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We evaluated the effect of reducing free calcium in the cryopreservation medium, using the calcium chelator ethylene diamine tetracetic acid (EDTA) at 0.3% and 0.5% concentrations. Three male mixed breed dogs were subjected to semen collection by digital manipulation (n=16). Each ejaculate was divided in three aliquots, and each one was diluted in TRIS-glucose-egg yolk extender with 6% glycerol and 0.5% Equex STM Paste® (TGE, control); and added with 0.3% EDTA (EDTA 0.3) or 0.5% EDTA (EDTA 0.5). Calcium concentration reduced in EDTA 0.3 and all the calcium ions were chelated in EDTA 0.5. The EDTA addition did not affect sperm morphology or plasma membrane integrity; however, by removing all free calcium (EDTA 0.5), the sperm motility reduced (64.7% in TGE and 45% in EDTA 0.5; p

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Os experimentos descritos no presente trabalho foram realizados com o objetivo geral de avaliar se a adição dos antioxidantes ácido ascórbico (AA) e ditiotreitol (DTT), ou o inibidor da caspase-3 (z-DEVD-fmk), durante a criopreservação podem melhorar o criotolerância de embriões bovinos produzidos in vitro. Foram realizados cinco experimentos representados assim: experimento 1, 2 e 3 no capitulo 1 e, experimento 4 e 5 no capitulo 2. Para todos os experimentos, os complexos cumulus- oócitos foram obtidos a partir de ovários de vacas de abatedouros. Os oócitos foram maturados, fertilizados e cultivados in vitro até o dia 7. Blastocistos e blastocistos expandidos foram aleatoriamente submetidos ao congelamento com taxa controlada seguindo o equilíbrio de 10 min em meio de congelamento (Hepes-TALP acrescido de 1,5 M de etilenoglicol e 0,1 M de sacarose) com os tratamentos tal como descrito abaixo. No experimento 1, os embriões foram equilibrados no meio de congelamento contendo 0,0; 0,1; 0,3 ou 0,5 mM de AA. Os embriões em palhetas foram então colocados numa máquina de congelamento programável em -6,0 °C a -32 °C antes de ser mergulhado em nitrogênio líquido (-196 °C). Em seguida, os embriões foram descongelados e cultivados durante 72 h em meio SOF-BE1 suplementado com 10% (v/v) de soro fetal bovino a 38,5 °C numa atmosfera umidificada de 5% de CO 2, 5% O2 e 90% N2. Os embriões tratados com 0,1 mM de AA apresentaram maiores taxa de re-expansão às 24, 48 e 72 h e na taxa de eclosão às 72 h em comparação com os embriões do controle (P0,05). Contudo, o AA 0,1 mM reduziu (P0,05) do tratamento com DTT ou z-DEVD-fmk nas taxas de re-expansão e eclosão às 24, 48 ou 72 h pós- descongelamento. Este é o primeiro trabalho que utiliza os antioxidantes AA e DTT ou o inibidor específico da apoptose z-DEVD-fmk no meio de criopreservação de embriões bovinos produzidos in vitro. Em conclusão, a adição de AA (0,1 mM) no meio de congelamento lento melhora a crio-sobrevivência de embriões bovinos produzidos in vitro, reduz as concentrações intracelulares de espécies reativas de oxigénio e a fragmentação do DNA. Os tratamentos DTT e z-DEVD-fmk não apresentaram nenhum efeito sobre a sobrevivência dos embriões pós- descongelamento. Experiments described in this study were performed with the overall objective to evaluate whether the addition of antioxidants ascorbic acid (AA) and dithiothreitol (DTT), or inhibitor of caspase-3 (z-DEVD-fmk) during cryopreservation could improve the cryotolerance of in vitro produced bovine embryos. Five experiments were performed and represented as follows: experiment 1, 2 and 3 in Chapter 2 and experiment 4 and 5 in Chapter 3. For all experiments, cumulus oocyte complexes were obtained from ovaries of slaughterhouse cows. Oocytes were in vitro matured, fertilized and cultured to day 7. Blastocysts and expanded blastocysts were randomly assigned to be subjected to controlled-rate freezing following equilibration for 10 min in freezing medium (Hepes-TALP plus 1.5 M ethylene glycol and 0.1 M Sucrose) with treatments as described below. For experiment 1, the embryos were equilibrated in freezing medium containing 0.0; 0.1; 0.3 or 0.5 mM of AA. The embryos into straws were then placed into programmable freezing machine at -6.0 °C to -32 °C prior to being plunged into liquid nitrogen (-196 °C). Then, embryos were thawed and cultured for 72 h in SOF-BE1 supplemented with 10% (v/v) fetal bovine serum at 38.5 oC in a humidified atmosphere of 5% CO2, 5% O2 and 90% N2. Embryos treated with 0.1 mM AA showed higher re-expansion at 24, 48 and 72 h and hatching rates at 72 h compared to control embryos (P0.05). However, 0.1 mM AA reduced (P0.05) of treatment with DTT or z-DEVD- fmk on re-expansion or hatching rates at 24, 48 or 72 h post-thaw. This is the first report that used AA and DTT antioxidants or z-DEVD-fmk a specific inhibitor of the apoptosis in the cryopreservation medium of in vitro produced bovine embryos. In conclusion, addition of AA (0.1 mM) in slow-freezing medium improves the cryosurvival of in vitro produced bovine embryos, reduces intracellular reactive oxygen species levels and DNA fragmentation. DTT and z-DEVD-fmk treatments had no effect on post-thaw embryo survival.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2016-06-17T12:51:11Z No. of bitstreams: 1 Maria da Conceicao Carvalho.pdf: 3109620 bytes, checksum: 2f7f0bd4b88adbfe9f8dee53321968f7 (MD5) Made available in DSpace on 2016-06-17T12:51:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maria da Conceicao Carvalho.pdf: 3109620 bytes, checksum: 2f7f0bd4b88adbfe9f8dee53321968f7 (MD5) Previous issue date: 2016-02-25 Canids are part of the large number of endangered species. The survival of these species depends on the conservation of existing biodiversity. The use of gamete preservation techniques associated with reproductive technologies such as artificial insemination (AI), in vitro fertilization (IVF) and intracytoplasmic sperm injection (ICSI) were developed to help propagate and preserve the genetic potential of canídeos.A testicular tissue cryopreservation might be a method used when ejaculate freezing techniques is not possible. This work set in two experimentos congelamento and vitrificaçãoin vitro, comparing different cryoprotectants (glycerol, dimetisufóxido (DMSO) and trehalose) in testicular tissue of domestic dogs (Canis familiaris). Fragments of 9 adult dogs testes were subjected to a cooling with 4 cryopreservation protocols: slow freezing with glycerol, dimethylsulfoxide (DMSO) or solid surface vitrification using glycerol or DMSO. Fragments of 3mm testicular parenchyma were separated into groups: control, subjected to slow freezing and vitrification. Histological evaluations of the fragments were performed before, after freezing and thawing by light and electron microscopy. Based on morphology and ultrastructure, the testicular tissue of slow freezing, there was no difference between the cryoprotectants. Among the vitrified groups, exposure to DMSO produced a greater structural integrity and architecture when compared to the glycerol group. Comparison of slow freezing and vitrification have shown that vitrification samples revealed more area consisting of tubular compartment, tubular lumen, seminiferous epithelium and conserved membrane. Furthermore, the intertubular compartment Leydig cells showed normal morphology and had characteristics typical of steroidogenic cells. From the results, it was concluded that vitrification DMSO is the most effective method for criopresevar testicular tissue of adult dogs, and can be used as a routine procedure. Os canídeos fazem parte do grande número de espécies ameaçadas de extinção. A sobrevivência destas espécies depende da conservação da biodiversidade existente. O uso de técnicas de preservação de gametas associadas às tecnologias reprodutivas tais como, inseminação artificial (IA), fertilização in vitro (FIV) e injeção intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI) foram desenvolvidas para ajudar a propagar e preservar o potencial genético dos canídeos.A criopreservação de tecido testicular pode vir a ser um método utilizado quando técnicas de congelação do ejaculado não é possível. A presente dissertação configurou-se em dois experimentoscongelamento e vitrificaçãoin vitro, comparando diferentes crioprotetores (glicerol, dimetisufóxido (DMSO) e trealose) em tecido testicular de cães domésticos (Canis familiaris). Fragmentos de testículos de 9 cães adultos foram submetidos a um arrefecimento com 4 protocolos de criopreservação: congelamento lento com glicerol, dimetilsulfóxido (DMSO), ou vitrificação superfície sólida, utilizando glicerol ou DMSO. Os Fragmentos de 3mm do parênquima testicular foram separados em grupos: controle, submetido ao congelamento lento e vitrificação. As avaliações histológicas dos fragmentos foram realizadas antes, após congelação e descongelação por microscopia óptica e eletrônica. Com base na morfologia e ultraestrutura, o tecido testicular de congelação lenta, não houve diferença entre os crioprotetores. Entre os grupos vitrificados, a exposição ao DMSO produziu maior integridade da estrutura e arquitetura quando comparado ao grupo de glicerol. A comparação do congelamento lento e vitrificação demonstraram que a vitrificação revelou amostras com mais área composta por compartimento tubular, luz tubular, epitélio seminífero e membrana conservada. Além disso, o compartimento intertubular mostrou células de Leydig tinham morfologia normal e características típicas de células esteroidogênicas. Diante dos resultados concluiu-se que a vitrificação com DMSO é o método mais eficaz para criopresevar tecido testicular de cães adultos, podendo ser utilizado como procedimento de rotina.

