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Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2018. A paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica, causada pelo fungo termodimórfico Paracoccidioides brasiliensis, adquirida pela inalação de propágulos da forma miceliana, presentes no solo. O desenvolvimento da doença depende de fatores do fungo, como mecanismos de evasão, além de fatores do hospedeiro. Nesse contexto, o desenvolvimento de uma resposta imune adaptativa com predominância de linfócitos T auxiliares do tipo 1 é considerada adequada e associada a resistência à PCM em modelos murinos e em humanos. A resposta adaptativa é iniciada e direcionada principalmente por células dendríticas (DCs) após o reconhecimento de padrões moleculares de patógenos. Assim, este trabalho avalia a capacidade imunomodulatória de dois agonistas de receptores de reconhecimento padrão (PRRs) sobre DCs. Para isso DCs foram infectadas com P. brasiliensis e tratadas com agonistas de PRRs Zymosan e Pam3csk4, que são respectivamente ligantes de Dectina-1/TLR-2 e TLR-2. Observou-se que, em geral, o tratamento induz a uma modulação de diversas atividades de DCs infectadas com o fungo. Foi observado o aumento da produção de citocinas, como TNF-α, IL-6 e IL-1β, a indução significativa da maturação das DCs, que em geral é inibida pelo P. brasiliensis. Além disso, o tratamento induziu o desenvolvimento de um perfil de citocinas associadas a resposta com predominância de linfócitos Th1. Ainda foi observada a capacidade do fungo de inibir a produção de IL-12p70 por DCs pela redução da transcrição do gene il12a, que codifica a subunidade específica p35 dessa citocina. Finalmente, a administração de zymosan em camundongos infectados pelo P. brasiliensis resultou na diminuição significativa da carga fúngica. Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis caused by the thermally dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis. It is acquired by the inhalation of propagules pf the mycelial form from the soil from the soil. The development of the disease depends on fungus features such as evasion mechanisms, and of host factors. In this context, the development of an adaptative immune response with a predominance of type 1 helper T lymphocytes is considered adequate and associated with resistance to PCM in murine models and in humans. The adaptive response is initiated and directed mainly by dendritic cells (DCs) after the recognition of pathogens molecular patterns. In this context this work evaluates the immunomodulatory capacity of three pattern recognition receptor (PRR) agonists on DCs during interaction with P.brasiliensis. DCs were infected with P. brasiliensis and treated with PRRs agonists Zymosan, Zymosan Depleted and Pam3csk4, wich are bound respectively to Dectin-1/TLR-2, only Dectin-1 and only to TLR-2. It was observed that, in general, the treatment induces a modulation of various functions of fungal infected DCs. It was observed increased production of cytokines, such as TNF-α, IL-6 and IL-1β and significant induction of maturation DCs, which in general is reduced by P. brasiliensis. Furthermore, the treatment induced the development of a cytokines profile associated with Th1 response predominance of lymphocytes. Furthermore, this work demonstrated the capacity of the fungus to inhibit IL-12p70 production by DCs, via reduction of the il12a gene transcription that encodes the specific p35 subunit of this cytokine. Lastly, the administration of zymosan in mice infected with P. brasiliensis led to a significant reduction of the fungal burden in the lung and spleen.

Introduction: Systemic lupus erythematosus (SLE) is a systemic autoimmune disease that develops inflammatory foci in the most diverse organs and tissues of the body, with a large number of clinical manifestations. This study aims to reinforce the knowledge that exists about the disease and to update on the criteria determined in 2018 by the American College of Rheumatology (ACR) and the European League Against Rheumatism (EULA). Methods: The present study was carried out by means of a review of the literature available in the Scientific Electronic Library Online and National Institutes of Medicine of the US National Library of Medicine Health databases. Development: Malfunction of the immune system and consequent production of autoantibodies are of paramount importance in the pathogenesis and presentation of clinical signs and symptoms, but the etiopathogenesis of SLE is not fully elucidated. The diagnosis of SLE is hampered by the wide variety of systemic presentations and the low specificity of various symptoms, which are often mistaken for other diseases. In 2018, updated criteria were developed by the ACR and the EULA. Current treatment regimens consist of antimalarial, corticosteroid and immunobiological drugs. Conclusion: SLE is a disease of considerable complexity due to the lack of complete knowledge of its etiopathogenesis. Its clinical manifestations are confounded with that of several diseases, which hinders its rapid diagnosis and initiation of treatment. Studies on the discovery of new therapies for use in SLE are being carried out worldwide, with the aim of reducing the mortality of these patients., Introdução: O lúpus eritematoso sistêmico (LES) é uma enfermidade autoimune sistêmica que desenvolve focos inflamatórios nos mais diversos órgãos e tecidos do corpo, com um amplo número de manifestações clínicas. Este estudo pretende reforçar o conhecimento que existe sobre a doença e atualizar sobre os critérios determinados em 2018 pelo American College of Rheumatology (ACR) e pela European League Against Rheumatism (EULA). Métodos: O presente estudo foi realizado por meio de uma revisão da literatura disponível na Scientific Eletronic Library Online e Institutos Nacionais de Medicina dos EUA da National Library of Medicine Bancos de dados de Saúde. Desenvolvimento: O mau funcionamento do sistema imunológico e a conseguinte produção de autoanticorpos são de suma importância na patogenia e na apresentação dos sinais e sintomas clínicos, porém a etiopatogenia do LES não está totalmente elucidada. O diagnóstico do LES é dificultado devido à grande variedade de apresentações sistêmicas e à baixa especificidade de vários sintomas, que diversas vezes se confunde com outras doenças. Em 2018, critérios atualizados foram desenvolvidos pelo ACR e pela EULA. Os regimes de tratamento atuais consistem em drogas antimaláricas, corticosteroides e imunobiológicos. Conclusão: O LES é uma doença de importante complexidade, devido ao não conhecimento completo de sua etiopatogenia. Suas manifestações clínicas se confundem com a de diversas doenças, o que dificulta seu rápido diagnóstico e início do tratamento. Estudos para a descoberta de novas terapias para uso no LES estão sendo realizados em todo o mundo, com o intuito de diminuir a mortalidade desses pacientes.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2018. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES). Baculovírus são vírus de DNA de dupla fita circular que infectam insetos. O potencial destes vírus como ferramenta para expressão de proteínas heterólogas começou a ser explorado na década de 70. Hoje, os baculovírus são utilizados amplamente para expressar antígenos de uso vacinal, diagnóstico e como potenciais vetores de terapia gênica e vacinas de DNA. Sabendo que a forma BV (Budded virus) de AcMNPV (Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrovirus) induz alterações fenotípicas e funcionais em células da resposta imune inata e adaptativa, despertou-se o interesse do nosso grupo em saber se a forma OB (Occlusion Body) de AcMNPV, também conhecido como poliedros, apresenta a capacidade de estimular tanto a resposta imune inata como a adaptativa. Genes de interesse podem ser fusionadas ao gene da poliedrina, a proteína mais abundante do poliedro, o que permite assim sua produção de proteínas recombinantes em alta concentração. Neste presente trabalho foi avaliado a capacidade do poliedro de AcMNPV em estimular a resposta imune do hospedeiro saudável, apresentando uma ação imunomoduladora. Os resultados in vitro mostraram que o poliedro é capaz de induzir a maturação das células dendríticas derivadas da medula óssea (BMDC) observado pelo aumento da produção de citocinas inflamatórias (IL-1β, TNF-α, IL-6 e IL-12), quimiocina (CCL2), aumento da expressão de moléculas coestimulatória (CD80, CD86) e MHC-II. O poliedro foi capaz de ativar vias de sinalização intracelular semelhante ao obsevado por vírus com o aumento da transcrição dos genes. Além disso, observou-se a ativação de células da reposta imune adaptativa com aumento da proliferação celular com indução de um perfil mixto. Estes dados nos permite concluir que a fusão de proteínas de interesse fusionadas à poliedrina é uma estratégia interessante, não sendo necessária a utilização de adjuvantes nas estratégias de vacinas terapêuticas ou profiláticas. Baculoviruses are circular double-stranded DNA viruses that infect insects. The potential as an implement for heterologous proteins expression began to be explored in the 70´. Today, baculoviruses are widely used to express vaccine antigens, to diagnosis and as potential gene therapy vectors and DNA vaccines. It is already reported in the literature that the BV form of AcMNPV induces phenotypic and functional changes in cells of the innate and adaptive immune response. In this way, our group's interest in knowing whether the OBs form of AcMNPV, also known as polyhedra, has been shown to have the ability to stimulate the innate and adaptive immune responses. Proteins of interest can be fused to the polyhedrin gene, the most abundant protein of the polyhedron, which allows its production in high concentration. This study evaluated if the polyhedron of AcMNPV is able to exert immunomodulatory action. The in vitro results showed that the polyhedron is capable of inducing maturation of the BMDCs cells, which is observed by increased production of inflammatory cytokines (IL-1β, TNF-α, IL-6 and IL-12), chemokine (CCL2), increased expression of co-stimulatory molecules (CD80, CD86) and MHC-II. The polyhedron was able to activate intracellular signaling pathways, like those observed by viruses with increased transcription of TLR3, TLR9, IRF3 and IFN-α. In addition, it was through the activation of the BMDCs that it provided the activation of adaptive immune response cells with increased cell proliferation with induction of a mixed profile. These data allow us to conclude that the fusion of proteins of interest fused to polyhedrin is an interesting strategy and there is no need for the use of adjuvants in the strategies of therapeutic or prophylactic vaccines.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Departamento de Nutrição, Programa de Pós-Graduação em Nutrição Humana, 2015. Introdução: Há evidências de que pacientes com câncer de mama apresentam alteração da função imune, o que pode favorecer a progressão do câncer. A inflamação crônica está envolvida em todos os estágios de carcinogênese. Estudos tem demonstrado que ácidos graxos poliinsaturados n-3 eicosapentaenóico (EPA) e docosahexaenóico (DHA) apresentam propriedades imunomoduladoras e antiinflamatórias, sendo utilizados na prevenção e tratamento de diferentes patologias, incluindo o câncer. Neste contexto, este estudo teve como objetivo investigar o efeito da suplementação com óleo de peixe, em pacientes recém diagnosticadas com câncer de mama, nas subpopulações de linfócitos, citocinas pró-inflamatórias, proteína C-reativa e Prostaglandina E2. Metodologia: Estudo de intervenção, randomizado, placebo controlado, duplo-cego, conduzido em pacientes com diagnóstico de câncer de mama, distribuídas em dois grupos (grupo óleo de peixe – GO e grupo placebo – GP). As pacientes do GO receberam diariamente 2 g de concentrado de óleo de peixe contendo 1,8g de ácidos graxos n-3. O grupo placebo recebeu 2 g/dia de óleo mineral com igual aparência do óleo de peixe. Todas as pacientes foram suplementadas por 4 semanas durante o período anterior ao tratamento cirúrgico. Antes e ao final da suplementação, foram coletados dados de antropometria, composição corporal, consumo dietético e amostras sanguíneas para fenotipagem de linfócitos, exames laboratoriais (glicemia de jejum, albumina sérica, perfil lipídico), análise do perfil de ácidos graxos séricos e marcadores inflamatórios (IL-1β, IL-6, TNF-α, proteína C-reativa e prostaglandina E2). A análise estatística foi realizada utilizando testes paramétricos e não paramétricos para comparar os resultados dos dois grupos. Resultados: O GO foi constituído de 18 pacientes e o GP 19. No início do estudo não foram observadas diferenças significativas entre os grupos quanto aos parâmetros socioeconômicos, antropométricos e clinicopatológicos. A maioria das pacientes apresentou carcinoma ductal infiltrante e 55,6% e 57,9% do GO e GP, respectivamente, apresentaram tumor HER2 negativo. Após a intervenção, no grupo óleo de peixe houve aumento significativo da quantidade de EPA (p=0,004), DHA (p=0,007) e total de ácidos graxos n3 (p=0,004) no fosfolipídio plasmático. Observou-se redução da razão n6/n3 (p=0,002). No GO observou-se manutenção tanto da percentagem de linfócitos T CD4+ no sangue periférico como dos níveis séricos da proteína C-reativa, enquanto no GP houve redução da percentagem de linfócitos T CD4+ no sangue periférico e aumento da proteína C-reativa. Não houve mudanças significativas nos níveis séricos das citocinas pró-inflamatórias e da prostaglandina E2. Conclusão: A suplementação de 1,8g de ácidos graxos n-3 em pacientes recém diagnosticadas com câncer de mama, durante 4 semanas promoveu mudança significativa na composição dos ácidos graxos plasmáticos, manteve a percentagem das células T CD4+ e os níveis séricos de PCR, sugestivo da sua ação benéfica no sistema imunológico. Introduction: There is evidence that breast cancer patients have impaired immune function, which can promote cancer progression. Chronic inflammation is involved in all stages of carcinogenesis. Studies have shown that n-3 polyunsaturated fatty acids eicosapentaenoic (EPA) and docosahexaenoic (DHA) acids have immunomodulatory and anti-inflammatory properties and are useful in the prevention and treatment of various diseases, including cancer. In this context, this study aimed to investigate in patients with newly diagnosed breast cancer the effects of fish oil supplementation in lymphocytes subpopulation, proinflammatory cytokines, C-reactive protein (CRP) and prostaglandin E2. Methodology: A randomized, placebo controlled, double-blind clinical trial was conducted in patients diagnosed with breast cancer, divided into two groups (fish oil group - GO and placebo group - GP). The GO patients received 2 g/ day of fish oil concentrate containing 1.8g of n-3 fatty acids. The placebo group received 2 g/ day of mineral oil with similar appearance to fish oil. All patients were supplemented for four weeks during the period prior to surgical treatment. Before and at the end of supplementation, we collected anthropometric, body composition and dietary intake data and blood samples for lymphocyte phenotyping, laboratory tests (fasting glucose, serum albumin, lipid profile), serum fatty acids analysis and inflammatory markers (IL-1β, IL-6, TNF-α, CRP and prostaglandin E2). Statistical analysis was performed using parametric and non-parametric tests to compare the results of both groups. Results: GO consisted of 18 patients and the GP 19. At baseline no significant differences were observed between the groups in terms of socioeconomic, anthropometric and clinicopathological parameters. Most of the patients had infiltrating ductal carcinoma and 55.6% and 57.9% of GO and GP, respectively, had negative HER2 tumor. After the intervention there was a significant increase in the amount of EPA (p=0.004), DHA (p=0.007) and the total of n3 fatty acids (p=0.004) in plasma phospholipid of the GO patients. There was a reduction in the n6/ n3 ratio (p=0.002). In GP patients there was a reduction in the percentage of peripheral blood CD4+ T lymphocytes counts and increased plasma C-reactive protein concentration. In GO patients the proportion of peripheral blood CD4 + T lymphocytes and serum of CRP levels were maintained. There were no significant changes in serum levels of proinflammatory cytokines and prostaglandin E2. Conclusion: Supplementation of treatment naïve breast cancer patients with 1.8 g/ day of n-3 fatty acids for 4 weeks caused a significant change in the composition of plasma fatty acids, kept the frequency of CD4+ T cells and serum CRP, suggestive of a beneficial effect of the supplement on patient’s immune system.

The literature presents several instances of interaction between the nervous system (NS) and the immune system (IS). These interactions are promoted by several molecules, such as cytokines and hormones, with modulating action for both the NS and IS. In this sense, the two systems may influence each other: changes in behavior may be accompanied by alterations in the IS (e.g., immunosuppression) and immunological disorders, such as infections, may modulate behavior (e.g., anxiety and depression). Considering that chronic stress, in addition to affecting behavior, also modulates the IS and that there is evidence that moderate intensity physical exercise (PE) protects physical and mental health, the objective of this review is to explore the influence of moderate-intensity PE on behavior and immunity. Level of Evidence V; Expert opinion. RESUMO A literatura apresenta diversas instâncias de interação entre o sistema nervoso (SN) e o sistema imunológico (SI). Essas interações são promovidas por diversas moléculas, como citocinas e hormônios com ação moduladora tanto para o SN quanto o SI. Nesse sentido, os dois sistemas podem ter influência mútua: as alterações do comportamento podem ser acompanhadas por alterações do SI (por exemplo, imunossupressão), e distúrbios imunológicos como infecções, podem modular o comportamento (por exemplo, ansiedade e depressão). Considerando que o estresse crônico, além de afetar o comportamento, modula o SI e que há evidências de que o exercício físico (EF) de intensidade moderada ajuda a proteger a saúde física e mental, o objetivo da presente revisão é explorar a influência do EF de intensidade moderada sobre o comportamento e a imunidade. Nível de Evidência V; Opinião do especialista. RESUMEN La literatura presenta diversas instancias de interacción entre el sistema nervioso (SN) y el sistema inmune (SI). Estas interacciones son promovidas por diversas moléculas, como citosinas y hormonas, con acción moduladora tanto para el SN como para el SI. En este sentido, los dos sistemas pueden influenciarse mutuamente: los cambios en el comportamiento pueden ser acompañados por alteraciones en el SI (inmunosupresión) y los disturbios inmunológicos, como infecciones, pueden modular el comportamiento (ej. ansiedad y depresión). Considerando que el estrés crónico, además de impactar el comportamiento, también modula el SI y que hay evidencias de que el ejercicio físico (EF) de intensidad moderada es un protector para la salud física y mental, el objetivo de la presente revisión es explotar la influencia del EF de intensidad moderada en el comportamiento y la inmunidad. Nivel de Evidencia V; Opinión del especialista.

