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Recent advances in the diagnosis and treatment of inborn errors of metabolism (IEM) have improved substantially the prognosis for many of these conditions. In the clinical practice it is important to recognize this pathology mainly in an acute situation, when the early intervention is essential. In this article, we presented some therapeutic strategies for IEM that should be used to improve their prognose., Recentes avanços no diagnóstico e tratamento dos erros inatos do metabolismo têm melhorado substancialmente o prognóstico de muitos pacientes com estas condições. Na pratica médica é importante o diagnóstico precoce destas patologias, especialmente em um paciente agudamente enfermo, para que um tratamento adequado e rápido seja instituído. Neste artigo, apresentamos várias estratégias terapêuticas para alguns erros inatos do metabolismo, que devem ser utilizadas no sentido de melhorar o seu prognóstico.

Tesis (Doctora en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2022. Resumen: La enzima arginil-ARNt transferasa (Ate1) cataliza la transferencia de arginina desde un ARN de transferencia a una proteína aceptora. Este proceso conocido como arginilación postraduccional está involucrado en el catabolismo de proteínas, particularmente en la señalización de sustratos del sistema de degradación ubiquitina-proteasoma (UPS). En situaciones donde el UPS está comprometido, la célula activa el mecanismo proteolítico de autofagia para evitar la acumulación de especies tóxicas y mantener el fitness celular. No obstante, se desconoce si la arginilación es necesaria para el reconocimiento y la degradación de proteínas por la vía autofágica. Por este motivo, en este trabajo de tesis se propuso investigar la implicancia funcional de Ate1 en la autofagia. Se analizaron aspectos moleculares y celulares de las distintas variantes alternativas de la enzima durante la respuesta autofágica inducida por la inhibición del proteasoma. Utilizando diferentes metodologías, se demostró que las isoformas de Ate1 se localizan en el citosol y núcleo de la célula, mientras que una fracción de las mismas se une a membranas biológicas y proteínas del citoesqueleto. Esta distribución se correlaciona con la formación de estructuras de alto peso molecular, que se localizan en las proximidades del núcleo junto a la proteína adaptadora autofágica p62 y otros sustratos de degradación. Dada la importancia de p62 en el reconocimiento de sustratos, la compartimentación de Ate1 junto a esta proteína sugiere que podría ser necesaria durante la respuesta autofágica. Además, para comprender la implicancia biológica de la enzima en este proceso degradativo, se analizó la actividad autofágica en ausencia de Ate1, y frente a la expresión endógena y ectópica de la enzima en células. Con esta finalidad, se realizaron ensayos bioquímicos y de microscopía confocal que permitieron descubrir aspectos funcionales de la enzima. Se demostró que en ausencia de Ate1, el complejo mTORC1 está hiperactivado, lo cual disminuye el flujo de autofagia y provoca la acumulación de vacuolas y sustratos autofágicos en la célula. Además, se observaron defectos en la inducción de autofagia en condiciones de déficit nutricional. La expresión ectópica de una única isoforma de Ate1 permitió recuperar parcialmente el fenotipo salvaje. Este estudio sugiere que Ate1 podría contribuir al proceso de reconocimiento de los sustratos junto a p62 y permite establecer la importancia de la arginilación en la regulación del proceso de degradación autofágico. Abstract: arginyl-tRNA transferase (Ate1) enzyme catalyzes the transfer of arginine from a transfer RNA to an acceptor protein. This process known as post-translational arginylation is involved in protein catabolism, notably during substrates recognition by the ubiquitin-proteasome degradation system (UPS). When the UPS is compromised, cells activate autophagy, a proteolytic mechanism that prevents the accumulation of toxic species and maintains cellular homeostasis. To further investigate whether protein arginylation is required in this process, this work was focused on the functional implication of Ate1 in the autophagic pathway. Molecular and cellular aspects of Ate1 isoforms were analyzed during the autophagic response induced by proteasome inhibition using different experimental approaches. Ate1 isoforms were found in the cytosol and nucleus of the cell, whereas a fraction was associated with biological membranes and cytoskeleton proteins. This subcellular distribution correlates with the formation of high molecular weight structures, which are localized in the perinuclear region of the cell together with the autophagic adaptor protein, p62 and other degradation substrates. Given the importance of p62 in substrate recognition, the compartmentalization of Ate1 with this protein suggests that it may be required during autophagic response. To understand the biological implication of Ate1 in this degradative process, we assessed autophagic activity in the absence of the enzyme, and under endogenous or ectopic expression of Ate1 in cultured cells. Ate1 deletion causes mTORC1 complex hyperactivation, a decrease of autophagic flux and leads to an accumulation of autophagosomes and their substrates. Moreover, autophagic induction is impaired under fasting conditions. The observed phenotype can be partially rescued by reintroduction of stably expressed Ate1-specific isoform. Finally, this study suggests that Ate1 may contribute to the substrate recognition process together with p62 and highlights the importance of post-translational arginylation in the regulation of the autophagic degradation process. 2024-06-30 Fil: Bonnet, Laura Vanesa. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Os inibidores de protease (IP) produzidos pelos vegetais têm um amplo espectro de proteases- alvo. No entanto, as pragas agrícolas encontraram formas de debelar os efeitos negativos dos IP de suas plantas hospedeiras. Para compreender os mecanismos moleculares e fisiológicos envolvidos na interação inseto-planta, a lagarta da soja (Anticarsia gemmatalis) e a soja (Glycine max) foram utilizadas como animal e planta modelo. Por meio de diferentes abordagens bioquímicas e biológicas, este trabalho apresentou as hidrolases intestinais da A. gemmatalis com elevada cobertura mediante à metodologia de 1DE-LC/MS proposta. Essa estratégia, apresentada de forma inédita, possibilitou a identificação de 98 hidrolases não redundantes, compreendendo isoformas importantes no mecanismo adaptativo do inseto a IP de plantas. As variações ocorridas nesse proteoma foram avaliadas expondo a lagarta a IP. Os resultados mostraram modulações fisiológicas que foram capazes de driblar os efeitos negativos dos inibidores. Houve aumento de isoformas responsáveis por atividades proteolíticas bem como aumento de proteínas relacionadas a processos de estresse. A presença de IP na dieta causou respostas nas atividades enzimáticas que revelaram uma melhor adaptação da lagarta ao IP natural da soja quando comparado a inibidores sintéticos. As análises de docking molecular mostraram a termodinâmica e os sítios de ligação envolvidos no complexo enzima-inibidor (EI), revelando características importantes para um IP eficiente. Usando esse conhecimento como base, um tripeptídeo (GORE2) foi racionalmente desenhado para atuar como inibidor de tripsinas-like de A. gemmatalis. O transcriptoma do intestino da lagarta mostrou que a presença do GORE2 e do SKTI, inibidor natural da soja, foram responsáveis por 1474 genes diferencialmente expressos, revelando importantes enzimas envolvidas na resposta do inseto. O GORE2 proposto mostrou-se mais eficiente que o SKTI ao provocar danos celulares no epitélio intestinal. Os danos mais intensos e extensos provocados pelo inibidor peptídico foram acompanhados por estresse oxidativo e pela baixa eficiência na resposta do inseto para se desintoxicar do estresse oxidativo por meio de enzimas antioxidantes. Esses resultados permitiram um melhor entendimento sobre o arsenal bioquímico e molecular do herbívoro para propor um IP potente, abrindo caminho para novas abordagens no desenvolvimento de defensivos agrícolas ambientalmente corretos e eficientes no manejo de pragas. Palavras-chave: Anticarsia gemmatalis. Enzimologia. Glycine max. Manejo de pragas agrícolas. Proteômica. Protease inhibitors (PIs) produced by plants have a broad spectrum of target proteases. However, agricultural pests have overcome the negative effects of PI on their host plants. To understand the molecular and physiological mechanisms involved in the insect-plant interaction, the soybean caterpillar (Anticarsia gemmatalis) and soybean (Glycine max) were used as an animal and plant model. Through different biochemical and biological approaches, this work presented the intestinal hydrolases of A. gemmatalis with high coverage through the proposed 1DE-LC/MS method. This strategy, presented unprecedentedly, allowed the identification of 98 non-redundant hydrolases, comprising important isoforms in the adaptive mechanism of the insect to plant PI. The variations that occurred in this proteome were evaluated by challenging the caterpillar with PI. The results showed physiological modulations that aimed to circumvent the negative effects of inhibitors. There was an increase in isoforms responsible for proteolytic activities, as well as an increase in proteins related to stress processes. The presence of PI in the diet caused responses in the enzymatic activities that revealed a better adaptation of the caterpillar to the natural PI of soybean when compared to synthetic inhibitors. Molecular docking analyzes showed the thermodynamics and binding sites involved in the enzyme-inhibitor (EI) complex, shedding light on important features of an efficient IP. Using this knowledge as a basis, a tripeptide (GORE2) was rationally designed to act as a trypsin-like inhibitor of A. gemmatalis. The transcriptome of the caterpillar intestine showed that the GORE2 and SKTI, a natural soybean inhibitor, handled 1474 differentially expressed genes, revealing important enzymes involved in the insect’s response. The proposed GORE2 proved to be more efficient than SKTI, in causing cellular damage to the intestinal epithelium. The most intense and extensive damage caused by the peptide inhibitor was accompanied by oxidative stress and the low efficiency in the insect’s response to detoxify itself from oxidative stress through antioxidant enzymes. These results allowed a better understanding of the herbivore’s biochemical and molecular arsenal to propose a potent IP, opening the way for new approaches in the development of environmentally friendly and efficient pesticides in pest management. Keywords: Anticarsia gemmatalis. Enzymology. Glycine max. Agricultural pest management. Proteomics.

