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Orientador: Fernando Roberto Martins Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Um estudo da dinâmica de populações da palmeira acaulescente Attalea humilis Mart. ex. Spreng foi conduzido em três fragmentos (1,6; 6,4 e 9,9 ha) da Floresta Atlântica, no sudeste do Brasil, entre 1996 e 1999. Durante o período de estudo, os fragmentos foram atingidos por um incêndio antrópico que devastou parte da reserva na qual estão incluídos. o número de folhas e o comprimento da raquis da folha mais recentemente expandida foram medidos para todas as palmeiras encontradas em duas transecções perpendiculares de 10m de largura cruzando os fragmentos de borda a borda. Os seguintes aspectos da ecologia de populações da espécie foram estudados: 1) Caracterização de estádios ontogenéticos. Cinco estádios ontogenéticos foram distinguidos: Plântulas encontravam-se ligadas a restos seminais geralmente enterrados e apresentavam folhas inteiras; Juvenis apresentavam segmentação incompleta do limbo foliar. Indivíduos não reprodutivos com folhas pinatissectas foram divididos morfometricamente em dois grupos: os hnaturos, com menor número de folhas e comprimento da folha mais jovem menor e altamente variável, e os Virgens, com mais e maiores folhas, mas com comprimento da folha mais jovem mais constante. O tamanho crítico de copa para o qual imaturos e virgens puderam ser identificados variaram de acordo com o fragmento e o ano. Palmeiras Reprodutivas apresentavam estruturas reprodutivas. 2) Dinâmica da hierarquia de tamanhos. Não foram encontradas evidências consistentes de dependência da densidade no tamanho dos indivíduos das populações estudadas, avaliados através de analises de regressão entre variáveis ligadas ao tamanho da copa e a densidade das parcelas. Tanto para o número de folhas quanto para o comprimento da raquis da folha mais nova em todas as populações, diferenças de tamanho entre palmeiras em uma mesma categoria ontogenética tenderam a diminuir ao longo do processo de maturação da espécie. Palmeiras jovens foram danificadas heterogeneamente pelo fogo, enquanto a maioria das palmeiras imaturas tiveram 50 - 75% de sua copa destruída, e os adultos mostraram uma grande proporção de plantas sem nenhum sinal de destruição da copa. Dezoito meses após o incêndio os indivíduos tenderam a apresentar uma menor desigualdade em relação ao número de folhas entre categorias ontogenéticas em todos os fragmentos. Sugerimos que a heterogeneidade ambienta!, poderia agir como filtros ambientais selecionando os indivíduos que são recrutados para a categoria imatura. Estes indivíduos apresentariam crescimento e sobrevivência maiores e tamanhos menos desiguais: 3) Distribuirão espacial de estádios ontogenéticos. As palmeiras estavam significativamente agregadas em várias escalas, mas uma redução no grau de agregação ocorreu de plântulas para adultos em todos os fragmentos. o fogo aumentou temporariamente o grau de agregação dos jovens. Estádios ontogenéticos não foram encontrados nas mesmas parcelas com maior freqüência do que esperado ao acaso na maioria dos casos, mas uma associação positiva significativa de reprodutivos em diferentes anos foi encontrada em dois fragmentos. A distribuirão das palmeiras entre setores dos fragmentos variou de acordo com o estádio, fragmento e o ano, mas foi consistente no tempo sendo pouco afetado pelo fogo. Não foi encontrada uma relação geral entre a densidade de palmeiras e a distância da borda do fragmento, mas sim uma resposta complexa e esporádica. Sugerimos que a dispersão de sementes a curta distância por roedores pode resultar em agregados discretos e de baixa densidade de palmeiras jovens dissociados de plantas reprodutivas e que estádios posteriores ficam restritos a sítios mais abertos, perturbados e sujeitos ao fogo: 4) Demografia. Em todos os anos a densidade de palmeiras no fragmento de tamanho intermediário (750 - 900 palmeiras ha-l) foi significativamente maior e apresentou maio amplitude do que nos outros fragmentos (130 - 200 palmeiras ha-l e 120 - 150 palmeiras ha l).A estrutura de estádios das populações variou com o fragmento e o ano, mas em geral os estádios posteriores foram mais abundantes do que os iniciais. A população no fragmento mais denso estava concentrada em seu setor mais perturbado. Tanto a taxa de crescimento populacional (I..) projetada quanto a observada foram significativamente maiores do que a unidade no menor fragmento mas similar á unidade no fragmento maior. Taxas de crescimento populacional baseadas em modelos matriciais foram mais sensíveis a mudanças na sobrevivência de plântulas, virgens e imaturos, e relativamente insensíveis a mudanças no crescimento e fecundidade. Depois do fogo, as populações