Está comprovado que as hérnias do disco intervertebral podem sofrer um fenómeno de reabsorção espontânea e existe evidência na literatura que este processo ocorre por mecanismos imunológicos. O disco intervertebral é o maior órgão avascular do organismo, sendo considerado um dos locais imunologicamente privilegiados do ser humano. Perspetiva-se que a violação deste estado imunologicamente privilegiado ocorrida durante a herniação poderá expor o conteúdo do disco intervertebral ao sistema imune e assim ser desencadeada uma resposta imunológica a fim de proceder à sua reabsorção. O objetivo desta “monografia” visa a revisão da literatura e a sistematização dos possíveis mecanismos pelos quais a reabsorção das hérnias do disco intervertebral acontece. A base de dados utilizada foi a PUBMED, onde foram selecionados artigos completos e revisões escritas em língua inglesa publicados entre 1953 e 2017. Os termos MeSH usados foram “intervertebral disc”, “intervertebral disc displacement”, “spontaneous resorption” “immune system”, isoladamente ou em combinação. A lista de referências dos artigos identificados foi também analisada na procura de mais artigos relevantes associados ao tema. É consensualmente aceite que no processo de reabsorção das hérnias do disco intervertebral estão envolvidos fenómenos de neovascularização, quimiotaxia de células imunes e formação de um tecido de granulação, culminando num processo fagocitose do material herniado. Contudo, ainda existe controvérsia quanto ao tipo de imunidade implicada neste processo, pelo que quer a imunidade inata, quer a imunidade adaptativa poderão estar ambas implicadas. It has been proven that the intervertebral disc hernia may suffer a phenomenon of spontaneous resorption and there is evidence in literature that this is mediated by immunological mechanisms. The intervertebral disc is considered one of the human immunological privileged sites, being also the largest avascular organ in the human body. It is foreseen that the invasion of this immunologically privileged state that occurs during herniation may expose the IVD to the immune system hence triggering an immune response in order to promote its resorption. The aim of this “monography” is to review literature and systematize the possible mechanisms by which the resorption of the intervertebral disc hernia occurs. The database used was PUBMED where full text articles and English-written reviews published between 1953 and 2017 were preferred. The MeSH terms used were ‘intervertebral disc’, ‘intervertebral disc displacement’, ‘spontaneous resorption’ and ‘immune system’ either alone or in combination. The references of the articles were also considered when searching for the most relevant articles. It is widely accepted that the resorption process of the herniated disc implies mechanisms such as neovascularization, chemotaxis of immune cells and synthesis of a granulated tissue culminating in the phagocytosis of the herniated material. However, there is controversy as to which immunity is implicated in this process thus both innate immunity and adaptive immunity may be involved.

Submitted by Wiqlifi Bruno de Freitas Melo (wbruno@ufersa.edu.br) on 2019-02-26T20:46:13Z No. of bitstreams: 1 ThalesADS_DISSERT.pdf: 1900088 bytes, checksum: 66181f9d19ef62cb9b74c6a6c0fbce71 (MD5) Approved for entry into archive by Vanessa Christiane (referencia@ufersa.edu.br) on 2019-04-10T14:05:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 ThalesADS_DISSERT.pdf: 1900088 bytes, checksum: 66181f9d19ef62cb9b74c6a6c0fbce71 (MD5) Approved for entry into archive by Vanessa Christiane (referencia@ufersa.edu.br) on 2019-04-10T14:06:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 ThalesADS_DISSERT.pdf: 1900088 bytes, checksum: 66181f9d19ef62cb9b74c6a6c0fbce71 (MD5) Made available in DSpace on 2019-04-10T14:06:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ThalesADS_DISSERT.pdf: 1900088 bytes, checksum: 66181f9d19ef62cb9b74c6a6c0fbce71 (MD5) Previous issue date: 2018-08-24 Trabalho não financiado por agência de fomento, ou autofinanciado O período de alta disponibilidade de alimento determina a época de realização de atividades de alta-demanda energética em Aves, como a reprodução e muda de penas. Podem ocorrer balanços de compensação (trade-off) no investimento energético-nutricional entre estas atividades e outras funções essenciais a sobrevivência, como investimento no sistema imunológico. Sob estas condições, alguma atividade pode ser prejudicada gerando estresse fisiológico para o organismo. Uma forma de mensurar esse estresse é determinar a razão entre dois tipos de células sanguíneas: heterófilos (H) e linfócitos (L), razão esta que tende a aumentar em resposta a estressores. Nas Aves, a relação entre reprodução, muda e disponibilidade de alimento são potenciais alteradores da razão H/L. No presente estudo quantificamos a ocorrência de mudas de penas primárias e placas de incubação em uma população de Coryphospingus pileatus entre 2012 e 2017 e obtivemos amostras de esfregaço de sangue entre 2016 e 2017, com o objetivo de testar as seguintes hipóteses: (1) A realização da reprodução e muda provocariam aumento nos valores de H/L; (2) Nos períodos de maior disponibilidade de alimento (biomassa de artrópodes) os valores de H/L seriam menores. Registramos 1094 indivíduos, sendo 985 adultos, com 63 registros de placa de incubação e 169 de muda de penas. Obtivemos 92 lâminas com esfregaço de sangue de indivíduos adultos de C. pileatus. A razão H/L foi significativamente negativamente dependente da proporção de indivíduos com placa– muda e da abundância de artrópodes, sendo a relação positiva em ambas regressões. Esta relação foi mais intensa quando restringimos os dados ao período de ocorrência de placa-muda. A relação positiva entre H/L e abundância de alimento não era esperada, pois a maior disponibilidade de alimento significa mais energia disponível para os organismos realizarem suas atividades. Por outro lado, a relação negativa observada entre placa-muda e H/L pode ser explicada pela temporalidade do processo. O curto período e alta sazonalidade do período chuvoso e de maior disponibilidade de alimento nos ambientes semiáridos condicionam a realização das atividades de reprodução e muda em um curto período afetando negativamente o sistema imune. A potencial recuperação do sistema imune no fim do período chuvoso, quando é baixa a abundância de alimentos, indica que o período seco e a falta de alimento não devem gerar restrições energéticas suficientes para impedir a recuperação do sistema imune. Portanto, concluímos que as atividades intrínsecas placa de incubação imuda de penas parecem ser as maiores responsáveis pelo estresse fisiológico em C. pileatus em ambientes semiáridos. Não informado.

Made available in DSpace on 2020-01-20T17:15:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 6152_13179.pdf: 1187780 bytes, checksum: ca698e34bf1c5b066f417c156e158af9 (MD5) Previous issue date: 2018-06-05

O nonilfenol etoxilado (NPE) é um desregulador endócrino que está presente no meio ambiente devido ao seu uso como detergente nos processos de limpeza de efluentes industriais. O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência do NPE sobre o sistema imune adaptativo em ratos Wistar machos. Nestes animais foram avaliados o efeito do NPE sobre as células linfocitárias periféricas através da realização de hemograma e do perfil linfocitário adaptativo, analisando os marcadores de superfície CD4, CD8, CD28 e CD45 RA. Foi também avaliado o efeito do tratamento sobre o fígado e baço, bem como sobre o metabolismo intermediário, através das análises de glicemia, triglicerídeos e colesterol. Os dados não demonstraram diferenças significativas em relação ao índice hepático e esplênico. O nível de triglicerídeos apresentou um aumento de 50% nos grupos tratados, na avaliação dos níveis de colesterol e glicose não foi demonstrado diferenças significativas entre os grupos. Os resultados indicaram que o número de linfócitos e monócitos dos grupos tratados tiveram uma queda significativa de aproximadamente 25% e 50% em relação ao grupo controle. Foi demonstrado que o número de células fortemente marcadas quanto à presença da proteína CD45RA High na superfície celular dos linfócitos é maior nas células dos ratos do grupo tratado e que o tratamento aumenta a relação entre as células CD45RA High/Dim. Esses resultados levantam a hipótese que as células aumentadas nos grupos tratados apresentam fenótipo de membrana compatível com células T terminalmente diferenciadas (TEMRA). Este estudo forneceu dados novos sobre a ação do NPE, até onde se tem conhecimento, é a primeira pesquisa a constatar a presença elevada de células TEMRA em animais tratados com NPE, contribuindo com um novo foco para futuras pesquisas dessa substância. Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico, CNPq Ethoxylated nonylphenol (NPE) is an endocrine disruptor that is present in the environment because of its use as a detergent in the industrial effluent cleaning processes. The objective of this work was to evaluate the influence of ethoxylated nonylphenol (NPE) on the adaptive immune system in male Wistar rats. In these animals, the effect of NPE on peripheral lymphocyte cells was evaluate by performing hemogram and adaptive lymphocytic profile, analyzing CD4, CD8, CD28 and CD45 RA surface markers. The effect of treatment on the liver and spleen, as well as on the intermediate metabolism, was also evaluate through glycemic, triglyceride and cholesterol analyzes. The data did not show significant differences in relation to the hepatic and splenic index. The level of triglycerides presented a 50% increase in the treated groups; in the evaluation of cholesterol and glucose levels, no significant differences between the groups were demonstrate. The results indicated that both, the number of lymphocytes and monocytes of the treated groups had a significant decrease of approximately 25% and 50% relative to the control group. The number of strongly labeled cells for the presence of the CD45RA High protein on the cell surface of the lymphocytes showed to be higher in the cells of the mice in the treated group and that the treatment increases the ratio between the CD45RA High/Dim cells. These results raise the hypothesis that enlarged cells in the treated groups exhibit terminally differentiated T cell (TEMRA). This study provided new data on the action of NPE, to the best of our knowledge, is the first research to verify the elevated presence of TEMRA cells in animals treated with NPE. In addition, these findings contribute a new focus for future research on this substance.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2015. Nos últimos 20 anos, a utilização de anticorpos monoclonais para fins terapêuticos tem sido um grande aliado para o tratamento de diversas enfermidades. Anticorpos anti-CD3 são utilizados na prevenção de órgãos transplantados e apresenta potencial para tratar enfermidades autoimunes. Entretanto, a utilização desses anticorpos, apesar de eficientes geram uma resposta imunogênica, pois a maioria deles possui origem murina, quando administrado impossibilitando o uso frequente, como o OKT3. A humanização de anticorpos, que é realizada por meio de manipulações genicas, tem sido uma solução pratica para esse problema, atenuando a resposta imunogênica desencadeada pelo uso de anticorpos murinos. A partir de uma biblioteca de anticorpos humanos construída a partir da técnica de Phage Display é possível a construção de novos anticorpos humanos com maior eficiência de ligação resultando menos efeitos adversos, auxiliando na clínica dessas doenças e melhorando a qualidade de vida dos pacientes. No presente estudo, a partir de uma construção sintética scFvRVL_gen3 contendo VH e VL humanizado e a sequência genica codificadora da proteína 3 (gene 3) foi possível construir um plasmídeo utilizando o vetor pCIgRM (plasmídeo anti- CD3 contendo VH e VL murino), resultando em 4 clones positivos para a construção pCIgRVL_G3. Para a amplificação dos genes VL da biblioteca de anticorpos humanos no vetor pCOMB 3X após o teste de 23 sistemas de reações distintas de PCR, foi estabelecido a otimização assim como as condições para que o mesmo acontecesse. O produto então foi clonado no vetor pGEM®T para o estudo da eficiência da reação de amplificação e diversidade da biblioteca. Os dados obtidos nesse estudo são ferramentas uteis para a clonagem das várias sequencias de VL amplificadas no vetor pCIgRVL_G3 substituindo o VL sintético pela biblioteca de VL humanos, e assim possibilitando passo à frente para a construção de um anticorpo monoclonal humano anti-CD3. T Over the past 20 years, the use of monoclonal antibodies for therapeutic purposes has been a great ally for the treatment of various diseases. Anti-CD3 antibodies are used in the prevention of transplant organs and have the potential to treat autoimmune diseases. However, the use of these antibodies, although efficient generate an immune response because most of them have murine origin, when administered preventing the frequent use, such as OKT3. The humanization of antibodies, which is performed by means of gene manipulation, it has been a practical solution to this problem, reducing the immunogenic response elicited by the use of murine antibodies. From a human antibody library constructed from a phage display technique it is possible to build new human antibodies with the highest binding efficiency resulting in less adverse effects in helping these clinical diseases and improving the quality of life of patients. In this study, from a synthetic construct scFvRVL_gen3 containing humanized VH and VL gene and the coding sequence of the protein 3 (gene 3) was constructed using a plasmid vector pCIgRM (plasmid containing anti-CD3 murine VH and VL), resulting 4 positive clones for pCIgRVL_G3 construction. For amplification of VL of the human antibody gene library in vector pComb 3X after the 23 different test systems PCR reactions, thereby optimizing the conditions has been established for it to happen. The product was then cloned into the vector pGEM®T to study the efficiency of the amplification reaction and library diversity. The data obtained in this study are useful tools for cloning of various sequences of the amplified VL pCIgRVL_G3 VL vector by replacing the synthetic human VL library, thus allowing step forward for the construction of a human monoclonal anti-CD3 antibody.

Submitted by azevedo@ufp.pt (azevedo@ufp.pt) on 2018-05-14T12:05:11Z No. of bitstreams: 1 PPG_27762.pdf: 1229379 bytes, checksum: 80ca694da3507a19ca6174bb7cf68128 (MD5) Approved for entry into archive by halves@ufp.pt (halves@ufp.pt) on 2018-05-15T11:35:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PPG_27762.pdf: 1229379 bytes, checksum: 80ca694da3507a19ca6174bb7cf68128 (MD5) Made available in DSpace on 2018-05-15T11:35:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PPG_27762.pdf: 1229379 bytes, checksum: 80ca694da3507a19ca6174bb7cf68128 (MD5) Previous issue date: 2018-02-19

Orientador: Marcio Alberto Torsoni Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Aplicadas Resumo: A sepse é uma das principais causas de morte em pacientes hospitalizados, e a inflamação crônica e de baixo grau observada na obesidade é um importante fator contribuinte. No entanto, pouco se sabe a respeito de uma dieta hiperlipídica de curto prazo (HFD) e seu papel no desenvolvimento da sepse. Aqui, mostramos, pela primeira vez, que o consumo de HFD a curto prazo prejudica a sinalização mediada pela subunidade... O resumo poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: Sepsis is one of the leading causes of death in hospitalized patients, and the chronic and low-grade inflammation observed in obesity is a major contributing factor. However, little is known with respect to a short-term high-fat diet (HFD) and its role in the development of sepsis. Here, we show for the first time, that short-term HFD consumption impairs early nicotinic acetylcholine receptor... The abstract is available with the full electronic document Doutorado Metabolismo e Biologia Molecular Doutora em Ciências da Nutrição e do Esporte e Metabolismo CAPES

A imunossenescência é caracterizada pelo declínio funcional do sistema imune. Envolve mudanças fenotípicas que se traduzem em alterações sistêmicas, tendo importante impacto na sua funcionalidade. A imunossenescência tem sido associada a evolução e desfecho clínico de muitas doenças associadas ao envelhecimento prematuro, como a obesidade. A obesidade é uma condição patológica associada a expansão do tecido adiposo e a uma inflamação crônica de baixo grau que exerce efeitos negativos em múltiplos tecidos. Evidências de senescência celular, como atividade da enzima beta galactosidase (β-gal) aumentada, presença de fenótipo secretor associado a senescência e a expressão aumentada da proteína supressora de tumor TP53 (p53) e CDKN1A (p21) tem sido descritas no tecido adiposo de indivíduos portadores de obesidade. No entanto, é pouco explorado na literatura como esta inflamação sistêmica pode impactar no possível envelhecimento prematuro do sistema imune em indivíduos portadores de obesidade. Assim, o objetivo desta tese foi avaliar alterações associadas a imunossenescência prematura em células mononucleares de sangue periférico (PBMC) expostas ao ambiente pró-inflamatório próprio da obesidade. Para isto, foram utilizadas três abordagens experimentais: (1) análise de parâmetros associados a imunossenescência prematura em PBMC saudáveis incubadas com plasma de indivíduos portadores de obesidade; (2) análise de parâmetros de imunossenescência em macrófagos diferenciados a partir da linhagem celular U-937 e incubados com plasma de indivíduos portadores de obesidade sem comorbidades ou com síndrome metabólica e (3) validação dos parâmetros de imunossenescência em PBMC de indivíduos portadores de obesidade. Nossos resultados mostraram que o plasma de indivíduos portadores de obesidade é capaz de modular o fenótipo de PBMC previamente saudáveis, induzindo aumento na morte celular por apoptose, sinalização comprometida de H2AFX e TP53, disfunção mitocondrial basal e associada a produção de ATP, aumento de linfócitos senescentes T auxiliares CD4+CD28- e citotóxicos CD8+CD28-, secreção de citocinas inflamatórias e ativação de monócitos e macrófagos. Além disso, o plasma de indivíduos portadores de obesidade, independente da presença de comorbidades, induziu aumento da atividade da enzima β-gal associada com a diminuição da viabilidade de macrófagos, aumentando sua capacidade fagocítica. Parte destes dados foram confirmados em PBMC de indivíduos portadores de obesidade, mostrando aumento da taxa de morte celular por apoptose, instabilidade genômica através de uma cinética de reparo de dano ao DNA comprometida, menor sinalização de H2AFX e aumento na frequência de micronúcleos e cariólise. Ainda, foi confirmada a redução da sinalização da via TP53/CDKN2A (p53/p16) e de ERK1/2 e o aumento na secreção de citocinas inflamatórias. Juntos, nossos dados confirmam a hipótese da obesidade como uma patologia associada a imunossenescência prematura e instabilidade genômica. Immunosenescence is characterized by the functional decline of the immune system. It involves phenotypic changes that translate into systemic modifications, having an important impact on its functionality. Immunosenescence has been associated with evolution and clinical outcome of many diseases associated with premature aging, such as obesity. Obesity is a pathological condition associated with the expansion of adipose tissue and chronic low-grade inflammation that exerts its negative effects on multiple tissues. Evidence of cell senescence, such as increased beta-galactosidase (β-gal) enzyme’s activity, presence of the secretory phenotype associated with senescence, and increased expression of the tumor suppressor proteins TP53 (p53) and CDKN1A (p21) have been described in adipose tissue of individuals with obesity. However, it is not understood how this systemic inflammation can impact on premature aging of the immune system in individuals with obesity. Thus, the aim of this thesis is to evaluate changes associated with premature immunosenescence in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) exposed to the proinflammatory environment of obesity. We used three different experimental approaches: (1) analysis of parameters associated with premature immunosenescence in healthy PBMC incubated with plasma from individuals with obesity; (2) analysis of immunosenescence parameters in the differentiated U-937 macrophages cell line incubated with plasma from subjects with obesity without comorbidities or with the metabolic syndrome and (3) validation of immunosenescence parameters in PBMC of individuals with obesity. Our results showed that the plasma of individuals with obesity can modulate the phenotype of previously healthy PBMC, inducing increased cell death by apoptosis, compromised signaling of H2AFX and TP53, basal mitochondrial dysfunction associated with ATP production, increased lymphocytes senescent T helper CD4+ CD28- and cytotoxic CD8+CD28-, secretion of inflammatory cytokines and activation of monocytes and macrophages. In addition, the plasma of individuals with obesity, regardless of the presence of comorbidities, induced an increase in the activity of the β-gal enzyme associated with decreased viability of macrophages, associated with increased phagocytic capacity. Some of these data were confirmed in PBMC of individuals with obesity, showing increased rate of cell death by apoptosis, genomic instability through DNA damage repair kinetics, decreased H2AFX signaling and increased micronucleus frequency and karyolysis. Furthermore, we confirmed reduction of TP53/ CDKN2A (TP53/p16) and ERK1/2 pathway signaling and increased secretion of inflammatory cytokines. Taking together, our data confirm the hypothesis of obesity as a pathology associated with premature immunosenescence and genomic instability.