A alta pressão gasosa (high gaseous pressure, HGP) tem sido descrita como um agente estressante capaz de induzir resposta ao estresse subletal, fornecendo proteção celular a estresses subsequentes, como a criopreservação, embora os mecanismos celulares envolvidos ainda não estejam elucidados. Este princípio foi investigado em blastocistos murinos expostos a diferentes tratamentos utilizando-se HGP, seguidos ou não de criopreservação. De um total de 427 fêmeas de Mus musculus domesticus superovuladas, 308 (72,1%) produziram 3070 blastocistos viáveis (média de 7,2 ± 11,5 blastocistos/fêmea superovulada e de 10,0 ± 12,5 blastocistos/fêmea responsiva ao tratamento superovulatório) que foram expostos a tratamentos de distintas pressões e tempos de exposição, em quatro grupos experimentais: (a) 20,7 MPa por 2 h (P20.T2); (b) 20,7 Mpa por 4 h (P20.T4); (c) 27,6 Mpa por 2 h (P27.T2); e (d) 34,5 Mpa por 2 h (P34.T2). Todos os grupos foram pareados com controles não expostos à HGP. No primeira parte do experimento, embriões foram expostos à HGP, conforme os grupos experimentais acima, e posteriormente submetidos ao cultivo in vitro por 72 h com o objetivo de verificar a influência dos protocolos de HGP sobre a taxa de eclosão. Não houve diferença nas taxas de eclosão e na morfologia entre os grupos experimentais e os controles. Já na segunda parte do experimento, os embriões foram expostos à HGP, conforme os grupos experimentais acima, e posteriormente criopreservados por curva de congelamento clássica (rápida). Após o descongelamento, os embriões foram cultivados in vitro por 72 h para a avaliação das taxas de eclosão entre os grupos. A taxa de eclosão do Grupo P34.T2 foi significativamente maior do que a dos controles criopreservados não expostos à HGP (70,2% vs. 58,6%, p < 0,05). Conclui-se que a HGP pode ser usada como agente estressor subletal sem perda da viabilidade embrionária, e que o uso da HGP de 34,5 MPa por 2 h prévio à criopreservação modificou positivamente a taxa de sobrevivência in vitro de blastocistos murinos criopreservados. High gaseous pressure (HGP) has been reported as a sublethal stressor able to induce "sublethal stress response”, providing cell protection to subsequent stress, such as cryopreservation, although the involved cellular mechanisms are little understood. This principle was investigated on murine blastocysts exposed to different HGP treatments with and without subsequent cryopreservation. A total of 308 (72.1%) out of 427 superovulated Mus musculus domesticus females produced 3,070 viable blastocysts (7.2 ± 11.5 blastocysts/superovulated mouse and 10.0 ± 12.5 blastocysts/female responsive to superovulation) that were exposed to distinct pressure intensities and exposure times, according to four experimental groups: (a) 20.7 MPa for 2 h (P20.T2); (b) 20.7 MPa for 4 h (P20.T4); (c) 27.6 MPa for 2 h (P27.T2); and (d) 34.5 MPa for 2 h (P34.T2). All groups were compared with non-exposed HGP controls. In the first part of the experiment, embryos were exposed to HGP treatments, according to the experimental groups as above, and subsequently in vitro-cultured for 72 h aiming to compare the effects of the HGP protocols on subsequent hatching rates. No differences in hatching rates and morphology were observed between experimental and control groups. In the second parto of the experiment, embryos were exposed to HGP treatments, according to the experimental groups as above, and subsequently cryopreserved by rapid (classic) freezing. After thawing, embryos were in vitro-cultured for 72 h to compare hatching rates between groups. Hatching rates in the P34.5.T2 group were significantly higher than for the cryopreserved control embryos with no HGP treatment (70.2% vs. 58.6%, p < 0.05). Therefore, we conclude that HGP can be used as a stressor without compromising subsequent in vitro embryo viability, and the use of HGP at 34.5 MPa for 2 h prior to cryopreservation improved the in vitro survival of cryopreserved murine blastocysts compared with control counterparts.

Para evaluar la crioconservación de semen de bagre blanco utilizando dimetilacetamida (DMA) fueron preparadas soluciones crioprotectoras con DMA a tres porcentajes de inclusión (8, 10 y 12%), glucosa 6% y leche en polvo descremada 5%. La osmolaridad de las soluciones fue medida con osmómetro (Precision System, Osmomette III, Usa). El semen fue diluido a razón de 1:4 (semen:solución) y congelado con vapores de nitrógeno en dry shipper (MVE 4/2v, Usa). La concentración, movilidad total, velocidad y progresividad del semen crioconservado y fresco (control) fue evaluada con el programa asistido por computador Sperm Class Analyzer SCA® (Microptic, España). La fertilidad y eclosión se evaluaron fertilizando un gramo de ovocitos con semen crioconservado y fresco; mantenidos en incubadoras cilindro-cónicas de 2L. La osmolaridad de las soluciones crioprotectoras fue 1233,3 ± 23,1 mOsm/kg (DMA 8%), 1530 ± 0,0 mOsm/kg (DMA 10%) y 1627,7± 5,8 mOsm/kg (DMA 12%). Semen fresco mostró la mejor movilidad total (99,6±0,4%), porcentaje de espermatozoides rápidos (34,7 ± 12,2%) y progresividad (48,2 ± 12,8%), valores estadísticamente diferentes a los obtenidos con semen crioconservado (p0,05). La fertilización con semen fresco (19,5 ± 4,4%) y semen crioconservado con DMA 8% (17,8 ± 8,3%) no presentó diferencia significativa (p>0,05). La solución crioprotectora compuesta por DMA 8%, glucosa 6% y leche en polvo descremada 5% es una alternativa viable para la crioconservación de semen de bagre blanco Cryoprotectant solutions of dimethylacetamide (DMA) were used at three inclusion levels (8, 10, and 12%) to evaluate cryopreservation of Trans-Andean shovelnose catfish semen. The solutions also included 6% glucose and 5% skimmed milk powder. Osmolarity of the solutions was measured with an osmometer (Precision System, Osmomette III, USA). Semen was diluted at a 1:4 ratio (semen:solution) and frozen in nitrogen vapors using a dry shipper (MVE 4/2V, USA). Concentration, mobility, speed, and progressivity of cryopreserved and fresh semen (control) were assessed with the SCA® Sperm Class Analyzer (Microptic, Spain) computer-assisted program. Fertility and hatching were evaluated fertilizing one gram of oocytes with cryopreserved and fresh semen, which was then kept in 2L cylinder-conical incubators. The osmolarity of cryoprotective solutions was 1233.3 ± 23.1 mOsm/Kg (8%DMA), 1530 ± 0.0 mOsm/Kg (10% DMA), and 1627.7 ± 5.8 mOsm/Kg (12% DMA). Fresh semen showed better total mobility (99.6 ± 0.4%), percentage of rapid sperm (34.7 ± 12.2%), and progressivity (48.2 ± 12.8%), compared with cryopreserved semen (p 0.05). Fertilization with fresh semen (19.5 ± 4.4%) and 8% DMA cryopreserved semen (17.8 ± 8.3%) were not different (p>0.05). A cryoprotective solution composed of 8% DMA, 6% glucose, and 5% skimmed milk powder is a viable alternative to cryopreserve Trans-Andean shovelnose catfish semen. Para avaliar a criopreservação de sêmen de bagre branco utilizando dimetilacetamida (DMA) foram preparadas soluções crioprotetoras com DMA a três porcentagens de inclusão (8, 10 e 12%), glucose 6%e leite em pó desnatada 5%. A osmolaridade das soluções foi medida com osmômetro (Precision System, Osmomette III, USA). O sêmen foi diluído em razão de 1:4 (sêmen: diluição) e congelado com vapores de nitrogênio em dry shipper (MVE 4/2v, USA). A concentração, mobilidade total, velocidade e progressividade do sêmen criopreservado e fresco (controle) foi avaliado com o programa assistido por computador Sperm Class Analyzer SCA® (Microptic, Espanha). A fertilidade e eclosão avaliaram-se fertilizando uma grama de ovócitos com sêmen criopreservado e fresco, mantidos em incubadoras cilindro-cônicas de 2L. A osmolaridade das soluções crioprotetoras foi de 1233,3 ± 23,1 mOsm/kg (DMA 8%); 1530 ± 0,0 mOsm/kg (DMA 10%) e 1627,7 ± 5,8 mOsm/kg (DMA 12%). O sêmen fresco mostrou a melhor mobilidade total (99,6 ± 0,4%), a porcentagem de espermatozoides rápidos (34,7 ± 12,2%) e de progressividade (48,2 ± 12,8%), esses valores com sêmen fresco são estatisticamente diferentes aos obtidos com sêmen criopreservado (p0,05). A fertilização com sêmen fresco (19,5 ± 4,4%) e sêmen criopreservado com DMA 8% (17,8 ± 8,3%) não apresentou diferença significativa (p>0,05). A solução crioprotetora composta por DMA 8%, glucose 6% e leite em pó desnatada 5% é uma alternativa viável para a criopreservação de sêmen de bagre branco.