El objetivo de esta investigación fue utilizar enzimas y levaduras como estrategia para disminuir el contenido de cadmio durante la fermentación del cacao (Theobroma cacao L.). Se empleó un diseño completamente al azar con un arreglo bifactorial, donde el factor A corresponde al tiempo de fermentación (48, 96 y 120 horas); y el factor B midió el tipo de cultivo iniciador (fermentación; fermentación + levadura madre; fermentación + levadura madre + PPO). En total se evaluaron nueve tratamientos y los tratamientos T1, T2 y T3 fueron los controles. Se utilizó la prueba de Tukey con un nivel de significancia de p

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais Prevê-se que as mudanças climáticas incrementarão a severidade de adversidades ambientais, como mudanças nos regimes pluviométricos e a ocorrência de temperaturas mais extremas, impondo um grande risco para a produtividade das culturas agrícolas. Ao longo da evolução, as plantas desenvolveram elegantes mecanismos para lidar com distintas condições adversas por meio da ativação de diferentes vias de sinalização. A ocorrência de estresses abióticos, como estresse osmótico ou do retículo endoplasmático, tende a ativar vias celulares específicas, como a via de sinalização de morte celular mediada por proteínas contendo domínios DCD/NRP. As proteínas AtNRP1 e AtNRP2, componentes da via em Arabidopsis, foram caracterizadas como efetores do processo de morte celular programada via a ruptura da membrana vacuolar. Entender como esta via está integrada à estabilidade celular é essencial, justificando verificar as previstas e ainda não caracterizadas interações entre os componentes da via com outras proteínas, como AtCCR4a, uma deadenilase ativa tanto no processamento de RNAm quanto no metabolismo de sacarose/amido. Neste contexto, nós tivemos como objetivo investigar a interação entre AtNRP2 e AtCCR4a, e a sua função na ocorrência de estresses por alta temperatura e seca. Não foi observado o seu envolvimento direto com a via de sinalização mediada por proteínas NRP, mas AtCCR4a foi induzido por estresses osmótico e por alta temperatura. Além disso, a supressão de AtCCR4a promove um fenótipo drasticamente sensível ao estresse térmico, acarretando em reduções nos teores de pigmentos fotossintéticos dias após a exposição ao estresse e alterações negativas no metabolismo de carboidratos durante esta condição. Surpreendentemente, a supressão de AtCCR4a também promove um fenótipo mais tolerante ao estresse hídrico, contribuindo para maiores manutenção dos teores relativos de água em tecidos foliares e taxa de sobrevivência de plantas. Estes resultados indicam que AtCCR4a pode apresentar um papel antagônico em vias de resposta a estresses, provavelmente por regular a expressão de determinados genes a nível pós-transcricional e/ou selecionando RNAms-alvo específicos. Palavras-chave: Abiótico. Água. Arabidopsis. Calor. Deadenilase. Climate changes are expected to increase the severity of environmental adversities to plants, such as changes in rainfall regimes and the occurrence of more extreme temperatures, imposing a major risk to the productivity of agricultural crops. Throughout evolution, plants have evolved elegant mechanisms to cope with different adverse conditions, through the activation of different signaling pathways. The occurrence of abiotic stresses, such as osmotic stress or endoplasmic reticulum stress, tend to activate specific cellular pathways, such as the death cell signaling pathway mediated by proteins that contain DCD/NRP domains. The AtNRP1 and AtNRP2 proteins, components of the pathway in Arabidopsis, have been characterized as effectors of the programmed cell death process by the breakdown of the vacuolar membrane. Understanding how this pathway is integrated into cellular stability is essential, which justifies checking the predicted and not yet functionally characterized interactions among the components of the pathway with other proteins, such as AtCCR4a, a deadenylase that is both active in mRNA processing and in sucrose/starch metabolism. Given this context, we aimed to investigate the interaction between AtNRP2 and AtCCR4a, and its role during heat and drought stresses. We did not observe its direct involvement in the NRP-signaling pathway, however AtCCR4a was induced by osmotic and heat stresses. Furthermore, AtCCR4a disruption provides a drastically heat stress-sensitive phenotype, leading to reductions in photosynthetic pigment contents days after exposure to stress and negative changes in carbohydrate metabolism during this condition. Surprisingly, AtCCR4a disruption also promotes a more tolerant phenotype to water deficit, contributing to greater maintenance of relative water contents in leaf tissues and plant survival rate. These results indicate that AtCCR4a may have an antagonistic function in stress-responsive pathways, probably by regulating at a post-transcriptional level the expression of certain genes and/or by selecting specific target mRNAs. Keywords: Abiotic. Arabidopsis. Deadenylase. Heat. Water.

Objective. To evaluate the potentiality of the microbial consortium Curvularia kusanoi L7- Trichoderma pleuroticola as biological pretreatment of high fiber sources destined for animal production. Materials and methods. The Strains used where Curvularia kusanoi L7 and Trichoderma pleuroticola. The degradative potential was evaluated through the production kinetics of cellulolytic (endo-1,4-β-glucanase and exo-1,4-β-glucanase) and ligninolytics enzymes (laccase and peroxidase) in solid submerged fermentation of bran wheat and sugarcane bagasse. The growth of the co culture in plates was analyzed. The effect of the consortium on the carbon mineralization of raw wheat straw was determined and the degree of fiber degradation was evaluated by infrared spectroscopy (IR). Resulted. Both strains showed high cellulolytic production. Only C. kusanoi L7 showed ligninolytic activity, with a maximum laccase activity of 1400 U / L. No antagonism was found between the strains and the results of carbon mineralization and evaluation of their final products by IR indicate the effectiveness of the consortium to degrade the cell wall more efficiently than each of the strains individually. Conclusions. It is concluded that the microbial consortium C. kusanoi L7-T. pleuroticola has great potential for structural modification of fibrous sources destined for animal feeding., Objetivo. Evaluar la potencialidad del consorcio microbiano Curvularia kusanoi L7- Trichoderma pleuroticola como método biológico de pretratamiento de alimentos altos en fibra destinados a la producción animal. Materiales y métodos. Se utilizaron las cepas Curvularia kusanoi L7 y Trichoderma pleuroticola. Se evaluó el potencial degradativo a través de las cinéticas de producción de las enzimas celulolítica (endo-1,4-β- glucanasa y exo-1,4-β- glucanasa) y ligninolíticas (lacasa y peroxidasa) en fermentación sólido sumergido de salvado de trigo y de bagazo de caña de azúcar. Se analizó el crecimiento del cocultivo en placas. Se determinó el efecto del consorcio sobre la mineralización del carbono de la paja de trigo cruda y se evaluó el grado de degradación de la fibra por espectroscopía infrarroja (IR). Resultados. Ambas cepas mostraron alta producción celulolítica . Solo C. kusanoi L7 mostró actividad ligninolítica, con actividad lacasa máxima de 1400 U/L. No se encontró antagonismo entre las cepas y los resultados de mineralización del carbono y evaluación de sus productos finales mediante IR, indican la efectividad del consorcio para degradar la pared celular de forma más eficiente que cada una de las cepas de manera individual. Conclusiones. Se concluye que el consorcio microbiano C. kusanoi L7-T.pleuroticola presenta grandes potencialidades para emplearse en la modificación estructural de fuentes fibrosas destinadas a la alimentación animal.

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior A L-asparaginase é uma enzima de interesse farmacêutico e da indústria de alimentos com diversos usos, com destaque o uso no tratamento de leucemia linfoblástica aguda (LLA) e na contenção de acrilamida presente em alimentos processados em elevadas temperaturas. Embora atualmente a L-asparaginase comercial seja de origem bacteriana, há o interesse em novos microrganismos promissores capazes de produzi-la através de fermentação em estado sólido (FES). Neste trabalho foi investigado a produção de L-asparaginase por FES avaliando diferentes meios inertes, fungos e fontes de nutrientes em dois tipos de biorreatores (estático e rotativo). Na seleção dos microrganismos, foram testadas cinco leveduras (Pichia guilliermondii, Candida sake, Candida globosa, Cryptococcus victori e Leucosporidium scotti) e três fungos filamentosos (Penicillium sp. LAMAI-505, Fusarium sp. e o Monilia sitophila). Referente aos suportes sólidos inertes, foram avaliados a fibra cerâmica, a espuma de poliuretana e a lã de vidro. Com relação a fonte de nutrientes, foram investigados o uso de glicose, L-asparagina, glicerol e uma solução nutritiva oriunda do Tenébrio molitor. No que diz respeito a escolha do microrganismo, o Penicillium sp. LAMAI-505 foi selecionado por ser eficiente na produção de L-asparaginase e por ser classificado como GRAS (geralmente reconhecido como seguro) pela FDA (administração americana de comidas e drogas), por isso é amplamente aplicado na indústria alimentícia e no uso para produção de medicamentos. No que se refere ao meio inerte, foi observado que o fungo escolhido apresentou melhor adaptação no suporte sólido inerte de fibra cerâmica para obtenção de L-asparaginase, onde o uso de glicose (10 g/L) e L-asparagina (1 g/L) como fonte nutritiva atingiu atividade de 1591,7 U/kg de suporte sólido. Apesar do uso de Ténebrio molitor (5 g/100 mL) juntamente com o uso de glicerol (1 g) se tratar de uma biomassa complexa, possibilitou a produção de Lasparaginase (596,7 U/kg de suporte sólido). A aplicação de glicerol e de solução de Ténebrio molitor foram realizadas de duas maneiras: a) glicerol aplicado diretamente no suporte sólido inerte, sendo que em condições otimizadas de pH (1,2), concentração da fonte nutritiva (7,5 g de glicerol e 15 g/100 mL de Tenébrio molitor) e tempo (48 horas) atingiu atividade de 3391,7 U/kg; b) glicerol aplicado diretamente na solução nutritiva nas condições otimizadas de pH (1,2), concentração da fonte nutritiva (15 g/L de glicerol e 10 g/100 mL de Tenébrio molitor) e tempo (48 horas), atingiu atividade de 2666,7 U/kg de suporte sólido. Desta forma, optou-se por utilizar na FES com suporte sólido inerte o glicerol aplicado diretamente na solução nutritiva, devido a grande economia materiais adicionadas, sendo esta usada no biorreator rotativo (mantido a 5 rpm), que em condição otimizada obteve atividade de L-asparaginase de 2758,3 U/kg de suporte sólido. L-asparaginase is an enzyme of pharmaceutical interest and the food industry with several uses, highlighting the use of non-treatment of acute lymphoblastic leukemia (ALL) and the containment of acrylamide present in processed foods at high temperatures. Although commercial L-asparaginase is currently of bacterial origin, there is interest in promising new microorganisms capable of producing it by solid state fermentation (FES). In this work we investigated the production of L-asparaginase by FES evaluating different inert media, fungi and nutrient sources in two types of bioreactors (static and rotary). In the selection of the microorganisms, five yeasts (Pichia guilliermondii, Candida sake, Candida globosa, Cryptococcus victori and Leucosporidium scotti) and three filamentous fungi (Penicillium sp., LAMAI-505, Fusarium sp. and Monilia sitophila). Regarding the inert solid supports, the ceramic fiber, the polyurethane foam and the glass wool were evaluated. Regarding the source of nutrients, the use of glucose, L-asparagine, glycerol and a nutrient solution from the Tenébrio molitor were investigated. As regards the choice of the micro-organism, Penicillium sp. LAMAI-505 was selected for being efficient in the production of L-asparaginase and being classified as GRAS (generally recognized as safe) by the FDA (American Food and Drug Administration), so it is widely applied in the food industry and in use for production of medicines. As regards the inert medium, it was observed that the selected fungus presented better adaptation in the inert solid support of ceramic fiber to obtain L-asparaginase, where the use of glucose (10 g/L) and L-asparagine (1 g/L) as nutrient source reached activity of 1591.7 U/kg of solid support. Although the use of thermocycler (5 g/100 ml) together with the use of glycerol (1 g) was a complex biomass, it enabled the production of L-asparaginase (596.7 U/kg support solid). The application of glycerol and solution of Tenébrio molitor was carried out in two ways: a) glycerol applied directly to the solid inert support, under optimized conditions of pH (1,2), concentration of nutrient source (7.5 g of glycerol and 15 g/100 ml of Tenébrio molitor) and time (48 hours) reached activity of 3391.7 U/kg; b) glycerol applied directly to the nutrient solution under optimized conditions of pH (1,2), concentration of the nutrient source (15 g/L glycerol and 10 g/100 mL of Tenébrio molitor) and time (48 hours) , reached activity of 2666.7 U/kg of solid support. In this way, it was chosen to use in FES with solid inert support the glycerol applied directly to the nutrient solution, due to the great economy added materials, being used in the rotary bioreactor (maintained at 5 rpm), which in optimized condition obtained L activity -asparaginase of 2758.3 U/kg of solid support. Dissertação (Mestrado) 2024-02-21