Orientador: Prof. Dr. Luiz Cláudio Fernandes Coorientadora: Profa. Dra. Marcia Helena Appel Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Fisiologia. Defesa : Curitiba, 19/01/2018 Inclui referências: p.54-66 Resumo: Introdução: Ácidos graxos poli-insaturados ômega 3 (AGPI n-3) têm sido utilizados como coadjuvantes no tratamento do câncer. Objetivo: Investigar o efeito da suplementação com 4g/dia de pacientes com câncer de mama por 14 dias antes da cirurgia com um óleo de peixe com concentração elevada de ácido eicosapentaenóico (EPA) chamado Hi-n3. Para tanto foram analisados função linfocitária e parâmetros metabólicos. Material e métodos: Ensaio clínico controlado com pacientes do sexo feminino (18-80 anos de idade), com câncer de mama e em tratamento no Hospital Erasto Gaertner em Curitiba-PR, foram divididas em dois grupos, não suplementadas (GC) e suplementadas com Hi-n3 (Hi-n3) por 14 dias previamente ao procedimento cirúrgico. Os experimentos foram conduzidos no tempo 0, antes da introdução da suplementação (T0) e 15 ao final do período de suplementação e antes da cirurgia (T15). Nos dois momentos foram coletadas amostras de sangue para determinação dos parâmetros hematológicos e para o isolamento de linfócitos. O plasma foi usado para mensurar parâmetros bioquímicos e outros parâmetros associados à caquexia relacionada ao câncer. E os linfócitos foram cultivados para determinação da proliferação e isotipados. Resultados: No GC os AGPI permaneceram inalterados, já no Hi-n3 houve alterações significativas (p0.05 Hi-n3 T0 vs. T15). Em relação aos parâmetros bioquímicos referentes à caquexia, a suplementação com Hi-n3 ocasionou redução significativa na concentração de lactato, triacilgliceróis (TAG) e proteína C reativa (PCR) (p 0.05 Hi-n3 T0 vs. T15). In relation to the biochemical parameters related to cachexia, supplementation with Hi-n3 caused significant reduction in the concentration of lactate, triacylglycerols (TAG) and Creactive protein (CRP) (p

As fotodermatoses autoimunes constituem um grupo heterogéneo de dermatoses idiopáticas incluindo cinco entidades clinicamente distintas: erupção polimorfa à luz, prurigo actínico, hydroa vacciniforme, dermite actínica crónica e urticária solar. Algumas destas dermatoses são potencialmente graves e com grande impacto na qualidade de vida dos doentes. Várias medidas de fotoprotecção são suficientes para o tratamento de doentes com formas ligeiras. As opções terapêuticas actuais são limitadas em doentes com doença grave e refractária, reflectindo os mecanismos fisiopatológicos pouco clarificados. Ainda assim, avanços recentes na área da fotoprotecção têm contribuído para um maior sucesso terapêutico. Numa altura em que a área da fotodermatologia tem vindo a perder gradualmente o seu impacto, propomos rever as manifestações clínicas e abordagens terapêuticas actuais das fotodermatoses idiopáticas, entidades raras e que impõem desafios relevantes no seu diagnóstico e tratamento.

Experimentos realizados na metade do século XX introduziram o conceito do sistema nervoso central (SNC) como local "imunologicamente privilegiado", pois o parênquima cerebral possura tolerância a enxertos heterólogos, diferentemente dos tecidos periféricos. De fato, o SNC possui características que o diferenciam imunologicamente de outros tecidos e durante muito tempo acreditou-se que a presença de células e fatores solúveis imunológicos no SNC possuía apenas consequências prejudiciais. Entretanto, a relação entre esses dois sistemas é mais complexa do que inicialmente imaginada e não está envolvida apenas em casos deletérios, com recentes evidências apontando para um papel fundamental das células T na função encefálica adequada. O presente trabalho visa investigar 1) o impacto da imunodeficiência de células T em camundongos atímicos nude sobre comportamentos relevantes para o estudo de transtornos do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricos, e 2) avaliar parâmetros sinápticos de excitação/inibição e citocinas moduladoras de tais comportamentos no córtex pré-frontal mediai. Foi encontrado um padrão complexo de alterações comportamentais em diferentes domínios (repetitivo/estereotipado, nociceptivo e social), além de redução da proteína sináptica excitatória PSD-95 e diminuição da expressão gênica de IFN-y, uma importante citocina moduladora do comportamento social, no córtex pré-frontal dos animais imunodeficientes. A redução da expressão gênica de IFN-y no córtex pré-frontal dos camundongos nude e uma potencial ausência de células T secretoras de IFN-y nas meninges poderiam estar relacionados com os déficits sociais encontrados. A redução do imunoconteúdo de PSD-95 no córtex pré-frontal não parece estar de acordo com as observações de prejuízos sociais causados por hiperexcitabilidade, sugerindo que outros mecanismos podem estar envolvidos na alteração encontrada. Concluímos com presente trabalho que a linhagem BALB/c nude oferece potencial para o estudo de interações neuroimunológicas, embora ainda seja necessária uma caracterização comportamental mais completa e avaliação da eletrofisiologia cortical desses animais para compreensão dos mecanismos envolvendo o equilíbrio excitatório/inibitório e a imunodeficiência de células T nas alterações encontradas. Experiments performed in the mid-twentieth century introduced the concept of the central nervous system (CNS) as an "immunologically privileged" site, since the brain parenchyma had tolerance to heterologous grafts, unlike peripheral tissues. lndeed, the CNS has features that immunologically differentiate it from other tissues and it has long been believed that the presence of soluble cells and immune factors in the CNS had only detrimental consequences. However, the relationship between these two systems is more complex than initially imagined and is not involved only in deleterious cases, with recent evidence pointing to a key role of T cells in adequate brain function. In the present work, we aimed 1) to investigate the impact of T -cell immunodeficiency on athymic nude mice on behaviors relevant to the study of neurodevelopmental and neuropsychiatric disorders and 2) to evaluate excitatory/inhibitory synaptic parameters and cytokines modulating such behaviors in the mediai prefrontal cortex. A complex pattern of behavioral changes was found in different domains (repetitive/stereotyped, nociceptive and social), as well as a reduction in the PSD-95 excitatory synaptic protein and a decrease in the gene expression of IFN-y, an important social behavior modulating cytokine on the prefrontal cortex of immunodeficient animais. Reduced IFN-y gene expression on the prefmntal cortex of nude mice and a potential absence of IFN-y-secreting T cells in the meninges could be related to the social deficits observed. Reduction of the PSD- 95 immunocontent on the prefrontal cortex does not appear to be in agreement with observations of social impairment caused by hyperexcitability, suggesting that other mechanisms may be involved in the that alteration. In conclusion, the BALB/c nude strain offers potential to the study of neuroimmune interactions, although a more complete behavioral characterization and evaluation of the cortical electrophysiology of these animais is necessary to understand the mechanisms involving the excitatory/inhibitory balance and the T cell immunodeficiency in the alterations observed.

A paracoccidioidomicose (PCM) é uma infecção causada pelos fungos do gênero Paracoccidioides. A forma crônica é a mais comum e acomete principalmente os pulmões, mas pode se disseminar para outros órgãos produzindo lesões secundárias. Constitui-se uma doença de saúde pública com alto impacto econômico por comprometer a saúde dos trabalhadores durante sua fase produtiva, podendo chegar ao ponto de causar a sua morte. Essa doença é marcada por uma forte predileção pelo gênero masculino e essa diferença ocorre em virtude do 17β-estradiol exercer um efeito inibidor na transformação da forma de micélio em levedura. Os objetivos deste estudo foram avaliar a existência de receptores de estrógeno alfa (ER1) e receptores de progesterona (PR) em lesões orais da PCM crônica e procurar correlacionar com a quantidade de fungos e com o CD163 em homens e mulheres. Foram utilizados 32 fragmentos de biopsias da mucosa bucal de pacientes diagnosticados com a PCM, obtidos do Laboratório de Anatomopatologia da Unifal-MG e que foram submetidos à análise imuno-histoquímica pelos marcadores ER1, PR, Anti-Pb e CD163. Os resultados obtidos foram tabulados e realizou-se a análise estatística com os testes não paramétricos do coeficiente de correlação de Spearman e o Teste de Mann-Whitney, com um nível de significância de 5%. O ER1 foi expresso apenas em mulheres e, quando foi correlacionado com a quantidade de fungos, apresentou uma correlação positiva significativa (r= 0,6844, p= 0,0034). O PR foi expresso em ambos os gêneros, porém não apresentou correlação com a quantidade de fungo (p= 0,8343). A quantidade de fungos e a expressão do CD163 entre os gêneros não se mostraram significativas (respectivamente, p= 0,8802 e p= 0,9699). Os resultados indicaram que o ER1 pode ser mais expresso em mulheres e que a expressão deste hormônio está correlacionada positivamente com a quantidade de fungos. O PR foi expresso em ambos os gêneros e não mostrou nenhuma correlação com o ER1 e a quantidade de fungos. O CD163 não apresentou correlação com nenhum dos imunomarcadores. Paracoccidioidomycosis (PCM) is an infection caused by fungi of the genus Paracoccidioides. The chronic form is the most common and affects mainly the lungs, but can spread to other organs producing secondary lesions. It constitutes a public health disease with high economic impact by compromising the health of workers during their most productive lifespan, and may even lead to their death. PCM is marked by a strong predilection for males and this difference occurs as a result of the 17 β-estradiol inhibitory effect on mycelium turns into the pathogenic form of the yeast. The objectives of the present study were to evaluate the immunostaining of estrogen receptors alpha (ER1) and progesterone receptor (PR) in oral lesions of chronic PCM and correlate with the amount of fungi and CD163 expression in men and women. Third-two fragments of oral mucous membrane biopsy of patients diagnosed with PCM were included in the study. The specimens were obtained from the Laboratory of Oral Pathology of Unifal-MG and were subjected to immunohistochemical analysis by markers ER1, PR, Pb and CD163. The results were tabulated and the statistical analysis was performed using the nonparametric tests Spearman correlation coefficient and the Mann-Whitney Test, with a significance level of 5%. The ER1 was found only in women. A significant positive correlation was observed between estrogen and amount of fungi (r = 0.6844, p = 0.0034). Regarding PR was expressed in both genders, but showed no correlation with the amount the fungi (p = 0.8343). Moreover, there was no difference between genders considering oral fungal cell number and CD163 immunostaining (p = 0.8802 and p = 0.9699, respectively). The results indicated that the ER1 may be more expressed in women and that the expression of this hormone is positively correlated with the amount of fungi. The PR was expressed in both genders and showed no correlation with the ER1 and the amount of fungi. The CD163 showed no correlation with any of the immunomarkers. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Objective: To investigate scientific evidence related to the term protection and clinical indicators and etiologic factors for nursing diagnosis Ineffective protection in adolescents with cancer. Method: Integrative literature review in the databases of Scopus, Web of Science, National Library of Medicine and National Institutes of Health (PubMed) and Cochrane; by intersection of the descriptors protection and childhood cancer, which resulted in seven articles. These were insufficient for a comprehension of the term protection and aspects related to its impairment, therefore it was necessary to include a further three reference books. Results: Five clinical indicators and three etiologic factors associated to Ineffective protection were identified some of which were not cited in NANDA-International. Conclusions: There are clinical and etiologic factors important for the identification of ineffective protection in adolescents with cancer. RESUMEN Objetivo: Investigar las evidencias científicas acerca del término protección y de los indicadores clínicos y factores etiológicos del diagnóstico de enfermería Protección ineficaz en adolescentes con cáncer. Método: Se realizó una revisión integradora en las bases de datos Scopus,Web of Science, National Library of Medicine andNationalInstitutesof Health (PubMed) y Cochrane; por medio del cruce de los términosprotection and childhood cancer, que resultó en siete artículos. Estos no fueron suficientes para la comprensión del término protección y de los aspectos asociados a su alteración, siendo necesario incluir tres libros. Resultados: Fueron identificados cinco indicadores clínicos y tres factores etiológicos asociados a una protección ineficaz, algunos no citados en la NANDA-Internacional. Conclusión: Existen indicadores clínicos y factores etiológicos que pueden ser importantes para identificar una alteración en la protección de adolescentes con cáncer. RESUMO Objetivo: Investigar as evidências científicas acerca do termo proteção e dos indicadores clínicos e fatores etiológicos do diagnóstico de enfermagem Proteção ineficaz em adolescentes com câncer. Método: Realizou-se uma revisão integrativa nas bases de dados Scopus, Web of Science, National Library of Medicine and National Institutes of Health (PubMed) e Cochrane; por meio do cruzamento dos termos protection and childhood cancer, que resultou em sete artigos. Estes não foram suficientes para a compreensão do termo proteção e dos aspectos associados à sua alteração, sendo necessário incluir três livros. Resultados: Foram identificados cinco indicadores clínicos e três fatores etiológicos associados a uma proteção ineficaz, alguns não citados na NANDA-Internacional. Conclusões: Existem indicadores clínicos e fatores etiológicos que podem ser importantes para identificar uma alteração na proteção de adolescentes com câncer.

Submitted by SERGIO MANUEL RUGELES REYES null (smrugelesr@gmail.com) on 2018-01-04T14:31:39Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao FINAL FINAL.pdf: 839997 bytes, checksum: 1ff42407d98ebf9f8e9ead2312027554 (MD5) Approved for entry into archive by Alexandra Maria Donadon Lusser Segali null (alexmar@fcav.unesp.br) on 2018-01-05T10:00:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 rugelesreyes_sm_me_jabo.pdf: 839997 bytes, checksum: 1ff42407d98ebf9f8e9ead2312027554 (MD5) Made available in DSpace on 2018-01-05T10:00:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 rugelesreyes_sm_me_jabo.pdf: 839997 bytes, checksum: 1ff42407d98ebf9f8e9ead2312027554 (MD5) Previous issue date: 2017-10-11 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) A deficiência de zinco atinge um terço da população mundial e uma estratégia para solucionar essa problemática é a biofortificação agronômica de hortaliças. A rúcula tem ganhado notoriedade nos últimos anos devido às suas propriedades nutricionais e boa aceitação pelos consumidores. Em razão do incremento no seu consumo, torna-se uma hortaliça folhosa com alto potencial para estudos de biofortificação agronômica com zinco, porém, ainda são poucas as pesquisas feitas a respeito. Assim, em um solo com alto teor do micronutriente, objetivou-se avaliar o efeito de aplicações foliares de zinco, em diferentes épocas, sobre parâmetros fisiológicos, produtivos e nutricionais de rúcula ‘Folha larga’, visando à biofortificação agronômica. O experimento foi instalado na UNESP, câmpus Jaboticabal e foram avaliados dois fatores: dose de Zn (0,5; 1 e 1,5 kg ha-1 de Zn) e épocas de aplicação (15 dias após a emergência - DAE, 20 DAE, 25 DAE, 15 e 20 DAE e 15, 20 e 25 DAE) mais um controle, que não recebeu aplicação de zinco. Observou-se que não houve efeito dos fatores nem da interação nas variáveis fisiológicas, assim como na altura, área foliar e massa fresca da parte aérea. Doses de Zn afetaram os teores de N, Mn e P, enquanto para Cu e Fe não foram encontrados efeitos significativos. Verificou-se que com aplicação de 1,5 kg ha-1 de Zn, feita aos 25 DAE, obteve-se maior teor de Zn nas folhas de rúcula, representando incremento de 279% em relação ao controle, denotando a efetividade de aplicações foliares de zinco como estratégia de biofortificação em rúcula. Zinc deficiency affects a third of the world population and a strategy to solve this problem is agronomic biofortification of vegetables. Arugula has gained importance in recent years due to its nutritional properties and good acceptance by consumers. Due to the increase in its consumption, it becomes a leafy vegetable with high potential for studies of agronomic biofortification with zinc, however, few researches have been done about them. Thus, in a soil with high micronutrient content, the objective was to evaluate the effect of foliar zinc applications, at different times, on physiological, productive and nutritional parameters of 'Broad Leaf' arugula, aiming at agronomic biofortification. The experiment was realized at UNESP, Jaboticabal Campus and two factors were evaluated: Zn dose (0.5, 1 and 1.5 kg ha-1 of Zn) and times of application (15 days after emergence - DAE, 20 DAE, 25 DAE, 15 and 20 DAE, and 15, 20 and 25 DAE) plus one control, which did not receive zinc application. It was observed that there was no effect of the factors or the interaction in the physiological variables, as well as in the height, leaf area and fresh mass of the aerial part. Doses of Zn affected the contents of N, Mn and P, whereas for Cu and Fe no significant effects were found. It was verified that with the application of 1.5 kg ha-1 of Zn, realized at 25 DAE, a higher Zn content was obtained in the arugula leaves, representing an increase of 279% in relation to the control, showing the effectiveness of foliar applications of zinc as a biofortification strategy in arugula.