O plasma rico em plaquetas (PRP) é um produto biológico utilizado na promoção de melhor reparo tecidual, por meio dos fatores de crescimento presentes em sua composição. O objetivo do presente trabalho foi comparar a viabilidade da criopreservação das plaquetas de muares e equinos e a influência de dois anticoagulantes citrato dextrose (ACD) e citrato de sódio (CS). Foram utilizados oito animais de cada espécie, com duas replicações cada. O PRP foi obtido em uma centrifugação única de 131g, durante oito minutos. As amostras foram congeladas em nitrogênio líquido após serem submetidas à curva de resfriamento controlado. Foi utilizado uma solução de DMSO a 3% em glicose como criopreservante. As análises foram feitas em aparelho hematológico e na câmara de Neubauer; a avaliação morfológica foi feita em microscopia óptica de contraste de fases. A concentração plaquetária do PRP em relação ao sangue total foi de 1,42 vezes para equinos e 2,00 vezes para muares, em ACD; e 1,39 vezes para equinos e 2,69 vezes para muares utilizando-se o CS. O protocolo utilizado foi mais efetivo em concentrar as plaquetas de muares do que de equinos, embora a qualidade do PRP congelado tenha sido semelhante nas duas espécies. Constatou-se o aumento das células em estado ativado nas amostras criopreservadas, independente da espécie ou anticoagulante empregado. A contagem de plaquetas em ACD e CS, no sangue total, foi mais fidedigna do que a contagem no EDTA para a produção do PRP. Baseando-se na premissa de que a presença leucocitária é deletéria à qualidade do PRP, o anticoagulante CS mostrou-se mais eficiente na redução de leucócitos totais em relação ao ACD, em ambas as espécies. Por não haver diferenças significativas entre a qualidade do PRP criopreservado obtido entre os diferentes anticoagulantes empregados (principalmente em parâmetros morfológicos plaquetários), sugere-se o CS como melhor anticoagulante na obtenção do PRP em equinos e muares. Aplicações clínicas são necessárias para validar os efeitos biológicos do PRP, fresco e criopreservado, especialmente em muares, que mostraram particularidades hematológicas em relação aos equinos. Platelet-Rich Plasma (PRP) is a biological product often used to promote tissue repair, due to its composition of growth factors. The aim of this study was to compare the viability of platelet cryopreservation on two species, horses and mules, and the influence of two different anticoagulants dextrose citrate (ACD) and sodium citrate (SC). Eight animals of each species were used, with two replicas each. PRP was obtained after single centrifugation at 131 g in eight minutes. Samples were frozen in liquid nitrogen after exposure to a controlled cooling rate. A solution of glucose and 3% DMSO was used as a cryoprotectant. Blood analysis were performed on hematologic analyzer, Neubauer chamber and morphology was evaluated through optical microscopy of phase inversion. Platelet concentration on PRP when compared to total blood samples were 1,42 times in horses and 2,00 in mules, using ACD; and 1,39 times in horses and 2,69 times in mules using SC. The protocol was more efficient in concentrating mules platelets when compared to horses, although both species cryopreservation had similar quality. There was a significant increase of cells in activated status after cryopreservation, despite the species or anticoagulant employed. Platelet count on ACD and SC, on total blood, was more truthful in ACD and SC when compared to EDTA, in order to establish PRP parameters. Based upon the negative effects of leukocytes on PRP, SC was more efficient in reducing total leukocyte count when compared to ACD on both species. Due to the fact that there were no significant differences between cryopreserved PRP and the anticoagulants employed (especially regarding morphology parameters of platelets), it is suggested that SC was a better anticoagulant to obtain PRP on both mules and horses. Clinical trials should be performed, especially in mules, due to its hematological distinctive features when compared to horses.

The most reproduction techniques used in donkeys are adaptations on other species, the equine are the base for these practices. Therefore, the development in practice of cryopreservation directed by asses is necessary. Based this, the aim in this study was assess the perform on removing the seminal plasma (SP) and evaluate methods of freezing semen in donkeys (Equus asinus), establish news protocols for the field routine is important. Were evaluated two methods of removal SP, centrifugation and filtration, and the freezing systems, automated and conventional. Three jackass, healthy, were used. By collections, was used artificial vagina method, sets are six ejaculates for each jackass. After the colections and free gel, the semen was divided in two parts, submitted to commercial membrane filter (SpermFilter®), another part subjected by centrifugation (600xg for 10 minutes). In order to freezing methods, the conventional system used (refrigerator 5 °C/ ramp in storyfoam box) and the automated system (TK-3000®, curve P2S2) were used. Thus were groups formed: automated centrifuged (MC), automaed filtrate (MF), conventional centrifuged (RC) and completed conventional filtrate (RF). Subjective analyzes were performed on fresh semen (motility, vigor, concentration, pH, morphology and integrity of membrane). The data were submitted to statistics evaluation (normality test, ANOVA, post test Turkey with 5% significance). The animals were evaluated individually and after finding that there was no difference between individuals, the data were grouped by formed experimental group. It was found that the groups submitted to the filtration technique showed greater sperm recovery (P0.05) between the experimental groups. It was observed that the RF group had lower (P0,05) distinção entre os grupos experimentais. Foi observado que o grupo RF apresentou menor (P

Semen cryopreservation is associated with low productivity results. This study aimed to test the Coconut Water Powder (ACP®-103) as a ressuspension diluent after thawing semen, also evaluate sperm quality during the cooling curve until thawing of the semen. For this, the semen was collected from 15 boars once a week, incubated at 30 °C for 15 minutes, and afterwards, the samples were diluted in the diluent Beltsville Thawing Solution – BTS (Control) or ACP-103®, and subjected to a slow cooling curve, where the force and the motility were analyzed in each step. The thawed semen was ressuspended in its respective solvents and analyzed in the characteristics of vigor, motility, vitality, acrosome integrity and functionality of the membrane. During the analysis of vigor and motility that make up the cooling curve, and thawing, for analysis of vitality and intact acrosomal membrane, it was observed that there was no significant difference between treatments. Besides, after thawing, the BTS showed better results of sperm vigor, sperm motility and membrane functionality. However, the cooling curve and coconut water powder can be used in the protocol for cryopreservation of boar semen, as both ensured quality of sperm viability that may be used in artificial insemination. Keywords: Swine semen; alternative extender; freezing; sperm viability.

As colheitas de sêmen em equinos são realizadas de forma convencional, com vagina artificialfechada, em que todas as frações se misturam. No entanto, a colheita de sêmen de formafracionada, separa as diferentes frações do ejaculado, cada uma dessas frações possuem umamaior ou menor quantidade de plasma seminal, sendo as glândulas sexuais acessóriasresponsáveis por sua produção. Cada garanhão possui características individuais com relaçãoà manutenção das células espermáticas durante a criopreservação, essas características podemestar relacionadas à produção do plasma seminal, assim como dos vários componentes. Sabese que existe um efeito deletério desempenhado pelos componentes do plasma seminalproduzido principalmente pelas vesículas seminais, aos espermatozoides durante o processode criopreservação, porém, esses fatores ainda são desconhecidos. Várias hipóteses sãosugeridas, tais como, a redução na produção de lipídeos e os tipos de proteínas e íonspresentes em cada uma das frações do ejaculado. Sabendo disso, a colheita fracionada podetrazer benefícios aos espermatozoides, de forma que as primeiras frações não tenham contatocom o plasma seminal produzido pelas vesículas seminais, possibilitando uma melhormanutenção espermática durante a criopreservação.

Made available in DSpace on 2016-04-01T17:55:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-08-31. Added 1 bitstream(s) on 2016-04-01T18:00:53Z : No. of bitstreams: 1 000859876_20160630.pdf: 471050 bytes, checksum: b283e5cdd6fee1565d98e89bf93e40b0 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-07-01T13:02:23Z: 000859876_20160630.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-07-01T13:03:18Z : No. of bitstreams: 1 000859876.pdf: 729708 bytes, checksum: 0c3f9644fb91e37bed700362170aae04 (MD5) As plantas da família Orchidaceae são muito apreciadas pelo potencial ornamental, ecológico e econômico. O domínio de técnicas para a domesticação e propagação em massa das espécies é extremamente importante, visto que, possibilita diminuir a coleta predatória, além de reduzir o custo de produção das plantas. O cultivo in vitro é uma técnica que permite produzir grande número de plantas; entretanto, ocorrem muitas perdas durante o período de aclimatização (ex vitro). O aprimoramento dos métodos de conservação de recursos genéticos por meio de criopreservação de sementes em desenvolvimento é uma importante estratégia para a conservação de germoplasma e programas de melhoramento genético de plantas desta família. Este trabalho teve como objetivos avaliar o desenvolvimento in vitro de plântulas em meio de cultura alternativo e diferentes ambientes das orquídeas Amblostoma amblostomoides e Cattleya percivaliana, bem como, diferentes protocolos para a criopreservação de sementes da orquídea Ionopsis utricularioides. Nos experimentos sobre desenvolvimento in vitro de plântulas em meio de cultura alternativo e diferentes ambientes, para cada espécie, o delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado. Inicialmente foram seis tratamentos (T1 - meio MS (Murashige e Skoog) + sala de crescimento - Controle; T2 - MCA (meio de cultura alternativo) + sala de crescimento; T3 - MCA + tela preta com 70% de sombreamento; T4 - MCA + tela azul com 50% de sombreamento; T5 - MCA + tela preta com 50% de sombreamento e T6 - MCA + tela vermelha com 50% de sombreamento) e quatro repetições com 10 plântulas por parcela avaliando-se porcentagem de sobrevivência; para avaliação dos dados biométricos, em razão do alto índice de mortalidade, foram avaliados quatro tratamentos para A. amblostomoides e três tratamentos para C. percivaliana, com 12 repetições para ambas as espécies, sendo uma plântula... Orchids are well appreciated by ornamental, ecological and economic potential. The improvement of genetic resources conservation methods through seeds and protocorms cryopreservation is an important strategy for the conservation of germplasm and plant breeding programs of this family. The domain of techniques for domestication and mass propagation of species is very important because, enables decreasing predation and reduce the cost of production of plants. The in vitro culture is a technique that allows the production of a large numbers of plants; however, there are many losses during the acclimatization period (ex vitro). This work aimed to evaluate different protocols for cryopreservation of Ionopsis utricularioides seeds, as well as the in vitro development of seedlings in alternative culture media and different environments of the orchids, Amblostoma amblostomoides and Cattleya percivaliana. In experiments on cryopreservation of seeds for each species, the experimental design was completely randomized with eight treatments and four replications each. The treatments were: T1) seeds without cryopreservation (control 1); T2) seeds cryopreserved without cryoprotectants (Control 2); T3) glycerol + PVS2; T4) glycerol + PVS2 + phloroglucinol; T5) sucrose + PVS2; T6) sucrose + PVS2 + phloroglucinol; T7) glycerol + sucrose + PVS2; and T8) + sucrose + glycerol + PVS2 + phloroglucinol and 10 repetitions. The variables analyzed were germination percentage, number of seedlings and protocorms and development of the seedlings formed. In the experiments on in vitro development of seedlings in an alternative culture media and in different environments, the experimental design was completely randomized for each species. There were six treatments [T1: MS medium (Murashige e Skoog) - under laboratory conditions; T2: ACM (Alternative Culture Medium) - under laboratory conditions; T3: MCA - black net with 50% shading; T4: MCA - black net with ...

