IgM antibodies showed a recognition frequency (f = 0.60) for the 60kDa protein, and in the chronic phase the IgG antibodies showed a recognition frequency (f = 0.68) for the 12kDa protein. Seronegatives revealed no type of band. The protein of 12kDa can be a diagnostic marker of the chronic phase while protein 60kDa of the acute phase of toxoplasmosis. Demonstrou-se que algumas proteínas do Toxoplasma gondii são reconhecidas pelos anticorpos IgG, IgM e IgA em pacientes com toxoplasmose aguda e crônica. A cepa e o estágio do protozoário interferem na diferença. Sessenta e nove soros de indivíduos imunocompetentes foram submetidos à pesquisa de anticorpos pela técnica de Western-Blot, sendo 20 dos soros provenientes de pacientes com infecção aguda e 29 de infecção crônica de toxoplasmose e 20 sem doença (soronegativos). A análise das proteínas reveladas pelos anticorpos IgG e IgM foi feita pelo método de Inmunoplot com a finalidade de se conhecer a freqüência de reconhecimento (f), e serem valorizados como marcadores de infecção. Na fase aguda os anticorpos IgM apresentaram uma freqüência de reconhecimento (f = 0.60) para a proteína de 60kDa. Na fase crônica, os anticorpos IgG apresentaram (f = 0.68) para a proteína de 12kDa. Soronegativos não revelaram nenhuma informação. A proteína de 12kDa pode ser um marcador diagnóstico da fase crônica, e a proteína de 60kDa pode ser um marcador diagnóstico da fase aguda da toxoplasmose.

Foi feita uma comparação entre os antígenos (Ag), preparados a partir dos vírus Maedi-Visna (MVV) e Artrite-encefalite Caprina (CAEV) para detecção de anticorpos contra o CAEV em 120 amostras de soro caprino. A sensibilidade e especificidade relativa da imunodifusão em ágar gel (IDAG) usando-se Ag MVV em relação ao Ag CAEV, foi 77,3% e 100%, respectivamente (X2, p

A biologia do Toxoplasma gondii demonstra que o gato é o hospedeiro completo, responsável pela disseminação do parasito. Assim, dois gatos domésticos foram imunizados com cada uma das amostras, VPS (humano), LIV-IV e LIV-V (suíno), CPL (caprino) e CN (felino) de T. gondii. Foram utilizados taquizoítas vivos em inóculos endovenosos de 2x10(6) (1° inóculo} e 4x10(7) (2° inóculo - 35 dias após), exceto a amostra VPS, onde 1 gato morreu no 10° dia com sinais clínicos agudos da doença, nas outras amostras, nenhum sinal clínico foi constatado durante os 6 meses de observação. O nível de anticorpos na imunização foi acompanhado através da reação de imunofluorescência indireta (IFI) com conjugado anti-IgG de felino. Os títulos de anticorpos obtidos no 20° dia variaram de 1:1.024 a 1:4.096 e de 1:1.024 a 1:8.000 no 40° dia. Somente a amostra VPS expressou títulos de 1:16.000 no 30° dia da imunização. Títulos homólogos e heterólogos foram equivalentes sem nenhuma diferença entre as amostras. Quando soros imunes foram adsorvidos com taquizoítas vivos de cada amostra, a redução nos títulos de anticorpos foi demonstrada em ambos homólogos e heterólogos. Esses resultados sugerem que, embora diferente em virulência para gatos, a superfície antigênica é comum entre as amostras do T. gondii, com base no nível de anticorpo demonstrado pela IFI. Esses resultados também demonstram que, aparentemente, não há correlação entre virulência e as características sorológicas das amostras estudadas no T. gondii. Entretanto, a importância do teste IFI em diagnóstico laboratorial é reforçada. The biology of Toxoplasma gondii demonstrate that cats are the complete host responsable for the dissemination of this parasites. Two domestic cats were immunised with Toxoplasma gondii strains VPS (human), LIV-IV and LIV-V (porcine), CPL (caprine) and CN (feline). Live tachyzoites were utilized in intravenous inoculation of 2x10(7) (first inoculum) and 4x10(7) (second inoculum - 35 days later), except for strain VPS, where one cat died 10 days after the first inoculation and another showed symptoms of acute toxoplasmosis. In all other strains, no clinical signs were detected during 6 months of observation. The antibody response after immunization was monitored by indirect immunofluorescence (IF) test by the use of anti-cat IgG conjugate. The antibody titers obtained at the 20th day varied from 1:1,024 to 1:4,096 and from 1:1,024 to 1:8,000 at the 40th day. Only the VPS strain attained titers of 1:16,000 at the 30th day of immunization. Homologous and heterologos titers were equivalem without any difference among the strain. When the immune sera were adsorbed with live tachyzoites, a reduction in the antibody titers was demonstrated both in homologous and heterologous levels. These results suggest that although dijferences in virulence for cats are evident among the strains. The surface antigens are commom among the T. gondii strains on the basis of IF antibody level. The results also demonstrated that apparently there is no correlation between virulence and serological characteristics of the studied strains of Toxoplasma gondii. However the importance of the IF test in the laboratorial diagnosis of Toxoplasmosis is reinforced.

