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La diabetes mellitus (DM) presenta un problema de salud pública a nivel mundial. La DM es un grupo de enfermedades metabólicas heterogéneas asociadas a alteraciones en el metabolismo glucídico, lipídico y proteico y inflamación sistémica crónica de bajo grado. Además, está caracterizada por un estado de hiperglucemia secundaria a un defecto absoluto o relativo en la secreción de insulina por parte de las células-β del páncreas. Tanto en la DM tipo 1 como en la DM de tipo 2 (DM1 y DM2) la hiperglucemia, la inflamación sistémica y el estrés oxidativo, son unos de los mayores factores predisponentes a la disfunción endotelial y a las enfermedades cardiovasculares. En los últimos años se han desarrollado como tratamiento farmacológico de la DM otro grupo de fármacos entre los que se incluyen los inhibidores del cotransportador SGLT-2 (iSGLT2). Gracias a su mecanismo de acción, los i-SGLT2 favorecen un mejor control glucémico modulando la disfunción mitocondrial, la cual es asociada a la activación del inflamasoma NLRP3 en la DM2. A tal fin, en la presente tesis doctoral nos planteamos investigar sobre diversos aspectos donde existen vacíos en el conocimiento. Por lo tanto, hemos establecido los siguientes objetivos específicos: 1. Evaluar las interacciones leucocitos-endotelio y explorar tal relación y su correlación con la producción ROS y la disfunción mitocondrial en leucocitos de pacientes con DM1 y sus respectivos controles. 2. Evaluar el papel del control glicémico en la activación del inflamasoma NLRP3 en pacientes con DM2. 3. Evaluar el efecto del iSGLT2 empagliflozina sobre el perfil inflamatorio y la respuesta antioxidante en leucocitos procedentes de pacientes con DM2 y sus respectivos controles. En la presente tesis doctoral, hemos observado que la disfunción mitocondrial, el estrés oxidativo y el control glucémico pueden modular las dinámicas y la función de los leucocitos en los pacientes con DM1 y DM2, favoreciendo las interacciones entre los leucocitos y las células endoteliales vasculares provocando junto a la inflamación de bajo grado danos vasculares. Además, los resultados apoyan la hipótesis que los pacientes DM2 tratados con Empagliflozina mejoran el perfil inflamatorio. En conclusión, los datos obtenidos sugieren que un buen manejo del control glucémico y de la inflamación junto al utilizo de los iSGLT2 podría prevenir también otras comorbilidades asociadas a la DM2. Diabetes mellitus (DM) has been recognized as one of the four major non-communicable diseases widespread worldwide. Its multifactorial aetiology leads to impaired carbohydrate and fat metabolism, prolonged and inappropriate hyperglycaemia, chronic low-grade inflammation, as well as defects in insulin action and/or secretion. Accumulating evidence suggests that hyperglycaemia, systemic inflammation and oxidative stress are some of the main common features of both type 1 and 2 diabetes (T1D and T2D), thus acting as key factors in the development of DM associated macro- and microvascular complications. Over the last few years, inhibitors of sodium-glucose co-transporter type 2 (iSGLT2) have received growing attention as new oral antidiabetic drugs. Their unique mechanism of action results in improved glucose control by modulating mitochondrial dysfunction, which is associated with NLRP3 inflammosome activation in T2D. With this aim in mind, we established the following objectives: 1. To assess the relationship between the inflammatory/adhesive process in the vascular wall and intracellular mechanisms in T1D patients, and explore its relevance in ROS production and mitochondrial impairment. 2. To explore the role played by glycaemic control in NLRP3 inflammasome activation in T2D patients. 3. To evaluate beneficial effects of iSGLT2 Empagliflozin treatment on glycaemic state, systemic inflammation and antioxidant properties in leukocytes in the peripheral blood (PMNs) in T2D patients. The findings of the current doctoral thesis reveal that mitochondrial dysfunction, oxidative stress and glycaemic control affect leukocyte dynamics and function in both T1D and T2D patients by promoting the interaction between these cells and the vascular endothelium and therefore vessels damage due to low grade inflammation. Moreover, our data support the hypothesis that treatment of T2D patients with Empagliflozin ameliorates the disease’s inflammatory profile. Together, these findings suggest that adequate management of the glycaemic state and inflammation and the use of iSGLT2 can prevent the onset of the atherosclerotic process and, consequently, delay the development of DM-associated vascular complications.

O uso dos raios X no diagnóstico e para guiar procedimentos intervencionistas trouxe inúmeras vantagens à assistência ao paciente, mas agregou riscos à saúde ocupacional da equipe envolvida. Esses profissionais são expostos aos raios X e devem ter o acompanhamento de sua saúde ocupacional. A legislação trabalhista brasileira prevê a realização de exames de hemograma completo com contagem de plaquetas na admissão e semestralmente, embora não existam evidências de que esse biomarcador é adequado para avaliar as exposições em baixas doses de radiação. Torna-se essencial avaliar se a dose dos trabalhadores ocupacionalmente expostos à radiação X em ambiente hospitalar são significativas e possuem relação para alteração nas contagens de leucócitos e plaquetas dos exames de hemograma. Para isso foi realizado um estudo observacional retrospectivo considerando uma amostra de 5.968 exames de hemograma e 62.088 doses efetivas mensais dos 766 trabalhadores que exerceram atividades em radiologia diagnóstica e intervencionista, no período de 2009 a 2019. Apenas 5,58% (IC95% 5,41 – 5,77) das doses avaliadas foram acima do nível de registro, 1,03% (IC95% 0,95 – 1,12) foram acima do nível de investigação e 0,78% (IC95% 0,29 – 1,70) atingiram o limite de dose anual. Quando observado os exames de hemograma, 1,09% (IC95% 0,84 – 1,39) destes apresentaram leucopenia e 2,13% (IC95% 1,78 – 2,53) apresentaram trombocitopenia. Quando analisada a dose acumulada em 12 meses e a dose mensal do mês anterior à coleta de sangue, não foi identificada relação estatisticamente significativa para contagem de leucócitos - (b = -0,01 (IC95% -0,03 - 0,01); p = 0,254) e (b = -0,04 (IC95% -0,02 - 0,12); p = 0,606) respectivamente, nem para contagem de plaquetas - (b = -0,52 (IC95% -1,09 - 0,05); p = 0,072) e (b = -0,69 (IC95% -3,63 - 2,25); p = 0,646), respectivamente. Avaliando a relação entre a dose mensal e os exames de hemograma dos IOEs, verifica-se relação estatisticamente significativa, para contagem de leucócitos (b = -0,12 (IC95% -0,19 - -0,04); p = 0,002), mas o mesmo não ocorreu para contagem de plaquetas (b = -1,91 (IC95% -4,93 - 1,11); p = 0,215). A avaliação quanto à probabilidade de doses acima do nível de investigação mensal ou do limite de dose efetiva anual ocasionar alterações no hemograma não mostrou diferença estatisticamente significativa em relação às médias leucocitárias ou plaquetárias. Foi identificada exceção, com diferença estatisticamente significativa, para a associação das doses acumuladas em 12 meses em relação à média da 8 contagem de leucócitos. No entanto, os dois grupos (dose acumulada menor que 20 mSv e dose acumulada maior ou igual a 20 mSv) estão entre os valores de referência normais para contagem de leucócitos. Os achados do presente estudo demonstraram não haver uma relação estatisticamente significativa, com validade clínica, entre as doses efetivas individuais e a contagem de leucócitos e de plaquetas no hemograma em todas as análises realizadas. The use of X-rays to diagnose and to guide interventional procedures brought numerous advantages to patient care, but added risks to the occupational health of the staff involved. These professionals are exposed to X-rays and must monitor their occupational health risk. Brazilian Labor Law provides for complete blood count tests with platelet counts at admission and every six months, although studies have shown that this biomarker does not show evidence of low-dose radiation. It is essential to assess whether the occupational radiation X dose to workers in a hospital environment is significant and has a relationship with changes in the leukocyte and platelet counts of the blood count tests. For this purpose, a retrospective observational study was carried out considering a sample of 5,968 blood tests and 62,088 effective monthly doses of the 766 persons who worked in diagnostic and interventional radiology, in the period from 2009 to 2019. Only 5.58% (95% CI, 5.41 - 5.77) of the doses evaluated were above the recording level, 1.03% (95% CI, 0.95 - 1.12) were above the investigation level and 0.78% (95% CI 0.29 - 1, 70) reached the annual dose limit. When analyzing the blood count tests, we observed that 1.09% (95% CI, 0.84 - 1.39) had leukopenia and 2.13% (95% CI, 1.78 - 2.53) had thrombocytopenia. When analyzing the accumulated dose in 12 months and the monthly dose in the month prior to blood collection, no statistically significant relationship was identified with leukocyte count - (b = -0.01 (95% CI -0.03 - 0.01); p = 0.254) and (b = -0.04 (95% CI, -0.02 - 0.12); p = 0.606) respectively, nor for platelet count - (b = -0.52 (95% CI, -1,09 - 0.05); p = 0.072) and (b = -0.69 (95% CI, -3.63 - 2.25); p = 0.646), respectively. Assessing the relationship between the monthly dose and the worker CBC tests, we found a statistically significant association with the leukocyte count (b = -0.12 (95% CI, -0.19 - -0.04); p = 0.002), but the same did not occur for platelet count (b = -1.91 (95% CI, -4.93 - 1.11); p = 0.215). The evaluation regarding the probability of doses above the monthly investigation level or the annual effective dose limit causing changes in the blood count did not show any statistically significant difference in relation to leukocyte or platelet averages. An exception was identified, with a statistically significant difference, for the association of doses accumulated in 12 months in relation to the average of leukocytes count. However, the two groups (accumulated dose less than 20 mSv and the accumulated dose higher than or equal to 20 mSv) are among the normal reference values for leukocyte count. The findings of the present study demonstrated that there is no statistically 10 significant relationship, with clinical validity, between the individual effective doses and the leukocyte and platelet count in the blood count in all analysis performed.