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:23:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-25. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:29:40Z : No. of bitstreams: 1 000852682_20160620.pdf: 79700 bytes, checksum: 3cf603415213794e29627e720a92e128 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-06-20T12:14:14Z: 000852682_20160620.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-06-20T12:14:51Z : No. of bitstreams: 1 000852682.pdf: 1984663 bytes, checksum: 5c39404e9531f1892485e096eb8f1752 (MD5) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) A congelação e refrigeração são biotecnologias muito utilizadas na reprodução equina, entretanto um significativo número de garanhões possuem baixa qualidade seminal após a criopreservação. Diversos autores descreveram a importância da composição e lipídica das membranas espermáticas sobre a resistência à criopreservação. Desta forma, este estudo teve como objetivo analisar a relação do perfil lipídico das membranas espermáticas com a raça e a resistência espermática à congelação e refrigeração. No experimento 1 foram verificadas as diferenças do perfil de fosfolipídios das membranas espermáticas de garanhões das raças Mangalarga Marchador e Quarto de Milhaa e observou-se maior abundância relativa dos íons m/z 728,6; 741,5 e 744,5 nos Mangalarga Marchador. No experimento 2 foram avaliados os fosfolipídios das membranas espermáticas entre garanhões com espermatozoides sensíveis ou resistentes à danos decorrentes da congelação e observou-se maior abundância relativa dos íons m/z 703,5; 728,6; 781,5; 808,5 e 836,6 nos animais sensíveis à congelação. No experimento 3 comparou-se os fosfolipídios das membranas espermáticas dos garanhões com a resistencia à refrigeração e observou-se maior abundância relativa dos íons m/z 772,5 e 774,6 nos animais resistentes à refrigeração. No experimento 4 observou-se não serem os mesmo lipídios que conferem resistência espermática à congelação e à refrigeração. Como os resultados do presente estudo, pode-se concluir que existe diferença no perfil lipídico das membranas espermáticas entre animais Quarto de Milha e Mangalarga Marchado, entre animais sensíveis e resistentes à congelação, entre animais sensíveis e resistentes à refrigeração. Além disso não há relação do perfil lipídicos que confere resistência espermática à congelação e à refrigeração The freezing and refrigeration are biotechnology very used in equine reprodution, although a significant number of stallion have low seminal quality after cryopreservation. Many authors described the importance of lipid composition of spermatic membrane in crypreservation resistance.The aim of this study is to analisy the lipid profile with MALDI-MS of plasmatic membrane of stallion sperm, checking its relation with breed and with spermatic resistance to freezing and refrigeration. Four experiments were done. The experiment 1 verified the diference of phospholipid spermatic membrane in stallions of Mangalarga Marchador and Quarter horse breeds, which was observed bigger relative abundance of ions m/z 728,6; 741,5 e 744,5 in Mangalarga Marchador. The experiment 2 evaluated the spermatic phospholipid membrane between stallions with weak and resistant to the damage of freezing and was observed bigger relative abundance of ions m/z 703,5; 728,6; 782,5; 808,5 and 836, 6 in the animals weaks to freezing. The experiment 3 compared the phospholipids of stallions spermatic membranes with sperm weaks or resistant to the damage of refrigeration and was observed bigger relative abundance of ions m/z 772,5 e 774,6 in animals resistants to refrigeration. The experiment 4 showed that not the same lipids offer spermatic resistance to freezing and refrigeration.The results of this study demonstrate tha there is a diference in lipid profile of spermatic membrane between Quarter Horse and Mangalarga Marchador breeds, between animals weak and resistant to freezing and between animals weak and resistant to refrigeration. Besides there is no relation of lipid profile that offer spermatic resistance to freezing and refrigeration FAPESP: 2012/24843-4

Made available in DSpace on 2015-10-06T13:03:39Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-09. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:18:14Z : No. of bitstreams: 1 000848324.pdf: 1288416 bytes, checksum: 27f2c10c6c420dc8e778806bfa51bc2e (MD5) O Haemonchus contortus se destaca como a principal verminose dos ovinos. Esse mostra-se mais propenso ao desenvolvimento de resistência aos antihelmínticos, provavelmente, devido ao seu alto potencial biótico e a sua grande variabilidade genética. A criopreservação possibilita a manutenção de linhagens com características desejáveis por um longo período de tempo a um baixo custo, somado a uma redução drástica no número de animais mantidos em laboratórios. O presente estudo visou comparar diferentes técnicas de criopreservação, considerando os melhores resultados quanto à taxa de sobrevida, motilidade e manutenção da infectividade de larvas L3 de Haemonchus contortus. A diferença entre cada técnica se deu através da alternância entre três etapas distintas, a manutenção ou remoção das bainhas das larvas L3 de Haemonchus contortus com Hipoclorito de Sódio, a utilização ou não de Etileno Glicol como crioprotetor e a velocidade de congelamento, lento ou ultrarrápido. O estudo identificou etapas estratégicas na criopreservação de larvas L3 de Haemonchus contortus, entre essas, a ausência de bainha e o congelamento lento se mostraram imprescindíveis para obtenção de alguma taxa de sobrevida após o descongelamento. Já o uso do Etileno Glicol como crioprotetor não se mostrou imprescindível, entretanto, apresentou benefícios a técnica, elevando as taxas de sobrevida e motilidade significativamente para um período maior de congelamento The Haemonchus contortus stands out as the main worms in sheep. This seems to be more likely to the development of resistance to antihelmintics, probably due to its high biotic potencial and genetic variability. The cryopreservation allows lineage maintenance with desirable characteristics for a long period of time, added to a drastic decrease in the number of animals kept in laboratories. The present study aimed at comparing different cryopreservation techniques, considering the best results regarding survival rate, motility and infectivity maintenance of Haemonchus contortus L3 larvae. The difference between each technique occurred through the alternation between three distinct stages, the conservation or removal of the sheaths of Haemonchus contortus L3 larvae with Sodium Hypochlorite, the use or not of Ethylene Glycol as a cryoprotector and the freezing speed, slow or ultrafast. The study identified strategic stages on the cryopreservation of Haemonchus contortus L3 larvae, among these, the absence of sheath and slow freezing proved to be essential for obtaining any survival rate after the defrosting. Instead, the use of Ethylene Glycol as cryoprotector was not indispensable, however presented technical benefits, significantly increasing the survival rates and motility for a longer period of freezing