permaneceram estáveis em todos os fragmentos exceto no de tamanho intermediário, onde uma tendência decrescente foi observada. A estrutura de estádios de todas as populações foi marcadamente alterada pelo fogo através da concentração da maioria dos indivíduos no estádio imaturo, de tamanho intermediário, mas esta tendência foi parcialmente revertida no segundo ano após o incêndio. Estes resultados poderiam indicar que a habilidade de rebrota de A. humilis, juntamente com sua tendência de persistir e crescer em áreas perturbadas promovem o crescimento populacional em fragmentos florestais pequenos e impactados, mas este crescimento pode ser revertido pelo crescimento secundário denso que tem lugar após incêndios ocasionais Abstract: A study of the population dynamics of the acauIescent palm Attalea humilis Mart. ex. Spreng was conducted in three fragments (1.6, 6.4 and 9.9ha) of the AtIantic Forest, in southeastern Brazil, fiom 1996 to 1999. In late 1997, the fragments were damaged by a wildfire that burned part of the reserve they are part of. Leaf number and Ieaf rachis 1ength of the newest expanded Ieaf were measured for palms in two 10 m-wide transects which eut aeross eaeh fragment. The following aspeets ofthe popu1ation eco10gy ofthe species were studied: 1) Characterisation olontogenetic stages. Five ontogenetie stages were distinguished: Seedlings were attached fruit remains that were buried and presented entire Ieaves; Juveniles possessed incomp1ete segmentation of the bIade. Pinnatifid-Ieafed, pre reproduetive individuaIs were morphometrically divided in two groups: the Immature, with fewer Ieaves and smaller but highIy variable youngest leaf1ength, and Virginile, with more and Iarger Ieaves, but more constant youngest Ieaf Iength; the critic crown size by which immature and virginile could be identified varied with fragment and yearo Reproduetive palms presented reproductive structures. 2) Size hierarchy dynamicso We found scant evidence of density-dependent size in the populations studied, as measured by regression analysis between crown size variabIes and pIot densityo For both Ieaf number and newest Ieaf rachis Iength and alI populations, size differences among palms in the same ontogenetic category tended to diminish along the species' maturation processo Young palms were heterogeneously damaged by fire, while most immature palms had 50 - 75% of their crown destroyed, and aduIts showed a high proportion of pIants without any sign of crown destruction. Eighteen months after fire individuaIs tended to show reduced inequality in regard to the number of Ieaves among ontogenetic categories in alI fragments. We suggest that environmental heterogeneity could act as environmental sieves selecting individuals that are recruited to the immature category. These individuaIs would show enhanced growth and survival and less unequal slzes; 3) Spatial distribution of ontogenetic stages. Palms were significantly clumped in a range of scales, but a marked reduction in clumping degree occurred from seedling to the adult stage in alI fragments. Fire increased temporarily the clumping degree of the young. Ontogenetic stages were not found in the same plots more often than expected by chance in the majority of cases, but a significant positive association of reproductive palms between years was found in two of the :fragments. Palm distribution among fragments sectors varied with stage, :fragment and year, but was consistent between years, being little affected by tire. No general relationship between palm density and distance from fragment edge could be detected, bu a complex and sporadic response was found instead. We suggest that short distance seed dispersal by scatterhoarding rodents results in discrete, low-density clumps of young palms dissociated from reproductive plants and that later stages are mostly restricted to more open, disturbed and fire-prone sites; 4) Demography. For alI years, palm density in the medium-sized fragment (750 ¿ 900 palms ha-1) was significantly higher and varied in a broader range than in the two other fragments (130 - 200 palms ha-l and 120 - 150 palms ha-l). The stage structure of the populations was dependent on :fragment and year, but later stages were genera11y more abundant than initial ones. The population in the denser :fragment was concentrated within its disturbed sector. Both observed and projected population growth rates (Â.) were greater than one in the smallest fragment but similar to one in the largest fragment. Population growth rates based on matrix models were most sensitive to changes in survivaI of seedlings, virgins and the immature, and relatively insensitive to changes in growth and fecundity. After tire, populations remained stabIe in aII fragments but the medium-sized one, where a declining tendency took place. After tire, most individuaIs were concentrated in the medium-sized, immature stage, but by the second year after tire most popuIations had retumed to pre-fire stage structure. These results could indicate that the _esprouting ability of A. humilis, coupled with its tendency to persist and thrive in disturbed areas promote popuIation growth in disturbed small forest fragments, but this growth may be hindered by dense secondary regrowth following occasional tires Mestrado Mestre em Ecologia