La diabetes tipo 2 (T2D) es una enfermedad metabólica crónica de base inflamatoria cuya incidencia ha ido aumentando en los últimos años. Esta enfermedad metabólica también aumenta la predisposición a sufrir complicaciones cardiovasculares, que ponen en peligro la vida del paciente. Por ello, profundizar en el origen celular y molecular de la T2D facilitaría su prevención temprana y el retraso de las complicaciones cardiovasculares. En este contexto, esta tesis doctoral pretende describir algunas de las vías homeostáticas implicadas en la fisiopatología de la T2D en los leucocitos humanos. En concreto, se centra en el estudio de las alteraciones en la función mitocondrial, la inflamación, la autofagia y el estrés del retículo endoplásmico y su impacto en las interacciones leucocito-endotelio y en los marcadores de lesiones ateroscleróticas tempranas. Nuestra hipótesis es que las diferentes alteraciones fisiopatológicas de la diabetes tipo 2 afectan a la función de los leucocitos al perturbar la función mitocondrial y generar estrés oxidativo, estrés del retículo endoplásmico y activar la autofagia. Además, abordamos la influencia de diferentes enfoques terapéuticos, como el control glucémico, el tratamiento con metformina o el novedoso péptido antioxidante SS-31 dirigido a las mitocondrias, en esos mecanismos. Inicialmente, describimos que la autofagia, la producción de especies reactivas de oxígeno mitocondriales y las interacciones leucocito-endotelio están aumentadas en los leucocitos de pacientes con T2D. Curiosamente, encontramos correlaciones entre Beclina-1 y las interacciones leucocito-endotelio, lo que apunta a una regulación de la inflamación dependiente de la autofagia. A continuación, analizamos cómo influye el control glucémico en el grosor de la capa íntima-media de la carótida, un marcador de desarrollo temprano de la aterosclerosis, y su asociación con las interacciones leucocito-endotelio y la inflamación en pacientes con T2D. El control glucémico se mide por el porcentaje de hemoglobina glicosilada en sangre periférica, y se emplea en la práctica clínica habitual para evaluar la evolución de los pacientes desde el inicio de la T2D. Observamos que un control glucémico estricto es beneficioso para todos los parámetros medidos, lo que supone una estrategia terapéutica fácil y útil para la prevención de eventos ateroscleróticos. Paralelamente, describimos que el tratamiento con metformina puede mitigar las alteraciones de la dinámica mitocondrial en los leucocitos de pacientes con T2D. La metformina es uno de los tratamientos más prescritos y mejor descritos de la diabetes tipo 2. Entre sus numerosos efectos, inhibe la función del complejo I mitocondrial. Nuestros resultados coinciden con este dato y sugieren que la metformina ejerce un efecto protector sobre las mitocondrias, además de su conocido efecto hipoglucemiante. Como abordar la disfunción mitocondrial parece ser una terapia prometedora, nos propusimos determinar el efecto del SS-31. El SS-31 es un péptido antioxidante dirigido a las mitocondrias que puede amortiguar el exceso de especies reactivas de oxígeno gracias a su residuo dimetiltirosina. El tratamiento de leucocitos de pacientes con T2D con este antioxidante redujo la activación de la autofagia, el estrés del retículo endoplásmico y mejoró la función mitocondrial. El tratamiento con SS-31 también disminuyó las interacciones de los leucocitos con el endotelio, apuntando a una posible acción preventiva del SS-31 contra los eventos ateroscleróticos. En conjunto, estos resultados contribuyen a desentrañar los mecanismos que contribuyen a la fisiopatología de la T2D y sus comorbilidades cardiovasculares. También nos adentramos en los posibles efectos beneficiosos de diferentes enfoques terapéuticos como el seguimiento estricto del control glucémico o los tratamientos farmacológicos con metformina o SS-31 sobre la función mitocondrial y las vías homeostáticas celulares, proponiéndolos como posibles tratamientos antiateroscleróticos tempranos. Type 2 diabetes (T2D) is a chronic metabolic disease with an inflammatory basis and whose incidence has been increasing over recent years. This metabolic disease also increases the predisposition to suffer cardiovascular complications, which endanger the life of the patient. Hence, delving into the cellular and molecular origin of T2D would facilitate its early prevention and the delay of the cardiovascular complications. In this context, this doctoral thesis aims to describe some of the homeostatic pathways involved in the physiopathology of T2D in human leukocytes. Specifically, the focus is set on studying the alterations on mitochondrial function, inflammation, autophagy and endoplasmic reticulum stress and their impact on leukocyte-endothelium interactions and markers of early atherosclerotic lesions. We hypothesize that the different pathophysiologic alterations in type 2 diabetes affect the leuckocyte function by disturbing mitochondrial function and generating oxidative stress, endoplasmic reticulum stress and activating autophagy. Moreover, we address the influence of different therapeutic approaches, as glycaemic control, metformin treatment or the novel mitochondria-targeted antioxidant peptide SS-31, in those mechanisms. Initially, we describe that autophagy, mitochondrial ROS production and leukocyte-endothelium interactions are enhanced in leukocytes from T2D patients. Interestingly, we found correlations between Beclin-1 and the leukocyte-endothelium interactions, which points to an autophagy-dependent regulation of inflammation. Next, we analysed how glycaemic control influences the carotid intima-media thickness, an early atherosclerosis development marker, and its association with the leukocyte-endothelium interactions and inflammation in T2D patients. Glycaemic control is measured by the percentage of glycated haemoglobin in peripheral blood, and is employed in usual clinical practice to assess the patients’ evolution since T2D onset. We observed that a tight glycaemic control is beneficial for all measured parameters, representing an easy and useful therapeutic strategy for prevention of atherosclerotic events. In parallel, we described that metformin treatment can mitigate the alterations in mitochondrial dynamics in leukocytes from T2D patients. Metformin is one of the most prescribed and best described treatments of T2D. Among its known pleiotropic effects, it inhibits the function of mitochondrial complex I. Our results are in line with this knowledge, and suggest that metformin exerts a protective effect on mitochondria, beyond its known hypoglycaemic effect. As tackling mitochondrial dysfunction seems to be a promising therapy, we aimed to determine the effect of SS-31. SS-31 is a mitochondria-targeted antioxidant peptide that can quench the excess of reactive oxygen species thanks to its dimethyltyrosine residue. The treatment of leukocytes from T2D patients with this antioxidant reduced the activation of autophagy, endoplasmic reticulum stress and improved the mitochondrial dysfunction. SS-31 treatment also diminished the interactions of the leukocytes with the endothelium, pointing to a possible preventive action of SS-31 against atherosclerotic events. Altogether, these results contribute to untangle the mechanisms that contribute to the physiopathology of T2D and its cardiovascular comorbidities. We also dive into the possible beneficial effects of different therapeutic approaches as the tight monitoring of glycaemic control or pharmacological treatments with metformin or SS-31 on mitochondrial function and the cellular homeostatic pathways, proposing them as possible early anti-atherosclerotic treatments.

