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Considering Cimicifuga racemosa (L.) Nutt. (CIMI) as an alternative and natural drug in the treatment of menopause, as well as the importance of the study of drug redirection, this study aims to investigate the action of CIMI as a potential factor capable of reducing the deleterious effects of dexameasone (DEXA) and doxorubicin (DOXO). The experimental studies were approved by CEUA of the Federal University of Ceará Campus Sobral under protocol N◦ 05/18. For that, Swiss female mice (n = 47) with regular estrous cycle were used. In the laboratory, the ovaries were collected and cultured individually in a 24-well plate at 37.5 ° C, in 5% CO2, for 6 days. For experiment 1 of this dissertation, the following groups were evaluated - (i) DMEM +; (ii) CIMI [5 ng/ml]; (iii) DOXO [0.3 μg/ml]; (iv) CIMI [5 ng/ml] + DOXO [0.3 μg/mL]. For experiment 2, the following treatments were investigated: (i) DMEM +; (ii) CIMI [5 ng/ml]; (iii) DEXA [4 ng/ml]; (iv) CIMI [5 ng/ml] + DEXA [4 ng/ml]. After culture, the ovaries were used for the analysis of survival, activation, growth and follicular viability, ECM, apoptosis rate and stroma density. The results of activation, survival and growth were compared using Fisher's exact test, and the differences were considered significant when p

Introducción: Laelia autumnalis es una orquídea nativa de México amenazada por la pérdida de su hábitat. Para la conservación de esta especie es necesario evaluar la efectividad de métodos de desinfección y secado para aplicar técnicas de crioconservación y cultivo in vitro.Método: En un primer experimento, se consideró la técnica de inmersión directa en nitrógeno líquido para optimizar el almacenamiento a largo plazo. Sin embargo, la germinación asimbiótica fue afectada por el hongo Alternaria sp., motivo por el cual se realizó un segundo experimento con dos ensayos para evaluar la viabilidad y germinación asimbiótica de las semillas en función de los desinfectantes hipoclorito de calcio al 1% e hipoclorito de sodio comercial al 15% y los métodos de secado con aire en la campana de flujo laminar, gel de sílice y bomba de vacío, antes y después de la inmersión en nitrógeno líquido.Resultados: Los desinfectantes hipoclorito de calcio e hipoclorito de sodio disminuyeron la viabilidad en 49 y 37%, respectivamente, así como los métodos de secado con aire en la campana de flujo laminar y bomba de vacío con 36 y 28%, respectivamente. La pérdida de viabilidad fue menor cuando se desinfectó después de la inmersión en nitrógeno líquido; la germinación se estimuló con hipoclorito de sodio (100%).Conclusión: Las semillas de L. autumnalis deben desinfectarse con hipoclorito de sodio y secarse con aire de la campana de flujo laminar después de la crioconservación por inmersión directa en nitrógeno líquido para evitar daños en los tejidos.

Apoharknessia eucalyptorum foi inicialmente descrita em 2017 e identificada em folhas de Eucalyptus dunnii no Sul do Brasil. No entanto, faltam informações sobre o cultivo in-vitro para estudos complementares. No presente estudo folhas de E. dunnii foram inoculadas para demonstrar a patogenicidade de A. eucalyptorum, e o crescimento e esporulação foram avaliados em temperaturas de 15, 20 e 25°C em quatro meios de cultura: extrato de malte-ágar (MEA), batata dextrose-ágar (PDA), suco V8-ágar (V8) e feijão dextrose-ágar (BEAN), sob luz constante. Apoharknessia eucalyptorum causou manchas foliares nas folhas inoculadas. As melhores condições para o crescimento micelial foram em 25°C em PDA, BEAN e MEA. Para a esporulação as melhores condições foram a 25°C em todos os meios testados, e também a 20°C em PDA e BEAN. As características das colônias mudaram com as temperaturas, em 15°C as colônias formaram micélio cotonoso, enquanto que em 25°C o micélio cresceu espalhado pelo meio de cultura formando margens escuras limitadas por micélio branco manchado e conídios. As condições indicadas para o crescimento e esporulação in-vitro de A. eucalyptorum são os meios MEA, PDA e BEAN em 25°C. Made available in DSpace on 2019-10-17T18:17:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2019AlvaroSPMycelial.pdf: 1957944 bytes, checksum: a318a5b5dd7f8cf41509ecd86cfa5fcf (MD5) Previous issue date: 2019

Resumen Aloe vera L. ha sido utilizada como planta medicinal y ornamental, por lo que ha adquirido gran importancia comercial; sin embargo, presenta una desventaja reproductiva en condiciones naturales que limita el abastecimiento de la demanda mundial. El objetivo del estudio fue evaluar el desarrollo de procesos organogénicos a partir de ápices meristemáticos y discos caulinares. Se emplearon como explantes, ápices meristemáticos y discos caulinares cultivados en medio Murashige y Skoog, suplementado con distintos reguladores de crecimiento. Se cuantificó el porcentaje de inducción callogénica y caulogénica. Los brotes regenerados fueron micropropagados en medio suplementado con 2 mg L-1 de BA y 0,1 mg L-1 de ANA y el enraizamiento fue ensayado bajo condiciones in vitro y ex vitro. El porcentaje más alto (100%) de callogénesis en ápices meristemáticos se cuantificó en presencia de 0,5 y 1 mg L-1 de 2,4-D y 3 mg L-1 de ANA y en discos caulinares en presencia de 0,5 mg L-1 de 2,4-D con 12.5%. Durante la caulogénesis, el promedio más alto de brotes/explante (1,1) se cuantificó en ápices meristemáticos en presencia de 5 mg L-1 de ANA; mientras que en discos caulinares se observó (1,3 brotes/explante), en presencia de 0,25 mg L-1 de 2,4-D. Después del segundo ciclo de micropropagación el promedio de brotes/explante desarrollados aumentó a 8,8. El mayor porcentaje (75,3%) de brotes enraizados se cuantificó en condiciones in vitro. En conclusión, el explante primario más aconsejable para iniciar procesos organogénicos en A. vera fue ápices meristemáticos cultivados en medio con 5,0 mg L-1 de ANA. Abstract Aloe vera L. has been used as a medicinal plant and ornamental, so that this plant has acquired great commercial importance. However, A. vera L. has a reproductive disadvantage under natural conditions limiting supply of world demand. The objective of this study was evaluated process organogenesis development from meristematic tip and cauline discs. Meristematic tip and cauline discs were used as explants and cultured on Murashige and Skoog medium supplemented with different growth regulators. The percentage of organogenic and callogenic induction was quantified. Regenerated shoots were micropropagated on medium supplemented with 2 mg L-1 BA and 0.1 mg L-1 NAA, and rooting was tested under in vitro and ex vitro conditions. Highest percentage of callus formation in meristematic tip was quantified in presence of 0.5 and 1 mg L-1 2,4-D and 3 mg L-1 NAA and in cauline disks in presence of 0.5 mg L-1 of 2,4-D. During caulogenesis, highest average number of shoots per explant (1.1) was quantified from meristematic tip in presence of 5 mg L-1 NAA, while in cauline disk (1.3 shoots/explant) were quantified in presence 0.25 mg L-1 2,4-D. After micropropagation cycle second, the average number of shoots per explant increased to 8.8. The highest percentage (75.3%) of rooted shoots was quantified in vitro conditions. In conclusion, the primary explant more desirable to initiate organogenic processes in A. vera was meristems cultured in medium with 5.0 mg L-1 NAA.

Se realizo la propagacion in vitro de Senecio calvus como una alternativa para su conservacion . Las yemas se desinfectaron con HgCl 2 (0.01 y 0.1%) con y sin adicion periodica de antibioticos. El medio de cultivo Murashige & Skoog (1/2) mas sacarosa 2%, fitagel 0.3% y pH 5.7 fue suplementado con bencilaminopurina para la multiplicacion; mientras que para el enraizamiento se uso acido naftalenacetico o acido giberelico. Se agregaron tratamientos sin regulador de crecimiento. Para la aclimatacion se evaluaron dos sustratos naturales. El mayor porcentaje de desinfeccion se obtuvo con HgCl 2 0.1% por 5 minutos con aplicacion de rifampicina (72 µg·mL -1 ) y nistatina (200 µg·mL -1 ) cada tres dias por 18 dias. La bencilaminopurina incremento la sobrevivencia de las yemas introducidas y el porcentaje de plantas con brotes; pero no se encontro diferencias significativas en el numero de brotes por planta. El acido giberelico tuvo efecto positivo sobre el enraizamiento mientras que el acido naftalenacetico indujo la formacion de callos. El mejor sustrato para la aclimatacion fue tierra + musgo (1:1). ABSTRACT In vitro propagation of Senecio calvus was carried out as an alternative for its conservation. The buds were disinfected with HgCl 2 (0.01 and 0.1%) with and without periodic addition of antibiotics. Murashige and Skoog culture medium (1/2) plus 2% sucrose and 0.3% phytagel 0.3%, and pH 5.7 was supplemented with benzylaminopurine for multiplication; while for the rooting naphthaleneacetic acid or gibberellic acid were used. Treatments without growth regulator were added. For acclimation two natural substrates were evaluated. The highest percentage of disinfection was obtained with 0.1% HgCl 2 for 5 minutes adding rifampicin (72 μg·mL-1) and nystatin (200 μg·mL-1) every three days per 18 days. Benzylaminopurine increased the survival of the introduced buds and the percentage of shooted plants; however the number of shoots per plant did not show significant differences. Gibberellic acidhad a positive effect on rooting while naphthaleneacetic acid induced callusing formation. The best substrate for acclimatization was soil + moss (1: 1). Key words : gibberellic acid, naphthaleneacetic acid, Asteraceae, benzylaminopurine, in vitro culture.

