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Dissertation for Master Degree in Biotechnology Supervisor, Acinetobacter species have become a major cause of nosocomial infections worldwide due to its inherent and adaptive resistance towards the majority of antibiotics, survival in hostile environments and virulence traits. The increased mortality rates associated with these hard-to-treat bacteria urgently demands the development of new therapeutic options. In the present work, bacteriophage endolysins and depolymerases were explored to tackle Acinetobacter infections. Five novel enzymes were identified, heterologously expressed in Escherichia coli and characterized to gain insights into their enzymatic and structural features, as well tested in vitro (Acinetobacter cells and human cell line A549) and in vivo (Galleria mellonella) to assess their therapeutic potential. Remarkably, endolysins exhibited intrinsic ability to kill Acinetobacter cells, with optimal activity at pH 5-7 and low ionic strength (20 mM), reducing approximately 3.5 log to > 5 log (below the detection limit) within 2 h. Interestingly, no antibacterial activity of endolysins could be observed in biomatrices such as culture medium. All depolymerases exhibited activity on extracellular polysaccharides in all ranges of pH values (pH 5 to 9) and ionic strengths (0 to 500 mM) and retained at least 50% of the activity at 70 ºC. Consistently, circular dichroism analysis showed moderate and high thermostability of endolysins (rich in α-helices) and depolymerases (rich in β-sheets), with melting temperatures around 56 ºC and > 68 ºC, respectively. Combinations of endolysin and depolymerase reduced 24 h-old bacterial biofilms in approximately 1 log. Further work conducted on depolymerases demonstrated that these enzymes degrade the bacterial capsular polysaccharides (observations confirmed by Atomic Force Microscope). The removal of the capsule via depolymerase activity reduced the virulence of Acinetobacter to human epithelial cells for 2 h. Complementary studies performed in vivo showed that depolymerase was able to rescue Galleria mellonella larvae from Acinetobacter baumannii infection in a time- and dose-dependent manner. Maximal difference survival between larvae injected with depolymerase-treated bacteria and non-treated bacteria was observed after 72 h with 5 μM of depolymerase (88% vs 10%; P < 0.01). In summary, the enzymes studied in this thesis revealed to be effective candidates to control problematic Acinetobacter infections, either as bacteriolytic or anti-virulence agents., As espécies de Acinetobacter tornaram-se uma das principais causas de infeções nosocomiais em todo o mundo, devido à sua resistência inerente e adaptativa à grande maioria dos antibióticos, sobrevivência em ambientes hostis e fatores de virulência. O aumento da taxa de mortalidade associada com estas bactérias de difícil tratamento exige, urgentemente, o desenvolvimento de novas opções terapêuticas. No presente trabalho, endolisinas e depolimerases de bacteriófago foram exploradas para combater infeções de Acinetobacter. Cinco novas enzimas foram identificadas, expressas de forma heteróloga em Escherichia coli e caracterizadas para obter informações sobre as suas características enzimáticas e estruturais, e também, testadas in vitro (células de Acinetobacter e linha celular humana A549) e in vivo (Galleria Mellonella) para avaliar o seu potencial terapêutico. Notavelmente, as endolisinas exibiram capacidade intrínseca para matar células de Acinetobacter, com atividade ótima no pH 5-7 e a baixa força iónica (20 mM), reduzindo aproximadamente 3.5 log até > 5 log (abaixo do limite de deteção) em 2 h. Curiosamente, nenhuma atividade antibacteriana das endolisinas foi observada em biomatrizes, como meio de cultura. Todas as depolimerases exibiram atividade contra os polissacarídeos extracelulares em todas as gamas de valores de pH (pH 5 a 9) e força iónica (0 a 500 mM) e conservaram pelo menos 50% da atividade a 70 ºC. De forma consistente, os estudos em dicroísmo circular mostraram moderada e alta thermoestabilidade das endolisinas (ricas em α-helices) and depolimerases (ricas em β-sheets), com temperaturas de desnaturação de aproximadamente 56 ºC and > 68 ºC, respetivamente. Combinações de endolisina e depolimerase reduziram biofilmes bacterianos de 24 h em aproximadamente 1 log. Estudos adicionais realizados com as depolimerases demonstraram que estas enzimas degradam a cápsula polissacarídica bacteriana (observações confirmadas por microscopia de força atómica). A remoção da cápsula pela atividade da depolimerase reduziu a virulência de Acinetobacter em células epiteliais humanas por 2 h. Estudos complementares realizados in vivo revelaram que a depolimerase foi capaz de resgatar larvas de Galleria Mellonella da infeção de Acinetobacter baumannii, de uma forma dependente do tempo e da dose. A maior diferença de sobrevivência entre larvas injetadas com bactéria tratada com depolimerase e bactéria não tratada foi observada após 72 h com 5 μM de depolimerase (88% vs 10%; P < 0.01). Em suma, as enzimas estudadas nesta tese revelaram ser candidatas eficientes para o controlo de infeções problemáticas de Acinetobacter, quer como agentes antibacteriano ou anti-virulência., This study was supported by the Portuguese Foundation for Science and Technology (FCT) under the scope of the strategic funding of UID/BIO/04469/2013 unit and COMPETE 2020 (POCI-01-0145-FEDER-006684) and BioTecNorte operation (NORTE-01-0145-FEDER-000004) funded by the European Regional Development Fund under the scope of Norte2020 - Programa Operacional Regional do Norte and the Project PTDC/BBB-BSS/6471/2014 (FEDER: POCI-01-0145-FEDER-016643).

Bacterial infections, which affect millions of people around the world, have progressively increased in recent years, impacting the rate of morbidity and mortality. The spread of drug-resistant bacteria is one of the most serious threats to successful treatment of bacterial diseases, in addition, some drugs are very toxic, making it difficult to adhere to treatment. In this context, flavonoids have been distinguished by their diverse pharmacological activities, such as: bactericide, fungicide and antioxidant. Based on this, the antibacterial and antioxidant effects, the theoretical oral bioavailability and the toxicological profile of the flavonoid 2,4-cis-3,4-cis-3,4,5,8- tetramethoxy- [1 '', 2 '': 6,7] –furanoflavane (TMFF), isolated from the hexane extract of the bark of the roots of Lonchocarpus araripensis. To analyze the antimicrobial potential of flavonoid, in silico analysis with the Pass online software was used. For the accomplishment of the antibacterial studies the microdilution test with different strains of the bacteria Staphylococcus aureus, Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa was used to evaluate the Minimum Inhibitory Concentration (MIC). In addition, the Minimum Bactericidal Concentration (MBC) was also determined. In the study of association of flavonoid with clinically used antibiotics, the ability of flavonoid to promote synergism, indifference or antagonism after association. In the accomplishment of the studies of antioxidant activity in vitro was used the technique of the chelating effect on the ferrous ion. For the in silico toxicological analysis the tool was used admetSAR and for the evaluation of oral bioavailability theoretically in silico was used the program Molinspiration Cheminformatics. The in silico study demonstrated that flavonoid presented a high probability of being active against several microorganisms, including bacteria. The experiments of antibacterial activity revealed that the flavonoid had a bacterial effect against gram positive and gram negative species, with MIC50 of 64 μg/mL for some strains of Pseudomonas aeruginosa, on different strains of Staphylococcus aureus, the flavonoid presented MIC50 of 256 μg/ml and on one of the tested strains of Escherichia coli the MIC50 was 512 μg/ml. Flavonoid has been shown to be bacteriostatic for all bacterial species tested and also showed a synergistic effect. In the antioxidant activity studies, flavonoid presented a chelating effect on the ferrous ion. Flavonoid demonstrated low theoretical toxicity as well as good oral bioavailability through in silico analysis. These results suggest that flavonoid has an antibacterial and antioxidant effect, with a low toxicological effect. As infecções bacterianas, que acometem milhões de pessoas em todo o mundo, têm aumentado progressivamente nos últimos anos, impactando na taxa de morbidade e mortalidade. A disseminação de bactérias resistentes aos medicamentos é uma das mais graves ameaças para o sucesso do tratamento das doenças bacterianas, além disso, algumas drogas são muito tóxicas, dificultando a adesão ao tratamento. Nesse contexto, os flavonoides têm se destacado por apresentarem diversas atividades farmacológicas, tais como: bactericida, fungicida e antioxidante. Com base nisto, foram estudados os efeitos antibacteriano e antioxidante, a biodisponibilidade oral teórica e o perfil toxicológico do flavonoide 2,4-cis-3,4-cis-3,4,5,8-tetrametoxi-[1'',2'':6,7]-furanoflavana (TMFF), isolado do extrato hexânico das cascas das raízes de Lonchocarpus araripensis. Para a análise do potencial antimicrobiano do flavonoide foi utilizado a análise in silico com o software Pass online. Para a realização dos estudos antibacterianos utilizou-se o teste de microdiluição com diferentes cepas das bactérias Staphylococcus aureus, Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa para avaliação da Concentração Inibitória Mínima (CIM). Além disso, determinou-se também a Concentração Bactericida Mínima (CBM). No estudo de associação do flavonoide com antibióticos usados clinicamente, avaliou-se a capacidade do flavonoide em promover sinergismo, indiferença ou antagonismo, após a associação. Na realização dos estudos de atividade antioxidante in vitro utilizou-se a técnica do efeito quelante sobre o íon ferroso. Para a análise toxicológica in silico utilizou-se a ferramenta admetSAR e para a avaliação da biodisponibilidade por via oral teórica in silico utilizou-se o programa Molinspiration Cheminformatics. O estudo in silico demonstrou que o flavonoide apresentou uma grande probabilidade de ser ativo, frente a vários micro-organismos, incluindo bactérias. Os experimentos de atividade antibacteriana revelaram que o flavonoide apresentou um efeito bacteriano frente espécies gram-positivas e gramnegativas, com CIM50 de 64 μg/mL para algumas cepas de Pseudomonas aeruginosa, sobre diferentes cepas de Staphylococcus aureus o flavonoide apresentou CIM50 de 256 μg/mL e sobre uma das cepas testadas de Escherichia coli a CIM50 foi de 512 μg/mL. O flavonoide demonstrou ser bacteriostático para todas as espécies de bactérias testadas e também apresentou um efeito sinérgico. Nos estudos da atividade antioxidante, o flavonoide apresentou um efeito quelante sobre o íon ferroso. O flavonoide demonstrou uma baixa toxicidade teórica, bem como uma boa biodisponibilidade oral através da análise in silico. Estes resultados sugerem que o flavonoide apresenta efeito antibacteriano e antioxidante, com baixo efeito toxicológico.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-03-12T12:33:29Z No. of bitstreams: 1 Ericleiton Rodrigues de Macedo.pdf: 4463323 bytes, checksum: ff8672a22e901a6d67fd1441383a76af (MD5) Made available in DSpace on 2018-03-12T12:33:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ericleiton Rodrigues de Macedo.pdf: 4463323 bytes, checksum: ff8672a22e901a6d67fd1441383a76af (MD5) Previous issue date: 2017-11-21 Polypyrrole (PPy) is a conductive polymer of great technological interest which, synthesized through branched growth, acquires a large surface area compared to conventional PPy. In this thesis nanocomposites were prepared on the basis of the branched PPy so that, depending on the particulate dispersed phase, it could assume a photocatalytic or antibacterial character The polymer matrix synthesized in the work has a surface area of 97,38 m2/g, around four times greater than the conventional PPy found in the literature. When it is polymerized in the presence of zinc oxide (ZnO) and titanium dioxide (TiO2) nanoparticles, the resulting material has excellent photocatalytic activity against organic dyes, such as rhodamine B (80-85%) and rhodamine 6G (90%). In this study it was verified that the synergy between a branched matrix and as nanoparticles of ZnO and TiO2 allows an absorption of photons in the visible region and a lower electron/gap connection rate as a function of the minimum aggregate between particles in the matrix, being responsible by the high photocatalytic efficiency of the dyes. Despite its photocatalytic behavior in the form of a composite, the branched polypyrrole also has an antibacterial character that makes it a promising material for the contamination of aquatic environments by bacteria, including multiresistant bacteria, such as Escherichia coli, Staphylococcus aureus and Klebsiella pneumoniae bacteria. This work evaluated the bactericidal activity of the branched polypyrrole as a function of its structural parameters, such as morphology and surface area, incorporation of additives, such as silver nanoparticles (AgNPs), and the aggregation levels of these in the polymer matrix. When in contact with the bacteria, the PPy/Ag composite adheres electrostatically to the negatively charged bacterial cell wall, promoting the adsorption of the polymer and diffusion of the nanoparticles along the cell wall, these bind to the cytoplasmic membrane allowing the release of intracellular components and loss of potassium ions (K+), resulting in the death of the microorganism. Thus, the branched polypyrrole and its combination in the form of composites with metal oxide particles, present a material with great potential for future applications as antibacterial filters and sponges for photodegradation of dyes. O polipirrol (PPy) é um polímero condutor com grande interesse tecnológico que, sintetizado através de crescimento ramificado, adquire grande área superficial em comparação ao PPy convencional. Nesta tese foram preparados nanocompósitos a base do PPy ramificado, para que pudesse, a depender da fase dispersa particulada, assumir um caráter fotocatalítico ou antibacteriano. A matriz polimérica sintetizada nesse trabalho possui uma área superficial de 97,38m2/g, em torno de quatro vezes maior que o PPy convencional encontrado na literatura. Quando polimerizado na presença de nanopartículas de óxido de zinco (ZnO) e dióxido de titânio (TiO2), o material resultante possui uma ótima atividade fotocatalítica frente a corantes orgânicos, como a rodamina B (80 a 85%) e rodamina 6G (90%). Nesse estudo verificou-se que a sinergia entre a matriz ramificada e as nanopartículas de ZnO e TiO2 possibilita a absorção de fótons na região do visível e uma taxa de recombinação elétron/lacuna menor em função da mínima agregação entre as partículas na matriz, sendo responsável pela alta eficiência fotocatalítica dos corantes usados. Não obstante ao seu comportamento fotocatalítico sob a forma de compósito, o polipirrol ramificado também possui um caráter antibacteriano que o torna um material promissor diante da contaminação de ambientes aquáticos por bactérias, inclusive multirresistentes, como as bactérias Escherichia coli, Staphylococcus aureus e Klebsiella pneumoniae. Através deste trabalho pôde-se avaliar a atividade bactericida do polipirrol ramificado em função dos seus parâmetros estruturais, como morfologia e área superficial, incorporação de aditivos, como as nanopartículas de prata (AgNPs), e dos níveis de agregação destas na matriz polimérica. Quando em contato com as bactérias, o compósito PPy/Ag adere eletrostaticamente à parede celular bacteriana carregada negativamente, promovendo a adsorção do polímero e difusão das nanopartículas ao longo da parede celular, estas se ligam à membrana citoplasmática permitindo a liberação de componentes intracelulares e perda de íons de potássio (K+), resultando na morte do microrganismo. Assim, o polipirrol ramificado, e sua combinação na forma de compósitos com nanopartículas de óxido metálico, se apresenta como um material com grande potencial para futuras aplicações como filtros antibacterianos e esponjas para fotodegradação de corantes.

Made available in DSpace on 2018-12-14T11:43:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 5729_11824.pdf: 1680701 bytes, checksum: 85e80fd44c8948fdf4c0a44456dc5dd2 (MD5) Previous issue date: 2017-11-09

Os microrganismos endofíticos apresentam uma grande diversidade genética e são importantes fontes para a descoberta de novos metabólitos secundários bioativos. Os produtos naturais de endofíticos apresentam amplo espectro de atividade biológica, incluindo antibióticos, imunossupressores, anticancerígenos, antioxidantes e outros. Neste trabalho reproduziu-se o cultivo do microrganismo endofítico Streptomyces tubercidicus isolado da planta Solanum lycocarpum St. Hill (Lobeira) do Cerrado da cidade de São Carlos - SP, que faz parte do campus da Universidade Federal de São Carlos – UFSCar, seguindo as condições previamente descritas. Os resultados do cultivo demonstraram quea linhagem é bastante resistente ao tempo de armazenamento, pois quase dez anos após seu isolamento e estudos realizados por Ratti et al., 2008. O processo de separação e purificação por técnicas cromatográficas do extrato bioativo de S. tubercidicus, levou ao isolamento de uma fração ativa, a qual apresenta atividade antibacteriana contra bactérias Gram + e Gram -. Esse resultado é diferente do obtido anteriormente, pois no estudo anterior foram obtidas duas frações ativas, porém uma com atividade contra a Escherichia coli, bactéria Gram + e outra com atividade contra bactéria Staphylococcus aureus, bactéria Gram -. O processo de elucidação estrutural do metabólito secundário bioativo isolado de S. tubercidicus ainda não foi finalizado, mas é possível concluir que não foi isolada a tubercidina composto bioativo produzido pelo S. tubercidicus, pois os dados dos espectros de RMN de 1H e de 13C do composto majoritário isolado são bastante distintos dos dados simulados para a tubercidina. Endophytic microorganisms present a great genetic diversity and are an important source for the discovery of new bioactive secondary metabolites. Natural endophytic products exhibit a broad spectrum of biological activity, including antibiotics, immunosuppressants, anticancer drugs, antioxidants and others.In this study, the endophytic microorganism Streptomyces tubercidicus, isolated from the Solanum lycocarpum St. Hill (Lobeira) plant of the Cerrado of the Universidade Federal de São Carlos (UFSCar),was cultivated and the results demonstrate that the lineage is quite resistant to storage time, as it was isolated almost ten years before the present cultivation. The process of separation and purification of the bioactive extract of S. tubercidicus led to the isolation of only one active fraction. This fraction displays antibacterial activity against Gram + and Gram - bacteria. This result is different from that previously obtained, where two active fractions were obtained, but one with activity against Gram + bacteria and another with activity against Gram - bacteria.The structural elucidation of the bioactive secondary metabolite isolated from S. tubercidicus has not yet been concluded, but it can be concluded that tubercidin has not been isolated as the 1H and 13C NMR spectra of the isolated major compound are distinct from simulated data for tubercidin. Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais

Os medicamentos trouxeram um grande impacto positivo sobre a humanidade; contribuindo diretamente para a prevenção de doenças, contribuindo para qualidade e aumento da expectativa de vida. No entanto com o uso amplamente difundido entre a população, vários microrganismos tem adquirido resistência aos medicamentos comercializados, sendo necessário a descoberta de novas formulações e substancias efetivas contra os principais mecanismos de resistência. As classes de compostos denominadas semicarbazonas (SCs) e tiossemicarbazonas (TSCs) vêm recebendo grande atenção dos pesquisadores. Esse fato se deve as suas atividades farmacológicas, como por exemplo a atividade antibacteriana. Dessa forma o objetivo deste trabalho foi sintetizar novos compostos orgânicos, caracterizar espectroscopicamente e estruturalmente, e realizar testes biológicos frente a agentes patogênicos. Foram sintetizadas e caracterizadas duas hidrazonas, uma semicarbazona e uma tiossemicarbazona. Os testes biológicos com os quatro compostos para avaliação da atividade antibacteriana e antifúngica, determinaram a Concentração inibitória mínima (MIC). O composto N-methyl-2- [1,1,1-trifluoro-4-oxo-4- (thiophen-2-yl) butan-2-ylidene] hydrazine carbothioamide (composto 1) apresentou atividade antibacteriana contra a bactéria Gram negativa Serratia marcescens (MIC 64 μg/mL) e a bactéria Gram positiva Enterococcus faecalis (MIC 64 μg/mL). O composto (2Z)-2-[1,1,1-trifluoro-4-oxo-4-(thiophen-2-yl)butan-2-ylidene] hydrazinecarboxamide (composto 4) apresentou atividade antibacteriana e antifúngica com a concentração inibitória mínima entre 32 μg/mL a 256 μg/mL. The drugs have had a great positive impact on humanity, contributing directly to the prevention of diseases, and increased quality and expectancy of life. However, with widespread use among the population, several microorganisms have become resistant to marketed drugs, being necessary to discover new formulations and substances effective against the main mechanisms of resistance. The classes of compounds called semicarbazones (SCs) and thiosemicarbazones (TSCs) have received great attention from the researchers. This is due to its pharmacological activities, such as antibacterial activity. Thus the objective of this work was to synthesize new organic compounds, to characterize them spectroscopically and structurally, and to perform biological tests against pathogens. Two hydrazones, one semicarbazone and one thiosemicarbazone were synthesized and characterized. Biological tests with the four compounds for evaluation of antibacterial and antifungal activity determined the Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The compound N-methyl-2- [1,1,1-trifluoro-4-oxo-4- (thiophen-2-yl) butan-2-ylidene] hydrazine carbothioamide (compound 1) showed antibacterial activity against Gram negative Serratia marcescens (MIC 64 μg/mL) and Gram positive bacteria Enterococcus faecalis (MIC 64 μg/mL). The compound (2Z)-2-[1,1,1-trifluoro-4-oxo-4-(thiophen-2-yl) butan-2-ylidene] hydrazine carboxamide (compound 4) showed antibacterial and antifungal activity with the minimum inhibitory concentration between 32 μg/mL and 256 μg/mL. Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG

Submitted by Ana Flávia Marques Pereira null (anaflavia_mp@aluno.ibb.unesp.br) on 2017-09-27T17:53:38Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Repositório.pdf: 2145202 bytes, checksum: 39516b61c1f0abc137e21b49adea6e98 (MD5) Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-09-29T20:25:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pereira_afm_me_bot_par.pdf: 674823 bytes, checksum: 835065f34737601ea8e088e883ede3e8 (MD5) Made available in DSpace on 2017-09-29T20:25:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pereira_afm_me_bot_par.pdf: 674823 bytes, checksum: 835065f34737601ea8e088e883ede3e8 (MD5) Previous issue date: 2017-07-28 Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) A busca por novos fármacos é uma constante, especialmente para aqueles obtidos a partir de produtos naturais, que apresentem melhor eficácia e vários efeitos terapêuticos. A própolis e o veneno (apitoxina) da abelha Apis mellifera, além da melitina, uma fração da apitoxina, possuem ação antimicrobiana reportada na literatura. As ações antibacterianas do extrato hidroalcoólico de própolis (EHP), de apitoxinas obtidas das abelhas Apis mellifera submetidas a floras apícolas diferentes (Api 1 - flora apícola silvestre, Api 2 - flora apícola de eucalipto, Api 3 - flora apícola de laranjeira, Api 4 - flora apícola silvestre associada com alimentação artificial) e de melitina foram testadas sobre isolados clínicos de Staphylococcus aureus resistentes à meticilina (MRSA) utilizando metodologia da microdiluição (Resazurin Microtiter Assay Plate – REMA) para obtenção dos respectivos valores de concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida mínima (CBM). Ensaios também foram realizados para verificação de sinergismo entre o EHP, as diferentes apitoxinas e a melitina em combinação com a oxacilina sobre uma linhagem de MRSA ATCC e um isolado clínico de MRSA utilizando metodologia da curva de sobrevivência (time kill curve). Foram realizados ensaios inéditos objetivando verificar também se a Api 1 e melitina inibem a produção de enterotoxinas sobre cepas ATCC de S. aureus SEA, SEB, SEC, SED e se inibem a produção de biofilme sobre a cepa ATCC de S. aureus. A microscopia eletrônica de transmissão foi utilizada para verificar alterações morfológicas e estruturais provocadas pela Api 1 e melitina sobre MRSA e E. coli. Todas as apitoxinas testadas e a melitina apresentaram ação antibacteriana frente ao MRSA além de sinergismos com efeitos bactericidas quando em combinação com a oxacilina, especialmente para melitina e Api 1. O EHP mostrou um alto valor de CIM e também um sinergismo bacteriostático com a oxacilina. A Api 1 e melitina não foram capazes de inibir a produção e/ou liberação de enterotoxinas de S. aureus e Api 1 mostrou uma baixa porcentagem de redução sobre a produção de biofilme (35,1%) enquanto a melitina mostrou ser um produto eficiente na redução de produção de biofilme (66,3%). Assim, conclui-se que a melitina e Api 1 se mostram potencialmente adequados para o desenvolvimento de fármacos no futuro. The search for new drugs is a constant, especially those obtained from natural products with better efficacy and many therapeutic effects. The propolis, bee venom (apitoxin) from Apis mellifera bee and melittin, a fraction of apitoxin, have reported antibacterial activity in the literature. We verified the antibacterial action of hydroalcoholic extract of propolis (HEP), the bee venom corresponding to different bee blossoms (Api 1 - Wild bee blossom, Api 2 - Eucalyptus bee blossom, Api 3 - Orange tree bee blossom, Api 4 – Wild bee blossom associated with artificial food) and melittin on strains of Methicillinresistant Staphylococcus aureus (MRSA) through microdilution assays (Assay Resazurin Microtiter Plate - REMA) to obtaining the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC). We performed assays to verify synergism of EHP, the different apitoxins and melittin in combination with oxacillin on a strain of MRSA ATCC and a clinical isolate of MRSA using time-kill curve methodology. Unpublished trials were carried out to verify also if Api 1 and melittin inhibit the enterotoxins production of S. aureus ATCC strains (SEA, SEB, SEC, SED) and biofilm production of S. aureus ATCC strain We did the transmission electron microscopy to check the phenotypic changes caused by Api 1 and melittin on MRSA and E. coli. All the tested apitoxins and melittin showed an antibacterial action against MRSA and bactericidal synergisms in combination with oxacillin, especially for melittin and Api 1. The HEP showed a high value MIC and a bacteriostatic synergism with oxacillin. Api 1 and melittin were not able to inhibit the production and or the release of enterotoxins. Api 1 showed a low reduction percentage on biofilm production (35,1%) while melittin showed to be a good product to reduce biofilm production (66,3%). Therefore, we concluded that melittin and Api 1 are potentially suitable for the development of drugs in the future. FAPESP: 2015/14278-6 CNPQ: 162208/2015-4