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico O objetivo principal do presente estudo foi estabelecer um protocolo eficiente de criopreservação seminal em Sapajus apella para a manutenção da viabilidade espermática. Para isso, foi comparado o desempenho dos diluidores TES-TRIS, ACIN e ACP-118® para escolher do melhor diluidor durante a dissolução do coágulo seminal e resfriamento, para posteriormente ser estabelecido a melhor concentração de glicerol (3; 5 e 7%) a ser adicionado no diluidor, bem como avaliar a suplementação do antioxidante catalase (10 µg e 50 µg) no meio de congelação seminal, no intuito de melhorar os parâmetros espermáticos. Foram utilizados seis machos adultos de S. apella oriundos do Centro Nacional de Primatas. As coletas do sêmen foram realizadas por eletroejaculação com probe retal, após a contenção química dos animais com Cloridrato de Ketamina e Cloridrato de Xilazina. Na primeira fase do projeto, o sêmen obtido foi diluído em TES-TRIS, ACIN e ACP®-118, mantido em banho-maria a 37 °C. Após dissolução do coágulo, o sêmen foi resfriado em geladeira a 4°C por 90 minutos, e avaliadas após 28h quanto a motilidade, o vigor, e o percentual de integridade de membrana antes e após o resfriamento. ACP®-118 foi o melhor diluidor para preservar a motilidade dos espermatozoides e integridade de membrana plasmática após 28 horas de incubação. A partir desse resultado, foi realizada a criopreservação avaliando diferentes concentrações de glicerol (3, 5 e 7%). Os espermatozoides criopreservados a 3% de glicerol apresentaram melhores resultados. Na segunda fase do projeto, foi realizada a criopreservação do sêmen de S. apella em diluidor ACP®-118 suplementado ou não com antioxidante catalase (10µg/mL e 50µg/mL). Todos os tratamentos foram eficazes na manutenção de parâmetros espermáticos, sendo possível a recuperação da motilidade pós-descongelamento. O tratamento catalase 50 foi o melhor de manutenção do vigor durante após resfriamento, e na integridade de membrana plasmática após a descongelação espermática. Em conclusão, ACP-118® pode ser usado de forma eficiente como diluidor para a criopreservação de sêmen S. apella adicionado de 3% de glicerol, além de que a adição do antioxidante catalase mostrou efeito benéfico durante esse processo. The main objective of the present study was to establish an efficient semen cryopreservation protocol in Sapajus apella for maintaining sperm viability. For this, we compared the performance of TES-TRIS, CWS and ACP-118® extenders during the seminal coagulum dissolution and cooling. Then, in order to improve the sperm parameters, we also determined the glycerol concentration (3; 5 and 7%) as well as to evaluate the effect of catalase antioxidant (10 µg and 50 µg). Therefore, six adult males of S. apella from the National Primate Center were used. Semen was collected by electro-ejaculation with rectal probe after chemical restraint of animals with ketamine and xylazine hydrochloride. In the first phase of the project, the semen obtained was diluted in TES- TRIS, CWS and ACP®-118 extenders, kept in a water bath at 37 °C. After coagulum dissolution, the semen was cooled in the refrigerator at 4 °C for 90 minutes and evaluated after 28h for motility, vigor and plasma membrane integrity percentage before and after the cooling. ACP®-118 was the best extender to preserve the motility sperm and plasma membrane integrity after 28 hours of incubation. Based on these results, cryopreservation was performed by evaluation of different concentrations of glycerol (3, 5, and 7%). The cryopreserved sperm to 3% glycerol had better results. In the second project phase was performed S. apella semen cryopreservation in ACP®-118 extender supplemented or not with catalase antioxidant (10 µg/mL and 50 µg /mL). All treatments were effective in maintaining sperm parameters and was possible to recovery the post-thaw motility. The catalase 50 treatment was the best for maintenance of the vigor after cooling and plasma membrane integrity in post-thaw sperm. So, we concluded that ACP-118® extender can be efficiently used for S. apella semen cryopreservation added 3% glycerol, moreover, the addition of the catalase antioxidant showed beneficial effect during this process.

As microalgas são organismos unicelulares fotossintéticos que possuem estrutura celular eucariótica e podem apresentar-se em formas coloniais ou livres. Estes organismos vem sendo amplamente estudados para aplicação em biorremediação e em biorrefinarias. Seu potencial biotecnológico destaca-se na produção de biocombustíveis e bioprodutos, por apresentarem características como alta taxa de crescimento e alta capacidade de armazenamento de substâncias de reserva, como lipídios e amido. Coleções de recursos genéticos e programas de melhoramento, tem como pré-requisito a identificação e manutenção dos organismos em um estado metabólico inativo. Desta forma, dois marcadores moleculares, o gene cloroplastídeo rbcL e a região ITS2 do DNA ribossômico nuclear, foram utilizados como barcodes de DNA para identificação das cepas microalgais coletadas de águas continentais brasileiras, depositadas na Coleção de Microrganismos e Microalgas Aplicados à Agroenergia e Biorrefinarias da Embrapa. Para a manutenção dos recursos genéticos desta coleção em um estado metabólico inativo, aplicou-se o método de criopreservação aliado a estratégia de resfriamento lento, utilizando os compostos químicos metanol e dimetilsulfóxido (DMSO) como agentes crioprotetores. A região ITS2 pode ser amplificada e sequenciada com sucesso em 48 (94%) das amostras utilizando um par de primers universais disponíveis na literatura. Por outro lado, novos pares de primers tiveram que ser desenhados para o gene rbcL, o que possibilitou o sequenciamento de 49 (96%) das amostras. Uma diversidade média de nucleotídeos próxima foi observada entre as sequências de ITS2 (0.472) e rbcL (0.461), o que sugere um similar poder de discriminação de espécies. Porém, os resultados indicam que o ITS2 deve ser utilizado como marcador primário, e o rbcL como marcador auxiliar para a identificação de microalgas verdes. Os testes de criopreservação demonstraram que é possível empregar este método para manutenção de microalgas continentais brasileiras em estado metabólico inativo, utilizando DMSO em concentração de 10% como agente crioprotetor. Microalgae are photosynthetic unicellular organisms that have eukaryotic cell structure and occur in colonial or free forms. These organisms have been widely studied in the application of bioremediation and in biorefineries. Their biotechnological potential stands out in the production of biofuels and bioproducts, because they have features like high growth rate and high storage capacity of reserve substances, such as lipids and starch. Collections of genetic resources and breeding programs have as a prerequisite the identification and the maintenance of the organisms in an inactive metabolic state. Thus, two molecular markers, the chloroplastid gene rbcL and the ITS2 region of the nuclear ribosomal DNA were used as DNA barcodes for identification of microalgal strains collected from Brazilian continental waters, deposited in Embrapa’s Collection of Microorganisms and Microalgae Applied to Agroenergy and Biorefineries. For the genetic resources maintenance in an inactive metabolic state, it was applied the cryopreservation method combined with a slow cooling strategy, using the chemical compounds methanol and dimethyl sulfoxide (DMSO) as cryoprotectans agents. The ITS2 region could be amplified and sequenced successfully in 48 (94%) of the samples using a pair of universal primers available in the literature. On the other hand, new sets of primers had to be designed for the rbcL gene, which allowed the sequencing of 49 (96%) of the samples. Similar levels of nucleotide diversity were observed among the ITS2 (0.472) and rbcL (0.461) sequences, suggesting a similar potential for taxa discrimination. However, the results indicates that the ITS2 should be used as a primary marker, and rbcL as an auxiliary marker for the identification of green microalgae. Cryopreservation tests showed that it is possible to use this method for maintaining Brazilian continental microalgae in an inactive metabolic state using DMSO in 10% concentration as a cryoprotectant agent.

As microalgas são organismos unicelulares fotossintéticos que possuem estrutura celular eucariótica e podem apresentar-se em formas coloniais ou livres. Estes organismos vem sendo amplamente estudados para aplicação em biorremediação e em biorrefinarias. Seu potencial biotecnológico destaca-se na produção de biocombustíveis e bioprodutos, por apresentarem características como alta taxa de crescimento e alta capacidade de armazenamento de substâncias de reserva, como lipídios e amido. Coleções de recursos genéticos e programas de melhoramento, tem como pré-requisito a identificação e manutenção a longo prazo dos organismos depositados nesta coleção. Desta forma, dois marcadores moleculares, o gene cloroplastídeo rbcL e a região ITS2 do DNA ribossômico nuclear, foram utilizados como barcodes de DNA para identificação das cepas microalgais coletadas de águas continentais brasileiras, depositadas na Coleção de Microrganismos Aplicados à Agroenergia da Embrapa. Para manutenção dos recursos genéticos desta coleção em estado metabólico inativo, aplicou-se o método de criopreservação aliado a estratégia de resfriamento lento, utilizando os compostos químicos metanol e dimetilsulfóxido (DMSO) como agentes crioprotetores. Os resultados demonstraram que ambos os marcadores possuem variabilidade semelhante. A região ITS2 apresentou primers com maior universalidade, enquanto o gene rbcL um maior poder de discriminação de espécies e um banco de dados com curadoria taxonômica. Os resultados observados nos testes de criopreservação demons traram que é possível utilizar este método para manutenção de microalgas continentais brasileiras em estado metabólico inativo, utilizando DMSO em concentração de 10% como agente crioprotetor. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia) - Universidade Federal do Tocantins, Palmas, TO. Orientador CNPAE: Dr. Bruno dos Santos Alves Figueiredo Brasil.

Dissertação de Mestrado, Engenharia Zootécnica, 4 de Janeiro de 2016, Universidade dos Açores. Submitted by RUA REPOSITORIO (repositorio@uac.pt) on 2016-03-04T11:19:39Z No. of bitstreams: 1 DissertMestradoMarcoFilipeCarreiroBraga2016.pdf: 859392 bytes, checksum: b8543825b0ba13be9d5b54f4d971276f (MD5) Made available in DSpace on 2016-03-04T11:20:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissertMestradoMarcoFilipeCarreiroBraga2016.pdf: 859392 bytes, checksum: b8543825b0ba13be9d5b54f4d971276f (MD5) Previous issue date: 2016-01-04

Submitted by Andréa Medeiros (andrea.medeiros@cespu.pt) on 2017-01-27T11:18:12Z No. of bitstreams: 2 MIMD_RE_17615_joanaalves.pdf: 3177078 bytes, checksum: a29cfa0535767081ceea429e13a11c77 (MD5) MIMD_RE_17615_joanaalves_Registo classificacao.pdf: 110514 bytes, checksum: 5e0df9392c146e28c10cc6cb68ed4c83 (MD5) Made available in DSpace on 2017-01-27T11:18:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 MIMD_RE_17615_joanaalves.pdf: 3177078 bytes, checksum: a29cfa0535767081ceea429e13a11c77 (MD5) MIMD_RE_17615_joanaalves_Registo classificacao.pdf: 110514 bytes, checksum: 5e0df9392c146e28c10cc6cb68ed4c83 (MD5) Previous issue date: 2016

Made available in DSpace on 2019-04-10T00:39:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 artigosNaianaeTiago.pdf: 517784 bytes, checksum: d813c8bec80ed01443bc147da784eaac (MD5) Previous issue date: 2016

A criopreservação da pele representa uma ferramenta interessante para a conservação da biodiversidade animal. Nesse contexto, diferentes protocolos já foram empregados e ajustes metodológicos, especialmente quanto ao tipo e a concentração dos crioprotetores, são constantemente desenvolvidos, tanto para mamíferos domésticos quanto silvestres. Embora ambos os métodos de criopreservação, congelação e vitrificação, tenham sido utilizados na conservação tecidual, este último é atualmente o mais usual. Além disso, métodos de análise para a averiguação da eficiência da técnica são necessários para garantir que a pele criopreservada mantenha suas características viáveis após o aquecimento. Em geral, a criopreservação permite o armazenamento adequado, tanto durante o transporte até o processamento no laboratório, quanto em longo prazo visando à formação de criobancos. As células somáticas recuperadas da pele podem ser empregadas também para estudos da fisiologia da espécie, diferenciação e reprogramação celular, clonagem reprodutiva e terapêutica. Portanto, a presente revisão objetiva apresentar os aspectos técnicos da criopreservação da pele, com ênfase sobre a eficiência dos métodos empregados em mamíferos e sua aplicação em biotecnologias reprodutivas.