Orientador: Wanderley Dias da Silveira Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Bactérias do ¿gênero¿ Shigella spp. apresentam-se como bacilos gram-negativos, anaeróbios facultativos, imóveis, não formam esporos e pertencem à família Enterobacteriaceae. De acordo com testes de aglutinação com anti-soros específicos, estas bactérias são classificadas em quatro sorogrupos: Sorogrupo A (Shigella dysenteriae), Sorogrupo B (Shigella flexneri), Sorogrupo C (Shigella boydii) e Sorogrupo D (Shigella sonnei). Estas bactérias são responsáveis pela Shiguelose ou Disenteria Bacilar enfermidade endêmica que anualmente acomete milhões de pessoas em todo o mundo, sendo que mais de 70% de todos os casos ocorrem em crianças de 1 até 5 anos de idade, possuindo grande importância epidemiológica devido à alta morbi-mortalidade. Os principais determinantes de patogenicidade neste grupo bacteriano são: o plasmídio de alto peso molecular, que determina o fenótipo invasivo desta espécie; genes cromossômicos, que regulam a expressão dos genes de virulência no plasmídio e a produção de uma exotoxina que atua destruindo a barreira de células epiteliais. No Brasil, até então, não foram encontrados trabalhos publicados que comparem as diferentes amostras bacterianas de Shigella spp. isoladas de casos de Shiguelose, relacionando suas características biológicas e estrutura clonal. Sendo assim, neste trabalho, estudamos as características biológicas (sorotipagem, perfil de resistência a antimicrobianos, adesão e invasão, análise do perfil de DNA plasmidial) de diferentes amostras de Shigella spp. relacionando-as através de técnicas de Biologia Molecular (ERIC-PCR, REPPCR e DRE-PCR) permitindo, assim, determinar a clonalidade epidemiológica destas. As amostras de Shigella spp. foram isoladas de diferentes surtos, de diversas cidades das regiões de Campinas e de São João da Boa Vista, e pertencem à coleção do Instituto Adolfo Lutz de Campinas Abstract: Shigella spp are gram-negative, anaerobic facultative, non-motile, and non-sporulated bacilli of the Enterobacteriaceae family, responsible for ¿Shigellosis¿ or the Bacillary Dysentery (BD) disease, an important cause of worldwide morbidity and mortality. The pathogenic determinants of Shigella spp include high molecular weight plasmids responsible for the bacterial invasive capacity, as well as chromosomal genes encoding for different pathogenic, factors such as exotoxins that destroy epithelial host cells. Little is known about the antibiotic resistance profiles and the population structure of Shigella species isolated from humans in Brazil. In this work, we have studied the antibiotic resistance profiles and the clonal structure of Shigella strains isolated from humans in different cities located in the region of Campinas, a city in the state of São Paulo, Brazil. We have also related the antibiotic resistance of these strains with the bacterial clonal groups determined by the molecular techniques ERIC, REP, and DRE-PCR. Our data indicate that many strains of S. flexneri and S. sonnei are multiresistant, and our results also support the circulation of specific clones among the cities. These data indicate that the human sanitary conditions in the cities analyzed herein should be improved. Doutorado Microbiologia Doutor em Genética e Biologia Molecular

Orientador: Hiroshi Aoyama Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Atualmente, muito tem sido descoberto acerca dos mecanismos de controle do crescimento e coordenação celular, principalmente em células eucarióticas. Dentre tais mecanismos, o balanço entre a fosforilação e a desfosforilação de proteínas é a base para o controle de diversos eventos biológicos. As fosfatases são hidrolases que utilizam como substrato fosfatomonoésteres, e são amplamente distribuídas na natureza. As fosfatases ácidas (FAcs) são enzimas que apresentam melhor atividade em meio ácido. O objetivo do presente trabalho é estudar o efeito de peróxido de hidrogênio em duas fosfatases ácidas cujos sítios ativos contêm cisteína. Para tanto, FAc de sementes de mamona e FAc de rim bovino, ambas obtidas previamente em nosso laboratório, foram utilizadas no estudo. A primeira é uma