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Está bem definido que fatores genéticos têm um papel importante no desenvolvimento do diabetes mellitus (DM) tipo 2 e de suas complicações crônicas. Sendo assim, grandes esforços têm sido feitos para identificar os genes associados com estas doenças. A proteína desacopladora 2 (UCP2) é expressa em diversos tecidos e atua na proteção contra o estresse oxidativo e na regulação da secreção de insulina pelas células-beta pancreáticas e do metabolismo dos ácidos graxos, mecanismos associados com o DM tipo 2, bem como com suas complicações crônicas. Dessa forma, o gene UCP2 é um gene candidato ao desenvolvimento destas doenças. Recentemente, nós relatamos que o haplótipo -866A / 55Val / Ins, constituído pelos polimorfismos - 866G/A, Ala55Val e Ins/Del no gene UCP2, foi associado com risco aumentado para retinopatia diabética (RD) proliferativa, a forma mais severa de RD, em pacientes com DM tipo 1 e 2. No presente estudo, nós avaliamos os efeitos deste haplótipo, bem como dos polimorfismos que o constituem, na expressão do gene UCP2 na retina humana. Nós também avaliamos a expressão do gene MnSOD2, o qual codifica uma enzima antioxidante, de acordo com os diferentes haplótipos e polimorfismos estudados no gene UCP2. Este estudo transversal incluiu 188 doadores cadavéricos de córneas, todos nãodiabéticos. Em um subgrupo de 91 amostras de retina diferenciadas de acordo com a presença do haplótipo mutado (-866A / 55Val / Ins) e dos alelos de risco dos três polimorfismos estudados, as concentrações dos RNAm da UCP2 e MnSOD2 foram avaliadas pela técnica de PCR em tempo real. Portadores do haplótipo mutado (homozigotos + heterozigotos) apresentaram uma menor expressão do RNAm da UCP2 do que portadores do haplótipo de referência (8,4 ± 7,6 vs. 18,8 ± 23,7 unidades arbitrárias; p = 0,046). De acordo com este resultado, os níveis do RNAm da UCP2 também foram menores em portadores dos alelos de risco -866A e 55Val quando comparados aos portadores dos outros genótipos destes polimorfismos (p = 0,010 e p = 0,003, respectivamente). A expressão do gene UCP2 não diferiu significativamente entre portadores do alelo de risco Ins e portadores do genótipo Del/Del (p = 0,556). Indivíduos portadores do haplótipo heterozigoto (-866A 55Val Ins / -866G 55Ala Del), bem como heterozigotos para os três polimorfismos estudados, apresentaram uma expressão gênica aumentada de MnSOD2 (p < 0,050). Nossos resultados indicam que a presença do haplótipo mutado -866A / 55Val / Ins está associada com expressão gênica diminuída de UCP2 na retina humana. Possivelmente, os níveis de expressão gênica da MnSOD2 na retina podem influenciar o efeito da UCP2 na patogênese da RD proliferativa. Entretanto, estudos funcionais adicionais serão necessários para confirmar se mudanças na expressão do gene UCP2 também ocasionam mudanças nos níveis de proteína. It is well established that genetic factors play an important role in the development of type 2 diabetes mellitus (DM) and its chronic complications. Therefore, grate efforts have been made to identify genes associated with these diseases. Uncoupling protein 2 (UCP2) is expressed in several tissues, and acts in the protection against oxidative stress and in the regulation of both insulin secretion by pancreatic beta-cells and fatty acid metabolism, mechanisms associated with type 2 DM pathogenesis as wells as with its chronic complications. So, UCP2 gene is a candidate gene to the development of these diseases. Recently, we reported that the -866A / 55Val / Ins haplotype (constituted by the -866G/A, Ala55Val and Ins/Del polymorphisms in the UCP2 gene) was associated with increased risk for proliferative diabetic retinopathy (DR), which is the most severe form of DR, in both type 1 and type 2 DM patients. In the present study, we evaluated the effects of this haplotype as well as the polymorphisms which constitute it on UCP2 gene expression in human retina. We also evaluated MnSOD2 gene expression, which codifies an antioxidant enzyme, accordingly to different haplotypes and studied polymorphisms in the UCP2 gene. This cross-sectional study included 188 cadaveric cornea donors, all nondiabetic. In a subset of 91 retinal samples differentiated according to the presence of the mutated haplotype (-866A / 55Val / Ins) and risk alleles of the three studied polymorphisms, UCP2 and MnSOD2 mRNA concentrations were measured by real-time PCR technique. Mutated haplotype carriers (homozygous + heterozygous) presented a lower UCP2 mRNA expression than reference haplotype carriers (8.4 ± 7.6 vs. 18.8 ± 23.7 arbitrary units; P = 0.046). Accordingly, UCP2 mRNA levels were also lower in -866A and 55Val allele carriers when compared with carriers of other genotypes of these polymorphisms (P = 0.010 and P = 0.003, respectively). UCP2 gene expression did not differ between Ins allele carriers and Del/Del carries (P = 0.556). Subjects carrying the heterozygous haplotype (-866A 55Val Ins / -866G 55Ala Del) as well as heterozygous for the three studied polymorphisms showed increased MnSOD2 gene expression (P < 0.050). Our results indicate that the presence of the -866A / 55Val / Ins haplotype is associated with decreased UCP2 mRNA expression in human retina. Possibly, MnSOD2 expression levels in retina might influence the UCP2 effect on the pathogenesis of proliferative DR. However, further functional studies will be necessary to confirm if changes on UCP2 gene expression also generate changes on protein levels.

A anemia falciforme é uma doença genética determinada pela homozigose da hemoglobina S (HbS). Essa doença é marcada por variabilidade clínica dependente de fatores hereditários e adquiridos. Três características têm importância na gravidade da evolução clínica: os níveis de hemoglobina fetal (HbF), a concomitância de talassemia alfa e os haplótipos associados ao gene da globina RS. Os haplótipos constituem importante fonte para estudos antropológicos sobre a origem étnica de uma população, além de contribuírem para melhor entendimento e prognóstico da anemia falciforme. Objetivo: Identificar os haplótipos do gene RS e dados hematológicos em indivíduos com anemia falciforme em Campo Grande, Mato Grosso do Sul. Material e métodos: Estudo transversal desenvolvido em indivíduos com anemia falciforme atendidos no Ambulatório de Hematologia de duas instituições públicas. A partir dos leucócitos obtidos do sangue total dos pesquisados foi extraído DNA pelo método fenol/clorofórmio e utilizado para a identificação dos haplótipos por PCR/RFLP. No sangue total foi feita a determinação dos dados hematológicos em contador de células automatizado. A HbF foi quantificada por HPLC. As variáveis analisadas consistiram em dosagem da hemoglobina fetal, eritrograma, contagem de reticulócitos, avaliação dos indicadores de hemólise e identificação dos haplótipos. Resultados: Das 47 amostras sanguíneas, 26 provieram de indivíduos do sexo feminino e 21 do masculino, a idade variou de 3 a 63 anos, com média de (23±12,2 anos). Em relação ao número de cromossomos, houve predomínio de haplótipo República Centro-Africana (CAR) ou Bantu, (69,1%), seguido de Benin (21,3%), de Atípico (8,5%) e de Camarões (1,1%). Houve diferença significativa quando realizada a associação entre níveis de HbF e os tipos de haplótipos. Os parâmetros laboratoriais analisados apresentaram diferença significativa nos indivíduos que fazem uso de hidroxiureia. A média da HbF (15,6±7,4%; n=35) foi significativamente maior nos indivíduos com a terapêutica de hidroxiureia em comparação com os que não fazem uso do medicamento (6,8±5,1%; n=12). Conclusão: Verificou-se neste estudo pioneiro em Campo Grande, Mato Grosso do Sul, que o haplótipo CAR foi o mais frequente, corroborando dados obtidos em outras regiões brasileiras. Sickle-cell anemia, a genetic disease caused by homozygous hemoglobin S (HbS), is characterized by clinical variability contingent on both inherited and acquired traits. Three factors play key roles in determining the severity of the disease’s clinical outcome: fetal hemoglobin (HbF) levels, coexistence of a-thalassemia, and presence of haplotypes associated with the RS-globin gene. Haplotypes are a rich source for anthropological studies on the ethnic origins of a given population, which contribute to improved understanding and better prognosis of sickle-cell anemia. Objective: To identify RS gene haplotypes and hematological features in individuals with sickle-cell anemia in Campo Grande, the capital city of Mato Grosso do Sul state, in West- Central Brazil. Method: This cross-sectional study was conducted on individuals with sickle-cell anemia receiving treatment at the hematology outpatient clinics of two public healthcare institutions. Using the phenol-chloroform method, DNA was extracted from leukocytes obtained from whole blood and employed for identification of haplotypes by PCR-RFLP. Hematological data from whole blood were determined using an automated cell counter. HbF was quantified by HPLC. The variables investigated were fetal hemoglobin levels, erythrogram data, reticulocyte counts, hemolysis indicators, and haplotypes. Results: Of the 47 blood samples investigated, 26 were from females and 21 from males. Ages ranged from 3 to 63 years (mean, 23±12.2 years). With regard to chromosome number, the CAR (or Bantu) haplotype predominated (69.1%), followed by Benin (21.3%), atypical (8.5%), and Cameroon (1.1%) haplotypes. Significant differences were found in the association between HbF levels and haplotypes. Significant differences in laboratory measurements were detected in individuals who were on hydroxyurea. Mean HbF levels (15.6±7.4%, n=35) were significantly higher in subjects undergoing hydroxyurea therapy than in those not using the drug (6.8±5.1%, n=12). Conclusion: This pioneering study in Campo Grande, Mato Grosso do Sul, showed CAR to be the most frequent haplotype, corroborating data obtained from other regions in Brazil.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Haplotypes linked to the βS gene represent patterns of DNA polymorphisms along chromosome 11 of individuals bearing the βS gene. Analysis of haplotypes, in addition to serving as an important source for anthropological studies about the ethnic origin of a population, contributes to a better understanding of the variations in clinical severity of sickle cell anemia. The aim of the present study was to determine βS gene haplotypes in a group of patients with sickle cell anemia treated at the Dalton Barbosa Cunha Hematology Center (Hemonorte) in Natal, Brazil and the Oncology and Hematology Center in Mossoró, Brazil. Blood samples were obtained from 53 non-related patients (27 males and 26 females), aged between 3 months and 61 years (mean age: 16.9 ± 12.1 years). Laboratory analyses consisted of the following: erythrogram, reticulocyte count, hemoglobin electrophoresis at alkaline pH, measurement of hemoglobin A2 and Fetal hemoglobin, solubility test and molecular analysis to determine βS gene haplotypes. DNA samples were extracted by illustra blood genomicPrep Mini Spin kit and βS gene haplotypes were determined by PCR-RFLP, using Xmn I, Hind III, Hinc II and Hinf I restriction enzymes for analysis of six polymorphic restriction sites in the beta cluster. Of 106 βS chromosomes studied, 75.5% were Central African Republic (CAR) haplotype, 11.3% Benin (BEN) and 6.6% Cameroon (CAM). The atypical haplotypes had a frequency of 6.6%. More than half the patients (58.5%) were identified as CAR/CAR genotype carriers, 16.9% heterozygous CAR/BEN, 13.2% CAR/CAM and 1.9% BEN/BEN. Patients with atypical haplotype in one or two chromosomes accounted for 9.5% (CAR/Atp, BEN/Atp and Atp/Atp). The genotype groups showed no statistically significant difference (p < 0.05) in their laboratory parameters. This is the first study related to βS haplotypes conducted in state of Rio Grande do Norte and the higher frequency of Cameroon halotype found, compared to other Brazilian states, suggests the existence of a peculiarity of African origin Os haplótipos do gene βs representam padrões de polimorfismos do DNA ao longo do cromossomo 11 de indivíduos portadores do gene βs. A análise dos haplótipos, além de servir como uma fonte importante para estudos antropológicos acerca da origem étnica de uma população, colabora para uma melhor compreensão da variação de gravidade clínica da anemia falciforme. O presente estudo teve como objetivo determinar os haplótipos do gene βs em um grupo de pacientes portadores de anemia falciforme atendidos no Ambulatório de Hematologia do Hemocentro Dalton Barbosa Cunha (Hemonorte) - Natal/RN e no Centro de Oncologia e Hematologia de Mossoró/RN. Foram obtidas amostras sangüíneas de 53 pacientes não aparentados (27 do sexo masculino e 26 do sexo feminino), com idade variando entre 3 meses e 61 anos (média de idade: 16,9 ± 12,1 anos). As análises laboratoriais consistiram em: eritrograma, contagem de reticulócitos, eletroforese de hemoglobina em pH alcalino, dosagem de hemoglobinas A2 e Fetal, teste de solubilidade e análise molecular para determinção dos haplótipos βs. O DNA foi extraído pelo kit illustra blood genomicPrep Mini Spin e a determinação dos haplótipos do gene S foi realizada por PCR-RFLP, utilizando as endonucleases de restrição Xmn I, Hind III, Hinc II e Hinf I para análise de 6 sítios polimórficos do cluster β. Os resultados observados mostraram, em relação ao número de cromossomos, o predomínio do haplótipo CAR (75,5%), frente aos haplótipos Benin (11,3%), e Camarões (6,6%). Os haplótipos atípicos tiveram freqüência de 6,6%. Com relação aos genótipos, mais da metade dos pacientes (58,5%) foram identificados como portadores do genótipo CAR/CAR. O segundo mais freqüente foi o CAR/BEN (16,9%), seguido de CAR/CAM (13,2%) e BEN/BEN (1,9%). Os pacientes com haplótipo atípico em um ou nos dois cromossomos representaram 9,5% (CAR/Atp, BEN/Atp e Atp/Atp). Não houve diferença estatisticamente significativa das médias dos parâmetros laboratoriais entre os diferentes grupos de genótipos comparados. O presente trabalho é o primeiro estudo relacionado aos haplótipos βs realizado no estado do Rio Grande do Norte e o encontro de uma maior freqüência do haplótipo Camarões, em relação a outros estados do Brasil, sugere a existência de uma peculiaridade da origem africana no estado