[Resumen]: Las nanopartículas (NP) de óxidos metálicos poseen una amplia variedad de propiedades físico-químicas y biológicas muy útiles para aplicaciones industriales y prácticas biomédicas, y constituyen una tecnología emergente en pleno desarrollo. Como resultado, la exposición humana a estos nanomateriales es muy frecuente, resultando un asunto de preocupación para la salud pública, ya que existen hasta la fecha datos escasos acerca de su seguridad y posibles efectos tóxicos. Los leucocitos salivales humanos se han propuesto recientemente como alternativa no invasiva a los leucocitos extraídos de sangre periférica para evaluar la genotoxicidad in vitro. El presente trabajo se ha centrado en demostrar la idoneidad de los leucocitos salivales como biomatriz en el ensayo del cometa para llevar a cabo estudios de nanogenotoxicidad in vitro, mediante la evaluación de algunas de las NP de óxidos metálicos presentes con mayor frecuencia en productos de consumo: NP de dióxido de titanio (TiO2), óxido de zinc (ZnO) y dióxido de cerio (CeO2). Se evaluaron el daño primario y oxidativo en el ADN inducido por estas NP mediante metodologías basadas en el ensayo del cometa: la versión alcalina estándar y la versión modificada con la enzima hOGG1, respectivamente. Previamente al análisis de la genotoxicidad, se descartó la existencia de cualquier posible interferencia de las NP con el procedimiento metodológico del ensayo y con la actividad de la enzima hOGG1. Los resultados obtenidos mostraron aumentos significativos tanto del daño primario como del daño oxidativo en el ADN tras los tratamientos con las tres NP. Los datos de este trabajo apoyan el uso de los leucocitos salivales como muestrabiológica adecuada y sensible para realizar estudios de nanogenotoxicidad in vitro, y contribuyen a incrementar el conocimiento acerca del impacto de las NP de óxidos metálicos sobre la salud humana, reforzando la necesidad de una regulación específica sobre el uso de nanomateriales. [Resumo]: As nanopartículas (NP) de óxidos metálicos posúen unha ampla variedade de propiedades físico-químicas e biolóxicas moi útiles para aplicacións industriais e prácticas biomédicas, e constitúen unha tecnoloxía emerxente en pleno desenvolvemento. Como resultado, a exposición humana a estes nanomateriais é moi frecuente, resultando un asunto de preocupación para a saúde pública, xa que existen ata o de agora datos escasos acerca da súa seguridade e posibles efectos tóxicos. Os leucocitos salivales humanos propuxéronse recentemente como alternativa non invasiva aos leucocitos extraídos de sangue periférico para avaliar a xenotoxicidade in vitro. O presente traballo centrouse en demostrar a idoneidade dos leucocitos salivales como biomatriz no ensaio do cometa para levar a cabo estudos de nanoxenotoxicidade in vitro, mediante a avaliación dalgunhas das NP de óxidos metálicos presentes con maior frecuencia en produtos de consumo: NP de dióxido de titanio (TiO2), óxido de zinc (ZnO) e dióxido de cerio (CeO2). Avaliáronse o dano primario e oxidativo no ADN inducido por estas NP mediante metodoloxías baseadas no ensaio do cometa: a versión alcalina estándar e a versión modificada coa enzima hOGG1, respectivamente. Previamente á análise da xenotoxicidade, descartouse a existencia de calquera posible interferencia das NP co procedemento metodolóxico do ensaio e coa actividade da encima hOGG1. Os resultados obtidos amosaron aumentos significativos tanto do dano primario como do dano oxidativo no ADN tralos tratamentos coas tres NP. Os datos deste traballo apoian o uso dos leucocitos salivales como mostra biolóxica adecuada e sensible para realizar estudos de nanoxenotoxicidade in vitro, e contribúen a incrementar o coñecemento acerca do impacto das NP de óxidos metálicos sobre a saúde humana, reforzando a necesidade dunha regulación específica sobre o uso de nanomateriais. [Abstract]: Metal oxide nanoparticles (NP) possess a wide variety of physico-chemical and biological properties very useful for industrial applications and biomedical practices, and constitute an emerging technology in growing development. As a result, human exposure to these nanomaterials is highly frequent, becoming an issue of concern to public health since data on their safety and possible toxic effects are scarce so far. Human salivary leukocytes have recently been proposed as a non-invasive alternative to peripheral blood leukocytes to evaluate genotoxicity in vitro. The present study focused on proving the suitability of salivary leukocytes as a biomatrix in the comet test for in vivo nanogenotoxicity studies, by testing some of the metal oxide NP most frequently present in consumer products: titanium dioxide (TiO2), zinc oxide (ZnO) and cerium dioxide (CeO2) NP. Primary and oxidative DNA damage induced by these NP were evaluated using the comet assay-based methodologies: the standard alkaline version and the hOGG1 enzyme-modified version, respectively. Any possible interference of the NPs with the methodological procedure or the hOGG1 activity was addressed before performing genotoxicity evaluation. Results showed significant increases in both primary and oxidative DNA damage after treatments with the three NP. These data support the use of salivary leukocytes as a proper and sensitive biological sample for in vitro nanogenotoxicity studies, and contribute to increase the knowledge on the impact of metal oxide NP on human health, reinforcing the need of a specific regulation on nanomaterials use. Traballo fin de mestrado (UDC.CIE). Bioloxía molecular, celular e xenética. Curso 2020/2021

Glycosaminoglycan metabolism disorders bring together a group of alterations of genetic origin whose effect is the progressive intralysosomal accumulation of GAGs. Affected individuals are compromised in a multisystemic way causing, among other clinical manifestations, coarse facial features, short stature, multiple skeletal dysplasia, joint stiffness, visceromegaly and developmental delay. The diagnostic approach to these disorders represents a challenge in our context since the required biochemical tests are specialized and only performed in major cities. This makes it difficult to have access to affected patients whose geographical location is distant and therefore, the use of samples collected in solid-phase represents an advantage for the study of high-risk populations. The present study aims to report the experience of twenty years of selective screening by assessing enzyme activity in dried blood spots (DBS) collected on filter paper and leukocyte extracts. The deficiency of the enzymes here studied has been associated with Mucopolysaccharidosis I, II, IIIB, IVA, IVB, VI and VII. The present study assessed a population of 8,239 patients referred for clinical suspicion of MPS. Fluorometric endpoint methods using 4-methylumbelliferone-labeled substrates were used. This study allowed us to establish reference values in the Colombian population for ?-L-iduronidase, iduronate 2-sulfatase, ?-N-acetylglucosaminidase, N-acetylglucosamine-6-sulfate sulfatase, ?-galactosidase, arylsulfatase B and ?-glucuronidase, in DBS and leukocytes. In addition, incidence values were calculated for each of MPS. This study offers very useful information for the health system, the scientific community and facilitates the diagnostic definition of these metabolic disorders in the country. Los desórdenes en el metabolismo de los glicosaminoglicanos (GAGs) reúnen un grupo de alteraciones de origen genético cuyo defecto a nivel celular es la acumulación progresiva intralisosomal de GAGs. Los individuos afectados se ven comprometidos en forma multisistémica causando, entre otras manifestaciones clínicas, rasgos faciales toscos, talla corta, displasias esqueléticas múltiples, rigidez articular, visceromegalias y retraso en el desarrollo. La aproximación diagnóstica de estos desórdenes representa un desafío en nuestro contexto dado que los ensayos bioquímicos requeridos son especializados y sólo se realizan en ciudades principales. Lo anterior hace difícil el acceso a pacientes afectados cuya localización geográfica es distante y por lo tanto, el uso de muestras recolectadas en fase sólida representa una ventaja para el estudio en poblaciones de riesgo, donde es necesaria la remisión de un gran número de muestras sin involucrar procesos de refrigeración. El objetivo del presente estudio es comunicar la experiencia de veinte años de tamizaje selectivo, mediante la valoración de la actividad enzimática en gotas de sangre seca recolectada en papel filtro (DBS) y extractos de leucocitos para las enzimas cuya deficiencia ha sido relacionada con Mucopolisacaridosis I, II, IIIB, IVA, IVB, VI y VII. El presente estudió valoró una población de 8,239 pacientes remitidos por sospecha de MPS. Se utilizaron métodos fluorométricos de punto final usando sustratos marcados con 4-metillumbeliferona. Como enzima control, la actividad de beta-galactosidasa fue estimada para todas las muestras analizadas con el fin de garantizar la viabilidad de estas. Los estudios permitieron establecer valores de referencia en población Colombiana para alpha-iduronidase, Iduronate 2-sulfatase, alpha-N-acetylglucosaminidase, N-acetylglucosamine-6-sulfate sulfatase, Beta-galactosidase, Arylsulfatase B y Beta-glucuronidase, en DBS y leucocitos. Además, se calcularon valores de incidencia para Magíster en Ciencias Biológicas Maestría