glicoproteína, ao passo que a segunda não contém carboidrato em sua estrutura. Ensaios enzimáticos utilizando o substrato sintético p-nitrofenilfosfato (pNPP) foram realizados, em diferentes condições de incubação e exposição das enzimas. A FAc de mamona apresentou grande resistência ao peróxido de hidrogênio (H2O2), fato que se mostrou independente da presença de carboidrato em sua estrutura. Ensaios na presença de ditiotreitol (DTT) ou glutationa reduzida (GSH) provocaram inibição da enzima, porém a combinação de DTT ou GSH a H2O2 foi capaz de recuperar completamente a atividade enzimática. A exposição da FAc de mamona a DTT ou GSH não protegeu totalmente o sítio catalítico contra a oxidação por H2O2, apesar de acarretar em menores taxas de inibição por esse composto. A exposição da enzima a H2O2 elevou a sua inibição. A FAc de rim bovino apresentou grande susceptibilidade ao H2O2. Os compostos DTT e GSH provocaram inibição de sua atividade, assim como observado para a FAc de mamona. A combinação de DTT ou GSH a H2O2 não restabeleceu a atividade enzimática, sugerindo que há diferenças no processo de oxidação por esse composto entre as duas FAcs utilizadas nesse trabalho. A exposição da FAc de rim bovino a DTT ou GSH não foi eficaz na proteção do sítio catalítico, e a exposição dessa enzima a H2O2 elevou a inibição da atividade enzimática. Nossos resultados sugerem que as FAcs, independentemente da presença de carboidrato na estrutura, sofreram oxidação de maneiras diferentes, apresentando comportamentos bastante divergentes entre si. Hipotetizamos que a Fac de mamona atingiu um estado reversível de oxidação, sendo que a cisteína tornou-se ácido sulfênico. Já a FAc de rim bovino deve ter alcançado um estado irreversível de oxidação, com a cisteína na forma de ácido sulfínico ou sulfônico Abstract: Currently, much has been discovered about the mechanisms of control of cell growth and coordination, especially in eukaryotic cells. Among such mechanisms, the balance between the phosphorylation and dephosphorylation of proteins is the basis for the control of various biological events. The phosphatases are hydrolases using as substrate phosphate monoesters, and are widely distributed in nature. The acid phosphatases are enzymes that have better activity under acidic conditions. The goal of this work is to study the effect of hydrogen peroxide (H2O2) in two acid phosphatases which contains cysteine in their active site. Therefore, castor bean and bovine kidney acid phosphatases, both previously obtained in our laboratory, were used in this study. The first is a glycoprotein, whereas the second contains no carbohydrate in its structure. Enzyme assays using the synthetic substrate p-nitrophenylphosphate (pNPP) were performed at different incubation conditions and exposure of the enzymes. The castor bean acid phosphatase showed great resistance to H2O2, a fact that was independent of the presence of carbohydrate in their structure. Assays in the presence of dithiothreitol (DTT) or reduced glutathione (GSH) caused enzyme inhibition, but the combination of the GSH or DTT and H2O2 was able to completely recover enzyme activity. Exposure of castor bean acid phosphatase to DTT or GSH did not fully protect the catalytic site against oxidation by H2O2, although result in lower rates of inhibition by this compound. Exposure of the enzyme to H2O2 increased its inhibition. Acid phosphatase from bovine kidney showed high susceptibility to H2O2. The compounds DTT and GSH caused inhibition of its activity, as was observed for castor bean acid phosphatase. For this enzyme, the combination of DTT or GSH to H2O2 not reestablished enzyme activity, suggesting that there are differences in the oxidation process for this compound between the two phosphatases used in this work. Exposure of bovine kidney acid phosphatase to DTT or GSH was not effective in protecting the catalytic site, and the exposure of the enzyme to H2O2 increased the inhibition of enzyme activity. Our results suggest that the acid phosphatases, regardless of the presence of carbohydrate in the structure, underwent oxidation by different ways, presenting quite divergent behaviors. We hypothesize that the castor bean acid phosphatase reached a state of reversible oxidation, and cysteine became sulfenic acid. As for acid phosphatase bovine kidney must have reached a state of irreversible oxidation with cysteine as sulfonic or sulfinic acid Mestrado Bioquímica Mestra em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Vera Nisaka Solferini Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Mestrado