– Plant genetic resources conservation is essential for the development of agriculture. The development of efficient cryopreservation protocols has become an effective tool to conserve vegetatively propagated plant species. Traditionally, genetic resources have been maintained primarily in field collections. As field collections, Vitis accessions are vulnerable to abiotic stresses and biotic threats, such as pathogens and pests. Thus, the availability of robust cryopreservation methods is an opportunity to preserve collections for long periods, safely and with low maintenance costs. Several cryopreservation methods have been described for grapevines and, so far, droplet-vitrification has been the most effective for multiple Vitis species. This method seems to be promising to overcome species- and genotype-specific responses to a determined protocol, factors that have been bottlenecks for the widespread use of Vitis cryopreservation. This review article presents updated and relevant information on the use of cryopreservation as a complementary tool for the conservation of Vitis genetic resources. Resumo - A conservação de recursos genéticos vegetais é fundamental para o desenvolvimento da agricultura. O desenvolvimento de protocolos eficientes de criopreservação tornou-se uma ferramenta eficaz para conservar espécies vegetais propagadas vegetativamente. Tradicionalmente, os recursos genéticos de videiras têm sido mantidos principalmente em coleções no campo. Como coleções no campo, os acessos de Vitis são vulneráveis a estresses abióticos e ameaças bióticas, como patógenos e pragas. Assim, quando métodos robustos de criopreservação estão disponíveis, há uma oportunidade para preservar coleções por longos períodos de tempo, com segurança e com baixo custo de manutenção. Vários métodos têm sido descritos para Vitis e, até agora, a vitrificação em gotas tem sido o mais efetivo para várias espécies de videira e, parece ser um método promissor para superar as respostas específicas de genótipos/espécies para um determinado protocolo que tem sido o gargalo para o uso generalizado da criopreservação de Vitis. Esse artigo de revisão apresenta informações atualizadas e relevantes sobre o uso da criopreservação como ferramenta complementar para a conservação de recursos genéticos de videira.

OBJETIVO: Comparar dois meios de congelamento para sêmen: o comercialmente disponível Meio de Congelamento TEST Yolk Buffer-Irvine Scientific - USA (TYB) e o crioprotetor sintético suplementado com fosfatidilcolina (PC) e antioxidante L-acetil-carnitina (ANTIOXPC - delineado pela Invitra Tecnologia de Reprodução Assistida - Brasil) em relação a motilidade progressiva (PR) e índice de fragmentação do DNA (IFD) em amostras de sêmen obtidas de homens com parâmetros seminais alterados. DESENHO: Ensaio clínico de nãoinferioridade. MATERIAIS E MÉTODOS: Foram incluídas amostras de sêmen com parâmetros seminais alterados (astenozoospermia) de 58 voluntários no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo. As amostras de sêmen foram submetidas à análise antes e após a criopreservação. A motilidade dos espermatozoides foi avaliada pelo espermograma e a fragmentação do DNA espermático foi analisada pela técnica transferase-mediated dUTP nick-end labelling (TUNEL). Antes da criopreservação, todas as amostras de sêmen foram divididas e randomizadas para receber os crioprotetores TYB ou ANTIOX-PC, congelados no período mínimo de 30 dias e descongelados. Uma análise exploratória dos dados foi realizada através de medidas de posição central e dispersão. O teste t pareado foi usado para comparar os grupos. Comparações entre os dois meios, ANTIOX-PC e TYB, e sêmen fresco foram realizadas através de contrastes ortogonais, utilizando o modelo de regressão linear de efeitos mistos. Este modelo foi implementado no programa SAS 9.3 considerando o PROC MIXED. RESULTADOS: A motilidade PR (P = 0,78) e o IFD (P = 0,06) não foram diferentes quando comparados os meios ANTIOX-PC (12,40 ± 11,49 e 13,33 ± 10,54) e o TYB (12,09 ± 11,11 e15,83 ± 11,04), respectivamente. Esses dados mostraram que o crioprotetor sintético delineado não foi inferior na proteção dos espermatozoides comparado com o meio TYB. Além disso, o ANTIOX-PC reteve taxas mais altas de motilidade total43,36 ± 26,77) do que o TYB (34,79 ± 22,86; P