Introdução: O envelhecimento populacional é um fenômeno mundial que ocorre de forma acelerada, principalmente nos países em desenvolvimento, como o Brasil. Possui repercussões sobre o estado nutricional, resposta imune e de saúde principalmente quando está relacionado à doença infecciosa, como a hanseníase. Portanto, torna-se relevante investigar o impacto da doença infecto contagiosa no estado nutricional de indivíduos idosos e adultos. Objetivo: Avaliar o perfil nutricional de idosos e adultos com hanseníase. Métodos: Estudo transversal realizado com indivíduos idosos e adultos infectados ou não com hanseníase, atendidos na Casa da Unimed e no Centro de Referência em Doenças Endêmicas e Programas Especiais (CREDEN-PES) Dr. Alexandre Castelo Branco de Governador Valadares/Minas Gerais no período de agosto a dezembro de 2015. A coleta de dados demográficos, socioeconômicos e de condições de Saúde foi baseada no questionário Genetics of Healthy Aging (GEHA) utilizado em Bologna. A Avaliação antropométrica foi realizada por meio das medidas: peso, circunferência da cintura (CC), circunferência do braço (CB), dobras cutâneas tricipital (DCT), subescapular (DCSE), supra ilíaca (DCSI) e bicipital (DCB). O inquérito alimentar foi por meio do Recordatório Alimentar Habitual, Questionários de Frequência Alimentar e História Alimentar e a Avaliação Bioquímica. O estudo foi aprovado pelo comitê de ética da UFMG com número de registro-COEP: 728/11. Foram realizadas análises descritivas e testes estatísticos de Mann-Whitney para comparação de medianas e o Qui-Quadrado ou Exato de Fisher para comparação de proporções. As análises foram realizadas com auxílio do software Statistical Package for the Social Sciences (SPSS) versão 20.0 e adotado nível de significância de 5% (p

O Lupus Eritematoso Sistemico (LES) e uma doenca autoimune, inflamatoria, que atinge orgaos e tecidos, sendo dez vezes mais comum em mulheres. Desta forma, este estudo teve como objetivo descrever os fatores de risco que atuam na genese do LES. Realizou-se um estudo de revisao entre os dias 18 e 23 de fevereiro de 2013 na base de dados do Scientific Electronic Library Online (SciELO) e pelo buscador Google Academico. Foram utilizados os descritores ‘’Lupus’’ and ‘’fator’’ and “risco’’. Os resultados mostram os principais fatores de risco para o desenvolvimento do LES, como: predisposicao genetica, presenca de autoanticorpos, desregulacao dos linfocitos T e deficiencia de vitamina D. De forma geral, o conhecimento sobre os fatores envolvidos na autoimunidade tem evoluido muito nos ultimos anos, inumeros marcadores geneticos tem sido descobertos e outros tantos foram revistos. Pode-se afirmar que e conhecida uma serie de fatores que estao envolvidos na genese do LES, embora ainda, nao se possa apontar para uma causa especifica.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2017. O câncer de mama é o câncer mais comum entre as mulheres, com aproximadamente 1,7 milhões de casos diagnosticados anualmente em todo o mundo. Os fatores genéticos, estilo de vida e moléculas com propriedades imunoregulatórias estão implicados na etiologia da doença. O antígeno leucocitário humano (HLA-G) possui função imunomoduladora negativa e sua expressão tem sido associada ao câncer de mama. Vários sítios polimórficos foram descritos na região promotora 5' HLA-G (5'URR), que podem afetar a afinidade dos fatores de transcrição e, portanto, influenciar diretamente a expressão da proteína. Assim, o objetivo deste estudo foi analisar a associação de variações de nucleotídeo único (SNVs) da 5'URR do HLA-G com susceptibilidade ao desenvolvimento do câncer de mama e suas manifestações clínicas. Um total de 103 pacientes com câncer de mama e 103 controles foram genotipados para 21 SNVs 5'URR HLA-G. Doze SNVs (nomeados -762C/T CC; -725G/C/T G e CC; -716T/G TT; -689A/G G, GG e GA; -646A/G G, GG e GA; -486A/C A, AA e CA; -483A/G A; -443G/A A e AA; -400G/A A e AA; -399G/A A e AA; -391G/A A e AA; -297G/A A e AA, alelos e genótipos respectivamente), foram associados ao aumento do risco de desenvolvimento de câncer de mama. A análise de desequilíbrio de ligação revelou que SNVs da 5'URR estão em forte desequilíbrio de ligação. Além disso, encontramos uma associação de risco com o Grau Elston-Ellis nas posições -762C/T, -509C/G e -443G/A e dados clínicos TNM nas posições -399G/A e -391G/A. Em conclusão, nossos resultados indicam associação entre os polimorfismos da 5'URR do gene HLA-G e a susceptibilidade ao desenvolvimento de câncer de mama, sugerindo que a regulação da expressão da molécula HLA-G possivelmente está envolvida na patogênese do câncer de mama. Abstract : Breast cancer is the most common cancer among women, with approximately 1.7 million cases diagnosed annually worldwide. Genetic factors, lifestyle and immune regulatory molecules implicate in the etiology of the disease. The Human Leukocyte Antigen-G (HLA-G) is a negative immunomodulatory molecule and its expression has been associated with breast cancer. Several polymorphic sites were described in the HLA-G 5? upstream regulatory region (5?URR) and can affect transcription factors affinity influencing protein expression. The aim of this study was to evaluate the association of 5?URR HLA-G variations (SNVs) and breast cancer susceptibility, development and clinical findings. A total of 103 breast cancer patients and 103 healthy subjects were genotyped for 21 HLA-G 5?URR SNVs. Twelve SNVs ( -762C/T CC; -725G/C/T G and CC; -716T/G TT; -689A/G G, GG and GA; -646A/G G, GG and GA; -486A/C A, AA and CA; -483A/G A; -443G/A A and AA; -400G/A A and AA; -399G/A A and AA; -391G/A A and AA; -297G/A A and AA, alleles and genotypes respectively), were associated with increased risk of developing breast cancer and a strong linkage disequilibrium was observed in this region. Besides that, according with Elston-Ellis scale we found a risk association in -762C/T, -509C/G and -443G/A positions and with clinical data TNM for -399G/A and -391G/A positions. In conclusion, our findings indicate association between some 5?URR HLA-G polymorphisms and the susceptibility to breast cancer, suggesting that these polymorphisms can interfere in HLA-G expression and, consequently, be involved in the pathogenesis of breast cancer.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2017. O câncer de colo do útero é o terceiro câncer mais comum em mulheres em todo o mundo, sendo assim, uma das principais causas de morbidade e mortalidade em países em desenvolvimento. O principal fator de risco é a infecção persistente com certos tipos oncogênicos de papilomavírus humano (HPV), que podem induzir neoplasias intraepiteliais cervicais (NIC) graus 1, 2 e 3. Não tratadas, essas lesões podem progredir para o câncer de colo do útero. O desenvolvimento de tumores depende de diferentes estratégias de escape do reconhecimento por células imunes. O gene HLA-G expressa moléculas de mesmo nome, com papel de regulação da imuno tolerância, envolvidas na inibição de respostas imunes. Sua expressão, em condições patológicas, pode permitir o desenvolvimento da infecção do HPV no trato cervical feminino e desenvolvimento de células tumorais. É proposto que variações de nucleotídeo único (SNVs) presente na região promotora 5' (5'URR) do gene podem influenciar os níveis de HLA-G, modificando a afinidade com fatores de transcrição. O objetivo deste estudo foi verificar a influência de vinte e um SNVs, localizados na 5'URR do HLA-G sobre a suscetibilidade à lesões de colo do útero e fatores de risco em pacientes. As amostras do estudo foram compostas por 83 pacientes e 83 mulheres saudáveis. A genotipagem foi realizada por sequenciamentoe 14 SNVs (-725G/C/T G e CC; -689A/G G, GG e GA; -646A/G G, GG e GA; -539A/G A e AA; -509C/G G, GG e CG; -486A/C CA; -483A/G A e AA; -477C/G G e GG; -443G/A A e AA; -400G/A A e AA; -399G/A A e AA; -391G/A A e AA; -369C/A A e AA; -284G/A A e AA) foram associados ao risco de desenvolvimento de câncer. Além disso, os resultados indicam uma associação entre o gene HLA-G (alelo G nos sítios -539A/G e -477 C/G ) com diferentes graus da lesão (NIC e câncer de colo do útero) e presença/ausência de infecção por HPV. Concluindo, este estudo sugere um possível envolvimento de polimorfismos da 5?URR com risco de infecção por HPV, associada ao desenvolvimento de câncer do colo de útero. Abstract : Cervical cancer is the third most common cancer in women worldwide and one of the main causes of morbidity and mortality in developing countries. The major risk factor is related with the persistent infection with certain types of oncogenic human papillomavirus (HPV), that can induce cervical intraepithelial neoplasias (CIN) grades 1, 2 and 3. If untreated, these lesions may progress to cervical cancer. The tumor development depends on different strategies to escape recognition by immune cells. In this context, the HLA-G molecule has immune tolerance properties, including the inhibition of immune responses. HLA-G expression, under pathological conditions, may allow the development of HPV infection in the female cervical tract and allow the development of tumor cells. It is proposed that, single nucleotide variations (SNVs) present in the 5 'promoter region (5'URR) can influence HLA-G levels modifying the affinity for transcription factors. The aim of this study was to explore the possible association between twenty-one SNVs located on the 5?URR HLA-G, the susceptibility to cervical lesions and patients risk factors. The samples were composed by 83 patients and 83 healthy women. SNVs identification was performed by capillary sequencing and 14 SNVs (-725 G/C/T, -689 A/G, -646 A/G, -539 A/G, -509 C/G, -486 A/C, -483 A/G, -477 C/G, -443 G/A, -400 G/A, -399 G/A, -391 G/A, -369 C/A e -284 G/A) were associated as risk for cervical cancer developing. In addition, it was observed an association between two SNVs (allele G in -539A/G and -477C/G) with different degrees of lesion (CIN and cervical cancer) and the presence or absence of HPV infection. Concluding, this study suggests a possible involvement of HLA-G 5?URR SNVs with HPV infection risk and cervical cancer.

Introdução: A complexidade das populações de células do sistema imunológico infiltrando tumores humanos com seus efeitos sinérgicos ou antagônicos pode influenciar os tumores de forma diferente. Embora as células do sistema imunológico sejam encontradas dentro do sítio tumoral, a razão para incapacidade do sistema imunológico em eliminar o tumor foram pouco elucidadas. Objetivo: Avaliar a importância das diferentes populações de células no sistema imunológico presentes no microambiente tumoral de glioblastoma e seus efeitos sobre as demais células em relação ao prognóstico dos pacientes. Metodologia: Foram utilizados dados de transcriptoma e dados clínicos gerados pelo The Cancer Genome Atlas (TCGA) e meta-assinaturas representando diferentes células do sistema imunológico previamente descritas. A relação entre as meta-assinaturas foi avaliada através de análises de mapa de calor e correlação de Pearson. As análises de sobrevida foram realizadas através de gráficos de Kaplan-Meier das meta-assinaturas individualmente, com dois e três elementos. Resultados e Discussão: Assinaturas transcricionais de diversas populações do sistema imunológico com papel imunossupressor foram encontradas infiltrando tumores de pacientes com glioblastoma, tais como macrófagos, células NK e NK T, MDSCs e Tregs e correlacionaram com um pior prognóstico dos pacientes. As meta-assinaturas T CD8+ e CD4+ não foram capazes de predizer o prognóstico dos pacientes sozinhas. No entanto, na ausência de elementos de imunossupressão, os pacientes com alta expressão da meta-assinatura de células T CD8+ mostraram melhor sobrevida em relação aos demais. Observamos uma divisão das meta-assinaturas em 4 conjuntos distintos, sendo um deles formado por Macrófagos, MDSCs e Tregs demonstrando pior prognóstico e outro cluster contendo CD4 e CD8 conferindo um melhor prognóstico, ambos quando altamente expressos. Esses resultados não se repetiram para gliomas de grau II e III. Conclusão: Se considerarmos as assinaturas transcricionais dos diferentes aspectos da resposta imunológica de forma integrada, teremos um impacto preditivo sobre a sobrevivência com papel positivo para a meta-assinatura referente a linfócitos CD8 e negativos para as meta-assinaturas de macrófagos, MDSC, Tregs, NK e NK T em pacientes com glioblastoma pacientes. A compreensão acerca desses diversos fatores reguladores e estimuladores do sistema imunológico no paciente, bem como no microambiente tumoral, é essencial para delinear uma estratégia eficaz com o objetivo de aumentar a resposta imune antitumoral e gerar benefícios clínicos reais. Introduction: The complexity of immune cell populations infiltrating human tumors with their synergistic or antagonistic effects may influence tumors differently. Although immune cells are found within the tumor site, the reason for the incapacity of the immune system in eliminating the tumor has hardly been elucidated. Objective: To evaluate the importance of different immune cell populations present in the glioblastoma tumor microenvironment and its effects on the other immune cells. Methodology: Transcriptome and clinical data were generated by The Cancer Genome Atlas (TCGA) and meta-signatures representing different cells of the immune system previously described were used. The relationship between meta-signatures was evaluated through heat-map analysis and Pearson's correlation. Survival analysis were performed through Kaplan-Meier plots of meta-signatures individually, with two and with three elements. Results and discussion: Infiltrating immune cells with immunosuppressive role were found in patients with glioblastoma, such as macrophages, NK and NK T cells, MDSCs and Tregs, and were correlated with poorer prognosis of patients. The CD8 + and CD4 + T meta-signatures were not able to predict patients’ prognosis alone. However, in the absence of immunosuppressive elements, patients with higher levels of CD8 + T-cell meta-signatures showed better survival than the opposite expression profile. We observed a division of meta-signatures into four clusters. The cluster consisting of macrophages, MDSCs and Tregs demonstrated the worst prognosis and the cluster containing CD4 and CD8 conferred the best prognosis, when both meta-signatures were highly expressed. These results were not reproduced for grade II and III gliomas. Conclusion: If we consider the transcriptional signatures of the different response immunological aspects in an integrated way, they will have a predictive impact on survival with positive role for CD8 and negative roles for macrophages, MDSC, Tregs, NK and NK T meta-signatures in glioblastoma patients. Understanding these regulatory factors and stimulators of the patients' immune system, as well as the tumor microenvironment, is essential to delineate an effective strategy to increase the anti-tumor immune response and generate real clinical benefits.

Orientador: Margareth Castro Ozelo Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Introdução: Hemofilia A (HA) é uma doença causada pela deficiência do fator VIII (FVIII) da coagulação, resultante de herança genética ligada ao cromossomo X. Uma das principais complicações associadas ao tratamento da HA consiste no desenvolvimento de inibidores, que são anticorpos direcionados contra o FVIII infundido. Fatores de risco genéticos e ambientais estão relacionados à susceptibilidade dos pacientes a desenvolver inibidores, porém, a razão pela qual apenas alguns pacientes o desenvolvem ainda não está clara e sugere que a formação de inibidores esteja relacionada a um complexo processo multifatorial. Objetivo: Avaliar a influência de fatores genéticos no desenvolvimento de inibidores ao FVIII em pacientes com HA grave de diferentes regiões do Brasil. Métodos: Os anticorpos inibitórios de FVIII foram detectados pelo método de Bethesda modificado; as inversões do íntron 22 (INV22) e 1 (INV1) no gene F8 pela técnica de PCR inversa (IS-PCR); mutações de ponto no gene F8 por sequenciamento automático e a genotipagem de polimorfismos em genes imunoregulatórios foi realizada pelo método de discriminação alélica por PCR em tempo real (RT-PCR) com a utilização de ensaios do tipo TaqMan®. Resultados: O diagnóstico de HA grave (FVIII:C 0,6UB em no mínimo duas ocasiões) foi detectada em 97 dos 422 pacientes (22,9%), sendo que 82 (19,4%) foram classificados como inibidores de alta resposta (?5UB). Ao considerarmos o risco de desenvolvimento de inibidor de acordo com o grupo étnico, pacientes negros com HA grave apresentaram 2,18 vezes maior risco para o desenvolvimento de inibidores ao FVIII quando comparados com caucasoides (OR=2,18; 95% IC 1,36-3,50). Enquanto que, descendentes de índios brasileiros se mostraram menos propensos em desenvolver inibidor (OR=0,12; 95% IC 0,01-0,90). Adicionalmente, a análise dos diferentes tipos de mutações no gene F8 mostrou, que o risco de inibidor foi maior entre pacientes com mutações do tipo nonsense e frameshift (OR=2,54; 95% IC 1,17-5,52 e OR=3,08; 95% IC 1,03-9,22, respectivamente) quando comparados com indivíduos com INV22, a causa mais frequente de HA grave. Em relação aos SNPs nos genes imunoregulatórios, a presença do genótipo -857CT no gene TNFA indicou aumento da susceptibilidade ao desenvolvimento de inibidores (OR=1,89; 95% IC 1,11-3,21). Enquanto que portadores dos genótipos -819TT e -592AA no gene IL10 e do haplótipo "CG/CG" no gene TNFA foram menos propensos em desenvolver inibidores (OR=0,34; 95% IC 0,13-0,88 e OR=0,52; 95% IC 0,33-0,83, respectivamente). Conclusão: O estudo em diferentes populações é uma importante etapa para o entendimento dos fatores de risco para o desenvolvimento de inibidores. Esse foi um dos primeiros trabalhos realizados no Brasil incluindo pacientes de diversas regiões e analisando simultaneamente diferentes fatores e seu envolvimento com o desenvolvimento de inibidores. A caracterização desses fatores de risco poderá ajudar no futuro a determinar um tratamento diferenciado para o controle e, sobretudo para a prevenção do desenvolvimento de inibidores Abstract: Introduction: Hemophilia A is a disease caused by deficiency of coagulation factor VIII (FVIII) resulting from genetic inheritance linked to chromosome X. Inhibitor to factor VIII development is the most important complication of hemophilia A (HA) treatment, and consist in antibodies directed against factor VIII infused. The risk factors for the development of inhibitor can be genetic and non-genetic (environmental), however, why only some patients develop inhibitors is not yet known and suggests that the formation of inhibitors is related to a complex multifactorial process. Objective: To assess the influence of genetic factors in the development of FVIII inhibitors in patients with severe hemophilia A from different regions of Brazil. Methods: FVIII inhibitors were detected using modified Bethesda assay; Intron 22 and 1 inversions in gene F8 were genotyped by inverse shifting polymerase chain reaction (IS-PCR); F8 point mutations were detected by automated sequencing, and the SNPs in immune regulatory genes were genotyped using TaqMan® SNP Genotyping Assay Kit. Results: The severe hemophilia A (FVIII:C 0.6 UB/mL on at least two occasions) were detected in 97 of the 422 HA, and in 82 of these cases, the inhibitor was of the high-responding type (? 5 UB/mL). Considering the risk of development according to the ethnic group, black patients with severe hemophilia A are twice as likely as white patients to produce inhibitors against factor VIII protein (OR= 2.18; 95%CI, 1.36-3.50). While, descendants of brazilian indians were less likely to develop an inhibitor (OR=0.12; 95%CI 0.01-0.90). In addition, analysis of the different types of mutations in the F8 gene showed that the risk of developing anti-FVIII antibodies was higher among patients with nonsense and frameshift mutations (OR=2.54, 95%CI, 1.17-5.52 and OR=3.08, 95%CI, 1.03-9.22, respectively) compared with individuals with intron 22 inversion, the most frequent cause of severe HA. Regarding the studied SNPs (single nucleotide polymorphism) in immune regulatory genes, the results indicated increased susceptibility to inhibitors development in patients with the -857CT genotype in gene TNFA (OR=1.89; 95%CI 1.11-3.21). However, patients with the -819TT genotype and -592AA in the gene IL10 and "CG/CG" haplotype in gene TNFA are lower risk to develop inhibitors (OR=0.34; 95%CI 0.13-0.88 e OR=0.52; 95%CI 0.33-0.83, respectively). Conclusion: The study in different populations is important to understand the risk factors for the development of inhibitors. This was one of the first works in Brazil, to study patients from various regions and to analyze different factors and their involvement in the development of inhibitors. The determination of these risk factors will help in the future to determine differential treatment for the control and in particular, for preventing the development of inhibitors Mestrado Clínica Médica Mestra em Ciências CAPES 01-P-3487/2014, 01-P-4351/2015