As glândulas acetabulares da cercária de Schistosoma mansoni produzem uma secreção que está envolvida no processo de penetração do parasita na pele do seu hospedeiro vertebrado. Nesta secreção existem proteinases que degradam macromoléculas da matriz extracelular da pele, participam da remoção do glicocálice e da transformação da larva cercariana em esquistossômulo e também induzem hipersensibilidade cutânea. Uma fração antigênica, capaz de induzir a liberação de histamina de mastócitos, foi obtida no nosso laboratório após passar uma fração parcialmente purificada da secreção de cercárias em uma coluna de Sepharose que continha IgGs de camundongos cronicamente infectados com S. mansoni. A fração imunogênica continha uma enzima de 60 kDa como componente principal que, entretanto, não estava isolada. Para concluir os estudos de caracterização bioquímica e imunológica desta enzima, desenvolvemos neste trabalho um novo método para a sua purificação. Filtração molecular, imunoafinidade e troca iônica foram as etapas de fracionamento cromatográfico utilizadas para obtenção da enzima purificada. A enzima de 60 kDa isolada é uma serino proteinase, inibida sobretudo por TLCK e TPCK, que apresenta atividade proteolítica sobre componentes de colágeno da pele. Sua atividade não é estimulada na presença de íons Ca2+. O seu pH ótimo de atividade é 8,0 e sua temperatura ótima é a 40 oC. A enzima é de natureza glicoprotéica mas os carboidratos que fazem parte da sua estrutura não contém resíduos de manose. A porção de carboidratos da proteinase de 60 kDa de cercária é o seu componente imunogênico principal apresentando em ELISA forte reação com soro de camundongo cronicamente infectado com S. mansoni. The acetabular glands of the Schistosoma mansoni cercaria produce a secretion which is involved in the penetration process of this parasite into the vertebrate host skin. This secretion contains proteases that degrade macromolecules from the skin matrix, help to remove the glicocalix layer and in the transformation from cercaria into schistosomulum, and also induce cutaneous hypersensitivity reaction. An antigenic fraction able to induce histamine release from mastocytes was obtained previously by our group after passing a semi-purified fraction from cercaria secretion into a column which contained IgGs from mice chronically infected with S. mansoni bound to Sepharose beads. The antigenic fraction contained a 60 kDa enzyme as its main component that, nevertheless, was not completely purified yet. To conclude the biochemical and immunological characterization of this enzyme, we established in this work a new method for its purification. Gel filtration, immunoaffinity, and ion exchange were the chromatographic steps employed. The 60 kDa enzyme isolated is a serine protease, (inhibited mostly by TLCK and TPCK) that degrades collagen components from the skin. Its optimum activity is at 40 oC and at pH 8.0. Its activity is not stimulated in the presence of Ca2+. The enzyme is a glycoprotein but the carbohydrate in its structure does not contain manose. The carbohydrate portion of the 60 kDa protease purified from cercarial secretions is its main immunogenic component showing by ELISA strong reaction with serum from mouse chronically infected with S. mansoni.