Este proyecto trata sobre cómo conseguir detectar la leucemia de una forma rápida y poco costosa para que pueda ser accesible por todo el mundo. Para ello, solamente necesitaríamos una muestra de sangre del paciente con la que aplicar un frotis de sangre periférico para poder obtener muestras válidas para analizar. A continuación, tras haber obtenido dichas muestras, aplicaríamos técnicas de visión por computación y aprendizaje automático para poder clasificarlas. En caso de que alguna de las muestras del paciente fuera clasificada dentro de la clase “Leucemia”, avisaríamos al paciente para que pudiera empezar a tratarse lo antes posible. Además, con el fin de ir mejorando nuestro dataset, siempre y cuando el paciente nos lo permita, y tras el diagnóstico por parte de los servicios de salud, iríamos añadiendo las muestras dentro de nuestro dataset. Para facilitar el trabajo en futuras mejoras e ir analizando mejor los resultados, crearemos una base de datos manejada por una interfaz gráfica, en donde almacenaremos todos los datos obtenidos tras cada prueba del código. Graduado o Graduada en Ingeniería Informática por la Universidad Pública de Navarra Informatika Ingeniaritzako Graduatua Nafarroako Unibertsitate Publikoan

Leukoreduction (LR) is a technique that consists of reducing the number of leukocytes in whole blood or blood components that can contribute to decreasing storage lesions and the occurrence of post-transfusion complications. We propose that using a blood bag with pre-storage leukocyte filtration is sufficient for blood conservation under field conditions. Ten healthy Nelore cows were used. Whole blood was sampled from each animal and stored at 2 to 6 &deg, C in CPD/SAG-M (citrate phosphate dextrose bag with a saline, adenine, glucose, mannitol satellite bag) triple bags (Control) and in CPD/SAG-M quadruple bags with a leukocyte filter (Filter). At baseline and after 7, 14, 21, 28, 35, and 42 days (D0, D7, D14, D21, D28, D35, and D42, respectively), complete hematological, blood gas, and biochemical evaluations were determined. The filtered bag removed 99.3% of white blood cells from cattle blood, and the entire filtration process was performed in the field. There was a reduction in the number of red blood cells (RBCs) in both groups from D14 onward, with a decrease of 19.7% and 17.1% at D42 for the Control and Filter bags, respectively. The hemoglobin (Hb) concentration had variation in both groups. Potassium, pO2, pCO2, and sO2 increased, and sodium, bicarbonate, and pH decreased during storage. The filtered bag was efficient in removing white cells from cattle whole blood and could be used under field conditions. Blood stored after LR showed differences (p &lt, 0.05) in blood gas analysis towards a better quality of stored blood (e.g., higher pH, lower pCO2, higher sO2). Further experimental studies are required to prove that blood without white cells results in a decrease in transfusion reactions in cattle.

[Abstract] OBJECTIVE: Clinical studies claim that platelet-rich plasma (PRP) accelerates tissue healing due to its high concentration of growth factors and that the combination with leukocytes improves the antimicrobial effect of the concentrate. Most of these studies obtained PRP using different separation systems, and few analyzed the content of the PRP used for treatment. This study characterized the composition of PRP and white blood cells (WBC) from a single donor produced by three commercially available PRP separation systems and two anticoagulated general analytical tubes. METHODS: Five patients donated 50 mL of blood, which was processed to produce PRP and WBC using three PRP concentration systems (i.e., Easy PRP Kit, GloPRP, and Wego) and two tubes for general analysis anticoagulated with ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) and citrate. Platelets and WBC in combination with their concentrates were analyzed by automated systems in a clinical laboratory. RESULTS: There were no significant differences in the average concentrations of PRP platelets and WBC between GloPRP and the tubes for general analysis with EDTA and citrate; however, the Easy PRP Kit gave results much superior to the rest of the methods, especially comparing it with the Wego Kit, whose concentrates were especially low, even nonexistent for WBC. CONCLUSIONS: The Easy PRP Kit concentrates WBC-rich PRP, resulting in increased WBC concentrations, compared with low WBC-low PRP of GloPRP and general tube methods for EDTA and citrate analysis and the even lower concentration of PRP from the Wego Kit, with the absence of leukocytes

Objective: to verify possible changes in immune system cells (leukogram) and immunoglobulins in women with depression. Methodology: this is an observational, cross-sectional and analytical study conducted with 50 women (with depression n=25; no depression n=25) living in the Araguaia Valley region, Brazil. The women were investigated by collecting a peripheral blood sample, and the concentrations of leukocytes were determined by counting cells by flow cytometry and immunoglobulin concentrations by immunoturbidimetry. The data obtained were analyzed by the Kruskal-Wallis and DUNN tests. This study was approved by an Ethics and Research Committee (CAAE: 34568014.8.0000.5587). Results: the sample consisted of women with a mean age of 37±10,59 years, white/brown and single. Non-smoking women who did not have a habit of consuming alcoholic beverages prevailed. Depression was present among 50% of the sample. Regarding the evaluation of leukogram between the groups (with depression and without depression), a significant difference was observed in the serum value of basophils and the total concentrations of Immunoglobulins did not present significant differences between the groups. Conclusion: in this study, depression did not interfere in the concentration of leukocytic cells or in the production of immunoglobulins, and may be related to the long-term use of psychiatric drugs, because they have immunomodulatory properties, highlighting the importance of performing a treatment and follow-up for Depression. Objetivo: verificar posibles cambios en las células del sistema inmunológico (leucograma) e inmunoglobulinas en mujeres con depresión. Metodología: se trata de un estudio observacional, transversal y analítico realizado con 50 mujeres (con depresión n=25; no hay depresión n=25) que vive en la región de Vale do Araguaia, Brasil. The women were investigated by collecting a peripheral blood sample, and the concentrations of leukocytes were determined by counting cells by flow cytometry and immunoglobulin concentrations by immunoturbidimetry. Los datos obtenidos fueron analizados por las pruebas Kruskal-Wallis y DUNN. Este estudio fue aprobado por un Comité de Etica e Investigación (CAAE: 34568014.8.0000.5587). Resultados: la muestra consistió en mujeres con una edad media de 37±10,59 años, blancas/marrones y solteras. Las mujeres no fumadoras que no tenían el hábito de consumir bebidas alcohólicas prevalecieron. La depresión estuvo presente entre el 50% de la muestra. En cuanto a la evaluación del leucograma entre los grupos (con depresión y sin depresión), se observó una diferencia significativa en el valor sérico de los basófilos y las concentraciones totales de inmunoglobulinas no presentaban diferencias significativas entre los grupos. Conclusión: en este estudio, la depresión no interfirió en la concentración de células leucocitos o en la producción de inmunoglobulinas, y puede estar relacionada con el uso a largo plazo de fármacos psiquiátricos, ya que tienen propiedades inmunomoduladoras, destacando la importancia de realizar un tratamiento y seguimiento de la depresión. Objetivo: verificar possíveis alterações de células do sistema imune (leucograma) e imunoglobulinas em mulheres com depressão. Metodologia: trata-se de um estudo observacional, transversal e analítico, conduzido com 50 mulheres (com depressão n=25; sem depressão n=25) residentes na região do Vale do Araguaia, Brasil. As mulheres foram investigadas por meio da coleta de uma amostra de sangue periférico, sendo determinadas as concentrações de leucócitos através da contagem de células por citometria de fluxo e as concentrações de imunoglobulinas por imunoturbidimetria. Os dados obtidos foram analisados pelo teste Kruskal-Wallis e DUNN. Este estudo foi aprovado por um Comité de Ética e Pesquisa (CAAE: 34568014.8.0000.5587). Resultados: a amostra, foi composta por mulheres com média de idade de 37±10,59 anos, brancas/pardas e solteiras. Prevaleceu mulheres não fumantes e que não tem hábito de consumir bebidas alcoólicas. A depressão esteve presente entre 50% da amostra. Quanto à avaliação do leucograma entre os grupos (com depressão e sem depressão), observou-se uma diferença significativa no valor sérico dos Basófilos, e as concentrações totais das Imunoglobulinas não apresentam diferenças significativas entre os grupos. Conclusão: neste estudo a depressão não interferiu na concentração das células leucocíticas nem na produção de imunoglobulinas, podendo estar relacionado ao uso em longo prazo de fármacos psiquiátricos, por possuírem propriedades imunomoduladoras, destacando a importância de realizar um tratamento e acompanhamento para depressão.