En enero de 1985, se establece el proyecto de investigación colaborativa Mejoramiento Genético de Papa y Camote para Zonas Andas y Salinas entre la Facultad de Ciencias Agrícolas de la Universidad Nacional Jorge Basadre Grohmann de Tacna y el Centro Internacional de la Papa. Dentro de la estrategia y logística del presente proyecto se diseñó un programa de cruzamientos y selecciones recurrentes para generar híbridos y clones avanzados, así como progenitores con buena habilidad combinatoria, adaptados a las condiciones agroecológicas áridas y salinas de la costa peruana. Este germoplasma autotetraploide mejorado (2n=4x=48=AAAA), introducido al sistema de cultivo in vitro para su limpieza de virus y liberación, sería utilizado por los agricultores de esta zona agroecológica para la alimentación humana y como materia prima para la agroindustria. A la fecha, se ha logrado una amplia ganancia genética y un avance de selección, materializado mayormente por un caudal de clones avanzados, familias híbridas de semilla botánica y variedades superiores, adaptadas a las condiciones climáticas y edáficas de los suelos costeros de potencial agrícola, así como una amplia resistencia de campo al nemátodo del nudo de la raíz Meloidogyne incógnita M.javanica y M. arenaria, importante plaga de la papa y una resistencia de campo a los principales virus del tubérculo, como parte de un manejo ecológico integrado, en el control de plagas y enfermedades en la costa árida peruana.

Dyckia vicentensis is an endemic species of the southwestern region of Rio Grande do Sul (RS, Brazil), which presents high ornamental and economic value. Thus, the aim of this study was to test in vitro and ex vitro conditions for its propagation. For in vitro germination, disinfested seeds were inoculated on Murashige and Skoog medium with different salt concentrations and containing or not active charcoal. The ex vitro emergence of the seeds was evaluated using different compositions of substrates. Results showed that the propagation of D. vicentensis could be successfully performed in vitro on medium with 50% salt concentration or ex vitro using commercial substrate. The seedlings showed good adaptation during acclimatization in a greenhouse, although the in vitro germinated plants presented higher survival rate, number of leaves, and biomass in relation to those grown in ex vitro substrate. This is the first study carried out on the propagation of D. vicentensis, which may be used to subsidize its propagation and conservation. Resumo Dyckia vicentensis, uma espécie endêmica do sudoeste do Rio Grande do Sul (RS, Brazil), possui alto valor ornamental e econômico. Assim, o objetivo deste estudo foi testar condições in vitro ou ex vitro para a sua propagação. Para a germinação in vitro, as sementes foram desinfestadas e inoculadas em meio de Murashige e Skoog (MS) com diferentes concentrações de sais minerais e contendo ou não carvão ativo. A emergência de plântulas, em condições ex vitro, foi avaliada em diferentes composições de substratos. Os resultados mostraram que a propagação de D. vicentensis pode ser realizada em condições in vitro, utilizando meio de cultura com 50% da concentração de sais do meio MS, e também em condições ex vitro, em substrato comercial. Em geral, as plântulas mostraram uma boa adaptação durante a aclimatização em casa de vegetação, embora aquelas germinadas in vitro tenham apresentado maior taxa de sobrevivência, maior numero de folhas e biomassa em relação às plântulas oriundas da germinação em substrato. Este estudo é pioneiro para D. vicentensis e poderá fornecer subsídios para propagação e conservação dessa espécie.