É recomendável que cada laboratório se baseie em protocolos e procedimentos operacionais comuns com a finalidade de obter valores de referência “comuns” e “harmonizados” a nível nacional. O objetivo deste trabalho foi determinar os valores de referência das enzimas AST, ALT e GGT. A metodologia teve como base o documento CSLI / IFCC, C28-A3. A amostra inicial foi de 1688 indivíduos de Portugal continental, dos quais 1122 foram excluídos após a análise dos questionários (com patologias e/ou fumadores) de modo a obtermos uma população considerada “saudável”. Após a quantificação das enzimas por um método enzimático, verificou-se que não houve relevância nos resultados para diferentes grupos etários, embora tenha sido observada diferença estatística significativa quanto ao género ( p

Background and Purpose The enzyme α/β‐hydrolase domain containing 6 (ABHD6), a new member of the endocannabinoid system, is a promising therapeutic target against neuronal‐related diseases. However, how ABHD6 activity is regulated is not known. ABHD6 coexists in protein complexes with the brain‐specific carnitine palmitoyltransferase 1C (CPT1C). CPT1C is involved in neuro‐metabolic functions, depending on brain malonyl–CoA levels. Our aim was to study CPT1C–ABHD6 interaction and determine whether CPT1C is a key regulator of ABHD6 activity depending on nutritional status. Experimental Approach Co‐immunoprecipitation and FRET assays were used to explore ABHD6 interaction with CPT1C or modified malonyl–CoA‐insensitive or C‐terminal truncated CPT1C forms. Cannabinoid CB1 receptor‐mediated signalling was investigated by determining cAMP levels. A novel highly sensitive fluorescent method was optimized to measure ABHD6 activity in non‐neuronal and neuronal cells and in brain tissues from wild‐type (WT) and CPT1C–KO mice. Key Results CPT1C interacted with ABHD6 and negatively regulated its hydrolase activity, thereby regulating 2‐AG downstream signalling. Accordingly, brain tissues of CPT1C–KO mice showed increased ABHD6 activity. CPT1C malonyl–CoA sensing was key to the regulatory role on ABHD6 activity and CB1 receptor signalling. Fasting, which attenuates brain malonyl–CoA, significantly increased ABHD6 activity in hypothalamus from WT, but not CPT1C–KO, mice. Conclusions and Implications Our finding that negative regulation of ABHD6 activity, particularly in the hypothalamus, is sensitive to nutritional status throws new light on the characterization and the importance of the proteins involved as potential targets against diseases affecting the CNS., We thank Dr. Gemma Fabriàs and Alexandre García from the Research Unit of BioActive Molecules (Institut de Química Avançada de Catalunya, IQAC) for technical assistance in the analysis of endocannabinoid levels. We also thank Prof. Kenneth Mackie from the Department of Psychological and Brain Sciences, Indiana University Bloomington (USA), for providing ABHD6 antibody for western blotting assays in brain tissue. This work was supported by the Ministerio de Economía, Industria y Competitividad (MINECO), Agencia Estatal de Investigación (AEI) and Fondo Europeo de Desarrollo Regional (FEDER) (SAF2017‐83813‐C3‐3‐R to N.C. and R.R.‐R.), Joint Bilateral Project Japan‐Spain/AEI (PCI2018‐092997/AEI to R.R.‐R.) and Fundació La Marató de TV3 (Grant 87/C/2016 to N.C.). A.F. and C.R. are recipients of a fellowship from the Agència de Gestió d'Ajuts Universitaris i de la Recerca (AGAUR) in Catalonia.

Fil: Lissoni, Paolo. Instituto de Medicina Biológica; Italia Fil: Porta, Enrica. Instituto de Medicina Biológica; Italia Fil: Rovelli, Franco. Instituto de Medicina Biológica; Italia Fil: Messina, Giusy. Instituto de Medicina Biológica; Italia Fil: Lissoni, Arianna. Instituto de Medicina Biológica; Italia Fil: Porro, Giorgio. Rondinella Pharmacy; Italia Fil: Porro, Davide. Rondinella Pharmacy; Italia Fil: Di Fede, Giuseppe. Instituto de Medicina Biológica; Italia Fil: Monzon, Alejandra. Instituto de Medicina Biológica; Italia Fil: Sassola, Andrea. Instituto de Medicina Biológica; Italia Fil: Cardinali, Daniel Pedro. Pontificia Universidad Católica Argentina. Facultad de Ciencias Médicas; Argentina Abstract: The recent advances of the psychoneuroimmunology have demonstrated the existence of a physiological anti-inflammatory antitumor neuroendocrine axis, mainly constituted by the pineal gland through its indole hormone melatonin (MLT) and the ACE2-angiotensin 1-7 (Ang 1-7) system. Moreover, most human systemic diseases, including cancer, autoimmunity, metabolic, cardiovascular, and neurodegenerative pathologies, have appeared to be characterized by an endogenous deficiency in the functionless of the pineal gland and ACEACE2 system. Therefore, the exogenous correction of MLT and Ang 1-7 deficiency could improve the clinical control of human systemic diseases. On these bases, a preliminary study of MLT plus Ang 1-7 was planned in patients suffering from systemic alterations other than cancer and autoimmunity. The study included 33 consecutive patients, whose pathologies were, as follows: cardiovascular pathologies: 9; pulmonary diseases: 7; metabolic syndrome: 7; neurodegenerative pathologies: 10. Both Ang 1-7 and MLT were given orally, at a dose of 0.5 mg/day in the morning for Ang 1-7, and at a dose of 10 mg/day in the evening for MLT. The treatment was well tolerated in all patients, and no-therapy related toxicity occurred. On the contrary, most patients experienced a relief of anxiety and asthenia, and an improvement in both mood and quality of sleep. Moreover, most patients referred an increased diuresis. Blood pressure values progressively became within the normal range in hypertensive patients. On the same way, glucose and cholesterol levels progressively decrease on therapy in diabetic and hypercholesterolemic patients, respectively. Patients with pulmonary disturbance referred an important enhancement in the expectoration, with a following improvement in the respiratory symptomatology. Finally, an apparent improvement in cognitive and motor functions was achieved in patients with neurodegenerative pathologies. These preliminary results would suggest a future medical possibility to treat the human systemicdiseases by simply correcting their endogenous neuroendocrine deficiencies, mainly those involving the functions of the pineal gland and ACE2-Ang1-7 system.

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior CNPQ Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico A enzima 2-oxoglutarato desidrogenase (2OGDH) é uma enzima do ciclo do ácido tricarboxílico. Essa enzima é um complexo multi-enzimático formado por três subunidades que juntas são responsáveis por catalisar a conversão de 2-oxoglutarato (2OG) em succinil-CoA com liberação de NADH e CO 2 na matriz mitocondrial. Esta enzima é descrita como um importante ponto de regulação dos metabolismos de carbono e nitrogênio, pois na sua ausência a respiração, fotossíntese e assimilação de nitrogênio são alterados. Uma das frentes de controle do metabolismo exercido por essa enzima se deve ao fato de que seu substrato, 2OG, também ser utilizado para a síntese de aminoácidos no cloroplasto. Além disso, o 2OG desempenha um papel na sinalização celular e na regulação da expressão através das proteínas PII e das dioxigenases dependentes de 2-oxoglutarato. A fim de ajudar a elucidar as respostas associadas à falta de subunidades específicas do complexo 2OGDH, propusemos analisar o impacto causado pela falta da subunidade E1 dessa enzima no proteoma de plantas cultivadas sob condições de controle, assim como abordamos as contribuições desta enzima na resposta das plantas à imposição e recuperação do estresse abiótico. Como resultado, observamos que a falta da subunidade E1 da enzima 2OGDH está relacionada a uma redução nas proteínas do metabolismo fotossintético e fotorrespiratório que podem explicar as grandes reduções de crescimento observadas nas plantas mutantes. Também observamos que durante o período de estresse e recuperação, a falta da subunidade E1 tem maior impacto no metabolismo das raízes que respondem mais rapidamente ao estresse, onde vias alternativas como o GABA “shunt” podem ser ativadas para suprir a falta desta enzima, e durante a recuperação o metabolismo do carbono é priorizado sobre o nitrogênio nas raízes Palavras-chave: 2-oxoglutarado desidrogenase. Proteoma. Estresse abiótico. Respiração. Arabidopsis The enzyme 2-oxoglutarate dehydrogenase (2OGDH) is a tricarboxylic acid cycle enzyme. This enzyme is a multi-enzymatic complex formed by three subunits that together are responsible for catalyzing the conversion of 2-oxoglutarate (2OG) into succinyl-CoA with the release of NADH and CO 2 in the mitochondrial matrix. This enzyme is described as an important point of regulation and link between the metabolism of carbon and nitrogen since in its absence, important processes in the plant such as respiration, photosynthesis and nitrogen assimilation are altered. One way this enzyme exerts control over the metabolism is through the control in the levels of its substrate, 2OG, that is also used for the synthesis of amino acids in the chloroplast. In addition, 2OG plays a role in cell signaling and expression regulation through PII proteins and the 2-oxoglutarate-dependent dioxygenases. In order to help elucidate responses associated with the lack of specific subunits of 2OGDH complex, we set out to analyze the impact caused by the lack of the E1 subunit of the 2OGDH enzyme on the proteome of plants grown under control conditions and also approach the contributions of this enzyme in the response of plants to imposition and recovery of abiotic stress. As a result, we observed that the lack of the E1 subunit of the 2OGDH enzyme is related to a reduction in photosynthetic and photorespiratory metabolisms proteins that may explain the large growth reductions observed in the mutant plants. We also observed that during the period of stress and recovery, the lack of the E1 subunit has a greater impact on the metabolism of roots that respond more quickly to stress, where alternative pathways such as GABA shunt can be activated in order to overcome the lack of this enzyme, and during recovery carbon metabolism is prioritized over nitrogen in the roots. Keywords: 2-oxoglutarate dehydrogenase. Proteome. Abiotic stress. Respiration. Arabidopsis