Acanthamoeba é uma ameba de vida livre, capaz de causar graves infecções como organismo oportunista ou patógeno afetando órgãos como: olhos, pele e sistema nervoso central de humanos, resultado da complexa interação patógeno-hospedeiro, a qual não é totalmente esclarecida. Poucos trabalhos sobre o papel funcional ou patogênico de proteínas que podem ser relevantes no processo de invasão, infecção ou até mesmo para um possível imunodiagnóstico têm sido apresentados. Assim esse trabalho descreve os resultados obtidos a partir de uma análise do repertório de proteínas expressas por trofozoítos de Acanthamoeba castellanii, baseado no conjunto de estratégia por SDS-PAGE-MS/MS. Foram identificadas 503 proteínas não redundantes. A classificação funcional das proteínas revelou diversas delas com relevância na sobrevivência do protozoário, nos processos infecciosos de hospedeiros e possíveis alvos para o imunodiagnóstico, incluindo 119 proteínas exclusivas de superfície. No presente trabalho é também apresentada uma revisão da literatura a respeito das técnicas utilizadas no diagnóstico de patologias causadas por Acanthamoeba spp. Atualmente o cultivo de material biológico é considerado o padrão ouro no diagnóstico de doenças causadas por Acanthamoeba spp. Ferramentas moleculares como a PCR têm sido empregadas para a confirmação do agente etiológico. Ferramentas imunológicas ainda estão sendo estudadas para viabilizar com mais rapidez o diagnóstico preciso das enfermidades causadas por Acanthamoeba spp. Acanthamoeba is a free-living amoeba, capable of causing severe opportunistic infections in the eyes, skin and central nervous system of humans as a result of the complex pathogen-host interaction is not fully understood. Few works on the functional or pathogenic role of proteins that could be relevant in the process of invasion, infection or even for a possible immunodiagnosis have been presented. Thus in this work we describe the results obtained from an analysis of the repertoire of proteins expressed by Acanthamoeba castellanii trophozoites, based on the strategy set by SDS-PAGE-MS / MS. 503 non-redundant proteins were identified. Functional classification of proteins revealed several proteins with relevance to parasite survival, infectious host processes and possible immunodiagnostic targets, including 119 unique surface proteins. This work also carried out a review regarding the techniques used in the diagnosis of pathologies caused by Acanthamoeba spp. Currently methodology as the culture in ANN using from biological material is the gold standard in the diagnosis of diseases caused by Acanthamoeba spp. Molecular tools such as PCR have been used to confirm the etiologic agent. Immunological tools are still being studied to more quickly enable the accurate diagnosis of Acanthamoeba spp.

As algas marinhas são amplamente utilizadas na nutrição humana e animal, já que são fonte de diversos compostos que trazem benefícios à saúde como imunoestimulantes, pois estas apresentas diversos compostos bioativos, entre eles macro e micronutrientes. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da inclusão da macroalga Gracilaria domingensis nos parâmetos zootécnico, perfil leucocitário e emarcações CD3 e CD4 no baço de juvenis da tainha Mugil liza. Foram testadas cinco dietas com níveis de inclusão crescente da G. domingensis (0, 5, 10, 15 e 20%). Foram estocados juvenis de tainha (0,42 ± 0,03g) em 15 tanques. A alimentação foi ofertada quatro vezes ao dia, até saciedade aparente, durante um período experimental de 60 dias. Os resultados do experimento mostraram que os peixes dos tratamentos com 0, 5 e 10% de G. domingensis obtiveram melhores índices de desempenho zootécnicos tais como ganho de peso, conversão alimentar aparente (CAA) e taxa de crescimento especifico (TCE). Não foi observada, diferença significativa na composição química corporal e contagem diferencial de células brancas nos peixes em todos os tratamentos. Diferenças significativas foram encontradas na marcação de linfócitos T pelas técnicas de anti-CD3 e anti-CD4 no baço, entre os animais alimentados com a dieta controle e as dietas contendo inclusões da macroalga. Podemos concluir que a inclusão da macroalga G. dominigensis nas dietas de juvenis de tainha M. liza com nível de inclusão de até de 5% não causa prejuizo ao desempenho zootécnico do animal. Apresentando imunoestimulação com apenas 5% da inclusão de G. domingensis na dieta. Marine algae are widely used in human and animal nutrition, since they are source of several compounds that bring health benefits and present several bioactive compounds, as immunostimulants, including macro and micronutrients. The aim of the present study was to evaluate the effect of the inclusion of the macroalga Gracilaria domingensis in zootechnical performance, leukocyte profile and CD3 and CD4 markers on spleen of juvenile mullet, Mugil liza. Five diets formulated with increasing inclusion levels of G. domingensis (0, 5, 10, 15 and 20%) were tested. Mullet juveniles (0.42 ± 0.03g) were stored in 15 tanks. Feeding was carried four times a day, until apparent satiety, during an experimental period of 60 days. The results of the experiment showed that fish from the 0, 5 and 10% treatments of G. domingensis showed better zootechnical performance indexes such as weight gain, apparent feed conversion (AFC) and specific growth rate (SGR). No significant differences were observed in body chemical composition and differential white blood cells count in all treatments. Significant differences were found in labeled T lymphocytes by anti-CD3 and anti-CD4 techniques in the spleen, between animals fed with control diet and diets containing macroalga inclusions. It was concluded that the inclusion of G. dominigensis macroalgae in the diet of M. liza juveniles with an inclusion level of up to 5% does not affect the animal's zootechnical performance. Also, an immune stimulation of the fish can happen with only 5% of the inclusion of G. domingensis in the diet.

ResumoEstudos mostram haver uma diminuição da quantidade de linfócitos T e B, assim como dos efeitos citotóxicos das células natural killer (NK), em decorrência da diminuição acentuada na concentração dos estrogênios circulantes, o que ocorre no período menopausal e pós-menopausal. Assim, existe uma relação direta entre senescência e deficiência do sistema imunológico, que tem como consequência o aumento de doenças neoplásicas, infecciosas, crônico-degenerativas, assim como de inflamações crônicas. Assim, para prevenir ou amenizar a imunossenescência, com consequente prevenção de diversas doenças dessa parcela da população, estudos mostram que existe uma normalização da resposta imunológica após a reposição hormonal, o que se torna um fator importante no controle dessas doenças. Dessa maneira, a reposição hormonal torna-se importante não somente para minimizar os efeitos da pós-menopausa, mas também no combate e na prevenção de doenças de caráter imunológico, como as doenças autoimunes e as neoplásicas.AbstractStudies show that there is a decreased amount of T and B lymphocytes, as well as the cytotoxic effects of natural killer cells (NK), due to the sharp decrease in the concentration of circulating estrogens, which occurs in the menopausal and post-menopausal period. Thus, there is a direct relationship between senescence and immune system deficiency, resulting in the increase of tumors, infectious, degenerative chronic diseases, as well as the chronic inflammation. So to prevent or lessen the immunosenescence, resulting in prevention of various diseases in this part of the population, studies show that there is a normalization of the immune response after hormonal replacement therapy, becoming an important factor in controlling these diseases. Thus, hormone replacement therapy becomes important not only to minimize the alterations that occurs in the post-menopausal period, but also in fighting and preventing immune diseases, such as tumors.

Objective: To investigate scientific evidence related to the term protection and clinical indicators and etiologic factors for nursing diagnosis Ineffective protection in adolescents with cancer. Method: Integrative literature review in the databases of Scopus, Web of Science, National Library of Medicine and National Institutes of Health (PubMed) and Cochrane; by intersection of the descriptors protection and childhood cancer, which resulted in seven articles. These were insufficient for a comprehension of the term protection and aspects related to its impairment, therefore it was necessary to include a further three reference books. Results: Five clinical indicators and three etiologic factors associated to Ineffective protection were identified some of which were not cited in NANDA-International. Conclusions: There are clinical and etiologic factors important for the identification of ineffective protection in adolescents with cancer.

Introduction: Type 1 diabetes is a metabolic disease associated to blood disturbances and disorder of the innate immune system functionality. Objective: This study investigated the effect of two weeks interval training on blood biochemistry and immunological parameters in rats with type 1 diabetes. Methods: Male Wistar rats were divided into three groups: sedentary (SE, n = 10), diabetic sedentary (DI, n = 10), diabetic interval training (DIT, n = 10). IV injection of streptozotocin (45 mg/kg) induced diabetes. Interval training consisted of swimming exercise for 30 seconds with 30 seconds of rest for 30 minutes three times a week during two weeks, with an overload of 15% of the total body mass. The evaluations performed were fasting blood glucose, triglycerides, very low-density lipoprotein cholesterol, low-density lipoprotein cholesterol, high-density lipoprotein cholesterol and total cholesterol concentrations, phagocytic capacity, cationic vesicles content, superoxide anion, and production of hydrogen peroxide of blood neutrophils and peritoneal macrophages. Results: The results showed that two weeks interval training did not attenuate the hyperglycemic state at rest and did not decrease blood lipids in the DIT group. Diabetes increased the functionality of blood neutrophils and peritoneal macrophages in the DI group. Interval training increased the content of cationic vesicles and the phagocytic capacity of blood neutrophils and peritoneal macrophages in the DIT group. Conclusion: It was found that two weeks of interval training increased the functionality parameters of innate immune cells, although this has been insufficient to attenuate the biochemical disorders caused by diabetes. RESUMO Introdução: O diabetes tipo 1 é uma doença metabólica associada a alterações sanguíneas e distúrbios da funcionalidade do sistema imunológico inato. Objetivo: Este estudo investigou os efeitos de duas semanas de treinamento intervalado sobre a bioquímica sanguínea e os parâmetros imunológicos em ratos com diabetes tipo 1. Métodos: Ratos Wistar machos foram divididos em três grupos: sedentário (SE, n = 10), sedentário diabético (SD, n = 10), treinado diabético (TD, n = 10). O diabetes foi induzido por uma injeção IV de estreptozotocina (45 mg/kg). O treinamento intervalado de natação consistiu em 30 segundos de exercício, com 30 segundos de recuperação, por 30 min., três vezes por semana, durante duas semanas, com sobrecarga de 15% da massa corporal total. Foram avaliados: glicemia de jejum, triglicerídeos, frações de lipoproteínas de muito baixa densidade, baixa densidade e alta densidade do colesterol, concentrações do colesterol total, capacidade fagocítica, conteúdo de vesículas catiônicas, produção de ânion superóxido e produção de peróxido de hidrogênio pelos neutrófilos sanguíneos e macrófagos peritoneais. Resultados: Os resultados mostraram que duas semanas de treinamento intervalado não atenuaram o estado hiperglicêmico em repouso e não diminuíram os lipídeos sanguíneos do grupo TD. O diabetes aumentou a funcionalidade dos neutrófilos sanguíneos e dos macrófagos peritoneais no grupo SD. O treinamento intervalado aumentou o conteúdo das vesículas catiônicas e a capacidade fagocítica dos neutrófilos sanguíneos e macrófagos peritoneais no grupo TD. Conclusão: Em duas semanas de treinamento intervalado verificou-se aumento dos parâmetros de funcionalidade das células do sistema imunológico inato, que foi, porém, insuficiente para atenuar os distúrbios bioquímicos causados pelo diabetes. RESUMEN Introducción: La diabetes Tipo 1 es un trastorno metabólico asociado con alteraciones de la sangre y trastornos de la funcionalidad del sistema inmunológico innato. Objetivo: Este estudio investigó los efectos de dos semanas de entrenamiento a intervalos sobre la bioquímica de la sangre y los parámetros inmunológicos en ratas con diabetes tipo 1. Métodos: Ratas Wistar machos fueron divididos en tres grupos: sedentario (SE, n=10), sedentario diabético (SD, n = 10), entrenado diabético (ED, n = 10). La diabetes se indujo por medio de inyección IV de estreptozotocina (45 mg/kg). El entrenamiento a intervalos consistió en ejercicios de natación de 30 seg. con 30 seg. de recuperación por 30 minutos, tres veces por semana durante dos semanas, con una sobrecarga del 15% de la masa corporal total. Se evaluaron: glucemia en ayunas, triglicéridos, las fracciones de lipoproteínas de muy baja densidad, de lipoproteínas de baja densidad, de lipoproteínas de alta densidad del colesterol, las concentraciones de colesterol total, la capacidad fagocítica, contenido catiónico vesicular, producción de anión superóxido, producción de peróxido de hidrógeno por neutrófilos sanguíneos, y macrófagos peritoneales. Resultados: Los resultados mostraron que dos semanas de entrenamiento a intervalos no atenuó el estado hiperglucémico en reposo ni disminuyó los lípidos sanguíneos en el grupo ED. La diabetes aumentó la funcionalidad de los neutrófilos sanguíneos y de los macrófagos peritoneales en el grupo SD. El entrenamiento a intervalos aumentó el contenido de las vesículas catiónicas y la capacidad fagocítica de los neutrófilos de la sangre y los macrófagos peritoneales en el grupo ED. Conclusión: En dos semanas de entrenamiento a intervalos se verificó el aumento de los parámetros de funcionalidad de las células del sistema inmunológico innato, que sin embargo fue insuficiente para atenuar los trastornos bioquímicos causados por la diabetes.

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico O desenvolvimento deste trabalho, deu-se devido a necessidade de se compreender melhor o sistema imune, levando-se em consideração a diversidade dos modelos experimentais de imunossupressão, bem como a variedade de respostas imunológicas e genotóxicas, diferenças estas, relacionadas às espécies, ao medicamento e doses utilizadas. Desta maneira, objetivo do presente estudo foi analisar os efeitos no sistema imunológico e os efeitos genotóxicos em Rattus norvegicus da linhagem Wistar, após a inoculação do agente alquilante Ciclofosfamida (CY). A administração de 50 mg/kg de CY nos roedores, possibilitou observar uma significativa diminuição dos parâmetros de celularidade e peso relativo dos órgãos linfóides. A imunidade humoral dos roedores sofreu supressão, visto que foi realizada a análise da titulação de anticorpos, o ensaio sobre as células formadoras de placa e o teste de hemólise. Foram realizadas quatro inoculações desse imunossupressor e a periodicidade entre as inoculações foi determinada pela recuperação dos níveis de normalidade dos parâmetros supracitados. Nas duas vezes que foi administrada a droga, houve redução no número de linfócitos e posteriormente diminuição de neutrófilos, porém somente no segundo contato com a CY foi observada a imunossupressão. A análise da genotoxicidade da ciclofosfamida (CY) foi analisada através do ensaio cometa e foi de suma importância, pois dectamos danos genômicos ocorridos no DNA , expostos às diferentes doses da ciclofosfamida (CY), que foram de 50 mg/kg nas duas primeiras fases e de 25 mg/kg nas duas últimas fases do experimento. Além disso, foi verificado que os efeitos genotóxicos são cumulativos a cada dose de CY aplicada, pois mesmo sendo administrado na terceira fase, a metade da concentração (25 mg/kg) das duas inoculações inicias CY, o índice de danos não correspondeu a metade dos índices de danos da primeira e da segunda administração. Entretanto, ao analisarmos imunologicamente e genotoxicamente os roedores, nosso trabalho possibilitará testar novos esquemas terapêuticos de imunossupressão. The development of this work has given up due to the need to better understand the immune system, taking into account the diversity of experimental immunosuppression models as well as the variety of immunological responses and genotoxic differences these, related species, the drug and doses used. Thus, aim of this study was to analyze the effects on the immune system and genotoxic effects in Rattus norvegicus Wistar, after inoculation of the alkylating agent cyclophosphamide (CY). The administration of 50 mg / kg in rodents CY, possible to observe a significant decrease in the parameters of cellularity and relative weight of lymphoid organs. The humoral immunity of rodents has undergone deletion, since the analysis of the antibody titration was performed on the test plate forming cells and hemolysis testing. four inoculations that immunosuppressant and the intervals between the inoculations was determined by recovery of normal levels of the above parameters were performed. Both times the drug was administered, there was a reduction in the number of lymphocytes and neutrophils subsequently decreased, but only the second contact CY was observed immunosuppression. The analysis of the genotoxicity of cyclophosphamide (CY) was analyzed using the comet assay and was of paramount importance because dectamos genomic damage occurring in DNA exposed to different doses of cyclophosphamide (CY), which were 50 mg / kg in the first two phases and 25 mg / kg during the last two phases of the experiment. Furthermore, it was found that the genotoxic effects are cumulative with each CY dose applied, because even being administered in the third phase, the middle concentration (25 mg / kg) of the two inoculations initial CY the damage index does not correspond to half damage indices of the first and second vaccination. However, the analysis and immunologically genotoxicamente rodents, our work will enable testing new therapeutic immunosuppression regimens.

Dissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2016. O diabetes mellitus (DM) consiste em uma desordem metabólica caracterizada por hiperglicemia crônica que pode levar a lesão de células e tecidos. Uma das possíveis causas das lesões pode ser o desequilíbrio que ocorre no sistema imune. Nesta condição, inúmeros peptídeos já foram descritos com o potencial imunomodulador. Contudo, ainda não foi descrito na literatura o efeito desses peptídeos nas células imunes em condições de elevadas concentrações de glicose, associadas à estímulos infecciosos e inflamatórios. Sendo assim, este estudo objetivou verificar o potencial imunomodulador de peptídeos sintéticos frente a um modelo de hiperglicemia in vitro, avaliando a produção de mediadores pró- e anti-inflamatórios. Para tanto o estudo foi dividido em 3 fases: (1) avaliação da resposta in vitro das diferentes concentrações de glicose; (2) seleção dos peptídeos candidatos (LL-37, IDR-1018, IDR-1002 e DJK-6); e (3) avaliação da produção de citocinas in vitro na presença de 64 μg.mL-1 do peptídeo IDR-1018. Para tanto, foram realizados ensaio de viabilidade celular, seguido da dosagem de citocinas (ELISA e reação de Griess) em células RAW 264.7 incubadas com ou sem D-glicose, lipopolissacarídeo (LPS), recombinante interferon (rIFN)-γ e peptídeos. Foram determinadas a produção da proteína quimiotática de monócitos (MCP)-1, interleucina (IL)-1α, IL-6, fator de necrose tumoral (TNF)-α, IL-12, IL-10 e óxido nítrico (NO) na primeira e terceira fase e apenas IL-6, TNF-α e NO na segunda fase. Na primeira fase, os estímulos de glicose não foram capazes de alterar a viabilidade celular, ocorreu um aumento na produção de IL-6, TNF-α e IL-12, enquanto que a produção de IL-10 diminuiu. Na segunda fase, todos os peptídeos mantiveram a viabilidade das células. Dentre os peptídeos testados, o peptídeo IDR-1018 foi o escolhido para a fase seguinte, por diminuir a produção de TNF-α e manter os níveis basais de produção de NO, juntamente com o peptídeo LL-37, utilizado como peptídeo de comparação. E na terceira fase o IDR-1018 manteve os níveis basais de MCP-1, IL-6, IL-12 e IL-10, diminuiu a produção de TNF-α e aumentou a produção de NO, semelhante aos resultados obtidos na presença da LL-37. Desta maneira, a partir dos resultados obtidos, o peptídeo IDR-1018 sugere um efeito protetor, promovendo a manutenção dos níveis basais e não permitindo o aumento da produção dos mediadores pró-inflamatórios, para que assim não ocorra um possível dano celular. Diabetes mellitus (DM) consists in a metabolic disorder characterized by chronic hyperglycemia, which may lead to cells and tissues damage. One of the possible causes of the injury can be the imbalance occurring in the immune system. In this condition, many peptides have been described with the immunomodulatory potential. However, it has not yet been described in the literature these peptides effects on the immune cells in conditions of high glucose concentrations, associated with infectious and inflammatory stimuli. Thus, this study aimed to verify the biotechnological potential of immunomodulatory synthetic peptides front of an in vitro hyperglycemia model, evaluating the production of pro- and anti-inflammatory mediators. For this, the study was divided into three phases: (1) assessing the in vitro response of different glucose concentrations; (2) selection of candidate peptides (LL-37, IDR-1018, IDR-1002 and DJK-6); and (3) evaluation of cytokine production in vitro in the presence of 64 μg.mL-1 IDR-1018 peptide. Therefore, there were carried cell viability assay, followed by cytokine assay (ELISA and Griess reaction) in RAW 264.7 cells incubated with or without D-glucose, lipopolysaccharide (LPS), recombinant interferon (rIFN)-γ and peptides. It were determined the production of monocyte chemoattractant protein (MCP) -1, interleukin (IL) -1α, IL-6, tumor necrosis factor (TNF)-α, IL-12, IL-10 and nitric oxide (NO) in first and third phase and only IL-6, TNF-α and NO in the second phase. In the first phase, the glucose stimuli were not capable of altering the cell viability. There was an increase in IL-6, TNF-α and IL-12 production, whereas IL-10 production decreased. In the second phase, all the peptides maintained the cell viability. Among the peptides tested, the IDR-1018 peptide was chosen for the next stage, by reducing TNF-α production and maintains basal levels of NO production, along with LL-37 peptide, used as a comparison peptide. And in the third stage, IDR -1018 maintained baseline levels of MCP-1, IL-6, IL-12 and IL-10, decreased TNF-α production and increased NO production, similar to the results obtained in the presence of LL-37. Thus, from the results, the IDR-1018 peptide suggests a protective effect in vitro, promoting the maintenance of baseline levels and not allowing the increasing production of pro-inflammatory mediators, which thereby does not happen possible cell damage.

Dissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2016. As células-tronco mesenquimais (CTMs) desempenham importante função imunorregulatória, por escapar do reconhecimento imune e suprimir a resposta imunológica. A infusão de CTMs é útil para o tratamento de situações em que o sistema imunológico apresenta resposta exacerbada, como na doença do enxerto contra o hospedeiro (DECH). Entretanto, o elevado número de células necessário para a obtenção do efeito terapêutico desejado constitui um grande limitante para o uso clínico dessas células. Para realçar o potencial supressivo das CTMs, duas estratégias têm sido realizadas: o condicionamento (licenciamento) e a terapia combinada de CTMs com imunossupressores. A catelicidina (LL- 37) é um peptídeo antimicrobiano que exerce diversas funções modulatórias sobre a resposta imune, estimulando, em alguns contextos a produção de fatores anti-inflamatórios, como IL-10 e, em outros, estimulando mediadores pró-inflamatórios. Com base nesse contexto, avaliamos, in vitro, se o condicionamento de CTMs pelo peptídeo LL-37 realça o potencial supressivo dessas células e se esse peptídeo poderia ser utilizado como adjuvante das CTMs na supressão de linfócitos T. Além disso, investigamos se esse peptídeo exerce efeito sobre a proliferação e potencial migratório das dessas células. Por fim, investigamos a influência de LL-37 na expressão do receptor tipo toll-3 (RTT3) e no perfil de expressão gênica das CTMs. O condicionamento das CTMs com peptídeo LL-37 não influenciou o potencial supressivo dessas células, entretanto, quando usado como adjuvante, LL-37 aumenta o efeito supressor das CTMs. A catelicidina LL-37 não influenciou a capacidade proliferativa das CTMs, mas quando usada como adjuvante realçou o potencial migratório dessas células. Por fim, investigamos mecanismos moleculares que poderiam sustentar os efeitos funcionais observados. LL-37 induziu aumento da expressão do RTT3 nas CTMs e a hiperexpressão de genes anti-inflamatórios, o que, em parte, pode explicar os efeitos observados. De modo geral, os resultados obtidos nesse estudo, podem servir de base para o desenvolvimento de abordagens terapêuticas inovadoras que tenham por objetivo realçar propriedades fundamentais das CTMs, como o efeito imunossupressivo e o potencial migratório, garantindo, ao mesmo tempo, efeito contra microrganismos oportunistas. Mesenchymal stem cells (MSCs) play an important immunoregulatory function, to escape immune recognition and suppress the immune response. Infusion of MSCs is useful for treatment of conditions where the immune system has exacerbated response, as in graftversus- host disease (GVHD). However, the large number of cells needed to achieve the desired therapeutic effect is a major limitation to the clinical use of these cells. To enhance the suppressive potential of MSCs, two strategies have been carried out: the conditioning (licensing) and combination MSCs therapy with immunosuppressants. The cathelicidin (LL- 37) is an antimicrobial peptide that exerts various modulatory functions on the immune response, stimulating, in some contexts the production of anti-inflammatory factors, such as IL-10, and others, stimulating proinflammatory mediators. Within this context, evaluated in vitro as MSCs conditioning the LL-37 peptide enhances the suppressive potential of these cells and this peptide could be used as adjuvant of MSCs in suppression of T lymphocytes. Furthermore, we investigated whether this peptide has an effect on the proliferation and migration potential of these cells. Finally, we investigated the influence of LL-37 in the toll-like receptor type 3 expression (TLR3) and gene expression profile of MSCs. The conditioning of MSCs with LL-37 peptide did not affect the suppressive potential of these cells, however, when used as adjuvant, LL-37 increases the suppressive effect of MSCs. The LL-37 cathelicidin did not affect the proliferative capacity of MSCs, but when used as an adjuvant enhanced the migration potential of these cells. Finally, we investigate molecular mechanisms that could sustain the observed functional effects. LL-37 induced increased expression in MSCs TLR3 and overexpression of anti-inflammatory genes, which in part may explain the observed effects. In general, the results obtained in this study could serve as the basis for the development of innovative therapeutic approaches which aim to enhance the fundamental properties of MSCs as immunosuppressive effect and migration potential, ensuring at the same time, effect against opportunistic microorganisms.

OBJETIVO: Esclarecer as repercussões da deficiência de cobre, zinco e magnésio sobre o sistema imune de crianças desnutridas graves. FONTES DE DADOS: Foi realizada revisão bibliográfica mediante consulta às bases de dados Pubmed Medline, Lilacs e SciELO, selecionando-se publicações científicas recentes, da última década, e representativas do tema por meio dos descritores: desnutrição infantil, cobre, zinco, magnésio e sistema imune. SÍNTESE DE DADOS: Os micronutrientes são compostos orgânicos essenciais. Além de sua função regulatória, atuam de maneira decisiva na modulação da resposta imune. Sua deficiência pode ocorrer devido à ingestão inadequada ou associada a doenças específicas. Quando associada à desnutrição, a multideficiência de minerais pode acarretar disfunções imunológicas e aumento na suscetibilidade a infecções, afetando gravemente a eficácia de intervenções terapêuticas. Cobre, zinco e magnésio atuam como cofatores de enzimas responsáveis tanto por diversas atividades metabólicas como na resposta imune inata e adquirida, além do papel importante na maturação dos tecidos e células linfoides. Sua deficiência acarreta neutropenia e linfopenia, comprometendo a imunocompetência. CONCLUSÕES: As alterações ocasionadas pelos déficits séricos dos minerais cobre, zinco e magnésio comprometem o funcionamento do sistema imune, levando à imunossupressão. A reposição desses elementos no manejo da desnutrição grave, como preconizada pela Organização Mundial da Saúde, é essencial, uma vez que tais alterações podem ser reversíveis.OBJECTIVE: To report the effects of the deficiency of copper, zinc and magnesium on the immune system of severely malnourished children. DATA SOURCE: A literature review was performed by consulting the databases Pubmed Medline, Lilacs and SciELO, using the descriptors: child malnutrition, copper, zinc, magnesium and immune system. Representative studies published during the last decade were chosen. DATA SYNTHESIS: Micronutrients are essential organic compounds. Besides their regulatory function, the minerals act on the modulation of the immune response. Their deficiency may be due to inadequate intake or associated with specific diseases. When combined with malnutrition, a multimineral deficiency can cause immune dysfunction and increased susceptibility to infections, altering the effectiveness of therapeutic interventions. Copper, zinc and magnesium act as co-factors of both enzymes responsible for several metabolic activities and associated to the innate and acquired immune response. These minerals also play an important role in the maturation of lymphoid tissues and cells. Their deficiency causes neutropenia and lymphopenia, decreasing the immunocompetence. CONCLUSIONS: Deficits of serum copper, zinc and magnesium affect the function of the immune system, leading to immunosuppression. The replacement of these elements in the management of severe malnutrition, as recommended by the World Health Organization, is essential, since such changes may be reversible.

OBJETIVO: Avaliar o papel dos probióticos, prebióticos e simbióticos no equilíbrio do sistema imunológico do lactente, bem como seu efeito preventivo no desenvolvimento de doenças alérgicas na criança. FONTE DE DADOS: A partir do levantamento de todos os ensaios clínicos duplo-cegos e randômicos em seres humanos, publicados nos últimos cinco anos na base de dados Medline e que contivessem unitermos relacionados a prebióticos (oligossacarídeos), probióticos e simbióticos versus hipersensibilidade, analisou-se seu papel quanto à utilização em doenças alérgicas. SÍNTESE DE DADOS: Foram incluídos nesta revisão três trabalhos com prebióticos, os quais utilizaram a mistura GOS:FOS (9:1) em fórmulas infantis em lactentes nos primeiros meses de vida; 24 trabalhos com probióticos, sendo os micro-organismos utilizados na suplementação L. rhamnosus GG, B. lactis, L. casei, L. paracasei, L. reuteri, L. acidophilus, B. longum, B. breve e P. freudenreichii sp., e dois estudos com simbióticos. CONCLUSÕES: Apesar das evidências de benefícios da suplementação precoce de probióticos com algumas cepas específicas, prebióticos e simbióticos na prevenção da dermatite atópica, em crianças de alto risco para alergias, e do uso de probióticos no tratamento das dermatites atópicas moderadas e graves mediadas por IgE, há necessidade de ampliar os estudos quanto ao tempo de observação dos indivíduos suplementados, quanto à segurança e aos efeitos em longo prazoOBJECTIVE: To review current evidence about the effects of probiotics, prebiotics and symbiotics on the immune development as well as on the prevention of allergic diseases in children. DATA SOURCES: Randomized, double-blind clinical trials in humans published in the last five years, in the Medline database, containing the following keywords: prebiotics (oligosaccharides), probiotics, symbiotics and hypersensitivity. DATA SYNTHESIS: For this review three papers with prebiotics were included, all of them using a mixture of GOS:FOS (9:1) in infant formula for the first months of life; 24 papers with probiotics, where L. rhamnosus GG, B. lactis, L. casei, L. paracasei, L. reuteri, L. acidophilus, B. longum, B. breve and P. freudenreichii sp. were the tested bacterial strains; and two papers about symbiotics. CONCLUSIONS: Although there are some evidence of benefits of early supplementation with some specific probiotic strains, prebiotics and symbiotics for the prevention of atopic eczema in children with high risk of allergy development, and probiotic use for the treatment of IgE-mediated moderate and severe atopic dermatitis, further research is needed in order to extended the evaluation of supplemented individuals, safety aspects and long term effects

O objetivo do presente estudo é realizar uma análise e discussão dos principais achados envolvendo o comportamento da imunoglobulina A salivar (IgA-s) em relação ao estímulo do exercício e evidenciar a importância de seu controle em atletas. O exercício físico é um importante modulador das características do sistema imune, sobretudo do comportamento da IgA-s, componente fundamental na proteção de infecções do trato respiratório superior (ITRS). No entanto, a relação direta entre baixas concentrações de IgA-s e ITRS precisa de mais evidências para ser confirmada. As concentrações de IgA-s durante e logo após um exercício intenso diminuem, deixando o indivíduo mais suscetível à infecção, porém, atletas envolvidos em atividades extenuantes não são clinicamente imunodeficientes, comparados com indivíduos sedentários. Essas modificações são transitórias, com retorno aos valores normais após aproximadamente 48 horas de repouso. A razão dessas alterações não é clara, mas se apresenta multifatorial: elevação de hormônios estressores; fatores nutricionais; ação de espécies reativas de oxigênio; e estresse psicológico. Apesar do efeito transitório das alterações provocadas nos elementos do sistema imune frente ao exercício, observa-se diferença na variabilidade da IgA-s em populações com diferentes níveis de condicionamento. Diferenças metodológicas - como o protocolo de exercício, o método de coleta, armazenamento e manipulação da saliva, a forma de expressão da IgA-s, o nível de hidratação, o controle da dieta, a sazonalidade do período de competição, a aclimatação entre outros fatores - devem ser levadas em consideração para comparação entre os estudos. Além disso, ajudam a explicar, em parte, os resultados adversos envolvendo exercício moderado e os intermitentes, em que se encontram aumento, redução e até ausência de alteração nos níveis de IgA-s. Investigações de elementos inovadores, como os toll-like receptors, e o avanço tecnológico podem colaborar para aumentar as evidências sobre o tema.The present study aimed to discuss the main findings involving salivary immunoglobulin A (s-IgA) and exercise and evidence the importance of the control in athletes. Exercise is a great modulator of immune system characteristics such as the s-IgA that exerts important defense against upper respiratory tract infections (URTI). However, more evidence is needed to confirm a direct association between low levels of s-IgA and URTI. The level of s-IgA decreases after a high-intense exercise, increasing thus, the individual's susceptibility to infection, but athletes engaged in exhausting exercise are not clinically immune-deficient compared with sedentary subjects. The changes in s-IgA are transitory returning to normal status in approximately 48-h rest. The reason of these alterations remains unclear, but many causes have been investigated: hormones stressors rise; nutrition influences; action of reactive oxygen species, psychological stress. Despite the transitory effects of the exercise on the immune system, the variability in s-IgA differs in populations with different fitness levels. Differences in exercise protocols, saliva collection, manipulation or storage methods, the method used to assess s-IgA, subject's hydration status, dietary control, competition's seasonality, acclimatization, among other factors should be considered to compare different studies. In addition, these factors could partially explain the adverse results of studies involving moderate and intermittent exercise that have found increase, decrease and no changes in s-IgA levels. Investigations of recent immunologic issues such as the toll like-receptors and the advances in technology may contribute to increase the evidence on this issue.

A obesidade é uma doença complexa de etiologia multifacetada, com sua própria fisiopatologia, comorbidades e capacidades desabilitantes. Aceitar a obesidade como uma doença é fundamental para o seu tratamento. Atualmente, o tecido adiposo é um dos principais focos das pesquisas em obesidade, devido a uma revolução no entendimento da função biológica desse tecido desde a última década. Já está muito claro que o tecido adiposo branco secreta múltiplos peptídeos bioativos, denominados adipocinas (proteínas sintetizadas e secretadas pelo tecido adiposo). Dessa forma, o objetivo deste trabalho de revisão foi investigar a relação entre obesidade e adipocinas inflamatórias, buscando discutir o papel do exercício físico no tratamento dessa patologia. Os resultados demonstram que uma das mais importantes descobertas das pesquisas recentes em obesidade é o conceito de que ela é caracterizada por uma inflamação crônica. Dentre todas as adipocinas, sem dúvida, a IL-6, o TNF-α, a leptina (pró-inflamatórias) e a adiponectina (anti-inflamatória) vêm recebendo atenção especial da literatura especializada. O aumento da concentração dessas adipocinas promove grande impacto em diversas funções corporais que estão fortemente correlacionadas com doenças cardiovasculares. Uma vez que a obesidade é considerada uma doença inflamatória e o exercício físico modula de forma direta tais processos, é essencial que tenhamos como um dos objetivos principais de nossos programas de exercícios físicos a melhora da resposta inflamatória de obesos.