Relatório de Estágio do Mestrado Integrado em Ciências Farmacêuticas apresentado à Faculdade de Farmácia Pistacia lentiscus (var. chia), também conhecida como mastic tree, uma pequena árvore pertencente à família Anacardiaceae, é produzida exclusivamente no Sul da ilha de Chios, na Grécia. É usada há mais de 2500 anos em medicina tradicional Grega, mas as suas propriedades vêm descritas nas obras de Heródoto, Dioscórides e Galeno. Vários autores romanos, árabes, do período bizantino e europeus fazem extensas referências às propriedades de mastic, nome dado à resina produzida por P. lentiscus, conhecida por mastic tree. As suas propriedades antibacterianas, especialmente contra Helicobacter pylori, antifúngicas, antioxidantes, anti-inflamatórias, antineoplásicas e citoprotetoras, hepatoprotetoras e antidiabéticas, hipocolesterolémicas, a sua aplicação em Tecnologia Farmacêutica são abordadas nesta monografia no sentido de avaliar o potencial de Pistacia lentiscus como novo agente terapêutico de origem natural. A maioria das publicações existentes sobre Pistacia lentiscus L. refere-se à variedade Pistacia lentiscus var. chia. Num estudo recente realizado pelo Professor Kazim Browicz (Browicz, Plant Systematics and Evolution, 1987), este propõe a substituição de “var.” por “cv.”, uma vez que se trata de um clone cultivado, “cultivated clone”. Ainda assim, numa tentativa de harmonização, na proposta de revisão apresentada pela EMA à Grécia, sugere-se a aceitação de Pistacia lentiscus L., conforme a monografia constante na Farmacopeia Europeia, sem qualquer especificação de variedade ou cultivo (EMA, 2015). Pistacia lentiscus (var. chia), also known as mastic tree, an evergreen shrub belonging to the Anacardiaceae family, is exclusively cultivated in the southern part of Chios Island, in Greece. It has been used for over 2500 years in traditional Greek medicine, although its properties are mentioned in the works of Herodotus, Dioscorides and Galen. Several Roman, Arab, Byzantine and European authors make extensive references to mastic’s properties, the resin produced by Pistacia lentiscus, known as mastic tree. Its antibacterial properties, especially against Helicobacter pylori, antifungal, antioxidant, anti-inflammatory, anticancer and cytoprotective, hepatoprotective and antidiabetic, hypocholesterolemic properties, its use in Pharmaceutical Technology are analysed in this monograph with the intent of evaluating the potential of Pistacia lentiscus as a new therapeutic agent of natural origin. The vast majority of the existing publications on Pistacia lentiscus L. refers to the variety Pistacia lentiscus var. chia. In a recent study conducted by Professor Kazim Browicz (Browicz, Plant Systematics and Evolution, 1987), Professor Kazim Browicz proposes the use of “cv.” instead of “var.”, given that it is a cultivated clone. In the proposal made by EMA for revision from Greece, it is documented that the best scientific way should be the acceptance in the European Pharmacopoeia’s monograph of the species Pistacia lentiscus L. without any further specified variety or cultivar (EMA, 2015).

Este trabalho consiste na síntese e caracterização de complexos de CuI e AgI com tiossemicarbazidas derivadas da p-toluenosulfohidrazida visando a obtenção de compostos com propriedades luminescentes e farmacológicas. Os agentes complexantes foram obtidos através da reação da p-toluenosulfohidrazida com um R-isotiocianato (L1Ch: R = ciclohexil e L2Ph: R = fenil) de modo a obter ligantes contendo duas classes farmacologicamente ativas, a classe das sulfonamidas e a classe das tiossemicarbazidas. Através de reações dos ligantes com precursor [CuCl(PPh3)3] foram obtidos os complexos neutros tetraédricos de CuI do tipo [CuCl(PPh3)2(L1R)], enquanto que as reações com AgNO3 levaram à formação de complexos iônicos com geometria linear do tipo [Ag(L1R)2]NO3. Todos foram obtidos na forma de sólidos cristalinos incolores, com rendimentos em torno de 70%. Os ligantes e os complexos foram devidamente caracterizados pelas seguintes técnicas: análise elementar (CHNS), ponto de fusão, espectroscopias de absorção na região do infravermelho e UV-Vis, RMN de 1H e 31P{1H}, espectrometria de massas e difração de raios X em monocristal. Além da elucidação estrutural, os compostos foram avaliados por suas propriedades fotofísicas. Foi verificada a emissão e determinado o rendimento quântico de cada composto. Além desta técnica, foram realizados cálculos teóricos para compreender a natureza das transições envolvidas na formação do estado excitado dos complexos. Através dos dados obtidos, foi observado que o grupo substituinte dos ligantes (ciclohexil ou fenil) afeta as transições envolvidas. Além disto, os estudos de luminescência indicam que a emissão dos compostos pode ser ajustada pelo tipo de substituinte na estrutura periférica dos ligantes. Testes biológicos contra a cepa Mycobacterium tuberculosis mostraram que os ligantes e complexos não apresentaram atividade na concentração de 25 μg/mL. Por outro lado, testes de atividade antiproliferativa contra células de câncer de pele mostraram que a complexação leva a um aumento considerável da atividade, sendo todos os complexos mais ativos que a cisplatina e que os ligantes livres após 48 h de incubação. Além disso, dois complexos revelaram excelente atividade contra cepas do T. cruzi na forma intracelular, com índice de seletividade semelhante ao do fármaco padrão benzonidazol. This work consists in the synthesis and characterization of CuI and AgI complexes with thiosemicarbazides derived from p-toluenesulfohydrazide aiming to obtain compounds with luminescent and pharmacological properties. The complexing agents were obtained by reactions of p-toluenesulfohydrazide with a R-isothiocyanate (L1Ch: R = cyclohexyl and L2Ph: R = phenyl) in order to obtain ligands containing two pharmacologically active classes, the sulfonamides and thiosemicarbazides. Reactions of the ligands with the precursor [CuCl(PPh3)3] afforded neutral CuI tetrahedral complexes of the type [CuICl(PPh3)2(L1R)], while the reactions with AgNO3 led to the formation of ionic complexes with linear geometry of the type [AgI(L1R)2]NO3. All the complexes were obtained as colorless crystalline solids with yields around 70%. The free ligands and complexes were properly characterized by the following techniques: elemental analysis (CHNS), melting point, absorption spectroscopies in the infrared region and UV-Vis, NMR 1H and 31P{1H}, mass spectrometry and single crystal X-ray diffraction. In addition to the structural elucidation, the compounds were evaluated for their photophysical properties. The emission was verified and the quantum yield of each compound determined. Beyond this technique, theoretical calculations were performed to understand the nature of the transitions involved in the formation of the excited state of the complexes. By the data obtained, it was observed that the substituent group of the ligands (cyclohexyl or phenyl) affects the transitions involved. Furthermore, the luminescence studies indicate that the emission of the compounds can be tuned by the type of substituents in the peripheral structure of the ligands. Biological tests against Mycobacterium tuberculosis strain showed that the free ligands and complexes do not present activity at the concentration of 25 μg/mL. On the other hand, antitumor activity tests against skin cancer cells showed that the complexation leads to a considerable increase of the activity, being all the complexes more active than cisplatin and free ligands after a period of 48 h of incubation. In addition, two complexes showed excellent activity against T. cruzi intracellular strains, with similar selectivity indexes as the standard drug benznidazole. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico

Colostrum from the first secretions of the mammary glands is considered an essential food for the development of newborns due to its high content of proteins, antimicrobial peptides, macro and micronutrients. The serum is considered na important coproduct for the dairy industry, configuring about 85-90% of the total milk volume, its proteins are recognized by their biological properties, since they have an excellent composition and bioavailability of essential amino acids. The present study had as objective to characterize the serum protein profile of goat colostrum produced by goats Created in Paraíba and to evaluate possible biological activities. The serum (SR) was obtained by acid precipitation in pH 4.1 and fractionated by ammonium sulfate precipitation to obtain the fractions 0-30% (SF1), 30- 60% (SF2) and 60-90% (SF3). The analysis of the protein profile was verified by SDS-PAGE and total amino acids. The biological properties of the samples were verified with the analysis of antioxidant, DNA protection and antibacterial activities. It was verified that colostrum serum presents proteins with molecular masses between 12-160kDa and an excellent profile of amino acids. From the obtained results it is possible to affirm that all the fractions were able to sequester the radicals ABTS and DPPH. For the DNA protection test, the concentracion of 10μg of SF3 conferred a greater integrity to the molecule. The samples presented inhibitory activity for both gram-negative and gram-positive bacteria. Colostrum serum proteins have biological properties with potential biotechnological application and pharmaceutical interest Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES O colostro oriundo das primeiras secreções das glândulas mamárias é considerado um alimento essencial para o desenvolvimento dos recém-nascidos, devido seu elevado teor de proteínas, peptídeos antimicrobianos, macro e micronutrientes. O soro é considerado um coproduto importante para a indústria leiteira, configurando cerca de 85–90% do volume total do leite. Suas proteínas são reconhecidas pelas propriedades biológicas, uma vez que possuem uma excelente composição e biodisponibilidade de aminoácidos essenciais. O presente estudo teve como objetivo caracterizar o perfil proteico do soro de colostro caprino produzido por cabras criadas na Paraíba e avaliar possíveis atividades biológicas. O soro (SR) foi obtido por precipitação ácida em pH 4,1 e fracionado por precipitação com sulfato de amônio para obtenção das frações 0-30% (SF1), 30-60% (SF2) e 60-90% (SF3). A análise do perfil proteico foi verificado por SDS-PAGE e aminoácidos totais. As propriedades biológicas das amostras foram verificadas com as análises das atividades antioxidante, proteção ao DNA e antibacteriana. Verificou-se que o soro do colostro apresenta proteínas com massas moleculares entre 12-160kDa e um excelente perfil de aminoácidos. A partir dos resultados obtidos é possível afirmar que todas as frações foram capazes de sequestrar os radicais ABTS e DPPH. Para o teste de proteção ao DNA, a concentração de 10μg de SF3 conferiu uma maior integridade à molécula. As amostras apresentaram atividade inibitória tanto para as bactérias gramnegativas quanto para gram-positivas. As proteínas do soro do colostro apresentam propriedades biológicas com potencial aplicação biotecnológica e de interesse farmacêutico.

Submitted by LARISSA SPÓSITO null (lari_sposito@hotmail.com) on 2017-07-27T13:11:28Z No. of bitstreams: 1 Dissertação versão final encaminhada pós- PDF.pdf: 2246283 bytes, checksum: 9ebe4c751ba29fc9cf4495fdb7288e5e (MD5) Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-07-31T18:31:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 sposito_l_me_arafcf.pdf: 2393152 bytes, checksum: cd33f70c4383729bdf5dc49ce9d3375f (MD5) Made available in DSpace on 2017-07-31T18:31:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 sposito_l_me_arafcf.pdf: 2393152 bytes, checksum: cd33f70c4383729bdf5dc49ce9d3375f (MD5) Previous issue date: 2017-06-02 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) O uso de produtos naturais na terapêutica convencional vem ganhando destaque nos últimos anos com relação a atividade antimicrobiana devido à alta taxa de efeitos tóxicos e ao excessivo crescimento do número de cepas multirresistentes aos antimicrobianos convencionais empregados na prática. Entre as novas triagens terapêuticas frente às afecções bacterianas, as infecções causadas pelo Helicobacter pylori merecem atenção especial, uma vez que estão diretamente relacionadas com quadros clínicos severos, como a gastrite crônica, úlcera péptica e câncer gástrico. A Casearia sylvestris Swartz é uma planta popularmente conhecida como guaçatonga ou erva-de-bugre, utilizada na medicina popular no tratamento de transtornos gástricos que nos últimos anos vem despertando interesse na comunidade científica, por suas importantes propriedades com potencial terapêutico como atividade anti-inflamatório, antiofídico, cicatrizante, citotóxica em linhagens de células tumorais e principalmente antiulcerogênica. Neste contexto, uma excelente alternativa para o aprimoramento dos parâmetros biodisponíveis dos extratos vegetais muito utilizada na atualidade é a incorporação destes em sistemas nanotecnológicos de liberação de fármaco para que o produto ativo tenha uma melhor ação. Deste modo, o presente trabalho teve por objetivo avaliar o potencial biológico antibacteriano in vitro do extrato etanólico, extrato aquoso, fração e subfrações das folhas de Casearia sylvestris Swartz, incorporar em um sistema de liberação de fármacos os derivados mais ativos e a partir dos resultados realizar o experimento in vivo contra a cepa ATCC 43504 de H. pylori. Os extratos foram preparados por infusão e maceração. Para as análises biológicas utilizamos a técnica de microdiluição para determinar a concentração inibitória mínima e o biofilme formado. O estudo foi desenvolvido aplicando-se metodologias in vitro e in vivo para elucidar o perfil antibacteriano pretendido, obtendo-se resultados satisfatórios, deixando esse estudo mais interessante, já que a literatura mostra que a C.sylvestris tem perfil anti-ulcerogênico. A partir desses resultados pudemos concluir que os derivados de C. sylvestris apresentaram estatisticamente atividades antibacterianas tanto in vitro como in vivo, sendo que a maioria dos derivados vegetais com exceção dos extratos aquosos, fração 1 e 3 e a subfração 17, tiveram alguma atividade frente ao micro-organismo. Essa atividade provavelmente esta relacionada aos diterpenos clerodânicos que estão em abundância nos derivados da C. sylvestris. A incorporação no sistema nanoestruturado não potencializou a atividade dos derivados vegetais como esperado na maioria dos teste, isto talvez seja pelo fato de a composição dos derivados vegetais e do sistema não serem compatíveis quimicamente. Desde que a literatura mostrou a atividade antiulcerogênica dos derivados vegetais da C. sylvestris, eles podem ser utilizados tanto na cicatrização das lesões como também para a erradicação do H. pylori. The use of natural products in conventional therapeutics has been gaining highlight in recent years relative to the antimicrobial activity due to the high rate of toxic effects and the excessive growth of the number of multiresistant strains to he conventional antimicrobials used in practice. Among the new therapeutic screenings for bacterial diseases, infections caused by Helicobacter pylori deserve special attention, since they are directly related to severe clinical conditions, such as chronic gastritis, peptic ulcer and gastric cancer. Casearia sylvestris Swartz is a plant popularly known as guaçatonga or erva-de-bugre, used in popular medicine to the treatment of gastric disorders that in recent years has gained the interest of the scientific community due to its important properties with therapeutic potential as an anti-inflammatory, antiofidic, healing, cytotoxicity against tumor cells and mainly antiulcerogenic. In this context, an excellent alternative for the improvement of the bioavailability parameters of the vegetal extracts that is used today is the incorporation of these in nanotechnological systems of drug release so that the active product has a better action. Thus, the aim of this study was to evaluate the in vitro antibacterial potential of the ethanolic extract, aqueous extract, fraction and subfractions of the leaves of Casearia sylvestris Swartz, and incorporate into a drug delivery system the most active derivatives and from these results carry out the in vivo experiment against the H. pylori ATCC strain. The extracts were prepared by infusion and maceration. For the biological analyzes we use the microdilution technique to determine the minimum inhibitory concentration and the formed biofilm. The study was developed applying in vitro and in vivo methodologies to elucidate the antibacterial profile. From the results, we can conclude that the C. sylvestris derivatives showed statistically antibacterial activities both in vitro and in vivo. Most of the vegetal derivatives with the exception of aqueous extracts, fractions 1 and 3 and subfraction 17, had some activity against to the microorganism. This activity is probably related to clerodan diterpenes that are abundant in C. sylvestris derivatives. The incorporation into the nanostructured system did not potentiate the activity of the vegetable derivatives as expected in most tests, this is perhaps due to the fact that the composition of the plant derivatives and the system are not chemically compatible. Since the literature shows an antiulcerogenic activity of C. sylvestris derivatives, they could be used both for wound healing and for H. pylori eradication.

O objetivo deste trabalho foi comparar a atividade antibacteriana de medicamentos de referência, genérico e similar contendo azitromicina, por ser este o antibacteriano mais comercializado em uma farmácia privada no município de Jequié, Bahia. Durante o ano de 2013 foram analisadas 720 prescrições e os dados dos antibacterianos dispensados foram tabulados. A atividade antibacteriana de três medicamentos de referência, genérico e similar contendo azitromicina pelo método de difusão em placas, contra as bactériasStaphylococcus aureuseProteus mirabilis.Os resultados apontaram que a maior parte dos medicamentos foram prescritos pelo seu nome comercial e não por seu princípio ativo e que a azitromicina foi o antibiótico mais comercializado. Além disso, os medicamentos de referência e genérico contendo azitromicina foram estatisticamente mais eficientes em reduzir o crescimento deS. aureusquando comparados com o medicamento similar, porém, estes medicamentos foram estatisticamente equivalentes quando avaliados contra cepas deP. mirabilis.Em conjunto, os dados deste trabalho mostraram que os medicamentos de referência e genérico possuem equivalência na atividade antibacteriana para ambas as bactérias, entretanto, o medicamento similar apresentou menor efeito sobre a bactéria gram positiva, o que pode estar associado com o menor rigor no controle desses medicamentos na fase pós-registro na ANVISA. DOI:http://dx.doi.org/10.22481/rsc.v13i2.380

Submitted by Gabriela Lopes (gmachadolopesufpel@gmail.com) on 2017-07-07T15:23:04Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) TESE - Dannenberg 2017.pdf: 1125673 bytes, checksum: 659297f040c56e3fca1291a9ee608e18 (MD5) Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-07-17T19:55:10Z (GMT) No. of bitstreams: 2 TESE - Dannenberg 2017.pdf: 1125673 bytes, checksum: 659297f040c56e3fca1291a9ee608e18 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Made available in DSpace on 2017-07-17T19:55:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE - Dannenberg 2017.pdf: 1125673 bytes, checksum: 659297f040c56e3fca1291a9ee608e18 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-05-30 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES A utilização de conservantes naturais bem como de embalagens ativas vêm ganhando espaço na indústria de alimentos. Neste trabalho, objetivou-se avaliar as características antimicrobianas do óleo essencial de pimenta rosa (OEPR) e, utilizá- lo como componente ativo na elaboração de filmes para aplicação no desenvolvimento de embalagens bioconservantes para alimentos. Através da análise cromatográfica (CG/MS), detectou-se 18 compostos, 4 monoterpenos e 14 sesquiterpenos, dos quais β-mirceno (41%), β-cuvebeno (12%) e Limoneno (9%) foram os majoritários. Na atividade antimicrobiana do OEPR em ágar e caldo, verificou-se ação contra cinco bactérias patogênicas. A CIM (Concentração Inibitória Mínima) para S. aureus e L. monocytogenes foi de 0,68 e 1,36 mg/mL, respectivamente e a CBM (Concentração Bactericida Mínima) foi de 2,72 mg/mL, para ambas. Em micro-atmosfera a redução foi de 100% no desenvolvimento de S. aureus e L. monocytogenes e, 16 e 15% para E. coli e S. Typhimurium. O tempo de contato necessário para a CBM agir sobre bactérias Gram positivas foi inferior ao período de 12 h, e bactérias Gram negativas não foram inibidas. Além disso, foram verificadas alterações na permeabilidade e integridade da membrana citoplasmática de todas as bactérias avaliadas, indicando que o dano no envoltório celular é um dos seus mecanismos de ação. O OEPR foi aplicado como componente ativo em filmes de acetato de celulose, avaliados in vitro (ágar, caldo e micro-atmosfera) e in situ (queijo mozarela fatiado) contra bactérias patogênicas. Foi verificado que concentrações de 2, 4 e 6% de OEPR na matriz polimérica, conferiu atividade em todos os meios avaliados contra L. monocytogenes e S. aureus. Escherichia coli foi sensível em meio liquido e em micro-atmosfera, enquanto S. Typhimurium não demonstrou sensibilidade aos filmes antibacterianos. A inibição in situ, demonstrou que a afinidade entre as moléculas apolares do OEPR e os componentes lipídicos do queijo permite a migração do OE do interior do polímero para a superfície facilitando sua dispersão no alimento, indicando favorável sua aplicação como embalagem ativa. The use of natural preservatives as well as active packaging has sparked interest in the food industry. The objective of this work was to evaluate the antimicrobial characteristics of the essential oil of pink pepper (PPEO) and to use it as an active component in the elaboration of films for application in the development of bioconservant packaging for food. Through the chromatographic analysis (GC/MS) 18 compounds, 4 monoterpenes and 14 sesquiterpenes were detected, of which β- myrcene (41%), β-cuvebene (12%) and Limonene (9%) were the majority. In the antimicrobial activity of PPEO in agar and broth, action was observed against five pathogenic bacteria. The MIC for S. aureus and L. monocytogenes was 0.68 and 1.36 mg/mL, and the MBC was 2.72 mg/mL for both. In micro-atmosphere the reduction was 100% in the development of S. aureus and L. monocytogenes, and 16 and 15% for E. coli and S. Typhimurium. The contact time required for MBC to act on Gram positive bacteria was lower than the 12 h period, and Gram negative bacteria were not inhibited. In addition, changes in the permeability and integrity of the cytoplasmic membrane of all evaluated bacteria were observed, indicating that damage in the cellular envelope is one of its mechanisms of action. PPEO was applied as an active component in cellulose acetate films evaluated in vitro (agar, broth and micro-atmosphere) and in situ (sliced mozzarella cheese) against pathogenic bacteria. It was found that concentrations of 2, 4 and 6% PPEO in the polymer matrix conferred activity on all média evaluated against L. monocytogenes and S. aureus. Escherichia coli was sensitive in liquid medium and in microatmosphere, while S. Typhimurium showed no sensitivity to antibacterial films. In situ inhibition has demonstrated that the affinity between the OEPR apolar molecules and the lipid components of the cheese allows migration of the OE from the interior of the polymer to the surface and facilitates its dispersion in the food, indicating its favorable application as an active packaging. Keywords: Essential oil; Antibacterial activity