Ex vivo human peripheral blood mononuclear cell (PBMC) systems offer the possibility to test transcriptomic effects of food bioactive compounds with potential health effects. We investigated all-trans retinoic acid (ATRA) effect on mRNA expression of key lipid metabolism and inflammatory genes in PBMCs from normal-weight (NW) and overweight-obese (OW-OB) men with different metabolic syndrome-related features. PBMCs were incubated with 10 &micro, M ATRA and mRNA levels of selected genes were analyzed using real-time RT-qPCR. Human ex vivo PBMCs responded to ATRA treatment, but the response for some genes was dependent on body mass index (BMI), with a lower response in PBMC from OW-OB than from NW donors. Moreover, gene expression response was affected by circulating high-density lipoprotein (HDL)-cholesterol levels. Particularly, the response to ATRA of CPT1A, previously reported as a sensitive metabolic risk predictive biomarker, was dependent on HDL levels and not on BMI, being impaired in those individuals with lower HDL levels, specifically in OW-OB. Thus, PBMCs&rsquo, insensitivity to ATRA, which can be considered as indicative of impaired metabolism, was observed in individuals with higher metabolic risk (OW-OB with low HDL levels). In conclusion, an ex vivo human PBMC system indicates that ATRA response could be influenced by metabolic syndrome features. Moreover, our study reinforces the role of CPT1A as a marker of metabolic risk and points to plasmatic HDL-cholesterol levels as a parameter to take into consideration when the effects of nutritional factors and/or dietary interventions on humans are under study. Further studies including women are required to detect potential gender differences in the observed effects.

Immune functions in teleosts are straightly influenced by environmental temperature. Low temperatures usually affect negatively the immune status of fishes favoring the incidence of diseases. Immune cells in fishes are protected from peroxidation by dietary vitamin E. Innate immune defenses of Piaractus mesopotamicus were evaluated in fish fed with diets supplemented with vitamin E for 45 days. The fish endured decreases in environmental fluctuations of temperature for 24 and 72 h. The most effects were observed at the 24th hour, in which the level of plasma cortisol increased independently of dietary supplement of vitamin E and a lessening of MNL and a raise of GL counting were observed in fish fed with supplemented diets. The lowest SL variation was observed in fish fed with the maximum level of vitamin E, but the dietary vitamin E decreased the HAC. However, the stressing condition increased HAC. Dietary vitamin E used in the present experimental conditions did not present remarkable effects on the immune frame of pacu to cope with environmental thermal fluctuations but other investigations concerning the vitamin half-life and its association with unsaturated dietary lipids seem to be fundamental.