Made available in DSpace on 2017-07-25T19:30:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lucas N Wisch.pdf: 1238431 bytes, checksum: fab61da00fd601e632d7feb86156e3da (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Soybean is the main crop of economic importance and commercially produced on a large scale in Brazil. Nevertheless many are the factors that affect the productive potential of this oilseed, among them stand out the insects of the order Lepidoptera. As an alternative to control these pests, many growers have adopted the use of Bt soybean, which expresses the Cry1Ac toxin. However, the large area with this technology can generates a main concern that is Cry1Ac exposure to target and non-target insects and its entomopathogens, such Metarhizium rileyi and nuclear polyhedrosis virus. The aim of this study were to elucidate the HD-73 impacts, that expresses Cry1Ac, i) in the immune system of S. frugiperda in order to investigate whether Bt challenge parental induce "immune priming or transgenerational effects"; ii) on virulence and occlusion body yield in Spodoptera frugiperda iii) level of larval mortality of the noctuid species when applied simultaneously or sequentially with NPV and M. rileyi; and iv) the biological parameters of the noctuid species, when exposed in conjunction with entomopathogens. In the immune assay, neonate larvae were exposed ad libitum to different concentrations of HD-73 (0, 15, 33, 72.6 μg.ml-1), in the fifth instar were extracted the haemolymph and measured the number of haemocytes, total protein and phenoloxidase activity (PO). Neonate offspring of those individuals were inoculated with 0 and 40 μg.ml-1 of HD-73 and again was quantified the same immune components in fifth instar larvae, including antibacteriana activity. In addition, biological parameters were observed in these tests. In the evaluation of Cry1Ac impacts on virus infectivity in S. frugiperda, neonate were exposed to HD-73 (0, 10, 40 and 80 μg.ml-1) until the end of the third instar and early of the fourth instar was inoculated with viruses (0, 103 and 104 OB.larvae-1). For this assay was evaluated larval weight (4 DAE), mortality, number of OB/caterpillar and subsequently, virulence test (LC50). Spodoptera cosmioides, Spodoptera eridania, S. frugiperda, Chrysodeixis includens and Rachiplusia nu caterpillars were simultaneously or sequentially exposed to entomopathogens, HD-73, M. rileyi and their viruses, and record mortality and biological parameters of these interactions. The sublethal concentrations of HD-73 did not cause changes in the immune system of the parental, as well as there was no evidence for acquired immunity in the offspring. Sublethal concentration of HD-73 affected the biological components of S. frugiperda, providing lower larval and pupal weight, reduced fecundity and egg viability. HD-73 proved lower OB yield/caterpillar and lower virulence of the virus multiplied in caterpillars prior exposed to 10 μg.ml-1. The interactions did not affect the biological parameters of these noctuids. In most cases was observed negative effect in the interactions between HD-73 and viruses, but may be promising simultaneous inoculation of HD-73 and M. rileyi to control S. eridania and S. frugiperda. Sublethal concentrations of HD-73 did not provide larger mortality of Plusiinae in interactions with M. rileyi and viruses, except for HD-73+ M. rileyi that had positive and negative effects on C. includens. A soja é a principal cultura de importância econômica e comercialmente produzida em larga escala no Brasil. Porém, diversos são os fatores que afetam o potencial produtivo desta oleaginosa, entre eles destacam-se os insetos da ordem Lepidoptera. Como alternativa para controle destas pragas, diversos produtores têm adotado o uso da soja Bt, que expressa a toxina Cry1Ac. Contudo, a expansão da área com essa tecnologia gera dúvidas quanto ao impacto da exposição de Cry1Ac aos insetos-alvo e não-alvo e seus entomopatógenos, Metarhizium rileyi e os vírus de poliedrose nuclear. Assim, os objetivos desse trabalho foram: elucidar o impacto de concentrações subletais da cepa HD-73, que expressa Cry1Ac, i) no sistema imunológico de Spodoptera frugiperda, a fim de investigar se o desafio com Bt induz a “memória imunológica”; ii) na virulência e produção de corpos de oclusão do vírus em S. frugiperda; iii) na mortalidade larval das espécies de noctuídeos, quando aplicada de forma simultânea ou sequencial com VPN e M. rileyi; e iv) nos parâmetros biológicos de noctuídeos-alvo e não-alvo, quando aplicada em conjunto com os entomopatógenos. No ensaio imunológico, lagartas neonatas foram expostas ad libitum a diferentes concentrações de HD-73 (0, 15, 33, 72,6 μg.ml-1), no quinto instar foi extraída a hemolinfa e avaliado o número de hemócitos, proteína total e atividade da fenoloxidase (PO). Neonatas descendentes destes indivíduos foram inoculadas com 0 e 40 μg.ml-1 de HD-73 e no quinto instar quantificou-se os mesmos componentes de resposta imune observados nos parentais, incluindo a atividade antibacteriana. Os parâmetros biológicos também foram observados nestes ensaios. Nas avaliações do impacto de Cry1Ac na infectividade de vírus sobre S. frugiperda, neonatas foram inoculadas com HD-73 (0, 10, 40 e 80 μg.ml-1) e mantidas até o final do terceiro instar, e no início do quarto instar ocorreu a infecção com vírus (0, 103 e 104 CO.lagarta-1), após foi avaliado o peso larval (4 DAE), a mortalidade, o número de CO.cadáver-1 e, posteriormente, teste de virulência (CL50). Lagartas de Spodoptera cosmioides, Spodoptera eridania, S. frugiperda, Chrysodeixis includens e Rachiplusia nu, foram expostas de forma simultânea ou sequencial aos entomopatógenos, HD-73, M. rileyi e os respectivos vírus, para registrar a mortalidade e os parâmetros biológicos destas interações. As concentrações subletais de HD-73 não provocaram alterações no sistema imune dos parentais, como também não houve evidências de imunidade adquirida nas progênies. HD-73 afetou subletalmente os componentes biológicos de S. frugiperda, proporcionando menor peso larval e pupal, redução na fecundidade e viabilidade dos ovos. HD-73 proporcionou menor rendimento de CO.cadáver-1 e menor virulência dos vírus multiplicados em lagartas expostas a 10 μg.ml-1. As interações não afetaram os parâmetros biológicos dos noctuídeos em estudo. Na maioria dos casos observou-se efeito negativo nas interações entre HD-73 e vírus, mas podendo ser promissor a inoculação simultânea de HD-73 e M. rileyi no controle de S. eridania e S. frugiperda. Concentrações subletais de HD-73 não proporcionaram maior mortalidade das Plusiinae nas interações com M. rileyi e vírus, exceto na associação HD-73+M. rileyi que apresentou efeitos positivos e negativos sobre C. includens.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2016. Os anticorpos anti-ácidos nucleicos são importantes no desenvolvimento de doenças autoimunes como o lúpus eritematoso sistêmico (LES). Porém, muito pouco se sabe sobre a origem e manutenção desses anticorpos pelo organismo e das interações desses anticorpos com seus antígenos. Foi observado na literatura e em trabalhos anteriores do grupo de Imunologia Molecular (UnB), que as sequências anotadas em banco de dados da família VH10 formadora da região variável da cadeia pesada de anticorpos era composta em sua maioria de sequências formadoras de moléculas anti-DNA. Além disso, através de uma abordagem experimental observou-se que essa família apresenta uma certa independência da CDR H3 para esta afinidade. Baseando-se nesses achados, nós desenhamos quatro fragmentos de anticorpos, no formato scFv (single-chain fragment variable), fragmento que preserva o sítio de ligação ao antígeno, composto de uma cadeia pesada (VH) ligada a uma cadeia leve, conhecida surrogate light chain (SLC) na tentativa de simular o reconhecimento antigênico em momento específico do desenvolvimento dos linfócitos B, onde a auto-reatividade é usada em prol do desenvolvimento normal dessas células. Levando-se também em conta a independência da CDR H3 para a ligação ao antígeno, nós iremos avaliar também através dessas construções o papel da CDR H2 para a ligação. Após clonagem das sequências em plasmídeo para a expressão heteróloga, esses scFvs foram produzidos em cepas de Escherichia coli BL21(DE3) pLysS. Até o momento, após padronização das condições para a produção de scFvs solúveis, condições favoráveis de duas das quatro construções foram estabelecidas. Estas construções irão permitir a análise do papel do segmento gênico V, mais especificamente da CDR2, para a afinidade ao DNA por anticorpos originados do segmento germinal de VH10. Além disso, será possível simular a interação antigênica de cadeias pesadas auto-reativas e não auto-reativas em um momento específico do desenvolvimento dos linfócitos B, onde a auto-reatividade parece ser utilizada em prol do desenvolvimento dessas células. The anti-nucleic acids antibodies are important in the development of autoimmune diseases such as systemic lupus erythematosus (SLE). However, very little is known about the origin and maintenance of these antibodies by the body and interactions of these antibodies with their antigens. Studies in the literature and previous work of the Molecular Immunology team (UnB) show that the annotated sequences in database of the VH10 family that is part of the variable region of the heavy chain antibodies consisted mostly of sequences of anti-DNA molecules. Furthermore, through an experimental approach it was observed that this family has a certain independence from CDR H3 for this affinity. Based on these findings, we designed four antibody fragments in scFv format (single-chain fragment variable), this fragments preserves the antigen binding site that comprises a heavy chain (VH) connected to a light chain, known surrogate light chain (SLC) in an attempt to simulate the antigen recognition in a specific moment in the development of B lymphocytes, where autoreactivity is used to promote the normal development of these cells. Also taking into account the independence of the H3 CDR for binding to antigen, we will also access through such constructions the role of CDR H2 for binding. After cloning the sequences into a plasmid for heterologous expression, these four scFvs were produced in Escherichia coli BL21 (DE3) pLysS. To date, after standardization of the conditions for soluble scFv production, conditions favorable for two of the four constructs were established. These constructions will enable the analysis of the role of the V gene segment, more specifically CDR2, for affinity to DNA antibodies originating from the germline segment VH10. In addition, you can simulate the antigen interaction of autoreactive and not autoreactive heavy chains at a specific time of the development of B lymphocytes, where self-reactivity seems to be used for the development of these cells.

A esquistossomose mansônica é uma doença endêmica de países em desenvolvimento, com mais de 200 milhões de pessoas infectadas em todo o mundo. No Brasil, 25 milhões de pessoas vivem em área de risco, onde 10 – 20% dos indivíduos estão infectados. A doença de Chagas é uma doença infecciosa causada por protozoário intracelular obrigatório denominado Trypanosoma cruzi, com prevalência de cerca de 7 a 8 milhões pessoas infectadas em todo o mundo. A doença atinge predominantemente países da América do Sul e Central e atualmente representa uma doença tropical negligenciada. Considerando que existem áreas endêmicas comuns para ambas às doenças, o presente estudo investigou a instalação e progressão das lesões no fígado, coração e pulmão de animais coinfectados experimentalmente com Schistosoma mansoni e T. cruzi. Como o perfil imunológico que se desenvolve ao longo de cada doença é antagônico, o presente estudo admite a hipótese de que interações imunológicas negativas podem modificar a evolução natural das infecções e alterar os padrões de lesão no fígado, coração e pulmão, importantes órgãos alvos da esquistossomose e doença de Chagas. Nossos resultados demonstraram que a infecção prévia pelo S. mansoni modificou o curso natural da doença de Chagas, aumentando o número de parasitas sanguíneos, que ao contrario dos animais infectados somente com T. cruzi, mantiveram a parasitemia patente durante todo o experimento. Entretanto, a coinfecção mostrou-se benéfica ao reduzir a severidade da cardiomiopatia chagásica e a lesão pulmonar em áreas remotas ao granuloma esquistossomótico. No fígado, houve aumento da susceptibilidade à infecção pelo T. cruzi, evidenciado por maior parasitismo, lesões hepáticas acentuadas e aumento de granulomas esquistossomóticos não organizados. Schistosomiasis mansoni is endemic in developing countries, with over 200 million people infected worldwide. In Brazil, 25 million people live in risk areas, where 10 - 20% of individuals are infected. Chagas' disease is an infectious disease caused by obligate intracellular protozoan parasite Trypanosoma cruzi called, with a prevalence of about 7 million to 8 million people infected worldwide. The disease predominantly affects countries of South and Central America and currently is a neglected tropical disease. Whereas there are common areas endemic for both diseases, the present study investigated the onset and progression of liver damage, heart and lung coinfected animals experimentally with Schistosoma mansoni and T. cruzi. As the immune profile that extends along each disease is antagonistic, this study supports the hypothesis that adverse immunological interactions may alter the natural course of infections and change lesion patterns in the liver, heart and lung, major target organs of schistosomiasis and Chagas disease. Our results showed that prior infection with S. mansoni modified the natural history of Chagas disease, increasing the number of blood parasites, which unlike the animals infected only with T. cruzi, maintained the patent parasitaemia throughout the experiment. However, coinfection was beneficial to reduce the severity of Chagas cardiomyopathy and lung damage in remote areas to schistosomiasis granuloma. In the liver, an increase in susceptibility to infection with T. cruzi, evidenced by higher parasitism, pronounced liver damage and increased granulomas schistosomiasis unorganized. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Em tempos atuais, com diversas síndromes/patologias relacionadas ao nosso sistema imunológico é imprescindível praticar exercícios que sejam imunoestimulantes, levando em consideração a influência de diversos hormônios e citocinas. Dentre esses, destacam-se as catecolaminas, que além de atuarem no aumento dos leucócitos circulantes, pela maior liberação de células da medula óssea e de órgãos linfoides, também influenciam as funções das células imunológicas. Surpreendentemente, pouco se sabe do efeito da intensidade do exercício físico sobre a resposta de células imunológicas teciduais, apesar de sua extrema importância, tanto na mobilização como na possível comunicação com outros órgãos. Essas células sofrem influência da intensa inervação, além da produção autógena de catecolaminas, estabelecendo um processo de neuroimunomodulação local e alterando seu fenótipo de acordo com o microambiente. Assim, o presente trabalho objetivou investigar se a estimulação adrenérgica afeta o perfil inflamatório de macrófagos residentes no peritônio de ratos, por meio de diferentes intensidades de exercício físico agudo. Ratos Wistar foram submetidos a uma sessão aguda de natação com três intensidades de exercício (conforme sobrepeso atado à base da cauda, como porcentagem da massa no animal): repouso (20 min), 4 % (20 min) ou 8 % (até a exaustão). Trinta minutos antes das sessões de exercício, os animais receberam (i.p.) bloqueadores adrenérgicos [prazosina (a1), ioimbina (a2), metoprolol (b1), propranolol (b inespecífico) e duplo bloqueio (a1, a2 e b)], ou PBS como controle, sendo mortos imediatamente após o exercício ou depois de 6, 12 ou 24 h após as sessões de nado. Determinou-se uma curva intensidade de exercício-resposta em função do tempo sendo avaliada a função dos macrófagos por meio da capacidade fagocítica e de produção de óxido nítrico (NO, pela medida de nitritos em meio de incubação). Os dados mostraram que a maior influência do exercício sobre estas variáveis do macrófago dá-se 6 h após a sessão e que estas respostas são dependentes da carga e de estimulação a-adrenérgica. Entretanto, o aumento na produção de NO não foi devido nem a incrementos na quantidade de moléculas da enzima NO sintase induzível (iNOS) nem de seu RNA mensageiro e nem da arginase-1 (proteína e RNAm) que compete pela arginina com a iNOS. A redução na quantidade de moléculas de proteínas de choque térmico de 70 kDa (HSP70), que reprimem a expressão de iNOS, também não foi observada. Em conclusão, a modulação do perfil pró-inflamatório dos macrófagos peritoneais com o exercício é dependente da carga e da estimulação a-adrenérgica. In current times, with the prevalence of several syndromes/pathologies related to our immune system, it is essential to practice exercises that are immunostimulants, taking into account the influences of various hormones and cytokines. Among these, catecholamines, which rise circulating leukocyte counts through increased release of bone marrow cells and lymphoid organs as well as influence the functions of immune cells. Surprisingly, there are a few studies about the effect of physical exercise load on the responses of tissue immune cells, which are extremely important, both in the mobilization as well as in the possible cross-talk with other organs. These cells are influenced by extensive innervation, besides their autogenic production of catecholamines, establishing a local neuroimmunomodulation and changing their phenotype according with microenvironment. Therefore, the present study aimed at investigating how adrenergic stimulation affects the inflammatory profile of rat peritoneal resident macrophages under different intensities of acute exercise. Wistar rats were submitted to a session of acute swimming with three exercise intensities (by an overweight attached to the base of the tail, as a percentage of animal body weight): rest (20 min), 4 % (20 min) or 8 % (to the point of exhaustion). Thirty minutes before the exercise sessions, the animals received (i.p.) adrenergic blockers [prazosin (a1), yohimbine (a2), metoprolol (b1), propranolol (b unspecific) and double blockade (a1 a2 and b)], or PBS as control, being killed immediately after exercise or after 6, 12 or 24 h after the sessions. It was prepared an exercise intensity-response curve as a function of time, being evaluated the function of macrophages through the phagocytic capacity and production of nitric oxide (NO, by the measurement of nitrite in the incubation media). The data showed that the highest influence of exercise on these variables occurred 6 h after the session and that these responses are dependent on exercise load and of a-adrenergic stimulation. However, the increase in the production of NO was not due nor to the increments in the number of molecules of the enzyme inducible NO synthase (iNOS), nor to its messenger RNA and neither to the arginase- 1 (protein and mRNA) that competes for arginine with NOS. A possible reduction in the amount of molecules of the 70 kDa heat shock proteins (Hsp70), which suppress iNOS expression was also not observed. In conclusion, the modulation of peritoneal macrophage pro-inflammatory profile with exercise is dependent on exercise load and a-adrenergic stimulation.