Antigens from three strains of Aspergillus fumigatus (354, 356, and JIG) and an antiserum against the mixing of these antigens have been produced, and evaluated immunochemically. The antigens were obtained through a modified Coleman & Kaufman technique (culture filtrate concentrated by acetone). Analysis by the immunodiffusion test (ID) against homologous serum has yielded 100% sensitivity (with the studied sera). Concerning heterologous sera we found reactivity with a serum of a patient of candidiasis and another with histoplasmosis. The same result was obtained with a reference antigen in immunodiffusion, showing similar standards of response. Titration of the antiserum by ID and counterimmunoelectrophoresis showed a title of 1:32, and by complement fixation (micro-technique) a title of 1:128. Using immunoelectrophoresis (IEF), the produced antiserum yielded 8 lines of precipitation (5 in the anodic pole and 3 in the cathodic one). In SDS-PAGE at 12.5% the antigen has presented a rather complex electro-phoretic profile (26 proteic subunits with a molecular weight ranging from 18 a >; 100 kDa). Immunogenicity of the antigen was observed in all fractions of SDS-PAGE when the immu-noblotting against the antiserum was carried out. Antígenos de três amostras de A. fumigatus (354, 356, JIG) e antissoro contra a mistura destes antígenos foram produzidos e avaliados imunoquimicamente. Os antígenos de filtrado de cultura foram obtidos após concentração com acetona conforme adaptação da técnica descrita por Coleman & Kaufman. Em prova de ID obteve-se 100% de positividade com os soros de pacientes com aspergilose estudados. Com relação aos soros heterólogos encontramos reatividade com soro de um paciente com candidíase e com soro de um paciente com histoplasmose; foi encontrado padrão idêntico de resposta quando se utilizou o antígeno de referência. O antissoro foi titulado por ID, CIE e RFC MI contra o antígeno específico apresentando títulos respectivos de 1:32, 1:32 e 1:128, e utilizado para reagir contra o mesmo antígeno por IEF, demonstrando 8 linhas de precipitação, sendo 5 na região anódica e 3 na região catódica. O perfil de bandeamento do antígeno em eletroforese utilizando gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) a 12,5% apresentou-se complexo com 26 sub-unidades protéicas, cujos pesos moleculares variaram de 18 a >; 100kDa. Quando estes componentes foram eletrotransferidos e reagidos com o antissoro específico ("immunoblotting"), verificou-se imunogenicidade em todas as frações bandeadas.

Antígenos de três amostras de A. fumigatus (354, 356, JIG) e antissoro contra a mistura destes antígenos foram produzidos e avaliados imunoquimicamente. Os antígenos de filtrado de cultura foram obtidos após concentração com acetona conforme adaptação da técnica descrita por Coleman & Kaufman. Em prova de ID obteve-se 100% de positividade com os soros de pacientes com aspergilose estudados. Com relação aos soros heterólogos encontramos reatividade com soro de um paciente com candidíase e com soro de um paciente com histoplasmose; foi encontrado padrão idêntico de resposta quando se utilizou o antígeno de referência. O antissoro foi titulado por ID, CIE e RFC MI contra o antígeno específico apresentando títulos respectivos de 1:32, 1:32 e 1:128, e utilizado para reagir contra o mesmo antígeno por IEF, demonstrando 8 linhas de precipitação, sendo 5 na região anódica e 3 na região catódica. O perfil de bandeamento do antígeno em eletroforese utilizando gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) a 12,5% apresentou-se complexo com 26 sub-unidades protéicas, cujos pesos moleculares variaram de 18 a > 100kDa. Quando estes componentes foram eletrotransferidos e reagidos com o antissoro específico ("immunoblotting"), verificou-se imunogenicidade em todas as frações bandeadas. Antigens from three strains of Aspergillus fumigatus (354, 356, and JIG) and an antiserum against the mixing of these antigens have been produced, and evaluated immunochemically. The antigens were obtained through a modified Coleman & Kaufman technique (culture filtrate concentrated by acetone). Analysis by the immunodiffusion test (ID) against homologous serum has yielded 100% sensitivity (with the studied sera). Concerning heterologous sera we found reactivity with a serum of a patient of candidiasis and another with histoplasmosis. The same result was obtained with a reference antigen in immunodiffusion, showing similar standards of response. Titration of the antiserum by ID and counterimmunoelectrophoresis showed a title of 1:32, and by complement fixation (micro-technique) a title of 1:128. Using immunoelectrophoresis (IEF), the produced antiserum yielded 8 lines of precipitation (5 in the anodic pole and 3 in the cathodic one). In SDS-PAGE at 12.5% the antigen has presented a rather complex electro-phoretic profile (26 proteic subunits with a molecular weight ranging from 18 a > 100 kDa). Immunogenicity of the antigen was observed in all fractions of SDS-PAGE when the immu-noblotting against the antiserum was carried out.

Al considerar las características excepcionales de las reacciones alérgicas y anafilácticas se comprende la necesidad de una revisión del estudio del mecanismo básico inmunoquímico de estos fenómenos biológicos.