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) In the last years the concerns about the resistance acquired by pathogenic microorganisms has increased due to large misuse of antibiotics and agricultural products. Research about new alternatives and natural antimicrobial agents allows, at least, a partial replacement of synthetic drugs. The interest in studying the biological activities of propolis has gained importance due to its great antimicrobial potential, which is attributed to phenolic compounds, especially to the flavonoids. In this sense, the propolis appears as an important therapeutic alternative. The antimicrobial action of this resin has been confirmed in several studies; however, an analysis of the mechanism of action is still scarce. Thus, to identify the presence of antibacterial constituents along with the analyzes by atomic force microscope (AFM), that allows evaluating modifications of the bacterial structures treated with propolis extract, were the main aims of this work. Extracts with different proportions of water and ethanol were prepared and simultaneously processed following standards. The extracts were characterized related to their composition and antibacterial property against Gram-positive Staphylococcus aureus and Gram-negative Escherichia coli bacteria. It was observed that the use of higher concentrations of ethanol in the extract production provided higher extractions of flavonoids and better antibacterial effects. Thus, the best results were attained by the ethanolic extract of propolis, composed of 100% ethanol (EEP), and conversely, the less efficient extract, composed of lower concentrations of flavonoids, was the aqueous one (EAP). The results obtained in the analyzes in FTIR and HPLC confirm a greater presence of flavonoids in the extracts with higher levels of ethanol. Regarding the microscopic analysis, the EEP was selected for analysis considering its better antibacterial capacity. For a satisfactory inhibition of the E. coli growth a more concentrated extract was necessary, leading to an increase in cell volume, and a probable occurrence of bacteriolysis and the occurrence of cellular damages. In general, the propolis showed to have action on the cellular structure of both bacteria, leading to inhibition of microbial growth. Nos últimos anos a preocupação com a resistência de micro-organismos patogênicos tem aumentado devido ao uso intensivo de antibióticos e produtos agrícolas. Pesquisas sobre novas alternativas de agentes antimicrobianos naturais possibilitam a substituição, ainda que de forma parcial, dessas drogas sintéticas. O interesse no estudo das atividades biológicas da própolis tem ganhado importância devido ao seu grande potencial antimicrobiano, atribuído aos compostos fenólicos, em especial, aos flavonoides. Dessa forma, a própolis é uma importante alternativa terapêutica. A ação antimicrobiana dessa resina está comprovada em diversos estudos, entretanto, a análise do mecanismo de sua ação antimicrobiana ainda é escasso. Assim, identificar a presença dos constituintes responsáveis pela atividade antibacteriana, em conjunto com análises em microscópio de força atômica (AFM), que permite avaliar modificações das estruturas bacterianas tratadas com o extrato de própolis foi o principal objetivo deste trabalho. Extratos com diferentes proporções de água e etanol foram preparados e processados de forma padronizada. Os extratos foram caracterizados quanto à sua composição e propriedade antibacteriana, contra a bactéria Gram-positiva Staphylococcus aureus e Gram-negativa Escherichia coli. Foi observado que o uso de maiores concentrações de etanol na produção dos extratos proporcionou maiores extrações de flavonoides e melhores efeitos antibacterianos. Assim, os melhores resultados foram obtidos para o extrato etanólico de própolis composto por 100% etanol (EEP), e em contrapartida, o extrato menos eficaz, e composto por menores concentrações de flavonoides, foi o extrato aquoso (EAP). Os resultados obtidos nas análises em FTIR e CLAE confirmaram a maior presença de flavonoides nos extratos com maiores teores de etanol. Com relação às análises de microscopia, foi selecionado o extrato EEP pela sua maior capacidade antibacteriana. Os componentes presentes no extrato causaram interações com a S. aureus, levando a um aumento do volume celular, e provável ocorrência de bacteriólise. Para a inibição da E. coli foi necessário uma maior concentração do EEP, com claras alterações celulares quando tratada com o extrato etanólico, gerando um aumento do volume e presença de defeitos na parede celular. De uma forma geral, a própolis demonstrou ter ação sob a parede celular das bactérias, levando-as à sua inibição de crescimento.

As doenças causadas por bactérias fitopatogênicas são responsáveis por uma significativa perda na produção agrícola, devido sua rápida disseminação, resistência à maioria dos bactericidas sintéticos e sementes contaminadas. Objetivou-se avaliar a atividade antibacteriana, in vitro, das oleorresinas e frações fixas de cinco espécies de Copaifera (C. duckei, C. pubiflora, C. paupera, C. multijuga e C. reticulata) e do ácido ent-poliáltico, frente às bactérias fitopatogênicas de interesse agrícola. As oleorresinas foram coletadas em diferentes estados, da Amazônia, no período entre agosto de 2013 e março de 2014. O estudo de desreplicação das oleorresinas foi feito por CLAE-EM, baseado no tempo de retenção dos picos cromatográficos e dos seus respectivos espectros de ions produtos (MS/MS dos padrões). As frações fixas das oleorresinas foram obtidas por hidrodestilação por arraste a vapor utilizando o aparelho Clevenger. O isolamento do ácido ent-poliáltico a partir da oleorresina de C. duckei, iniciou-se realizando uma cromatografia líquida a vácuo e depois análise por CLAE das frações. A atividade antibacteriana foi obtida através da concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida mínima (CBM), por microdiluição em placa. A desreplicação das oleorresinas mostrou que os principais constituintes da porção não volátil são os ácidos terpênicos. Os valores de CIM e CBM para a Xanthomonas axonopodispv. Passiflorae (gram-negativas) e todas gram-positivas foram promissores, onde resultaram-se em oleorresinas, ficando abaixo de 60 μg mL-1 e para as frações fixas abaixo de 30 μg mL-1 , respectivamente. O mesmo não ocorreu para o ácido ent-poliáltico, onde os valores de CIM e CBM para todas as bactérias fitopatogênicas foram >100 μg mL-1, mostrando não ser promissor para o controle. Foi encontrada atividade antibacteriana promissora para as bactérias fitopatogênicas Xanthomonas axonopodis pv. passiflorae, (gram-negativa) e todas gram-positivas. The diseases caused by bacteria phytopatogenics in plants are responsible for a significant loss in agricultural production due to their rapid spread, resistance to most synthetic bactericides and contaminated seeds. This study evaluated in vitro the antibacterial activity of oilresins and the respective fixed fractions of five Copaifera species (C. duckei, C. pubiflora, C. paupera, C. multijuga and C. reticulata) and of the ent-polyaltic acid against plant pathogenic bacteria of agricultural interest. The oilresins were collected in different states of the Amazonas from August 2013 to March 2014. The study of dereplication of oilresins was done by CLAE-EM based on the retention time of the chromatographic peaks and their respective spectra of ions products (MS/MS of standards). The fixed fractions were obtained by hydrodistillation of the oilresinsby steam stripping using the Clevenger apparatus. Isolation of entpolyaltic acid from the oilresin of C. duckei started with a vacuum liquid chromatography followed by CLAE analysis of the fractions. Antimicrobial activity was evaluated by the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericide concentration (MBC) by micro dilution in plates. Dereplication of oilresins showed that the main constituents of the non volatile fraction are the terpenic acids. Oleoresins gave promising MIC and MBC values Xanthomonas axonopodis pv. passiflorae (gram-negative) and all gram-positives above 60 μg mL-1 , and to fixed fractions above 30 μgmL-1 , respectively. In contrast, the same was not true for ent-polyaltic acid, which had MIC and MBC values >100 μg mL1 , is not promising for the control of plant pathogenic bacteria evaluated. Promising antibacterial activity was found for phytobacteria Xanthomonas axonopodis pv. passiflorae (gram-negative) and all gram-positives.

Dissertação de Mestrado em Segurança Alimentar O objetivo do presente estudo, foi avaliar a atividade antibacteriana dos extratos orgânico e aquoso de múkua e mulala. Para tal, foi utilizada uma metodologia modificada a partir de Vuyst, Callewaert & Pol (1996), utilizando como indicadores Pseudomonas aeruginosa, Salmonella Enteritidis, Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes e Escherichia coli. O extrato orgânico de mulala demonstrou ter efeito inibitório em P. aeruginosa, S. Enteritidis e S. aureus e não evidenciou nenhum efeito inibitório sobre L. monocytogenes e E. coli. No caso do extrato aquoso de múkua, observou-se um efeito inibitório em P. aeruginosa, S. Enteritidis e E. coli, não tendo sido registado efeito inibitório em S. aureus e L. monocytogenes. Posteriormente, realizou-se um ensaio experimental de aplicação dos extratos de múkua e mulala no fabrico de um preparado de carne tendo-se utilizado como modelo almôndegas. Para avaliar o efeito antimicrobiano sobre a microbiota da carne, adicionou-se 5%, de extrato de múkua e 1,5% de extrato de mulala. As almôndegas foram embaladas em atmosfera protetora e em aerobiose sendo conservadas a 4 ˚C durante 22 dias. Efetuaram-se contagens de microrganismos aeróbios totais a 30 ˚C, Brochothrix thermosphacta, bactérias ácido lácticas, Enterobacteriaceae e Staphylococcus coagulase-negativa ao longo do período de armazenamento (0, 4, 8, 12, 18 e 22 dias). Nas almôndegas adicionadas de 5% de múkua observou-se um maior efeito inibitório para todos os grupos de microrganismos estudados, sendo maior nas Enterobacteriaceae, Staphylococcus coagulase-negativa e B. thermosphacta. Realizou-se um segundo ensaio com a aplicação do extrato de 1% de múkua em salsichas embaladas em atmosfera protetora, conservadas a 7 ˚C durante 30 dias. Efetuaram-se contagens de microrganismos aeróbios totais a 30 ºC, Enterobacteriaceae e bactérias ácido lácticas ao longo do período de armazenamento (0, 5, 10, 20 e 30 dias). Os extratos vegetais utilizados, mostraram ser efetivos na inibição dos microrganismos patogénicos e de deterioração estudados, tendo-se revelado o extrato aquoso com adição de 5% de múkua o melhor candidato como aditivo natural a utilizar em produtos cárneos. Os resultados evidenciaram que a adição de múkua aos preparados de carne durante o armazenamento reduziu o pH do produto, o que favorece a inibição da multiplicação bacteriana. Os resultados demonstraram que a cor não foi influenciado significativamnete P>(0,05) pelos diferentes tipos de embalagem (aerobiose e atmosfera protetora) a que foram sujeitos os preparados de carne durante os dias de armazenamento. Nas salsichas adicionadas de 1% de múkua observou-se um efeito inibitório nas Enterobacteriaceae no dia 20 mas de modo geral não ocorreu qualquer inibição da microbiota presente. ABSTRACT - The aim of this study was to evaluate the antibacterial activity of organic and aqueous extracts múkuaand mulala. Therefore, a modified method of Vuyst, Callewaert Pol (1996), was employed to test their inhibitory effect using Pseudomonas aeruginosa, Salmonella Enteritidis, Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes, and Escherichia coli as indicators. The organic extract of mulala demonstrated an inhibitory effect on P. aeruginosa, S. Enteritidis and S. aureus but did not shown any inhibitory effect on L. monocytogenes and E. coli. In the case of the aqueous extract of múkuawas shown an inhibitory effect on P. aeruginosa, S. Enteritidis and E. coli but no effect on S. aureus and L. monocytogenes. In the case of the aqueous extract of múkua, an inhibitory effect was observed in P. aeruginosa, S. Enteritidis and E. coli; no inhibitory effect was observed on S aureus and L. monocytogenes. Subsequently, an experimental test of mukua and mulala extracts application was carried out in the manufacture of a prepared meat product using meatballs as an model. To evaluate the antibacterial effect on the meat microbe added 5% of extract múkua and 1,5 % extract mulala was added. The almondegas were packed in a protected atmosphere and aerobiose being conserved at 4º C during 22 days. The total microorganism aerobic at 30 ° C, Brochothrix thermosphacta, lactic acid bacteria, Enterobacteriaceae and S. coagulase-negative counts were performed, during the storage period (0, 4, 8, 12, 18 and 22 days). A strong inhibitory effect for all groups of microorganisms studied were observed in 5% múkua meatballs, mainly on Enterobacteriaceae, coagulase-negative staphylococci and Brochothrix thermosphacta. A second experimental application with 1% múkua extract in sausages packed in a protected atmosphere and stored at 7 °C for 30 days was assessed. The total microorganism aerobic at 30 °C, Enterobacteriaceae and lactic acid bacteria counts were evaluated throughout the storage period (0, 5, 10, 20 and 30 days). In the meatballs with 5% múkua was observed an inhibitory effect on microbiota development, which may be considered a good candidate as natural preservative. The results showed that addition of múkua to the meat pre-cooked during storage reduced the pH of the product, increasing the inhibition of bacterium multiplication. The results showed that the color was not signicantly influenced P> 0, 05 by the different types of aerobic packaging and protetive atmosphere to which the meat preparations were subjected during storage days. In the added sausages with 1% mukua an inhibitory effect was observed on Enterobacteriaceae at day 20, but generally no inhibition occurred in the present microbiota. N/A

Submitted by Jean Medeiros (jeanletras@uepb.edu.br) on 2018-05-21T14:55:49Z No. of bitstreams: 1 PDF - Mysrayn Yargo de Freitas Araújo Reis.pdf: 25441289 bytes, checksum: 518beaa4a3b4581b9a50e243986be6b6 (MD5) Approved for entry into archive by Secta BC (secta.csu.bc@uepb.edu.br) on 2018-05-23T16:59:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PDF - Mysrayn Yargo de Freitas Araújo Reis.pdf: 25441289 bytes, checksum: 518beaa4a3b4581b9a50e243986be6b6 (MD5) Made available in DSpace on 2018-05-23T16:59:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PDF - Mysrayn Yargo de Freitas Araújo Reis.pdf: 25441289 bytes, checksum: 518beaa4a3b4581b9a50e243986be6b6 (MD5) Previous issue date: 2017-03-08 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Bacterial Skin Infections (BSIs) includes a varied group of diseases caused by the invasion of bacteria into the epidermidis and adjacent soft tissues. Although the skin can host bacteria belonging to the normal cutaneous microbiota, such as, several speciessuch as, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis and Pseudomonas aeruginosa can be considered pathogens for several IBPs. Among the various antibiotic groups used in treatment of BSIs, azithromycin is mentioned in the literature. Azithromycin (AZ), is a semi-synthetic macrolide antibiotic of the azalide class and is a promising candidate for the treatment of BSIs due to their capacity of penetration in the tissues and wide spectrum of action for several bacterial species. The incorporation of AZ into new drugs delivery systems such as microemulsion (ME) can ensure release control, lower toxicity, lower doses, decrease in plasma peaks, protection of drug degradation or inactivation. The present work aims to encapsulate AZ into microemulsion systems, perform the characterization and confirm its antibacterial activity. From the pseudoternary phase diagram were developed and selected one type of O/W formulations composed of deionized water, isopropyl myristate, LAS , and Brij 52 for the encapsulation of AZ. Both formulations in the absence (MEB) and presence of drug (MEAZ) were presented as clear and stable systems. For MEAZ, the pH value (6.75) indicated an excellent compatibility for dermal administration. In addition, its high conductivity (630.1), allied with the differential scanning calorimetry (DSC) studies, suggested an O/A type system. The refractive index revealed the isotropic character, confirmed by the technique of polarized light microscopy. Transmission electron microscopy (MET) indicated the nanometric droplet size of the systems and the dynamic light scattering (DLS) technique was able to measure a diameter of 18.72 and 20.89 nm for MEB and MEAZ, respectively. From the rheological analysis we can attest to the Newtonian type behavior for both formulations. Finally, the antimicrobial activity of MEAZ against the strains of S.aureus, S.epidermidis and P.aeruginosa was confirmed. Studies necessary to trace the release profile and determination of minimal inhibitory concentration will be conducted so that the developed ME may represent a new safe and effective alternative in the complementary treatment of PPIs. As infecções bacterianas da pele (IBPs) engloba um variado grupo de doenças causadas pela invasão de bactérias na epiderme e tecidos moles adjacentes. Embora a pele possa abrigar bactérias que pertencem a microbiota cutânea normal, muitas espécies tais como, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis e Pseudomonas aeruginosa podem ser consideradas agentes patógenos para várias IBPs. Dentre os vários grupos de antibióticos utilizados no tratamento das IBPs, pode ser citada a azitromicina (AZ). A AZ é um antibiótico macrolídeo semi-sintético da classe dos azalídeos, apresenta-se como um promissor candidato no tratamento das IBPs uma vez que possui a capacidade de penetração nos tecidos e largo espectro de ação para diversas espécies bacterianas. A incorporação de AZ em novos sistemas de liberação de fármacos visando a sua administração por via tópica, como as microemulsões (ME), pode garantir o controle da liberação, menor toxicidade, menor número de doses, diminuição dos picos plasmáticos, a proteção da degradação e/ou inativação do fármaco. O presente trabalho teve como objetivo incorporar a AZ em uma ME, realizar a sua caracterização e confirmar a sua atividade antibacteriana. A partir do diagrama de fases pseudoternário foi desenvolvida e selecionada uma microemulsão do tipo O/A compostas por água deionizada (fase aquosa), miristato de isopropila (fase oleosa), LAS e Brij 52 (tensoativos na proporção 9:1) para a incorporação de AZ. Ambas as formulações na ausência (MEB) e presença de fármaco (MEAZ) se apresentaram como sistemas límpidos e estáveis. Para a MEAZ, o valor de pH (6,75) indicou uma ótima compatibilidade para administração cutânea. Além disso, a sua elevada condutividade (630, 1µScm^-1), aliada aos estudos de calorimetria exploratória diferencial (DSC) sugeriram um sistema do tipo O/A. O índice de refração revelou o caráter isotrópico, confirmada pela técnica de microscopia de luz polarizada. A microscopia eletrônica de transmissão (MET) indicou o tamanho de gotículas nanométrico dos sistemas e a técnica de espalhamento de luz dinâmica (DLS) foi capaz de medir um diâmetro de 18,72 e 20,89 nm, para a MEB e MEAZ, respectivamente. A partir de análises reológicas pode-se atestar o comportamento do tipo newtoniano para ambas as formulações. Por último, foi atestada a atividade antimicrobiana da MEAZ contra as cepas de S. aureus, S.epidermidis e P. aeruginosa. Estudos necessários para traçar o perfil de liberação e determinação da concentração inibitória mínima serão conduzidos para que a ME desenvolvida possa representar uma nova alternativa segura e eficaz no tratamento complementar das IBPs.

The present work aimed to prepare a series of esters derived from trans-2-nitrocinnamic acid, through Fischer esterification, nucleophilic substitution with halides and Mitsunobu reaction. All the derivatives were submitted to antimicrobial tests by the microdilution method in broth, and the antimicrobials chloramphenicol and nystatin as positive controls. This study resulted in the obtaining of 14 esters of trans-2-nitrocinnamic acid in yields ranging from 25 to 98%, nine of which were unpublished in the literature, and characterized by infrared spec-troscopic methods, 1H and 13C magnetic resonance, as well as High resolution mass spectrometry. The results of the antimicrobial evaluation showed that ten esters presented antifungal activity against Candida species. While two derivatives were bioactive in the an-tibacterial test. Of these, the EL4, EL6 and EL14 esters were the derivatives that obtained the most promising antifungal minimum inhibitory concentrations with MIC ranging from 128 to 256 μg / mL and considered to be strong activities. Regarding the bacterial activity, EL12 and EL13 derivatives showed activity on the Pseudomonas aeruginosa species with MIC 512 μg / mL. These results demonstrate that the increase of the alkyl chain in the substituent up to a certain size and the presence of hydroxyl, methoxy, or chlorine at the para position of the aromatic ring influence the antifungal activity of the 2-nitrocinnamic esters. Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq O presente trabalho teve como objetivo preparar uma série de ésteres derivados do ácido trans-2-nitrocinâmico, através da esterificação de Fischer, substituição nucleofílica com haletos e reação de Mitsunobu. Todos os derivados foram submetidos a testes antimicrobianos pelo método de microdiluição em caldo, tendo como controles positivos os antimicrobianos cloranfenicol e nistatina. O referido estudo resultou na obtenção de 14 ésteres do ácido trans-2-nitrocinâmico com rendimentos variando entre 25 e 98%, sendo nove derivados inéditos na literatura,caracterizados por métodosespectroscópicos de infravermelho, ressonância magnética de 1H e 13C, bem como porespectrometria de massas de alta resolução. O resultado da avaliação antimicrobiana demonstrou que dez ésteres apresentaram atividade antifúngica frente a espécies do gêneroCandida. Enquanto, dois derivados foram bioativos no teste antibacteriano. Destes, os ésteres EL4, EL6 e EL14 foram os derivados que obtiveram concentrações inibitórias mínimas antifúngicas mais promissoras com CIM que variaram entre 128 e 256 μg/mL, sendo consideradas atividades fortes. Com relação à atividade bacteriana, os derivados EL12 e EL13 demostraram atividade sobre a espécie de Pseudomonas aeruginosacom CIM 512μg/mL. Esses resultados demonstram que o aumento da cadeia alquílica no substituinte, até determinado tamanho, e a presença de hidroxila, metoxila ou cloro na posição para do anel aromático influenciam a atividade antifúngica dos ésteres 2-nitrocinâmicos.