In this study, we aimed to evaluate the rate of bovine embryo production by using 50 ng/mL melatonin supplementation in in vitro culture medium. For this, oocytes from slaughterhouse ovaries were matured in vitro in TCM-199 medium with Earle’s balanced salt solution + 10% SFB, FSH, and LH in an atmosphere of 5% CO2. Twenty-four hours after IVM, the oocytes underwent in vitro fertilization in human tubal fluid under the same conditions as above, for 18 h. Semen was fractionated by Percoll gradient centrifugation and the concentration of sperm was adjusted to 1 × 106/mL. Probable zygotes were then divided into two groups: the control group grown in drops of 90 μL SOFaa medium + 0.6% BSA + 2.5% SFB, in an atmosphere of 5% CO2, 90% N2, and a melatonin group (Mel), similarly cultured in 90 μL drops of SOFaa medium + 0.6% BSA + 2.5% SFB + 50 ng/mL melatonin. Cleavage rates were assessed on day 3 (D3). On D7, blastocyst formation rates were evaluated. Eight routines were performed (320 oocytes per routine). Data were analyzed with ANOVA, followed by Tukey’s range test using a general linear model. The level of statistical significance was set at 5%. There were no differences in the rates of cleavage or blastocyst formation between the control and melatonin groups (P > 0.05). Thus, under the conditions used in this study, supplementation with melatonin did not yield benefits in increasing the rate of in vitro bovine embryo production. En este estudio, nuestro objetivo fue evaluar la tasa de producción de embriones bovinos mediante el uso de suplementos de melatonina 50 ng / mL en medio de cultivo in vitro. Para ello, se maduraron in vitro ovocitos de ovarios de matadero en medio TCM-199 con solución salina equilibrada de Earle + SFB, FSH y LH al 10% en una atmósfera de CO2 al 5%. Veinticuatro horas después de la MIV, los ovocitos se sometieron a fertilización in vitro en líquido tubárico humano en las mismas condiciones que antes, durante 18 h. El semen se fraccionó mediante centrifugación en gradiente de Percoll y la concentración de espermatozoides se ajustó a 1 x 106 / ml. Luego, los cigotos probables se dividieron en dos grupos: el grupo de control crecido en gotas de 90 μL de medio SOFaa + 0.6% BSA + 2.5% SFB, en una atmósfera de 5% CO2, 90% N2 y un grupo de melatonina (Mel), de manera similar cultivado en gotas de 90 μL de medio SOFaa + BSA al 0,6% + SFB al 2,5% + 50 ng / mL de melatonina. Las tasas de escisión se evaluaron el día 3 (D3). En D7, se evaluaron las tasas de formación de blastocistos. Se realizaron ocho rutinas (320 ovocitos por rutina). Los datos se analizaron con ANOVA, seguido de la prueba de rango de Tukey utilizando un modelo lineal general. El nivel de significación estadística se estableció en 5%. No hubo diferencias en las tasas de escisión o formación de blastocistos entre los grupos de control y melatonina (P> 0,05). Por lo tanto, en las condiciones utilizadas en este estudio, la suplementación con melatonina no produjo beneficios en el aumento de la tasa de producción de embriones bovinos in vitro. Neste estudo, objetivou-se avaliar a taxa de produção de embriões bovinos utilizando suplementação de melatonina 50 ng/mL em meio de cultivo in vitro. Para isso, oócitos de ovários de abatedouro foram maturados in vitro em meio TCM-199 com solução salina balanceada de Earle + 10% SFB, FSH e LH em uma atmosfera de 5% de CO2. Vinte e quatro horas após a MIV, os oócitos foram submetidos à fertilização in vitro em fluido tubárico humano nas mesmas condições acima, por 18 horas. O sêmen foi fracionado por centrifugação em gradiente de Percoll e a concentração espermática ajustada para 1 × 106/mL. Os prováveis zigotos foram então divididos em dois grupos: o grupo controle cultivado em gotas de 90 μL de meio SOFaa + 0,6% de BSA + 2,5% de SFB, em uma atmosfera de 5% de CO2, 90% de N2, e um grupo de melatonina (Mel), da mesma forma cultivadas em gotas de 90 μL de meio SOFaa + 0,6% BSA + 2,5% SFB + 50 ng / mL de melatonina. As taxas de clivagem foram avaliadas no dia 3 (D3). No D7, as taxas de formação de blastocisto foram avaliadas. Oito rotinas foram realizadas (320 oócitos por rotina). Os dados foram analisados por ANOVA, seguido pelo teste de intervalo de Tukey usando um modelo linear geral. O nível de significância estatística foi estabelecido em 5%. Não houve diferenças nas taxas de clivagem ou formação de blastocisto entre os grupos controle e melatonina (P > 0,05). Assim, nas condições utilizadas neste estudo, a suplementação com melatonina não trouxe benefícios no aumento da taxa de produção in vitro de embriões bovinos.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES As cutias são mamíferos silvestres que apresentam importantes funções ecológicas por serem dispersadoras de sementes, além de contribuírem para o equilíbrio da cadeia alimentar. Esses animais são utilizados como modelo experimental tanto para o aperfeiçoamento de técnicas reprodutivas, quanto para a formação de bancos de germoplasma. Nesse contexto, o objetivo do presente estudo foi utilizar a manipulação de oócitos inclusos em folículos ovarianos pré-antrais (MOIFOPA) como ferramenta para o resgate e conservação do uso de gametas femininos de cutias (Dasyprocta leporina). A tese foi dividida em dois capítulos experimentais. No primeiro experimento foi analisado o uso do TCM-199 suplementado com diferentes concentrações de pFSH (10 e 50 ng/mL) sobre a morfologia, desenvolvimento e viabilidade de folículos ovarianos pré-antrais (FOPAS) inclusos em tecido ovariano. Em seguida, verificou-se o efeito desse sistema de cultivo in vitro (CIV) sobre os mesmos parâmetros dos FOPAS previamente à vitrificação. Após o cultivo, o grupo FSH50 apresentou maior porcentagem de folículos morfologicamente normais quando comparado ao grupo FSH10 (P < 0,05). Além disso, essa mesma resposta foi observada para os folículos primordiais. Independentemente das concentrações de FSH utilizadas durante o CIV, não foi observada diferença em relação ao percentual de folículos viáveis (P > 0,05). Assim, o grupo FSH50 foi utilizado para experimento posterior, no qual um total de 76,2 ± 7,2% de PAFs normais previamente vitrificados foi observado após a cultivo de 6 dias, apresentando os maiores valores (P < 0,05) para a morfologia dos folículos primordiais (95,2 ± 4,7 %). Contudo, o cultivo manteve a viabilidade dos FOPAS derivados de tecidos criopreservados (P > 0,05). No segundo experimento, os ovários de oito fêmeas foram recuperados e fragmentados, com quatro fragmentos de córtex imediatamente fixados e avaliados (grupo fresco). Os demais fragmentos foram processados pelo método de vitrificação de superfície sólida (SSV) ou ovarian tissue cryosystem (OTC) usando soro fetal bovino (SFB), etilenoglicol (EG) e sacarose (SAC) como crioprotetores, armazenados por duas semanas a -196 ºC e aquecidos. Posteriormente, os fragmentos foram submetidos a um cultivo in vitro de 24 h e avaliados quanto à carga microbiológica, morfologia dos FOPAS e integridade do DNA. Não houve contaminação fúngica; entretanto, as amostras vitrificadas de dois indivíduos apresentaram contaminação bacteriana de 79.200 unidades formadoras de colônias por mililitro (UFC) / mL para SSV e 3.120 UFC / mL para OTC. Em relação à morfologia dos FOPAS, ambos os sistemas proporcionaram preservação adequada da morfologia, com valores superiores a 70% dos folículos normais observados antes e após a cultivo. O TUNEL revelou que tanto a SSV (52,39%) quanto o OTC (41,67%) podem preservar a integridade do DNA após a vitrificação e após 24 h de cultivo. Para a proliferação celular, baixas taxas foram detectadas para amostras frescas (11,53%) e SSV (29,87%); contudo, nenhuma evidência de proliferação foi encontrada quando OTC foi usado. Assim, o uso da MOIFOPA em cutias permitiu a conservação através da vitrificação em superfície sólida e utilizando o sistema OTC, bem como apresentou resultados promissores para o cultivo in vitro de FOPAS inclusos em tecido ovariano previamente vitrificados The agouti are wild mammals that have important ecological functions for being seed dispersers, in addition to contributing to the balance of the food chain. These animals are used as an experimental model both for the improvement of reproductive techniques and for the formation of germplasm banks. In this context, the aim of the present study was to use the manipulation of oocytes included in preantral ovarian follicles (MOIFOPA) as a tool for the rescue and conservation of the use of female agouti gametes (Dasyprocta leporina). The thesis was divided into two experimental chapters. In the first experiment, the use of TCM-199 supplemented with different concentrations of pFSH (10 and 50 ng/mL) was analyzed on the morphology, development and viability of preantral ovarian follicles (PAFs) included in ovarian tissue. Then, the effect of this in vitro culture system (IVC) on the same PAFs parameters prior to vitrification was verified. After cultivation, the FSH50 group had a higher percentage of morphologically normal follicles when compared to the FSH10 group (P < 0.05). Furthermore, this same response was observed for primordial follicles. Regardless of the FSH concentrations used during the IVC, no difference was observed in relation to the percentage of viable follicles (P > 0.05). Thus, the FSH50 group was used for a further experiment, in which a total of 76.2 ± 7.2% of previously vitrified normal PAFs was observed after 6 days of cultivation, with the highest values (P < 0.05) for the morphology of the primordial follicles (95.2 ± 4.7%). However, the culture maintained the viability of FOPAS derived from cryopreserved tissues (P > 0.05). In the second experiment, the ovaries of eight females were retrieved and fragmented, with four cortex fragments immediately fixed and evaluated (fresh group). The remaining fragments were processed by the solid surface vitrification (SSV) or ovarian tissue cryosystem (OTC) method using fetal bovine serum (SFB), ethylene glycol (EG) and sucrose (SAC) as cryoprotectants, stored for two weeks at -196 ºC and heated. Afterwards, the fragments were submitted to an in vitro culture for 24 h and evaluated for microbiological load, PAFs morphology and DNA integrity. There was no fungal contamination; however, vitrified samples from two individuals showed bacterial contamination of 79,200 colony-forming units per milliliter (CFU) / mL for SSV and 3.120 CFU / mL for OTC. Regarding the morphology of PAFs, both systems provided adequate preservation of morphology, with values above 70% of normal follicles observed before and after cultivation. TUNEL revealed that both SSV (52.39%) and OTC (41.67%) can preserve DNA integrity after vitrification and after 24 h of culture. For cell proliferation, low rates were detected for fresh samples (11.53%) and SSV (29.87%); however, no evidence of proliferation was found when OTC was used. Thus, the use of manipulation of oocytes included in preantral ovarian follicles in agouti allowed conservation through vitrification on solid surface and using the OTC system, as well as presented promising results for the in vitro culture of PAFs included in previously vitrified ovarian tissue

The term “sempre-viva” denotes plants whose structures retain their natural form and color after being cut and dried. For these reasons, they are commercially valuable for ornamental purposes. However, due to extractive overexploitation of their inflorescences, some of these species are considered endangered. The genus Comanthera includes the sempre-vivas species with greatest economic importance in Brazil. Previous studies have shown that tissue culture is a workable strategy for in vitro propagation and conservation of species of this genus. However, these studies are still incipient. Therefore, the objective of this review is to summarize the findings on the in vitro cultivation of species of the Comanthera genus, to serve as the basis for future research. The text is structured in two main topics: micropropagation and in vitro conservation. Resumo As sempre-vivas são plantas que mantêm o aspecto vivo de suas estruturas mesmo após serem coletadas, e por esta característica são comercializadas como ornamentais de alto valor econômico; contudo, devido à coleta extrativista de suas inflorescências algumas espécies se encontram em perigo de extinção. O gênero Comanthera compreende as sempre-vivas de maior importância econômica para o Brasil. Estudos apontam a cultura de tecidos como estratégia para a propagação e conservação in vitro de espécies deste gênero; entretanto as pesquisas publicadas ainda são incipientes. Diante disso, o objetivo desta revisão foi reunir publicações sobre o cultivo in vitro do gênero Comanthera com o intuito de fundamentar estudos futuros com suas espécies. Para tanto, esta revisão está estruturada em dois tópicos principais: micropropagação e conservação in vitro.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2022-12-23T15:04:34Z No. of bitstreams: 1 Thae Lanne Barbosa Gama Lins.pdf: 5463267 bytes, checksum: 6c6b4dc640d5e323ed2b8ae94d1afc4c (MD5) Made available in DSpace on 2022-12-23T15:04:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Thae Lanne Barbosa Gama Lins.pdf: 5463267 bytes, checksum: 6c6b4dc640d5e323ed2b8ae94d1afc4c (MD5) Previous issue date: 2021-02-26 Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq The aims of this study were to analyze the effects of rutin on the follicular development after in vitro culture of ovine ovarian tissue and against the ovarian toxicity induced by cisplatin or doxorubicin in mice, and to verify the possible involvement of the phosphatidylinositol-3-kinase (PI3K) signaling pathway, and its members such as Protein kinase B (AKT), phosphatase and tension homolog (PTEN) and forkhead box O3a (FOXO3a) in the rutin actions in the ovary of these species. For chapter 1 of this thesis, ovine ovarian fragments were cultured in α-minimum essential medium alone (α-MEM+) or in this medium supplemented with 0.1; 1 or 10 μg/mL rutin (chapter 1) for 7 days. Inhibition of PI3K activity was performed in fragments cultured with LY294002. The following endpoints were analysed: follicle survival, activation and growth of primordial follicles, apoptosis and AKT phosphorylation (p-AKT). The results showed that 1 μg/mL rutin has higher percentage of normal follicles, activation and growth (P