Objetivo: verificar associações entre os genótipos de -Tal e os haplótipos do agrupamento de genes da S-globina com características clínicas e hematológicas em uma população de crianças triadas pelo Programa Estadual de Triagem Neonatal de Minas Gerais (PETN-MG) e acompanhadas no Hemocentro de Belo Horizonte (HBH) da Fundação HEMOMINAS. Métodos: coorte retrospectiva, com amostra aleatorizada, na qual foram incluídas crianças triadas pelo PETN-MG e encaminhadas ao HBH, com perfil eletroforético compatível com anemia falciforme (SS ou S0-talassemia), nascidas no período entre 01/01/1999 e 31/12/2006. Os dados foram coletados nos prontuários médicos do HBH. Os pacientes foram acompanhados por, no mínimo, dois anos e meio, até 30/06/2009. A genotipagem de -Tal foi realizada por PCR multiplex (alelos: -3.7; -4.2; --SEA; --FIL; --MED; -()20.5 e --THAI). Os haplótipos S foram determinados por PCR-RFLP. Resultados: Foram analisadas 221 crianças, sendo 119 (53,8%) do sexo feminino e 102 (46,2%), do masculino. A idade variou entre 2,5 e 10,4 anos. Duzentos e oito (94,1%) eram homozigotos para o alelo S e 13 (5,9%) possuíam o genótipo S0-tal. Dos 208 sujeitos SS, 58 (27,9%) eram heterozigotos (-3.7/) e três (1,4%) homozigotos para -Tal (-3.7/-3.7). Dos 13 sujeitos S0-tal, cinco (38,5%) eram heterozigotos (-3.7/). Entre os 208 sujeitos SS, havia 82 (39,43%) com o genótipo CAR/CAR, 69 (33,17%) Ben/CAR, 49 (23,56%) Ben/Ben, dois (0,96%) CAR/Atp, dois (0,96%) Ben/Atp, dois (0,96%) Árabe-Indiano/Ben e dois (0,96%) não puderam ser caracterizados. Dos 412 cromossomos S genotipados nos sujeitos homozigotos (Hb SS), 57% eram do tipo CAR, 41,5% eram Ben, 0,5% eram Árabe-Indiano e 1% eram atípicos. Nos sujeitos homozigotos, a presença de -Tal associou-se significativamente com a diminuição dos níveis de VCM, HCM, leucócitos e reticulócitos, e não influenciou os níveis de Hb total, Hb F e plaquetas. Não houve associação significativa entre haplótipos S e os níveis médios de Hb total, Hb F, VCM, HCM, leucócitos e reticulócitos. O nível de plaquetas foi significativamente maior no grupo com o genótipo Ben/CAR quando comparado com o Ben/Ben e CAR/CAR. Não houve associação significativa entre a presença de -Tal e a frequência de episódios de síndrome torácica aguda, transfusões sanguíneas e sequestro esplênico agudo. A presença de -Tal foi fortemente associada com a diminuição do risco de doença cerebrovascular (Doppler transcraniano alterado ou AVC clínico; P=0,007). Não xii houve associação significativa entre os haplótipos S e a frequência de episódios de síndrome torácica aguda, transfusões sanguíneas, sequestro esplênico agudo e doença cerebrovascular. Conclusões: A associação significativa mais importante encontrada foi a da -Tal com diminuição do risco de doença cerebrovascular. A presença ou não de -Tal bem como o haplótipo S não permitem prever as características clínicas da doença. Outros fatores moduladores devem ser estudados para definir subfenótipos da doença e, assim, serem utilizados em conjunto como ferramenta clínica no acompanhamento dos pacientes. Ressaltese que a amostra de crianças proveio de uma única fonte, foi aleatorizada e o acompanhamento seguiu o mesmo protocolo de tratamento num único hemocentro, o que reforça as conclusões do estudo. Objectives: To examine associations between the alpha-thalassemia (-Thal) genotypes and the S gene cluster haplotypes (S haplotypes) with clinical and hematological features in a population of children derived from the Newborn Screening Program of Minas Gerais (NSPMG) and followed-up at the Blood Center of Belo Horizonte (HBH) of HEMOMINAS Foundation. Methods: children with electrophoretic profile compatible with sickle cell anemia (SS or S0-thalassemia) screened by NSP-MG between 01/01/1999 to 12/31/2006 and followed-up at HBH were included in a randomized retrospective cohort study. Data were collected from patients medical records at HBH. All patients were followed-up for a minimum of two years and a half, up to 6/30/2009. Genotyping of -Thal was performed by multiplex PCR (alleles: -3.7; -4.2; --SEA; --FIL; --MED; -()20.5 e --THAI). S haplotypes were determined by PCR-RFLP. Results: 221 children were analyzed, 119 (53.8%) females and 102 (46.2%) males. The age ranged from 2.5 to 10.4 years. Two hundred and eight (94.1%) were homozygous for the S allele and 13 (5,9%) were S0-thal. Of the 208 SS subjects, 58 (27.9%) were heterozygous (-3.7/) and three (1.4%) homozygous for -Thal (-3.7/-3.7). Of the 13 S0-thal subjects, five (38.5%) were heterozygous (-3.7/). Among the 208 SS subjects, 82 (39.43%) were CAR/CAR, 69 (33.17%) Ben/CAR, 49 (23.56%) Ben/Ben, two (0.96%) CAR/Atp, two (0.96%) Ben/Atp, two (0.96%) Arab-Indian/Ben and two (0.96%) could not be genotyped. Of 412 S chromosomes genotyped in homozygous subjects for S hemoglobin (SS), 57% were CAR type, 41.5% were Ben, 0.5% were Arab-Indian e 1% were atypical. In homozygous subjects for S hemoglobin, the presence of -Thal was significantly associated with decreased levels of MCV, MCH, WBC and reticulocytes, and not with the levels of total Hb, Hb F and platelets. There was no significant association between S haplotypes and total Hb, Hb F, MCV, MCH, WBC and reticulocyte levels. Platelet count was significantly higher in the group with Ben/CAR genotype when compared with the Ben/Ben and CAR/CAR. There was no significant association between the presence of -Thal and the frequency of episodes of acute chest syndrome, blood transfusions and acute splenic sequestration. The presence of -Thal was strongly associated with decreased risk of cerebrovascular disease (abnormal transcranial Doppler or clinical stroke; P=0.007). There was no significant association between S haplotypes and the frequency of episodes of acute xiv chest syndrome, blood transfusions, acute splenic sequestration and cerebrovascular disease. Conclusions: The most important significant association found was between co-inheritance of -Thal and decreased risk of cerebrovascular disease. Neither the presence/absence of - Thal nor S haplotypes can alone predict the clinical course of the disease. Other modulating factors should be investigated to subphenotype the disease and thus be used together as a clinical tool in monitoring patients. It should be noted that the sample of children has come from a single source and was randomized; follow-up was uniform and done in a single blood center, what reinforces the conclusions of the study.

INTRODUCCIÓN. La Pentasomia del X (49,XXXXX) es una alteración cromosómica poco frecuente, que afecta a mujeres y fue descrita en 1963 por Kesaree y Wooley. Hasta la fecha se han reportado menos de 30 casos en la literatura. Se presenta un caso de pentasomia del cromosoma X, y mediante biología molecular se determino el origen materno de los cromosomas X adicionales. CASO CLÍNICO: Paciente de 28 meses, con talla baja proporcionada, braquicefalia, fascies característica, genitales externos femeninos con labios mayores hipoplásicos, braquidactilia, clinodactilia bilateral del quinto dedo, luxación de rodilla derecha, deformidad en varo. Se realizó cariotipo en sangre periférica que reportó un complemento cromosómico 49,XXXXX. MATERIALES Y MÉTODOS: Se realizó extracción de ADN y PCR para la amplificación de ocho microsatélites o STRs tetra y dinucleotídicos situados a lo largo del cromosoma X. Los productos amplificados se analizaron en el secuenciador ALF EXPRESS. Con la información alélica se realizó la construcción del haplotipo y el análisis de dosis génica mediante la determinación del área bajo la curva. RESULTADOS Y DISCUSIÓN: El análisis de los 8 STRs realizados en la paciente y sus padres, permitió establecer que los cromosomas X extras corresponden a información alélica heredada de la madre. Se analizan los resultados y los eventos que se han documentado como relacionados con los fenómenos de no disyunción. CONCLUSIÓN: El origen de la doble no disyunción que generó la pentasomia es materna, en donde un ovulo tetrasómico, con cuatro copias de cromosoma X fue fecundado con un espermatozoide monosómico normal.

BACKGROUND: The genetic contribution to stroke is well established but it has proven difficult to identify the genes and the disease-associated alleles mediating this effect, possibly because only nuclear genes have been intensely investigated so far. Mitochondrial DNA (mtDNA) has been implicated in several disorders having stroke as one of its clinical manifestations. The aim of this case-control study was to assess the contribution of mtDNA polymorphisms and haplogroups to ischemic stroke risk. METHODS: We genotyped 19 mtDNA single nucleotide polymorphisms (SNPs) defining the major European haplogroups in 534 ischemic stroke patients and 499 controls collected in Portugal, and tested their allelic and haplogroup association with ischemic stroke risk. RESULTS: Haplogroup H1 was found to be significantly less frequent in stroke patients than in controls (OR = 0.61, 95% CI = 0.45-0.83, p = 0.001), when comparing each clade against all other haplogroups pooled together. Conversely, the pre-HV/HV and U mtDNA lineages emerge as potential genetic factors conferring risk for stroke (OR = 3.14, 95% CI = 1.41-7.01, p = 0.003, and OR = 2.87, 95% CI = 1.13-7.28, p = 0.021, respectively). SNPs m.3010G>A, m.7028C>T and m.11719G>A strongly influence ischemic stroke risk, their allelic state in haplogroup H1 corroborating its protective effect. CONCLUSION: Our data suggests that mitochondrial haplogroup H1 has an impact on ischemic stroke risk in a Portuguese sample.

A Península Ibérica é a região onde se encontra a maior diversidade genética da abelha melífera (Apis mellifera L.) em toda a Europa. Enquanto as populações de abelha melífera residentes em Espanha estão bem caracterizadas, a composição genética das populações portuguesas é virtualmente desconhecida. Neste estudo amostraram-se 322 colónias de abelhas da costa litoral portuguesa, de 90 concelhos pertencentes aos distritos de Viana do Castelo, Braga, Porto, Aveiro, Viseu, Coimbra, Leiria, Lisboa, Santarém, Setúbal, Beja e Faro. O ADN foi extraído pelo método Chelex tendo a identificação dos haplótipos sido feita pelo teste Dra I. Este teste consiste na amplificação por PCR da região intergénica COI-COII do ADN mitocondrial seguida de digestão com a enzima Dra I. Os resultados mostraram que existe uma grande variabilidade mitocondrial ao longo da costa atlântica portuguesa a qual é essencialmente africana com 96% dos haplótipos identificados. De facto foram identificados 20 haplótipos, 13 pertencentes à linhagem Africana (A), 1 haplótipo pertencente à linhagem da Europa Ocidental (M), 1 haplótipo pertencente à linhagem da Europa Oriental (C) de Apis mellifera e 5 novos haplótipos a aguardar sequenciação. A dominância da linhagem africana neste canto da Península Ibérica é congruente com o padrão clinal de orientação nordeste-sudoeste encontrado para Espanha. Dentro da linhagem africana, a sub-linhagem AI é a mais frequente (59,54% do total da linhagem A), seguida da sub-linhagem AIII (25,55% do total da linhagem A) e por último, da sub-linhagem AII com apenas 14,91% do total da linhagem A. The Iberian Peninsula is the region of Europe where is found the greatest genetic diversity in honey bees (Apis mellifera L.). While the honey bee populations in Spain are well characterized, the genetic composition of the Portuguese populations is virtually unknown. In this study 322 colonies were sampled along the costal lane of Portugal representing 90 counties belonging to the districts of Viana do Castelo, Braga, Porto, Aveiro, Viseu, Coimbra, Leiria, Lisboa, Santarém, Setúbal, Beja e Faro. The DNA was extracted following the Chelex method and the Dra I test was used to identify the haplotypes. This test consists of PCR amplification of the intergenic COI-COII mtDNA region, followed by a digestion of the amplified product with the Dra I enzyme. The results indicate a high level of mtDNA diversity along the Portuguese atlantic coast. In fact, 20 haplotypes were identified, 15 of wich belong to the African evolutionary lineage (A); 1 to the western European lineage (M); 1 to the eastern European and northern Mediterranean lineage (C) and 5 new haplotypes wich will be sequenced. The dominium of the African lineage on this corner of the Iberian Peninsula is congruent with the north-east-south-west cline found in Spain. Within the African evolutionary lineage, the sub-lineage AI is the most frequent (59,54% of the total of the African evolutionary lineage), followed by the sub-lineage AIII (25,55% of the total of the African evolutionary lineage) and the last, sub-lineage AII with only 14,91% of the total of the African evolutionary lineage.

Dissertação de Mestrado em Genética Molecular, Comparativa e Tecnológica Introdução: A Espondilite Anquilosante (EA) é uma doença reumática inflamatória com um componente hereditário muito significativo e com uma prevalência global muito similar à artrite reumatóide. A forte associação com o alelo HLA-B27 é conhecida desde a década de 70. Existem evidências de que múltiplos genes MHC e não MHC possam exercer influência em diferentes aspectos da doença. Objectivos: A presente investigação teve como principais objectivos investigar as associações individuais de alelos HLA classe I/II e de haplotipos MHC estendidos (HLA-A/B*27/-Cw/-DRB1/-DQB1) com a susceptibilidade e com características fenotípicas da EA. Determinar a frequência dos subtipos B*27 na população Portuguesa, estabelecendo possíveis associações entre estes polimorfismos e a doença. Métodos: Recrutaram-se 188 pacientes em vários centros de reumatologia nacionais segundo os critérios de Nova Iorque modificados (1984). O grupo controlo (n=189) foi seleccionado a partir do registo nacional de dadores de medula óssea do Centro de Histocompatibilidade do Sul. Neste estudo, apenas indivíduos HLA-B27 positivos (doentes e controlos) foram considerados. Ambos os grupos foram genotipados para os loci HLA-A, -B, -Cw, -DRB1 e -DQB1 através da PCR-rSSOP. A alta resolução foi realizada de forma a determinar os subtipos B*27 num subgrupo de 138 doentes e 189 controlos. Os haplotipos foram estimados pelo algoritmo EM, do software Arlequim v3.11. As comparações caso-controlo foram efectuadas através de tabelas de contingência; as associações entre características clínicas e genéticas foram determinadas através de regressões lineares e logísticas binomiais, utilizando o software Stata10.1. Resultados: Não se observaram associações entre os loci HLA em estudo e a susceptibilidade para a EA. Na nossa população, os alelos B*27 relacionados com a doença aparecem frequentemente associados com o haplotipo: A*02/B*27/Cw*02/DRB1*01/DQB1*05 (p=0,000; OR=39,06; IC 95% [2,34-651]). As correlações entre variáveis clínicas e genéticas efectuadas revelaram a presença de vários alelos e haplotipos associados com as características fenotípicas da doença. O haplotipo A*02/B*27/Cw*01/DRB1*08/DQB1*04 e o alelo DQB1*04 parecem exercer um efeito “protector” em relação à gravidade, repercussão funcional e radiológica. Os alelos B*2705 e B*2702 foram os subtipos mais frequentes na população Portuguesa, neste caso não se verificaram diferenças significativas na distribuição dos subtipos B*27 entre grupo de doentes e controlos. Conclusões: Na população Portuguesa identificou-se um haplotipo capaz de conferir susceptibilidade para a doença, assim como, um haplotipo e um alelo que aparentemente poderão conferir menor gravidade da doença. Reafirma-se a importância do alelo DRB1*08 como factor de risco para uveíte. Os subtipos B*27 encontrados na nossa população estão em concordância com os que são referenciados na literatura para populações Caucasianas. A identificação e descrição de variantes genéticas em genes-alvo poderão contribuir para a caracterização da susceptibilidade para esta doença, assim como para a definição de modelos de prognóstico e de terapia. Introduction: The Ankylosing Spondylitis (AS) is an inflammatory rheumatic disease with a significant hereditary component, and with an overall prevalence very similar to rheumatoid arthritis. The strong association with the HLA-B27 allele has been known since the '70s. There is evidence that multiple MHC and non MHC genes may influence on different aspects of the disease. Objectives: This study aims to investigate the individual associations of HLA class I/II and MHC extended haplotypes (HLA-A/B*27/-Cw/-DRB1/-DQB1) with susceptibility and phenotypic features of AS. In addition to determine the frequency of B*27 subtypes in the Portuguese population and establish possible associations between these polymorphisms and disease. Methods: A total of 188 patients were recruited in several rheumatology outpatient clinics from different areas of the country, according to the modified New York (1984). The control group (n=189) were randomly selected from the bone marrow donors registry of Centro de Histocompatibilidade do Sul. In this study, only HLA-B27 positive individuals (patients and controls) were considered. Both groups were genotyped for the loci HLA-A, -B, -Cw, -DRB1 and -DQB1 by PCR-rSSOP. The high resolution was performed to determine the B*27 subtypes in a subgroup of 138 patients and 189 controls. The extended HLA haplotypes were estimated by EM algorithm using the Arlequin v3.11 software. The case-control comparisons were made using contingency tables; the associations between clinical and genetic characteristics were determined through linear regression and logistic binomial, using the Stata10.1 software. Results: No association was seen between HLA loci and AS. In our population, the B*27 alleles conferring susceptibility to AS appear to be more frequently carried by the haplotypes A*02/B*27/Cw*02/DRB1*01/DQB1*05 (p=0,000; OR=39,06; IC 95% [2,34-651]). Correlations between clinical and genetic features revealed the presence of multiples alleles and haplotypes associated with phenotypic features of the disease. The haplotype A*02/B*27/Cw*01/DRB1*08/DQB1*04 and DQB1*04 seems to confer protection for the severity, functional and radiological repercussion. The B*2705 and B*2702 subtypes were the most frequent in the Portuguese population; no significant difference was found in the distribution of these B*27 subtypes between AS patients and controls. Conclusions: We identified, in the Portuguese population, a haplotype that seems to confer susceptibility to disease. In addition we identified a haplotype and an allele that apparently may have a protective role in disease severity. We confirm the importance of the DRB1*08 allele as a risk factor for uveitis. The B*27 subtypes found in our population are in agreement with those reported in the literature for Caucasian populations. The identification of genetic variants of target genes could be very useful in the characterization of susceptibility to the disease and establishing models of prognosis and guidance of therapy.