ResumenLa toxocariosis es una zoonosis causada por la ingestión de huevos infectivos de Toxocara spp. El diagnóstico de la enfermedad se basa en la detección de anticuerpos en el suero u otros fluidos biológicos. La técnica serológica más utilizada es el ELISA, que usa como antígeno los productos de excreción-secreción de larvas de tercer estadio (ES/L3). Estos productos antigénicos son glicoproteínas que se originan en los órganos secretorios del parásito y no son específicos de especie. Para evaluar la especificidad de la técnica de ELISA con el antígeno ES/L3, se emplearon sueros de personas con otras helmintiasis y con patologías no parasitarias. Se observó que estos sueros presentaron reactividad entre el 11 y el 70 % de los casos. El Western blot con suero de los mismos pacientes reveló que la glicoproteína que corresponde al triplete de 120kDa fue la más inespecífica. Teniendo en cuenta estos resultados y con el propósito de purificar el antígeno se realizó una cromatografía de intercambio iónico. Cuando se analizaron los sueros de los pacientes con diferentes enfermedades parasitarias y no parasitarias con el antígeno ES/L3 purificado, solo fueron reactivos entre un 10 y un 20 % de ellos. La sensibilidad del test de ELISA determinada por el programa Epidat 3.0 para los dos antígenos fue del 100 %, pero se observaron diferencias en la especificidad: para el antígeno ES/L3 total esta fue del 84 % y para el ES/L3 purificado del 99 %. Empleando el antígeno ES/L3 purificado se puede considerar que los sueros que son reactivos, en presencia de una sintomatología compatible, corresponden a pacientes que fueron o están parasitados con Toxocara canis.AbstractToxocarosis is a zoonotic disease caused by the ingestion of infective eggs of Toxocara spp. The diagnosis is based on the detection of antibodies in serum or other biological fluids. One of the current serological techniques for the diagnosis of toxocariasis is ELISA using excretory - secretory antigens of third stage larvae (ES/L3). These antigens are glycoproteins, which originate in the secretory organs of the parasite and are non speciesspecific. Sera from patients with other helminthiases and non- parasitic diseases were used to evaluate the specificity of ELISA using the excretory - secretory antigen (ES/L3). The reactivity of these sera was between 11 and 70%. Western blot using patients’ sera revealed that the glycoprotein triplet having a molecular weight of 120kDa was responsible for cross-reactivity. With these results, and for the purpose of purifying the antigen, ion exchange chromatography was performed. When the sera from patients with various parasitic and non-parasitic diseases were analyzed with the purified antigen ES/L3, they were only reactive between 10 to 20%. The sensitivity of the ELISA test determined by program Epidat 3.0 for the two antigens was 100%, but the following differences in specificity were observed: 84% for the total antigen ES/L3 and 99% for purified ES/L3. Using the ES/L3 purified antigen, it can be considered that the reactive sera, with compatible symptoms correspond to patients who are or were parasitized with Toxocara canis.

São descritas as principais etapas de uma técnica simples e sensível para a pesquisa, na mesma placa, do antígeno, do anticorpo e de imunocomplexos específicos baseada no "Enzyme-Linked Immunosorbent Assay" (ELISA). A técnica se mostrou de grande utilidade na pesquisa do antígeno, do anticorpo e de imunocomplexos específicos no soro de pacientes com esquistossomose hépato-intestinal crônica. The main steps of a sensitive and quantitative technique for the simultaneous determination, in the same microplate, of antigen, antibody and specific immune complexes has been described. The assay involved principles of the double sandwich technique used in the "Enzyme-Linked Immunosorbent Assay" (ELISA). The technique proved to be useful for the estimation of antigen, antibody and specific immune complexes in sera of patients with human chronic hepato-intestinal schistosomiasis.

É descrito novo antígeno para teste cutâneo no diagnóstico da cisticercose. São relatados os resultados obtidos em experimentação realizada em 64 pessoas não parasitadas, em 18 portadores de ténia, em 34 de cisticercose cerebral e em 51 de Hymenolepis nana. Após considerações sobre a especificidade, sensibilidade, facilidade de aplicação e leitura e inocuidade do antígeno proposto, é indicado como teste de triagem em estudos epidemiológicos. A new antigen for a cutaneous test used for cyticercosis diagnosis is described. The author refers to technical details of antigen preparation and the results obtained in tests performed on 64 controls, on 18 subjects infected with Taenia, on 34 subjects with cerebral cysticercosis and on 51 subjects with Hymenolepis nana. The antigen is considered specific, sensible, innocuous and very easy to apply. The test is pointed out as being the test of choice in epidemiologic studies.