The inoculation of growth-promoting bacteria has already shown benefits in different cultures such as increased biomass production for the growth of roots and stems, greater resistance to water stress conditions and changes in their physiological properties. Plant growth promoting bacteria have stood out for their potential application in plant production, allowing the reduction of the use of fertilizers and pesticides, which is due to the ability to stimulate the growth of plants by biological means by nitrogen fixation and production of phytohormones , such as indole-3-acetic acid (IAA). The aim of this study was to verify the potential for promoting plant growth of 25 wild bacteria from the Agricultural Microbiology Culture Collection at the Federal University of Lavras (CCMA-UFLA) by assessing the capacity for biological nitrogen fixation and IAA production; select growth-promoting bacteria, in addition to evaluating the effect of 3 isolates on seedlings of Musa sp. grown in vitro. The experiment was conducted in a completely randomized design (CRD), containing 3 treatments, plus the control, with 30 explants per treatment. The bacterium CCMA0056 caused the death of all seedlings in vitro. Banana growth is reduced when inoculated with the bacteria Azospirillum brasilense and Enterobacter cloacae. La inoculación de bacterias promotoras del crecimiento ya ha mostrado beneficios en diferentes cultivos como una mayor producción de biomasa para el crecimiento de raíces y tallos, mayor resistencia a las condiciones de estrés hídrico y cambios en sus propiedades fisiológicas. Las bacterias que promueven el crecimiento de las plantas se han destacado por su potencial aplicación en la producción vegetal, permitiendo la reducción del uso de fertilizantes y pesticidas, lo que se debe a la capacidad de estimular el crecimiento de las plantas por medios biológicos mediante la fijación de nitrógeno y producción de fitohormonas, como el ácido indol-3-acético (IAA). El objetivo de este estudio fue verificar el potencial para promover el crecimiento vegetal de 25 bacterias silvestres de la Colección de Cultivos de Microbiología Agrícola de la Universidad Federal de Lavras (CCMA-UFLA) mediante la evaluación de la capacidad de fijación biológica de nitrógeno y producción de IAA; seleccionar bacterias promotoras del crecimiento, además de evaluar el efecto de 3 aislados sobre plántulas de Musa ssp. cultivado in vitro. El experimento se realizó en un diseño completamente aleatorizado (CRD), conteniendo 3 tratamientos, más el control, con 30 explantes por tratamiento. La bacteria CCMA0056 provocó la muerte de todas las plántulas in vitro. El crecimiento del banano se reduce cuando se inocula con las bacterias Azospirillum brasilense y Enterobacter cloacae. A inoculação de bactérias promotoras de crescimento, já mostrou benefícios em diferentes culturas como o aumento da produção de biomassa para o crescimento das raízes e caules, maior resistência às condições de estresse hídrico e mudanças em suas propriedades fisiológicas. Bactérias promotoras de crescimento vegetal têm se destacado por seu potencial de aplicação na produção vegetal, permitindo a redução do uso de fertilizantes e pesticidas, o que se deve à capacidade de estimular o crescimento das plantas por via biológica por fixação de nitrogênio e produção de fitohormônios, como ácido indol-3-acético (IAA). O objetivo deste trabalho foi verificar o potencial de promoção do crescimento vegetal de 25 bactérias silvestres da Coleção de Culturas de Microbiologia Agrícola da Universidade Federal de Lavras (CCMA-UFLA) por meio da avaliação da capacidade de fixação biológica de nitrogênio e produção de IAA; selecionar bactérias promotoras de crescimento, além de avaliar o efeito de 3 isolados em mudas de Musa sp. cultivadas in vitro. O experimento foi conduzido em delineamento inteiramente casualizado (CRD), contendo 3 tratamentos, mais o controle, com 30 explantes por tratamento. A bactéria CCMA0056 ocasionou a morte de todas mudas in vitro. O crescimento das bananeiras é reduzido quando inoculado com as bactérias Azospirillum brasilense e Enterobacter cloacae.

El HLB es la enfermedad más devastadora de los cítricos que se conoce hoy en día. Se asocia a tres especies bacterianas del género Liberibacter: `Candidatus Liberibacter asiaticus´, `Ca. L. africanus´ y `Ca. L. americanus´. Estas bacterias son transmitidas por insectos vectores de la familia Psyllidae, y no se han podido cultivar hasta el momento en el laboratorio, lo que dificulta en gran medida su estudio y control. La prevención de la diseminación de estas tres especies y de su entrada en áreas libres de la enfermedad, como el continente europeo y, en particular, la cuenca mediterránea, requiere el uso de técnicas de detección específicas y sensibles.

Las especies del género Thymus L. (Lamiaceae) presentan un gran interés como plantas medicinales, condimentarías y de extractos, con múltiples aplicaciones actuales y potenciales debido a la alta riqueza en metabolitos secundarios bioactivos que producen. Concretamente, especies como Thymus piperella L., prácticamente endémica de la Comunidad Valenciana, tienen un amplio abanico de usos tradicionales en este sentido. Aunque se ha estudiado la micropropagación de esta especie y se conoce la composición en compuestos volátiles en tres quimiotipos silvestres descritos dentro de su área de distribución, todavía no se ha estudiado si las condiciones de cultivo in vitro pueden afectar a la producción de estos metabolitos en esta especie o en sus híbridos comerciales de uso tradicional. Por ello, el principal objetivo de este trabajo fue desarrollar un protocolo de micropropagación de un híbrido comercial de uso popular de Th. piperella. Los resultados obtenidos mostraron una buena capacidad de adaptación e inicio del cultivo in vitro tras los dos tratamientos de esterilización aplicados. Además, los distintos parámetros de desarrollo vegetal medidos en la fase de multiplicación mostraron valores significativamente mayores en medio Murashige y Skoog (MS) suplementado con 0,013 mg/l de 2-isopenteniladenina (2iP), o sin reguladores del crecimiento, y 30 g/l de sacarosa y solidificado con 5,5 g/l de Plant Agar tras compararlos con los otros tratamientos. Finalmente, la prueba realizada acerca del contenido en compuestos volátiles mediante SPME-GC/MS-HS reveló que se produjo un aumento destacable de timol en las plantas cultivadas in vitro en comparación con las muestras procedentes de planta silvestre. Por todo ello, los resultados obtenidos en el presente trabajo podrían suponer la base para el desarrollo de futuros estudios acerca de la elicitación de este compuesto mediante sistemas de cultivo in vitro con material vegetal de Th. piperella o de sus híbridos comerciales. Species of the genus Thymus L. (Lamiaceae) are of great interest as medicinal plants, seasoning and extracts with multiple current and potential applications due to the high richness of the bioactive secondary metabolites they produce. Specifically, species such as Th. piperella L., practically endemic to the Valencian Community, have a wide range of traditional uses in this sense. Although the micropropagation of this species has been studied and the composition of volatile compounds in three chemotypes described within its distribution area is known, it has not yet been studied how in vitro culture conditions can affect the production of these metabolites in Th. piperella or in its commercial hybrids of traditional use. Therefore, the main objective of this work was to develop a micropropagation protocol of a popularly used commercial hybrid of Th. piperella. The results obtained showed a good capacity of adaptation and initiation of in vitro culture after the two sterilization treatments applied. In addition, the different plant development parameters measured in the multiplication phase showed significantly higher values in Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with 0.013 mg/l 2-isopentenyladenine (2iP), or without plant growth regulators, plus 30 g/l sucrose and solidified with 5.5 g/l Plant Agar when compared to the other treatments. Finally, the test performed on the content of volatile compounds by SPME-GC/MS-HS revealed that there was a remarkable increase of thymol in the in vitro cultivated plants compared to the samples from wild plant. Therefore, the results obtained in the present work could be the basis for the development of future studies on the elicitation of this compound by in vitro culture systems with plant material of Th. piperella or its commercial hybrids. Biotecnología