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Leishmaniose é o nome dado as enfermidades causadas por protozoários do gênero Leishmania que são capazes de gerar diversos quadros de doenças em seres humanos, dependendo da espécie envolvida na infecção podem ocorrer desde lesões cutâneas localizadas a lesões disseminadas e infecção visceral. No Brasil a leishmaniose visceral (LV) é causada principalmente por Leishmania infantum chagasi (syn Leishmania infantum). A LV tem os cães e o homem como principais espécies afetadas, é uma doença endêmica ocorrendo principalmente em regiões rurais, mas que vem apresentando tendência a urbanização. Segundo o ministério da saúde entre 1990 e 2016 foram relatados mais de 75000 casos desta doença no Brasil. As ecto- nucleotidases da família E-NTPDase são enzimas capazes de hidrolisar nucleotideos di e/ou trifostato e atuam em diversos processos relacionados a infeciosidade deste parasito, além de terem potencial para uso em diagnóstico de LV em cães. Duas isoformas são conhecidas em L. infantum chagasi, LiNTPDase1 e LiNTPDase2. Nosso objetivo foi estudar possíveis inibidores dessas enzimas. Nesse trabalho foram realizadas diferentes abordagens: atividade enzimática, docking, ensaio de adesão e avaliação in vitro da capacidade desses compostos de eliminar formas amastigotas de L. infantum. Constatamos que os compostos quercetina, IL-05 e IL-09 foram capazes de inibir a atividade da LiNTPDase2 e matar os parasitos. Análises bioquímicas demonstraram que os compostos IL-09 e o IL-05 atuam como inibidores competivos da LicNTPDase2 e eliminam em até 50% as formas amastigotas quando administrados na concentração de 50µM. Estes dados podem reforçar a participação destas enzimas no desenvolvimento e infecciosidade do parasito e indicam a possibilidade de atuarem como novos fármacos para o tratamento da Leismaniose Visceral no futuro. Palavras-chave: Leishmaniose. NTPDase. Leishmania Leishmaniasis is the name given to diseases caused by protozoans of the genus Leishmania that are capable of generating several disease states in humans, depending on the Leishmania species involved in the infection, can occur from localized skin lesions to disseminated lesions and visceral infection. In Brazil the visceral leishmaniasis (VL) is caused by the species Leishmania infantum chagasi and its transmission occurs by the bite of females of the insect Lutzomya longipalpis. VL has dogs and man as main species affected, is an endemic disease occurring mainly in rural regions, but that has been showing a strong tendency to urbanization. According to the Health Ministry between 1990 and 201, more than 75,000 cases of this disease have been reported in Brazil. The Ecto-nucleotidases from the E- NTPDase family are enzymes capable of hydrolyzing di- and / or triphosphate nucleotides and act in several processes related to the infectivity of this parasite, besides being potential for use in the diagnosis of VL in dogs. Two isoforms of these enzymes are known in L. infantum, LiNTPDase1 and LiNTPDase2. Our aim was to study possible inhibitors of these enzymes. In this work, different approaches were carried out: enzymatic activity, docking, adhesion assay and in vitro evaluation of the ability of these compounds to eliminate amastigote forms of L. infantum. We found that the compounds quercetin, IL-05 and IL-09 were able to inhibit LiNTPDase2 activity and eliminate these parasites. Biochemical analyzes showed that IL-09 and IL-05 act as competitive inhibitors of LicNTPDase2 and eliminate up to 50% of the amastigote forms when administered at a concentration of 50µM. These data may reinforce the participation of these enzymes in the development and infectivity of the parasite and indicate the possibility of work as possible pharmacological targets for the treatment of Visceral Leishmaniasis in the future. Keywords: Leishmaniasis. NTPDases. Leishmania