Un Ag HA para el virus SLE, se obtuvo en células suspendidas "in vitro", incubadas en 37°C a pH 7 a 8 con un óptimo de 7,2. La fuente celular fue células provenientes del Sarcoma 180 TG, cosechado de ratones y resuspendidas en el mismo fluído ascítico inactivado a 56°C durante 30 minutos. El HA se obtuvo del 3° al 6°. día de inoculadas las células con un óptimo entre el 5° y 6° día. Otras fuentes de células, plaquetas bovinas y células de cerebro de ratón, fueron también positivas a estos pHs y T° pero dieron títulos más bajos. Las restantes fuentes de células resultaron negativas., A hemagglutinating antigen for SLE virus was obtained in cells suspended "in vitro" incubated at 37°C at pH 7,0 to 8,0 with the optimal 7,2. The source of cell was Sarcoma 180 TG harvested from mice, and resuspended in the same ascitic fluid after inactivation at 56°C during 30 minutes. HA was recorded from the third to sixth day after seeding with the optimal between fifth and sixth day. Other two sources of cells: bovine platelets and mouse brain cells were also positive at these pH's and temperature but lower titlers were observed other eight sources of cells were all negatives., Tesis digitalizada en SEDICI gracias a la Biblioteca Conjunta de las Facultades de Ciencias Agrarias y Ciencias Veterinarias de la UNLP., Facultad de Ciencias Veterinarias

Introducción: existen diversos métodos para el diagnóstico serológico de leptospirosis pero es necesario investigar más, para conseguir uno eficiente, rápido y económico que satisfaga el diagnóstico. Objetivo: evaluar Ag polivalente para diagnóstico macroscópico de leptospirosis frente a la microaglutinación. Método: se elaboró un Ag leptospiral polivalente y el diluyente para sueros problemas en el Centro de Leptospirosis de la Universidad de Ciencias Médicas de Pinar del Río, sometiéndolo a ensayo con sueros de pacientes llegados al Laboratorio Provincial de Microbiología. Se compararon entre macro y microaglutinación 430 sueros, 260 de pacientes sospechosos y positivos de leptospirosis, 120 de 10 consultorios de familia, 20 positivos de brucelosis, 15 positivos a sífilis y 15 sueros hiperinmunes. Los sueros fueron diluidos 1:80, para macroaglutinación con su diluyente y para microaglutinación 1:100 con solución fisiológica Resultados: los resultados se procesaron mediante comparación de proporciones con intervalo de confianza del 95%, estimando la sensibilidad y especificidad. De los sueros sospechosos, resultaron positivos a microaglutinación el 2,63% y un 3,21% a macroaglutinación), no hubo diferencia no significativa. Los positivos a brucella y sífilis fueron negativos a leptospira y los hiperinmunes positivos, en general especificidad y sensibilidad del Ag leptospiral polivalente fue 99,73 y 99,95% respecto al 100% de la microaglutinación. Conclusiones: no hubo diferencia significativa entre microaglutinación y macroaglutinación (P≥ 0,05). Fue excelente tanto la especificidad como la sensibilidad del AgLP. Los ensayos hay que extenderlos a distintos grupos poblacionales. El método resulta muy valioso.

This paper reports the sequence analysis of Bm86 Campo Grande strain comparing it with Bm86 and Bm95 antigens from the preparations TickGardPLUS and GavacTM, respectively. The PCR product was cloned into pMOSBlue and sequenced. The secondary structure prediction tool PSIPRED was used to calculate alpha helices and beta strand contents of the predicted polypeptide. The hydrophobicity profile was calculated using the algorithms from the Hopp and Woods method, in addition to identification of potential MHC class-I binding regions in the antigens. Pair-wise alignment revealed that the similarity between Bm86 Campo Grande strain and Bm86 is 0.2% higher than that between Bm86 Campo Grande strain and Bm95 antigens. The identities were 96.5% and 96.3% respectively. Major suggestive differences in hydrophobicity were predicted among the sequences in two specific regions. O objetivo deste estudo foi analisar a seqüência de Bm86 cepa Campo Grande comparando-a com os antígenos Bm86 e Bm95 das preparações TickGardPLUS e GavacTM, respectivamente. O produto de PCR foi clonado em PMOSBlue e seqüenciado. Para calcular os conteúdos de alfa-hélice e fita beta do polipeptídio previsto, foi utilizada a ferramenta de prognóstico de estrutura secundária PSIPRED. O perfil de hidrofobicidade foi calculado usando os algoritmos de Hopp e Woods, além da identificação das possíveis regiões de ligação com MHC classe I nos antígenos. O alinhamento "pair-wise" revelou que a similaridade entre Bm86 cepa Campo Grande e Bm86 é 0,2% maior que aquela entre Bm86 cepa Campo Grande e Bm95. As identidades foram de 96,5% e 96,3%, respectivamente. Com relação à hidrofobicidade, os resultados sugerem que a maior diferença Made available in DSpace on 2018-05-24T00:41:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SP19597ID30708.pdf: 482558 bytes, checksum: 38f22872ff8b2297e76a6026f9f190ad (MD5) Previous issue date: 2009-01-16