Fil: Zahner, Marisa. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias; Argentina. Fil: Medina, Ricardo Daniel. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias; Argentina. Fil: Dolce, Natalia Raquel. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias; Argentina. La mandioca (Manihot esculenta Crantz, Euphorbiaceae) es un arbusto cultivado principalmente por la producción de raíces tuberosas amiláceas. Su propagación tradicional se realiza a través de estacas de tallos, la cual es sencilla, pero conlleva algunos inconvenientes. La propagación in vitro de mandioca ha permitido mejorar la tasa de multiplicación, sin embargo, hasta el momento, las metodologías puestas a punto son eficientes en algunos genotipos. El objetivo de esta tesis fue determinar las condiciones óptimas necesarias para la propagación in vitro de mandioca, utilizando la vía de regeneración organogénica directa por inducción de múltiples vástagos (MV), aplicable a 10 cultivares de interés para la agricultura del Nordeste argentino. Para ello, se planteó evaluar el efecto de diferentes factores que afectan la propagación in vitro mediante la promoción de la regeneración de MV. En primer lugar, se evaluó el efecto de los medios de cultivo adicionados con citocininas (BAP, CIN y TDZ), en 5 dosis (0,5, 1, 5, 10 y 15 mg/L), y 2 controles (MS y MS + 0,01 mg/L BAP + 0,01 mg/L ANA + 0,1 mg/L AG3 empleado de rutina en micropropagación de mandioca) sobre la inducción de MV. En el Experimento 1 se demostró que los medios adicionados con 0,5 o 1 mg/L de BAP o bien 5 o 10 mg/L de CIN, fueron los que permitieron que el 100% de los cultivares evaluados respondan positivamente. Además se estudió la capacidad de enraizamiento de los vástagos derivados de MV y la calidad de las plantas regeneradas en términos de peso seco. En el Experimento 2 se observó que, los medios adicionados con BAP (0,5 y 1 mg/L) fueron los que manifestaron las mejores respuestas de regeneración de MV. El tiempo de inducción mínimo favorable resultó ser de 20 días, aunque persistieron las diferencias genotípicas en la regeneración de MV. La interacción entre el cultivar, los medios de cultivo y el tiempo de exposición a las citocininas sobre la longitud de vástagos derivados de MV, demostró que hubieron cultivares que formaban los vástagos más altos (cv. Surubím y MCol 1505), otros los más bajos (cvs. Ramada Paso y Santa Catarina) y un tercer grupo que presentaba variaciones con una tendencia al aumento de la longitud cuando el medio se encontraba suplementado con las concentraciones más bajas de citocininas y tiempos de inducción más cortos. En el Experimento 3, se analizó el efecto de 3 medios de cultivo destacados (i.e. MS + 0,5 mg/L de BAP; MS + 1 mg/L de BAP y MS + 10 mg/L de CIN) y distintas condiciones lumínicas (i.e. tratamientos con luz blanca, luz azul, luz roja y oscuridad) sobre la diferenciación de MV, la producción de nudos por explante y la elongación de los vástagos derivados de MV. El medio con BAP promovió una mayor diferenciación de MV y producción de nudos, favoreciendo su elongación, en particular, cuando se empleó una concentración de 0,5 mg/L. Cuando los explantes fueron sometidos a luz blanca, azul o roja no se observaron variaciones significativas en la diferenciación de MV, sin embargo, fue deprimida en oscuridad así como la producción de nudos. La incubación en luz blanca o azul ejerció efectos similares sobre la producción de nudos. Será necesario entonces seguir explorando otras alternativas para optimizar la elongación, sin perjuicio de la eficiencia de la propagación. A partir de los resultados obtenidos en esta tesis, se sugiere un protocolo de multiplicación in vitro de mandioca vía múltiples vástagos aplicable a genotipos diferentes de mandioca. Cassava (Manihot esculenta Crantz, Euphorbiaceae) is a shrub cultivated mainly for the production of starchy tuberous roots. It is traditionally propagated through stem cuttings, which is a simple method, but has some inconvenient. The in vitro propagation of cassava has made possible to improve the multiplication rate, however, until now the methodologies developed are efficient only for a few genotypes. The aim of this thesis was to determine the optimal conditions for the in vitro propagation of cassava, through direct shoot organogenesis by induction of multiple shoots (MV), applicable to 10 cultivars of interest for the agriculture of Northeast Argentina. For this, it was proposed to evaluate the effect of different factors that affect in vitro propagation by promoting MV regeneration. First, were evaluated the effect of the culture media added with cytokinins (BAP, CIN and TDZ), in 5 doses (0.5, 1, 5, 10 and 15 mg/L), and 2 controls (MS and MS + 0.01 mg/L BAP + 0.01 mg/L ANA + 0.1 mg/L AG3 frequently used in cassava micropropagation) on the induction of MV regeneration. Results from Experiment 1 showed that the media added with a cytokinin, either 0.5 or 1 mg/L of BAP or 5 or 10 mg/L of CIN, were those that allowed to 100% of the evaluated cultivars respond positively. The rooting capacity of the shoots derived from MV and the quality of the regenerated plants in terms of dry weight were also studied. In Experiment 2 it was observed that the media added with BAP (0.5 and 1 mg/L) were those demonstrated the best MV regeneration responses. The minimum favorable induction time was 20 days, although genotypic differences in MV regeneration persisted. The interaction between the cultivar, the culture media and the time of exposure to cytokinins on the length of shoots derived from MV, showed that some cultivars formed the highest shoots (cv. Surubím and MCol 1505), others the lowest (cvs. Ramada Paso and Santa Catarina), and a third group that presented variations with a tendency to increase in length when the medium was supplemented with the lowest concentrations of cytokinins and shorter induction times. In Experiment 3, the effect of the best MV induction culture media (i.e. MS + 0.5 mg/L BAP; MS + 1 mg/L BAP and MS + 10 mg/L CIN), combined with different light conditions (i.e. treatments with white, blue and red light, and darkness) on the differentiation of MV, the production of nodes by explant and the elongation of the stem derived from MV were analyzed. Medium with BAP promoted a greater differentiation of MV and production of nodes, favoring their elongation, in particular, when a concentration of 0.5 mg/L was added. When the explants were subjected to white, blue or red light, no significant variations were observed in the differentiation of MV; however it was depressed in the dark as well as the production of nodes. Incubation in white or blue light had similar effects on nodes production. Thus, it will be necessary to continue exploring other alternatives to optimize elongation, without prejudice to the propagation efficiency. Based on the results obtained in this thesis, an in vitro multiplication protocol for cassava via multiple shoots applicable to different genotypes is suggested.

El informe elaborado, en la década de los 60, por expertos del Banco Internacional de Reconstrucción y Fomento (BIRF) sobre la investigación agraria en nuestro país, puso de manifiesto la existencia de graves deficiencias. La firma del convenio INIA-BIRF permitió abordar la modernización de las infraestructuras, así como la formación de personal investigador en distintas especialidades, incluida la de cultivo in vitro (Navarro, L. y Tortosa, E. 2007. Arbor, Ciencia, Pensamiento y Cultura, Vol. CLXXXIII, 727, 655-668). A continuación, se explica la evolución de los trabajos in vitro en tres especies de interés hortofrutícola, fresa, olivo y aguacate, para su uso en mejora (véanse Ric-Varas etal. La fresa, pp. 418-439; Rugini et al. El olivo, pp. 343-376; Pliego-Alfaro et al. El aguacate, pp. 258-281, en: Biotechnology of Fruit and Nut Crops, 2020, 2nd Edition, R.E. Litz, F. Pliego-Alfaro and J.I. Hormaza, eds., CABI International, Wallingford). En fresa, mediante la transformación vía A. tumefaciens, se ha avanzado en el conocimiento de los genes implicados en el reblandecimiento del fruto mientras que la regeneración de plantas a partir de protoplastos permite abordar con optimismo nuevos retos en la edición genética. En olivo, la disponibilidad de técnicas eficientes de regeneración mediante embriogénesis somática junto a la transformación vía A. tumefaciens, está permitiendo profundizar en las bases moleculares de la resistencia a patógenos fúngicos, inducción floral y contenido en volátiles. En aguacate, la técnica de micropropagación solo se ha usado con éxito en algunos genotipos tolerantes a R. necatrix, en el programa de mejora del IFAPA-Málaga. Por otra parte, las tecnologías de regeneración y transformación disponibles necesitan ser optimizadas para su uso en material adulto. Universidad de Málaga. Campus de Excelencia Internacional Andalucía Tech.