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais, Florianópolis, 2019. Cattleya crispa é uma orquídea endêmica, com distribuição geográfica restrita à Mata Atlântica, que está seriamente ameaçada pela perda de habitat. C. crispa está presente na Lista Vermelha da Flora Brasileira e é protegida pelo anexo II da Convenção sobre o Comércio Internacional de Espécies Ameaçadas de Fauna e Flora Silvestres (CITES). A espécie em estudo possui valor de uso devido a sua rara beleza e pertence ao gênero Cattleya que possui ampla capacidade de recombinação genética, tendo potencial para melhoramento genético. Os objetivos desse trabalho foram desenvolver um protocolo de criopreservação de sementes, bem como estudar o desenvolvimento inicial in vitro, visando produzir dados que subsidiem o estabelecimento de estratégias de uso sustentável e conservação para a espécie. Sementes de C. crispa foram criopreservadas pela técnica de imersão direta em nitrogênio líquido, posteriormente foram descongeladas em banho maria, desinfestadas com hipoclorito de sódio e inoculadas em meio de cultura MS. Sementes submetidas a criopreservação resultaram em alta taxa de germinação (81,14%). Esse potencial de germinação, após a exposição ao NL, provavelmente, está relacionado ao baixo teor (5%) de água inicial da semente. Por outro lado, a porcentagem de sobrevivência dos protocormos não criopreservados (8,48%) e criopreservados (11,12%) avaliados cinco meses após a semeadura, foi reduzida. As análises de MEV revelaram que as sementes tem o tegumento persistente, que, apesar de não influenciar o início da germinação, comprime o protocormo ocasionando sua morte. Nas análises morfológicas e histológicas observa-se que o embrião tem uma germinação homogênea, que ocorre aos 7 dias de cultivo. O embrião é formado por protoderme e promeristema. Avaliações ultraestruturais do embrião revelaram que ele é composto principalmente de corpos lipídicos e proteicos e contém alguns pequenos grãos de amido. Os resultados obtidos no presente trabalho, configuram-se como o primeiro estudo de criopreservação de sementes e do processo de germinação de C. crispa. Abstract : Cattleya crispa is an endemic orchid, with geographic distribution restricted to the Atlantic Forest, which is seriously threatened by the loss of habitat. C. crispa is on the Brazilian Red List and is protected by Annex II to the Convention on International Trade in Endangered Species of Wild Fauna and Flora (CITES). The species under study has a use value due to its rare beauty and belongs to the Cattleya genus, which has a large capacity for genetic recombination and has potential for genetic improvement. The objectives of this work were to develop a protocol for cryopreservation of seeds, as well as to study the initial in vitro development, aiming to produce data that support the establishment of sustainable use and conservation strategies for the species. Seeds of C. crispa were cryopreserved by direct immersion in liquid nitrogen, later thawed in water bath, disinfested with sodium hypochlorite and inoculated in MS culture medium. Seeds submitted to cryopreservation resulted in a high germination rate (81.14%). This germination potential, after exposure to NL, is probably related to the low content (5%) of initial seed water. On the other hand, the percentage of survival of non-cryopreserved (8.48%) and cryopreserved (11.12%) protocorms evaluated five months after sowing was reduced. SEM analysis revealed that the seeds have a persistent seed coat which, although it does not influence the germination, compresses the protocorm, causing its death. In the morphological and histological analyzes it is observed that the embryo has a homogeneous germination, which occurs at 7 days of culture. The embryo is formed by protoderm and promeristem. Ultrastructural evaluations of the embryo revealed that it is composed mainly of lipid and protein bodies and contains some small starch grains. The results obtained in the present work, are configured as the first study of seed cryopreservation and the process of germination of C. crispa.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais, Florianópolis, 2019. As bromélias desempenham um importante papel ecológico na manutenção dos ecossistemas. O extrativismo ocasionado pelo seu uso ornamental e a progressiva devastação de seu habitat tem aumentando o número de espécies enquadradas em categorias de ameaça. Entre elas, Vriesea reitzii Leme & Costa e Vriesea philippocoburgii Wawra, ambas epífitas e endêmicas da Mata Atlântica Brasileira. Neste sentido, técnicas de criopreservação representam uma estratégia eficiente para a conservação a longo prazo da diversidade genética destas espécies. Os principais objetivos deste trabalho foram divididos em dois capítulos, sendo: capítulo I: (1) criopreservar cápsulas de V. reitzii e V. philippocoburgii visando eliminar a contaminação durante o estabelecimento in vitro; (2) criopreservar as cápsulas mantendo sua umidade inicial; (3) ilustrar possíveis alterações morfoanatômicas nas sementes decorrentes da criopreservação nestas condições; e (4) comparar as concentrações de poliaminas livres em sementes não criopreservadas e criopreservadas. Capítulo II: (1) desenvolver um protocolo para a criopreservação de culturas nodulares (CNs) de V. reitzii; (2) testar o efeito de diferentes tempos de desidratação em solução de vitrificação (PVS2); (3) avaliar a capacidade das CNs em regenerar microbrotos após a criopreservação; e (4) analisar as características histológicas e ultraestruturais das CNs em diferentes etapas do protocolo proposto. Cápsulas maduras de ambas espécies foram coletas e desinfestadas. Em seguida, foram armazenadas em nitrogênio líquido (+NL) ou em geladeira (-NL). O percentual e o índice de velocidade de germinação foram avaliados durante 21 dias após a inoculação in vitro e o percentual de plântulas normais foi avaliado 60 dias após o cultivo in vitro. CNs induzidas a partir de sementes foram desidratadas por 0, 15, 30, 60 e 90 min. em PVS2 e submetidas ao NL. O percentual de recuperação das CNs após a criopreservação foi avaliado 35 dias após o cultivo in vitro. Aspectos celulares foram analisados em sementes e CNs e as concentrações de poliaminas livres avaliadas nas sementes. Plântulas obtidas a partir da criopreservação das cápsulas não apresentaram contaminação durante o estabelecimento in vitro. Sementes criopreservadas com 29% e 12% de umidade apresentaram maior percentual de germinação, bem como maior índice de velocidade de germinação e maior formação de plântulas normais. Além disso, a criopreservação de sementes com 41 e 55% de umidade acarretou em alterações celulares como plasmólise, intensa vacuolização e descompartimentalização celular. Observou-se concentrações mais elevadas de poliaminas, especialmente putrescina, em sementes criopreservadas. Portanto, essa poliamina pode desempenhar um importante papel na tolerância contra danos decorrentes do congelamento. Na criopreservação de CNs, as maiores taxas de recuperação após o armazenamento em NL foram observados em CNs previamente desidratadas por 15 ou 30 min., 80.0 e 88.7%, respectivamente. CNs desidratadas com PVS2 por 15 min. e cultivadas em meio de cultura suplementado com ANA (2 µM) e BAP (4 µM) foram capazes de regenerar microbrotos após a criopreservação, comprovando a viabilidade do protocolo proposto. Através de análises histológicas e ultraestruturais foram verificadas alterações celulares nos dois tratamentos de PVS2 avaliados (15 e 90 min.). No entanto, a exposição das CNs por 15 min. apresentou menor toxidade, resultando em maiores taxas de recuperação. Este resultado pode estar associado com o maior conteúdo de lipídios e mitocôndrias, bem como grãos de amido e plastoglóbulos nos plastídios, os quais foram observados neste tratamento. A partir dos resultados obtidos, pode-se concluir que a criopreservação de cápsulas, estando as sementes com umidade inferior a 29% (V. reitzii) e com 12% (V. philippocoburgii) é uma estratégia para a conservação destas espécies. Da mesma forma, a criopreservação de CNs de V. reitzii a partir do protocolo de vitrificação proposto mostrou-se eficiente. Abstract : Bromeliads play an important ecological role in maintaining ecosystems. The extractivism caused by its ornamental use and the progressive devastation of its habitat has increased the number of species framed in categories of threat. Among them, Vriesea reitzii Leme & Costa and Vriesea philippocoburgii Wawra, both epiphytes and endemic to the Brazilian Atlantic Rainforest. In this sense, cryopreservation techniques represent an efficient strategy for the long-term conservation of the genetic diversity of these species. The main objectives of this work were divided into two chapters: Chapter I: (1) cryopreserving capsules of V. reitzii and V. philippocoburgii to eliminate contamination during in vitro establishment; (2) cryopreserving the capsules while maintaining their initial moisture; (3) to illustrate possible morpho-anatomical changes in the seeds resulting from cryopreservation under these conditions; (4) to compare the concentrations of free polyamines in non-cryopreserved and cryopreserved seeds. Chapter II: (1) to develop a protocol for the cryopreservation of nodular cultures (NCs) of V. reitzii; (2) to test the effect of different dehydration times on plant vitrification solution (PVS2); (3) to evaluate the ability of NCs to regenerate microshoots after cryopreservation; (4) to analyze the histological and ultrastructural features of NCs at different stages of the proposed protocol. Mature capsules of the two species were collected and disinfested. They were then stored in liquid nitrogen (+ NL) or in refrigerator (-NL). The germination and the germination speed index were evaluated for 21 days after in vitro inoculation and the percentage of normal seedlings was evaluated 60 days after in vitro culture. NCs induced from seeds were dehydrated for 0, 15, 30, 60 and 90 min. in PVS2 and submitted to NL. The recovery percentage of cryopreserved NCs was evaluated 35 days after in vitro culture. Cellular aspects were analyzed in seeds and NCs and the concentrations of free polyamines evaluated in the seeds. Seedlings obtained from the cryopreservation of the capsules did not present contamination during in vitro establishment. Cryopreserved seeds with 29% and 12% moisture presented higher percentage of germination, as well as higher germination speed index and greater formation of normal seedlings. In addition, cryopreservation of seeds with 41 and 55% moisture resulted in cellular alterations such as plasmolysis, intense vacuolization and cellular decompartmentalization. Higher concentrations of polyamines, especially putrescine, were observed in cryopreserved seeds. Therefore, such polyamine may play an important role in freeze tolerance. In the cryopreservation of NCs, the highest recovery rates were observed in NCs previously dehydrated for 15 or 30 min., 80.0 and 88.7%, respectively. NCs dehydrated with PVS2 for 15 min. and cultured in culture medium supplemented with 2 µM of ANA and 4 µM of BAP were able to regenerate microshoots after cryopreservation, proving the viability of the proposed protocol. Through histological and ultrastructural analysis, it was possible to verify cellular changes in the two PVS2 treatments evaluated (15 and 90 min). However, the NC exposure for 15 min. presented lower toxicity, resulting in higher recovery rates. This result may be associated with higher content of lipids and mitochondria, as well as starch grains and plastoglobuli in plastids, which were observed in this treatment. From the results obtained, it can be concluded that the cryopreservation of capsules, being the seeds with humidity below 29% (V. reitzii) and with 12% (V. philippocoburgii) is a strategy for the conservation of these species. In the same way, the proposed vitrification protocol proved to be efficient for the cryopreservation of NCs of V. reitzii.

Araucaria angustifolia (Bertol.) O. Kuntze is one of the most important native species in Southern Brazil. However, its naturally recalcitrant seeds represent obstacles for long-term conservation and thus cryopreservation is a viable alternative for germplasm storing. Embryonic axes (EA) excised from araucaria seeds were encapsulated, dehydrated, and submitted to two cryopreservation methods: flash-cooling by freezing in liquid nitrogen (LN) for 2 h and pre-cooling at – 40 °C, followed by freezing in LN for 2 h. Subsequently, the EA were quickly thawed and assessed for DNA integrity, tetrazolium test, in vitro germination and oxidation occurrence. The DNA of both not cryopreserved and cryopreserved EA maintained their integrity. The tetrazolium test results indicated that the majority of flash-cooled EA were viable. After 15 days of in vitro culture, the EA did not germinate and presented signs of oxidation. Dehydration method by direct plunge in LN is promising for cryopreservation of araucaria EA, as demonstrated through the results of tetrazolium test and the maintenance of total DNA integrity. Araucaria angustifolia (Bertol.) O. Kuntze é uma das espécies nativas do Brasil com maior importância na Região Sul. No entanto, suas sementes são recalcitrantes, constituindo um obstáculo para a sua conservação em longo prazo, sendo a criopreservação uma alternativa viável para o armazenamento de seu germoplasma. Os eixos embrionários (EE) excisados das sementes de araucária foram encapsulados, desidratados e submetidos a dois métodos de criopreservação: o resfriamento rápido, congelando em nitrogênio líquido (NL) durante 2 h, e o pré-resfriamento a - 40 °C, seguido do congelamento em nitrogênio líquido durante 2 h. Posteriormente, os EE foram descongelados rapidamente e avaliados quanto à integridade do DNA pelo teste bioquímico do tetrazólio, germinação in vitro e ocorrência de oxidação. Tanto o DNA dos EE que não foram criopreservados quanto o daqueles que foram criopreservados mantiveram sua integridade. Os resultados do teste de tetrazólio indicaram que a maioria dos EE desidratados pelo congelamento rápido permaneceu viável. Após 15 dias de cultivo in vitro, os EE não germinaram e apresentaram sinais de oxidação. Os métodos de encapsulamento-desidratação seguidos de congelamento rápido são promissores para a criopreservação de EE de araucária, como demonstrado pelo teste de tetrazólio e da manutenção da integridade total do DNA.