A Península Ibérica, pela sua proximidade com o Norte de África, explica a presença de linhagem africana na Europa. A abelha que habita nesta região é a Apis mellifera iberiensis Engel 1999. A Península Ibérica, representa um dos redutos das populações de abelhas que povoam a Europa, quer pela sua localização quer pelas barreiras naturais que a limitam. As abelhas ibéricas são o resultado da interacção entre as abelhas de linhagem Europeia (M) que sobreviveram ao último fenómeno glaciar e as abelhas da linhagem Africana (A) que colonizaram o sudoeste europeu. Partindo dos estudos que caracterizaram o perfil evolutivo da abelha A. m. iberiensis em Espanha, foram aplicadas as mesmas metodologias de análise, em território Português, ao longo dos distritos do interior, acompanhando a linha fronteiriça entre os dois países. Este trabalho permitiu caracterizar, por análise molecular, a linhagem materna predominante nas populações. Tal como em Espanha, a linhagem A de origem Africana é dominante, e está presente em mais de 93% das colónias. É evidente a distribuição clinal com orientação Sul-Norte de substituição gradual da sub-linhagem AI pela sub-linhagem AIII. A sublinhagem AII, a qual é dominante no Norte de África, também está presente em Portugal, contudo sem se destacar perante as demais. A frequência observada de haplótipos pertencentes à linhagem C foi muito baixa (0,02%), pelo que concluímos que a poluição genética, por linhagens exóticas, no interior de Portugal continental é muito reduzida. Nos nove distritos estudados, a diversidade genética é elevada, com valores máximos de 0,92 no distrito de Castelo Branco. É também neste distrito que cinco novos haplótipos foram identificados, entre os nove que não se encontraram referenciados para o território Espanhol. Esta variabilidade genética pode suportar a hipótese de que na Península Ibérica a distribuição dos haplótipos a nível regional, está associada às condições climáticas locais, aos ecossistemas e às práticas apícolas (De La Rúa et al., 2009b). Na área de estudo, que representa aproximadamente 10% do território espanhol, é possível correlacionar a distância genética com a distância geográfica das populações. As maiores distâncias genéticas calculadas pelo índice de Nei, foram observadas entre as populações de Vila Real, Santarém e Faro, que representam exactamente os distritos mais norte, central e sul de Portugal continental. The Iberian Peninsula, by its proximity with the North of Africa, explains the presence of the African honey bee lineages in Europe. The resident honey bee is the Apis mellifera iberiensis Engel 1999, formerly known as A. m. iberica Goetze 1964. The geographical position of the Iberian Peninsula, and its natural barriers, represent the last refuge for the European honey bees. The Iberian honey bees are the result of the interaction between the M lineage from Europe, and the A Lineage from Africa, that colonised the Eastern of Europe. Following previous studies which characterized the patterns of genetic diversity of A. m. iberiensis in Spain, the same methodology was applied to honey bee populations across the Portuguese border with Spain. This study allowed characterization of the predominant maternal lineage among the Portuguese honey bee population. As it was reported in Spain, the A lineage is dominant with over 93% of honey bee colonies belonging to this lineage. It is also remarkable the clinal distribution of the haplotypes. The sublineage AI, which is dominant in southern Portugal, is gradually replaced by sublineage AIII in the north. The AII sublineage, which is dominant North Africa, is also present in Portugal, but in lower frequencies than the others sublineages. The frequency of haplotypes belonging to the C lineage was very low (0,02%). With this result, we can conclude that genetic pollution, by exotic honey bee lineages, is very low in continental Portugal. The genetic diversity is high in the nine geographical regions studied. The highest value was observed in Castelo Branco (0,92), in which it was also found the largest number of new haplotypes (5), that were never identified in previous studies. This genetic variability might support the hypothesis that at the Iberian Peninsula the haplotypic distribution has a direct relationship with the environmental conditions, the ecosystems and the beekeeping practices (De La Rúa et al., 2009b). This study was focused in a small area (approximately 10% of the Spain). Nevertheless it was possible to establish a direct relationship between the genetic distance (estimated by Nei’s Indice), and the geographical distance of the populations. The higher values for genetic distance were found between Vila Real, Santarém and Faro populations, which are located exactly at the North, Center and South of Portugal.

Los marcadores del cromosoma Y se han descrito como una herramienta útil en la genética forense de hoy debido a que ayudan a complementar casos de identificación y abuso sexual. Se determinaron los haplotipos de 406 individuos para 17 marcadores Y-STR, teniendo en cuenta los marcadores del Haplotipo Mínimo Europeo (DYS19, DYS385 a/b, DYS389I, DYS389II, DYS390, DYS391, DYS392 Y DYS393) y adicionalmente se analizaron los sistemas DYS438, DYS439, DYS437, DYS448, DYS456, DYS635 y Y-GATA-H4. Empleando el kit Y FILER de Applied Biosystems. Se observaron 378 haplotipos, de los cuales 353 son haplotipos únicos y los 25 restantes se encuentran representados 2, 3 o 4 veces para los haplotipos más frecuentes. Este hallazgo confirma que el 93,4% de los individuos analizados no están emparentados por línea paterna que el muestreo realizado fue al azar y que son lo suficientemente heterogéneos para ser utilizados en casos de rutina en los laboratorios de genética forense. La presencia de un gran número de individuos con haplotipos únicos (353/406) refleja la gran diversidad genética que presenta esta muestra tomada a partir de las poblaciones de Bogotá y Santander La diversidad haplotipica total para las poblaciones estudiadas fue de 0,9996 supera las encontradas para otros estudios poblacionales. Este hallazgo puede deberse a que en la mayoría de estudios poblacionales realizados en cromosoma -Y hasta el momento solo han utilizado los marcadores que conforman el haplotipo mínimo europeo (9 marcadores) y en otros estudios el haplotipo mínimo extendido (11 marcadores) y no se han utilizado los 17 marcadores analizados en este estudio. Se ha observado que a medida que se incrementa el número de marcadores Y-STR, la diversidad haplotipica también aumenta. Utilizando los 17 marcadores STR del cromosoma ?Y se obtuvo una amplia heterogeneidad genética en las poblaciones de Bogotá y Santander, lo que hace que los datos reportados en este estudio sirvan como herramienta poblacional de referencia para análisis con fines forenses y de filiación con marcadores de este cromosoma en las poblaciones de Bogotá y Santander. Magíster en Ciencias Biológicas Maestría

Spodoptera frugiperda es un insecto migratorio que es considerado una plaga importante en cultivos de maíz, sorgo, arroz, algodón y pastos en Norte y Sur América. Esta especie está compuesta por dos biotipos, “arroz y maíz” que son idénticos morfológicamente pero que difieren en características genéticas, fisiológicas y de asilamiento reproductivo. En estos dos biotipos se han secuenciado los genes del citocromo oxidasa I, II e ITS1 en diferentes poblaciones de Estados Unidos y Brasil. Sin embargo, este tipo de estudios no se ha llevado a cabo en Colombia. A partir de la secuenciación de un fragmento del gen mitocondrial COI en 40 individuos para el Tolima y 102 individuos para Colombia, se encontró: 18 haplotipos en Tolima y 43 dentro de Colombia. Se determinó que existe una mayor frecuencia del haplotipo 1 en los cultivos evaluados tanto para Tolima como para Colombia, indicando que éste es probablemente el haplotipo blanco dentro de los programas de monitoreo de esta plaga. Los resultados del AMOVA mostraron que los haplotipos de S. frugiperda no producen poblaciones genéticamente estructuradas para los cultivos analizados dentro del departamento de Tolima (FST = 0.000001, P 0.005). Contrario a esto, si se encontró estructuración genética para los departamentos colombianos y las poblaciones norteamericanas (FST = 0.76812, P 0.001). El árbol de N-J para Tolima tuvo una tendencia a asociar híbridos y biotipos según el origen materno del gen COI. El árbol para Colombia no generó agrupaciones ni por asociación a planta hospedera ni por áreas geográficas. Las redes de expansión mínima corroboraron la alta frecuencia del haplotipo 1, encontrada con otro tipo de análisis. Los resultados de este estudio sugieren que este método de secuenciación es útil para establecerlo en el sistema de monitoreo de esta especie. / Abstract Spodoptera frugiperda is a migratory insect that is considered a major pest in corn, sorghum, rice, cotton and pasture in North and South America. This species comprises two biotypes "corn rice" that are morphologically identical but differ in genetic characteristics, physiological and reproductive isolation. These two biotypes have sequenced the genes of cytochrome oxidase I, II and ITS1 in different populations of the United States and Brazil. However, such studies have not been carried out in Colombia. From the sequencing of a fragment of mitochondrial COI gene in 40 individuals for the Tolima and 102 individuals in Colombia, was found: 18 and 43 haplotypes in Tolima in Colombia. It was determined that there is a higher frequency of haplotype 1 in all crops both to Colombia Tolima, indicating that this is probably the haplotype white in monitoring programs for this pest. The results of AMOVA showed that the haplotypes of S. frugiperda populations that are genetically not structured to produce the crops surveyed in the department of Tolima (FST = 0.000001, P 0,005). Contrary to this, if genetic structure was found to the Colombian departments and American populations (FST = 0.76812, P 0.001). The NJ tree for Tolima had a tendency to associate hybrid biotypes according to the maternal origin of the COI gene. The tree for Colombia did not produce groupings or by association with host plant or geographical areas. The minimum spanning networks confirmed the high frequency of haplotype 1, found with other types of analysis. The results of this study suggest that this method of sequencing is useful to set the monitoring system of this species. Maestría

El ADN mitocondrial de Apis mellifera fue estudiado en 105 colmenas colectadas de 7 zonas geográficas colombianas asociadas a 14 departamentos. Se amplificó mediante PCR un fragmento de la región intergénica ARNtleu y de la citocromo oxidasa II (COII), usando posteriormente la endonucleasa DraI. Tras la digestión con la enzima DraI, se identificaron 13 haplotipos, 8 asociados al linaje africano A (con 90,5% del total para A1, A2, A4, A5, A6, A8, A9 y A13), 4 al linaje europeo M (7,6%, M2, M4, M5 y M7) y 1 al C de Europa del Este (C1 con 1,9%). La presencia de los 8 haplotipos A diferentes para las abejas de Colombia, sugiere que ha habido más de un episodio de hibridación, introgresión y expansión del fenómeno de africanización en el territorio colombiano, aspecto que supone existan otros haplotipos en poblaciones no incluidas en el estudio. El gradiente de distribución del linaje africano, esta representado principalmente por el haplotipo A1, desde la Costa Caribe colombiana al centro del país, donde se distinguen además los haplotipos A4 y A6. Los linajes europeos no se ven representados de manera importante en la población estudiada, por ello se demuestra que la actividad apícola colombiana muestra una marcada dependencia de colonias africanizadas The mitochondrial DNA of Apis mellifera, sampled in 105 beehives and 7 geographical zones associate to 14 localities in Colombia have been studied. A fragment of the intergenic region between the RNAtleu and the subunit II of the cytochrome oxidase gene was amplified by PCR and digested with the endonuclease DraI. Thirteen haplotypes were identified: eight belonging to the African lineage A (90,5% for A1, A2, A4, A5, A6, A8, A9 and A13), 4 to European lineage M (7,6% M2, M4, M5 and M7) and 1 to C (C1, 1,9%), of the east European lineage. The presence of eight different A haplotipes, suggests the occurrence of more than one episode of hybridization, introgression and expansion of the africanized phenoma which suggests the presence of other haplotypes in other populations not included in the study. The gradient of distribution of African lineage is represented by the A1 haplotype, to the center of the country from the Caribbean coast with A4 and A6 haplotypes. The european lineages, are not represented significantly on the population studied. Colombia beekeeping activities depend on the africanized honeybee