Submitted by Sarah Santiago (srhraquel@hotmail.com) on 2022-08-04T16:46:14Z No. of bitstreams: 3 460??_Ata_de_Defesa_-_Sarah_Raquel_assinado_HSP_assinado.pdf: 344326 bytes, checksum: 0b02951b1c788f83d4764d1747097806 (MD5) Carta de encaminhamento.pdf: 91247 bytes, checksum: 76e777b5a2c4910b75a54588bee0857c (MD5) Tese Sarah Raquel Final.pdf: 2285591 bytes, checksum: b32ff903204edeaf6e27a9460821e033 (MD5) Approved for entry into archive by PPG BIONORTE (secestadualppgbionorte@uea.edu.br) on 2022-08-23T17:43:11Z (GMT) No. of bitstreams: 3 460??_Ata_de_Defesa_-_Sarah_Raquel_assinado_HSP_assinado.pdf: 344326 bytes, checksum: 0b02951b1c788f83d4764d1747097806 (MD5) Carta de encaminhamento.pdf: 91247 bytes, checksum: 76e777b5a2c4910b75a54588bee0857c (MD5) Tese Sarah Raquel Final.pdf: 2285591 bytes, checksum: b32ff903204edeaf6e27a9460821e033 (MD5) Rejected by Divis??o de Documenta????o/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br), reason: Corrigir na Ficha Catalogr??fica (alterar apenas o que foi solicitado e manter as demais informa????es): a) Onde se l?? "Orientador???, leia-se "Orientadora" (Selecionar a op????o Orientadora no formul??rio). b) Corrigir o nome da orientadora que deve constar apenas ???Antonia Queiroz Lima de Souza???, sem espa??o e ??? ( ??? ao final. c) Deve-se inserir a Ficha conforme gerada automaticamente pelo sistema (N??o alterar formata????o e texto manualmente). on 2022-08-24T19:16:09Z (GMT) Submitted by Sarah Santiago (srhraquel@hotmail.com) on 2022-09-13T01:23:29Z No. of bitstreams: 3 460??_Ata_de_Defesa_-_Sarah_Raquel_assinado_HSP_assinado.pdf: 344326 bytes, checksum: 0b02951b1c788f83d4764d1747097806 (MD5) Carta de encaminhamento.pdf: 91247 bytes, checksum: 76e777b5a2c4910b75a54588bee0857c (MD5) Tese Sarah Raquel Final.pdf: 2312688 bytes, checksum: c2e6ff134d7d07a170d892b2428324a2 (MD5) Approved for entry into archive by PPG BIONORTE (secestadualppgbionorte@uea.edu.br) on 2022-09-13T15:16:43Z (GMT) No. of bitstreams: 3 460??_Ata_de_Defesa_-_Sarah_Raquel_assinado_HSP_assinado.pdf: 344326 bytes, checksum: 0b02951b1c788f83d4764d1747097806 (MD5) Carta de encaminhamento.pdf: 91247 bytes, checksum: 76e777b5a2c4910b75a54588bee0857c (MD5) Tese Sarah Raquel Final.pdf: 2312688 bytes, checksum: c2e6ff134d7d07a170d892b2428324a2 (MD5) Approved for entry into archive by PPG BIONORTE (secestadualppgbionorte@uea.edu.br) on 2022-09-13T15:16:49Z (GMT) No. of bitstreams: 3 460??_Ata_de_Defesa_-_Sarah_Raquel_assinado_HSP_assinado.pdf: 344326 bytes, checksum: 0b02951b1c788f83d4764d1747097806 (MD5) Carta de encaminhamento.pdf: 91247 bytes, checksum: 76e777b5a2c4910b75a54588bee0857c (MD5) Tese Sarah Raquel Final.pdf: 2312688 bytes, checksum: c2e6ff134d7d07a170d892b2428324a2 (MD5) Rejected by Divis??o de Documenta????o/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br), reason: 1. Verificar a capa e folha de rosto que constam apenas o nome da Universidade do Estadual do Amazonas. A ???Universidade Federal do Amazonas??? deve constar, tamb??m, para submiss??o no BDTD/UFAM. 2. Deve-se manter a informa????o "Ficha catalogr??fica elaborada automaticamente de acordo com os dados fornecidos pelo(a) autor(a)", conforme gerada automaticamente pelo sistema na parte superior da Ficha Catalogr??fica. on 2022-09-14T20:00:43Z (GMT) Submitted by Sarah Santiago (srhraquel@hotmail.com) on 2022-09-14T20:24:24Z No. of bitstreams: 3 460??_Ata_de_Defesa_-_Sarah_Raquel_assinado_HSP_assinado.pdf: 344326 bytes, checksum: 0b02951b1c788f83d4764d1747097806 (MD5) Carta de encaminhamento.pdf: 91247 bytes, checksum: 76e777b5a2c4910b75a54588bee0857c (MD5) Tese Sarah Raquel Final.pdf: 2313313 bytes, checksum: 8dcd0ce5e3c38c9f051a4d6be92ab445 (MD5) Approved for entry into archive by PPG BIONORTE (secestadualppgbionorte@uea.edu.br) on 2022-09-21T19:21:03Z (GMT) No. of bitstreams: 3 460??_Ata_de_Defesa_-_Sarah_Raquel_assinado_HSP_assinado.pdf: 344326 bytes, checksum: 0b02951b1c788f83d4764d1747097806 (MD5) Carta de encaminhamento.pdf: 91247 bytes, checksum: 76e777b5a2c4910b75a54588bee0857c (MD5) Tese Sarah Raquel Final.pdf: 2313313 bytes, checksum: 8dcd0ce5e3c38c9f051a4d6be92ab445 (MD5) Approved for entry into archive by PPG BIONORTE (secestadualppgbionorte@uea.edu.br) on 2022-09-21T19:20:58Z (GMT) No. of bitstreams: 3 460??_Ata_de_Defesa_-_Sarah_Raquel_assinado_HSP_assinado.pdf: 344326 bytes, checksum: 0b02951b1c788f83d4764d1747097806 (MD5) Carta de encaminhamento.pdf: 91247 bytes, checksum: 76e777b5a2c4910b75a54588bee0857c (MD5) Tese Sarah Raquel Final.pdf: 2313313 bytes, checksum: 8dcd0ce5e3c38c9f051a4d6be92ab445 (MD5) Approved for entry into archive by Divis??o de Documenta????o/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2022-09-30T14:59:31Z (GMT) No. of bitstreams: 3 460??_Ata_de_Defesa_-_Sarah_Raquel_assinado_HSP_assinado.pdf: 344326 bytes, checksum: 0b02951b1c788f83d4764d1747097806 (MD5) Carta de encaminhamento.pdf: 91247 bytes, checksum: 76e777b5a2c4910b75a54588bee0857c (MD5) Tese Sarah Raquel Final.pdf: 2313313 bytes, checksum: 8dcd0ce5e3c38c9f051a4d6be92ab445 (MD5) Made available in DSpace on 2022-09-30T14:59:31Z (GMT). No. of bitstreams: 3 460??_Ata_de_Defesa_-_Sarah_Raquel_assinado_HSP_assinado.pdf: 344326 bytes, checksum: 0b02951b1c788f83d4764d1747097806 (MD5) Carta de encaminhamento.pdf: 91247 bytes, checksum: 76e777b5a2c4910b75a54588bee0857c (MD5) Tese Sarah Raquel Final.pdf: 2313313 bytes, checksum: 8dcd0ce5e3c38c9f051a4d6be92ab445 (MD5) Previous issue date: 2022-03-29 CAPES - Coordena????o de Aperfei??oamento de Pessoal de N??vel Superior FAPEAM - Funda????o de Amparo ?? Pesquisa do Estado do Amazonas The cultivation of caesarweed (Urena lobata) is cultural in the State of Amazonas since 1970 and the production of these fibers has had its ups and downs in the local economy. Currently, they are cultivated by riverside dwellers, being one of the main crops in the State of Amazonas. Malviculturists face some adversities in the process of obtaining fiber, such as onychomycosis, dermatoses, in addition to the risk of attacks by venomous animals. The Amazon region is potentially rich in microorganisms and among these are endophytic fungi, fungi associated with aquatic environments and soil. In chapter I, the microorganisms isolated and preserved from the tissues of in natura and macerated caesarweed are presented, in addition to the environments associated with their planting, obtaining 191 preserved fungi from a total of 344 isolated microorganisms. The fungi were grouped and 10% of the total of each group was sequenced, obtaining 24 different species with biotechnological potentials reported in the literature. In chapter II, Fusarium pseudocircinatum (1290) and Corynespora torulosa (1291) strains were evaluated for their potential for lignocellulase production using dried and crushed caesarweed as substrate in Manachini and GLBN 40 mineral salt solutions over 10 days under agitation. in submerged cultivation. The enzymatic extracts were filtered in a vacuum filtration system (Millipore 0.22 ??m) and the lignocellulases activities were quantified. C. torulosa was the best producer of laccase (8,691 U/L), MnP (5,353 U/L), ??-glucosidase (0.3285 U/mL) and CMCase (0.7038 U/mL) and F. pseudocircinatum was the best producer of FPase (1.29 U/mL), xylanase (12.05 U/mL) and pectinase (0.18 U/mL). None of the strains showed Lignin Peroxidase activity. In chapter III, the strains F. pseudocircinatum, Trichoderma longibrachiatum and Talaromyces pratensis were evaluated for pectinase production varying the temperature (28, 30 and 32?? C), pH (4, 5 and 6) and cultivation time (3, 4 and 5 days) using dry caesarweed (5%) as substrate in submerged cultivation. F. pseudocircinatum showed the highest peak of pectinase production (0.2261 U/mL) under test conditions 28 ??C, pH 6, on the 4th day of cultivation. Under these conditions, 18 fungi were tested for pectinase production and the three best strains [F. pseudocircinatum (1290) 0.2261 U/mL, Westerdykella dispersa, (1321) 0.2113 U/mL) and Diaporthe eucalyptorum, (1300) 0.1981 U/mL] were subjected to xylanase quantification [1290 (4.6113 U/mL), 1321 (2.7388 U/mL) and 1300 showed no activity] and CMCase [1300 (0.1003 U/mL), 1321 (0.0887 U/mL) and 1290 showed no activity]. Strains 1290 and 1321 were selected for production on a larger scale and for the shredding test where caesarweed stalks (10 cm) were submerged in an enzymatic solution at concentrations of 50, 100 and 200 mg/mL, at temperatures of 40 and 50 ??C and collected at 3, 5 and 7 days. Both enzymatic extracts promoted fiber softening and defibration. The extract of the strain of F. pseudocircinatum (1290), temperature of 40 ??C, 200 mg/mL and 7 days of incubation was more efficient in the defibration of caesarweed, allowing the reduction of the maceration time. Therefore, this research aimed to evaluate the potential of fungal enzymes for the processing of caesarweed in search of an alternative that provides a reduction in the defibering time and improves the quality of the fibers. O cultivo de malva (Urena lobata) para a produ????o de fibras ?? cultural no Estado do Amazonas desde 1970 com a imigra????o japonesa e essas fibras tiveram seus altos e baixos na economia local ao longo do tempo. Atualmente s??o cultivadas por ribeirinhos sendo uma das principais culturas do Estado do Amazonas. Os malvicultores encontram v??rias adversidades no processo de obten????o da fibra, tais como onicomicoses, dermatoses, al??m do risco de ataques de animais pe??onhentos. A regi??o Amaz??nica ?? potencialmente rica em microrganismos e dentre estes est??o os fungos endofiticos, fungos associados a ambientes aqu??ticos e ao solo. No cap??tulo I, apresenta-se os microrganismos isolados e preservados dos tecidos da malva in natura e macerada, al??m dos ambientes associados ao seu plantio, obtendo-se 191 fungos preservados de um total de 344 microrganismos isolados. Os fungos foram agrupados e 10% do total de cada grupo foi sequenciado obtendo-se 24 esp??cies diferentes com potenciais biotecnol??gicos relatados na literatura cient??fica. No cap??tulo II as linhagens Fusarium pseudocircinatum (1290) e Corynespora torulosa (1291) foram avaliadas quanto ao seu potencial de produ????o de lignocelulases usando como substrato a malva seca e triturada nas solu????es de sais minerais Manachini e GLBN 40 ao longo de 10 dias sob agita????o em cultivo submerso. Os extratos enzim??ticos foram filtrados em sistema de filtra????o a v??cuo (Millipore 0,22 ??m) e quantificadas as atividades de lignocelulases. C. torulosa foi o melhor produtor de lacase (8.691 U/L), MnP (5.353 U/L), ??-glicosidase (0,3285 U/mL) e CMCase (0,7038 U/mL) e o F. pseudocircinatum foi o melhor produtor de FPase (1,29 U/mL), xilanase (12,05 U/mL) e pectinase (0,18 U/mL). Nenhuma das linhagens apresentou atividade de Lignina Peroxidase. No cap??tulo III as linhagens F. pseudocircinatum, Trichoderma longibrachiatum e Talaromyces pratensis foram avaliadas quanto ?? produ????o de pectinase variando a temperatura (28, 30 e 32?? C), pH (4, 5 e 6) e tempo de cultivo (3, 4 e 5 dias) utilizando malva seca (5%) como substrato em cultivo submerso. O F. pseudocircinatum apresentou o maior pico de produ????o de pectinase (0,2261 U/mL) nas condi????es de ensaio 28?? C, pH 6, no 4?? dia de cultivo. Nestas condi????es, 23 fungos foram testados quanto ?? produ????o de pectinase e as tr??s melhores linhagens [F. pseudocircinatum (1290) 0,2261 U/mL, Westerdykella dispersa, (1321) 0,2113 U/mL e Diaporthe eucalyptorum, (1300) 0,1981 U/mL] foram submetidos ?? quantifica????o de xilanase [1290 (4,6113 U/mL), 1321 (2,7388 U/mL) e 1300 n??o apresentou atividade] e CMCase [1300 (0,1003 U/mL), 1321 (0,0887 U/mL) e 1290 n??o apresentou atividade]. As linhagens 1290 e 1321 foram selecionadas para a produ????o em escala maior e para o ensaio de desfibramento onde talos de malva (10 cm) foram submersos em solu????o enzim??tica nas concentra????es 50, 100 e 200 mg/mL, temperatura de 40 e 50?? C e analisados com 3, 5 e 7 dias. Ambos os extratos enzim??ticos promoveram o amolecimento da fibra e desfibramento. O extrato da linhagem de F. pseudocircinatum (1290), temperatura de 40?? C, 200 mg/mL e 7 dias de incuba????o foi mais eficiente no desfibramento de malva possibilitando a redu????o do tempo de macera????o desta. O potencial de enzimas f??ngicas para o processamento da malva em busca de uma alternativa que proporcione a redu????o do tempo de desfibramento e aprimore a qualidade das fibras foi comprovado com est?? pesquisa.

Tesis Doctoral inédita leída en la Universidad Autónoma de Madrid, Facultad de Ciencias, Departamento de Química Física Aplicada. Fecha de Lectura: 09-03-2022, La quimosina es una aspartil proteasa (o proteasa ácida) usada en la industria alimentaria para la elaboración de quesos. Naturalmente se produce en el cuajo de animales rumiantes jóvenes, pero con el avance de las técnicas del ADN recombinante para suplir la demanda que impone tanto el mercado como la industria especializada en la elaboración y fabricación de quesos. Así, en la presente tesis, hemos intentado desarrollar un nuevo sistema de producción heteróloga de esta proteína mejorando su hiperprodución por clonaje en Escherichia coli. El proceso ha consistido en el clonaje del gen de la proquimosina A bovina, optimizado en el uso de codones para E. coli, con el vector pBAD/His bajo el control del promotor PBAD inducible por L- arabinosa, por cuestiones económicas. La sobreexpresión del gen genera cuerpos de inclusión de proquimosina que son luego desnaturalizados por lavados con NaOH, para posteriormente replegar la proteína por dilución y ajuste de pH con glicina. Una vez plegada la proquimosina se activa la quimosina mediante un drástico cambio de pH. Las unidades de coagulación de leche (IMCUS) de quimosina recombinante que se han obtenido durante el proceso de fermentación una vez optimizado el proceso alcanzan aproximadamente 1000 U/L de cultivo por unidad de DO600. Como el proceso de activación/purificación tiene lugar a pHs muy ácidos, el control de este es algo complejo, por lo que buscamos nuevas alternativas para suplir este inconveniente. Tales alternativas fueron diseñar soportes sólidos y nanopartículas magnéticas para que, en un solo paso pudiéramos realizar todo el proceso de purificación y activación de la proteína