Este trabalho envolve um estudo fitoquímico dos extratos hexânico e clorofórmico das raízes de Maytenus distichophylla e da avaliação da atividade biológica dos extratos e compostos isolados. Este estudo resultou no isolamento dos compostos: 3-oxofriedelano e 3,7-dioxofriedelano, com esqueleto friedelânico; 3-oxo-olean-9(11),12-dieno, do tipo oleano; 11[alfa]-hidroxilup-20(29)-en-3-ona e 30-hidroxilup-20(29)-en-3-ona, do tipo lupano; pristimerina e tingenona, quinonametídeos; ¿-sitosterol, um esteroide e um triacilglicerol. As estruturas químicas das substâncias foram determinadas utilizando métodos espectroscópicos (IV, RMN de 1H e de 13C) e espectrométrico (CG-EM). O estudo da atividade biológica consistiu da avaliação da atividade antimicrobiana (antibacteriana e antifúngica), ensaio de toxicidade em Caenorhabditis elegans e cálculos de atividade biológica promissora, por meio de ferramentas in silico. Todas as substâncias testadas diminuíram significantemente a viabilidade de Staphylococcus aureus MRSA. Os compostos tingenona e a mistura de pristimerina e 11[alfa]-hidroxilup-20(29)-en-3-ona e os extratos hexânico e clorofórmico, causaram uma redução da viabilidade de S. aureus, de aproximadamente 75%. Nas condições testadas não foi observado nenhum efeito sobre a viabilidade de Candida albicans. Os testes no estágio L4 de C. elegans, que é o estágio larval utilizando em ensaios de infecção, indicaram como bons candidatos a utilização do extrato hexânico e a mistura de pristimerina e 11[alfa]-hidroxilup-20(29)-en-3-ona, para o tratamento da infecção bacteriana in vivo. Os demais compostos afetaram a viabilidade de C. elegans indicando que os mesmos apresentam potencial nematicida. Os cálculos in silico realizados utilizando os métodos SVM (Support Vector Machine) e Bayes (naive-Bayes Classifier) indicaram que os compostos lupânicos possuem potencial atividade no tratamento de doenças cardíacas e como inibidores da enzima [beta]-lactamase. Os compostos 3-oxo-olean-9(11),12-dieno, 11[alfa]-hidroxilup-20(29)-en-3-ona e 30-hidroxilup-20(29)-en-3-ona, apresentaram uma atividade promissora em vários tipos de câncer, principalmente câncer de mama e câncer de ovário. The phytochemical study of hexane and chloroform root extracts from Maytenus distichophylla was performed yielding natural products from a variety of classes such as friedelane, oleanane, lupane, quinonemethide and steroid compounds. The isolated compounds were identified as 3-oxofriedelane, 3,7-dioxofriedelane, 3-oxo-olean-9(11),12-diene, 11-hydroxylup-20(29)-en-3-one, 30-hydroxylup-20(29)-en-3-one, tingenone and -sitosterol. Furthermore, one triacylglycerol and a mixture of 11[alfa]-hydroxylup-20(29)-en-3-one/pristimerin were also isolated in this study. Their chemical structures were determined by spectroscopic (IR, H and C-NMR) and spectrometric (GC-MS) methods. The antimicrobial activity (antibacterial/antifungal) was evaluated for the extracts and isolated compounds. All substances reduced the viability of Staphylococcus aureus MRSA, however no effect was observed for Candida albicans. The most active samples were tingenone, the mixture of 11-hydroxylup-20(29)-en-3-one/pristimerin and the hexane and chloroform extracts, with a reduction of 75% approximately. The toxicity was also assayed using a Caenorhabditis elegans model in L1 and L4 phase. All tested compounds were non-toxic in L1 phase. However, only the hexane extract and the mixture 11[alfa]-hydroxylup-20(29)-en-3-one/pristimerin allowed the nematodes survival in L4 phase (larval phase used on infection tests). Once these two samples also showed high antibacterial activity, they present themselves as potential candidates to in vivo treatment of bacterial infections. The toxic substances displayed a nematicide potential that could be explored in parasitological studies. Moreover, in silico calculations were performed for 3-oxo-olean-9(11),12-diene, 11[alfa]-hydroxylup-20(29)-en-3-one and 30-hydroxylup-20(29)-en-3-one using the SVM (Support Vector Machine) and Bayes (naive-Bayes Classifier) methods. The lupane compounds showed a potential for treatment of heart diseases and inhibition of [beta]-lactamase enzyme. Also, all three substances displayed promising activity for several types of cancer, mainly breast and ovary cancer.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-06-19T12:42:49Z No. of bitstreams: 1 Atzel Candido Acosta Abad.pdf: 2296027 bytes, checksum: 77b9c26103182c9839f925ddfa1f8307 (MD5) Made available in DSpace on 2018-06-19T12:42:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Atzel Candido Acosta Abad.pdf: 2296027 bytes, checksum: 77b9c26103182c9839f925ddfa1f8307 (MD5) Previous issue date: 2017-02-17 Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq The aim of the present study was to characterize genetically isolates of Staphylococcus aureus (S. aureus) obtained from cows and goats with mastitis in Pernambuco state, Brazil. Additionally was evaluated the antibacterial efficacy of nanoparticles of polypyrrole (PPy) in water against biofilm producer or not S. aureus. For this, 150 isolates (123 from bovines and 27 from goats) were analyzed. The virulence factors involved in adhesion to host cells (fnbA/B and clfA/B), toxins (sea, - sei, tsst, hla and hlb), and capsular polysaccharide genes (cap5 and cap8) were amplified by PCR. A total of 138 isolates of S. aureus were evaluated for biofilm formation by spectrophotometry in microplates and Minimum Inhibition Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC) of nanoparticles of PPy were measured. The toxic potential, defined by the number of toxins genes per isolate, showed that goat’s isolates had a higher potential. The cap8 genotype had more virulence potential by the number of virulence genes per isolate. The cap5 genotype was most frequent (70.67%), especially in bovine’s strains. The MIC and MBC of S. aureus to PPy were found in 125μɡ/mL in all strains, independent of biofilm production or not. New control measures should be implement, especially in goats that the isolates circulating had a higher toxic potential. In view of the positive preliminary results of PPy nanoparticles, future studies should be performed to obtain a product that contributes to mastitis control. Objetivou-se neste estudo caracterizar geneticamente os isolados de Staphylococcus aureus (S. aureus) obtidos de vacas e cabras com mastite no estado de Pernambuco, Brasil. Também, avaliou-se a eficácia antibacteriana de nanopartículas de polipirrol (PPy) em água frente a S. aureus produtores ou não de biofilme. Para isto 150 isolados (123 de vacas e 27 de cabras) foram analisadas. Os fatores de virulência envolvidos na adesão às células do hospedeiro (fnbA/B e clfA/B), toxinas (sea - sei, tsst, hla e hlb) e os genes polissacáridos capsulares (cap5 e cap8 ) foram detectados pela PCR. 138 isolados de S. aureus foram avaliados quanto à formação de biofilme por espectrofotometria em microplacas e determinou-se a Concentração Mínima Inibitória (MIC) e a Concentração Mínima Bactericida (MBC) frente a nanopartículas de PPy. O potencial tóxigênico, indicado pelo número de genes de toxinas por isolado, revelou que os isolados de cabras apresentam um maior potencial. O genótipo cap8 apresentou maior potencial de virulência, indicado pelo número de genes apresentado por isolado. O genótipo cap5 foi mais frequente (70.67%), especialmente nos isolados de vacas. A MIC e a MBC do PPy frente a S. aureus foi de 125μɡ/mL para todos os isolados, independente da produção de biofilme. Novas medidas de controle deverão ser implementadas, em especial em rebanhos caprinos onde os isolados circulantes apresentaram maior potencial tóxico. Diante dos resultados preliminares promissores das nanopartículas de PPy frente a S. aureus, futuros estudos devem ser realizados para obtenção de um produto que contribua com o controle da mastite.

Achyrocline satureioides (Asteraceae) ou "Marcela" é uma planta nativa de países latino-americanos e, apesar do seu uso generalizado na medicina tradicional, as propriedades químicas e biológicas que sustentam seu uso fitoterápico, ainda não foram completamente caracterizadas. Neste trabalho apresentamos benefícios terapêuticos de extratos de Achyrocline satureioides, através de estudos in vitro e in vivo. Avaliou-se o perfil químico, potencial antioxidante in vitro e atividade antimicrobiana de três extratos de Achyrocline satureioides. Dentre os extratos testados, o extrato hidroetanólico exibiu atividade antioxidante em concentrações de 34 μg/mL, e apresentou um amplo espectro de atividade antimicrobiana (100 a 200 mg/mL) contra bactérias patogênicas intestinais. Os efeitos antibacterianos foram superiores aos exercidos pela amoxicilina, quando testados contra Bacillus cereus e Staphylococcus aureus. Como estudos sobre o efeito do uso indiscriminado de infusões de plantas durante a gravidez são limitados, neste trabalho, também investigamos os efeitos da suplementação em ratas wistar com dois extratos de Achyrocline satureioides, um extrato aquoso (47mg/Kg/dia) e um extrato hidroetanólico (35mg/Kg/dia), administrados durante a gestação e lactação. Nossos dados sugerem que tanto o extrato aquoso quanto o hidroetanólico podem induzir sintomas de toxicidade nas concentrações testadas, no que se refere ao índice de nascimentos dos filhotes, diminuição da sobrevivência neonatal, além de causar alterações significativas específicas nos tecidos quanto aos parametros enzimáticos tanto das mães como dos filhotes fornecendo evidências que podem justificar a necessidade de controle na suplementação na gestação. A administração oral de um extrato hidroetanólico de A. satureioides também produziu atividade anti-hiperglicêmica promissora em ratos. Sendo comparável ao fármaco controle positivo: a acarbose. Este efeito foi observado em ratos que ingeriram níveis elevados de maltose e amido, e também em modelo de indução de diabetes mellitus (DM) com estreptozotocina. Para investigar o mecanismo de ação do extrato, determinamos seus efeitos inibitórios sobre maltase e α-amilase pancreática. O nível de extrato associado a 50% de inibição enzimática (IC50) foi de 185,21 μg/mL para maltase e 265,72 μg / mL para α-amilase pancreática. Uma investigação mais profunda dos constituintes de A. satureioides mostrou que o flavonoide, achyrobichalcona, produziu a maior inibição das glicosidases (IC50 de 4,74 μM para α-amilase e 6,71 μM para maltase), o que foi consistente com os nossos resultados de modelagem molecular. Estes achados sugerem uma potencial aplicação de A. satureioides como agente terapêutico em DM. As atividades antioxidantes, antimicrobianas e hiperglicêmica de parecem estar positivamente correlacionadas com a quantidade de flavonoides. Em conclusão, nossos resultados mostraram evidências de atividades antioxidante, antimicrobiana e hipoglicêmica convidando a pesquisas futuras sobre seu potencial uso como agente co-adjuvante terapêutico tanto para o tratamento das doenças gastrointestinais que podem apresentar altas taxas de resistência a antibióticos, bem como no DM. Contudo, são necessárias mais investigações para verificar os seus efeitos sobre a saúde. Achyrocline satureioides (Asteraceae) or “Marcela” has been widely used in traditional medicine; however, chemical and biological properties supporting its phytotherapeutic usage are still poorly studied. In this work we present therapeutic benefits of extracts of Achyrocline satureioides, through in vitro and in vivo studies. We evaluated the chemical profiles of the dried extracts, along with antioxidant potential and antimicrobial activity against intestinal pathogenic bacteria. Our data suggest that dried A. satureioides extracts exert greater antibacterial effects than the antibiotic amoxicillin when tested against Bacillus cereus and Staphylococcus aureus. The antioxidant and antimicrobial activities of A. satureioides extracts appear to positively correlate with the amount of flavonoids measured in each extract. Our results provide evidence for the antioxidant and antimicrobial activities of A. satureioides extracts against intestinal pathogens. These findings justify further research regarding the potential for A. satureioides extracts as co-adjuvants to treat bacterial-induced intestinal diseases that may present high rates of antibiotic resistance. Studies regarding the indiscriminate use of plant infusions during pregnancy are limited. Recent reports have shown that chronic flavonoid supplementation induces toxicity in vivo and raises the mortality rates of healthy subjects. Therefore, we investigated whether supplementation of pregnant and lactating Wistar rats with two AS inflorescence extracts, consisting of an aqueous extract similar to a tea (47 mg/kg/day) and a hydroethanolic extract (35 mg/kg/day) with a higher flavonoid content, could induce redox-related side effects. Our data suggest that both aqueous extract and hydroethanolic extract of A. satureioides inflorescence extracts may induce symptoms of toxicity in concentrations tested in mothers regarding the delivery index and further decrease of neonatal survival. Our findings provide evidence that may support the need to control supplementation with the aqueous extract of A. satureioides inflorescence extracts during gestation due to potential toxicity in vivo, which might be related, at least in part, to changes in tissue-specific redox homeostasis and enzymatic activity. Oral administration of a hydroalcoholic extract from A. satureioides also produced promising antihyperglycemic activity in rats. This was comparable to the positive control drug: acarbose. This effect was observed in rats that ingested high levels of maltose and starch, and also in a rat streptozotocin model of DM. To investigate the mechanism of action of A. satureioides, we determined its inhibitory effects on maltase and pancreatic α-amylase. The level of A. satureioides associated with 50% enzyme inhibition (IC50) was 185.21 μg / mL for maltase and 265.72 μg / mL for pancreatic α-amylase. Further investigation of AS constituents showed that flavonoid, achyrobichalcona, produced the highest inhibition of the enzyme (IC50 of 4.74 μM for α-amylase and 6.71 μM for maltase), which was consistent with our modeling results molecular. These findings suggest a potential application of A. satureioides as a therapeutic agent in DM. The antioxidant and antimicrobial and hyperglycemic activities appear to be positively correlated with the amount of flavonoids. In conclusion, our results showed evidence of antioxidant, antimicrobial and hypoglycemic activity inviting future research on its potential use as a co-adjuvant therapeutic agent both for the treatment of gastrointestinal diseases that may present high rates of antibiotic resistance as well as in DM. However, more research is needed to verify its effects on health.

RESUMO A utilização de materiais nanoestruturados sintetizados a partir de sais metálicos tem atraído cada vez mais a atenção de pesquisadores e indústrias no sentido de desenvolver aplicações inovadoras em áreas como a de energia, saúde e alimentos. A prata, o cobre e o óxido de zinco, por apresentarem propriedades antibacterianas, possuem um grande potencial para aplicação como substituintes aos tradicionais agentes antibacterianos organoclorados e derivados de arsênio. O óxido de zinco, por apresentar baixíssima toxicidade às células humanas, não sendo classificado como metal pesado e por ser um material biocompatível, aparece como alternativa em aplicações como na área médica e no tratamento de água para o consumo. O presente trabalho teve como principal objetivo sintetizar nanopartículas de óxido de zinco pelo método do poliol, e avaliar a atividade antibacteriana destas nanoestruturas contra a bactéria Gram negativa Escherichia coli. As sínteses foram conduzidas na presença e ausência da poli(vinil pirrolidona) para investigar a influência deste agente estabilizante nas propriedades morfológicas das nanopartículas obtidas. Todas as amostras foram caracterizadas por espectrofotometria na região do UV-Vis, difratometria de raios-X, microscopia eletrônica de varredura com efeito de campo e microscopia eletrônica de transmissão. Testes para avaliação da atividade antibacteriana com diferentes quantidades de nanopartículas de óxido de zinco sintetizadas sem a poli(vinil pirrolidona) foram conduzidos conforme a norma ASTM E-2149. Os resultados obtidos demonstraram que o método do poliol foi capaz de produzir nanopartículas de óxido de zinco com elevado grau de pureza e diâmetro médio em torno de 20 nm, na ausência ou presença da poli(vinil pirrolidona). Os ensaios microbiológicos comprovaram que as nanopartículas de óxido de zinco produzidas apresentaram excelente atividade antibacteriana contra a bactéria Escherichia coli quando aplicadas em concentrações superiores a 50 mg.L-1. ABSTRACT The use of nanostructured materials synthesized from metal salts has increasingly attracted the attention of researchers and industries to develop innovative applications in areas such as energy, health and food. Due to the antibacterial properties of silver, copper and zinc oxide, they are potential substituents to the traditional antibacterial agents, such as organochlorines and arsenic derivatives. Once zinc oxide is not classified as heavy meta, has low toxicity, and is biocompatible, it appears as an alternative material for applications in the medical area and water treatment. The main objective of this work was to synthesize zinc oxide nanoparticles by the polyol method and evaluate the antibacterial activity of these nanostructures against the Gram negative bacteria Escherichia coli. The syntheses were carried out in the presence and absence of poly(vinyl pyrrolidone) to investigate the influence of this stabilizing agent on the morphological properties of the nanoparticles. All of the samples were characterized by UV-Vis spectrophotometry, X-ray diffractometry, field emission scanning electron microscopy and transmission electron microscopy. Tests to evaluate the antibacterial activity of different amounts of the zinc oxide nanoparticles were performed according to the ASTM E-2149. The results obtained demonstrated that the polyol method was able to produce zinc oxide nanoparticles with high purity and average diameter around 20 nm, regardless the presence of poly(vinyl pyrrolidone). Microbiological assays showed that zinc oxide nanoparticles produced excellent antibacterial activity against the bacteria Escherichia coli when applied at concentrations higher than 50 mg.L-1.

Trabalho Final de Mestrado Integrado, Ciências Farmacêuticas, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia, 2017 Submitted by Repositório FFUL (repositorio@ff.ul.pt) on 2018-12-18T19:05:58Z No. of bitstreams: 1 MICF_Ines_Marques_Fernandes.pdf: 896461 bytes, checksum: 88a3a7d7824a815b5b338dd55ded9f5a (MD5) Made available in DSpace on 2018-12-18T20:39:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MICF_Ines_Marques_Fernandes.pdf: 896461 bytes, checksum: 88a3a7d7824a815b5b338dd55ded9f5a (MD5) Previous issue date: 2017-10-23

The antimicrobial activity of the bacteriocin-like substance (BLS) P34 against Listeria monocytogenes was investigated in chicken sausage. The BLS was applied to chicken sausages (256 AU g(-1)) previously inoculated with a suspension of 10(2) cfu g(-1) of L. monocytogenes. BLS P34 inhibited the indicator microorganism in situ in all incubation times for up to 10 days at 5 °C. The effectiveness of BLS P34 was increased when it was added in combination with nisin. The bacteriocin was also tested in natural eatable natural bovine wrapping (salty semi-dried tripe) against the same indicator microorganism, also showing inhibitory capability in vitro. BLS P34 showed potential to control L. monocytogenes in refrigerated meat products.

TCC (graduação) - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências da Saúde. Odontologia. A periodontite e cárie dental ainda são as doenças bucais mais prevalentes e a terapêutica usada para cura tem sido afetada pela resistência bacteriana aos antibióticos. A fim de tentar reverter essa situação, estão sendo estudados materiais biocompatíveis contendo novos compostos antibacterianos em sua composição para uso em próteses e implantes dentários. Um exemplo deste tipo de material é o biovidro, desenvolvido na década de 60, com propriedades antibacterianas, bioativo, com capacidade de aumentar a expressão de indutores angiogênicos e osteocondutor, promovendo uma resposta intra e extracelular que permite a colonização da sua superfície por células tronco livres no ambiente defeituoso. Os biovidros derivados do processo sol-gel, como o 58S utilizado neste trabalho, possuem mais nanoporosidades e maior área de superfície do que os derivados do processo de fusão, como o 4S5S, o que torna os primeiros mais bioativos. O objetivo deste estudo é estabelecer um protocolo para avaliar formação de biofilme e o crescimento da microbiota (Streptococcus oralis) em meio de cultura BHI, em presença de pó de biovidro 58S contendo diferentes quantidades de brometo de cálcio (CaBr2) em sua composição. Para desenvolvimento deste trabalho, foram escolhidas 4 concentrações de CaBr2 na composição do biovidro (0%, 5%, 10% e 20%) e duas concentrações de pó de biovidro 58S, 50mg/ml e 100mg/ml, em TRIS em pH 7,5 e concentração de 0,05 g/mol. Em uma placa de 96 poços foram depositados 100µl de cada suspensão de CaBr2 e adicionados 100µl do pré-inóculo S.oralis cultivados por 16h à 37°C em BHI. As quantificações do crescimento planctônico e do biofilme foram realizadas através da leitura de densidade óptica diretamente à 600nm no caso do crescimento planctônico e à 595nm após coloração com cristal violeta 0,1% no caso do biofilme. Os resultados indicaram presença de formação de biofilme no pó de biovidro, assim como inibição do crescimento planctônico induzida pelas amostras de biovidro. Porém, não foi possível quantificar com precisão visto que algumas variáveis não puderam ser controladas, como a baixa solubilidade do biovidro nas condições do experimento e a reatividade do mesmo ao corante cristal violeta. Conclui-se que, estudos posteriores são necessários para o estabelecimento de um protocolo que resulte em resultados quantitativos precisos dos dois parâmetros aqui estudados, a começar pela determinação das condições necessárias à solubilização do biovidro. Periodontitis and dental caries are still the most prevalent oral disease and the conventional therapy used to treat it has been affected by the development of bacterial antibiotic resistance. In order to try to reverse this situation, biocompatible materials containing novel antibacterial compounds in its composition are being studied for use in prosthetics and dental implants. Bioglass is one example of this type of material; it has been developed in the 60s, with antibacterial properties, bioactive, capable of increasing the expression of angiogenic inducers and osteoconductive, promoting intra and extracellular response that allows the colonization of the surface by stem cells. Bioactive glasses derived from the sol-gel process, such as the 58S used in this work, have more nanoporosities and greater surface area than the derivatives of the fusion process, such as 4S5S, which makes the first more bioactive. The aim of this study was to establish a protocol to assess biofilm formation and planktonic growth of bacteria (Streptococcus oralis) in the presence of bioglass powder 58S, containing different percentages of calcium bromide (CaBr2 ) in its composition. To develop this study were selected bioglasses containing 4 different concentrations of CaBr2 in their compositions (0%, 5%, 10% and 20%). The experiments were performed using two bioglass 58S concentrations, 50mg/ml and 100mg/ml, in TRIS pH 7,5 at 0,05 g/mol. 100µl of each bioglass suspension were placed in individual wells of a 96-well plate. 100µl of S.oralis pre-inoculum cultured in BHI were added to each well and plates were incubated for 16h at 37° C. Quantification of biofilm and planktonic growth were performed by optical density reading directly (600nm) in the case of planktonic growth and after staining with crystal violet 0,1% in the case of biofilm (595nm). Results indicated the presence of biofilm formation in bioglass powder, as well as inhibition of planktonic growth induced by bioglass samples. However, it was not possible to quantify these parameters accurately because some variables could not be controlled, such as low solubility of bioglass in the experiment conditions and its reactivity to the crystal violet coloring. We conclude that further studies are necessary to establish a protocol that results in accurate quantitative results of the two parameters studied here, mainly with the determination of the conditions for bioglass solubilization .

RESUMO: O presente trabalho descreve a atividade antibacteriana do óleo essencial e do extrato etanólico das folhas de Alpinia zerumbet (colônia) sobre cepas de Staphylococcus aureus isoladas de vacas com mastite subclínica e cepas padrão ATCC 29213 e ATCC 25923, por meio do método de difusão em ágar. Foram utilizados 10 tratamentos contendo diferentes concentrações do óleo essencial e do extrato etanólico (100,0; 50,0; 25,0; 12,5 e 6,3 mg.mL-1) e o grupo controle (álcool etílico a 50% e Tween a 1%). Os constituintes majoritários do óleo essencial foram p -cimeno (32,72%), 1,8-cineol (24,05%) e 4-terpineol (20,23%), sendo esses determinados por cromatografia a gás acoplada a espectrometria de massas e cromatografia a gás com detector de ionização de chama (CG-EM/DIC). No extrato etanólico foi detectado o ácido elágico e três flavonoides: rutina, quercetina e campferol, por meio de cromatografia a líquido de alta eficiência acoplada a detector de arranjo de diodo (CLAE-DAD). Todas as cepas apresentaram sensibilidade aos tratamentos com óleo essencial e extrato etanólico. A melhor resposta foi obtida com o óleo essencial de A. zerumbet que, na concentração de 100 mg.mL-1 proporcionou inibição total do crescimento bacteriano. Esses resultados sugerem o potencial antibacteriano do óleo essencial e do extrato etanólico de A. zerumbet no controle da mastite bovina. ABSTRACT: The present work describes the antibacterial activity of the essential oil and the ethanol extract from leaves of Alpinia zerumbet (colônia) on Staphylococcus aureus strains isolated from cows with subclinical mastitis and standard strains ATCC 29213 and ATCC 25923, using the agar diffusion method. Ten treatments containing different concentrations of essential oil and ethanol extract (100.0; 50.0; 25.0; 12.5 and 6.3 mg.mL-1) and the control group (50% ethyl alcohol and 1% Tween solutions) were used for antimicrobial testing. The major constituents of the essential oil were p -cimeno (32.72%), 1.8-cineol (24.05%) and 4-terpineol (20.23%), which were determined by gas chromatographymass spectrometry and gas chromatography - flame ionization detector (CG-MS/FID). Ellagic acid and three flavonoids (rutin, quercetin and campferol) were detected in the ethanol extract by means of high performance liquid chromatography-photodiode array detector (HPLC-PDA). All strains showed sensitivity to the treatments with essential oil and the ethanol extract. The best response was obtained with A. zerumbet essential oil at a 100 mg.mL-1, showing complete inhibition of bacterial growth. These results demonstrate the antibacterial potential of essential oil and ethanol extract of A. zerumbet in the control of bovine mastitis.