The angular leaf spot, incited by the fungus Pseudocercospora griseola (Sacc.) Crous & U. Braun is one of the major diseases that affect the culture of the bean, can be found in all producing regions, especially when the culture is subjected to condition of mild temperatures in irrigated crops. This condition coupled with the use of susceptible cultivars favors the occurrence of the disease causes losses in production reaching 80%. An option to control the disease is the use of resistant cultivars. However, the efficiency in the use of resistance depends on knowledge of pathogenic variability and geographical distribution of the pathogen. Several studies have shown the extensive pathogenic variability of P. griseola and their co-evolution with the Andean and Mesoamerican gene pools of common bean. By the process of co-evolution, populations of P. griseola can also be divided into two gene pools: Andean (P. griseola formae griseola) that had parallel evolution with varieties of Andean origin beans, being able to bring the disease only in Andean beans; and Mesoamerican (P. griseola formae mesoamericana) that had parallel evolution with varieties of Mesoamerican origin beans, being able of inciting disease in Mesoamerican beans and also in some Andean beans. The main objectives of this study were characterized isolates of P. griseola, from nine cities in three regions of Minas Gerais State - Brazil, using the differential varieties; evaluate sources of resistance to the pathogen used by the Beans Improvement Program of BIOAGRO/UFV against these isolates; and, through the ITS region (ITS1-5,8S-ITS2) of the rDNA gene cluster, to characterize the genetic diversity of 48 isolates of P. griseola, using the universal primers ITS1 and ITS4. With the support of differential varieties were characterized 31 isolates monosporic of P. griseola, obtaining 15 distinct pathotypes, which demonstrates the highvariability of this pathogen. The pathotype 63-63 was the most frequent with 12 of the 31 isolates characterized and was detected in seven of the nine cities visited. The pathotype 63-23 occurred in three cities with the frequency of three isolates, the pathotypes 63-7, 15-7 and 47-39 occurred in two cities each with a frequency of two isolates and the other occurred in a single city with the frequency of one isolate. The fact that several isolates were characterized as pathotype 63-63, in other words, which present reaction of compatibility with all differential varieties, suggests that the differential series needs to be revised, possibly with the inclusion of new varieties and/or exclusion of certain vatieties, in order to better discrimination in pathotypes. All isolates showed reaction compatibility with the of Andean and Mesoamerican varieties, which classifies them as belonging to the Mesoamerican group. Varieties Mexico 54, BAT 332, Cornell 49-242, AND 277 and MAR-2, used by the Beans Improvement Program of BIOAGRO/UFV, were resistant, respectively, 11, 10, 11, 10 and 8 of the 15 pathotypes characterized. Nevertheless, none of the sources used was resistant to pathotype 63-63 characterized from isolates identified as A18, A212, AJ12, B146, B750, C11, SM17, SM20 and SM211 showing the need to seek new access that offer resistance to angular leaf spot. Another finding is that some isolates characterized as the same pathotype provided differing responses when inoculated into sources of resistance, showing that there are differences in relation to pathogenicity. The analysis of the inoculations in this differential series also showed that the varieties Don Timoteo, G11796 and Bolón Bayo are not relevant in discrimination of pathotypes. These two findings provide, once again, support for the proposed revision of the genotypes used in the differential series of angular leaf spot. The genetic variability of P. griseola is also examined through several other types of analysis involving morphological and molecular characters. In this work, through analysis of the ITS region (ITS1-5,8S-ITS2) of rDNA, using the universal primers ITS1 and ITS4, held a study on the genetic diversity of isolates of P. griseola, obtained in the State of Minas Gerais (Brazil) and elsewhere in the world, showing the efficiency of the ITS region for this purpose. It was found that there are five different haplotypes, grouped by the existence of five mutations among the sequences studied. These haplotypes formed two haplogroups: one consisting by all isolates ofMesoamerican origin (three haplotypes) and other consisting by isolates of Andean origin and isolates that do not have information about the gene pool (two haplotypes). This result indicates that the isolates that lack the gene pool defined, possibly belonging to the collection of Andean P. griseola. The finding that all isolates obtained in State of Minas Gerais belong to the Mesoamerican gene pool proves the existence of co-evolution between Phaseolus vulgaris and Pseudocercospora griseola, since in Brazil predominate the cultivation of beans Mesoamerican gene pool. A mancha angular, incitada pelo fungo Pseudocercospora griseola (Sacc.) Crous & U. Braun é uma das principais doenças que acometem a cultura do feijoeiro, podendo ser encontrada em todas as regiões produtoras, principalmente quando a cultura é submetida à condição de temperaturas amenas em cultivos irrigados. Esta condição aliada ao uso de cultivares suscetíveis favorece a ocorrência da doença ocasionando perdas na produção que atingem 80%. Uma opção de controle da enfermidade é o uso de cultivares resistentes. No entanto, a eficiência no uso da resistência depende do conhecimento sobre a variabilidade patogênica e distribuição geográfica do patógeno. Diversos trabalhos têm mostrado a ampla variabilidade patogênica de P. griseola e a sua co-evolução com os pools gênicos Andino e Mesoamericano do feijoeiro. Pelo processo de co-evolução, populações de P. griseola também podem ser divididas em dois pools gênicos: Andino (P. griseola formae griseola) que tiveram evolução paralela com variedades de feijão de origem Andina, sendo capazes de incitar a doença apenas em feijões Andinos; e Mesoamericano (P. griseola formae mesoamericana) que tiveram evolução com variedades de feijão de origem Mesoamericana, sendo capazes de incitar a doença em feijões Mesoamericanos e também em alguns feijões Andinos. Os principais objetivos deste estudo foram: caracterizar isolados de P. griseola, provenientes de nove cidades de três regiões do Estado de Minas Gerais - Brasil, utilizando as variedades diferenciadoras da mancha angular; avaliar fontes de resistência ao patógeno utilizadas pelo Programa de Melhoramento do Feijoeiro do BIOAGRO/UFV frente a estes isolados; e através da região ITS (ITS1-5,8S-ITS2) do cluster gênico do rDNA caracterizar a diversidade genética de 48 isolados de P. griseola, utilizando os primers universais ITS1 e ITS4. Com o auxílio das variedades diferenciadoras, foramcaracterizados 31 isolados monospóricos de P. griseola, obtendo-se 15 patótipos distintos, o que demonstra a alta variabilidade deste patógeno. O patótipo 63-63 foi o mais frequente com 12 dos 31 isolados caracterizados e foi detectado em sete das nove cidades visitadas. O patótipo 63-23 ocorreu em três cidades com a frequência de três isolados; os patótipos 63-7, 47-39 e 15-7 ocorreram em duas cidades cada um, com a frequência de dois isolados e os demais patótipos ocorreram em uma única cidade com a frequência de um isolado. A constatação de que vários isolados foram caracterizados como patótipo 63-63, ou seja, apresentam reação de compatibilidade com todas as variedades diferenciadoras, sugere que a série diferenciadora necessita ser revista, possivelmente, com a inclusão de novas variedades e/ou exclusão de determinadas variedades, visando melhor discriminação em patótipos. Todos os isolados apresentaram reação de compatibilidade com as variedades Andinas e Mesoamericanas, o que os classifica como pertencentes ao grupo Mesoamericano. As variedades México 54, BAT 332, Cornell 49-242, AND 277 e MAR-2, utilizadas pelo Programa de Melhoramento do Feijoeiro do BIOAGRO/UFV, foram resistentes, respectivamente, a 11, 10, 11, 10 e 8 dos 15 patótipos caracterizados. Apesar disso, nenhuma das fontes utilizadas foi resistente ao patótipo 63-63 caracterizado a partir dos isolados identificados como A18, A212, AJ 12, B1 46, B7 50, C11, SM 17, SM 20 e SM211 evidenciando a necessidade de se buscar novos acessos que ofereçam resistência à mancha angular. Outra constatação é que alguns isolados caracterizados como um mesmo patótipo proporcionaram reações diferenciadas quando inoculados nas fontes de resistência, mostrando que existem diferenças em relação à patogenicidade. As análises das inoculações na série diferenciadora ainda evidenciaram que as variedades Don Timóteo, G11796 e Bolón Bayo não estão sendo relevantes na discriminação dos patótipos. Estas duas constatações oferecem, mais uma vez, suporte para a proposta de revisão dos genótipos utilizados na série diferenciadora da mancha angular. A variabilidade genética de P. griseola tem sido examinada também através de diversos outros tipos de análises envolvendo caracteres morfológicos e moleculares. Neste trabalho, através de análises da região ITS (ITS1-5,8S-ITS2) do rDNA, utilizando os primers universais ITS1 e ITS4, realizou-se um estudo acerca da diversidadegenética de isolados de P. griseola, obtidos no Estado de Minas Gerais (Brasil) e em outras localidades do mundo, evidenciando a eficiência da região ITS para este propósito. Verificou-se a existência de cinco haplótipos distintos, agrupados pela existência de cinco mutações entre as sequências estudadas. Estes haplótipos formaram dois haplogrupos: um constituído por todos os isolados de origem Mesoamericana (três haplótipos) e outro constituído por isolados de origem Andina e por isolados que não possuem informações acerca do pool gênico (dois haplótipos). Este resultado indica que os isolados que não possuem o pool gênico definido, possivelmente, pertencem ao acervo Andino de P. griseola. A constatação de que todos os isolados obtidos no Estado de Minas Gerais pertencem ao pool gênico Mesoamericano comprova a existência de co-evolução entre Phaseolus vulgaris e Pseudocercospora griseola, já que no Brasil predomina o cultivo de feijão do pool gênico Mesoamericano.

Os tumores mistos benignos são neoplasias constituídas por proliferação epitelial benigna e por elementos mesenquimais. Estes tumores são freqüentes na glândula mamária canina e podem malignizar originando carcinomas em tumores mistos. A origem dos diferentes elementos celulares que os compõem bem como os fatores que determinam a sua transformação maligna são aspectos não elucidados. Os objetivos deste estudo foram: 1) Investigar a presença de alterações em uma zona hipervariável do DNA mitocondrial e a presença de polimorfismos de microssatélites nucleares em tumores mamários mistos da cadela com a finalidade de obter informações a respeito da evolução clonal destes tumores. 2) Avaliar a expressão das ncoproteínas HER2 e EGFR em tumores mistos e verificar seu possível envolvimento com a histogênese e progressão destes tumores. Os componentes epitelial e mesenquimal de 10 tumores mistos benignos e 9 carcinomas em tumores mistos foram microdissectados, o DNA foi extraído e um fragmento de 273pb da região controle do DNA mitocondrial foi amplificado por reação de polimerase em cadeia e seqüenciado. A presença de polimorfismos em cinco locos de microssatélites nucleares foi também investigada. Adicionalmente, a expressão imunoistoquímica de HER2 e EGFR foi analisada em 16 tumores mistos benignos e 22 carcinomas em tumores mistos. Nove polimorfismos e quatro mutações foram detectados. O mesmo haplótipo de DNA mitocondrial foi encontrado em ambos componentes tumorais de 80,0% (8/10) dos tumores mistos benignos e de 89,9% (8/9) carcinomas em tumores mistos. Amplificação dos locos de microssatélites foi obtida em apenas um caso de tumor misto benigno e um caso de carcinoma em tumor misto e o mesmo padrão alélico para os cinco locos foi observado nos dois componentes destes tumores.Superexpressão de HER2 e EGFR foi observada em 9,0 % (2/22) e 31,8% (7/22) dos carcinomas em tumores mistos. Em ambos os casos a expressão foi encontrada apenas no componente epitelial dos tumores. Os tumores mistos benignos não superexpressaram HER2e EGFR, mas uma marcação indeterminada foi encontrada em 12,5% deles. Em conclusão, os dois componentes dos tumores mistos apresentaram um mesmo haplótipo de DNA mitocondrial indicando uma comum origem clonal. Os resultados sugerem que alterações naexpressão protéica de HER2 não são associadas com aquisição do fenótipo maligno de carcinomas em tumores mistos. Por outro lado a superexpressão de EGFR pode ter um papel na divergência e malignização destes tumores, mas não esta envolvida com a diferenciação mesenquimal. Benign mixed tumors are histologically characterized by a mixture of epithelial and mesenchymal components. These are common neoplasias in canine mammary glands and can malignize developing carcinomas in benign mixed tumors. The cell origin of the differentcomponents that compose mixed tumors and the aspects that determine its malignant transformation remains to be elucidated. The aims of this study were: 1) To investigate alterations in a polymorphic region of the mtDNA control region and the presence of polymorphisms in nuclear microssatellites loci in canine mammary mixed tumors to accessthe clonal pattern. 2) To study the expression of HER2 and EGFR oncoproteins in canine mammary mixed tumors and verify the possible role in histogenesis and progression of these tumors. The epithelial and mesenchymal components were microdissected from 10 benignmixed tumors and 9 carcinomas in mixed tumors. The DNA was extracted and a 273bp fragment from mitochondrial control region was amplified using polymerase chain reaction and then sequenced. The nuclear microssatellites loci: FH2658, ren214L11, FH2010, FH2263 e FH39 were also analysed. Additionally, immunohistochemical expression of HER2 and EGFR was analyzed in 16 benign mixed tumors and 22 carcinomas in mixed tumors. Nine polymorphism and four mutations were found. Identical haplotype of mitochondrial DNA in both the epithelial and mesenchymal components were found in 80.0% (8/10) of the benignmixed tumors and in 89% (8/9) of the carcinomas in benign mixed tumors. Amplification of microssatellites locus was obtained in only one case of benign mixed tumor and one case of carcinoma in mixed tumor and the same allelic pattern for the five loci was observed in bothepithelial and mesenchymal components. Overexpression of HER2 and EGFR was found in 9% (2/22) and 31.8% (7/22) of carcinomas in mixed tumors. In both the cases the overexpression was restricted to the epithelial component. HER2 and EGFR were not overexpressed in benign mixed tumors, however an inconclusive staining was found in 12.5% of cases. In conclusion, the epithelial and mesenchymal components of tumors showed the same haplotype of mitochondrial DNA suggesting a shared clonal origin. The results indicate that HER2 overexpression may not be associated with acquisition of malignant phenotype in carcinomas um mixed tumors. In contrast, EGFR may be a role in the divergence and malignization of these tumors, however are not involved with mesenchymal differentiation.

Introducción. Las proteínas desacoplantes pertenecen a la familia de proteínas transportadoras de aniones que desacoplan la producción de ATP de la respiración mitocondrial, causando pérdida de protones a través de la membrana mitocondrial interna y disipando la energía en forma de calor. Aunque su función no ha sido bien establecida, algunos polimorfismos en estas proteínas se han asociado con diabetes mellitus tipo 2, obesidad y resistencia a la insulina. Objetivo. Evaluar la asociación entre las variantes -3826A/G, ID 45, -2723T/A, -1957G/A, -866G/A, -55C/T de los genes de las proteínas desacoplantes 1, 2 y 3 con diabetes mellitus tipo 2 en una población del nordeste colombiano. Materiales y métodos. Se tipificaron 545 casos y 449 controles para 14 variantes de los genes de las proteínas desacoplantes por medio de PCR y PCR-RFLP. Se hicieron pruebas de asociación simples con ji al cuadrado y se corrigieron en un análisis de regresión logística bayesiana, incluyendo los estimados de mezcla individual obtenidos mediante 54 marcadores informativos de ascendencia europea, africana y amerindia. Resultados. Las variantes -3826A (OR=0,78; IC95% 0,63-0,97; p=0,02), -55C (OR=1,41; IC95% 1,04-1,92; p=0,03) de las proteínas desacoplantes 1 y 3, respectivamente, y el haplotipo D45, -866G, -1957G, -2723T, -55C (OR=1,26; IC95% 1,02-1,56; p=0,03) se asociaron con diabetes tipo 2. Estas asociaciones se conservaron después de ajustar por la mezcla genética individual. Conclusión. Algunas variantes de las proteínas desacoplantes 1, 2 y 3, y sus haplotipos, confieren riesgo para diabetes mellitus tipo 2 en una población del nordeste colombiano. Introduction. The uncoupling proteins belong to the family of anion transporting proteins which uncouple the ATP production from the mitochondrial respiration, cause proton leakage through the inner mitochondrial membrane, and release energy as heat. Although uncoupling protein function has not been well established, specific polymorphisms in these proteins have been associated with type 2 diabetes mellitus, obesity and insulin resistance. Objective. The association was assessed between the polymorphisms in uncoupling protein genes 1, 2 and 3 genes and type 2 diabetes mellitus. Materials and methods. In a northwestern Colombian population, 545 diabetes cases and 449 controls were investigated for presence of 14 polymorphisms in uncoupling protein genes (3826A/G, ID 45, 2723T/A, 1957G/A, 866G/A, and 55C/T) by PCR and PCR-RFLP. Single associations were evaluated by chi-square test, and bayesian logistic regression analysis was done including as covariates the individual admixture estimates obtained by 54 informative markers for European, African and Amerind ancestry. Results.Association between type 2 diabetes mellitus and the polymorphisms 3826A (OR=0.78; 95%CI=0.63-0.97; p=0.02) and 55C (OR=1.41; 95%CI=1.04-1.92; p=0.03) and the haplotype D45, 866G, 1957G, 2723T, and 55C (OR=1.26; 95%CI=1.02-1.56; p=0.03) were found. These associations remained after adjustment using individual genetic admixture estimates. Conclusion.Some alleles of uncoupling protein genes 1, 2 and 3, and their haplotypes confer risk to type 2 diabetes in a northwestern Colombian population.