Orientador: Marcos Silveira Buckeridge Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Sementes de Sesbania virgata (Cav.) Pers. acumulam suas reservas de carbono no endosperma na forma de um polissacarídeo de parede celular, o galactomanano. A mobilização deste ocorre após a germinação e envolve três enzimas hidrolíticas, dentre elas a a-galactosidase. Além da reserva de carbono, há uma grande quantidade de corpos protéicos, no citoplasma das células endospérmicas, que constituem a principal reserva de nitrogênio nestas sementes. Para que ocorra a correta distribuição dos produtos de degradação das reservas deve haver sincronização entre os processos de degradação das reservas de carbono e nitrogênio, porém para compreender tais mecanismos, é necessário estudar aspectos do controle da produção e ação das enzimas responsáveis pela hidrólise das reservas. Buscando determinar em que ponto do metabolismo a semente de S. virgata se encontra em relação à produção destas enzimas hidrolíticas, durante e após a germinação, e supostamente os tecidos envolvidos nesta produção, sementes desta espécie foram embebidas em actinomicina-D (inibidor de transcrição) e cicloheximida (inibidor de tradução) e os efeitos destes inibidores verificados através da atividade e detecção da a-galactosidase no tegumento e endosperma destas sementes. Além disso, buscando verificar e relacionar o efeito do ácido abscísico, do etileno e dos açúcares na degradação das reservas após a germinação de S. virgata, sementes desta espécie foram embebidas em ABA, etileno, glucose e sacarose, e os efeitos destes foram verificados através dos teores protéicos, da atividade da a-galactosidase e da produção endógena de ABA e etileno nestas sementes. Como a presença de actinomicina-D e cicloheximida não inibiram a produção e a atividade da a-galactosidase no endosperma durante e após a germinação, sugere-se que a produção desta enzima ocorra principalmente durante a maturação da semente. Aparentemente, a partir do período pós-germinativo, a enzima pré-formada seria processada e ativada, para conseqüente degradação dos galactomananos, através de um processo proteolítico. Em contrapartida, como a presença deactinomicina-D e cicloheximida inibiram a degradação das proteínas de reserva no tegumento e endosperma e, inclusive, induziram a atividade da a-galactosidase nestes tecidos no final do processo de degradação dos galactomananos, sugerese a síntese de novo de proteases durante e após a germinação e a relação íntima destas enzimas com a degradação das proteínas de reserva e da a-galactosidase no final do processo de degradação dos galactomananos. Quanto aos hormônios, a presença de ABA exógeno retardou o início da degradação das proteínas de reserva no endosperma, assim como diminuiu a atividade da a-galactosidase no mesmo tecido no final do processo de degradação do galactomanano, sugerindo um efeito modulador deste hormônio durante a degradação das reservas, reprimindo a ação das enzimas hidrolíticas. A presença de etileno exógeno, entretanto, aumentou a atividade da a-galactosidase no endosperma e, inclusive, no tegumento no final do processo de degradação do galactomanano, sugerindo um efeito indutor deste hormônio na ativação e ação das enzimas hidrolíticas. De fato, analisando a produção endógena de ABA e etileno, observou-se um aumento brusco dos hormônios no período de mobilização das reservas, que pode estar relacionado à influência destes hormônios na atividade das enzimas hidrolíticas em sementes de S. virgata. Ainda, como ocorreram mudanças na produção de ABA e etileno endógeno na presença de glucose e sacarose, sugere-se uma relação íntima entre a via de sinalização destes hormônios e a dos açúcares, a fim de controlar o processo de degradação das reservas. Desta forma, estas evidências sugerem que o ABA e o etileno controlariam antagonicamente a mobilização de reservas em sementes de S. virgata, juntamente com os açúcares, através da ativação e ação das enzimas hidrolíticas, a fim de controlar o processo de degradação das proteínas e dos galactomananos, evitando a produção dos açúcares redutores e de sacarose em excesso durante o período pós-germinativo e garantindo o afluxo eficiente de carbono e nitrogênio para o desenvolvimento da plântula. Abstract: Seeds of Sesbania virgata (Cav.) Pers. have an endosperm which accumulates galactomannan as a storage polysaccharide in the cell walls that is hydrolysed after germination by three enzymes (a-galactosidase, endo-ß-mannanase and exo-ß-mannosidase). Besides the storage of carbon, there is a great amount of protein bodies in the cytoplasm of endospermic cells, which play the major role as a nitrogen reserve in this seed. It is likely that a synchronization between the process of galactomannan and protein degradation occurs for a more efficient distribution and use of the storage degradation products. However, to understand these mechanisms, it