Universidad Nacional Agraria La Molina. Escuela de Posgrado. Maestría en Mejoramiento Genético de Plantas El espárrago es una especie de importancia mundial y38 Perú es uno de los países con mejor producción. Esta alta producción de espárragos ha 38obligado a los fitomejoradores a investigar nuevas alternativas para tener cultivares de espárragos con alto rendimiento y de forma rápida. Por consiguiente, las investigaciones se orientan a la producción de cultivares masculinos de espárragos utilizando el cultivo de anteras ya que, esta técnica facilita la selección de genotipos y reduce el tiempo de selección de un cultivar. Por ello, el objetivo de este trabajo es evaluar el comportamiento de las anteras de tres cultivares de espárrago (ATLAS, IDA LEA y UC 157 F1) en condiciones in vitro hasta la obtención de plantas. Esta investigación se realizó en el laboratorio de biotecnología de los PIP en cereales y granos andinos en 2013. Se desarrolló el protocolo de cultivo de anteras de tres cultivares de espárragos (ATLAS, IDA LEA y UC 157 F1) obteniendo lo siguiente: (1) El estado de la antera más adecuado fue cuando el botón floral tiene entre 1.5 mm y 2 mm para los tres cultivares. (2) En los tres cultivares, el azúcar causó la oxidación de las anteras, pero incentivó la formación de callos (respuesta androgénica), junto con la concentración de la hormona ANA y la relación ANA/BAP. (3) Solo, el cultivar UC 157 F1 produjo callo blanco en el medio de inducción MS suplementado con ANA (2 mg/l), BAP (1 mg/l) y 5% de sacarosa y produjo 15 embriones y dos plantas por callo en promedio con el medio de regeneración MS suplementado con 0.3 gr/l de ANA, 0.2 mg/l de BAP y 3% de sacarosa. Estos resultados revelan que la disminución de la concentración de ANA, BAP y sacarosa promueve la regeneración de las plantas en las anteras de espárragos. Asparagus is a species of world importance and Peru is one of the countries with the best production. This high production of asparagus has forced plant breeders to investigate new alternatives to have asparagus cultivars with high yields and quickly. Therefore, research is oriented to the production of male asparagus cultivars using anther culture, since this technique facilitates the selection of genotypes and reduces the time of selection of a cultivar. Therefore, the objective of this work is to evaluate the behavior of the anthers of three asparagus cultivars (ATLAS, IDA LEA and UC 157 F1) under in vitro conditions until obtaining plants. This research realized in the biotechnology laboratory of the PIPs in Cereal and Grain Andean in 2013. The anther culture protocol of three asparagus cultivars was developed (ATLAS, IDA LEA, and UC 157 F1) obtaining the following: (1) The anther state more adequate was when the floral button has between 1.5mm y 2mm to the three cultivars. (2) In the three cultivars, the sugar caused the anther oxidation but incentivized the callus formation (androgenic response), together with the ANA hormone concentration and the ANA/BAP relationship. (3) Only, The UC 157 F1 cultivar produced white callus in the MS induction medium supplemented with ANA (2mg/l), BAP (1 mg/l), and 5% of saccharose and produced 15 embryos and two plants by callus in average with the MS regeneration medium supplemented with 0.3 mg/l de ANA, 0.2 mg/l de BAP and 3% de saccharose. These results reveal that the decrease of ANA, BAP, and saccharose concentration, promote the regeneration of the plants in the asparagus anthers.

El cultivo de tejidos vegetales in vitro puede inducir alteraciones en las células, lo que se conoce como variación somaclonal (Larkin y Scowcroft, 1981, TAG, 60, 197-214). Estas alteraciones pueden ser útiles como fuente de variabilidad, pero pueden ser un problema si se quiere mantener la estabilidad genética. Factores como el genotipo, tipo de explanto, sistema de regeneración, tiempo y frecuencia de cultivo, así como el uso de reguladores de crecimiento, pueden afectar a este fenómeno. La estabilidad genética debe ser asegurada lo antes posible, para ello se dispone de marcadores tanto morfológicos, para la detección de variación de características fenotípicas, como moleculares, siendo los más utilizados los Simple Sequence Repeat (SSR) y Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD). El objetivo de este trabajo fue el estudio de la estabilidad genética de material obtenido vía embriogénesis somática (ES), a partir del cultivo de radícula de embriones zigóticos maduros de la variedad Picual de olivo (Olea europaea), así como por proliferación de brotes axilares, mediante el cultivo del ápice del mismo embrión, usando marcadores RAPDs. La inducción de callo se realizó en medio OMc suplementado con 25 µM IBA - 2.5 µM 2ip. A las 3 semanas, el callo se transfirió al mismo medio pero conteniendo 2.5 µM IBA y sin 2ip. Posteriormente, se cultivó en medio de embriogénesis cíclica de olivo (ECO) conteniendo 0.25 µM IBA, 0.5 µM 2ip - 0.44 µM BA (Pérez-Barranco et al., 2009, PCTOC, 97, 243-251) y suplementado con 200 mg/L de cefotaxima. El callo embriogénico se mantuvo en este medio, con subcultivos cada 4 semanas. Los ápices se cultivaron en medio de germinación (Clavero-Ramírez y Pliego-Alfaro, 1990, Actas de Horticultura, 1, 512-516) durante 12 semanas y los brotes obtenidos se mantuvieron en medio RP suplementado con 2 mg/L de ribósido de zeatina (Vidoy-Mercado et al., 2012, Acta Horticulturae 949, 27-30). Proyecto UMA18-FEDERJA-096 Universidad de Málaga. Campus de Excelencia Internacional Andalucía Tech

Myracrodruon urundeuva Fr. All. is a tree threatened with extinction, which has wood and medicinal potential. This study aimed to analyze the in vitro shoot regeneration in M. urundeuva, in order to increase the species multiplication. Two experiments were conducted: 1) concentrations of 6-benzylaminopurine (BAP) (0.0, 2.0, 4.0, 8.0 and 16.0 µM), in association with naphthaleneacetic acid (NAA) (0.0, 1.5 and 3.0 µM), in explants (cotyledon, hypocotyl and cotyledonary node); 2) concentrations of meta-topolin (mT) (0.0, 2.0, 4.0, 8.0, 16.0 and 32.0 µM) in explants (biaxillary, medial uniaxillary and apical basal nodal segment). The percentage of explants responsive to shoot regeneration, percentage of callus explants, number of shoots and shoot length were evaluated. In the first experiment, the shoot regeneration occurred only in explants of the cotyledonary node and hypocotyl type, with the highest responsiveness percentage (76.67 %) and number of shoots (1.97 and 1.63) obtained for the cotyledonary node in the presence of 3.0 µM of NAA in association with 2.0 (1.97 shoots/explant) and 4.0 µM (1.63 shoots/explant) of mT. In the second experiment, the resolution of the obtained quadratic equation indicates that the use of basal explant with 24.59 µM of mT added to the culture medium leads to the highest number of shoots (1.86). However, despite the mT having increased the mean number of shoots, all treatments containing this cytokinin showed callus formation. As a conclusion, it is possible to regenerate shoots in M. urundeuva from the cotyledonary node using BAP in association with NAA. RESUMO Myracrodruon urundeuva Fr. All. é uma árvore ameaçada de extinção, que possui potencial madeireiro e medicinal. Objetivou-se estudar a regeneração de brotos in vitro de M. urundeuva, visando aumentar a porcentagem de multiplicação da espécie. Foram realizados dois experimentos: 1) concentrações de 6-benzilaminopurina (BAP) (0,0; 2,0; 4,0; 8,0; e 16,0 µM), combinadas com ácido naftalenoacético (ANA) (0,0; 1,5; e 3,0 µM) em explantes (cotilédone, hipocótilo e nó cotiledonar); 2) concentrações de meta-topolina (mT) (0,0; 2,0; 4,0; 8,0; 16,0; e 32,0 µM) sob explantes (segmento nodal basal biaxilar, mediano uniaxilar e apical). Avaliaram-se a porcentagem de explantes responsivos para regeneração de brotações, porcentagem de explantes que formaram calos, número de brotos e comprimento da parte aérea. No primeiro experimento, observou-se regeneração de brotações apenas nos explantes do tipo nó cotiledonar e hipocótilo, sendo a maior porcentagem (76,67 %) de responsividade e número de brotos (1,97 e 1,63) obtidos com o nó cotiledonar na presença de 3,0 µM de ANA, combinado com 2,0 (1,97 brotos/explante) e 4,0 µM (1,63 brotos/explante) de mT. No segundo experimento, a resolução da equação quadrática obtida indica que o maior número de brotos (1,86) é alcançado utilizando-se o explante basal com 24,59 µM de mT adicionado ao meio de cultura. No entanto, apesar de a mT ter elevado o número médio de brotações, observou-se formação de calos em todos os tratamentos contendo essa citocinina. Conclui-se que é possível regenerar brotações em M. urundeuva a partir do nó cotiledonar com o uso de BAP combinado com ANA.