The Citrus tristeza virus (CTV) presents a vast biological diversity and it may cause different symptoms according to its interaction with the host plant and due to environmental conditions, especially temperature. The present study aims to evaluate the performance of different combinations of sweet orange cultivars and strains of CTV in experimental fields located in the northern, central and southern regions of São Paulo state. The combinations were evaluated through the analysis of symptomatology, crops, biological indexing and the SSCP analysis of the virus capsid protein gene. The treatments consisted of clones of four cultivars, Pêra IAC, Pêra IAC 2000, Pêra Olímpia and Ipiguá, original ones and shoot tip grafteds that were pre-immunized with the PIAC complex. The data referring to symptomatology, crops and biological testing revealed that the plants belonging to fields located both in the northwestern and central regions of the state, where averages of temperature were higher, seemed to be more resistant to the tristeza than the plants located in the southern fields, what suggests a correlation between severe symptoms of tristeza and lower temperatures. The SSCP analysis revealed that, in spite of the change in the original profile, the protective capacity of the weak virus used in the pre-immunization was maintained in the fields from the cities of Cajobi and Cordeirópolis, located in the northwestern and central regions of the state. In addition to that, the majority of the plants presented a profile that was similar to the PIAC. O Citrus tristeza virus (CTV), apresenta uma grande diversidade biológica, podendo induzir os mais variados sintomas, dependendo da sua interação com a planta hospedeira e condições ambientais, destacando-se a temperatura. O presente estudo teve o objetivo de avaliar o desempenho de diferentes combinações de cultivares de laranja Pêra e isolados de CTV, em pomares experimentais das regiões norte, central e sul do Estado de São Paulo. As combinações foram avaliadas por meio da análise da sintomatologia, produção, indexação biológica e análise de SSCP do gene da proteína do capsídeo do vírus. Os tratamentos consistiram de clones de quatro cultivares, Pêra IAC, Pêra IAC 2000, Pêra Olímpia e Ipiguá, originais e microenxertados pré-imunizados com o complexo PIAC. Os dados referentes à sintomatologia, produção e teste biológico revelaram que as plantas instaladas nos pomares das regiões noroeste e central do Estado, com médias mais altas de temperatura, apresentaram melhor desempenho em relação à tristeza do que as plantas instaladas em pomares da região Sul, sugerindo uma correlação entre sintomas severos de tristeza e decréscimo de temperatura. A análise de SSCP revelou que, apesar da mudança do perfil original, a capacidade protetiva do vírus fraco utilizado na pré-imunização foi mantida nos pomares dos municípios de Cajobi e Cordeirópolis, regiões noroeste e central do estado, com a maioria das plantas apresentando um perfil semelhante ao PIAC. ix, 71 f

Orientador: Jose Eduardo Tanus dos Santos Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: O Fator de Crescimento Endotelial Vascular (VEGF, ou também conhecido como VEGF-A), é uma glicoproteína homodimérica de 45KDa que é produzida principalmente em células endoteliais em condições de hipóxia. VEGF leva a proliferação, migração e sobrevivência de células endoteliais; desenvolve um papel importante na regulação da permeabilidade vascular e angiogênese, tanto fisiológica como fisiopatológica, além de outras atividades biológicas, como vasodilatação, vasculogênese e homeostase vascular. Enquanto muitos SNPs (polimorfismos de base única) estão presentes no gene do VEGF, três SNPs clinicamente significantes localizados na região promotora do gene (C-2578A, G-1154A e G-634C) têm sido associados a várias doenças cardiovasculares. Porém associações inconsistentes entre esses polimorfismos e doenças cardiovasculares têm sido encontradas. Essas diferenças podem ser uma conseqüência da diversidade étnica, que leva a uma distribuição desproporcional dos variantes do gene do VEGF entre grupos étnicos. Embora alguns estudos sugiram que haja uma diferença na distribuição destes SNPs, nenhum estudo prévio analisou esta hipótese em populações miscigenadas. Nós analisamos a distribuição destes três SNPs em 175 brancos e 185 negros brasileiros, avaliamos também a distribuição haplotípica e a associação entre as variantes desses SNPs. O alelo C-2578 e o alelo G-1154 foram mais comuns em indivíduos negros do que brancos (71% e 61%, respectivamente), enquanto para o SNP G-634C não houve diferença quanto a frequência alélica e genotípica entre os dois grupos étnicos. O haplótipo contendo os alelos C-2578/G-1154/G-634 foi o mais comum em ambos grupos étnicos e também o mais freqüente em negros comparados a brancos. O haplótipo contendo os alelos C-2578/A-1154/C-634 e o haplótipo contendo os alelos C-2578/A-1154/G-634 foram mais frequentes em indivíduos brancos do que em negros. Estes resultados mostraram diferenças na distribuição de variantes genéticas e haplótipos do gene do VEGF relevantes clinicamente quando brancos e negros são comparados. Estas diferenças podem explicar, no mínimo em parte, os resultados inconsistentes em estudos de associação desses SNPs com doenças cardiovasculares e, as diferenças interétnicas na suscetibilidade a doenças cardiovasculares Abstract: Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF, or also known as VEGF-A) is a homodimeric glycoprotein of 45kDa produced mostly in endothelial cells in hypoxic conditions. VEGF leads to proliferation, migration and survival of endothelial cells, plays an important role in regulating vascular permeability and angiogenesis, both physiological and pathophysiological and other biological characteristics such as vasodilation, vasculogenesis and vascular homeostasis. While many Single Nucleotides Polimporphisms (SNPs) are present in the VEGF gene, three clinically significant SNPs in the promoter region of the gene (C-2578A, G-1154A and G-634C) have been associated with cardiovascular diseases, however inconsistent associations have been found between these polymorphisms and cardiovascular diseases. These differences may be a consequence of ethnic diversity, which leads to a distinct distribution of VEGF gene variants between ethnic groups. Although some studies suggest difference in the distribution of these SNPs, no previous study has examined this hypothesis in admixed populations. We examined the distribution of these three SNPs in 175 white and 185 black Brazilian subjects, we have also evaluated haplotype distribution and the association between variants of these SNPs. The C-2578 and G-1154 alleles were more frequent in black subjects than in white (71% and 61% respectively), while for the G-634C SNP no differences in allele and genotype frequencies were found between the two ethnic groups. The haplotype containing the alleles C-2578/G-1154/ G-634 was the most common in both ethnic groups and was more common in blacks compared to whites. The haplotype containing the alleles C-2578/A-1154/C-634 and the haplotype containing the alleles C-2578/A-1154/G-634 were more frequent in whites compared to blacks. These results showed differences in the distribution of clinically relevant genetic variants and haplotypes of VEGF gene when whites and blacks are compared. These differences may explain, at least in part, the inconsistent results in studies of association of these SNPs with cardiovascular disease, and ethnic disparities in susceptibility to cardiovascular disease Mestrado Mestre em Farmacologia

Introducción. Los restos óseos arcaicos son fuente privilegiada de información biológica y su caracterización genética permite confirmar o descartar filiaciones propuestas por otras aproximaciones científicas. La historia precolombina de los Andes orientales se divide en tres periodos principales: i) un poblamiento temprano por parte de grupos cazadores-recolectores; ii) un periodo intermedio (Herrera) de pueblos con agricultura incipiente, y iii) un periodo tardío de pueblos chibchas, agrícolas y alfareros (agroalfarero). Objetivo. Analizar el ADN mitocondrial de restos óseos del periodo Herrera. Materiales y métodos. Se analizaron 11 individuos pertenecientes al yacimiento arqueológico Madrid 2-41, con una edad aproximada de 2.000 años. Un fragmento (192 pb) del segmento hipervariable I fue amplificado y secuenciado, siguiendo criterios estrictos de autenticidad de ADN arcaico. Las secuencias se compararon con las existentes en bases de datos de Norteamérica y Europa usando herramientas bioinformáticas. Resultados. Todas las secuencias resultaron idénticas y fueron clasificadas como haplogrupo B. Esto puede relacionarse con el tipo de entierro ritual practicado en Madrid 2-41, es decir, probablemente los individuos analizados hagan parte de una familia jerárquicamente importante en la antigua sociedad Herrera. La búsqueda de secuencias homólogas en las bases de datos estadounidense y europea no arrojó coincidencias exactas, aunque existe el reporte de un individuo amazónico de ~4.000 años de antigüedad (Brasil) cuya secuencia coincide con la hallada en Madrid 2-41. Conclusión. Los individuos del yacimiento arqueológico Madrid 2-41 están estrechamente emparentados entre sí por línea materna y presentan una secuencia aparentemente ausente en poblaciones actuales. Introduction. Ancient bone remains constitute an important source of biological information, and their genetic characterization allows the confirmation or rebuttal of human affiliations proposed on the basis of non-molecular approaches. Pre-Columbian history of the Eastern Andes in Colombia has been divided into three main periods: (i) an early colonization by groups of hunter-gatherers, (ii) an intermediate period “Herrera” characterized by primitive agriculture and (iii) a late stage of Chibcha-speaking groups, with agriculture and ceramics (“agroalfarero”). Objective. The mitochondrial DNA on ancient bone remains of the Herrera period were analyzed for comparison with modern and other ancient DNAs. Materials and methods. Mitochondrial DNA was extracted from 11 Herrera individuals [~2,000 years before present (YBP)] found in the Madrid 2-41 archaeological site near Bogotá, Colombia. A 192 bp segment of the hypervariable segment I was amplified and sequenced, following stringent archaic DNA authenticity criteria. The sequences were compared with those in American and European databases using bioinformatics tools. Results. All individuals had identical sequences and were classified as haplogroup B. This identity may be related to the type of ritual burial performed in the site, probably exclusively for members of a hierarchically important family of the ancient Herrera society. The search for homologous sequences in the American and European mtDNA data bases produced no identical coincidences, although a Brazilian Amazonic individual (~4,000 YBP) was recorded with a matching sequence. Conclusion. Individuals buried in the Madrid 2-41 site were maternally closely related and showed a mtDNA sequence that is apparently absent in contemporary populations.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-03-24Bitstream added on 2014-06-13T18:57:08Z : No. of bitstreams: 1 viana_ac_me_arafo.pdf: 2263466 bytes, checksum: 281fb30cdd901d18de3b37fae96ad857 (MD5) Objetivo: O presente estudo foi realizado para investigar a associação entre polimorfismos +785(C/T), +1208(T/C) e +1440(G/A) no gene do receptor 2 da interleucina 8 (CXCR2), bem como de seus haplótipos, e a suscetibilidade à Periodontite em indivíduos brasileiros. Material e Método: Foram selecionados 500 indivíduos de ambos os gêneros (Grupo Controle: n = 224, idade média 35,3 anos; Grupo Periodontite [GP] n = 276, idade média 43,4 anos) que procuraram atendimento na Faculdade de Odontologia de Araraquara. A partir de células da mucosa bucal, o DNA foi extraído por uma solução de solventes orgânicos (fenol:clorofórmio:álcool isoamílico; - 25:24:1). Os polimorfismos +785 e +1208 foram investigados pela técnica SSP-PCR (Sequence Specific Primer – PCR) enquanto que o polimorfismo +1440 foi analisado por PCR-RFLP (Polymerase Chain Reaction – Restriction Fragment Length Polymorphism). Os fragmentos obtidos por PCR-RFLP e os produtos obtidos por SSP-PCR foram submetidos à eletroforese vertical em gel de poliacrilamida a 10% (locus +785 e +1208) e 14% (locus +1440), sendo depois corados com nitrato de prata. Resultados: Considerando a frequência de alelos e genótipos de cada polimorfismo isoladamente, não foi encontrada diferença estatisticamente significante entre os grupos. Quando analisados em haplótipos, a freqüência do haplótipo TCG foi significativamente maior no Grupo Periodontite (p=0,005; odds ratio [OR] = 3,54) do que no Controle. O haplótipo heterozigoto TCG/CCA foi relacionado com um aumento de suscetibilidade à periodontite na população total (p=0,015; OR=3,22). Conclusão: Os resultados deste estudo sugerem que haplótipos no gene CXCR2 estão associados com suscetibilidade à periodontite em indivíduos brasileiros. Objective: This study investigated whether the +785(C/T), +1208(T/C) and +1440(G/A) single nucleotide polymorphisms (SNPs) in the CXCR2 gene, as well as their haplotypes, would be associated with susceptibility to periodontitis in Brazilian individuals. Methods: Five hundred individuals in both genders (Control Group [CG] = 224, mean age 35.3 years; Periodontitis Group [PG] = 276, mean age 43.4 years) were recruited for this study from the patient pool of the School of Dentistry of Araraquara – FOAr/UNESP. DNA was extracted from buccal epithelial cells with a solution of organic solvents (phenol/chlorophorm/isoamilic alcohol, - 25:24:1). The +785 and +1208 SNPs were investigated using the Sequence Specific Primers Polymerase Chain Reaction method (SSP-PCR). The +1440 SNP was genotyped by the PCR-RFLP method (Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism). The SSP-PCR products and the RFLP fragments were submitted to polyacrylamide gel electrophoresis in a concentration of 10% and 14%, respectively, which were stained by silver staining method. Results: Considering each polymorphism allele and genotype frequency isolated, no differences were found between groups. The frequency of TCG haplotype was significantly higher in the Periodontitis group (p=0.005, odds ratio [OR] =3.54) than in the Controls. The heterozygous haplotype TCG/CCA was related to an increased susceptibility to Periodontitis in the total casuistic (p=0.015, OR=3.22). Conclusion: These data indicate that haplotypes in the CXCR2 gene were associated with susceptibility to periodontitis in brazilian individuals.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-03-20Bitstream added on 2014-06-13T19:36:31Z : No. of bitstreams: 1 kim_yj_me_arafo.pdf: 638831 bytes, checksum: f183603fe99b8b5a6225e19af91a60e9 (MD5) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) O estudo investigou se há associação individual dos polimorfismos –353(A/T), -738(T/A) e -845(T/C) na região promotora do gene interleucina 8 (IL8), bem como de seus haplótipos, com suscetibilidade à periodontite em indivíduos Brasileiros. Foram selecionados 500 indivíduos de ambos os gêneros (Grupo Controle n=224 e Grupo Periodontite n=276) que procuraram atendimento na Faculdade de Odontologia de Araraquara. A partir do DNA obtido de células da mucosa oral, os polimorfismos -738(T/A) e -845(T/C) foram analisados por PCR-RFLP (Polymerase Chain Reaction – Restriction Fragment Length Polymorphism), e o -353(A/T) por SSP-PCR (Sequence Specific Primer – PCR). Os fragmentos obtidos foram submetidos à eletroforese vertical em gel de poliacrilamida a 10%. Para analisar a freqüência dos genótipos e alelos foi utilizado o teste χ2, ou o programa CLUMP para os polimorfismos que mostraram alelos raros. Os haplótipos foram estimados pelo programa ARLEQUIN e a diferença na distribuição deles entre os grupos foi investigada por meio do programa CLUMP. Os resultados da análise individual dos polimorfismos não evidenciaram associação com a periodontite. Em relação aos haplótipos, as freqüências dos mesmos como alelos e/ou genótipos entre Grupo Controle e Grupo Periodontite apresentaram diferenças estatisticamente significantes considerando a população total e também a não fumante. Os indivíduos com o haplótipo CTA apresentaram-se 2,14 vezes mais susceptíveis à doença periodontal (p=0,0012, OR=2,14; 95% CI =1,6-3,38). Concluiu-se que houve associação dos haplótipos formados pelos polimorfismos –845(T/C), –738(T/A) e –353(A/T) no gene IL8 com a suscetibilidade a periodontite na população brasileira estudada. The purpose of this study was to investigate whether there is an individual association of the –845(T/C), –738(T/A) and –353(A/T) single nucleotide polymorphisms (SNPs) in the IL8 gene, as well as their haplotypes with susceptibility to periodontitis in Brazilian population. DNA was extracted from buccal epithelial cells from 500 Brazilian individuals (Control group n = 224, Periodontitis group n = 276). The –845 and –738 SNPs were genotyped by PCR-RFLP method (Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism). The –353 SNP was investigated using the Sequence Specific Primers Polymerase Chain Reaction method (SSP-PCR). Differences of the allelic and genotypic frequencies were assessed by Chi-squared test or by using the CLUMP program for rare alleles. Haplotypes were estimated using the ARLEQUIN program. Differences in the haplotype frequencies between the studied groups were assessed by the CLUMP program. No differences were observed in the allelic and genotypic distribution of all the investigated SNPs between control and periodontitis groups when they were analysed individually. The haplotypes distribution in the periodontitis and controls groups was significantly different both considering the total casuistic or the non-smokers subgroup only. Individuals with CTA haplotype seemed to be over twice more likely to develop periodontitis than individuals with other haplotypes (OR=2.14, 95% CI =1.36-3.38). The analysis of haplotypes constructed from –845(T/C), – 738(T/A) and –353 (A/T) polymorphisms in the IL8 gene demonstrated association with susceptibility to periodontitis in Brazilian individuals.

La Osteoporosis (OP) es un problema de salud pública, que afecta a más de 150 millones de personas en el mundo, mayoritariamente mujeres posmenopáusicas. Estudios epidemiológicos demuestran que los factores genéticos podrían representar el 80-90% de la variabilidad en la densidad mineral ósea y en consecuencia relacionarse con el riesgo a sufrir OP. El gen del receptor de la vitamina D (RVD) se ha estudiado ampliamente en este campo y su relación con la osteoporosis ha sido controversial. El objetivo de esta investigación fue estudiar la asociación de los polimorfismos Bsm I, Apa I y Taq I del gen del RVD con la OP en 147 mujeres posmenopáusicas, 71 con OP y 76 sin la enfermedad (control). El análisis molecular se realizó utilizando la reacción en cadena de la polimerasa (RCP). Los genotipos BB, AA y tt se encontraron en 56,33, 50,70 y 25,35% y en 21,05, 28,95 y 10,53%, en el grupo con OP y control, respectivamente. El haplotipo BBAAtt se observó en un 23,94% en el grupo con OP y en 5,26% en el grupo control. Este haplotipo resultó ser factor de riesgo para la OP con Razón de disparidad (RD) de 5,66, mientras que el haplotipo BbaaTT, factor de protección (RD: 0,10). Estos hallazgos apoyan la asociación del haplotipo BBAAtt del gen del receptor de la vitamina D con la OP. Osteoporosis (OP) is an important public issue affecting more than 150 millions all over the world, mainly post-menopausic women. Epidemiological studies have shown that the genetic factors could be involved in 80-90% of the bone mineral density variabiblity and therefore, related to the risk of OP manifestations. The vitamin D receptor (VRD) gene has been extensively studied, but its relationship with OP has been controversial. The aim of this investigation was to study the association of Bsm I, Apa I and Taq I VDR gene polymorphism with OP in 147 post-menopausic women; 71 with OP and 76 without the disease (control).The molecular gene analysis was performed using the polymerase chain reaction (PCR). The genotypes BB, AA, and tt were found in 56.33, 50.70 and 25.35% and in 21.05, 28.95 and 10.53% of OP patients and controls respectively. The haplotype BBAAtt was observed in 23.94% of OP patients and 5.26% of the controls. This haplotype was a risk factor for OP, since a odds ratio (OR) of 5.66 was found, while, haplotype BbaaTT was a protection factor (OR: 0.10). These findings support the association of the vitamin D receptor gene BBAAtt haplotype with OP.