RESUMO: O presente trabalho descreve a atividade antibacteriana do óleo essencial e do extrato etanólico das folhas de Alpinia zerumbet (colônia) sobre cepas de Staphylococcus aureus isoladas de vacas com mastite subclínica e cepas padrão ATCC 29213 e ATCC 25923, por meio do método de difusão em ágar. Foram utilizados 10 tratamentos contendo diferentes concentrações do óleo essencial e do extrato etanólico (100,0; 50,0; 25,0; 12,5 e 6,3 mg.mL-1) e o grupo controle (álcool etílico a 50% e Tween a 1%). Os constituintes majoritários do óleo essencial foram p -cimeno (32,72%), 1,8-cineol (24,05%) e 4-terpineol (20,23%), sendo esses determinados por cromatografia a gás acoplada a espectrometria de massas e cromatografia a gás com detector de ionização de chama (CG-EM/DIC). No extrato etanólico foi detectado o ácido elágico e três flavonoides: rutina, quercetina e campferol, por meio de cromatografia a líquido de alta eficiência acoplada a detector de arranjo de diodo (CLAE-DAD). Todas as cepas apresentaram sensibilidade aos tratamentos com óleo essencial e extrato etanólico. A melhor resposta foi obtida com o óleo essencial de A. zerumbet que, na concentração de 100 mg.mL-1 proporcionou inibição total do crescimento bacteriano. Esses resultados sugerem o potencial antibacteriano do óleo essencial e do extrato etanólico de A. zerumbet no controle da mastite bovina.

Mestrado em Bioquímica Clínica Os flavonoides são um grupo extenso de compostos naturais presentes na Natureza, em particular nas plantas. Este tipo de compostos já demonstraram em várias instâncias possuir atividades biológicas muito diversas, desde atividade antioxidante, anticancerígena e até antibacteriana. Dos compostos pertencentes a esta família e que apresentam atividade antibacteriana destacam-se as flavonas. Na literatura, estão descritos vários mecanismos através dos quais elas exercem a sua capacidade bactericida. Para além disso, estas apresentam também a capacidade de atenuar a patogenicidade de várias bactérias. Face ao crescente número de espécies bacterianas resistentes a antibióticos, às potencialidades do núcleo de flavona e à reconhecida importância da presença de um anel β-lactâmico idealizou-se a síntese de flavonas contendo um anel β-lactâmico como substituinte e a avaliação da sua atividade antibacteriana. Assim sendo o trabalho descrito nesta dissertação envolve num primeiro passo a síntese de 2’-hidroxinitrocalconas através de uma reação de condensação aldólica entre 2’-hidroxiacetofenonas e benzaldeídos convenientemente substituídos. Estas são em seguida sujeitas a uma reação de ciclodesidrogenação, catalisada por iodo, originando as respetivas nitroflavonas, que por redução do grupo nitro originam as aminoflavonas. As aminoflavonas foram usadas como substratos em diversos estudos de reações de Reformatsky, com o objetivo de sintetizar os derivados contendo o anel β-lactâmico. Os compostos sintetizados foram todos caracterizados por espectroscopia de ressonância magnética nuclear (RMN) mono (RMN de 1H e 13C) e bidimensional (HSQC e HMBC). Em seguida descrevem-se os resultados obtidos na avaliação da atividade antibacteriana de derivados de flavona e 2’-hidroxicalcona. Os resultados mostram que alguns derivados apresentam atividade antibacteriana, como sejam os casos da 2’-hidroxi-3’-nitrocalcona (MIC = 64 μg/mL), da 4- amino-2’-hidroxicalcona (MIC = 16 μg/mL), da 8-aminoflavona (MIC = 32 μg/mL) e da 8-nitroflavona (MIC = 8 μg/mL). No final são apresentadas as conclusões gerais e apresentadas propostas para trabalhos futuros. Flavonoids are an extensive group of natural compounds present throughout nature, particularly in plants. This type of compounds revealed in several instances to have very different biological activities that range from antioxidant, anticancer and antibacterial activity. From the compounds belonging to this family that showed antibacterial activity, flavones can be highlighted. In the literature, there are described several mechanisms by which they exert their bactericidal capacity. In addition, they also have the capacity to attenuate the pathogenicity of several bacteria. The growing number of bacterial species resistant to antibiotics, the potential of the flavone nucleus and the recognised role of the β-lactam ring in antibiotics, prompted us to synthesize flavones containing a β-lactam ring and evaluate their antibacterial activity. Therefore the work described in this dissertation reports the synthesis of 2’- hydroxynitrochalcones through an aldol condensation of 2’-hydroxyacetophenones with benzaldehydes. These 2’-hydroxychalcones are then subjected to a ciclodehydrogenation, catalysed by iodine, giving the respective nitroflavones that will be further transformed into aminoflavones through reduction of the nitro group. The aminoflavones were used in several studies involving Reformatsky reaction conditions, aiming the synthesis of flavones with a β-lactam ring. All synthesized compounds were characterised using mono (1H and 13C) and bidimensional (HSQC and HMBC) nuclear magnetic resonance (NMR) spectroscopy. Next the antibacterial evaluations are described emphasizing the good activity showed be several compounds such as 2’-hydroxy-3’-nitro-chalcone (MIC = 64 μg/mL), 4-amino-2’-hydroxychalcone ( MIC = 16 μg/mL), 8-aminoflavone (MIC = 36 μg/mL) and 8-nitroflavone (MIC = 8 μg/mL). At the end of this dissertation some conclusions of this work and future perspectives will be presented.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais Neste trabalho foi avaliada a influência da composição do chorume na eficiência de mineralização da matéria orgânica pelo processo foto-Fenton. Primeiramente foram avaliados processos de coagulação-floculação, sendo comparado o uso de dois coagulantes (FeCl3 e Al2(SO4)3) e determinada a melhor concentração do íon em pH 3, monitorando-se a remoção da cor, turbidez e carbono orgânico dissolvido. A concentração de 240 mg L-1 de Fe3+ foi escolhida como ótima, sendo obtido 60% e 80% de remoção de cor e turbidez, respectivamente. Por outro lado, houve apenas 11% de remoção de carbono orgânico dissolvido. Assim, foi necessário o acoplamento com outro processo para mineralização da matéria orgânica. Neste contexto, o processo foto-Fenton foi aplicado isoladamente ou combinado ao processo de coagulação-floculação, visando a mineralização da matéria orgânica. A influência da concentração de Fe2+ (50, 100 e 200 mg L-1) foi avaliada durante a mineralização da matéria orgânica pelo processo foto-Fenton isolado, sendo determinada como melhor condição 100 mg L-1 de Fe2+. Posteriormente, foi avaliada a influência da composição da matriz (turbidez e cor, bem como a presença dos íons inorgânicos cloreto e sulfato) sobre a eficiência de mineralização pelo processo foto-Fenton. Foi observado que a composição não reduz a eficiência de mineralização, mas influencia significativamente o tempo de reação e consumo de H2O2. Assim, o melhor protocolo é o tratamento de coagulação-floculação (remoção de cor e turbidez) antes da aplicação do processo foto-Fenton para a mineralização da matéria orgânica, desde que a mesma eficiência de mineralização (73 ± 3%) foi obtida consumindo apenas 17% do tempo e 7% do H2O2 para o tratamento do lixiviado bruto. Além disso, foram feitos experimentos avaliando diferentes processos (UV, H2O2/UV, Fe3+/UV, Fe2+/UV, Fe3+/H2O2, Fe2+/H2O2, Fe3+/H2O2/UV, Fe2+/H2O2/UV e TiO2/UV) e fontes de radiação (lâmpada germicida - UVC e lâmpada de luz negra - UVA), ambas com potência de 8W, na degradação do antibiótico ciprofloxacino. Foi observado que a degradação de ciprofloxacino foi fortemente influenciada pela fonte de radiação e pH utilizado. Dentre os processos avaliados, a fotocatálise heterogênea (TiO2/UVA ou UVC) e o processo foto-Fenton (Fe2+/H2O2/UVA ou Fe2+/H2O2/UVC) apresentaram os melhores resultados de degradação de ciprofloxacino, uma vez que sua concentração ficou abaixo do limite de quantificação do equipamento ( 0,12 mg L-1) após 10 min de tratamento. Somado a isso, durante a degradação de ciprofloxacino pelo processo Fe3+/H2O2/UVA foram identificados por LC-QTOF-MS/MS, três produtos de transformação, sendo um deles ainda não descrito na literatura. Finalmente, foi observado que os processos Fe2+/H2O2/UVC e TiO2/UVC foram os mais eficientes em relação a atividade antibacteriana contra Escherichia coli e Staphylococcus aureus, respectivamente. In this work the influence of the landfill leachate composition on the mineralization of the organic matter by photo-Fenton process was evaluated. Firstly, the coagulation-flocculation processes were evaluated, being compared the use of two coagulant (FeCl3 and Al2(SO4)3) and determined the better concentration of coagulant ion at pH 3, by monitoring of the removal of color, turbidity and dissolved organic carbon. The concentration of 240 mg L-1 Fe3+ was choosing as the best condition, and 60% and 80% of color and turbidity removal were reached, respectively. On the other hand, only 11% of dissolved organic carbon removal was obtained. So, is required a coupling with a second treatment aiming the mineralization. In this context, the photo-Fenton was applied as a treatment isolated or integrated to the coagulation-flocculation processes, aiming the mineralization of the organic matter. The influence of Fe2+ concentration (50, 100 and 200 mg L-1) on the efficiency of mineralization by isolated photo-Fenton process was evaluated, being determined 100 mg L-1 Fe2+ as the best condition. After, the role of the composition of sanitary landfill leachate on the mineralization by photo-Fenton process was evaluated. The composition of the matrix (turbidity and color, as well as presence of inorganic ions sulfate and chloride) does not reduce the efficiency of mineralization by photo-Fenton reactions, but influences significantly the reaction time and consumption of H2O2. Therefore, the best protocol is the pre-treatment of this effluent by coagulation-flocculation (removal of color and turbidity) before the photo-Fenton, since a similar efficiency of mineralization (73 ± 3%) was achieved using only 17% of the time and 7% of H2O2 necessary to the treatment of raw leachate treatment. In addition, experiments were carried out evaluating different processes (UV, H2O2/UV, Fe3+/UV, Fe2+/UV, Fe3+/H2O2, Fe2+/H2O2, Fe3+/H2O2/UV, Fe2+/H2O2/ UV and TiO2/UV) and different radiation sources of the same power – 8W (germicidal lamp - UVC and black light lamp - UVA), in the degradation of the antibiotic ciprofloxacin. It was observed that the ciprofloxacin degradation was strongly influenced by the radiation source and pH used. Among the processes evaluated, the heterogeneous photocatalysis (TiO2/UVA or UVC) and photo-Fenton process (Fe2 +/H2O2/UVC or Fe2 +/H2O2/UVA) showed the best results of ciprofloxacin degradation, since its concentration was below the quantification limit of equipment (0.12 mg L-1) after 10 min of treatment. Added to this, during the ciprofloxacin degradation by Fe3+/H2O2/UV were identified by LC-QTOF-MS/MS, three transformation products, one of them not yet reported in the literature. Finally, it was observed that the Fe2+/H2O2/TiO2 and TiO2/UVC were the most effective for antibacterial activity against Escherichia coli and Staphylococcus aureus, respectively. Dissertação (Mestrado)

As plantas vêm sendo utilizadas pela população para várias finalidades, porém muitas não têm ação comprovada. Desta forma, pesquisas que buscam identificar produtos naturais com atividade biológica representam uma alternativa para tratamento de doenças, entre elas infecções bacterianas. O uso de fitoterápicos tem sido uma opção terapêutica dos profissionais de saúde que procuram novas alternativas com potencial atividade farmacológica, menor toxicidade e menores custos a população. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antibacteriana e antibiofilme de treze óleos essenciais (canela, cravo, orégano, tomilho, laranja, lima, tangerina, eucalipto, hortelã, noz moscada, alecrim, gengibre e melaleuca) puros e incorporados a cremes dentais frente a bactérias causadoras de patologias na cavidade oral. Foram utilizadas cepas de Staphylococcus aureus ATCC 25923, Streptococcus mutans ATCC 25175, Lactobacillus sp. e Enterococcus sp. Inicialmente foi realizado o teste de difusão em ágar e apenas os óleos de C. zeylanicum (canela), E. caryophyllata (cravo), O. vulgare (orégano) e T. vulgaris (tomilho) apresentaram atividade antibacteriana. O teste de concentração inibitória mínima (CIM) foi realizado com os óleos essenciais ativos sendo observada uma potente atividade do óleo de C. zeylanicum contra a bactéria S. mutans (0,156 mg/mL). A seguir, os óleos essenciais foram testados para verificar a atividade antibiofilme tendo o óleo de E. caryophyllata apresentado atividade contra o biofilme de S. mutans de 39% a 44%, os quatro óleos ativos inibindo o biofilme de S. aureus de 92% a 95% e o óleo de O. vulgare apresentado atividade contra o biofilme de Enterococcus sp. de 43% a 60%. Posteriormente os óleos ativos foram incorporados a cremes dentais nas concentrações de 3% e 5%, puros e em associações, totalizando 18 cremes dentais fitoterápicos. O teste de difusão em ágar foi utilizado para verificar a atividade antibacteriana dos cremes dentais sendo observadas atividades significativas nas duas concentrações utilizadas. Os cremes dentais também foram submetidos ao teste de inibição do biofilme pré-formado, sendo verificado que para a bactéria S. mutans a associação dos quatro óleos essenciais inibiu 100% do biofilme. Para S. aureus 12 dos 18 cremes dentais inibiram em mais de 50% do seu biofilme e para Enterococcus sp. todos os cremes dentais obtiveram mais de 45% de ação. No presente estudo também foi observado o sinergismo entre a clorexidina e o óleo essencial de T. vulgaris para bactéria S. mutans. Os óleos ativos foram submetidos a cromatografia gasosa acoplada a espectrômetro de massa para elucidação dos componentes majoritários. Assim, os óleos essenciais de canela, cravo, tomilho e orégano e os cremes dentais fitoterápicos utilizados no presente estudo apresentaram atividade antibacteriana e antibiofilme contra bactérias cariogênicas, sendo, portanto, uma alternativa para a prevenção e terapia das doenças da cavidade oral. Plants have been used throughout human history for various therapeutic purposes. However, for many of these plants, the supposed medicinal activities have not been proven. Thus, studies toward the identification of bioactive plant metabolites constitutes a promising alternative for the treatment of diseases, including bacterial infections. Due to the potential pharmacological activities, low toxicity, and lower costs, herbal medicines have been used by health professional as an alternative to synthetic drugs. The objective of the present work was to evaluate the antibacterial and biofilm inhibition activities of thirteen essential oils (cinnamon, cloves, oregano, thyme, orange, lime, tangerine, eucalyptus, mint, nutmeg, rosemary, ginger, and melaleuca), both in pure forms and incorporated into toothpastes, against bacteria causative of pathologies of oral cavity. Staphylococcus aureus ATCC 25923 Streptococcus mutans ATCC 25175, Lactobacillus sp. and Enterococcus sp. Were used in this study. In the preliminary investigations, results from agar diffusion tests showed that only C. zeylanicum (cinnamon), E. caryophyllata (clove), O. vulgare (oregano), and T. vulgaris (thyme) showed antibacterial activity. These oils were tested to determine their miminal inhibitory concentration (MIC), and a pontent antibacterial activity was observed for C. zeylanicum against S. mutans (0.156 mg/mL). Following, the essential oils were tested for their biofilm inhibition activities. E. caryophyllata oil inhibited S. mutans biofilm from 39% ato 44%. The four active oils inhibited S. aureus biofilm from 92% to 95%, and O. vulgare oil inhibited Enterococcus sp. biofilm from 43% to 60%. Following, the active essential oils were incorporated in toothpastes at concentrations of 3% and 5%, pures and in associations, totalizing 18 herbal toothpastes. All these toothpastes showed significant activities at both concentrations tested. Toothpaste containing association of the four active oils inhibited by 100% the formation of biofilm by S. mutans. Twelve of the eighteen toothpastes were capable of inhibiting Enterococcus sp. biofilm in 50 %, and all formulations showed more than 45% of inhibition. In these studies, a synergistic action between chlorexidine and T. vulgaris against S. mutans was observed. Finally, the active oils were analysed by gas Chromatography-Mass spectrometry and their major chemical constituents were identified. In conclusion, the essential oils of cinnamon, cloves, thyme, and oregano, as well as the herbal toothpastes containing these essential oils, showed antibacterial activities against cariogenic bacteria, indicating their potential as alternative to treatment and prevention of diseases of oral cavity.

RESUMO Campomanesia adamantium é muito utilizada na medicina popular no tratamento de hipertensão, reumatismo e diabetes. Objetivou-se com o presente trabalho avaliar o rendimento, a composição química, e as atividades antimicrobiana e antioxidante do óleo essencial de folhas de C. adamantium submetidas a diferentes métodos e tempos de secagem. O delineamento utilizado foi inteiramente casualizado, com oito tratamentos e três repetições. O óleo essencial foi extraído por hidrodestilação das folhas e analisado por CG-EM. O tipo de secagem das folhas de C. adamantium influenciou no teor e na composição química do óleo essencial. Os constituintes espatulenol, óxido cariofileno e germacreno-B apresentaram maior concentração na maioria das procedências avaliadas. O óleo essencial das folhas de C. adamantium apresentou moderada atividade antibacteriana em relação a todos os micro-organismos testados. A atividade antioxidante se deu empregando-se o método de redução do radical estável DPPH, sendo observada fraca atividade antioxidante por meio do ensaio utilizado. ABSTRACT C. adamantiumis widely used in popular medicine for thetreatment of hypertension, rheumatism and diabetes. This study looked to evaluate the essential oil yield, the chemical composition and the antimicrobial and antioxidant activities of the essential oil from leaves of C. adamantium. A completely randomized design was used with eight treatments and three replications. The essential oil obtained by hydrodestillation of the leaves was analyzed by GC-MS. The results show that the drying type and the processing of the leaf influence the content and chemical composition of the essential oil. The compounds spathulenol, caryophyllene oxide and germacrene-B have higher concentrationsin mostorigins. The essentialoil from theleaves of C.adamantiumshowed moderate bacterial activityagainst all tested microorganisms. The antioxidant activity was determined by the methods of reduction of the DPPH stable radical. The antioxidant activity was weak in the test used.

Se evaluó la composición química y la actividad antibacteriana del aceite esencial Minthostachys mollis cultivado en el departamento de Norte de Santander, Colombia.El aceite esencial fue obtenido por hidrodestilación convencional, a partir de las hojas; se determinó densidad relativa a 20°C, índice de refracción; solubilidad de los aceites esenciales en etanol (70% v/v) y rotación óptica. La composición química se evaluó mediante cromatografía de gases/espectrómetro de masa. La actividad se realizó sobre tres bacterias: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 y Escherichia coli ATCC 25922. Para determinar la sensibilidad antibacteriana y la concentración mínima inhibitoria, los aceites se diluyeron hasta la concentración deseada (1000-50 µg/mL) empleando el método de microdilución en caldo, y se empleó el lector de microplacas para la cuantificación del crecimiento bacteriano. El rendimiento fue de 0,6%. Los resultados de la prueba de sensibilidad mostraron que las bacterias fueron sensibles al aceite esencial de Minthostachys mollis; además, este aceite presentó un elevado contenido de monoterpenos oxigenados con reconocida actividad antibacteriana, como son el carvacrol y el timol. En función de los resultados obtenidos, concluimos que la especie vegetal evaluada es promisoria para el control del componente bacteriano. The chemical composition and antibacterial activity of essential oil from Minthostachys mollis were evaluated; the plants were grown in the Norte de Santander department, Colombia. The essential oil was obtained by conventional hydrodistillation from Minthostachys mollis leaves; relative density was determined at 20°C, as were the refraction index, essential oil solubility in ethanol (70% v/v) and optical rotation. Chemical composition was evaluated by gas chromatography/mass spectrometry (GC-MS). Three bacteria were used for evaluating antibacterial activity: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 and Escherichia coli ATCC 25922. The oil was diluted to the desired concentration (1,000-50 µg/mL) for determining antibacterial sensitivity and minimum inhibitory concentration, using the broth microdilution method, and a microplate reader was used for quantifying bacterial growth. Yield was 0.6%. Sensitivity test results revealed that bacteria were sensitive to essential oil from Minthostachys mollis; furthermore, this oil had a high content of oxygenated monoterpenes (i.e. carvacrol and thymol) having recognised antibacterial activity. It can thus be concluded that the vegetal species evaluated here is promising for controlling bacteria. Avaliou-se a composição química e atividade antibacteriana do óleo essencial Minthostachys mollis cultivada no departamento de Norte de Santander, Colômbia. O óleo essencial foi obtido por destilação convencional das folhas; determinada densidade relativa a 20°C, índice de refração; solubilidade de óleos essenciais em álcool etílico (70% v/v) e rotação óptica. A composição química foi avaliada utilizando o espectrômetro de massa/cromatógrafo. O evento foi realizado para três bactérias: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 e Escherichia coli ATCC 25922. Para determinar a sensibilidade antibacteriana e a concentração inibitória mínima, óleos são diluídos para a concentração desejada (1000-50 µg/mL), utilizando o método de microdiluição em caldo, e usado o leitor de microplacas para a quantificação do crescimento bacteriano. O rendimento foi de 0,6%. Os resultados do teste de sensibilidade mostraram que as bactérias foram sensíveis para o óleo essencial de Minthostachys mollis; Além disso, este óleo apresenta um alto teor de monoterpenos, oxigenados com atividade antibacteriana conhecida, tais como o carvacrol e timol. Dependendo dos resultados, podemos concluir que as espécies de plantas avaliadas é promissora para o controle do componente bacteriano.