La fresa cultivada, Fragaria × ananassa Duch., es una especie octoploide procedente de un híbrido interespecífico entre las especies silvestres F. virginiana Duch. y F. chiloensis L. Los cruces intraespecíficos de F × ananassa se utilizan extensivamente para la obtención de nuevos cultivares con características agronómicas mejoradas. A pesar de esto, esta especie muestra una alta susceptibilidad a patógenos fúngicos y bacterianos y una baja tolerancia a estreses abióticos. Especies silvestres de menor ploidía, e.g. F. vesca (2x), pueden ser una fuente genética de gran valor para la mejora de esos caracteres en la fresa cultivada, pero las diferencias en ploidía representan una barrera reproductiva para los cruzamientos interespecíficos. La duplicación del número de cromosomas mediante tratamientos con colchicina de meristemos procedentes de estolones se ha utilizado para facilitar la hibridación interespecífica entre fresas diploides y comerciales. En este trabajo, se ha puesto a punto la metodología para la obtención de poliploides en fresa mediante la aplicación de colchicina durante la regeneración de brotes in vitro. Esta investigación ha sido financiada por los fondos FEDER EU y el Ministerio de Economía y Competitividad de España (AGL2017-86531-C2-1-R)

Los sistemas basados en tubos fluorescentes de tipo Grolux tienen una capacidad de configuración muy escasa aparte de la mera selección del número de lámparas, su potencia eléctrica y la distancia de separación con las plantas para conseguir los niveles de radiación que se desean obtener. Contrariamente, las lámparas y luminarias LEDs, ofrecen un amplio abanico de parámetros que deben ser caracterizados para poder homogeneizar, estandarizar y contextualizar adecuadamente los experimentos y procesos desarrollados en estas instalaciones. En este trabajo se describen y analizan los parámetros de diseño más relevantes a tener en cuenta en instalaciones de iluminación artificial LED para su uso en cultivo in vitro de plantas:  Cantidad de energía radiada incidente en las plantas.  Caracterización del espectro de emisión generado.  Identificación de emisión lumínica de flujo constante o pulsante.  Uniformidad de los niveles de radiación incidente en los distintos puntos de las superficies de trabajo.  Calor generado por el equipo de iluminación, en el ambiente de cultivo. Universidad de Málaga. Campus de Excelencia Internacional Andalucía Tech.

La mejora genética del olivo (Olea europaea) es crucial para satisfacer la creciente demanda de aceite de oliva a nivel mundial. El objetivo de esta investigación ha sido la inducción de poliploidía en callo embriogénico, para la obtención de plantas tetraploides con características agronómicas deseables, tales como mayor plasticidad frente a estrés y/o vigor reducido. Para ello se utilizaron embriones somáticos globulares con un tamaño de 1-2 mm procedentes de la línea P1, obtenidos de la radícula de un embrión zigótico maduro del cv. Picual. Se expusieron 0,5 g de material embriogénico a 0,1 % de colchicina durante 2, 3 y 6 días; posteriormente, los embriones somáticos se cultivaron en medio de embriogénesis cíclica de olivo (ECO) para inducir proliferación. Tras 5 meses de cultivo, se procedió al análisis de ploidía en el citómetro de flujo (PA-II Ploidy Analyzer; Partec), obteniéndose un 2,8 % (5 líneas) de tetraploides para las líneas expuestas durante 2 días, 9,3 % (11 líneas) para las de 3 días y 12,5 % (2 líneas) para las de 6 días. A los 3 meses se realizó otro análisis de ploidía en el material tetraploide obtenido para comprobar su estabilidad en el tiempo. Para ello se dividieron los callos embriogénicos en secciones, obteniéndose un total de 10 líneas tetraploides y 4 líneas mixtas (con secciones tetraploides y diploides en la misma línea), manteniéndose el número inicial de líneas tetraploides excepto para las de 3 días que fueron cuatro donde todas las secciones resultaron diploides. Posteriormente, se procedió a la maduración y germinación de las líneas embriogénicas obtenidas. El porcentaje de maduración fluctuó entre 8 y 22 % en las líneas tetraploides, mientras que en las mixtas fue entre 8 y 17 %, respecto a los valores de las líneas control diploides (18-27 %). La germinación para las líneas tetraploides fue del 8 %, mientras que en las mixtas fue superior al valor del control (13 %). P18-RT-1993 Universidad de Málaga. Campus de Excelencia Internacional Andalucía Tech

La presente investigación tuvo como objetivo conservar el pepino dulce (Solanum muricatum Aiton) ecotipo morado, usando la técnica de cultivo in vitro de tejidos vegetales, para lo cual se colectó el material vegetal en el distrito de Pachía en el sector de Peligro y se instaló una parcela en el centro experimental agrícola “La agronómica” – UNJBG, para obtener material vegetal para su caracterización morfológica y para realizar el cultivo in vitro. Los resultados obtenidos en la caracterización morfológica mediante el uso de los descriptores del IPGRI indican que las variables cualitativas para el tallo, hojas, flores y frutos no presentan diferencias significativas. Con respecto al cultivo in vitro se consiguió elaborar un protocolo con los medios de cultivo óptimo para todas las etapas de la micropropación in vitro, en la etapa establecimiento y de multiplicación in vitro de Solanum muricatum Aiton, ecotipo morado el medio de cultivo que obtuvo mejores resultados para las variables evaluadas a los 30 y 45 días, corresponde al T1, el cual es MS + 0,0 mg/L BAP, siendo el peor tratamiento el T4 (2,0 mg/L BAP) para ambas etapas. Sin embargo, en la etapa de enraizamiento el mejor tratamiento fue el T4 con 2,0 mg /L AIB; el peor fue el T1 (control), en la etapa de aclimatación el sustrato que mejor resultado fue la turba logrando un 91,79% de plántulas aclimatadas. Asimismo, en la etapa de conservación in vitro, mediante la técnica de los crecimientos mínimos se logró reducir el tiempo de subcultivos para Solanum muricatum Aiton, ecotipo morado, el medio de cultivo óptimo corresponde al T4: MS suplementado con 60 g Sorbitol/L de esta manera se logró establecer un banco de germoplasma in vitro de Solanum muricatum Aiton, ecotipo morado. Por lo tanto, se concluye que, si es posible conservar Solanum muricatum Aiton, ecotipo morado utilizando la técnica del cultivo in vitro. Tesis

El zinc (Zn+2) cumple funciones en innumerables procesos celulares. Sin embargo, el conocimiento acerca de su homeostasis en la célula (en particular, en el sistema reproductor bovino) es aún limitado. En este contexto, se estudió la influencia de las hormonas folículo estimulante, luteinizante, estradiol y progesterona (según correspondiera) sobre la expresión de los transportadores de Zn+2 y la concentración intracelular del mineral en i) el complejo ovocito-cúmulus (COC) bovino y ii) las células epiteliales del oviducto bovino (CEOB). Luego, se evaluó la expresión de dichos transportadores según la fase del ciclo estral en los COC y las CEOB, y, además, el efecto del Zn+2 y el estradiol sobre el proteoma de las CEOB. Para ello, se realizaron maduraciones in vitro de COC y cultivos in vitro de CEOB obtenidos a partir de hembras de frigorífico. La concentración intracelular de Zn+2 se determinó por medio del colorante FluoZin-3, la expresión y cuantificación de los transportadores por PCR en Tiempo Real (PCR-RT), y el análisis proteómico por espectrometría de masas (nano LC- MS/MS) y análisis funcionales. Las investigaciones permitieron comprobar la expresión génica de transportadores de Zn+2 en los COC y las CEOB, y señalaron que las hormonas estudiadas participarían activamente en la regulación intracelular del Zn+2 en dichas células. Además, se detectó interacción entre las hormonas y el Zn+2 en la mayoría de los casos al evaluar el nivel intracelular de Zn+2 y la expresión génica de sus transportadores. En el COC y las CEOB, los transportadores cuantificados tuvieron diferencias en su expresión de ARNm entre las fases luteal y folicular del ciclo estral. 2 La exposición de las CEOB al Zn+2 en presencia de E2 provocó cambios en la abundancia de proteínas involucradas en involucradas en la remodelación del epitelio oviductal y la proteostasis, entre otros procesos., Zinc (Zn2+ ) is involved in a myriad of cellular functions. However, knowledge about Zn2+ homeostasis in the cell (particularly, in the bovine reproductive system) is still scarce. In this context, follicle-stimulating and luteinizing hormones, as well as estradiol and progesterone (where appropriate) were analyzed on how they may influence Zn2+ transporters gene expression and intracellular Zn2+ levels in i) the oocyte-cumulus complex (OCC) and ii) the bovine oviductal epithelial cells (BOEC). Subsequently, Zn2+ transporters gene expression in different estral cycle phases (luteal or follicular) was assessed in both OCC and BOEC. Furthermore, a proteomic study on how estradiol and Zn2+ impact the BOEC proteome was performed. For these purposes, in vitro maturation of OCC and in vitro culture of BOEC were employed. Zn2+ intracellular concentration was determined using indicator FluoZin-3, gene expresion analyses and cuantification by Real Time PCR (RT-PCR) and the proteomic studies by mass spectrometry (nano LC- MS/MS) and functional analyses. Experiments confirmed the transporters gene expression in OCC and BOEC, and showed that these hormones would actively participate in intracellular Zn2+ regulation. Moreover, Zn2+ -hormone interplay was detected in most FluoZin-3 and RT-PCR results. Transporters whose gene expression was quantified held differences in their mARN levels when comparing the luteal and follicular phases of the estral cycle. Lastly, BOEC exposure to estradiol and Zn2+ during culture led to changes in the abundance of proteins involved in the oviduct epithelia remodeling and proteostasis, among other cell proceses., Facultad de Ciencias Veterinarias