Orientador: Heron Fernando de Sousa Gonzaga Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba Resumo: A hialinose cutâneo-mucosa (HCM) é uma dermatose autossômica recessiva rara, congênita, de aparecimento precoce na infância. Caracteriza-se por deposição de material hialino, que se acumula na pele e mucosas. Foram descritos 258 casos na literatura mundial e no Brasil, doze casos. A HCM apresenta aumento da expressão do colágeno tipo IV e V e redução da expressão do colágeno I e III. Esta doença foi mapeada no locus do cromossomo 1q21. Mutações patogênicas foram identificadas no gene ECM1. A doença é caracterizada por voz rouca, pápulas cutâneas amareladas, cicatrizes atróficas, lesões ulceradas cutâneas, blefarose moniliforme e conjuntivite pseudo-membranosa. Manifesta multiplicidade de sintomas, afetando vários órgãos. A revisão da literatura sobre HLA e HCM não mostrou nenhum trabalho. Realizou-se o estudo clínico e das especificidades HLA na família de uma afetada por HCM. Foram submetidos a exames clínicos e complementares. A tipificação HLA foi realizada através da análise de DNA genômico pela técnica de PCR-SSP. A afetada era branca, com 14 anos. Referia choro rouco desde o nascimento e eritema na região subescapular e cervical há 13 anos, que evoluiu para vesículas e posteriormente, micropápulas, que se rompiam, evoluindo para lesões ulceradas. Nesses locais, apareciam verrucosidades nos ângulos da boca, joelhos, cotovelos e regiões palmares. Concomitantemente, evoluiu para micropápulas hipocrômicas no dorso das mãos e axilas. Referia disfagia. Negava história familiar. Ao exame dermatológico, pápulas amareladas nas pálpebras e linearmente na borda livre; cicatrizes atróficas varioliformes nas regiões antecubitais; placas verrucosas nos cotovelos, regiões palmares, joelhos; pápulas amareladas em dorso das mãos e região cervical posterior. Apresentava alopecia parieto-occipital. Ao exame bucal, abertura limitada, endurecimento labial, lesões vegetantes no ângulo da boca, placas branco-amareladas em regiões de mucosa jugal, vestibular, orofaringe, dorso e ventre da língua. Ulcerações linguais e no palato duro e mole. Xerostomia discreta foi observada. Ao exame dentário, placa bacteriana, cálculos e agenesia do dente 22. A gengiva era friável, hipertrófica com bolsas periodontais. Ao exame oftalmológico, obstrução das vias lacrimais, mucosa espessada nos pontos lacrimais e prurido periocular. Diagnóstico psiquiátrico de Distimia foi estabelecido. Na avaliação neurológica, cefaléia. O exame clínico nos outros membros da família não mostrou nenhum traço da doença. Na fibronasofaringolaringoscopia, espessamento epidérmico em epiglote e hipertrofia de falsas cordas, pregueamento mucoso em prega interaritenóidea. O EEG não mostrou anormalidades. A tomografia computadorizada apresentou calcificações parenquimatosas hipocampais bilaterais. O exame histopatológico confirmou o diagnóstico de HCM. Constatou-se que sendo a doença autossômica recessiva, a ausência de manifestações clínicas nos pais da afetada, mostrou serem os mesmos heterozigotos. As manifestações clínicas são importantes para o diagnóstico. A primeira manifestação clínica mais freqüente na literatura, apresentada pela afetada, é a rouquidão. As manifestações clínicas mais exuberantes na doença são as cutâneas e mucosas. O estudo das especificidades HLA determinou os seguintes haplótipos na afetada: A31-B39-Cw7-DR4-DQ8 e A74-B7-Cw7-DR8-DQ-. A paciente era haploidêntica a um dos seus dois meioirmãos. Este foi o primeiro trabalho em que se investigou especificidades HLA em portador de HCM Abstract: Cutaneous-mucous hyalinosis (CMH) is a rare congenital autosomal recessive dermatose, which is presented precociously in early childhood. It is characterized by disposition of hyaline material that accumulates in the skin and cutaneous mucous. 258 cases were described in the world and 12 cases in Brazil. The CMH presents an increase of the expression of the collagen types IV and V and reduction of the expression of the collagen I and II. The disorder was mapped in a locus on chromosome 1q21 and pathogenic mutations were identified in the ECM1 gene. The disease is characterized by hoarse voice, yellowed cutaneous papules, atrophic scars, ulcerated cutaneous lesions, moniliform blepharosis, and pseudomembranous conjunctivitis. It manifests multiple symptoms affecting several organs. The review of literature about HLA as well as CMH has not presented any work so far. The clinical study as well as of the HLA antigens in the family of an individual affected by CMH was performed. They were submitted to clinical and auxiliary tests. The HLA type was accomplished through the analysis of genome DNA by the technique of PCR-SSP. The proband was a 14 year old white female. It referred hoarse crying from the birth and erythema in the sub-omoplate and cervical area 13 years ago which developed for vesicles and later on, micropapules that broke up, developing for ulcerated lesions, verrucous lesions in the angles of the mouth, knees, elbows and palm areas appeared. Concomitantly it developed for hypochromic micropapules in the back of the hands and armpits. It referred dysphagia. There was no history family. During the dermatological examination she presented yellowed papules in the eyelids and lineally in the free border; atrophic varioliform scars in the ante-cubital areas; verrucous plates in the elbows, palm areas and knees: yellowed papules in the back of the hands and posterior cervical area. She showed Parietal-occipital alopecia. During the oral examination she Presented limited opening, labial hardening, vegetative lesions in the angle of the mouth, white yellowed plaques in the areas of buccal, vestibular, oro-pharynx, dorsal and ventral tongue mucous membranes. Tongue ulcerations and also in the hard and soft palate. Discreet xerostomia was observed. During the dental examination, bacterial plaque, calculous and agenesis of the tooth 22. The gengive was friable, hypertrophic with periodontal depressions. During the ophthalmic examination, obstruction of the lacrimal via, thickened mucous in the lacrimal vias and perio-ocular pruritis. Psychiatric diagnosis of Dysthymia was estableshed. In the neurological evaluation, migraine. The clinical examination in the other members of the family did not show any line of the disease. Epidermal thickening in the epiglottis and hypertrophy of false strings, mucous pleatment in interarytenoide pleat were found. EEG did not show abnormalities. Computed tomography presented bilateral parenchymatosis hippocampus calcifications. The histopathology examination confirmed the diagnosis of CMH. It was verified because of the disease was recessive autosomal, the absence of clinical manifestations in the parents of the affected individual who were heterozygote. The clinical manifestations are important for the diagnosis. The most frequent clinical manifestation in the literature, presented by the affected girl, is the hoarse voice. The most exuberant clinical manifestations in the disease are the cutaneous and the mucous ones. The study of the HLA antigens determined the following haplotypes in the affected girl: A31-B39-Cw7-DR4-DQ8 and A74-B7-Cw7DR8-DQ- . She is haplo-identical to one of two her middle-siblings. This was the first work in which HLA antigens were investigated in carrier of CMH Doutorado Estomatologia Doutor em Estomatopatologia

A Malária é considerada um problema grave de saúde pública nas regiões onde é endémica. A interrupção dos regimes terapêuticos e a ausência de fármaco-vigiliância adequada levou ao surgimento de populações de parasitas resistentes, sendo este, um dos principais obstáculos ao controlo eficaz desta doença. Actualmente a resistência em Plasmodium falciparum já existe para todas as classes de antimaláricos excepto no caso dos derivados da artemisinina. A estrutura genética da população de P. falciparum varia em diferentes áreas geográficas dependendo dos níveis de transmissão e endemicidade da infecção. Estudos prévios demonstraram que, mutações pontuais em dois genes em particular, pfATPase6 e pfubp-1, poderão exercer uma influência moduladora da actividade antimalárica dos derivados da artemisinina. As populações parasitárias de uma dada região poderão apresentar diversas combinações entre polimorfismos no gene pfubp-1 e o genótipo do pfATPase6 originando diferentes haplótipos entre alelos destes genes, ambos localizados no cromossoma 1 do parasita P.falciparum. O gene ubp-1 codifica uma protease ubiquitina-específica. A sequenciação do gene ubp-1 em isolados naturais de Plasmodium falciparum, provenientes do Brasil, Ruanda e São Tomé e Príncipe permitiu analisar a frequência de putativos polimorfismos genéticos e investigar potenciais haplótipos entre alelos dos genes pfubp1 e pfATPase6 nas amostras provenientes destas regiões. No conjunto dos isolados naturais estudados, foram encontradas duas mutações não-sinónimas que se localizam no domínio funcional da proteína codificada pelo gene pfubp-1. Adicionalmente, os resultados obtidos revelaram diferenças relativamente à frequência dos polimorfismos estudados e, na frequência de potenciais haplótipos entre alelos dos genes pfubp1 e pfATPase6 oriundos das diferentes regiões endémicas estudadas. Verificou-se uma menor variabilidade de polimorfismos e menor variabilidade haplotípica no Brasil comparativamente às duas regiões Africanas estudadas. Os resultados deste trabalho deram a conhecer a estrutura populacional em termos do perfil de dois potenciais moduladores genéticos de susceptibilidade à artemisinina e derivados antes da utilização destes fármacos em larga escala. Deste modo, o presente estudo traduz-se como uma ferramenta que servirá de base a actividades de vigilância molecular continuadas, no intuito de preservar a eficácia prolongada desta importante classe de antimaláricos. Malaria is considered a serious problem of public health in the regions where it is endemic. The interruption of the therapeutic regimes and the absence of the adequate drug-surveillance led to the appearance of populations of resistant parasites, being this, one of the main obstacles to the efficient control of this disease. Currently the resistance in Plasmodium falciparum already exists for all the antimalarial drugs except in the case of the derivatives of the artemisinin (DA). The genetic structure of the population of P. falciparum varies in different geographic areas depending on the levels of transmission and endemic of the infection. Previous studies demonstrated that, point mutations in two genes, pfATPase6 and pfubp-1, will have a modulating influence of the drug activity of the D.A. The parasitic populations of a given region will be able to present diverse combinations between polymorphisms in the gene pfubp-1 and the genotype of pfATPase6 originating different haplotypes between alleles of these genes, both located in chromossome 1 of the P.falciparum parasite. The gene pfubp-1 codifies a specific ubiquitin protease. The sequence of the gene ubp-1 in natural isolation, that come from Brazil, Ruanda and São Tomé and Príncipe (RDST) allowed to analyse the frequency of putative genetic polymorphisms and to investigate potential haplotypes between alleles of the genes pfubp1 and pfATPase6. In the group studied, two non-synonym mutations were found in the functional domain of the codified protein by the gene pfubp-1. In addition, the results revealed differences relatively to the frequency of studied polymorphisms and, in the frequency of potential haplotypes between alleles of the deriving genes pfubp1 and pfATPase6. It was verified that there was a lesser variability of polymorphisms and a minor haplotype variability in Brazil compared to the two studied African regions. The results showed the population structure in terms of the profile of two genetic modulating potentials of susceptibility to the DA before the use of these drugs on a large scale.The present study is expressed as a tool that will serve as a continued activity base of monitoring molecules, in order to preserve effectiveness of the DA.

Introducción. La caracterización genética del sistema HLA es de gran utilidad en estudios antropogenéticos, en la comprensión de mecanismos asociados a susceptibilidad o resistencia a diversas enfermedades, en los fenómenos inmunológicos durante el embarazo y en la selección de donantes/receptores en trasplantes de órganos. Objetivo. Determinar las frecuencias alélicas, genotípicas y haplotípicas HLA-A, -B, -DRB1 en donantes fallecidos en Medellín. Materiales y métodos. Se incluyeron 926 donantes entre febrero de 1989 y septiembre de 2006, a los cuales se les realizó la tipificación HLA-A, -B, -DRB1 por PCR-SSP (single specific primer-polymerase chain reaction) de mediana resolución. Las frecuencias alélicas, genotípicas y haplotípicas fueron estimadas mediante el algoritmo de máxima verosimilitud. Se evaluó el ajuste al equilibrio de Hardy-Weimberg por una prueba exacta análoga a la de Fisher usando la cadena de Markov, así como el desequilibrio de ligamiento entre pares de loci. Resultados. Se identificaron 22, 43 y 14 alelos para los loci HLA-A, -B, -DRB, respectivamente, de los cuales los más frecuentes fueron: A*02, A*24, B*35 y DRB1*04. En los loci HLA-A y -B se observó deficiencia en la frecuencia de heterocigóticos esperada (p

A five-years long study aiming to describe the basic genetic epidemiology of the dystrophinopathies in Costa Rica recruited 31 patients with clinical symptoms of DMD/BMD at the National Children’s Hospital (HNN). This center is the obligate reference hospital of the national health system for genetic diseases, however, the geographic origin of the patients, a low percentage of deletions and a high proportion of de novo mutations found among them indicate that a significant ascertainment bias impedes a substantial scientific approach to confront and alleviate the problems posed by these severe diseases in Costa Rica. Rev. Biol. Trop. 52(3): 485- 490. Epub 2004 Dic 15. Un estudio de cinco anos tendiente a describir la epidemiologia genética básica de las distrofinopatias en Costa Rica detecto 31 pacientes con sintomatologia de DMD o de BMD en el Hospital Nacional de Niños (HNN), el centro de referencia del sistema nacional de salud para enfermedades hereditarias, sin embargo. la distribucion geográfica de los pacientes, un bajo porcentaje de lesiones y una muy elevada proporción de mutaciones de novo indican que un significante sesgo de averiguación impide estudio científico de riguroso tendiente a disminuir el impacto de estas enfermedades en Costa Rica. The project was supported by the University of Costa Rica,(Project No. 742-97-253) and by the National Children Hospital (FUCODOCSA) UCR::Vicerrectoría de Docencia::Ciencias Básicas::Facultad de Ciencias::Escuela de Biología

La región varón específica del cromosoma Y, es extensamente estudiada a nivel de la evolución humana, siendo una oportunidad única para analizar los efectos de factores evolutivos en la dinámica de los haplotipos basados en microsatélites por carecer de recombinación. En diferentes poblaciones, distribuidas a nivel mundial, se encuentran “pseudoequilibrios” de ligamiento entre microsatélites del cromosoma Y. Por lo cual, la prueba de desequilibrios de ligamiento (LD), puede ser una herramienta para evidenciar la acción de diversos factores evolutivos. Aplicando un modelo coalescente se simuló el efecto de diferentes escenarios demográficos/evolutivos, que incluyen mutación, migración y crecimiento poblacional en la estimación del desequilibrio de ligamiento. Para esto, se tomaron 3 microsatélites totalmente ligados y 3 poblaciones con tamaños efectivos de 10000 a 20000 individuos. Se muestrearon 100 cromosomas en cada una de las 1000 simulaciones realizadas para detectar LD mediante la prueba exacta de Fisher. Se observa que en los escenarios planteados se establece un “pseudoequlibrio” de ligamiento con valores cercanos a los observados en las poblaciones naturales. Es posible que los “pseudoequilibrios” encontrados se extiendan a los loci autosómicos en poblaciones donde se encuentren situaciones similares a las descriptas., Asociación de Antropología Biológica de la República Argentina (AABRA)

