251. Detection of Lipase Activity Immobilized on a PVDF Membrane
- Author
-
Pilić, Daria and Strelec, Ivica
- Subjects
PVDF membrane ,Burkholderia cepacia lipaza ,dot-blot ,BIOTEHNIČKE ZNANOSTI. Prehrambena tehnologija ,Pseudomonas fluorescens lipaza ,BIOTECHNICAL SCIENCES. Food Technology ,PVDF membrana ,detekcija aktivnosti ,Pseudomonas fluorescens lipase ,Burkholderia cepacia lipase ,detection of lipase activity - Abstract
Cilj ovog završnog rada bio je odrediti mogućnost detekcije i kvantifikacije aktivnosti lipaza imobiliziranih adsorpcijom na PVDF membranu primjenom „dot-blot“ tehnike. Za detekciju aktivnosti imobiliziranih lipaza podrijetlom iz bakterija Burkholderia cepacia i Pseudomonas fluorescens korišteni su α-naftilacetat kao supstrat, te dvije različite azo boje Fast Red TR i Fast Blue B sol kao kompleksirajući reagensi. Kvantifikacija aktivnosti imobiliziranih lipaza provedena je primjenom modula Protein Array Analyzer programa ImageJ. Rezultati su pokazali da je moguće provesti kvantifikaciju aktivnosti lipaza imobiliziranih na PVDF membranu primjenom Fast Red TR sol i Fast Blue B soli uz α-naftil-acetat kao supstrat. Međutim za potpunu kvantifikaciju nanesene lipazne aktivnosti potrebno je na PVDF membranu nanositi od 1-100 mU za detekciju aktivnosti B.cepaica lipaze te aktivnost od 1-30 mU za detekciju aktivnosti P. fluorescens lipaze uz primjenu Fast Red TR soli, dok se u slučaju azo boje Fast Blue B ovaj raspon za obje lipaze kreće od 1- 25 mU. The aim of this undergraduate thesis was to determine the possibility of detection and quantification of activity of lipases immobilized by adsorption onto PVDF membrane by „dot-blot“ technique. Activity detection of Burkholderia cepacia and Pseudomonas fluorescens lipases immobilized on PVDF membrane was performed with α-naphthylacetate as lipase substrate and two different azo dyes, Fast Red TR and Fast Blue B salt, as complexing reagents, while Protein Array Analyzer module of ImageJ software for immobilized lipase activity quantification. Obtained results revealed the possibility for detection of PVDF membrane immobilized lipase activity using both azo dyes, Fast Red TR and Fast Blue B salt. However, in order to ensure complete quantification of immobilized lipase activities, it will be necessary to apply from 1 to 100 mU of B. cepacia lipase per dot onto PVDF membrane and from 1 to 30 mU of P. fluorescens lipase when using Fast Red TR salt as copulating reagent, while in case of Fast Blue B salt from 1 to 25 mU of both lipases.
- Published
- 2020