is necessary to study aspects of the production and action control of the hydrolytic enzymes responsible for the mobilisation of these reserves. Aiming to determine in which point of the metabolism the seed of S. virgata is in relation to the production of the hydrolytic enzymes, during and after germination, and the supposed tissues involved in this production, seeds of this specie were imbibed in actinomycin-D (transcription inhibitor) and cycloheximide (translation inhibitor), and the effects of these inhibitors verified thought the a-galactosidase activity and detection in the testa and endosperm of these seeds. Besides of this, for to verify and relate the effects of abscisic acid, ethylene and sugars on the reserves degradation after germination of the S. virgata, seeds of this specie were imbibed in ABA, ethylene, glucose and sucrose, and the effects of these were verified through the protein content, a-galactosidase activity and endogenous production of ABA and ethylene in this seeds. In the presence of actinomycin-D and cycloheximide, the production and activity of the a- galactosidase were not inhibited during and after germination, suggesting that the production of this enzyme occurs principally during the maturation of the seed. Apparently, after the germination, this enzyme is processed by proteolysis, so that it becomes activated to perform galactomannan degradation. On the other hand, the presence of actinomycin-D and cycloheximide inhibited the protein degradation in the testa and endosperm and at the same time induced the a-galactosidaseactivity in the same tissues at the final steps of the galactomannan degradation process. This suggests the existence of synthesis de novo of the proteases during and after germination and a possible relationship between the storage protein and galactomannan mobilisation. Regarding the hormones, the presence of exogenous ABA retarded the beginning of the storage protein degradation in the endosperm and also decreased a-galactosidase activity in the same tissue at the end of galactomannan degradation. This suggests that there is a regulator effect of this hormone during the storage degradation, repressing the enzymes action. In the presence of exogenous ethylene an increase in the a-galactosidase activity in the endosperm and in the testa were observed at the end of galactomannan degradation, suggesting an inducing effect of this hormone on the hydrolytic enzymes. The finding of endogenous ABA and ethylene production, observed during the period of the storage mobilisation, give support to the above raised hypothesis that the two hormones participate in the control of the hydrolytic enzyme activities in seeds of S. virgata. Furthermore, the changes observed in the endogenous ABA and ethylene production in the presence of glucose and sucrose, suggested a relation between the signaling pathway of these hormones and the sugars signaling, controlling the process of storage degradation. Thus, our results add evidence to suggest that ABA and ethylene antagonistically control the storage mobilisation in seeds of S. virgata, together with the sugars, through the hydrolytic enzymes activation, controlling the process of storage protein and galactomannan degradation, in other to avoiding the excess production of reductor sugars and sucrose during the post-germinative period and assuring the efficient afflux of the carbon and nitrogen to the seedling development. Doutorado Biologia Celular Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Hernandes Faustino de Carvalho Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O hialuronam (ou ácido hialurônico, AR) é um importante componente do espaço matrice1ular, estando presente tanto na matriz extracelular, como na superficie das células. Suas funções são variadas, mas estão sempre associadas à criação de um espaço pouco denso e extremamente hidratado, permitindo a proliferação e migração celular, típicas de processos como a embriogênese, cicatrização e invasão tumoral. Neste trabalho foi desenvolvido um estudo do metabolismo do ácido hialurônico na próstata ventral de ratos. Numa primeira etapa foi verificado o efeito da castração por 7, 14 e 21 dias sobre. o conteúdo e distribuição do AR, assim como uma avaliação do papel da HA. sintase 2 (HAS2) e da hialuronidase 1 (Hyall). Para tanto, foram empregados ensaios de marcação tecidual de AH com a utilização de sonda marcada com fluoresceína, quantificação deAH por ensaio competitivo, determinação dos tamanhos das cadeias de AH por cromatografia em gel filtração, determinação dos níveis de expressão das enzimas HAS2 e Hyall por Real Time PCR, localização desta expressão por hibridação in situ e localização do receptor CD44 por imunohistoquímica. Na segunda