Los marcadores STRs son de gran utilidad en genética poblacional, y su grado de variación depende en parte de su localización genómica y su modo de herencia. La población mocoví constituye una etnia muy reducida en la actualidad, que presenta características propias tanto para marcadores del sistema HLA como para STRs autosómicos. Dado que en etnias reducidas numéricamente es frecuente la pérdida de variabilidad del Y debida a barridos selectivos, el objetivo del trabajo fue evaluar la variabilidad de STRs-Y en una muestra de varones mocovíes. Se analizaron 10 STR-Y en 26 varones no emparentados de Colonia Dolores, Santa Fé. Los 26 individuos presentaron haplotipos diferentes, que se compararon con los perfiles de STR-Y de la base de datos de Promega; entre éstos, 19 no se hallan en la base de datos y 7 se han observado previamente en una muestra de 894 hispanos (incluyendo 2 también descriptos en una muestra de 1108 afroamericanos y 3 que se hallan en varias poblaciones del mundo). Con respecto a la variación alélica, se encontraron algunos alelos que no se han observado en otras etnias de amerindios chaqueños (DYS390-12, DYS393-11). La riqueza haplotípica observada para STR-Y de mocovíes permite concluir que esta etnia aún conserva una alta variabilidad, a pesar de haber sufrido gran reducción numérica en el pasado., Sesión de posters, Asociación de Antropología Biológica de la República Argentina (AABRA)

Journal Article; Research Support, Non-U.S. Gov't; Caveolae are involved in physical compartmentalization between different groups of signaling events. Its main component, CAV1, modulates different pathways in cellular physiology. The emerging evidence pointing to the role of CAV1 in cancer led us to study whether different alleles of this gene are associated with colorectal cancer (CRC). Since one of the most characterized enzymes regulated by CAV1 is eNOS, we decided to include both genes in this study. We analyzed five SNPs in 360 unrelated CRC patients and 550 controls from the general population. Two of these SNPs were located within eNOS and three within the CAV1 gene. Although haplotype distribution was not associated with CRC, haplotype TiA (CAV1) was associated with familiar forms of CRC (p

Orientador: Jose Eduardo Tanus dos Santos Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: Polimorfismos no gene da sintase endotelial do óxido nítrico (eNOS) têm sido associados com desenvolvimento ou severidade da retinopatia diabética em pacientes com diabetes mellitus tipo 1(DM1). Entretanto, existem poucos estudos investigando esta associação em portadores de diabetes mellitus tipo 2 (DM2). Além disso, não há estudo prévio que tenha analisado a combinação de marcadores genéticos (haplótipos) e aparecimento e/ou gravidade das complicações vasculares do DM2 . Foram estudados três polimorfismos genéticos: Polimorfismo de base única (SNP) na região promotora (T 786 C), no exon 7 (Glu298Asp) e um número variável de repetições sequenciais (VNTR) no intron 4 (b/a), em 103 voluntários saudáveis e 170 pacientes portadores de diabetes mellitus tipo 2, classificados em diabéticos sem retinopatia (114) e com retinopatia (56). Outrossim, examinamos a associação dos haplótipos genéticos da eNOS com diabetes mellitus tipo 2 e retinopatia diabética. Não foram encontradas diferenças na freqüência dos genótipos e dos alelos dos três polimorfismos entre os três grupos testados. Entretanto, um determinado haplótipo "C - Glu - b" foi mais comum no grupo de indivíduos saudáveis (24%) do que nos pacientes diabéticos (7%) (P=0.0001). Quando comparamos diabéticos com retinopatia diabética com aqueles sem retinopatia, não foi identificada diferença significativa na distribuição da freqüência dos haplótipos da eNOS (P=0,7372). Estes achados sugerem que não há associação entre retinopatia diabética e haplótipos individuais da eNOS em pacientes portadores de diabetes mellitus tipo 2. O haplótipo "C - Glu - b" , no entanto, pode possuir algum efeito protetor contra o desenvolvimento de diabetes mellitus tipo 2. Novos estudos devem se conduzidos para tentar identificar uma base molecular para tal efeito Abstract: Background: Polymorphisms in the endothelial nitric oxide synthase (eNOS) gene have been associated with the development of diabetic retinopathy (DR) in patients with type 1 diabetes mellitus (T1DM), but not with T2DM. However, no previous study has analyzed combinations of genetic markers (haplotypes), which can be more informative. Methods: We studied three eNOS genetic polymorphisms: a single nucleotide polymorphism in the promoter region (T-786C), in exon 7 (Glu298Asp), and a variable number of tandem repeats in intron 4 (b/a) in 103 healthy controls, and in 170 patients with T2DM (without DR, N=114; with DR, N=56). We also examined the association of eNOS gene haplotypes with T2DM and with DR. Results: No differences were found in the frequencies of genotypes and alleles of the three polymorphisms among the three groups of subjects. Conversely, the "C-Glu-b" haplotype was more common in healthy controls (24%) than in T2DM patients (7%) (P=0.0001). Finally, no significant difference in the distribution of eNOS haplotypes frequencies was found when T2DM patients with or without DR were compared (P=0.7372). Conclusions: These findings suggest no association between DR and individual eNOS haplotypes in T2DM patients. The "C-Glu-b" haplotype, however, may have a protective effect against T2DM. Further studies should be conducted to address the molecular basis for such an effect Mestrado Mestre em Farmacologia

This study focused on clinical, hematological, and molecular aspects of sickle cell anemia pediatric patients from two different cites in Brazil. Seventy-one patients from São Paulo and Salvador, aged 3 to 18 years, were evaluated. Hematological analyses, betaS globin gene haplotypes, and alpha2 3.7kb-thalassemia were performed. Numbers of hospitalizations due to vaso-occlusive crises, infections, stroke, and cholelithiasis were investigated. São Paulo had more hospitalizations from vaso-occlusion, cholelithiasis, and stroke than Salvador. The Ben/CAR genotype predominated in both cities. alpha2 3.7kb-thalassemia had a frequency of 28.2% in Salvador, mostly with Ben/CAR genotype (45.0%), while São Paulo had 22.5% with similar frequencies of the Ben/ CAR and CAR/CAR genotypes. Sickle cell anemia patients from São Paulo also had more episodes of stroke, which was observed among CAR/CAR, atypical, and BEN/CAR haplotypes. In Salvador stroke was only observed in the Ben/CAR genotype. Cholelithiasis had similar frequencies in the two cities. These data suggest a milder phenotype among patients in Salvador, possibly due to genetic, environmental, and socioeconomic factors. Further studies are needed to elucidate modulating factors and phenotype association. O objetivo desse estudo foi avaliar aspectos clínicos, hematológicos e moleculares de pacientes pediátricos portadores de anemia falciforme em duas cidades brasileiras: Salvador e São Paulo. Foram estudados 71 pacientes com idades variando entre 3 a 18 anos, analisando-se os seguintes aspectos: perfis hematológicos, haplótipos dos genes da globina beta, presença de talassemia alfa-2(3.7kb), número de internações por vaso-oclusão, infecção, presença de acidente vascular cerebral e litíase biliar. O genótipo Ben/CAR predominou nas duas cidades. Talassemia alfa-2(3.7kb) teve freqüência de 28,2% em Salvador e 22,5% em São Paulo. Os pacientes de São Paulo apresentaram um número maior de internações por vaso-oclusão nos diferentes genótipos. Esses dados sugeriram um fenótipo com menor gravidade clínica nos pacientes de Salvador, possivelmente relacionados a fatores genéticos, ambientais e sócio-econômicos. Estudos adicionais necessitam ser realizados com intuito de elucidar os efeitos moduladores na expressão gênica da doença.

Submitted by Santiago Fabio (fabio.ssantiago@hotmail.com) on 2011-10-25T13:23:20Z No. of bitstreams: 1 DDDDDDDDDDDDDDD.pdf: 52353 bytes, checksum: 116d298619457157a1d5135447c46764 (MD5) Made available in DSpace on 2011-10-25T13:23:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DDDDDDDDDDDDDDD.pdf: 52353 bytes, checksum: 116d298619457157a1d5135447c46764 (MD5) Previous issue date: 2005 O objetivo desse estudo foi avaliar aspectos clínicos, hematológicos e moleculares de pacientes pediátricos portadores de anemia falciforme em duas cidades brasileiras: Salvador e São Paulo. Foram estudados 71 pacientes com idades variando entre 3 a 18 anos, analisando-se os seguintes aspectos: perfis hematológicos, haplótipos dos genes da globina b, presença de talassemia a-23.7kb, número de internações por vaso-oclusão, infecção, presença de acidente vascular cerebral e litíase biliar. O genótipo Ben/CAR predominou nas duas cidades. Talassemia a-23.7kb teve freqüência de 28,2% em Salvador e 22,5% em São Paulo. Os pacientes de São Paulo apresentaram um número maior de internações por vaso-oclusão nos diferentes genótipos. Esses dados sugeriram um fenótipo com menor gravidade clínica nos pacientes de Salvador, possivelmente relacionados a fatores genéticos, ambientais e sócio-econômicos. Estudos adicionais necessitam ser realizados com intuito de elucidar os efeitos moduladores na expressão gênica da doença. Rio de Janeiro

142f. Submitted by Suelen Reis (suziy.ellen@gmail.com) on 2013-05-24T13:11:05Z No. of bitstreams: 1 Elisangela Adorno.pdf: 3379043 bytes, checksum: 972521d9aae8561da326946dd4da678a (MD5) Approved for entry into archive by Flávia Ferreira(flaviaccf@yahoo.com.br) on 2013-05-30T00:18:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Elisangela Adorno.pdf: 3379043 bytes, checksum: 972521d9aae8561da326946dd4da678a (MD5) Made available in DSpace on 2013-05-30T00:18:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Elisangela Adorno.pdf: 3379043 bytes, checksum: 972521d9aae8561da326946dd4da678a (MD5) Previous issue date: 2005 Introdução. A hemoglobina S (HbS) resulta da troca de nucleotídeo (GAG GTG) no sexto codon do gene da globina beta, levando à substituição do ácido glutâmico por valina na cadeia da globina beta. A anemia falciforme ou a homozigose para a HbS, freqüentemente apresenta manifestações clínicas heterogêneas, fortemente relacionadas aos níveis de hemoglobina fetal (HbF). Objetivo. O presente estudo investigou as características fenopíticas e os marcadores moleculares presentes em portadores da anemia falciforme de Salvador-BA, identificando seqüências gênicas potencialmente importantes para a expressão dos genes gama. Métodos. O perfil de hemoglobinas e o nível de HbF foram determinados por cromatografia líquida de alta performance (HPLC). Informações sobre o perfil clínico dos pacientes foram obtidas através da análise de prontuários. A talassemia α2 3.7Kb foi investigada pela reação em cadeia da polimerase (PCR) e os haplótipos ligados ao grupo de genes da globina berta S foram investigados por PCR e análise de sítios polimórficos utilizando endonucleases de restrição (RFLP). As regiões promotoras dos genes yG e γA e o HS2-LCR foram amplificados assimetricamente e seqüenciadas no ABI Prism 3100 prism DNA Sequencer. As análises estatísticas foram desenvolvidas no software EPI-INFO versão 6.04 e a significância foi estabelecida para p < 0.05. Resultados. Foram analisados 131 pacientes, dos quais 125 tiveram identificado o genótipo beta S, tendo sido encontrado 64 (51,2%) CAR/Ben; 36 (28,8%) Ben/Ben; 18 (14,4%) CAR/CAR; dois (1,6%) CAR/Aty;dois (1,6%) Ben/Cam; um (0,8%) CAR/Cam; um (0,8%) Car/Arabia-India e um (0,8%) Sen/Aty. A talassemia 2 3.7Kb foi estudada em 110 pacientes, onde 30 (27,3%) foram heterozigotos e dois (1,8%) homozigotos. O uso de transfusão sangüínea foi maior em pacientes com HbF menor que ou igual a 10,0% (p=0,009). Pacientes com genótipos α diferentes apresentaram diferenças para os valores de Hb (p=0,018); Ht (p=0,019); VCM (p=0,0004) e HCM (p=0,039). Os níveis de HbF foram maiores entre os pacientes Ben/Ben que entre os CAR/CAR (p=0,007) e CAR/Ben (p=0,013). A análise das seqüências do HS2-LCR de dez indivíduos demonstrou a substituição G A na posição ?10.677, presente apenas entre os portadores do haplótipo Ben com nível elevado de HbF, sugerindo uma possível associação entre este polimorfismo, a expressão dos genes γ e a síntese da HbF. A análise da região promotora do gene γG demonstrou a substituição T C na posição -157, que parece ser uma seqüência característica entre os pacientes estudados. Também foi encontrada a deleção de 4 pb na posição ?222 a ?225 no gene γG e relacionado ao haplótipo Cam. Conclusões. Os dados demonstraram um novo polimorfismo localizado no HS2-LCR e na região promotora do gene γG da globina, justificando a realização de estudos adicionais, associando os níveis de HbF, marcadores biológicos e mecanismos relacionados, visando esclarecer um possível papel no desenvolvimento do fenótipo da doença. Salvador

We analyzed mitochondrial DNA haplotypes from 144 samples of islanders of the Taquile and Amantani (Quechua speakers) and Los Uros and Anapia (Aymara speakers) of the Lake Titicaca, Peru. We have found the highest frequency of B1 mtDNA haplotype ever reported: 100% in Taquile (n= 57); 88,6% in Amantani (n= 35); 87,5% in Anapia (n= 24) and 75% in Los Uros (n= 28). There are other haplotypes but in low frequencies: 11,4% of C1 in Amantani; 17,9% of A2 and 7,1% of D1 in Los Uros; 4,2% of C1, C2 and D1 haplotypes in Anapia. The high frequency of the B1 haplotype indicates that Taquile, Amantaní and Anapia islands have been populated by a reduced founder group. Although the genetic affinity between islanders of Anapia and Los Uros, the proportion of some alleles in the latter suggest the persistence of the uru genetic background., Los polimorfismos del ADN mitocondrial son herramientas en el estudio comparativo de poblaciones modernas y antiguas. Entre los más usados están los haplotipos mitocondriales basados en RFLP (polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción) y un sistema de inserción /deleción. El presente estudio establece la frecuencia de estos haplotipos y compara un total de 144 individuos representativos de las islas Taquile y Amantaní (lengua quechua) y de las islas de Los Uros y Anapia (lengua aymara) del lago Titicaca, Perú. Nuestros resultados revelan la predominancia del haplotipo B1: 100% en Taquile (n=57); 88,6% en Amantaní (n=35); 75% en Los Uros (n=28) y 87,5% en Anapia (n=24), siendo las frecuencias más altas registradas en el mundo. Otros haplotipos se observan en menor proporción: 17,9% de A2 y 7,1% de D1 en Los Uros; 11,4% de la variante C1 en Amantaní; 4,2% de cada haplotipo C1, C2 y D1 en Anapia. La alta frecuencia de B1 indica que las poblaciones de Taquile, Amantaní y Anapia provienen de un grupo fundador reducido. Aunque hay afinidad entre las poblaciones aymaras de Anapia y Los Uros; la proporción de algunos alelos en los últimos, sugiere la persistencia de un acervo genético uru en contraposición a la idea de su extinción.

No presente artigo abordaram-se vários aspectos relacionados à natureza molecular da anemia falciforme, desordem hematológica de caráter hereditário que acomete expressivo número de indivíduos em várias regiões do mundo. As pesquisas realizadas em torno desta patologia da hemácia, ao longo de quase um século, a partir de 1910, cooperaram para a criação de um novo e importante segmento da ciência, denominado biologia molecular. A descoberta dos polimorfismos da mutação (GAT->GTG) no gene que codifica a cadeia beta da hemoglobina, originando diferentes haplótipos da doença, permitiu um melhor e mais amplo conhecimento em torno da heterogeneidade clínica nos pacientes falcêmicos. Analisando a hemoglobina na sua estrutura normal e mutante, sua produção e evolução, pode-se ter um entendimento mais completo da fisiopatologia desta doença e da sua complexidade clínica. The present article dealt with various aspects related to molecular nature of sickle cell disease (SCD), a heritable hematology disorder that attacks a great number of people in different regions of the world. Researches done on red cell patology, in approximately half a century, starting since 1910, cooperated to gave origin a new branch of science called molecular biology. The discovery of mutation polymorphism (GAT -> GTC) in the gene that codifies beta globin chain, give origin to different illness haplotypes, permitted a better and great knowledge about the clinic heterogeneity of the patients. Analysing hemoglobin in its normal and mutation structure as well as in its productions and evolution, one can have a complete understanding of the illness phisiopathology and its clinical complexity.