RESUMO O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito antibacteriano e tripanocida in vitro do extrato hidroalcóolico das raízes de Tradescantia sillamontana Matuda (Commelinaceae), conhecida popularmente como veludo branco. Foi avaliada a atividade antibacteriana in vitro frente às bactérias Streptococcus mitis (CIM = 100 µg/mL; CMB = 150 µg/mL), Streptococcus mutans (CIM = 200 µg/mL; CMB = 220 µg/mL), Streptococcus sanguinis (CIM = 400 µg/mL; CMB = 425 µg/mL), Streptococcus sobrinus (CIM = 400 µg/mL; CMB = 420 µg/mL) e Bacteroides fragilis (CIM = 400 µg/mL; CMB = 430 µg/mL) pelo método de diluição em caldo. Os protozoários da família tripanossomatídeo causam doenças tropicais que costumam ser negligenciadas que costumam ser como a tripanossomíase, para a qual estão disponíveis poucos medicamentos. Neste contexto, o extrato hidroalcóolico das raízes de T. sillamontana também foi avaliado frente às formas tripomastigotas da cepa Y de Trypanosoma cruzi, com promissora atividade frente a este protozoário (IC50 = 2,4 µg/mL). Quando avaliada a atividade citotóxica frente a fibroblastos da linhagem LLCMK2, o extrato apresentou moderada citotoxicidade (CC50 = 480,37 µg/mL). Os resultados ora apresentados para o extrato hidroalcóolico das raízes de Tradescantia sillamontana Matuda demonstraram promissoras atividades antibacteriana e tripanocida, sendo uma fonte alternativa de produtos naturais com atividades contra T. cruzi e algumas bactérias do gênero Streptococcus e Bacteroides. ABSTRACT The aim of this study was to investigate the in vitro, antibacterial and trypanocidal effect of the hydroalcoholic extract from the roots of Tradescantia sillamontana Matuda (Commelinaceae), commonly known as Veludo branco. The in vitro antibacterial activity against the standard bacteria Streptococcus mitis (MIC = 100µg/mL; MBC = 150 µg/mL), Streptococcus mutans (MIC = 200µg/mL; MBC = 220 µg/mL), Streptococcus sanguinis (MIC = 400µg/mL; MBC = 425 µg/mL), Streptococcus sobrinus (MIC = 400µg/mL; MBC = 420 µg/mL) andBacteroides fragilis (MIC = 400µg/mL; MBC = 430 µg/mL), using microdilution broth methods. Protozoans from the trypanosomatid family cause neglected tropical diseases such as trypanosomiasis, for which few drugs are available. In this context, the hydroalcoholic extract of the Tradescantia sillamontana roots was also investigated with regards to the in vitro effects against the trypomastigote forms of theY strain of Trypanosoma cruzi, showing strong activity against this parasite (IC50 = 2.4 µg/mL). When performing cytotoxic activity against fibroblasts LLCMK2 line, the extract showed moderate cytotoxicity (CC50 = 480.37 mg/mL). The results presented for the hydroalcoholic extract of the roots of Tradescantia sillamontana Matuda demonstrated effective antibacterial and trypanocidal activities and were shown to be an alternative source of natural products with activity against T. cruzi and some bacteria of the genus Streptococcus and Bacteroides.

Resumo Objetivou-se avaliar a atividade antibacteriana in vitro da própolis marrom, por meio da determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM). O extrato alcoólico de própolis foi obtido de 35 g de própolis bruta macerada em 65 mL de álcool de cereais. As concentrações do extrato de própolis usadas foram: 75mg/mL; 56,4mg/mL; 37,5mg/mL; 18,9mg/mL; 9,3mg/mL; 4,5mg/mL e 2,25mg/mL. Foram utilizados 32 isolados de bactérias Gram-positivas: Rhodococcus equi, Staphylococcus aureus, Staphylococcus hyicus, Staphylococcus spp. e Streptococcus spp., e 32 isolados de bactérias Gram-negativas: Enterobacter agglomerans, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Klebsiella sp., Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas spp., Salmonella spp. e Serratia rubidaea, provenientes de processos clínicos infecciosos de animais domésticos, obtidas e armazenadas no Laboratório de Bacteriologia da FAMEZ/UFMS. O extrato de própolis marrom apresentou atividade antimicrobiana com CIM variando de 2,25 a 18,9mg/mL para as bactérias Gram-positivas e 4,5 a 18,9mg/mL para as bactérias Gram-negativas, sendo as bactérias provenientes de bovinos e caninos as mais resistentes. Conclui-se que a própolis marrom tem ação bactericida, em função da espécie da bactéria e da procedência animal. Abstract The aim of this study was to evaluate the in vitro antibacterial activity of brown propolis, by determining the minimum inhibitory concentration (MIC). The alcoholic extract of propolis was obtained from 35g of crude propolis macerated in 65mL of cereals alcohol. Dilutions of propolis extracts used were: 75mg/mL; 56.4mg/mL; 37.5mg/mL; 18.9mg/mL; 9.3mg/mL; 4.5mg/mL, and 2.25mg/mL. Thirty-two Gram-positive bacteria isolates were used: Rhodococcus equi, Staphylococcus aureus, Staphylococcus hyicus, Staphylococcus spp. and Streptococcus spp.; and the thirty-two Gram-negative bacteria isolated were: Enterobacter agglomerans, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Klebsiella sp., Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas sp., Salmonella sp., and Serratia rubidaea, obtained from infectious clinical processes of domestic animals, and stored in the Laboratory of Bacteriology of FAMEZ/UFMS. The brown propolis extract showed antibacterial activity with MIC ranging from 2.25 to 18.9mg/ml for Gram-positive bacteria and 4.5 to 18.9mg/ml for Gram-negative bacteria, and bacteria from cattle and dogs were more resistant. It was concluded that brown propolis has antibacterial action, but the effect depends on the species of the bacterium and its origin.

Submitted by Gabriela Lopes (gmachadolopesufpel@gmail.com) on 2017-03-14T15:14:14Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação Mariana Dias Antunes.pdf: 1431622 bytes, checksum: 9905ccf2b784bdcc91d69fa8ef93c413 (MD5) Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-03-17T21:29:49Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação Mariana Dias Antunes.pdf: 1431622 bytes, checksum: 9905ccf2b784bdcc91d69fa8ef93c413 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Made available in DSpace on 2017-03-17T21:29:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação Mariana Dias Antunes.pdf: 1431622 bytes, checksum: 9905ccf2b784bdcc91d69fa8ef93c413 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-12-20 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES O controle microbiano é uma preocupação constante na indústria de embalagens para alimentos. As embalagens ativas são capazes de inibir o crescimento microbiano nos alimentos. Além disso, o uso de polímeros biodegradáveis tem sido amplamente estudado. A zeína é um polímero biodegradável que possui um grande potencial na indústria de embalagens, podendo encapsular compostos bioativos em sua matriz polimérica. Os óleos essenciais (OE) são compostos bioativos de ocorrência natural decorrente do metabolismo secundário de algumas plantas e têm sido estudado como agentes antimicrobianos em embalagens ativas. No entanto, torna-se necessário a complexação com alguma molécula a fim de reduzir algumas características indesejáveis, como a alta volatilidade. As ciclodextrinas são moléculas em forma de cone capazes de acomodar no seu interior moléculas apolares, como os óleos essenciais. Uma tecnologia eficaz capaz de incorporar compostos bioativos em nanomateriais, é a técnica de electrospinning. Com isso, o objetivo desse estudo foi produzir fibras ultrafinas de zeína incorporando um complexo de inclusão (CI) entre β-Ciclodextrina (β-CD) e óleo essencial de eucalipto (Eucalyptus citriodora) (OEE) através da técnica de electrospinning a fim de se obter membranas antimicrobianas como embalagens ativas para alimentos. O OEE foi caracterizado quanto a composição química e atividade antimicrobiana contra 7 bactérias de importância em alimentos. O CI foi avaliado quanto aos grupos funcionais, morfologia e propriedades térmicas. As soluções poliméricas de zeína pura, em diferentes concentrações, foram avaliadas quanto a viscosidade aparente e condutividade elétrica e as membranas resultantes após o processo de electrospinning foram avaliadas quanto a morfologia e distribuição de diâmetro. As soluções de zeína 30% (p/v) foram adicionadas de CI nas concentrações de 6, 12, 18 e 24% (p/v), sendo estas caracterizadas quanto a viscosidade aparente e condutividade elétrica. Após o processo de electrospinning das soluções com CI, estas membranas foram avaliadas quanto a morfologia e distribuição de diâmetro, propriedades térmicas, grupos funcionais e atividade antimicrobiana em microatmosfera contra S. aureus e L. monocytogenes. Os resultados indicaram atividade antimicrobiana do OEE contra as bactérias testadas. Através da análise dos grupos funcionais e da morfologia, pode-se observar uma efetiva complexação do OEE e da β-CD. As fibras obtidas com 30% (p/v) de zeína na solução polimérica apresentaram melhores características morfológicas. Todas as membranas formadas com CI reduziram o crescimento microbiano de S. aureus e L. monocytogenes. A concentração de 24% (p/v) de CI foi a que se obteve maior percentual de redução de crescimento, em micro-atmosfera, com 24,3% e 28,5% para S. aureus e L. monocytogenes, respectivamente. As membranas antimicrobianas apresentaram características para possível aplicação como embalagens ativas para alimentos. Microbial control is a constant concern in the food packaging industry. Active packaging is capable of inhibiting microbial growth in food. In addition, the use of biodegradable polymers has been extensively studied. Zein is a biodegradable polymer that has great potential in the packaging industry and can encapsulate bioactive compounds in its polymer matrix. Essential oils (EO) are naturally occurring bioactive compounds due to the secondary metabolism of some plants and have been studied as antimicrobial agents in active packaging. However, complexation with some molecule is necessary in order to reduce some undesirable characteristics, such as high volatility. Cyclodextrins are cone-shaped molecules capable of accommodating apolar molecules such as essential oils. An effective technology capable of incorporating bioactive compounds into nanomaterials is the electrospinning technique. The objective of this study was to produce ultrafine zein fibers by incorporating an inclusion complex (IC) between β-Cyclodextrin (β-CD) and eucalyptus essential oil (EO) through the electrospinning technique in order to Antimicrobial membranes as active food packaging. The EEO was characterized by the chemical composition and antimicrobial activity against 7 bacteria of importance in food. CI was evaluated for functional groups, morphology and thermal properties. Polymer solutions of pure zein at different concentrations were evaluated for apparent viscosity and electrical conductivity and the resulting membranes after the electrospinning process were evaluated for morphology and diameter distribution. The 30% (w/v) zein solutions were added with IC at concentrations of 6, 12, 18 and 24% (w/v), which were characterized for apparent viscosity and electrical conductivity. After the electrospinning process of IC solutions, these membranes were evaluated for morphology and diameter distribution, thermal properties, functional groups and micro-atmosphere antimicrobial activity against S. aureus and L. monocytogenes. The results indicated antimicrobial activity of EEO against all tested bacteria. Through the analysis of functional groups and morphology, an effective complexation of EEO and β-CD can be observed. The fibers obtained with 30% (w/v) zein in the polymer solution showed better morphological characteristics. All membranes formed with IC reduced the microbial growth of S. aureus and L. monocytogenes. The concentration of 24% (w/v) IC was obtained with the highest percentage of growth reduction in micro-atmosphere, with 24.3% and 28.5% for S. aureus and L. monocytogenes, respectively. The antimicrobial membranes showed characteristics for possible application as active food packaging.

Made available in DSpace on 2016-08-15T20:31:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JardelBS_DISSERT.pdf: 1487162 bytes, checksum: 3c112dba9883bc8ce9ed34012482ca23 (MD5) Previous issue date: 2016-02-18 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior The study aimed to evaluate the geopropolis bees Plebeia aff. flavocincta produced in Rio Grande Norte- Brazil, through the study of pharmacological activities, sensory characteristics and physical and chemical requirements. Investigated the antioxidant activity by the DPPH (2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl), antibacterial, through the method of diffusion in agar and healing activity, by inducing experimental surgical wounds Rattus norvegicus in Berkenhout, 1769 Wistar. Quantified if the contents of total phenols and flavonoids through the Waterman and Mole methods, Woisky and Salatino, respectively. Samples of geopropolis showed consistency between the soft sticky resinous hard and hydroalcoholic extracts of geopropolis we identified 06 different types of scent, amber color, dark brown, green and colorless. The taste ranged from bitter to sweet and strong characteristic. All samples of the extracts showed up with liquid aspect, clear and smooth. The total phenolic content varied between 0,00 ± 0,00 and 9,4 ± 0,28% (m/m), the total flavonoid content of 0,0005 ± 0,0220 and 0,00003 ± 0,00037% (m/m). The antioxidant capacity of over 90% was observed in 05 samples. The extracts were found to be effective with respect to antimicrobial activity because of the 08 samples tested, 05 promoted inhibition zones ≥9mm front of all the strains tested. In wound healing assay of the experimental group, the base cream 20% geopropolis P. aff. flavocincta decreased the signs of inflammation and stimulate collagen production, accelerating the process of re-epithelialization, with no statistically significant difference in the areas of the wounds from the 9th day and complete healing on the 16th day. It follows that the geopropolis P. aff. flavocincta produced in semiarid RN, can be used as an alternative and natural principle in antibacterial activities, antioxidant and healing, characterized by a source of phenolic compounds O estudo objetivou avaliar a geoprópolis de abelhas Plebeia aff. flavocincta produzida no Rio Grande do Norte-Brasil , através do estudo das atividades farmacológicas, características sensoriais e requisitos físico-químicos. Investigou-se a atividade antioxidante através do método DPPH (2,2-difenil-1-picril-hidrazilo), antibacteriana, através do método de difusão em ágar e atividades cicatrizantes, através da indução de feridas cirúrgicas experimentais em Rattus norvegicus Berkenhout, 1769, linhagem Wistar. Quantificou-se os teores de fenóis e flavonoides totais através dos métodos Waterman e Mole, Woisky e Salatino, respectivamente. As amostras de geoprópolis apresentaram consistência entre maleável pegajoso a rígido resinoso e nos extratos hidroalcoólicos de geoprópolis identificou-se 06 distintos tipos de aroma, coloração âmbar, marrom escuro, esverdeado e incolor. O sabor variou do amargo ao característico forte e adocicado. Todas as amostras dos extratos apresentaram-se com aspecto líquido, límpido e homogêneo. O teor de fenóis totais variou entre 0,00± 0,00 e 9,4± 0,28% (m/m), o teor de flavonoides totais 0,0005 ± 0,00003 e 0,0220 ± 0,00037% (m/m). A capacidade antioxidante acima de 90% foi observada em 05 amostras. Os extratos foram considerados eficazes no que tange a atividade antimicrobiana, pois das 08 amostras testadas, 05 promoveram halos de inibição ≥9mm frente todas às cepas testadas. No ensaio de cicatrização do grupo experimental, o creme base 20% de geoprópolis de P. aff. flavocincta diminuiu os sinais de inflamação e estimulou a produção de colágeno, acelerando o processo de re-epitelização, apresentando diferença estatística significativa nas áreas das feridas a partir do 9° dia e total cicatrização no 16° dia. Conclui-se que a geoprópolis da P. aff. flavocincta produzidas no semiárido do RN, pode ser usada como princípio alternativo e natural nas atividades antibacteriana, cicatrizante e antioxidante, caracterizando por ser fonte de compostos fenólicos

Submitted by Gabriela Lopes (gmachadolopesufpel@gmail.com) on 2016-10-04T17:58:34Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese Francine Manhago Bueno Costa.pdf: 2356986 bytes, checksum: 31813840aa88e1e4401af857389f7d04 (MD5) Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2016-10-11T20:36:21Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese Francine Manhago Bueno Costa.pdf: 2356986 bytes, checksum: 31813840aa88e1e4401af857389f7d04 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Made available in DSpace on 2016-10-11T20:36:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese Francine Manhago Bueno Costa.pdf: 2356986 bytes, checksum: 31813840aa88e1e4401af857389f7d04 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-02-15 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES A apicultura é uma atividade em crescente expansão econômica no país, pois está associada aos princípios que regem o atual mercado consumidor no qual se constata uma tendência que prevaleça o consumo de alimentos naturais. O mel é considerado o produto com maiores possibilidades de comercialização e de relevância econômica no mercado apícola do estado do Rio Grande do Sul, Brasil. Visando elucidar a qualidade do mel produzido no estado foram realizadas análises físico-químicas (umidade, sólidos solúveis, acidez, condutividade elétrica, coloração) de compostos bioativos (compostos fenólicos e carotenoides), da capacidade antioxidante in vitro(pelos métodos de DPPH e ABTS) e de atividade antibacteriana (CIM). Em conjunto a essas determinações foi proposto o estudo do perfil volátil (CG-MS) dos méis, com o objetivo de conferir especificidades que os caracterizassem quanto à origem botânica e geográfica. O conteúdo total de compostos fenólicos, flavonoides, ácidos fenólicos, carotenoides e as atividades antioxidantes (DPPH e ABTS) diferiram significativamente na maioria das amostras testadas, apresentando resultados entre 61,7 a 111,37mgEAG.100g -¹; 2,98 a 10,46mgEQ.100g-¹; 0 a 65,47mgEAC.100g-¹; 0,56 a 6,19mgβ-caroteno.Kg-¹; 2,48 a 17,21mgEAQ.100g¹; e de 8,24 a 112,48mgtrolox.100g-¹, respectivamente. Todas as amostras de méis apresentaram atividade antibacteriana frente às quatro bactérias testadas (Shiguella dysenteria, Salmonella typhimurium, Staphylococcus aureus e Bacillus cereus), com resultados de Concentração Inibitória Mínima (CIM) variando de 10 a 350mg.mL-¹ de água. As amostras apresentaram valores adequados de pH (3,85), condutividade elétrica (685µS.cm-¹) e conteúdo de hidroximetilfurfural (5,18mg.Kg-1) porém 42% dos méis apresentaram teores de umidade e ou conteúdo de acidez fora do limite preconizado pela legislação brasileira. Os flavonoides catequina, epicatequina e hesperitina foram os compostos fenólicos presentes em maior concentração nos méis. Por meio da determinação do perfil volátil foi possível identificar aromas característicos de cada região, metropolitana, nordeste, ocidental, sudeste e sudoeste. E ainda, sendo possível identificar a florada de eucalipto nas amostras M18 e M19, provenientes da região sudoeste do estado do RioGrande do Sul. Apiculture is an activity with substantial economic growth in Brazil as it is associated with the principles of a current market of notable consumption of natural foods. Honey is a product considered with higher trends possibility and with economy relevance in the apiculture market of the estate of Rio Grande do Sul in the south of Brazil. In order to highlight the quality of the honey produced in this state, it was performed some physical-chemical analysis (moisture, soluble solids, acidity, electrical conductivity, coloring) of bioactive compounds (phenolic compounds and carotenoids) of antioxidant capacity in vitro (by the methods of DPPH and ABTS) and antibacterial activity (MIC). Along with these results, it was proposed the volatile profile (CG-MS) in the honeys types with the purpose to check specific features related to its botanic and geographic source. The total content of phenolics, flavonoids, phenolic acids, carotenoids and antioxidant activity (DPPH and ABTS) differed significantly to the most of the samples tested presenting results between 61,7 and 111,37mgEAG.100g-¹; 2,98 and 10,46mgEQ.100g-¹; 0 and 65,47mgEAC.100g-¹; 0,56 and 6,19mgβ-carotene.kg-¹; 2,48 and 17,21mgEAQ.100g-¹;and from 8,24 to 112,48mgtrolox.100g-¹, respectively. All the honey samples have showed antibacterial activity if compared to the four bacteria tested ( Shiguella dysenteria, Salmonella typhimurium, Staphylococcus aureus and Babillus cereus) with results of Minimum Inhibitory Concentration (MIC) ranging from 10 to 350mg. mL-¹ of water. The results of the samples were suitable with regards to pH (3,85), electrical conductivity (685µS.cm-¹) and hydroxymethylfurfural content (5,18mg.kg-¹), however 42% of the honeys tested have showed moisture content and or acidity content out of the limits defined by Brazilian laws. The flavonoids catechin, epicatechin and hesperetin were the phenolic compounds presented with highest concentration in the honeys tested. Through the determination of volatile profile, it was possible to identify the typical aromas of each region such as urban, northeast, western, southeast and southwest. Furthermore, it was possible to identify the Eucalyptus honey in the samples M18 and M19 that came from southwest of Rio Grande do Sul state.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Incipient carious lesions manifested by white spots are frequently visualized around the orthodontic brackets. Further to possible progression of these lesions to cavities, a reduction on the bond strength of the bracket to the tooth enamel might occur due to mineral loss. Adhesive systems containing monomers that inhibits the bacteria adhesion or activity have been developed to help at caries control around of brackets. This study evaluated the caries inhibition and shear bond strength reached by addition of antibacterial monomer 2-(Methacryloyloxy)ethyl]trimethylammonium chloride (MADQUAT) to adhesive used to cement orthodontic brackets when submitted to cariogenic challenge. Sound premolars were sectioned in halves and brackets are cemented to the buccal and lingual surfaces using experimental adhesives with 0 (control), 5 or 10% of MADQUAT. Half of the samples was subjected to cariogenic challenge using a microcosm biofilm model with intermittent exposure to sucrose for 6 hours per day during 5 days. Following, the samples were embedded in resin cylinders and brackets submitted to shear loading until the de-bonding. The mode failure was analyzed under optical microscopy. The tested samples were sectioned and the internal enamel hardness measured to calculate the integrated mineral loss (ΔS). Data of bond strength and ΔS were submitted to two-way ANOVA and Tukey test, while the chi-square test was used to assess the effect of factors on failure mode (α = 0.05). The adhesive containing 10% of MADQUAT significantly reduced the demineralization around the bracket, but also reached lowest bond strength values. No effect on the bond strength and ΔS was observed by addition of 5% MADQUAT to adhesive. The cariogenic challenge did not affect the bond strength and the failure mode, which was influenced only by the adhesive. It was concluded that the MADQUAT was only effective to reduce demineralization when added to the adhesive at a concentration of 10%, whereas this concentration also reduced the bond strength. Lesões cariosas incipientes, manifestadas por meio de manchas brancas, são comumente visualizadas ao redor dos bráquetes. Além destas lesões poderem progredir para cavidades, uma redução na resistência de união do bráquete ao esmalte dental pode ocorrer devido à perda mineral. Sistemas adesivos contendo monômeros que inibem a adesão ou atividade bacteriana têm sido desenvolvidos para auxiliar no controle de cárie ao redor dos bráquetes. Este estudo avaliou a inibição de cárie e a resistência de união alcançado pela adição do monômero antibacteriano [2 - (metacriloxi) etil] trimetil cloreto de amônio (MADQUAT) ao adesivo usado para colagem de bráquetes ortodônticos quando submetidos ao desafio cariogênico. Para isto, foram utilizados trinta pré-molares hígidos, seccionados ao meio. Bráquetes foram colados nas faces vestibular e lingual usando adesivos experimentais com 0% (controle), 5% ou 10% de MADQUAT. Metade das amostras foram submetidas ao desafio cariogênico em modelo de biofilme com microcosmos, com exposição intermitente a sacarose por 6 horas por dia, durante 5 dias. Em seguida, as amostras foram embutidas em cilindros de resina e os bráquetes submetidos ao carregamento de cisalhamento até ruptura. O padrão de falha foi analisado em microscopia óptica. As amostras ensaiadas foram seccionadas ao meio e a dureza interna do esmalte mensurada para calcular a perda mineral integrada (ΔS). Os dados de resistência de união e ΔS foram submetidos à ANOVA de duas vias e teste de Tukey, enquanto queo teste Qui-quadrado foi usado para avaliar o efeito dos fatores no padrão de falha (α = 0,05). O adesivo contendo 10% de MADQUAT reduziu significativamente a desmineralização ao redor do bráquete, porém alcançou menores valores de resistência de união. Nenhum efeito na resistência de união e na ΔS foi observado com a adição de 5% de MADQUAT ao adesivo. O desafio cariogênico não afetou a resistência de união e o padrão de falha, o qual foi influenciado pelo adesivo. Concluiu-se que o MADQUAT apenas foi eficaz na redução da desmineralização quando adicionado ao adesivo para uma concentração de 10%, mas esta concentração também reduziu a resistência de união.