La sangre es un tejido involucrado en la mayoría de los procesos bioquímicos del cuerpo, cuyas variaciones ayudan a detectar lesiones que alteran el organismo. El propósito del estudio fue determinar los valores de referencia en hemograma y química sanguínea en pollos de engorde hembras en condiciones de altitud. Los valores obtenidos tuvieron poca diferencia con los valores bibliográficos comparativos. The blood is a tissue involved in the majority of the bioquimics process of the body, whose variations help to detect issues that disturb the organism. The purpose of the study was to determine the values of references in blood count and biochemistry of females broilers in altitude conditions. The values obtained had little difference with the references.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES The aim of this study was to evaluate the effect of supplementation with exogenous progesterone on the expression of ISG15 in leukocytes and concentration of serum progesterone, on days 10 and 16 of early pregnancy in ewes. The ewes were randomly allocated into two groups: Control Group (GC) and Group P4 (P4G), during seasonal anestrous period and breeding season. The groups were submitted to estrous cycle manipulation protocol. In both periods, P4G received a dose of injectable progesterone on day 3 after mating (25 mg), while the CG received the same vehicle volume. During the non-breeding season, the expression of ISG15 in leukocytes at day 10 did not differ between the groups, P4G and GC (p> 0.05). On the other hand, the expression of ISG15 on day 16 is higher in the CG, when compared to the P4G (p 0.05). On the contrary, P4G showed higher concentrations of circulating progesterone when compared to GC on day 16. The results indicate that progesterone supplementation at the beginning of pregnancy in sheep in the seasonal anestrus is not effective in increasing endocrine signaling in maternal recognition of pregnancy or raising serum progesterone, however, it increases serum progesterone during the reproductive season without changing the relative expression of ISG15 in leukocytes. O objetivo deste trabalho foi avaliar a expressão gênica de ISG15 em leucócitos e progesterona sérica, nos dias 10 e 16 da gestação inicial de ovelhas suplementadas com progesterona. As ovelhas foram alocadas aleatoriamente em dois grupos: Grupo Controle (GC) e Grupo P4 (P4G) durante o período de anestro estacional e na estação reprodutiva. Os grupos foram submetidos a um protocolo de manipulação do ciclo estral. Nos dois períodos, o P4G recebeu uma dose de progesterona injetável no dia 3 após o acasalamento (25 mg), enquanto o GC recebeu o mesmo volume de veículo. A expressão do ISG15 nos leucócitos no D10 não diferiu entre os grupos, P4G e GC (p> 0,05) no anestro e na estação reprodutiva. Por outro lado, no anestro a expressão de ISG15 no dia 16 é maior no GC, quando comparada ao P4G (p 0,05). Ao contrário, P4G apresentou maiores concentrações de progesterona circulante quando comparadas ao GC no dia 16. Os resultados indicam que a suplementação de progesterona no início da gestação em ovelhas no anestro estacional não é eficaz em melhorar a sinalização endócrina do reconhecimento materno da gestação além de diminuir a P4 sérica, no entanto, aumenta a P4 sérica durante a estação reprodutiva sem alterar a expressão relativa de ISG15 nos leucócitos.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Quetiapine (QUE) is a highly complex drug that, due to its different forms of interaction with receptors, has great clinical applicability. Although widely used, QUE brings with it a range of side effects that include, in addition to disorders of the metabolic pathway, changes in levels of the immune system. Quickly metabolised by the liver, it is transformed into its main active metabolite, norquetiapine, being then the clearance of QUE only 5%. This percentage may increase in elderly people, with liver failure or through interaction with other drugs. Thus, non-metabolized quetiapine (nmQUE) may be responsible for inducing peripheral immune changes, especially low-grade chronic inflammation. Therefor, our objective was to evaluate in vitro the potential cytotoxicity and modulatory effect of nmQUE on inflammatory activation and in the formation of extracellular neutrophil traps (NETs). For this, cellular experiments were carried out, using a commercial macrophage cell line (RAW 264.7), in addition to leukocytes and neutrophils, obtained through blood collection from volunteers. The cells were cultured under ideal conditions according to standardisation until the concentration of 1x105 cells/mL was obtained. Then, macrophages, leukocytes and neutrophils were treated and activated, or not, with a mitogenic agent, phytohemagglutinin (PHA). After 24 hours, they were treated with different concentrations of QUE (25, 50, 100, 200 and 400 μg/L). Given at 24 hours of treatment, the cell viability and cytotoxicity of all cells were evaluated using the 3- [4,5-dimethylthiazol-2-yl] -2,5-diphenyltetrazolium assay (MTT). With the result of these tests, the concentration of choice for QUE to be used in the following analyses was defined: 100 μg/L. Thus, after 72 hours of treatment, cell proliferation, oxidative molecules and gene and protein expression (via Quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction (qRT-PCR) of pro-inflammatory and anti-inflammatory cytokines in RAW 264.7 were evaluated. In addition, to assess the effect of nmQUE on the formation of NETs, neutrophils were previously activated, or not, by exposure to yeast cells for 2 hours, followed by exposure to QUE for an additional 2 hours, then fixed and stained, followed by images capture and evaluations consistent with the experiment.The results show the high capacity of nmQUE to interact with immune cells, not showing cytotoxicity, but modifying its inflammatory profile according to its initial state, thus corroborating it with a pro and anti-inflammatory pharmacological effect. In relation to the formation of NETs, neutrophils were surprisingly induced, with nmQUE being responsible for hyper-formation of NETs. With these results, it is concluded that nmQUE exerts an influence on the pathways of the immune system, being possibly responsible for the existence of morbidities and side effects, which represents the major problem of antipsychotic therapy. A quetiapina (QUE) é um fármaco altamente complexo que por suas diferentes formas de interação com os receptores apresenta grande aplicabilidade clínica. Embora muito utilizada, a QUE traz consigo uma gama de efeitos colaterais que incluem além de distúrbios da via metabólica, alterações em nível de sistema imune. Rapidamente metabolizada pelo fígado ela é transformada em seu principal metabólito ativo, a norquetiapina, estando então, à depuração da QUE em apenas 5%. Este percentual pode aumentar em pessoas idosas, com isuficiência hepática ou através da interação com outros fármacos. Com isso, a quetiapina não metabolizada (nmQUE) pode ser responsável pela indução das alteraçãoes imunológicas periféricas, principalmente a inflamação crônica de baixo grau. Assim, nosso objetivo concentrou-se em avaliar in vitro o potencial efeito citotóxico e modulatório da nmQUE na ativação inflamatória e, na formação de armadilhas extracelulares de neutrófilos (NETs). Para isso, foram realizados experimentos celulares, utilizando a linhagem celular comercial de macrófagos (RAW 264.7), além de leucócitos e neutrófilos, obtidos através de coleta sanguínea de voluntários. As células foram cultivadas em condições ideais conforme a padronização até a obtenção da concentração de 1x105 cél/mL. Em seguida, os macrófagos, leucócitos e neutrófilos foram tratados e ativados ou não com agente mitogênico, a fitohemaglutinina (PHA). Após 24 horas, foram tratados com diferentes concentrações de QUE (25, 50, 100, 200 e 400 μg/L). Dada às 24 horas do tratamento, foi avaliada a viabilidade celular e citoxicidade de todas as células, através do ensaio espectrofotométrico do Brometo de 3-[4,5-dimetiltiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazólio (MTT). Com o resultado destes testes, fora definida a concentração de escolha da QUE para ser utilizada nas análises seguintes: 100 μg/L. Com isso, após 72 horas de tratamento, avaliou-se a proliferação celular, moléculas oxidativas e a expressão proteica e gênica (via Quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction (qRT-PCR) de citocinas pró- inflamatórias e anti-inflamatória em RAW 264.7. Ainda, para avaliar o efeito da nmQUE na formação de NETs, os neutrófilos foram previamente ativados ou não pela exposição a células de leveduras por 2 horas, seguidos da exposição à QUE por mais 2 horas, estando posteriormente fixados e corados, seguidos pela captura de imagens e avaliação condizente. Os resultados mostram a alta capacidade de interação da nmQUE para com as células imunológicas, não demostrando citoxicidade, porém modificando seu perfil inflamatório conforme seu estado inicial, corroborando assim, para com um efeito farmacológico pró e anti- inflamatório. Já em relação a formação de NETs, os neutrófilos foram induzidos surpreendentemente, estando a nmQUE responsável por uma hiperformação das NETs. Com esses resultados, conclui-se que nmQUE exerce influência nas vias do sistema imune, sendo possivelmente responsável pela existência de morbidades e efeitos colaterais, o que representa o grande problema da terapia antipsicótica.

El análisis de sangre periférica mediante análisis del frotis es una útil herramienta para la detección de enfermedades y anomalías. Ya sea mediante microscopía o gracias al uso de maquinaria automática especializada, se pueden llevar a cabo numerosos exámenes de fluidos o segregaciones corporales de gran utilidad diagnóstica. Como en el caso de este trabajo, el estudio o análisis de células hematológicas que circulan en sangre periférica requiere de una tinción específica a la hora de mejorar el contraste y visibilidad en el microscopio manual o motorizado como el Cellavision DM96. El equipo de CellsiLAB, grupo de investigación fruto de la colaboración del Hospital Clínic y la Universidad Politécnica de Cataluña, ha desarrollado modelos de redes neuronales para llevar a cabo clasificaciones automáticas de las células sanguíneas anómalas según su índole (linfocitos anormales en diferentes tipos de linfoma, blastos en leucemias agudas, linfocitos reactivos en infecciones, entre otros casos). Asimismo, ocurre que las muestras obtenidas en hospitales ajenos son más susceptibles a ser clasificadas erróneamente por dichos modelos al no compartir características de color, tinción y textura. Es aquí donde entran las GANs, traducido al español RGAs, Redes Generativas Antagónicas, un tipo de redes neuronales artificiales que han experimentado una enorme evolución en los últimos años. La particularidad de estas arquitecturas es que generan imágenes a partir del aprendizaje de un conjunto de datos. Por ende, se ha aprovechado esta cualidad para transformar las imágenes del dominio X (Hospital Germans Trias i Pujol) en el dominio Y (Hospital Clínic) y así emular las características de color, tinción y textura de este último. Tras esta transformación se ha conseguido mejorar la efectividad en la clasificación de las imágenes tomadas en el Hospital Germans Trias i Pujol por parte de los modelos de redes neuronales convolucionales pre-entrenados con datasets del Hospital Clínic. Para las transformaciones se han utilizado las arquitecturas CycleGAN y ColorizationGAN, mientras que para las clasificaciones se han utilizado: ResNet 18, ResNet 34, ResNet 18 con focal loss y ResNet 34 con focal loss. Se ha logrado mejorar la exactitud de la clasificación del 34% a al 81%.

Objective: The primary objective was to investigate the relationship between periodontitis and hypertension in two independent large surveys. The secondary objective was to ascertain whether systemic inflammation had a mediation effect in the association. Methods: This cross-sectional study analysed representative samples of the US (n = 3460; NHANES 2009/10) and Korean (n = 4539; 2015 KNHANES VI-3) populations. The association between periodontitis (exposure), hypertension (outcome) and inflammatory markers [C-reactive protein (CRP) and white blood cell counts (WBC)] (mediators) was assessed using multivariate linear and logistic regression models and mediation analysis. Results: Participants with periodontitis were more likely to have hypertension (NHANES: OR = 1.3, 95% CI: 1.0–1.6, P = 0.025; KNHANES: OR = 1.2, 95% CI: 1.0–1.4, P = 0.041) and actual systolic blood pressure ≥ 140 mmHg (NHANES: OR = 1.6, 95% CI: 1.1–2.3, P < 0.001; KNHANES: OR = 1.3, 95% CI :1.0–1.6, P < 0.031) than those without the disease. These associations were independent of age, gender, BMI, education level, smoking, alcohol consumption, creatinine, physical activity, presence of other comorbidities and confirmed in participants not taking antihypertensive medications. Diagnosis of periodontitis was directly associated with WBC (in both surveys: NHANES: β ± SE = 0.3 ± 0.1, P < 0.004; KNHANES: β ± SE = 0.3 ± 0.1, P < 0.001) and with CRP levels (in one survey: NHANES: β ± SE = 0.1 ± 0.03, P < 0.007; KNHANES: β ± SE = 0.1 ± 0.04, P > 0.213). Mediation analyses confirmed that CRP acted as a mediator in the association between periodontitis and hypertension in both populations (mediated effect: NHANES: β ± SE = 0.010 ± 0.003, P < 0.001; KNHANES: β ± SE = 0.003 ± 0.001, P = 0.015). WBC acted as a mediator in the KNHANES (mediated effect: β ± SE = 0.004 ± 0.001, P = 0.004) whilst in the NHANES, its effect was dependent of CRP inclusion in the model (mediated effect WBC + CRP: β ± SE = 0.002 ± 0.001, P = 0.001). Conclusions: These findings suggest that periodontitis is closely linked to hypertension and systemic inflammation is, in part, a mediator of this association. info:eu-repo/semantics/publishedVersion