RESUMEN Se investigaron las condiciones esenciales para la micropropagación in vitro de las variedades ecuatorianas de yuca INIAP Portoviejo 650 e INIAP Portoviejo 651. Se plantó un banco de donantes con estacas de plantas vigorosas y sanas. En las etapas in vitro se empleó el medio de Murashige y Skoog (MS). En el establecimiento se adicionó Amoxicilina 500® y se evaluó la supervivencia de los explantes y la contaminación. En la multiplicación se utilizó 0,50 mg L-1 de 6-bencilaminopurina (6-BAP) + 0,30-0,50 mg L-1 de ácido giberélico (GA3) y se evaluó la longitud de las plantas, el diámetro del tallo, el número de brotes y el número de hojas. Para el enraizamiento se empleó 1 mg L-1 de ácido naftalenacético (ANA) + 0,01 mg L-1 de ácido giberélico (GA3), y se evaluó la longitud de las plantas, el diámetro del tallo, el número de raices y la longitud de las raices. En la aclimatación se evaluó la longitud de la planta, el diámetro del tallo, el número de brotes por planta y el número de hojas por planta. Se logró 100% de supervivencia en el establecimiento. En la multiplicación y el enraizamiento se observaron interacciones significativas variedad x medio de cultivo, atribuibles al balance entre las fitohormonas presentes en los tejidos vegetales y los reguladores adicionados al medio. Se alcanzaron altos porcentajes de aclimatación (83-87%). Se logró determinar las condiciones esenciales para micropropagar estas variedades de yuca, y se recomiendan estudios más profundos para estandarizar protocolos con vistas a su multiplicación masiva como via de entrega de propágulos a los agricultores.

The importance of Eucalyptus and Corymbia has been evident in forestry programs, mainly due to their adaptation to various environmental conditions and the multiple products that can be obtained. As the selection and cloning of superior individuals are usually performed in adulthood, the development and adaptation of the vegetative propagation techniques that enable the rescue and in vitro establishment of species are necessary. Thus, the present study aimed to induce epicormic shoots from pruned branches of adult trees and to promote the in vitro establishment of nine species: six of Eucalyptus and three of Corymbia. The material used to obtain the explants came from the selection of two 44-year-old mother plants of each species, from species, and provenance tests. The number of buds and shoots of each branch was evaluated at 15, 25, 35, and 45 days after the beginning of the experiment in a greenhouse. According to the results, the induction of epicormic shoots from pruned branches was considered a viable and efficient technique to obtain propagule sources from adult mother plants of all species, presenting a gradual increase in the evaluated characteristics over time. Also, in vitro culture is an effective alternative to improve the propagation of the evaluated species, with an establishment of up to 62.5%. However, for Corymbia citriodora (Hook.) K.D. Hill & L.A.S Johnson and Eucalyptus tereticornis Smith it is necessary to develop further studies to enable the in vitro establishment. RESUMO A importância de espécies dos gêneros Eucalyptus e Corymbia vem sendo evidenciada nos programas de silvicultura, principalmente pela adaptação em diversas condições ambientais e pelos múltiplos produtos que podem ser obtidos. Como a seleção e a clonagem de indivíduos superiores geralmente são realizadas na fase adulta, o desenvolvimento e a adequação de técnicas de propagação vegetativa que possibilitem o resgate e o estabelecimento in vitro de espécies desses gêneros são necessários. Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo induzir brotos epicórmicos a partir de ramos podados de árvores adultas e promover o estabelecimento in vitro de nove espécies, sendo seis do gênero Eucalyptus e três de Corymbia. O material utilizado para a obtenção dos explantes foi proveniente da seleção de duas matrizes de cada espécie com 44 anos de idade, oriundas da implantação de um teste de espécies e procedências. Foram avaliados o número de gemas e brotos de cada ramo aos 15, 25, 35 e 45 dias após o início do experimento em casa de vegetação. De acordo com os resultados, a indução de brotações epicórmicas a partir de ramos podados foi considerada uma técnica viável e eficiente para obter fontes de propágulos de matrizes adultas de todas as espécies, apresentando um aumento gradual das características avaliadas ao longo do tempo. Além disso, o cultivo in vitro é uma alternativa eficaz para estabelecer propágulos a partir de brotações epicórmicas de árvores adultas da maioria das espécies avaliadas, com estabelecimento de até 62,5%. Contudo, para Corymbia citriodora (Hook.) K.D. Hill & L.A.S Johnson e Eucalyptus tereticornis Smith é necessário o desenvolvimento de mais estudos para viabilizar o estabelecimento in vitro.

Tesis para obtener el grado de Magister Scientiae en Genética Vegetal, de la Universidad Nacional de Rosario, en diciembre de 2020 El mejoramiento genético de caña azúcar se enfrenta a su complejo genoma, la estrecha base genética y la baja fertilidad de los cultivares modernos que dificultan la obtención de genotipos superiores. La mutagénesis in vitro es una herramienta alternativa para generar variabilidad genética, combinando la variación somaclonal generada por el cultivo in vitro y la inducción de mutaciones. Por otro lado, la embriogénesis somática es una excelente vía de regeneración de plantas mutantes, ya que disminuye la frecuencia de aparición de quimeras. En caña de azúcar, la formación de callos embriogénicos y la regeneración de plantas varían según el genotipo. En este trabajo, se estudió la respuesta a la embriogénesis somática de cinco genotipos desarrollados y/o seleccionados por el Programa de Mejoramiento Genético de Caña de azúcar de INTA, con el objetivo de identificar genotipos adecuados para la aplicación de mutagénesis in vitro. Los genotipos mostraron una gran variabilidad en su respuesta a las diferentes etapas de cultivo in vitro. Cuatro de los genotipos de INTA formaron callos embriogénicos y regeneraron plantas con alta capacidad de aclimatación y supervivencia en el campo. El cultivar INTA CP 98-828 mostró la mejor respuesta y fue seleccionado para los tratamientos mutagénicos. La optimización de la dosis de mutágeno adecuada es un paso fundamental en la mutagénesis in vitro. En este estudio, se expusieron callos embriogénicos del genotipo INTA CP 98-828 a diferentes dosis (0, 8, 16, 32 y 48 mM) de etil metanosulfonato (EMS) durante 3 h para inducir variación genética. Los resultados mostraron diferencias significativas en la capacidad de recuperación, la sensibilidad de los callos al mutágeno y la capacidad de regeneración entre las dosis de EMS evaluadas. Las concentraciones de EMS ≤ 32 mM fueron adecuadas para regenerar un número óptimo de plantas normales en el cv. INTA CP 98-828, encontrándose por debajo de las DL50 determinadas para la regeneración de plantas y recuperación de callos embriogénicos. Las cuatro poblaciones (0, 8, 16 y 32) de somaclones y/o plantas mutantes obtenidas se evaluaron fenotípicamente a campo, para una exploración preliminar de la variación genética generada mediante el cultivo in vitro y/o la aplicación de EMS. Los resultados demostraron que la dosis 32 mM presentó mayor variabilidad genética entre las dosis de EMS, con valores medios a altos de heredabilidad en sentido amplio, sin un efecto en detrimento de los caracteres culturales y de calidad evaluados, incluso con incrementos de la media poblacional respecto al genotipo wild type en algunos atributos. Estos resultados presentan la posibilidad de aprovechar este enfoque para introducir nuevas variantes genéticas en el Programa de Mejoramiento Genético de Caña de azúcar de INTA. The sugarcane genome complexity, the narrow genetic base and poor fertility are limitations for conventional breeding. In vitro mutagenesis is an alternative tool to generate variability involving both somaclonal variation and inducted mutations. Furthermore, somatic embryogenesis offers an efficient way for avoiding chimera occurrence but it is highly genotype-dependent. In this study, somatic embryogenesis response of five INTA genotypes was investigated in order to achieve an efficient in vitro mutagenesis. Four out of five INTA genotypes were able to form embryogenic calluses and regenerated plants. The cv. INTA CP 98-828 showed the best in vitro response and it was selected for mutagen treatments. Embryogenic calluses were exposed to different doses of EMS to induce genetic variation. EMS concentrations ≤ 32 mM were suitable to regenerate an optimum number of plants. Four somaclonal-mutant plants populations were phenotypically evaluated in the field for a preliminary assessment of genetic variation generated by in vitro mutagenesis. Field assessments evidenced that the 32 mM EMS dose showed the highest genetic variability without a detrimental effect on agronomic and quality traits. These results show the prospect of exploiting this approach in INTA Sugarcane Breeding Program. EEA Famaillá Fil: Di Pauli, Valentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Famaillá; Argentina