etapa, foram estudadas células musculares lisas (CML) isoladas de ratos e mantidas em cultura, quanto à expressão de marcadores da diferenciação deste tipo celular e quanto à produção de AH, utilizando. imunocitoquímica e RT-PCR para marcadores de CML, imunocitoquímica para o receptor CD44, quantificação de AH por ensaio competitivo e por medida de área de coat. Os resultados demonstram que o AR é encontrado tanto no epitélio quanto no estroma prostático e que há uma redução no conteúdo total de AR na próstata ventral, com um predomínio de cadeias curtas. Além disto, foi verificado que estas modificações são, ao menos em parte, devidas à manutenção da expressão da HAS2 e um aumento na expressão da Hyall. Foi observado também, por outro lado, que ocorre uma diminuição na atividade da hialuronidase lisossomal. Experimentos de hibridação in situ demonstraram a presença da HAS2 no epitélio e em diversas células do estroma, com exceção das células musculares lisas e endoteliais. Com a castração, a expressão da HAS2 e da Hyall aumenta no estroma. Foi demonstrado também que as células musculares lisas prostáticas de rato em cultura mantêm a expressão de marcadores da diferenciação (smoothelin, SM22 e calponina) e que esta expressão não foi dependente de insulina-nemtestosterotta. A concentração de ácido hialurônico no meio de cultura variou nas diferentes passagens (0-8), assim como variou o tamanho do coa! ao redor das células. Surpreendentemente, nas passagens 3 e 4 houve uma queda brusca na síntese de HA Os- resultados demonstram uma modificação no padrão expressão e de distribuição do ácido hialurônico na próstata ventral de ratos, com o comprometimento de diversos tipos celulares, que resultam na diminuição do conteúdo total. Conclui-se também que células musculares lisas em cultura mantêm-se diferenciadas e que são capazes de sintetizar e formar um coa! na sua superficie Abstract: Hyaluronan (or hyaluronic acid, HA) is an important component ofthe matricellularspace. It is found in both extracelular matrix and at the cell surface. It has many functions, but is always associated with the establishment of a looser and hydrated space, allowing the cells to proliferate and migrate, in processes such as embryogenesis, healing and tumor invasion. In this work, we have studied some aspects ofHA metabolism in the rat ventral prostate. In a firt series of experiments, the effect of castration for 7, 14 and 21 days on the content and distribution of HA, as well as an evaluation of the function of HA synthase 2 (HAS2) and hyaluronidase 1 (Hyall). For this, were done tecidual HA localization with fluorescein probe, measurement of HA content in a competitive binding assay, determination of HA chain size variation using gel filtration cromatography, determination of expression levels ofHAS2 and Hyall enzymes by Real Time PCR, localization ofthese expression by in situ hybridization and CD44 localization by immunohistochemistry. In a second series of experiments, the rat prostatic smooth musc1e cells (SMC) were isolated and maintainedin vitro for the study of the expression of molecular markers of the differentiated state and of the production of HA, using immunohistochemistry e RT-PCR for SMC markers, immunocitochemistry for CD44 receptor, HA quantification by competitive bindingassay and measurement of coat area. The results demonstrate that HA is found in both epitheJium and stroma and that there is a decrease in the total amount of HA in the organ afier castration, with a predominance of short chains. Besides, it was observed that these modifications are, at least in part, due to a sustained expression of HAS2 and an increased expression of Hyall. On the other hand, a reduction in lysosomal hyaluronidase activity was also observed. In situ hybridization showed the presence of HAS2 mRNA in both epithelium and stroma. Different stromal cells, with the exception of SMC and endothelial cells, expressed HAS2. Castration resulted in increased expression of HAS2 and Hyall in the stroma. It was also demonstrated that SMC kept inculture express the differentiation markers smoothelin, SM22 and calponin and that this expression pattern was not dependent on either insulin or testosterone. The concentration of HA in the culture medium and the size of the cell coat varied as cells were subcultured through passages 0-8. Surprisingly; a severe drop in HA synthesis was observed at passages 3 and 4. The results demonstrate a modification in the pattem of expression and distribution of HA in the rat ventral prostate in response to castration, and the involvement of different cell types in the decreasing amount ofHA. lt is also concluded that SMC preserve the differentiated state in culture and that they are able to assemble a HA coat