Embora seja consenso que a incidência e o agravamento de infeções são maiores em obesos, o efeito de adipocinas, mediadores secretados pelo tecido adiposo, como a amilóide sérica A (SAA) e a leptina, na função de neutrófilos, primeira linha de defesa do organismo, não é completamente conhecido. Acreditando na hipótese de que a leptina e a SAA possam ativar/inativar neutrófilos e interferir na resposta imune inata, nesse trabalho estudamos os efeitos da leptina e de leptina e SAA na função de neutrófilos humanos. Neutrófilos (2,5x106 células/mL) foram isolados do sangue periférico de doadores saudáveis, e posteriormente, cultivados em meio RPMI na presença de leptina (25 e 50ng/mL), SAA (5ug/mL) e leptina nas diferentes concentrações em conjunto com a SAA. LPS (1ug/mL) foi utilizado como controle positivo. In vitro analisamos, através da técnica de citometria de fluxo o efeito da leptina e de SAA sobre parâmetros relacionados à viabilidade de neutrófilos; por ELISA avaliamos a liberação de TNF-α e IL-8 e pela técnica de quimiluminescência amplificada por lucigenina observamos a produção de ROS. Nas condições estudadas, os tratamentos de neutrófilos com SAA, leptina e a combinação de ambas não foram tóxicos para as células. Observamos aumento na produção de ROS de 60% (*p=0.01) e 79% (**p=0.02) por neutrófilos, quando tratados com a combinação de SAA e leptina nas concentrações de 2.5ng/mL e 25ng/mL respectivamente. O tratamento de neutrófilos com leptina nas concentrações de 25ng/mL, 50ng/mL e SAA isoladamente aumentou 38% (**p=0.02), 92% (***p=0.003) e 159% (****p=0.0002) a concentração de TNF-α, respectivamente e essas células, quando tratadas com leptina nas concentrações de 25ng/mL e 50ng/mL em conjunto com a SAA apresentaram aumento de 62% (°p=0.0044), e 106% (°°°p=0.0002), respectivamente. A concentração de IL-8 foi aumentada em neutrófilos tradados com leptina nas concentrações 25ng/mL e 50ng/mL e SAA isoladamente, 39% (**p=0.01), 38% (***p= 0.01) e 62% (****p=0.001), respectivamente e essas células quando tratados com leptina na concentração 50ng/mL em conjunto com a SAA apresentaram aumento de 32% (°p=0.0001). Os resultados indicam que a combinação de leptina e SAA induz a produção de ROS, TNF-α e IL-8 por neutrófilos. Os nossos dados apontam que o tecido adiposo pode através da secreção de adipocinas modular a função de neutrófilos e interferir na resposta imune inata. Although there is a consensus that the infections incidence is higher in obese, the effect of adipokines on neutrophil function is not completely known. Herein, we hypothesized that leptin and serum amyloid A (SAA) can activate/inactivate neutrophils and interfere with the innate immune response. So, we studied the combined effects of leptin and SAA on the function of human neutrophils. Neutrophils (2.5x106 cells / mL) were isolated and cultured in RPMI medium in the presence and absence of leptin (25 and 50ng/mL), SAA (5ug/mL) and LPS (1ug/mL). In vitro, we analyzed, through flow cytometry technique, the effect of leptin and SAA on parameters related to neutrophil viability; by ELISA we evaluated the release of cytokines (TNF-α, IL-8) and by the chemiluminescence technique amplified by lucigenin we observed the production of ROS. Under the conditions studied, neutrophil treatments with SAA, leptin and the combination SAA and leptin were not toxic to the cells. We observed an increase in ROS production of 60% (*p= 0.01) and 79% (**p= 0.02) by neutrophils, when treated with the combination of SAA and leptin at concentrations of 2.5ng/mL and 25ng/mL respectively. The treatment of neutrophils with leptin at concentrations of 25ng/mL, 50ng/mL and SAA increased by 38% (**p= 0.02) and 92% (***p= 0.003) and 159% (****p= 0.0002) the concentration of TNF-α and these cells, when treated, with leptin at concentrations of 25ng/mL and 50ng/mL with SAA showed an increase of 62% (°p= 0.0044), and 106% (°°°p= 0.0002), respectively. The treatment of neutrophils with leptin at concentrations 25ng / mL and 50ng/mL and SAA increased by 39% (**p= 0.01), 38% (***p= 0.01) and 62% (****p= 0.001) the concentration of IL-8, respectively, and these neutrophils when treated with leptin at a concentration of 50ng / mL with SAA showed an increase of 32% (°p= 0.0001). There was an increase in the production of TNF-α and IL-8 at different concentrations of leptin and in treatments with combined leptin and SAA. Our data indicate that adipose tissue can modulate neutrophil function through adipokine secretion and interfere with the innate immune response.

The aim of this study was to assess free fatty acids&rsquo, (FAs) ex vivo anti-/proinflammatory capabilities and their influence on inflammatory gene expression and H2O2 production by human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs). Anthropometric and clinical measurements were performed in 26 participants with metabolic syndrome. Isolated PBMCs were incubated ex vivo for 2 h with several free fatty acids&mdash, palmitic, oleic, &alpha, linolenic, &gamma, linolenic, arachidonic and docosahexaenoic at 50 &mu, M, and lipopolysaccharide (LPS) alone or in combination. H2O2 production and IL6, NF&kappa, B, TLR2, TNF&alpha, and COX-2 gene expressions were determined. Palmitic, &gamma, linolenic, and arachidonic acids showed minor effects on inflammatory gene expression, whereas oleic, &alpha, linolenic, and docosahexaenoic acids reduced proinflammatory gene expression in LPS-stimulated PBMCs. Arachidonic and &alpha, linolenic acids treatment enhanced LPS-stimulated H2O2 production by PBMCs, while palmitic, oleic, &gamma, linolenic, and docosahexaenoic acids did not exert significant effects. Oleic, &alpha, linolenic, and docosahexaenoic acids induced anti-inflammatory responses in PBMCs. Arachidonic and &alpha, linolenic acids enhanced the oxidative status of LPS-stimulated PBMCs. In conclusion, PBMC ex vivo assays are useful to assess the anti-/proinflammatory and redox-modulatory effects of fatty acids or other food bioactive compounds.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Introdução: Poucos são os estudos que apontam as evidencias dos efeitos agudos e crônicos dos exercícios aeróbios nos marcadores imunológicos. Objetivo: investigar o efeito do exercício aeróbio agudo e crônico nos marcadores imunológicos. Métodos: Foi realizada uma revisão sistemática em relação aos efeitos dos exercícios aeróbios agudos e crônicos nas células imunes, dentro da literatura cientifica existente sem restrição ao idioma ou ano de publicação dos estudos até a atualidade. Os artigos selecionados para a revisão passaram por uma análise investigativa quantitativa e qualitativa determinando as suas características. Um estudo seccional com uma avaliação cardiorrespiratória ergoespirométrica, ou seja, teste incremental máximo, assim como uma investigação imunologia antes e após a mesma através da coleta sanguínea nos participantes do estudo seccional também foram desenvolvidas. Nas amostras sanguíneas foram realizada uma análise descritiva caracterizando um perfil imunológicos, seguida do teste t pareado, verificando alterações nas células imunes. Além disso, o tamanho do efeito (TE) foi avaliado com o objetivo de comparar a magnitude pré e pós do efeito agudo do esforço físico nestes marcadores. Resultados: Foram incluídos 15 estudos na presente revisão sistemática sendo 13 de intervenções agudas e 2 crônicas, onde foi observado que a intervenção aguda promove alterações em grande parte dos marcadores imunológicos enquanto que a crônica interfere em uma menor proporção nos mesmos, sendo nas subpopulações linfocitárias. A maioria desses estudos não apresentaram alto riscos de vieses, porem riscos incertos de viés. Com o teste incremental máximo foram observados aumentos significativos após o mesmo nos valores séricos dos leucócitos, linfócitos, CD3-CD16- 56, CD16-56, CD56, CD3, CD3-CD4, CD3-CD8 e valores do TE para os mesmos, sendo de moderado a muito alto. Conclusão: Contudo, conclui-se que as intervenções agudas e crônicas modificam a maioria dos marcadores imunes, porém aspectos como, o sexo, uso de pílula anticoncepcional nas mulheres, a capacidade física dos investigados, o ambiente, o tipo e a intensidade destes exercícios aeróbios podem interferir nestes marcadores. O teste incremental máximo promove alterações em determinados marcadores imunológicos analisados, sendo o tamanho do efeito desse classificado de moderado a muito alto.