The aim of this research was to evaluate the changes in the soil quality associated with the implementation of ecological agriculture (EA) techniques in coffee plantations under different coverings (banana, mandarin, and a mix of citrus fruits) in San José de Pare, Boyacá. To this effect, changes in physicochemical parameters, the abundance of functional groups of microorganisms (phosphate solubilizers, cellulolytic microorganisms, nitrogen fixers), and enzymatic activities (acid and alkaline phosphatase, β-glucosidase, urease, and protease) were determined. The soil samples were collected on a bimonthly basis for a period of ten months in plots cultivated with coffee plantations with three different coverings: banana, mandarin, and a mix of citrus fruits. The results showed modifications in the soil quality indicators as a consequence of the application of EA techniques, finding a significant increase in the content of phosphorus, carbon, phosphate solubilizing bacteria and fungi, and cellulolytic fungi. In contrast, no significant changes were observed for enzymatic activity. Resumen La presente investigación tuvo como objetivo evaluar cambios de la calidad del suelo asociados a la implementación de técnicas de agricultura ecológica (AE) en cafetales bajo diferentes coberturas en San José de Pare, Boyacá. Para el cumplimiento de este objetivo se determinaron cambios en parámetros fisicoquímicos, abundancia de grupos funcionales de microorganismos (solubilizadores de fosfatos, celulolíticos, fijadores de nitrógeno) y actividades enzimáticas (fosfatasa acida y alcalina, β-glucosidasa, ureasa y proteasa). Las muestras de suelo se recolectaron de manera bimensual durante un periodo de diez meses en parcelas con cultivo de café con tres diferentes coberturas: plátano, mandarina y una mezcla de cítricos. Los resultados mostraron modificaciones de los indicadores de calidad del suelo como consecuencia de la aplicación de técnicas de AE, encontrando un aumento significativo en el contenido de fósforo, carbono, bacterias y hongos solubilizadores de fosfato y hongos celulolíticos. En contraste, no se observaron cambios significativamente relevantes en la actividad enzimática.

In advanced biotechnology, the utilization of enzymes to achieve new or modified compounds with antibacterial, fungicidal, and anti-cancer specifications is crucial. Mushroom lactases are a hopeful biocatalyst for the synthesis and modification of different compounds. They are an accessible and inexpensive enzyme for the preparation of reaction objects and have recently received attention. Laccase purification was performed from basidiomycete Lentinus strigosus (LS) in several stages: Stage 1. On ion-exchange chromatography on TEAE Servacell 23 (400 ml), two distinctly separated laccase activity peaks were observed, eluted from the carrier at 0.21 and 0.27 M NaCl. In order to reduce the loss of enzymes, all fractions with laccase activity were collected, concentrated, and desalted using an ultrafiltration cell (Amicon, United States) with a UM-10 membrane. Stage 2. The resulting preparation with laccase activity was applied to a Q-Sepharose column (60 ml). Two well-separated peaks with laccase activity were obtained during the elution: laccase I (0.12 M NaCl) and laccase II (0.2 M NaCl). Stage 3. In the course of further purification of both enzymes, carried out on anion-exchange carrier Resource Q (6 ml), a broken gradient was used: 0 - 10%, 10 - 20%, and 20 - 100% with 1M NaCl. Stage 4. Both laccase I and laccase II, obtained after Resource Q, were desalted, concentrated to 1 ml each, and applied to a Superdex 75 gel filtration column. As a result, two laccases were obtained in a homogeneous form. Resumo Na biotecnologia moderna, o uso de enzimas para obter compostos novos ou modificados com propriedades antibacterianas, antifúngicas e anticancerígenas é crucial. Lactases de cogumelos são biocatalisadores promissores para síntese e modificação de diferentes compostos, por serem enzimas baratas e disponíveis para a preparação de componentes de reação, e vem recebendo a devida atenção recentemente. A purificação da lacase foi realizada a partir do basidiomiceto Lentinus strigosus em vários estágios: Etapa 1 - na cromatografia de troca iônica em TEAE Servacell 23 (400 ml), foram observados dois picos de atividade da lacase distintamente separados, com eluição do transportador a 0,21 e 0,27 M de NaCl. Para reduzir a perda de enzimas, todas as frações com atividade de lacase foram coletadas, concentradas e dessalinizadas em uma célula de ultrafiltração (Amicon, Estados Unidos) com membrana UM-10; Etapa 2 - a preparação resultante com atividade de lacase foi aplicada a uma coluna Q-Sepharose (60 ml). Durante a eluição, foram obtidos dois picos bem separados com atividade de lacase: lacase I (NaCl 0,12 M) e lacase II (NaCl 0,2 M); Etapa 3 - no decurso da purificação adicional de ambas as enzimas, realizada no Recurso Q de transportador de troca aniônica (6 ml), um gradiente quebrado foi usado: 0-10%, 10-20% e 20-100% com NaCl 1M; Etapa 4 - tanto a lacase I como a lacase II, obtidas após o Recurso Q, foram dessalinizadas e concentradas para 1 ml cada e aplicadas a uma coluna de filtração em gel Superdex 75. Como resultado, duas lacases foram obtidas de forma homogênea.

Tesis (Doctora en Neurociencias) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2022 Resumen: Capítulo 1 - Introducción General, apartado aclaratorio en el que se describe el marco conceptual de la investigación realizada y la motivación que llevo a la realización n de los estudios y experimentos que dan cuerpo a esta Tesis Doctoral. El objetivo de esta parte es facilitar a los evaluadores y lectores del manuscrito de la Tesis, una adecuada ubicación teórica. Seguidamente, realizamos una versión resumida de la investigación bibliográfica y de los conocimientos alcanzados hasta la fecha, acerca del sistema de reparación por escisión de bases del ADN (BER), su relación con el reloj biológico, como se ve afectado durante el envejecimiento y los efectos de la restricción calórica durante ese estado fisiológico, particularmente, en el cerebelo de rata. Esta recopilación bibliográfica, da una visión global de los tópicos a los que actualmente se está prestando una mayor atención en el campo, y que, se cree, deberían abrir otras líneas de investigación durante los próximos años. Capítulo 2 – Hipótesis y Objetivos, aquí se enuncian la hipótesis y los objetivos que nos propusimos en la presente Tesis Doctoral, poniendo de relieve los aspectos innovadores de esta investigación. Capítulo 3 – Materiales y métodos, se describe la metodología empleada en los experimentos realizados. Incluye una descripción detallada del modelo animal, materiales, técnicas empleadas, análisis estadístico, programas informa ticos usados. Capítulos 4- Evaluación fisiológica y comportamental del modelo experimental, describimos los resultados de las experiencias realizadas a fin de cumplimentar los objetivos propuestos y comprobar la hipótesis planteada. Capítulos 5- Análisis de los patrones temporales de los niveles de expresión del factor neurotrófico derivado del cerebro, Bdnf, y de su receptor TrkB, en cerebelo y su posible regulación circadiana y epigenética, describimos los resultados de las experiencias realizadas a fin de cumplimentar los objetivos propuestos y comprobar la hipótesis planteada. Capítulos 6- Análisis de la expresión circadiana de enzimas que participan en la reparación del ADN por escisión de base y estudio de su regulación temporal, en cerebelo de rata, describimos los resultados de las experiencias realizadas a fin de cumplimentar los objetivos propuestos y comprobar la hipo tesis planteada. Parte IV: Conclusión y Discusión, comprende el capítulo 7. Capítulo 7 – Conclusión. En la conclusión hacemos una recopilación general de todas aquellas observaciones y hallazgos generales, que obtuvimos a lo largo del desarrollo de este trabajo. Discusión. Aquí realizamos el análisis e interpretación de los resultados, confrontándolos con los de otros autores y discutimos su impacto y aporte al conocimiento. 2024-02-28 Fil: Castro Pascual, Ivanna Carla. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina. Fil: Anzulovich Miranda, Ana Cecilia. Universidad Nacional de San Luis, Argentina. Fil: Chiesa, Juan José. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología. Laboratorio de Cronobiología; Argentina. Fil: Degano, Alicia Laura. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Química Biológica; Argentina. Fil: Degano, Alicia Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentina. Fil: Duero, Dante Gabriel. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Psicología; Argentina. Fil: Martín, Mauricio Gerardo. Universidades Nacional de Córdoba; Argentina. Fil: Martín, Mauricio Gerardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigación Médica Mercedes y Martín Ferreyra; Argentina.