Glioblastoma multiforme é o tumor maligno mais comum do sistema nervoso central em adultos e a sobrevida média é de apenas 12 a 15 meses após o diagnóstico. Por isso, é extremamente importante desenvolver tratamentos mais eficazes e específicos contra essa neoplasia. A presença do sistema imune, incluindo macrófagos associados ao tumor, promove a proliferação tumoral e está associada com um pior prognóstico em pacientes com essa doença maligna. A sinalização purinérgica e o receptor purinérgico P2X7, um canal iônico, têm sido implicados na progressão de diferentes tipos de tumores tanto in vitro como in vivo. A ciclooxigenase 2 (COX-2) desempenha um papel importante na regulação da proliferação celular, diferenciação e na tumorigênese. O ácido ursólico é um triterpeno pentacíclico encontrado em uma variedade de plantas e exibe diversas atividades biológicas e farmacológicas. O objetivo dessa tese é verificar a participação do sistema purinérgico, sistema imune e COX-2 no desenvolvimento e progressão do glioblastoma multiforme, e também investigar os efeitos citotóxicos do ácido ursólico. Primeiramente, verificamos que macrófagos expostos ao meio condicionado de glioma (GL-CM) foram modulados para um fenótipo do tipo M2 e houve um aumento da liberação de IL-10, IL-6 e MCP-1. Esses efeitos foram diminuídos na presença de antagonistas dos receptores P2X7 e A2A. Portanto, os resultados apresentados contribuem para o melhor entendimento da interação entre inflamação e câncer e demonstram que os receptores purinérgicos são importantes para a progressão do glioma. Após, analisamos o papel do receptor P2X7 na proliferação de células de glioma. Surpreendentemente, in vitro, não se observou nenhuma diferença no crescimento das células quando houve a transfecção com o P2X7. Entretanto, in vivo, essas células geraram tumores maiores quando comparado com o controle. Os nossos resultados demonstram que, como em outros tipos de cânceres, o P2X7 tem um papel importante no desenvolvimento e progressão tumoral. Uma vez verificado o importante papel do receptor P2X7 nos macrófagos associados ao tumor e nas células de glioma, investigamos se esse receptor poderia interagir com a enzima COX-2 em células de glioma. Porém, não houve diferença na expressão do P2X7 ou da COX-2 tanto in vitro como in vivo. E também não houve nenhum efeito adicional entre o antagonista de P2X7 e o inibidor seletivo de COX-2. Esse trabalho fornece evidências de que não há relação entre o P2X7 e COX-2 em células de glioma. Em conclusão, todos esses resultados reforçam a hipótese do envolvimento da sinalização purinérgica na progressão do glioblastoma multiforme e tornam o P2X7 como um interessante alvo terapêutico. Finalmente, também investigamos a possível atividade anticâncer do ácido ursólico contra as células de glioma. Essa molécula foi capaz de diminuir o número de células e induziu parada no ciclo celular. In vivo, o ácido ursólico reduziu ligeiramente o tamanho do tumor, mas não alterou as características malignas. Em conclusão, o ácido ursólico pode ser um potencial candidato como adjuvante para o tratamento do glioblastoma multiforme. Em conjunto, todos os resultados apresentados nessa tese indicam possíveis novas abordagens terapêuticas no tratamento e novos conhecimentos em relação a esse maligno câncer cerebral. Glioblastoma multiforme is the most common malignant tumor of central nervous system in adults and the median survival is only 12 to 15 months after diagnosis. Therefore, it is extremely important to develop more effective and specific treatments. The presence of an inflammatory environment, including tumor-associated macrophages, promotes tumor proliferation and is associated with a poor prognosis in patients with this malignancy. Disruption of purinergic signaling has also been implicated in cancer progression. P2X7R is an ion channel receptor, whose participation in tumor progression has been demonstrated in in vitro and in vivo studies. Cyclooxygenase 2 (COX-2) plays an important role in regulating cell proliferation, differentiation, and tumorigenesis. Ursolic acid is a pentacyclic triterpenoid found in a variety of plants that exhibits several biological and pharmacological activities. The aim of this study is to verify the participation of the purinergic system, immune system and COX-2 in the glioblastoma multiforme development and progression, and also to investigate the anti-proliferative effects of ursolic acid. We first verified that macrophages exposed to glioma conditioned medium (GL-CM) were modulated to an M2-like phenotype and there was an increased IL-10, IL-6 and MCP-1 secretion and these effects were diminished by P2X7 and A2A receptors antagonists. Therefore, the results presented contribute to advancing in the field of cancer-related inflammation and point specific purinergic receptors as targets for glioma progression. After that, we analyzed the role of P2X7 receptor in glioma cell proliferation. Surprisingly, in vitro, no difference in cell growth was observed when the cells were transfected with P2X7R but in vivo these cells generated larger tumors when compared to the control. Our data demonstrate that, as in other type of cancers, P2X7R has an important role in sustaining the development of glioma. Once verified the important role of P2X7 receptor in tumorassociated macrophages and glioma cells, we verified whether this receptor could interact with the COX-2 enzyme in glioma cells. No differences in mRNA expression of P2X7R or COX-2 were verified both in vitro and in vivo experiments. And any additional effect with selective P2X7R antagonist and COX-2 inhibitor were observed in in vitro and in vivo experiments. This work provides evidence that there is no relationship between the P2X7R and COX-2 in glioma. In conclusion, all these results reinforce the hypothesis of purinergic signaling involvement in glioma progression and point to P2X7R as an interesting target for glioma treatment. Finally, we also investigated the potential anticancer activity of ursolic acid against to glioma cells. Ursolic acid decreased the cell number and induced an arrest in the cell cycle in glioma cells. In vivo, ursolic acid slightly reduced the glioma tumor size but did not alter the malignant features. In conclusion, the ursolic acid may be a potential candidate as adjuvant for glioblastoma therapy. Taken together, the results presented herein indicate new adjuvant treatment approaches and new knowledge regarding to this deadliest brain tumor.

Orientadores: Pablo Agustin Vargas, Lynne Bingle Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba Resumo: O carcinoma espinocelular de boca usualmente se desenvolve a partir de uma lesão oral potencialmente maligna, como por exemplo, a leucoplasia ou eritroleucoplasia. O sistema imune, por sua vez, desempenha importante papel no reconhecimento de células malignas precursoras. No entanto, as células tumorais através do mecanismo de imunoedição são capazes de escapar da imuno vigilância. Objetivo: Avaliar a expressão de células dendríticas de Langerhans (CDL) imaturas e maduras, células dendríticas plasmocitoides (CD plasmocitoides) e linfócitos T em displasia epitelial oral (DE), leucoplasia verrucosa proliferativa (LVP) e carcinoma espinocelular bucal (CEC) e correlacionar essa expressão com os dados clínicos disponíveis. Material e métodos: Cinquenta casos de CEC, 48 casos de DE e 15 casos de LVP foram submetidos a técnica imunoistoquímica para os anticorpos CD1a, CD83, CD303 e CD8. Os resultados dessas imunomarcações foram avaliados através da análise quantitativa de cinco campos consecutivos de cada lâmina utilizando um aumento de 400x. Resultados: A análise mostrou diminuição significativa da expressão de CD83 no grupo CEC em comparação ao grupo DE. CD303 mostrou aumento significativo no grupo CEC em comparação ao grupo DE. A expressão de CD8 não apresentou diferença significativa entre os grupos avaliados. Para o grupo LVP a expressão de CD1a e CD8 apresentou aumento gradual nas lesões de hiperqueratose, displasia leve/moderada e displasia epitelial intensa. A expressão de CD83 apresentou diminuição gradual nas lesões de hiperqueratose, displasia leve/moderada e displasia epitelial intensa. Não houve correlação estatística com os dados clínicos. Conclusão: O aumento no número de CDL maduras no grupo DE em relação ao grupo CEC sugere que essas células possam ter migrado até os linfonodos para dar início a resposta imune. O aumento no número de CD plasmocitoides no grupo CEC, sugere que essas células desempenham papel importante na defesa do organismo contra lesões tumorais, no entanto não está claro se promovendo ou inibindo a progressão tumoral. No grupo LVP a expressão de CDL imaturas e linfócitos T CD8 sugere que o sistema imune encontra-se vigilante e ativo, respectivamente. No entanto, a expressão de CDL maduras sugere que pode haver algum tipo de falha na resposta imune Abstract: Oral squamous cell carcinomas (OSCC) may arise from potential malignant lesions, such as leukoplakia. The immune system plays an important role recognizing tumor precursor cells. However, due to the immunoediting mechanisms cancer cells are able to escape the immune system surveillance. Objective: Evaluate the profile of imature and mature dendritic Langerhans cells (DLC), plasmacytoid dendritic cells (plasmacytoid DC) and T cells in epithelial displasya (OED), proliferative verrucous leukoplakia (PVL) and OSCC and correlate these fndings with clinical data available. Study design: Fifty cases of OSCC, 48 of OED and 15 of PVL were immunostained for CD1a, CD83, CD303 and CD8 followed by a quantitative analysis. Results: Analysis revealed a significant decrease in the number of CD83 positive cells in OSCC compared with OED group. CD303 positivity was significantly increased in the OSCC group when compared to OED whilst there was no statistical difference in CD8 positivity between OSCC and OED. In the PVL group analysis revealed increased expression of CD1a from hyperkeratosis to severe epithelial dysplasia and decreased expression of CD83 from hyperkeratosis to severe epithelial dysplasia. The expression of CD8 increased from hyperkeratosis to severe epithelial dysplasia. No statisticant correlation was found for clinical data. Conclusion: The numbers of mature DLC were decreased in OSCC compared with OED lesions suggesting that maybe these cells might have migrated to lymph nodes to present the tumour antigen and activate the immune system. The numbers of plasmacytoid DC was significantly increased in the OSCC group compared with the OED group. This suggests they may play an important role in the defence against tumours although it is not clear whether this is promoting or inhibiting malignant progression. In the PVL group, the expression of immature DLC and CD8 T cells suggest that the immune system is vigilant and active, respectively, however the expression of mature DLC suggest that in some extent it is impaired Doutorado Patologia Doutora em Estomatopatologia FAPESP 2013/18321-8 CAPES CNPQ PDSE 99999.008317/2014-03

OBJETIVO: Analisar os efeitos agudos do exercício de curta duração em diferentes durações e intensidades sobre leucócitos totais, número e capacidade fagocitária de macrófagos peritoneais. MÉTODO: Foram utilizados ratos Wistar (n= 30, n= 6 por grupo), divididos em 5 grupos: controle sedentário (C); exercitados 5 minutos na intensidade leve ou moderada (5L e 5M, respectivamente); exercitados 15 minutos na intensidade leve ou moderada (15L e 15M, respectivamente). Na intensidade leve, o exercício foi realizado sem cargas; na moderada, foi utilizada carga adicional de 5% do peso corporal dos animais em suas regiões dorsais. A contagem total de leucócitos e monócitos foi realizada no microscópio, cuja leitura foi procedida no aparelho LEUCOTRON TP. A porcentagem da fagocitose foi determinada por contagem em câmara de Neubauer através do número de células que fagocitaram três ou mais partículas de zymosan. Foram utilizados os testes ANOVA two way e Tukey com p < 0,05. RESULTADOS: Foi observado aumento nos leucócitos totais nos grupos exercitados (de 4,12 ± 0,17 x 10(6) para 8,69 ± 1,06 x 10(6) no grupo 5L, 9,5 ± 0,91 x 10(6) no grupo 15L, 12,56 ± 0,9 x 10(6) no grupo 5M e para 11,61 ± 0,6 x 10(6) no grupo 15M); aumento do número de macrófagos peritoneais após 15 minutos de exercício moderado (de 14,07 ± 0,57 x 10(6) para 20,9 ± 1,28 x 10(6)) e da capacidade fagocitária após 5 e 15 minutos de exercício leve de 74,8 ± 0,73% para 79,8 ± 0,8% e 83% ± 0,44%, respectivamente (p < 0,05). CONCLUSÕES: O exercício de curta duração promove aumento na capacidade fagocitária, fato esse de relevância para a reabilitação e esporte.OBJECTIVE: To analyze the acute effects of short-duration exercise of different lengths and intensities on total leukocytes, peritoneal macrophage count and on the phagocytic capacity of peritoneal macrophages. METHOD: Five groups of Wistar rats were used (n= 30, n= 6 per group): one sedentary control group (C); two groups exercised for 5 minutes at low or moderate intensity (5L and 5M, respectively); and two groups exercised for 15 minutes at low or moderate intensity (15L and 15M, respectively). Low-intensity exercise was done without any load, while moderate-intensity was done with an additional load of 5% of the animal's body weight, attached to its back. The total leukocyte and monocyte counts were obtained under a microscope, and the readings were made with the Leucotron TP apparatus. The percentage phagocytosis was determined by counting in a Neubauer chamber, from the number of cells that phagocytized three or more particles of zymosan. Two-way ANOVA and Tukey tests were used, with p < 0.05. RESULTS: There was an increase in total leukocytes in the exercised groups (from 4.12 ± 0.17 x 10(6) to 8.69 ± 1.06 x 10(6) for 5L, 9.5 ± 0.91 x 10(6) for 15L, 12.56 ± 0.9 x 10(6) for 5M and 11.61 ± 0.6 x 10(6) for 15M), an increase in peritoneal macrophage count after 15 minutes of moderate exercise (from 14.07 ± 0.57 x 10(6) to 20.9 ± 1.28 x 10(6)) and an increase in phagocytic capacity after 5 and 15 minutes of light exercise (from 74.8 ± 0.73% to 79.8 ± 0.8% and 83% ± 0.44%, respectively) (p < 0.05). CONCLUSION: Short-duration exercise promotes increased phagocytic capacity. This is of importance for rehabilitation and sports.

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O tecido periodontal inflamado produz dentre outras citocinas, a Interleucina 8 (IL-8). Na literatura científica há informações conflitantes acerca dos níveis de IL-8 em fluido crevicular gengival de pacientes com e sem DP. Estudos prévios realizados por nosso grupo identificaram que pacientes carregando o haplótipo ATC/TTC no gene IL8 foram 2 vezes mais suscetíveis à DP e que esses pacientes mesmo com menor desafio microbiano, pareciam desenvolver a DP mais exacerbadamente comparados aos indivíduos considerados não suscetíveis à DP pela ausência daquele haplótipo. Como esses resultados foram obtidos de um estudo clínico, estudos in vitro se mostraram necessários para investigar a funcionalidade dos haplótipos no gene IL8. O objetivo deste trabalho foi verificar na literatura científica se os níveis de IL-8 estão aumentados ou não mediante a presença da DP e se, por meio de ensaios in vitro controlados, os mencionados haplótipos no gene IL8 podem influenciar a funcionalidade e expressão deste e outros genes importantes para a resposta imune. Realizamos uma criteriosa revisão sistemática da literatura seguida de meta-análise enfocando a quantificação de mRNA e proteína IL-8 em tecido gengival, saliva e fluido crevicular gengival (FCG) de pacientes com DP comparados a indivíduos periodontalmente saudáveis. Verificamos maior expressão gênica de IL8 e da proteína IL-8 nos tecidos gengivais de pacientes com Livia Sertori Finoti – Doutorado 17 DP, enquanto níveis proteicos de IL-8 mostraram níveis variáveis na saliva e FCG. Também investigamos em células isoladas do sangue periférico de pacientes carregando diferentes haplótipos no gene IL8, a possível influência destes na expressão de genes do sistema imune. A funcionalidade destes haplótipos no gene IL8 foi também investigada após edição genética em linhagem celular por meio do sistema CRISPR-CAS9 seguida de recombinação homóloga. Conjuntamente observamos que perante estímulos microbianos o haplótipo ATC/TCC foi associado à maior expressão gênica e funcionalidade do gene IL8 em comparação ao outro haplótipo ATT/TCC. Como conclusão geral notou-se que em tecido gengival há concordância na literatura sobre maiores níveis de mRNA e proteicos de IL-8 associados à DP, e que o haplótipo no gene IL8 previamente associado com suscetibilidade à DP mostrou-se funcional influenciando a expressão gênica. Periodontal disease (PD) is a multifactorial disease, influenced by the periodontopathogenic microorganisms’ presence, host genetic susceptibility, among others. The inflamed periodontal tissue produces amongst other cytokines the Interleukin8 (IL-8). In the scientific literature there are conflicting information about the IL-8 levels in gingival crevicular fluid of patients with and without DP. Previous studies of our group found that patients carrying the haplotype ATC/TTC in IL8 gene were 2 times more susceptible to PD and these same patients with lower microbial challenge develop PD more exaggeratedly compared to individuals considered not susceptible to PD by absence of that haplotype. As these results were obtained from a clinical study, in vitro studies are necessary to investigate the functionality of the IL8 gene haplotypes. The objective of this study was to investigate whether IL-8 levels are increased or not by the presence of PD and, through controlled in vitro assays, the aforementioned haplotypes in IL8 gene can influence the functionality and expression of this and other important genes to the immune response. We conducted a rigorous literature systematic review followed by meta-analysis focusing on the mRNA and IL-8 protein quantification in gingival tissue, saliva and gingival crevicular fluid (GCF) of patients with PD compared to periodontally healthy individuals. We found a higher IL8 gene expression and IL-8 protein in the gingival tissues of PD patients, whereas protein levels of IL-8 showed varying levels in GCF and saliva. We also investigated cells from the patient’s peripheral blood carrying Livia Sertori Finoti – Doutorado 19 different haplotypes in IL8 gene, their possible influence on the expression genes of the immune system. The functionality of these haplotypes in IL8 gene was also investigated after genetic edition in cell line using CRISPR-CAS9 followed by homologous recombination system. It was observed that against microbial stimuli the ATC/TTC haplotype was associated with increased gene expression and function of the IL8 gene compared to the ATT/TCC haplotype. As a general conclusion it was noted that in gingival tissue there is an agreement in the literature on higher levels of mRNA and protein for IL-8 associated with PD, and that the IL8 haplotype previously associated with susceptibility to chronic periodontitis proved functional, influencing gene expression.