Rutaceae is a family, mostly tropical and subtropical, comprising about 160 genera, including Metrodorea and Pilocarpus, having important medicinal and ecological properties. This family also requires attention for presenting a wide variety of secondary metabolites. This study aimed to expand the chemical and biological knowledge of the Rutaceae family by studying the species Metrodorea mollis Taub. and Pilocarpus spicatus subsp. aracatensis Kaastra. The aerial parts of the species were submitted to extraction processes, partitioning and isolation of their chemical constituents, which were then characterized by spectroscopic techniques of IR, MS and one- and two-dimensional 1H and 13C NMR, and compared to literature data. From the hexane extract of M. mollis were isolated the substances: xanthotoxin, isopimpinellin, hinokinin, savinin, lupeol and β-sitosterol. From the hexane phase of P. spicatus were identified: xanthotoxin, bergapten, imperatorin, asarinin, taraxerol acetate and brazoxido A, this last compound has been reported by the first time in the literature. The xanthotoxin and imperatorin coumarins were selected as chemical markers of P. spicatus and an analytical methodology was developed and validated to quantify by High Performance Liquid Chromatography (HPLC) the content of them in the Crude Ethanolic Extract (CEE) of P. spicatus. The proposed methodology showed to be selective, linear, accurate, precise and robust. Furthermore, it was investigated the evaluation of the antibacterial activity by the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and the drug resistance modulator in Staphylococcus aureus of P. spicatus CEE and isolated coumarins (bergapten, xanthotoxin, isopimpinellin, imperatorin). The CEE and coumarins presented no significant antibacterial activity. However, in the drug resistance modulation assay, the isopimpinellin reduced up to 4 times the MIC of erythromycin, and imperatorin showed the best results, with a MIC reduction of the antibiotics tetracycline (up to 2-fold), erythromycin (up to 4-fold) and norfloxacin (up to 4 times). By reducing the MIC of ethidium bromide, imperatorin is considered in fact as a putative inhibitor of the efflux system in bacteria. The results obtained in this study were promising and may encourage further research on the use of natural products. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Rutaceae é uma família, predominantemente tropical e subtropical, constituída por cerca de 160 gêneros, dentre eles os gêneros Metrodorea e Pilocarpus, que possuem importantes propriedades medicinais e ecológicas. Esta família também merece atenção por apresentar uma grande diversidade de metabólitos secundários. Diante disso, este trabalho teve como objetivo ampliar o conhecimento químico e biológico sobre a família Rutaceae através do estudo das espécies Metrodorea mollis Taub. e Pilocarpus spicatus subsp. aracatensis Kaastra. As partes aéreas das espécies em estudo foram submetidas a processos de extração, particionamento e isolamento dos seus constituintes químicos, que posteriormente foram caracterizados por técnicas espectroscópicas de IV, EM e RMN de 1H e 13C uni e bidimensionais, além de comparação com dados com a literatura. Do extrato hexânico de M. mollis foram isoladas as substâncias: xantotoxina, isopimpinelina, hinoquinina, savinina, lupeol e β-sitosterol. Da fase hexânica de P. spicatus foram identificadas: xantotoxina, bergapteno, imperatorina, asarinina, acetato de taraxerol e brazoxido A, sendo este último relatado pela primeira vez na literatura. As cumarinas xantotoxina e imperatorina foram selecionadas como marcadores químicos de P. spicatus e uma metodologia analítica foi desenvolvida e validada para quantificar, por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência, o teor das mesmas no Extrato Etanólico Bruto (EEB) de P. spicatus. A metodologia proposta mostrou-se seletiva, linear, exata, precisa e robusta. Além disso, foi realizada a avaliação da atividade antibacteriana através da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e moduladora da resistência a drogas em Staphylococcus aureus do EEB de P. spicatus e das cumarinas isoladas (bergapteno, xantotoxina, isopimpinelina, imperatorina). O EEB e as cumarinas não apresentaram atividade antibacteriana relevante. Entretanto, no ensaio da modulação da resistência a drogas, a isopimpinelina reduziu em até 4 vezes a CIM da eritromicina, e a imperatorina apresentou o melhor resultado, com redução da CIM dos antibióticos tetraciclina (até 2 vezes), eritromicina (até 4 vezes) e norfloxacino (até 4 vezes). Ao reduzir a CIM do brometo de etídio, a imperatorina é considerada de fato como inibidor putativo do sistema de efluxo em bactéria. Os resultados obtidos no presente estudo se mostraram promissores, podendo estimular futuras pesquisas sobre o uso de produtos naturais.

Allium sativum L., vulgarmente designado de alho, é muito utilizado desde a antiguidade, quer para fins alimentares quer para fins medicinais. No presente trabalho, estudaram-se amostras de alho-negro, que corresponde a bolbilhos (dentes) de A. sativum sujeitos a um processo de fermentação em estufa com controlo de humidade e temperatura, o qual provoca alterações organoléticas. Determinou-se a atividade antibacteriana das amostras de alho em isolados clínicos de Enterococcus faecalis (isolado de urina); Listeria monocytogenes (isolada de líquido cefalorraquidiano); Staphylococcus aureus resistente à meticilina, MRSA (isolado de expectoração); Staphylococcus aureus sensível à meticilina, MSSA (isolados de exsudado de ferida); Acinetobacter baumannii e Pseudomonas aeruginosa (isolados de expectoração), Escherichia coli e Klebsiella pneumoniae (isoladas de urina) provenientes do Centro Hospitalar de Trás-Os-Montes e Alto Douro (unidade de Vila Real). Os ensaios foram feitos utilizando o método da microdiluição para cálculo da concentração mínima inibitória (CMI) e bactericida (CMB). Observou-se ação antibacteriana contra todos os isolados clínicos testados, dos quais destacamos os melhores resultados de CMI para MSSA, MRSA, E. faecalis e L. monocytogenes. Relativamente aos Gram negativo, E. coli apresentou o melhor resultado de CMI seguida de P. aeruginosa. A. baumannii e K. pneumoniae apresentaram valores de CMI elevados. Relativamente à ação bactericida, o melhor valor de CMB foi obtido para MRSA e E. coli, seguido de MSSA, P. aeruginosa e A. baumannii. Em suma, verifica-se que o alho-negro, resultado da fermentação de bolbilhos de A. sativum, apresenta potencial antibacteriano, com uma maior eficácia contra bactérias Gram positivo, particularmente contra MRSA. Allium sativum L., commonly known as garlic, is largely used since antiquity for dietary purposes but also for its medicinal interest. The present study studies samples of black garlic which refers to bulbils (cloves) of A. sativum, submitted to a controlled humidity and temperature fermentation process in incubator that produces organoleptic alterations. The antibacterial activity of the garlic samples was determined in clinical isolates of Enterococcus faecalis (isolated from urine); Listeria monocytogenes (isolated from cerebrospinal fluid); methicillin resistant Staphylococcus aureus, MRSA (isolated from sputum); methicillin susceptible Staphylococcus aureus, MSSA (isolated from wound exudate); Acinetobacter baumannii and Pseudomonas aeruginosa (isolated from sputum); Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae (isolated from urine) from the Hospital Centre of Trás-Os-Montes and Alto Douro (unity of Vila Real). The tests were made using the microdilution method to calculate the minimal inhibitory concentration (MIC) and the minimal bactericidal concentration (MBC). It was observed antibacterial activity against all clinical isolates tested, of which we highlight the best MIC results against MSSA and MRSA followed by E. faecalis and L. monocytogenes. Regarding to Gram negative bacteria, E. coli presented the best MIC result followed by P. aeruginosa. A. baumannii and K. pneumoniae presented high MIC values. Regarding bactericidal action, the best value of MBC was obtained against MRSA and E. coli, followed by MSSA, P. aeruginosa and A. baumannii. Overall, it appears that the black garlic resulting from the fermentation of A. Sativum bulbils presents antibacterial potential, with better efficacy against Gram positive bacteria, particularly against MRSA. info:eu-repo/semantics/publishedVersion

RESUMO A cada dia, cepas bacterianas estão tornando-se resistentes a diversos antibióticos, o que faz necessária a busca de novas substâncias eficazes para o tratamento de doenças. Desta forma, este trabalho reporta o estudo preliminar toxicológico, antibacteriano e fitoquímico do extrato etanólico das folhas de Jatropha mollissima (pinhão-bravo, Euphorbiaceae), coletada no Município de Tauá, Ceará, Nordeste Brasileiro. Inicialmente, realizou-se o teste de toxicidade do extrato contra Artemia salina. Na sequencia, foi realizado o ensaio antibacteriano contra quatro cepas bacterianas Gram-negativas (Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Hafnia alvei ATCC 51873, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883) e uma cepa Gram-positiva (Enterococcus faecalis ATCC 29212). Finalmente, fez-se a análise fitoquímica preliminar do extrato ativo para detecção das principais classes de metabólitos especiais. Como resultado, o extrato etanólico das folhas de J. mollissima se mostrou tóxico para Artemia salina, pois apresentou CL50 igual a 406,02 μg/mL. Quanto à ação antibacteriana, o extrato se mostrou ativo contra a bactéria Gram-positiva Enterococcus faecalis ATCC 29212, apresentando moderada atividade antibacteriana (halo de inibição igual a 7,03 mm). Evidenciou-se no extrato bioativo a presença de cumarinas, fenóis, taninos, flavonoides (flavonóis e flavanonas), alcaloides e esteroides, ambas as classes reportadas como antimicrobianos. Portanto, esse extrato tem potencial para ser usado na produção de fármacos contra infecções causadas por bactérias Gram-positivas. No entanto, as informações direcionam estudos futuros para o isolamento e identificação dos compostos bioativos, monitorados sob a ação antibacteriana mais expressiva.

Data de aprova??o ausente. Disponibiliza??o do conte?do parcial, conforme Termo de Autoriza??o no trabalho. Submitted by Jos? Henrique Henrique (jose.neves@ufvjm.edu.br) on 2016-12-20T11:25:18Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) fabricio_oliveira_parcial.pdf: 460996 bytes, checksum: 830d7a19829ad0928872ba9504ea142a (MD5) Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2017-01-10T12:15:20Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) fabricio_oliveira_parcial.pdf: 460996 bytes, checksum: 830d7a19829ad0928872ba9504ea142a (MD5) Made available in DSpace on 2017-01-10T12:15:20Z (GMT). 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Assim, o pa?s necessita de maiores investimentos em pesquisas com plantas medicinais, especialmente quando se tratam de doen?as cujo arsenal terap?utico ? limitado e/ou apresenta restri??es como efic?cia e efeitos colaterais, como ? o caso do c?ncer, doen?as negligenciadas como a Doen?a de Chagas e as Leishmanioses e, doen?as infecciosas causadas por bact?rias. Desta forma, este estudo prop?e uma triagem de atividades biol?gicas de extratos etan?licos de 20 plantas do Cerrado. Foram avaliados 24 extratos etan?licos das plantas da regi?o de cerrado de Diamantina, Vale do Jequitinhonha, Minas Gerais: Agarista oleifolia (partes a?reas), Ageratum fastigiatum (partes a?reas), Byrsonima dealbata (partes a?reas), Byrsonima lancifolia (folhas e caule), Byrsonima verbascifolia (partes a?reas), Croton antisyphiliticus (caule), Gomphrena arborescens (partes a?reas), Gomphrena scapigera (partes a?reas), Gomphrena vaga (caule), Gomphrena virgata (ra?zes), Kielmeyera lathrophyton (folhas e caule), Kielmeyera rubriflora (partes a?reas), Lafoensia pacari (folhas e caule), Myrsine emarginella (folhas), Norantea adamantium (partes a?reas), Qualea dichotoma (partes a?reas), Salvertia convallariodora (folhas e caule), Schefflera macrocarpa (folhas), Vochysia elliptica (partes a?reas) e Zeyheria Montana (partes a?reas). Estes foram obtidos por meio de macera??o e secagem por rotaevapora??o. A toxicidade para c?lulas normais de mam?feros foi avaliada utilizando fibroblastos de camundongo, linhagem L929. A avalia??o das atividades antitripanossomat?deos foi realizada sobre formas promastigotas das cepas BH46 de Leishmania (leishmania) infantum, M2269 de Leishmania (leishmania) amazonensis e contra formas epimastigotas das cepas Y e Colombiana de Trypanosoma cruzi. A atividade antitumoral foi realizada sobre a linhagem MDA-MB-231. A avalia??o da toxicidade sobre as linhagens celulares foi realizada por meio da t?cnica colorim?trica de MTT. A atividade antibacteriana foi avaliada sobre as esp?cies Staphylococcus aureus, Salmonella typhimurium, Escherichia coli, Klebsiella oxytoca, Proteus mirabilis, Streptococcus agalactiae, Listeria monocytogenes e Pseudomonas aeruginosa por meio da t?cnica da resazurina. Na avalia??o in vitro da atividade biol?gica dos extratos etan?licos foi verificado que todos os extratos demonstraram alguma toxicidade sobre c?lulas normais de mam?feros da linhagem L929. Entre os extratos avaliados 22 apresentaram atividade antitumoral, sendo que o mais ativo foi o de Ageratum fastigiatum (partes a?reas). Atividade tripanocida foi verificada para sete extratos sobre a cepa Y e oito sobre a cepa Colombiana, sendo que dentre estes os extratos das partes a?reas de Ageratum fastigiatum e das partes a?reas Zeyheria montana foram os mais ativos sobre a cepa Colombiana de T. cruzi. Atividade leishmanicida foi verificada para 11 extratos sobre a cepa M2269 de Leishmania amazonensis e tr?s sobre a cepa BH46 de Leishmania infantum, sendo que o mais ativo foi o extrato das partes a?reas de Ageratum fastigiatum. Atividade antibacteriana foi identificada para 11 extratos, os mais ativos foram o de Ageratum fastigiatum (partes a?reas) e Byrsonima lancifolia (folhas), sendo que a bact?ria mais suscept?vel, por ser inibida pelo maior n?mero de extratos avaliados, foi S. aureus (9 extratos) e a menos suscept?vel foi S. agalactiae (1 extrato). A partir dos resultados obtidos, sugere-se que os extratos etan?licos das partes a?reas de Ageratum fastigiatum e Zeyheria montana s?o os mais promissores para prosseguimento dos estudos, representando uma potencial fonte de subst?ncias com atividade antitripanossomat?deo e antitumoral, e os extratos de Ageratum fastigiatum (partes a?reas) e Byrsonima lancifolia (folhas) como antibacteriana, sendo necess?ria a realiza??o do fracionamento destes extratos a fim de identificar as subst?ncias respons?veis por tais atividades e pela citoxicidade. Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-gradua??o em Ci?ncias Farmac?uticas, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, [2016]. The use of plants for therapeutic purposes is one of the oldest forms from medical practice to mankind. The Brazil accommodate approximately 20% of all global biodiversity and concentrate the largest number of endemic species in the world. Medicinal plants represent a promising source of new drugs, where the Cerrado region stands out for its large biodiversity. Even tought the importance, the endemic plants of this region are yet little explored. So the country needs more investment in research with medicinal plants, especially in situations where the therapeutic arsenal is limited and/or shows restriction like efficacy and side effects, such as cancer, neglected diseases (leishmaniosis and Chagas' disease) and inflammation diseases caused by bacterias. Therefore, the study consider a screening test of 24 ethanol extracts from 20 plants of Cerrado from Diamantina, Valley Jequitinhonha, Minas Gerais, state about its biological activity: Agarista oleifolia (aerial parts), Ageratum fastigiatum (aerial parts), Byrsonima dealbata (aerial parts), Byrsonima lancifolia (leaves and stems), Byrsonima verbascifolia (aerial parts), Croton antisyphiliticus (stems), Gomphrena arborescens (aerial parts), Gomphrena scapigera (aerial parts), Gomphrena vaga (stems), Gomphrena virgata (roots), Kielmeyera lathrophyton (leaves and stems), Kielmeyera rubriflora (aerial parts), Lafoensia pacari (leaves and stems), Myrsine emarginella (leaves), Norantea adamantium (aerial parts), Qualea dichotoma (aerial parts), Salvertia convallariodora (leaves and stems), Schefflera macrocarpa (leaves), Vochysia elliptica (aerial parts) e Zeyheria Montana (aerial parts). They were obtained by maceration and dry out using a rotary evaporator. The toxicity from normal mammalian cells was assessed using mouse fibroblasts (L929 lineage). The evaluation of anti trypanosomatid activities was performed on promastigotes of Leishmania strains BH46 (Leishmania) infantum, Leishmania M2269 (Leishmania) amazonensis and against epimastigotes of Y and Colombian strains of Trypanosoma cruzi. The antitumoral activity was performed on MDA-MB-231 lineage. The evaluation of the toxicity on cell lines and parasites was performed by the colorimetric MTT technique. The antibacterial activity was assessed about the species Staphylococcus aureus, Salmonella typhimurium, Escherichia coli, Klebsiella oxytoca, Proteus mirabilis, Streptococcus agalactiae, Listeria monocytogenes e Pseudomonas aeruginosa using the resazurin technique. In citoxicity assay all extracts have shown some toxicity to normal cells of mammals L929 lineage. Antitumoral activity was observed for 22 extracts, being the most active the extract of aerial parts of Ageratum fastigiatum. Trypanocidal activity was observed for seven extracts against the Y strain and eight extracts against Colombian strain, among them the most active is the aerial parts of Ageratum fastigiatum and aerial parts of Zeyheria montana. Leishmanicidal activity was observed for 11 extracts againt M2269 strain of Leishmania amazonensis and three against BH46 strain of Leishmania infantum, being the most active the extract from aerial parts of Ageratum fastigiatum. Antibacterial activity was identified for 11 extracts, the most active were the Ageratum fastigiatum (aerial parts) and Byrsonima lancifolia (leaves), while the most susceptible bacteria, inhibited by the largest number of extracts, was S. aureus (9 extracts) and the less susceptible was S. agalactiae (1 extract). The results reveals that, the ethanol extracts of the aerial parts of Ageratum fastigiatum and Zeyheria montana are the most promising for further studies, representing a potential source of substances to leismanicial, tripanocidal and antitumoral activities, and extracts of Ageratum fastigiatum (aerial parts) and Byrsonima lancifolia (leaves) as antibacterial activity, being need to perfom a fractionation of these extracts to identify the substances responsible for the activities and toxicity.

rea de concentra??o: Ci?ncias farmac?uticas. Data de aprova??o ausente. Submitted by Jos? Henrique Henrique (jose.neves@ufvjm.edu.br) on 2017-08-01T18:51:24Z No. of bitstreams: 2 leticia_figueiredo_cunha.pdf: 6440587 bytes, checksum: 74ac0e7008e3cbee954ff6c0815803c4 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2017-08-14T16:34:13Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) leticia_figueiredo_cunha.pdf: 6440587 bytes, checksum: 74ac0e7008e3cbee954ff6c0815803c4 (MD5) Made available in DSpace on 2017-08-14T16:34:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) leticia_figueiredo_cunha.pdf: 6440587 bytes, checksum: 74ac0e7008e3cbee954ff6c0815803c4 (MD5) Previous issue date: 2016 As plantas, por serem fonte de subst?ncias biologicamente ativas, s?o utilizadas com a finalidade terap?utica desde o in?cio da civiliza??o humana. O Brasil, por sua vez, ? detentor de uma vasta diversidade biol?gica e possui uma grande quantidade de esp?cies vegetais com potencial medicinal. Dentre os diversos biomas do territ?rio brasileiro, o Cerrado representa o segundo maior, registrando-se muitas esp?cies medicinais. Apesar de sua rica biodiversidade muitas plantas end?micas deste bioma foram pouco estudadas do ponto de vista qu?mico e biol?gico. Consequentemente, ? necess?rio maior investimento em pesquisas com plantas medicinais para tratamento de doen?as, principalmente, as cr?nicas degenerativas e parasit?rias, como Doen?a de Chagas, Leishmanioses, C?ncer e as infec??es causadas por bact?rias e fungos, cujo o tratamento apresenta importantes limita??es. Assim, o objetivo deste estudo foi realizar a triagem fitoqu?mica e de atividades biol?gicas de extratos etan?licos de 12 esp?cies de plantas oriundas do Cerrado, coletadas no mun?cipio de Diamantina, Vale do Jequitinhonha/MG. Para a triagem fitoqu?mica preliminar destes extratos foram realizadas rea??es cromog?nicas, de precipita??es e an?lises em cromatografia em camada delgada comparativa (CCDC). A citotoxicidade para c?lulas normais de mam?feros foi avaliada em fibroblastos de camundongos (L929). A linhagem celular de c?ncer de mama MDA-MB-231 foi a utilizada para a avalia??o da atividade antitumoral dos extratos. A avalia??o da atividade antitripanossomat?deo foi realizada sobre formas epimastigotas da cepa Colombiana de Trypanossoma cruzi e, sobre as formas promastigotas das cepas BH46 de Leishmania (leishmania) infantum e cepa M2269 de Leishmania (leishmania) amazonensis. Para a avalia??o destas atividades foi empregada a t?cnica colorim?trica de MTT. A avalia??o das atividades antibacteriana e antif?ngica foi realizada por meio da determina??o da Concentra??o Inibit?ria M?nima (CIM), empregando a t?cnica colorim?trica da Resazurina. As esp?cies de bact?rias utilizadas foram Escherichia coli, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa e Staphylococcus aureus. Na atividade antif?ngica foram utilizadas quatro esp?cies de leveduras (Candida albicans, Candida famata, Candida krusei e Candida tropicalis) e duas esp?cies de fungos filamentosos (Aspergillus niger e Penicillium expansum). Dos 13 extratos avaliados com rela??o a citotoxicidade sobre fibroblastos de camundongos da linhagem L929, todos apresentaram algum grau de citotoxicidade. Alguns destes extratos apresentaram elevada toxicidade sobre esta linhagem celular, sendo que o extrato etan?lico das folhas de E. erythropappus foi o mais t?xico. Na avalia??o da atividade antitumoral, com exce??o do extrato etan?lico das folhas de P. rigida, todos os outros extratos avaliados apresentaram atividade. Destes o mais promissor tamb?m foi o extrato etan?lico das folhas de E. erythropappus. Na avalia??o da atividade tripanocida sobre formas epimastigotas da cepa Colombiana de T. cruzi, nove extratos foram ativos contra este parasito. Destes os mais promissores foram os extratos das folhas de A. aculeata e das folhas de E. erythropappus. Na avalia??o da atividade leishmanicida para a cepa M2269 os extratos etan?licos das folhas de E. erythropappus e das folhas de B. oxyclada apresentaram como os mais promissores e, para a cepa BH46 o extrato etan?lico de toda esp?cie T. catahartica foi o mais promissor, seguido tamb?m do extrato etan?lico das folhas de E. erythropappus. Na avalia??o da atividade antibacteriana somente os extratos etan?licos das folhas de B. oxyclada, de P. tomentosa e S. rugosa foram ativos e, as ?nicas bact?rias sens?veis foram P. aeruginosa e S. aureus. Destes o extrato etan?lico de P. tomentosa inibiu um maior n?mero de bact?rias com a??o bactericida. Os fungos filamentosos, A. niger e P. expansum, se mostraram resistentes a todos os extratos avaliados e C. krusei foi a levedura mais sens?vel. Os extratos das folhas de B. oxyclada e das folhas de P. tomentosa foram os extratos que inibiram o maior n?mero de esp?cies f?ngicas com os menores valores de CIM. Atrav?s destes resultados, sugere-se que os extratos etan?licos das folhas de Eremanthus erythropappus, de Peixotoa tomentosa e de Banisteriopsis oxyclada apresentaram o maior n?mero de atividades biol?gicas e com os melhores resultados, o que torna estas esp?cies as mais promissoras como fontes potenciais de mol?culas bioativas para o tratamento de C?ncer, Doen?a de Chagas, Leishmanioses e infe??es bacterianas e f?ngicas, necessitando de mais estudos a fim de identificar as subst?ncias respons?veis por tais atividades e pela citotoxicidade e, valid?-las atrav?s de outros modelos in vitro e in vivo. Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-gradua??o em Ci?ncias Farmac?uticas, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, [2016]. Plants are a potencial source of biologically active substances and they are used for therapeutic purposes since the beginning of human civilization. Brazil, in turn, holds a vast biological diversity and has a lot of plant species with medicinal potential. Among the various biomes of Brazil, the Cerrado is the second largest, registering many medicinal species. Consequently, it is necessary to invest more in research of medicinal plants as possible new treatments, especially for the degenerative and chronic disease such as Chagas, Leishmaniasis, cancer and infections caused by bacteria and fungi, whereof treatment has big limitations. The objective of this study was the phytochemical screening and biological activities studies of ethanolic extracts of 12 plants species from the Cerrado, collected in the municipality of Diamantina, Vale do Jequitinhonha / MG.For the preliminary phytochemical screening were made chromogenic and precipitation reactions and analysis in thin-layer chromatography. Cytotoxicity for normal mammalian cells was evaluated in mouse fibroblasts (L929) and the cell line of breast cancer MDA-MB-231 was used to analyze the antitumor activity of the extracts. The evaluation of antitripanossomatideo activity was performed using epimastigotas of Colombiana Trypanosoma cruzi strain and promastigotes of BH46 Leishmania (Leishmania) infantum strain and M2269 Leishmania (Leishmania) amazonensis strain. The analyze of these activities were based at the colorimetric MTT technique. The evaluation of antibacterial and antifungal activities was performed by determining the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) employing the colorimetric Resazurin technique. Species of bacteria used were Escherichia coli, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus. In the antifungal activity were used four species of yeast (Candida albicans, Candida famata, Candida krusei and Candida tropicalis) and two species of filamentous fungi (Aspergillus niger and Penicillium expansum). Of the 13 extracts evaluated for cytotoxicity using the L929 strain mouse fibroblasts, all they had some cytotoxicity level. Some of these extractsthen showed a high toxicity in this assay cell line, wherein the ethanolic extract of E. erythropappus leaves was the most toxic. In the evaluation of antitumor activity all extracts showed activity, exception for the extract of P. rigida leaves. Among these the most promising was either the ethanolic extract of the leaves of E. erythropappus. Evaluation of trypanocidal activity using Colombian strain of T. cruzi epimastigotas, present active for nine extracts against this parasite, been the A. aculeata and leaves E. erythropappus leaf extract the most promising. Leishmanicidal activity for the M2269 strain of E. erythropappus B. oxyclada leaf extract presented as the most promising and, for the BH46 strain the T. catahartica role plant extract shows the best results, followed by the E. erythropappus leaf extract. In the antibacterial activity assay only the B. oxyclada, P. tomentosa and S. rugosa leaf extracts were active, and the only for P. aeruginosa and S. aureus. Among these the P. tomentosa extract inhibited a greater number of bacteria with bactericidal action. Filamentous fungus A. niger and P. expansum were resistant to all extracts evaluated and C. krusei was the most sensitive yeast. P. tomentosa and B. oxyclada leaf extracts inhibited more yeast species but with the lowest MIC values. Due these results, it is suggested that the E. erythropappus of P. tomentosa and B. oxyclada leaf ethanolic extracts showed the greatest of biological activities, making these the most promising species as potential sources of bioactive molecules for the treatment of cancer, Chagas disease, Leishmaniasis and bacterial and fungal infections, yet requiring further studies to identify the substances responsible for such activities and cytotoxicity and validate them through other models in vitro and in vivo.