[ES] Debido a la creciente importancia de la dieta en el manejo de la salud, sigue habiendo un gran interés en desentrañar como se procesan los alimentos en el sistema digestivo humano. La estructura de los alimentos puede influir significativamente en su procesamiento, afectando al rendimiento durante la alimentación y la digestión. Específicamente, la digestión de alimentos a base de carbohidratos requiere una mayor comprensión debido a su contribución a los niveles de glucosa en sangre. El conocimiento de la cinética de digestión del almidón contribuirá a diseñar alimentos a medida para controlar los niveles de glucosa posprandial. El objetivo de esta tesis doctoral fue adquirir una mejor comprensión del impacto de la microestructura en la digestión del almidón y cómo las enzimas digestivas podrían ser moduladas por compuestos fenólicos. Con ese propósito, se evaluó el papel de la estructura del pan en la masticación in vivo y la digestión in vitro. Posteriormente, se produjeron geles de almidón de diferentes fuentes y se digirieron en un sistema de digestión oro-gastro-intestinal in vitro para analizar el impacto de la microestructura del gel. Después de los estudios de microestructura en geles de almidón y pan, se exploraron diferentes ácidos fenólicos o extractos polifenólicos de algas como inhibidores de enzimas digestivas de almidón, y se evaluó la participación de la microestructura del gel de almidón en la digestión enzimática. La masticación y la textura del bolo de panes tostados de trigo se vio afectada por su diferente estructura, a pesar de que no se observaron diferencias en la percepción sensorial. El proceso de panificación también ofreció la posibilidad de modificar la estructura del pan. De hecho, la variación de la forma de la masa dio lugar a panes con diferentes propiedades estructurales y texturales de la miga. La digestión de los panes con diferente estructura de miga confirmó que se disgregaban de manera diferente, produciendo variaciones en la posterior digestibilidad del almidón. Una vez que se estableció la importancia de la microestructura de la miga en la digestión del almidón, se cambió el enfoque para enlazar la microestructura de los geles de almidón con su digestión in vitro. Los geles obtenidos con almidones de distintas fuentes botánicas mostraron diferente digestibilidad, lo que se relacionó con su microestructura, pero también con su contenido de amilosa. Considerando la acción de las enzimas digestivas (α-amilasa y α-glucosidasa) sobre la hidrólisis del almidón, se estudiaron diferentes compuestos fenólicos para comprender las interacciones entre los compuestos fenólicos y las enzimas o sustratos. La forma más eficaz de inhibir las enzimas era incubarlas con ácidos fenólicos. Se necesitó una mayor concentración del inhibidor cuando los compuestos fenólicos interactuaban previamente con el sustrato, debido a su retención dentro del gel de almidón. La estructura química de los ácidos fenólicos controlaba la inhibición de la enzima. Asimismo, los extractos fenólicos complejos, como los extraídos de las algas A. nodosum, podrían utilizarse para inhibir las enzimas digestivas, mostrando mayor efecto inhibidor cuando fueron previamente incubados con la enzima, debido a la existencia de complejos carbohidrato-polifenoles con sus diferentes capacidades inhibitorias. Además, los ácidos fenólicos afectaron las propiedades de pegado y, por lo tanto, a la estructura y textura de geles de almidón. Sin embargo, esos cambios no fueron suficientes para controlar la hidrólisis enzimática del almidón, que estaba relacionada con la estructura química de los ácidos fenólicos y sus propiedades. En general, la microestructura de la miga o del gel puede limitar la accesibilidad de las enzimas digestivas, lo que reduciría la hidrólisis del almidón. Además, la inclusión de ácidos fenólicos en alimentos a base de almidón podría ser la alternativa para reducir el grado de digestión del almidón al inhibir estas enzimas., [CA] A causa de la creixent importància de la dieta en el maneig de la salut, segueix sent de gran interès desentranyar com es processen els aliments en el sistema digestiu humà. L'estructura dels aliments pot influir significativament en el processament dels aliments, afectant al seu rendiment durant l'alimentació i la digestió. Específicament, la digestió d'aliments a base de carbohidrats requereix una major comprensió a conseqüència de la seua contribució als nivells de glucosa en sang. El coneixement de la cinètica de la digestió del midó contribuirà a dissenyar aliments a mesura per controlar els nivells de glucosa postprandial. L'objectiu d'aquesta tesi doctoral va ser adquirir una millor comprensió de l'impacte de la microestructura en la digestió del midó i com els enzims digestius podrien ser modulats per l'ús de compostos fenòlics. Amb aquest propòsit, es va avaluar el paper de l'estructura del pa en la masticació in vivo i la digestió in vitro. Posteriorment, es van produir gels de midó de diferents fonts i es van digerir en un sistema de digestió oro-gastrointestinal in vitro per analitzar l'impacte de la microestructura del gel. Després dels estudis de microestructura en gels de midó i pa, es van explorar diferents àcids fenòlics o extractes polifenòlics d'algues com inhibidors dels enzims digestius del midó, i es va avaluar la participació de la microestructura del gel de midó en la digestió enzimàtica. La masticació i la textura de la bitla de pans torrats de blat es va veure afectada per les seues diferencies estructurals, tot i que no es van observar diferències en la percepció sensorial. El procés de panificació va oferir la possibilitat de modificar l'estructura del pa. De fet, la variació de la forma de la massa va donar lloc a pans amb diferents propietats d'estructura i textura de la molla. La digestió dels pans amb diferent estructura de molla va confirmar que es disgregaven de manera diferent, produint variacions en la posterior digestibilitat del midó. Una vegada que es va establir la importància de la microestructura de la molla en la digestió del midó, es va canviar l'enfocament per a enllaçar la microestructura dels gels de midó amb la seua digestió in vitro. Els gels obtinguts amb midó de diferent fonts botàniques van mostrar diferent digestibilitat, el que es va relacionar amb la seua microestructura, però també amb el seu contingut d'amilosa. Considerant l'acció dels enzims digestius (α-amilasa i α-glucosidasa) sobre la hidròlisi del midó, es van estudiar diferents compostos fenòlics per a comprendre les interaccions entre els fenòlics i els enzims o substrats. La forma més eficaç d'inhibir els enzims era incubar-los amb àcids fenòlics. Es va necessitar una major concentració de l'inhibidor quan els compostos fenòlics interactuaven prèviament amb el substrat, a causa de la seua retenció dins del gel de midó. L'estructura química dels àcids fenòlics controlava la inhibició de l'enzim. Així mateix, els extractes fenòlics complexos, com els extrets de l'alga A. nodosum, podrien utilitzar-se per a inhibir els enzims digestius, mostrant major efecte inhibidor quan van ser prèviament incubats amb l'enzim, a causa de l'existència de complexos carbohidrat-polifenols amb les seues diferents capacitats inhibitòries. A més, els àcids fenòlics van afectar les propietats de pegat i, per tant, la estructura i textura dels gels de midó. No obstant, estos canvis en la estructura i textura dels gels no van ser suficients per a controlar la hidròlisi enzimàtica del midó, que estava relacionada amb l'estructura química dels àcids fenòlics i les seues propietats. En general, la microestructura de la molla de pa o gel de midó pot limitar l'accessibilitat dels enzims digestius, la qual cosa reduiria la hidròlisi del midó. A més, la inclusió d'àcids fenòlics en aliments a base de midó podria ser l'alternativa per a reduir el grau de digestió del midó en inhibir aquests enzims., [EN] Due to the increasing importance of diet on health management, it remains of utmost interest to unravel how food is processed in the human digestive system. Food structure can significantly influence food processing, affecting its performance during eating and digestion. Specifically, the digestion of carbohydrates-based foods requires further insight due to their contribution to blood glucose levels. The knowledge of starch digestion kinetics will contribute to design tailored foods for managing postprandial glucose levels. The objective of this doctoral thesis was to acquire a better understanding of the impact of microstructure on starch digestion and how digestive enzymes might be modulated by the use of phenolic compounds. With that purpose, the role of bread structure on in vivo mastication, and in vitro digestion was evaluated. Subsequently, starch gels from different sources were produced and digested in an in vitro oro-gastro-intestinal digestion system to analyze the impact of gel microstructure. After the microstructure studies on bread and starch gels, different phenolic acids or seaweed polyphenolic extracts were explored as inhibitors of starch digestive enzymes, and the involvement of starch gel microstructure on the enzymatic digestion was assessed. Mastication of toasted wheat breads was affected by their different structures, despite no differences in the sensory perception was observed. Bolus texture was also altered by bread structure and texture. The breadmaking process offered the possibility to modify the bread structure. In fact, varying dough shaping led to breads with different crumb structure and texture properties. After stressing the importance of selecting the in vitro oral processing method used to simulate mastication, the further digestion of the bread with different crumb structure confirmed that they were differently disaggregated yielding variations on posterior starch digestibility. Once stating the importance of crumb microstructure on starch digestion, the focus was shifted to connect starch gels microstructure with its in vitro digestion. Gels obtained with a different type of starch, from cereals, pulses, or tubers, showed different digestibility, which was related to their microstructure but also their amylose content. Considering the action of digestive enzymes (α-amylase and α-glucosidase) on starch hydrolysis, different phenolic compounds were studied to understand the interactions between phenolics and either enzymes or substrates. The most effective way to inhibit enzymes was to incubate them with phenolic acids. A higher concentration of the inhibitor was needed when phenolic compounds interacted previously with the substrate, due to their retention within the starch gel. The chemical structure of phenolic acids controlled the enzyme inhibition. Similarly, complex phenolic extracts, like those extracted from A. nodosum seaweed could be used to inhibit digestive enzymes, showing greater inhibition effect when they were previously incubated with the enzyme, owing to the existence of carbohydrate-polyphenol complexes their different inhibitory capabilities. In addition, phenolic acids affected pasting properties and therefore gel microstructure and gel texture of starches. However, those changes on gels microstructure and texture were not enough to control starch enzymatic hydrolysis, which was related to the specific chemical structure of the phenolic acids and their properties. Overall, crumb or gel microstructure can limit digestive enzymes accessibility, which would reduce the starch hydrolysis. Moreover, the inclusion of phenolic acids on starch-based foods might be the alternative to reduce the extent of starch digestion by inhibiting digestive enzymes., Authors acknowledge the financial support of the Spanish Ministry of Science, Innovation and Universities (Project RTI2018-095919-B-C21) funded by MCIN/AEI/10.13039/501100011033, “ERDF A way of making Europe” by the “European Union”, Generalitat Valenciana (Project Prometeo 2017/189) and Xunta de Galicia (ED431B 2019/01). This work is based upon the work from COST Action 18101 SOURDOMICS – Sourdough biotechnology network towards novel, healthier and sustainable food and bioprocesses, where A. Aleixandre was supported by COST (European Cooperation in Science and Technology). COST is a funding agency for research and innovation networks.

Essential oils and enzymes are alternatives to feed additives for ruminants that aim to replace the use of ionophores and improve animal performance, but their mechanisms of action are different. Therefore, the present study aimed to verify if there is a synergistic effect in the combined use of enzymes carbohydrates and essential oils on the performance, ingestive behavior and carcass traits of steers fed a high-energy diet. During the finishing period of 78 days, 40 steers were assigned to four treatments: CON- control; ENZ- enzymatic complex; EO- essential oil blend; ENZ+EO - enzymatic complex combined with essential oil blend. Regardless of the feedlot periods, the ENZ+EO treatment caused a reduction in the dry matter intake (12.48%) compared to the control. The ENZ+EO treatment resulted in the lowest mean fecal output and, consequently, the highest dry matter digestibility (DMD) and starch digestibility (SD), compared to the other treatments. Animals that received EO and ENZ+EO in the diet spent more time in feeding. As for the number of times animals visited the feeding trough, the highest values were presented by the animals in the EO, ENZ and ENZ+EO treatments. For the carcass parameters, only the subcutaneous fat thickness on the rib was significantly different between treatments, with the highest values obtained by adding EO and ENZ+EO (8.80 and 8.10 mm respectively). Thus, the combination of carbohydrate enzymes and essential oils proved to be synergistically beneficial in relation to better use of nutrients and productive performance of feedlot steers. Os óleos essenciais e as enzimas são alternativas de aditivos alimentares para ruminantes que visam substituir o uso de ionóforos e melhorar o desempenho animal, porém seus mecanismos de ação são distintos, diante disso, o presente estudo teve por objetivo verificar se há efeito sinérgico no uso associado de enzimas carboidrases e óleos essenciais sobre o desempenho, comportamento ingestivo e características de carcaça de novilhos recebendo dieta de alta densidade energética. Durante 78 dias, período de terminação, 40 novilhos foram distribuídos em quatro tratamentos: CON - controle; ENZ - complexo enzimático; OE - mistura de óleos essenciais; ENZ+OE - complexo enzimático associado a mistura de óleos essenciais. Independentemente dos períodos de confinamento, o tratamento ENZ+OE apresentou maior redução na ingestão de matéria seca (12,48%) quando comparado ao controle. O tratamento ENZ+OE foi o que apresentou a menor produção média de fezes e a maior digestibilidade da matéria seca (DMS) e digestibilidade do amido (DA), comparado aos demais tratamentos. Os animais que receberam dieta contendo OE e ENZ+OE passaram maior tempo se alimentando, já em relação ao número de vezes que os animais visitaram o cocho de alimentação, as maiores médias ficaram com os animais dos tratamentos OE, ENZ e ENZ+OE. Para os parâmetros avaliados em carcaça apenas a espessura de gordura subcutânea nas costelas apresentou diferença significativa entre os tratamentos, sendo as maiores médias obtidas pela adição de OE e ENZ+OE (8.80 e 8.10 mm, respectivamente). Dessa forma, a associação de enzimas carboidrases e óleos essenciais mostrou-se sinergicamente benéfica em relação ao melhor aproveitamento dos nutrientes e desempenho produtivo de novilhos confinados.