O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos de diferentes crioprotetores e da centrifugação do sêmen sobre os parâmetros cinéticos e integridade da membrana do sêmen caprino criopreservado. Quatro bodes foram utilizados, e o sêmen foi colhido por meio de uma vagina artificial. Após colheita e aprovação do sêmen, seis pools foram formados, e cada pool foi dividido em oito alíquotas. O plasma foi retirado de quatro alíquotas por centrifugação (1200 g/10 min) e posteriormente diluído; as quatro alíquotas restantes foram diluídas em Tris-gema de ovo padrão, leite padrão, Tris-gema de ovo teste e diluente a base de leite, sem remoção do plasma seminal. Após a diluição, as amostras foram colocadas em palhetas (0,25 mL), congeladas e armazenadas a -196 °C. As amostras foram descongeladas (37 °C/30 s) e avaliadas imediatamente e duas horas pós-descongelação para determinar a cinética e integridade das membranas plasmática e mitocondrial. Foi observada diferença (p

Introducao Devido a pandemia do novo Coronavirus, a criopreservacao tem sido recomendada para garantir a continuidade do transplante de medula ossea (TMO) alogenico nao aparentado independentemente da fonte de celulas. Porem, a criopreservacao de celulas progenitoras hematopoeticas coletadas por puncao aspirativa da medula ossea (CPH,MO) e menos utilizada e poucos dados estao disponiveis na literatura. Objetivo descrever a experiencia do Centro de Processamento Celular do Cetebio/Fundacao Hemominas com a criopreservacao de CPH,MO para utilizacao terapeutica em TMO. Metodos Trata-se de um estudo do tipo serie de casos e a casuistica foi composta por oito unidades de CPH,MO criopreservadas entre 10/2020 e 06/2021. As unidades de CPH,MO foram submetidas a deseritrocitacao utilizando hidroxietilamido (HES) 450/0,7 e, em seguida, a centrifugacao para desplasmatizacao. O volume da camada leucocitaria foi ajustado para atingir a concentracao de celulas nucleadas final ≤2 × 108 NC/mL apos a adicao da solucao de criopreservacao (5%HES/5%DMSO). As unidades foram congeladas em freezer mecânico a -80°C e armazenadas em tanque a vapor de nitrogenio. Resultados oito unidades de CPH,MO foram criopreservadas para utilizacao em nove pacientes; uma unidade foi dividida para uso em dois pacientes pediatricos irmaos HLA identicos. Uma (11,1%) unidade foi criopreservada para o uso autologo e oito (88,9%) para uso alogenico nao aparentado. Cinco (55,6%) pacientes eram do sexo masculino. A media de idade dos pacientes foi 14,7 ± 19,1 anos (1–42). Um (11,1%) paciente possuia neuroblastoma, um (11,1%) LMC, um (11,1%) LMA, um (11,1%) sindrome de Griscelli, dois (22,2%) sindrome de Wiskott-Aldrich e tres (33,3%) LLA. O volume (mL) medio das unidades pre e pos-processamento foi 756,9 ± 411,7 e 78,7 ± 45,8, respectivamente. O volume (mL) medio de hemacias pre e pos-processamento foi 239,1 ± 150,8 e 27,02 ± 16,9, respectivamente. A media do total de celulas nucleadas (x108) pre e pos-processamento foi 153,07 ± 80,0 e 120,01 ± 67,7, respectivamente. A media de celulas CD34+ viaveis (x106) pre e pos-processamento foi 131,7 ± 74,0 e 120,2 ± 77,8, respectivamente. Quatro (50%) unidades apresentaram teste microbiologico positivo (Staphylococcus hominis, Staphylococcus epidermidis, Corynebacterium sp e Staphylococcus aureus). A viabilidade celular (%) media pos-descongelamento em amostras de segmento foi 66,1 ± 8,5. Os ensaios clonogenicos realizados em amostras pre-processamento (n = 6), pos-processamento (n = 8) e pos-descongelamento (n = 7) apresentaram crescimento positivo. Seis (66,6%) unidades foram liberadas para uso terapeutico, das quais cinco (83,3%) possuimos os dados da enxertia. Nenhum paciente apresentou falha de enxertia ou obito apos a infusao. O tempo medio de enxertia de granulocitos e plaquetas foi 17 ± 5,8 e 19,5 ± 9,2 dias, respectivamente. Discussao A reducao do volume possibilitou a criopreservacao do material, sendo que a recuperacao celular foi satisfatoria. Os testes de controle de qualidade realizados em todas etapas do processo evidenciaram a qualidade e seguranca do procedimento e foram corroborados pelos dados de enxertia. Alertamos, entretanto, sobre a necessidade de cuidados adicionais com os pacientes devido ao volume de hemacias a ser infundido e a contaminacao bacteriana, mais frequentemente observada nas unidades de CPH,MO. Conclusoes A criopreservacao CPH, MO apresentou resultados satisfatorios, demonstrando que a metodologia utilizada e segura e eficiente.

Mestrado em Bioquímica - Bioquímica Clínica O cordão umbilical é, hoje em dia, uma importante fonte de células estaminais. Estas podem ser isoladas a partir do sangue do cordão umbilical (UCB), mas também do próprio tecido (UC), tendo sido desenvolvidas técnicas de criopreservação e bancos para o seu armazenamento. Cada amostra apresenta características diferentes, variando quer no número de células presentes, quer na viabilidade das diferentes populações celulares. Assim, este trabalho consistiu na análise retrospetiva de amostras criopreservadas na Crioestaminal em relação a diferentes fatores, que podem afetar a qualidade das amostras, nomeadamente fatores neonatais como o sexo, peso e idade gestacional, fatores obstétricos, que inclui o tipo de parto e o número de recém-nascidos por parto e fatores maternos como a idade e a presença e/ou desenvolvimento de doença durante a gravidez. Também analisamos fatores relativos à colheita e condições de transporte e a sua relação com a qualidade das amostras. Foram reunidos os dados relativos a 9543 amostras de UCB e 4775 amostras de UC e relacionados através de uma análise estatística. Desta forma, verificou-se que recém-nascidos com maior peso e idade gestacional, bem como o parto vaginal e o nascimento de apenas um bebé se relacionam com uma maior qualidade das amostras de UCB. Também o sexo do recém-nascido e a idade materna mostraram afetar a qualidade destas amostras. Por outro lado, em amostras de UC, recém-nascidos com menor peso e idade gestacional, assim como o parto por cesariana, relacionaram-se com uma maior qualidade deste tipo de amostras. Conclui-se, ainda, que uma redução do intervalo de tempo entre a colheita e o processamento, como também uma otimização do processo de colheita com melhores práticas de desinfeção, poderão contribuir para um aumento da qualidade das amostras. Assim, o estudo destes fatores poderá contribuir para uma melhoria da qualidade de amostras de UCB e UC criopreservadas, e desta forma para um maior sucesso da transplantação. Nowadays, the umbilical cord is considered one of the most important sources of stem cells. These cells can be isolated either from the umbilical cord blood or from the tissue itself, which led to the development of cryopreservation techniques and storage banks. Each sample exhibits different characteristics, varying both in the number of cells and in the viability of several cellular populations. Therefore, this work consisted in the retrospective analysis of various factors, such as neonatal factors like sex, weight and gestational age, obstetric factors which included the type of delivery and the number of newborns by birth and maternal factors like the age and the presence and/or development of diseases during the pregnancy in cryopreserved samples at Crioestaminal. Furthermore, factors associated with sample collection and transport conditions were also analyzed and related with sample quality. Data was gathered from 9543 UCB samples and 4775 UC samples and was later statistically analyzed. In this way, it was observed that newborns with higher weight and gestational age, as well as a vaginal delivery and the birth of only one baby resulted in higher UCB sample quality. Besides this, the newborn’s gender as well as the maternal age also affected the quality of these samples. On the other hand, in UC samples, newborns with a low weight and gestational age, as well as a cesarean delivery, were related with a superior quality in this kind of samples. It was also verified that a reduction of the period between the sample collection and the processing, as well as the optimization of the sample collection process with better disinfection practices led to a quality increase in both types of samples. Ultimately, the study of these factors contributed to a quality improvement of cryopreserved UCB and UC samples, resulting in a higher transplantation success rate.

A criopreservação de sêmen de Curimba (Prochilodus lineatus) é de importância ecológica e comercial. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de diferentes concentrações (2, 5, 8 e 11%) de dimetilsulfóxido (DMSO) diluído em Betsville Thawing Solution (BTS) sobre a qualidade do sêmen de Curimba pósdescongelamento. Foram analisadas a taxa e período de motilidade, viabilidade espermática, integridade da membrana plasmática e do DNA, funcionalidade mitocondrial, e taxa de fertilização e eclosão. A membrana plasmática e a integridade do DNA a uma concentração de DMSO de 11% obtiveram melhores resultados que na concentração de 5% (p

objetivou-se avaliar o efeito da dimetilformamida associada ou não ao glicerol no diluente de sêmen de caprinos antes da criopreservação sobre a longevidade e a funcionalidade da membrana espermática. Ejaculados de quatro caprinos foram coletados e diluídos com Tris diluente. Posteriormente, foram determinados os seguintes tratamentos experimentas: Controle; TG + 2% de dimetilformamida (DMF2); TG + 3% de DMF (DMF3); TG + 4% de DMF (DMF4); TG + 5% de DMF (DMF5); e TG + 2% de glicerol + 2% DMF (DMF2G). As amostras foram resfriadas a 5 °C/2 h, envasadas em palhetas de 0,5 mL e colocadas sob vapor de nitrogênio por 7 min, após este tempo as palhetas foram imersas no nitrogênio liquido. Os tratamentos foram descongelados a 37 ºC/30 segundos. As amostras foram analisadas quanto à longevidade da motilidade progressiva e quanto ao teste hiposmótico. As variáveis foram submetidas à análise de variância e as médias foram comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. A motilidade progressiva dos espermatozoides foi maior ao longo dos 120 min do TTR, nas amostras tratadas com DMF2, quando comparado às demais concentrações testadas (P