N/A El sobrepeso y la obesidad ocasionados por consumo excesivo de alimentos con alto contenido energético es uno de los principales problemas de salud que afectan a la sociedad actualmente. Estas patologías están ligadas a alteraciones del sistema inmunológico que inducen inflamación crónica de bajo grado, que a su vez promueve alteraciones metabólicas como la resistencia a la insulina y el desarrollo de enfermedades crónicas no transmisibles. Una consecuencia de la inflamación crónica es la liberación de moléculas de señalización que inhiben los efectos negativos de la inflamación y regresan al organismo a la homeostasis. Entre ellas, la señalización dependiente de endocanabinoides es esencial para la regulación del metabolismo energético y el funcionamiento del sistema inmunológico, principalmente por la señalización a través de los receptores específicos para endocanabinoides CB1 y CB2. Los receptores CB se localizan en múltiples tipos de células y tejidos, incluyendo el cerebro y los órganos linfoides primarios y secundarios. En años recientes, ha habido un interés mayor en analizar las consecuencias de las modificaciones dietéticas sobre el sistema inmunológico, debido a su papel como el principal sistema de defensa del organismo. Igualmente, ha habido interés en determinar la utilidad de las modificaciones nutricionales para modular funciones fisiológicas relevantes, incluyendo la producción de endocanabinoides y su señalización en diversos tejidos. El objetivo de este estudio fue analizar las diferencias en la expresión de los receptores CB1 y CB2 en el bazo y timo de ratones adultos BALB/c, machos y hembras, suplementados con edulcorantes nutritivos y no nutritivos durante 6 semanas. Nuestros resultados muestran un incremento en la expresión de receptores CB1 en el bazo de ratones hembras suplementados con sucralosa, mientras que los ratones machos del mismo grupo muestran una disminución en la expresión de este receptor, comparados con controles sin suplementación. En contraste, la expresión de CB2 se incrementó en ratones machos suplementados con sacarosa, pero no en las hembras. La expresión de CB1 en el timo mostró un descenso significativo entre los grupos de sucralosa y glucósidos de esteviol en machos, pero no se observaron diferencias en las hembras. Finalmente, la expresión de CB2 en el timo fue más variable, con la sacarosa y sucralosa causando una disminución en la expresión de CB2 en machos y la sacarosa incrementando su expresión en hembras, comparados con los controles. Nuestros resultados muestran que el consumo frecuente de edulcorantes no nutritivos tiene efectos diferenciales dependientes del sexo sobre la expresión de los receptores CB1 y CB2 en el bazo y timo, lo que puede implicar alteraciones en las funciones del sistema inmunológico. N/A

RESUMO: A contagem de células somáticas (CCS) é um parâmetro amplamente utilizado para monitorar a saúde do úbere e a qualidade do leite, porém não diferencia as distintas populações leucocitárias. Portanto, a diferenciação das populações celulares no leite pode aprimorar o diagnóstico da mastite bovina. Dessa forma, o objetivo do presente trabalho foi avaliar as diferentes técnicas de contagem diferencial de leucócitos no leite para diagnosticar precisamente a mastite. Para tal, foram utilizadas 31 vacas da raça holandesa preta e branca em lactação (124 quartos mamários). Foram empregadas a contagem automática de células somáticas, e a contagem diferencial de leucócitos pelas técnicas de citocentrifugação, contagem diferencial de leucócitos por esfregaço direto, e citometria de fluxo com a utilização de anticorpos monoclonais específicos para identificação de cada população leucocitária. Os resultados demonstraram correlação positiva e significativa entre a proporção de leucócitos polimorfonucleares pelas diferentes técnicas e a contagem automática de células somáticas, sendo observada uma correlação discretamente mais forte com a citometria de fluxo. Além disso, foi demonstrado que os macrófagos são a população predominante no leite oriundo de glândula mamária com baixa CCS. Observaram-se também diferenças na proporção das distintas populações leucocitárias entre as distintas técnicas, resultado da possível subjetividade do examinador na contagem diferencial de leucócitos pelas técnicas de citocentrifugação e contagem microscópica direta por esfregaços, o que reforça que a citometria de fluxo pode ser uma ferramenta confiável no controle e diagnóstico da mastite. ABSTRACT: Milk somatic cell count (SCC) is the basis of mastitis and milk quality control programs, however it not differentiate the distinct leukocyte populations which in turn can improve the diagnosis of mastitis. Thus, the present study aimed to evaluate different techniques used to measure the distinct leukocyte populations in milk in attempt to improve the diagnosis of mastitis. Here, milk samples from 31 dairy cows (124 quarter milk samples) were used. The differential leukocytes count was determined by cytocentrifugation, direct microscopy smears, and monoclonal antibodies by flow cytometry. The automatic SCC was also performed. The results showed a positive and significant correlation between the proportion of polymorphonuclear leukocytes determined by all techniques and automatic cell count; although a discrete higher correlation between flow cytometry and automatic SCC was found. Furthermore, the present study reinforces the idea that macrophages were the predominant cell type in mammary gland with low SCC. The proportion of each leukocyte population differ among techniques, probably due to the subjectivity of the examiner in the evaluation of the differential leukocyte counts by cytocentrifugation and direct microscopy smears, which emphasize that flow cytometry can be a useful and feasible tool in the diagnosis and control of mastitis.

Epidemiological studies have found a higher prevalence of allergic symptoms and positive prick tests in patients with Meniere's disease (MD); however the effect of allergenic extracts in MD has not been established. Thus, this study aims to determine the effect of Aspergillus and Penicillium stimulation in cytokine release and gene expression profile in MD. Patients with MD showed higher basal levels of IL-1 beta, IL-1RA, IL-6 and TNF-alpha when compared to healthy controls. We observed that IL-1 beta levels had a bimodal distribution suggesting two different subgroups of patients, with low and high basal levels of cytokines. Gene expression profile in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) showed significant differences in patients with high and low basal levels of IL-1 beta. We found that both mold extracts triggered a significant release of TNF-alpha in MD patients, which were not found in controls. Moreover, after mold stimulation, MD patients showed a different gene expression profile in PBMC, according to the basal levels of IL-1 beta. The results indicate that a subset of MD patients have higher basal levels of proinflammatory cytokines and the exposure to Aspergillus and Penicillium extracts may trigger additional TNF-alpha release and contribute to exacerbate inflammation., This work was supported by Grants from Meniere's Society, UK and PI13/1242 Grant from ISCIII by FEDER Funds from the EU. Lidia Frejo was a PhD student oft he Biomedicine Program at the University of Granada. The authors would like to thank all patients and healthy controls participating in this study. We also would like to thank the Supercomputing and Bioinnovation Center (SCBI) from University of Malaga for the sharing of their resources (IPA (R)).