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior A composição da fração lipídica do leite de cabra possui potencial para produção de aromas naturais. A hidrólise enzimática é a melhor alternativa para liberação de ácidos graxos de cadeia curta e média, porém, quando realizada de forma convencional, apresenta baixa taxa de conversão, longo tempo de reação e alto consumo de energia, o que pode estar correlacionado com a estrutura dos glóbulos de gordura. Nesse contexto, esse estudo objetivou avaliar o uso das tecnologias de ultrassom (US), dispersão de alto cisalhamento (DAC), agitação (AGT), homogeneização convencional (HC) e homogeneização à alta pressão (HAP) na melhora da hidrólise enzimática de lipídios do creme de leite de cabra (CLC), seus efeitos na estrutura desse substrato, bem como os parâmetros cinéticos da hidrólise assistida por US do creme de leite de cabra pré-tratado por DAC, AGT e HAP sob condições otimizadas. Para isso, primeiramente CLC (20% de gordura) foi processado a 50°C por US (15 e 30 min, 20 kHz e 38,4W/L), DAC (5 e 10 min, 12.500 e 25.000 rpm), AGT (4 e 8 min, 550 W), HC (15 MPa) e HAP (40 MPa). Após os processos, a estrutura do CLC foi avaliada pela cremeação em espectrofotômetro, índice de estabilidade de emulsão (IEE) e microestrutura utilizando um microscópio óptico. Para avaliar a hidrólise do CLC pré-processado, foi adicionada lipase (Lipozyme TL 100L, Novozymes) e as reações foram realizadas em banho termostático a 50°C por 300 min. Em paralelo, para avaliar o efeito da hidrólise assistida por ultrassom, CLC (20% de gordura), foi processado a 50°C por AGT (4 min, 550 W), DAC (25.000 rpm/5min) e HAP (40 MPa). Em seguida, a mesma enzima foi adicionada e a reação foi conduzida em banho termostático a 20, 35 e 50°C por 300 minutos e no banho ultrassonico (20 kHz e 38,4W/L) nas mesmas temperaturas. Durante a hidrólise, a concentração de ácidos graxos (CAG) foi determinada e os dados foram modelados para obter a taxa de hidrólise e a CAG final. Os pré-tratamentos promoveram aumento na taxa de hidrólise (até 3,9 vezes - efeito maior em baixas temperaturas) e na CAG final (aumento de até 9,4 vezes), independente da temperatura avaliada. Em ordem crescente, US < HC < DAC (5 min/25.000 rpm) < HAP < AGT (4 min) apresentaram os melhores resultados. Além disso, esses tratamentos também promoveram as maiores mudanças na estrutura do CLC. AGT, HAP e DAC em condições otimizadas mostraram menordesestabilização da emulsão, maior IEE e menor tamanho de glóbulo de gordura. Além disso, verificou-se um aumento no CAG final (até 72%) nas reações assistidas por ultrassom em diferentes temperaturas, independente do pré-tratamento aplicado. Os maiores aumentos na CAG final foram observados na hidrólise assistida por US em temperaturas mais baixas (20 e 35°C). Portanto, a aplicação de diferentes processos físicos e o uso da tecnologia de ultrassom durante a hidrólise surge como uma alternativa interessante para melhorar a hidrólise do creme de leite de cabra pela lipase. Palavras-chave: Gordura do leite de cabra. Lipase. Hidrólise enzimática. Processos físicos. The lipid fraction composition of goat milk has the potential to produce natural flavors. Enzymatic hydrolysis is the best alternative for the release of short- and medium-chain fatty acids, however, when performed in a conventional manner, it has a low conversion rate, long reaction time and high energy consumption, which may be correlated with the structure of the fat globules. In this context, this study aimed to evaluate the use of ultrasound (US), high-shear dispersing (HSD), stirring (ST), and low or high pressure homogenization (LPH or HPH) technologies to improve the enzymatic hydrolysis of lipids in goat milk cream (GMC) and its effects on GMC structure, as well as the kinetic parameters of ultrasound-assisted hydrolysis of GMC pretreated by HSD, ST and HPH technologies under optimized conditions. For this, firstly GMC (20% fat) was processed at 50°C by US (15 and 30 min, 20 kHz, and 38.4W/L), HSD (5 and 10 min, 12,500 and 25,000rpm), ST (4 and 8 min, 550 W) and low (15 MPa) and high (40 MPa) pressure homogenization. After the processes, the GMC structure was evaluated by creaming process in a spectrophotometer, emulsion stability index (ESI), and microstructure using an optical microscope. To evaluate the hydrolysis of preprocessed GMC, lipase (Lipozyme TL 100L, Novozymes) was added, and the reactions were carried out in a thermostatic bath at 50°C for 300 min. In parallel, to assess the effect of ultrasound-assisted hydrolysis, GMC (20% fat), it was processed at 50°C by ST (4 min, 550 W), HSD (25,000rpm / 5min), and HPH (40 MPa) and then, the same enzyme was added and the reaction was conducted in a thermostatic bath at 20, 35 and 50 °C for 300 minutes and in an ultrasound bath (20 kHz and 38.4W/L) at the same temperatures. During hydrolysis, the fatty acids concentration (FAC) was determined, and the data were modeled to obtain the hydrolysis rate and the final FAC. The pretreatments promoted an increase in the hydrolysis rate (up to 3.9 times - greater effect at low temperatures) and in the final FAC (an increase of up to 9.4 times), regardless of the evaluated temperature. In ascending order, US< LPH< HSD (5 min/25,000rpm) < HPH< ST (4 min) showed the best results. In addition, these treatments also promoted the greatest changes in the GMC structure. ST, HPH, and HSD in optimized conditions showed a lower emulsion destabilization, higher ESI, and smaller fat globule size.Furthermore, an increase in the final FAC (up to 72%) was verified in the reactions assisted by ultrasound at different temperatures, regardless of the pretreatment applied. The greatest increases in final FAC were observed in US assisted hydrolysis at lower temperatures (20 and 35°C). Therefore, the application of different physical processes and the use of ultrasound technology during hydrolysis appears as an interesting alternative to improve the goat milk cream hydrolysis by lipase. Keywords: Goat milk fat. Lipase. Enzymatic hydrolysis. Physical process.

Tesis (Doctor en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2022 Las ADN glicosilasas son enzimas que catalizan el primer paso del sistema de reparación de bases por escisión (BER). En plantas, un homólogo de la enzima MBD4 de humanos llamada MBD4L tiene la capacidad de reconocer y escindir timina, uracilo y derivados halogenados de uracilo (5-FU, 5-BrU y 5-hmU) in vitro. La timina y el uracilo pueden ser generados por la desaminación de 5mC y C, respectivamente, mientras que 5-hmU se genera por desaminación/oxidación de 5mC. Esas bases modificadas podrían formarse durante condiciones de estrés. Como MBD4L presenta localización nuclear, la enzima podría reconocer y escindir tales bases modificadas del ADN genómico in vivo. En este trabajo de tesis Doctoral se estudió la actividad in vivo de MBD4L y el efecto fenotípico de mutantes para el gen que codifica esta enzima bajo condiciones de estrés genotóxico por 5-FU y 5-BrU, y estrés biótico causado por infección bacteriana (Pseudomonas syringae pv. tomato -Pst-). Determinamos el rol diferencial entre MBD4L y AtUNG, otra ADN glicosilasa con capacidad de reconocer U in vitro. Nuestros resultados muestran que las mutantes mbd4l presentan niveles bajos de ADN fragmentado en presencia de 5-FU y 5-BrU. Curiosamente, estas plantas presentan un crecimiento reducido y una elevada muerte celular en sus ápices radicales. Por otro lado, determinamos que AtUNG está presente en el núcleo, y es activa en presencia de 5-FU, pero no frente a 5-BrU. Por otra parte, debido a que MBD4L promueve la descondensación de cromocentros (CCs) en presencia de Pst, analizamos si otras ADN glicosilasas, que responden a daños oxidativos, podrían también participar de este proceso. Además, evaluamos qué relación existe entre la descondensación de CCs y la reparación del ADN bajo estas condiciones. En primer lugar, demostramos que OGG1 y FPG no son esenciales para descondensar los CCs en presencia de Pst. Por ello, MBD4 y OGG1/FPG tienen efectos diferenciales en la descondensación de CCs y reparación del ADN en respuesta a Pst. Más aún, MBD4L sería la principal ADN glicosilasa que media la reparación y alteración de la heterocromatina centromérica en plantas sometidas a este estrés biótico. Finalmente analizamos los blancos genómicos de MBD4L. Para ello, seleccionamos secuencias peri/centroméricas (heterocromatina) y distales al centrómero (eucromatina) para evaluar los niveles de metilación bajo condiciones de daño de bases por desaminación y/o oxidación de 5mC (Pst). En mutantes mbd4l detectamos hipermetilación de secuencias peri/centroméricas tratadas con Pst. Sin embargo, también observamos hipometilación en algunos loci distales al centrómero. Estos resultados nos sugieren que MBD4L tendría un efecto dual (desmetilación y re-metilación) en la regulación de la metilación del ADN, dependiendo de las características de la cromatina en la que actúa. 2024-01-31 Fil: Torres, José Roberto. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina. Fil: Álvarez, María Elena. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Química Biológica; Argentina. Fil: Álvarez, María Elena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentina. Fil: Bocco, José Luis. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina. Fil: Bocco, José Luis. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Fil: Argaraña, Carlos Enrique. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Química Biológica; Argentina. Fil: Argaraña, Carlos Enrique. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentina. Fil: Asís, Ramón. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina. Fil: Asís, Ramón. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Fil: Spampinato, Claudia Patricia. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Bioquímica y Farmacia; Argentina. Fil: Spampinato, Claudia Patricia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Estudios Fotosintéticos y Bioquímicos; Argentina.