Artículo científico -- Universidad de Costa Rica, Instituto de Investigaciones en Salud. 2002 Estimar el riesgo de ser portadoras a mujeres emparentadas por línea materna con un paciente afectado con DMD. Sitio de realización: Instituto de Genética Humana, Universidad Friedrich Alexander Erlangen-Nuremberg e INISA, Universidad de Costa Rica. Materiales y métodos. Se obtuvo ADN de 19 personas emparentadas por vía materna con un paciente afectado con DMD; para cada uno se analizaron, mediante PCR, 5 marcadores microsatelíticos ubicados en la región del gen de la distrofina. Se marcó un imprimador de cada par con un fluorocromo, se determinó el tamaño de los productos de amplificación por electroforesis capilar fluorescente y se construyeron haplotipos para la región de interés. Resultados. Se determine el haplotipo de riesgo en el paciente, el que también se encontró en dos primos suyos, adultos sanos y en tres de sus tías y tres primas. Los hermanos del paciente heredaron de su madre el cromosoma X portador del haplotipo normal. Conclusiones. Los resultados indican que el paciente herede una mutación de novo, originada en la línea germinal ya sea de la madre o de la abuela materna y que ninguna de las otras mujeres de la familia está en riesgo incrementado de ser portadoras. No es posible determinar si la madre del niño es portadora de la mutación. Universidad de Costa Rica, Vicerrectoria de Investigation, proyecto 742-97- 253 Servicio Alemán de Intercambio Academic° (DAAD) Universidad de Erlangen-Nuremberg, Institute de Genetica Humana. UCR::Vicerrectoría de Investigación::Unidades de Investigación::Ciencias de la Salud::Instituto de Investigaciones en Salud (INISA)

A partir del estudio del ADNmt en la población actual de los departamentos de Tacuarembó y Cerro Largo, se concluyó que el 59% de la población de Tacuarembó y el 30% en Cerro Largo tenían haplogrupos indígenas (se analizaron los haplogrupos A, B, C, D, y en el segundo caso, también el X). El objetivo de esta ponencia fue realizar una aproximación al número de mujeres indígenas que potencialmente contribuyeron con sus haplogrupos a la conformación de la población actual. Para esto, se analizan los datos genéticos con relación a datos censales, estimaciones y anuarios estadísticos. Se partió de la transmisión uniparental del ADNmt, asumiendo flujo génico direccional, cruzamientos al azar y a la población indígena como receptora de pobladores no indígenas. El período considerado abarca desde la fundación de las ciudades capitales departamentales (Melo, 1795 y Tacuarembó, 1832) hasta el último censo de población (1996). Para el siglo XX, se calculó el crecimiento vegetativo a partir de datos estadísticos de natalidad y mortalidad, mientras que para el siglo XIX, se realizaron estimaciones a partir de diversos modelos demográficos y datos comparativos. Las diferencias entre estimaciones basadas en el crecimiento vegetativo y los datos censales se interpretan como inmigración de individuos no indígenas o emigración de población al azar. Se discuten los valores de población estimados y las asunciones realizadas., Asociación de Antropología Biológica de la República Argentina (AABRA)

Recientemente el estudio del ADN mitocondrial de individuos de diferentes poblaciones humanas ha permitido determinar linajes mitocondriales específicos de diferentes áreas geográficas. El ADN mitocondrial por su herencia exclusivamente materna se ha constituido así en una herramienta importante para la deducción del origen geográfico del linaje materno de una persona. En el presente trabajo, con el objeto de determinar el origen geográfico de los linajes maternos de una muestra de 107 individuos no emparentados pertenecientes a los sectores universitario y obrero del partido de La Plata, se estudia un conjunto de 17 polimorfismos que diferencian 17 linajes mitocondriales de distribución geográfica definida. A través de ellos se resolvió el origen geográfico de los linajes maternos presentes en el 96% de la muestra. Los resultados demostraron que los individuos presentan un linaje materno de origen europeo en una frecuencia del 0,47, de origen americano en una del 0,44 y en una frecuencia del 0,02 se presentan linajes mitocondriales africanos. Los dos ámbitos muestreados se diferencian en la distribución de frecuencias para los linajes americanos, los cuales presentan en la muestra de obreros una frecuencia del 0,72 mientras que poseen una del 0,32 en los individuos provenientes del sector universitario. Esto estaría explicado porque grupos de matriz principalmente hispano-indígena constituyen la gran parte de la clase obrera de las grandes ciudades., Recent mtDNA studies on individuals of various human populations have allowed to determine mitochondrial lineages specific for different geographic areas. Due to its exclusively maternal inheritance, mtDNA has become an important tool for reconstructing the geographic origin of the maternal lineage of a given individual. In order to determine the geographic origin of maternal lineages in a sample of 107 unrelated individuals from the university and working sectors of La Plata area, a set of 17 polymorphisms belonging to 17 different mitochondrial lineages of well-established geographic distribution has been studied. Through these polymorphisms, the geographic origin of the maternal lineages present in 96% of the sample could be traced. Results revealed that the individuals present a maternal lineage of European origin in a frequency of 0,47, one of American origin in a frequency of 0,44; and in a frequency of 0,02 African mitochondrial lineages are present. Both groups of analyzed individuals differed in the distribution of frequencies for American lineages, presenting a frequency of 0,72 in the workers sample and one of 0,32 in the university sample. This difference could be explained by the fact that, in big cities, individuals belonging to the working class are mainly of Hispanic-Indigenous origin., Asociación de Antropología Biológica de la República Argentina

ackground:Mutations in theTGM1gene encoding transglutaminase 1 are a major cause of autosomal recessivecongenital ichthyosis. In the Galician (NW Spain) population, three mutations, c.2278C.T, c.1223_1227delACAC andc.984+1G.A, were observed at high frequency, representing,46%,,21% and,13% of allTGM1gene mutations,respectively. Moreover, these mutations were reported only once outside of Galicia, pointing to the existence of historicalepisodes of local severe genetic drift in this region.Methodology/Principal Findings:In order to determine whether these mutations were inherited from a common ancestorin the Galician population, and to estimate the number of generations since their initial appearance, we carried out ahaplotype-based analysis by way of genotyping 21 SNPs within and flanking theTGM1gene and 10 flanking polymorphicmicrosatellite markers spanning a region of 12 Mb. Two linkage disequilibrium based methods were used to estimate thetime to the most recent common ancestor (TMRCA), while a Bayesian-based procedure was used to estimate the age of thetwo mutations. Haplotype reconstruction from unphased genotypes of all members of the affected pedigrees indicated thatall carriers for each of the two mutations harbored the same haplotypes, indicating common ancestry.Conclusions/Significance:In good agreement with the documentation record and the census, both mutations arosebetween 2,800–2,900 years ago (y.a.), but their TMRCA was in the range 600–1,290 y.a., pointing to the existence ofhistorical bottlenecks in the region followed by population growth. This demographic scenario finds further support on aBayesian Coalescent Analysis based onTGM1haplotypes that allowed estimating the occurrence of a dramatic reduction ofeffective population size around 900–4,500 y.a. (95% highest posterior density) followed by exponential growth. LF is supported by the Isabel Barreto program from Xunta de Galicia and Fondo Social Europeo. This project was partially supported by projects of the Xunta de Galicia (10PXIB 9101297PR), the Instituto de Salud Carlos III (FIS PI10/00164) and Fondo Europeo de Desarrollo Regional (FEDER 2007–2013) and Fundación Mutua Madrileña given to AV, SAF2011-26983 and SAF2011-26983 from the Ministerio de Ciencia e Innovación given to AS SI

Journal Article; Research Support, Non-U.S. Gov't; BACKGROUND Multiple sclerosis (MS) is a multifactorial disease with a genetic basis. The strongest associations with the disease lie in the Human Leukocyte Antigen (HLA) region. However, except for the DRB1*15:01 allele, the main risk factor associated to MS so far, no consistent effect has been described for any other variant. One example is HLA-DRB1*03:01, with a heterogeneous effect across populations and studies. We postulate that those discrepancies could be due to differences in the diverse haplotypes bearing that allele. Thus, we aimed at studying the association of DRB1*03:01 with MS susceptibility considering this allele globally and stratified by haplotypes. We also evaluated the association with the presence of oligoclonal IgM bands against myelin lipids (OCMB) in cerebrospinal fluid. METHODS Genotyping of HLA-B, -DRB1 and -DQA1 was performed in 1068 MS patients and 624 ethnically matched healthy controls. One hundred and thirty-nine MS patients were classified according to the presence (M+, 58 patients)/absence (M-, 81 patients) of OCMB. Comparisons between groups (MS patients vs. controls and M+ vs. M-) were performed with the chi-square test or the Fisher exact test. RESULTS Association of DRB1*03:01 with MS susceptibility was observed but with different haplotypic contribution, being the ancestral haplotype (AH) 18.2 the one causing the highest risk. Comparisons between M+, M- and controls showed that the AH 18.2 was affecting only M+ individuals, conferring a risk similar to that caused by DRB1*15:01. CONCLUSIONS The diverse DRB1*03:01-containing haplotypes contribute with different risk to MS susceptibility. The AH 18.2 causes the highest risk and affects only to individuals showing OCMB. Yes

Introducción. Los restos óseos arcaicos son fuente privilegiada de información biológica y sucaracterización genética permite confirmar o descartar filiaciones propuestas por otrasaproximaciones científicas. La historia precolombina de los Andes orientales se divide en tresperiodos principales: i) un poblamiento temprano por parte de grupos cazadores-recolectores;ii) un periodo intermedio (Herrera) de pueblos con agricultura incipiente, y iii) un periodo tardíode pueblos chibchas, agrícolas y alfareros (agroalfarero).Objetivo. Analizar el ADN mitocondrial de restos óseos del periodo Herrera.Materiales y métodos. Se analizaron 11 individuos pertenecientes al yacimiento arqueológicoMadrid 2-41, con una edad aproximada de 2.000 años. Un fragmento (192 pb) del segmentohipervariable I fue amplificado y secuenciado, siguiendo criterios estrictos de autenticidad deADN arcaico. Las secuencias se compararon con las existentes en bases de datos deNorteamérica y Europa usando herramientas bioinformáticas.Resultados. Todas las secuencias resultaron idénticas y fueron clasificadas como haplogrupoB. Esto puede relacionarse con el tipo de entierro ritual practicado en Madrid 2-41, es decir,probablemente los individuos analizados hagan parte de una familia jerárquicamente importanteen la antigua sociedad Herrera. La búsqueda de secuencias homólogas en las bases de datosestadounidense y europea no arrojó coincidencias exactas, aunque existe el reporte de unindividuo amazónico de ~4.000 años de antigüedad (Brasil) cuya secuencia coincide con lahallada en Madrid 2-41.Conclusión. Los individuos del yacimiento arqueológico Madrid 2-41 están estrechamenteemparentados entre sí por línea materna y presentan una secuencia aparentemente ausenteen poblaciones actuales Introduction. Ancient bone remains constitute an important source of biological information,and their genetic characterization allows the confirmation or rebuttal of human affiliationsproposed on the basis of non-molecular approaches. Pre-Columbian history of the EasternAndes in Colombia has been divided into three main periods: (i) an early colonization bygroups of hunter-gatherers, (ii) an intermediate period “Herrera” characterized by primitiveagriculture and (iii) a late stage of Chibcha-speaking groups, with agriculture and ceramics(“agroalfarero”).Objective. The mitochondrial DNA on ancient bone remains of the Herrera period were analyzedfor comparison with modern and other ancient DNAs.Materials and methods. Mitochondrial DNA was extracted from 11 Herrera individuals [~2,000years before present (YBP)] found in the Madrid 2-41 archaeological site near Bogotá, Colombia.A 192 bp segment of the hypervariable segment I was amplified and sequenced, following stringent archaic DNA authenticity criteria. The sequences were compared with those inAmerican and European databases using bioinformatics tools.Results. All individuals had identical sequences and were classified as haplogroup B. Thisidentity may be related to the type of ritual burial performed in the site, probably exclusively formembers of a hierarchically important family of the ancient Herrera society. The search forhomologous sequences in the American and European mtDNA data bases produced noidentical coincidences, although a Brazilian Amazonic individual (~4,000 YBP) was recordedwith a matching sequence.Conclusion. Individuals buried in the Madrid 2-41 site were maternally closely related andshowed a mtDNA sequence that is apparently absent in contemporary populations

ResumenAntecedentesEl síndrome de ovario poliquístico es una enfermedad compleja y heterogénea que implica problemas reproductivos y metabólicos. Se ha sugerido una predisposición genética en la etiología de este síndrome. La identificación del gen de la calpaína-10 (CAPN10) como el primer gen asociado a diabetes mellitus tipo 2 suscitó el interés por investigar su posible relación con el síndrome de ovario poliquístico, debido a que este síndrome se asocia a hiperinsulinemia y resistencia a la insulina, 2 anormalidades metabólicas relacionadas con diabetes.ObjetivoInvestigar si existe asociación entre el SNP-63 y la variante indel-19 del gen CAPN10 y el síndrome de ovario poliquístico en mujeres en edad reproductiva.Material y métodosEl estudio incluyó a 101 mujeres (55 con síndrome de ovario poliquístico y 46 clínicamente sanas). La variante indel-19 se identificó mediante corrimiento electroforético de los fragmentos amplificados por PCR y el SNP-63 por PCR-RFLP.ResultadosLas frecuencias alélicas y genotípicas de las 2 variantes no difieren significativamente entre pacientes con síndrome de ovario poliquístico y mujeres del grupo control. El haplotipo 21 (definido por el alelo inserción de la variante indel-19 y el alelo C del SNP-63) se encontró con mayor frecuencia en los 2 grupos de estudio, siendo más frecuente en el grupo de pacientes; sin embargo, esta diferencia no fue estadísticamente significativa (p = 0.8353).ConclusionesLos resultados sugieren que el SNP-63 y la variante indel-19 del gen CAPN10 no son factores de riesgo para síndrome de ovario poliquístico en nuestro grupo de pacientes.AbstractBackgroundPolycystic ovary syndrome is a complex and heterogeneous disease leading to reproductive, as well as metabolic problems. It has been suggested that there may be a genetic predisposition in the aetiology of polycystic ovary syndrome. The identification of calpain 10 gene (CAPN10) as the first candidate gene for type 2 diabetes mellitus has focused the interest in investigating their possible connection with the polycystic ovary syndrome. This syndrome is associated with hyperinsulinaemia and insulin resistance, two metabolic abnormalities associated with type 2 diabetes mellitus.ObjectiveTo investigate if there is association between the SNP-63 and the genetic variant indel-19 of CAPN10 gene and polycystic ovary syndrome in women of reproductive age.Material and methodsThis study included 101 women (55 with polycystic ovary syndrome and 46 without polycystic ovary syndrome). The genetic variant indel-19 was identified by electrophoresis of the amplified fragments by PCR, and the SNP-63 by PCR-RFLP.ResultsThe allele and genotype frequencies of the two variants do not differ significantly between women with polycystic ovary syndrome and the control women group. The haplotype 21 (defined by the insertion allele of indel-19 variant and C allele of SNP-63) was found with higher frequency in both study groups, being more frequent in the polycystic ovary syndrome patients group, however, this difference was not statistically significant.ConclusionsThe results suggest that SNP-63 and indel-19 variant of CAPN10 gene do not represent a risk factor for polycystic ovary syndrome in our patient group.