RESUMO A cada dia, cepas bacterianas estão tornando-se resistentes a diversos antibióticos, o que faz necessária a busca de novas substâncias eficazes para o tratamento de doenças. Desta forma, este trabalho reporta o estudo preliminar toxicológico, antibacteriano e fitoquímico do extrato etanólico das folhas de Jatropha mollissima (pinhão-bravo, Euphorbiaceae), coletada no Município de Tauá, Ceará, Nordeste Brasileiro. Inicialmente, realizou-se o teste de toxicidade do extrato contra Artemia salina. Na sequencia, foi realizado o ensaio antibacteriano contra quatro cepas bacterianas Gram-negativas (Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Hafnia alvei ATCC 51873, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883) e uma cepa Gram-positiva (Enterococcus faecalis ATCC 29212). Finalmente, fez-se a análise fitoquímica preliminar do extrato ativo para detecção das principais classes de metabólitos especiais. Como resultado, o extrato etanólico das folhas de J. mollissima se mostrou tóxico para Artemia salina, pois apresentou CL50 igual a 406,02 μg/mL. Quanto à ação antibacteriana, o extrato se mostrou ativo contra a bactéria Gram-positiva Enterococcus faecalis ATCC 29212, apresentando moderada atividade antibacteriana (halo de inibição igual a 7,03 mm). Evidenciou-se no extrato bioativo a presença de cumarinas, fenóis, taninos, flavonoides (flavonóis e flavanonas), alcaloides e esteroides, ambas as classes reportadas como antimicrobianos. Portanto, esse extrato tem potencial para ser usado na produção de fármacos contra infecções causadas por bactérias Gram-positivas. No entanto, as informações direcionam estudos futuros para o isolamento e identificação dos compostos bioativos, monitorados sob a ação antibacteriana mais expressiva. ABSTRACT Each day, bacterial strains are becoming more resistant to various antibiotics, which requires the search for new effective substances for the treatment of diseases. Thus, this study reports the toxicological, antibacterial, and phytochemical preliminary study of the ethanolic extracts of Jatropha mollissima (pinhão-bravo, Euphorbiaceae) leaves, collected in Tauá, Ceará, Northeast of Brazil. Initially, we performed the toxicity testing of the extract against Artemia salina. Then, we conducted the antibacterial assay against four Gram-negative bacterial strains (Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Hafnia alvei ATCC 51873, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883), and one Gram-positive strain (Enterococcus faecalis ATCC 29212). Finally, we carried out the preliminary phytochemical analysis of the active extract to detect the main classes of special metabolites. As a result, the ethanolic extract of J. mollissima leaves was toxic to Artemia salina, because it presented LC50 equal to 406.02 µg/mL. Regarding antibacterial action, the extract was active against the Gram-positive bacteria Enterococcus faecalis ATCC 29212, with moderate antibacterial activity (inhibition zone equal to 7.03 mm). The bioactive extract had the presence of coumarins, phenols, tannins, flavonoids (flavanols and flavonones), alkaloids and steroids, both classes reported as antimicrobials. Therefore, this extract has the potential to be used in the production of drugs against infections caused by Gram-positive bacteria. However, these information require further studies for the isolation and identification of bioactive compounds, monitored under the more expressive antibacterial action.

Orientador: Pedro Paulo Corbi Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química Resumo: O presente trabalho descreve a síntese e caracterização química e espectroscópica do ligante 2-tiofen-2-il-imidazol (Thim) e de seus complexos inéditos de paládio(II) (Pd-Thim), platina(II) (Pt-Thim) e prata(I) (Ag-Thim). O ligante teve sua estrutura resolvida por primeira vez por difração de raio-X de pó. Os complexos Pd-Thim e Ag-Thim tiveram suas estruturas resolvidas por difração de raio-X de monocristal. Os complexos Pd-Thim e Pt-Thim possuem a fórmula mínima [PdCl2(Thim)2] e [PtCl2(Thim)2], sendo complexos neutros de geometria trans quadrado planar. O complexo Ag-Thim possui a fórmula mínima [Ag(Thim)2]NO3, sendo um complexo catiônico de geometria linear. O ligante se coordena aos metais pelo mesmo átomo em todos com complexos, o átomo de nitrogênio imino do grupo imidazol. Como não foi possível resolver a estrutura do complexo Pt-Thim comparações espectroscópicas com o complexo Pd-Thim e com o Thim foram efetuadas para se propor sua estrutura. Também foram realizados cálculos por DFT do Thim, Pd-Thim e Pt-Thim obtendo-se uma estrutura análoga ao Pd-Thim. Thim e Pd-Thim foram estudados quanto às suas interações com DNA de timo de bezerro por espectroscopia no UV-Vis, dicroísmo circular, fluorescência com brometo de etídio e determinação do ponto de desnaturação do DNA. Estas análises indicam que tanto o Thim quando o Pd-Thim interagem com o DNA e foi possível propor modos de interação para ambos os compostos. Estudos de atividade antibacteriana foram realizados para o Thim e os complexos e somente o Ag-Thim foi ativo contra as cepas testadas. Thim, Pd-Thim e Pt-Thim foram testados quanto à atividade antifúngica e somente o Pd-Thim se mostrou ativo. O Thim e os complexos foram testados quanto às suas citotoxicidades contra uma linhagem celular de câncer de mama e uma linhagem de osteoblasto. Todos os compostos apresentaram citotoxicidade contra as cepas testadas, sendo a mais expressiva para o Ag-Thim. O complexo Pd-Thim foi o único que mostrou seletividade frente às células tumorais Abstract: This present work describes the synthesis and full chemical and spectroscopic characterization of the ligand 2-thiophen-2-yl-imidazole (Thim) and its novel complexes with palladium(II) (Pd-Thim), platinum(II) (Pt-Thim) and silver(I) (Ag-Thim). The ligand had its structure solved by powder X-ray diffraction. The Pd-Thim and Ag-Thim complexes had their structures solved by single crystal X-ray diffraction. The Pd-Thim and Pt-Thim complexes have the minimum formula [PdCl2(Thim)2] and [PtCl2(Thim)2], being neutral complexes with trans square plannar geometry. The Ag-Thim complex has the minimum formula [Ag(Thim)2]NO3, being a cationic complex with linear geometry. The ligand coordinates to the metals through the same atom in all the complexes, the imine nitrogen atom of the imidazole group. Spectroscopic comparisons were made between Pd-Thim, Pt-Thim and Thim to propose the Pt-Thim structure as it was not possible to solve it by X-ray diffracion. DFT calculations were also performed for Thim, Pd-Thim and Pt-Thim and the result was that the Pt-Thim structure is analogous to the Pd-Thim structure. Thim and Pd-Thim were evaluated for their interactions with calf-thymus DNA by UV-Vis spectroscopy, circular dichroism, fluorescence with ethidium bromide and denaturarion point of DNA. These analyses indicate that both Thim and Pd-Thim interact with DNA and it was possible to propose the modes of interaction. Antibacterial activity studies were performed for Thim and all the complexes, but only the Ag-Thim complex is active against the tested strains. Thim, Pd-Thim and Pt-Thim were evaluated for their antifungal activity, but only Pd-Thim is active. Thim and all the complexes were evaluated for their citotoxic activity agains a strain of breast cancer and one of osteoblast. All the compounds were citotoxic agains the testet strains with Ag-Thim being the most active. Pd-Thim was the only one that shows selectivity for the tumoral cells Mestrado Química Inorgânica Mestra em Química CAPES FAPESP CNPQ

espanolIntroduccion: la resistencia bacteriana ha crecido significativamente en los ultimos anos, por lo que es necesaria la busqueda de nuevas dianas terapeuticas. En este contexto, los compuestos bioactivos presentes en algunas plantas medicinales pueden tener diversas actividades biologicas, tales como la accion antimicrobiana. Allium cepa, conocida como la cebolla, es utilizada, popularmente de forma etnofarmacologica para el tratamiento de diversas enfermedades tales como la tuberculosis, la diabetes, la hipertension, el reumatismo y asi sucesivamente. Objetivo: el objetivo de este estudio fue evaluar la actividad antimicrobiana y moduladora de extractos de metanol yhexano de Allium cepa frente a las cepas de bacterias y normas multirresistentes. Materiales y metodos: por los metodos microdilucion y modulacion con antibioticos. Resultados: los resultados mostraron una variacion de mic (concentracion minima inhibitoria) de 128 a ≥ 1024μg /mL dos extractos metanolicos A. cepa (emac) y hexano de A. cepa (ehac). En la modulacion con aminoglucosidos (amikacina y gentamicina), se observaron efectos sinergicos y antagonicos deehac y emac, frente a las cepas de Escherichia coli y Staphylococcus aureus multirresistente. Se necesitan nuevas investigaciones para un posible uso de plantas medicinales combinadas con la cara antimicrobiana de las cepas patogenas. Conclusion: a partir de estos resultados, se sugiere que los productos naturales son fuentes prometedoras en la lucha contra la resistencia bacteriana. EnglishIntroduction: Bacterial resistance has grown significantly in recent years, making the search for new antibiotics imperative. Bioactive compounds in some medicinal plants may exhibit various biological activities as antimicrobial activity. Allium cepa, popularly known as onion, is ethnopharmacologically used for treating various diseases, such as tuberculosis, diabetes, hypertension and rheumatism; it is also considered a powerful bactericide. Objective: The main objective of this study was to evaluate the antimicrobial and modulating activity of methanol and hexane extracts of A. cepa against the strains of ultiresistant bacteria. Materials and methods: Microdilution and modulation of antibiotics. Results: The results showed a variation in the mic (Minimum Inhibitory Concentration) from 128 to ≥ 1024μg / mL between A. cepa methanol (emac) and A. cepa hexane (ehac) extracts. Modulation with aminoglycosides (gentamicin and amikacin) have proved to have antagonistic effects of the extracts sinergicose ehac and emac against strains of multiresistant Escherichia coli and Staphylococcus aureus. Further research is needed related to the use of medicinal plants combined with antimicrobials against pathogenic strains. Conclusion: Through these results it can be inferred that natural products could constitute a promising source for combating bacterial resistance. portuguesIntroducao: A resistencia bacteriana tem crescido significativamente nos ultimos tempos, tornando-se imprescindivel a busca por novos alvos terapeuticos. Nesse contexto, compostos bioativos presentesem algumas plantas medicinais podem apresentar varias atividades biologicas, como acao antimicrobiana. Allium cepa conhecida popularmente como cebola e utilizada de maneira etnofarmacologicaha muito tempo para o tratamento de diversas enfermidades: tuberculose, diabetes, hipertensao, reumatismo e assim por diante. Objetivo: O principal objetivo deste trabalho foi avaliar a atividadeantimicrobiana e modulatoria dos extratos metanolico e hexânicoda das folhas A. cepa frente as cepas de bacterias padroes e multirresistentes. Materiais e metodos: Pelos metodos e microdiluicaoe modulacao com antibioticos. Resultados: Os resultados deste estudo demonstraram uma variacao no cim (Concentracao Inibitoria Minima) de 128 a ≥ 1024 μg/mL dos extratos metanolico de A. cepa (emac) e hexânico de A. cepa (ehac). Na modulacao com os aminoglicosideos (amicacina e gentamicina) observaram-se efeitos sinergicos e antagonicos dos extratos ehac e emac frente as cepas Escherichia coli e Staphylococcus aureus de linhagem multirresistente. Novas pesquisas sao necessarias para uma possivel utilizacao das plantas medicinais combinadas com os antimicrobianos frente as linhagens patogenicas. Conclusao: Atraves desses resultados sugere-se que os produtos naturais representam fontes promissoras no combate a resistencia bacteriana.

Experimentos com vista à avaliação das propriedades físico-quimica, fitoquímicas e biológica, bem como a sua estabilidade, em raízes tuberosas maduras, caules e folhas jovens de duas cultivares, RBS Amélia e RBS Cuia, e dois acessos de Ipomoea batatas, um de polpa púrpura com manchas brancas (C) e outro de polpa púrpura (D), cultivados ecologicamente e em condições de sequeiro na Horta Comunitária de Lomba do Pinheiro (30º 06’ 46’’ S; 51º 06’ 34’’ O) no Município de Porto alegre, RS no período de 2013 a 2015 foram efetuados nos laboratórios de Higiene, Qualidade e Microbiologia de alimentos e de Química e Bromatologia do Instituto de Ciência e Tecnologia de Alimento (ICTA) da Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS). A avaliação quantita-tiva das propriedades físico-químicas e fitoquímicas seguiu os métodos descritos no Manual das Normas Técnicas para Determinação das Propriedades Físico-químicas em alimentos do Instituto Adolfo Lutz. O teor de polifenóis totais foi determinado pelo método de Folin & Ciocalteu, o con-teúdo de antocianinas pelo método de pH diferencial, os flavonoides, taninos e vitamina C avalia-dos por métodos espectrofotométricos. A atividade biológica consistiu na determinação das pro-priedades antioxidantes dos materiais usando o método fotocolorimétrico in vitro, empregando o radical livre estável 2,2-difenil-1-picrilhidrazila (DPPH) e na avaliação da atividade antimicrobi-ana, expressa como intensidade de atividade de inibição bacteriana (IINIB) e intensidade de ativi-dade de inativação bacteriana (IINAB), usando sistema de tubos múltiplos frente a diferentes con-centrações de Salmonella Enteritidis (ATCC 11076), Enterococcus faecalis (ATCC 19433), Es-cherichia coli (ATCC 11229) e Staphylococcus aureus (ATCC 25923). Foi igualmente analisada a estabilidade físico-química, fitoquímica e biológica das raízes tuberosas, caules e folhas estoca-dos a temperatura ambiente por períodos de 90, 180 e 270 dias, através da mensuração e avaliação das concentrações dos componentes físico-químicos, fitoquímicos e atividade biológica naqueles pontos de estocagem, Foram encontrados teores de proteínas variando de 10,5 a 26,3%, carboidra-tos totais oscilando de 15,7 a 61,1% com valores altos observados na cultiva RBS Amélia. Maiores teores de fenólicos totais e antocianinas foram observados em acessos de polpa púrpura com valo-res até 709,3 e 78,7mg/100g, respectivamente. Elevada atividade antioxidante foi também verifi-cada na maioria dos extratos testados que, igualmente, evidenciaram atividade antibacteriana frente a todos os inóculos testados ainda que a sua intensidade tenha sido diferente. Porém, nenhuma atividade antibacteriana foi verificada em extratos preparados com base no calor, quais sejam in-fusão e decocção. A estabilidade das propriedades de todos esses materiais foi presenciada embora algumas características tenham reduzido seus teores aos 270 dias de estocagem. O trabalho conclui que as raízes tuberosas, caules e folhas das cultivares RBS Amélia e RBS Cuia e dos acessos de batata-doce estudados se constituem em hortaliças vegetais com alto potencial físico-químico, fi-toquímico e biológico, a avaliar pelos altos teores de carboidratos totais, considerável concentração de proteínas, elevados valores de polifenóis totais e, ou antocianinas, principalmente nos acessos de polpa púrpura. Os mesmos materiais têm um indicativo de atividade antioxidante e de atividade antibacteriana seletiva frente a Salmonella Enteritidis (ATCC 11076), Enterococcus faecalis (ATCC 19433), Escherichia coli (ATCC 11229) e Staphylococcus aureus (ATCC 25923). Figuram-se, portanto, como uma excelente fonte de proteína, carboidratos e de compostos fenólicos relativamente estável por período de 270 dias de estocagem a temperatura ambiente, tornando-se importante na segurança alimentar e nutricional, saúde e bem-estar social. Experiments for the evaluation of the physic-chemical, phytochemical and biological properties, and their stability in mature tuber roots, young stems and leaves of two cultivars, RBS Amelia and RBS Cuia and of two accessions of Ipomoea batatas, one having purple fleshed tuber roots with white spots (C) and another purple fleshed tuber (D), grown ecologically in “ Horta Comunitária da Lomba do Pinheiro (30º 06' 46'' S, 51° 06' 34'' O), Porto alegre, RS from the period of 2013 to 2015 were perfomed in the Hygiene, Quality and Microbiology and Food Chemistry laboratories of the Institute of Science and food Technology (ICTA), Federal University of Rio Grande do Sul (UFRGS). The quantitative assessment of physicochemical and phytochemical properties followed the described methods in the Manual of Technical Standards for Determination of Physical and Chemical Properties, Institute Adolfo Lutz. The total polyphenol content was determined by the Folin & Ciocalteu method, the content of anthocyanins at pH differential method, flavonoids, tan-nins, and vitamin C evaluated by spectrophotometric methods. Biological activity was analysed evaluated by determinating antioxidant properties of materials using fotocolorimétrico in vitro method, using the stable free radical 2,2-diphenyl-1-picrilhidrazila (DPPH) and also by evaluating antimicrobial activity, expressed as intensity of bacterial inhibition activity (IINIB) and intensity of bacterial inactivation activity (IINAB) using multiple tube system against different concentra-tions of Salmonella enteritidis (ATCC 11076), Enterococcus faecalis (ATCC 19433), Escherichia coli (ATCC 11229) and Staphylococcus aureus (ATCC 25923). It was also analyzed the physical and chemical, phytochemical and biological stability of tuber roots, stems and leaves stored at room temperature for periods of 90, 180 and 270 days, through the measurement and assessment of con-centrations of physico-chemical components, phytochemicals and biological activity on those points of storage. Protein levels were found ranging from 10.5 to 26.3%, total carbohydrates rang-ing from 15.7 to 61.1% with higher values observed in the RBS Amelia cultivar. Higher total phe-nolic content and anthocyanins were found in the purple fleshed roos, with values of up to 709.3 and 78,7mg / 100g, respectively. High anti-oxidant activity was also observed in most of the tested extracts which also showed antibacterial activity against all inocula tested, although its intensity was different. However, no antibacterial activity was detected in extracts prepared by heat, namely infusion and decoction. The stability of the properties of all materials was attended although some features have reduced its contents to 270 days of storage. The paper concludes that the tuber roots, stems and leaves of the RBS Amélia and RBS Cuia cultivars and sweet potato accessions studied constitute vegetables with high physical-chemical, phytochemical and biological potential, accord-ing to the high levels of total carbohidrates, considerable protein concentration, high total polyphe-nol values, or anthocyanins, mainly in pupuple fleshed roots accesses. The same materials have an indicative of antioxidant activity and selective antibacterial activity against Salmonella enteritidis (ATCC 11076), Enterococcus faecalis (ATCC 19433), Escherichia coli (ATCC 11229) and Sta-Staphylococcus aureus (ATCC 25923). Therefore, this specie can be seen as an excellent source of protein, carbohydrates and relatively stable phenolic compounds for a period of 270 days of storage at room temperature, making it important for food security and nutrition, health and social welfare.

The activity of 23 samples of ethanolic brown propolis, from the State of Mato Grosso, was investigated against Escherichia coli ATCC 25922. The values of physical and chemical parameters showed significant variation among samples. The percentage of dry extract ranged from 2.6 to 27.6%. The index of oxidation varied from 3 to 519 seconds. All samples showed the percentage of wax higher than the limit preconized by the legislation, with values varying from 3.4 to 74.6%. The quantification of phenolic and flavonoid compounds, responsible for antimicrobial activity, ranged from 0.1 to 5.0 (w/w) and 0.02 to 0.66 (w/w), respectively, being that the higher the index of phenolic compounds the larger the zones of inhibition. Antibacterial activity was observed in seven out of the 23 samples, demonstrating zones of inhibition ranging from 10 to 11.3mm. For these active samples, the minimum inhibitory concentration was determined, ranging from 125 to 1000mg/mL. The value of MIC in 42.9% of these samples was 250mg/mL. These results contribute to the establishment of physical and chemical parameters for the regulation of brown propolis and indicate possible therapeutic applicability in the development of formulations for the treatment of infections caused by E. coli.