Obejivo: Confirmar la presencia del antígeno del virus de la fiebre amarilla en muestras de hígado. Material y Métodos: Se aplicó la técnica de inmunohistoquímica en muestras de hígado de 34 pacientes procedentes de las diferentes regiones del país con diagnóstico clínico de fiebre amarilla, durante los años 1999 a 2001. A los cortes de tejido (hígado parafinizado) se aplicó esta técnica con anticuerpos monoclonales y policlonales contra FA y el complejo biotina-streptavidina. El control positivo fue el hígado de un paciente con diagnóstico serológico e histopatológico de fiebre amarilla y el control negativo una muestra de hígado obtenida de la necropsia de un paciente con patología no hepática. Resultados: La positividad se dio por una tinción marrón en el citoplasma hepático. Las muestras negativas carecen de esta tinción. Se confirmó la presencia de antígeno de fiebre amarilla durante los años 1999 al 2001. Las 34 muestras procedieron de los departamentos de San Martín, Junín, Cuzco, Huánuco, Loreto, Pasco, y Ucayali. Conclusión: La técnica de inmunohistoquímica constituye una herramienta de diagnóstico por su alta sensibilidad y especificidad (ambas 90%), para estudios epidemiológicos en los que se puede realizar un diagnóstico retrospectivo., Objective: To determine the presence of yellow fever virus antigen in liver samples. Material and Methods: Immunohistochemistry assay was used in liver samples obtained from 34 patients from 1999 through 2002; they lived in different regions of the country and presented clinical diagnosis of yellow fever. Monoclonal and polyclonal antibodies against yellow fever virus and biotin-streptavidin complex were applied to liver sections (paraffinized-liver). A liver sample from a patient with serological and histophatological diagnosis of yellow fever was used as positive control and a negative control was a liver sample obtained at necropsy from a patient without liver disease. Results: Brown staining of the liver cell cytoplasm was considered positive. The presence of yellow fever virus antigen was confirmed in the 34 liver samples studied from 1999 to 2001. Patients came San Martín, Junín, Cuzco, Loreto, Pasco and Ucayali departments. Conclusion: Immunohistochemistry assay is a useful diagnostic tool for epidemiologic studies due to its high sensitivity and specificity (90%), when a retrospective diagnosis may be performed.

Neospora caninum is an obligate intracellular protozoan that can infect domestic and wild canids, as well as ruminants and equines. It was described in 1988 as causing neuromuscular alterations and death in dogs. Recently, N. caninum has been the focus of considerable attention for its large impact on the dairy industry, given the economic losses related to breeding failures and to a decrease in productivity. ELISA diagnosis of neosporosis has not been widely used in Brazil, mostly because of the assay's cost, and thus the distribution of the disease in the country is not well known. In order to evaluate its ability to react with sera from infected animals from the state of Mato Grosso do Sul, an antigenic determinant domain of a major surface protein (Nc-p43) was produced. The antigenic domain, located in the distal 2/3 region of the C-terminus, was amplified by polymerase chain reaction. The DNA fragments were cloned into pet100/D-TOPO vectors. The recombinant plasmids were transformed into Escherichia coli of the BL21 Star (DE3) strain and induced to express the fused fragment of Nc-p43 as a 29-kDa protein that, when assayed with bovine Neospora-positive serum from a regional sample, was sensitive for identification by immunoblotting. This Nc-p43 fragment may be of use in additional studies targeted at diagnosing N. caninum infection and at evaluating the immunoprotection conferred by the protein fragment to animal hosts. Made available in DSpace on 2018-06-06T01:03:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ID285591.pdf: 759459 bytes, checksum: 6a00cc67338ca60b046a2786757bdb48 (MD5) Previous issue date: 2008-01-14