Doutorado Biologia Celular Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador : Ivany Ferraz Marques Valio Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O presente trabalho teve como objetivos principais .estudar os efeitos térmicos e fotoperiódicos sobre o desenvolvimento, produção e..alguns aspectos bioquímicos do Jacatupé. No estudo de épocas de plantio, as plantas apresentaram melhora comportamento no plantio de primavera, onde se obteve um bom rendimento de sementes e raízes ruberosas, ao contrário do plantio de outono, cujos rendimentos de vagens e sementes foram insignificantes, muito embora a produção de raízes tenha sido superior em relação ao plantio de primavera. As práticas da desfolha em 33% e a remoção de gemas ou ramos laterais não influenciaram as produções de vagens e sementes, ao contrário do desfolhamento em 66% que reduziu acentuadamente o rendimento destes componentes de produção, sobretudo no plantio de primavera. No plantio de outono, 33% de desfolha combinada com a remoção de inflorescência proporcionaram maior peso de raízes, o mesmo ocorrendo com o desfolhamento em 33% no plantio de primavera. Os acúmulos de açúcares solúveis totais e redutores nas sementes e raízes foram maiores no plantio de primavera, enquanto o acúmulo de amido nas raízes permaneceu estável nas duas épocas de plantio. Em relação aos compostos nitrogenados, constataram-se maiores níveis de proteínas e aminoácidos no plantio de outono, à excessão das sementes no ponto de maturidade fisio1ógica, cujo nível proteico foi maior no plantio de primavera... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: Not informed. Doutorado Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Thomas Michael Lewinsohn Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Instituto de Biologia Resumo: Esta tese foi dividida em dois capítulos. No capítulo I, foram analisados os fatores responsáveis pela variação da densidade de insetos por planta nas populações de Senecio brasiliensis (Asteraceae), bem como a relação entre densidade local dos insetos e sua distribuição geográfica (fteqüência de ocorrência nas populações de plantas). No capítulo n, foram analisados os fatores responsáveis pela variação da riqueza de insetos por planta. Estudou-se também o efeito da distância entre populações de plantas e do tamanho das populações de hospedeiras sobre a similaridade na composição de insetos. O trabalho foi realizado em duas regiões no Sudeste do Brasil. Na região denominada Norte (Estado de Minas Gerais), foram amostradas 4 localidades e na região denominada Sul (Estados de São Paulo e Paraná), 5 localidades. Em cada localidade, foi amostrado um par de manchas (populações discretas) de Senecio brasiliensis, sendo uma grande e uma pequena. Em cada mancha, foram amostradas 30 plantas e, de cada uma destas, 30 capítulos, que foram dissecados. Foram encontradas dez espécies de insetos, sendo oito endófagos, um galhador e um predador. As espécies pertencem às famílias Cecidomyiidae, Agromyzidae (Diptera), Pyralidae, Tortricidae e Pterophoridae (Lepidoptera). A variação da densidade e riqueza de insetos por planta foi estudada em relação às variáveis região, localidade, complexi~e da vegetação no entorno da mancha, tamanho da mancha, densidade de plantas na mancha e tamanho das plantas. Os fatores mais importantes na variação da densidade de insetos foram a complexidade da vegetação no entorno das manchas e a variável localidade, que reflete particularidades históricas e ecológicas de cada área. As variáveis que medem a concentração de recursos das plantas (tamanho da mancha, densidade de plantas e tamanho das plantas) não afetaram as densidades da maioria das espécies, poss~velmente devido ao hábito generalista destas e à saturação da capacidade reprodutiva. Somente Melanagromyza erechtitidis (Agromyzidae), o inseto mais especialista encontrado, softeu efeito significativo da densidade e do tamanho das pl~tas. Foi observada cada espécie de inseto. A riqueaza de insetos por planta também softeu efeito significativo das variáveis vegetação no entorno e localidade. Existe uma maior riqueza de espécies em plantas com maior complexidade de vegetação ao seu redor. Este resultado pode estar relacionado ao hábito generalista das espécies. A variável localidade reflete variações em particularidades e no histórico de colonização de cada área. As variáveis que medem a concentração de recursos das plantas também não afetaram a riqueza de insetos por planta. Foi encontrado um efeito significativo da distância entre manchas sobre a similaridade faunística destas, mostrando que manchas mais distantes apresentavam menor similaridade. Manchas de tamanhos semelhantes apresentaram maior similaridade faunística do que manchas de diferentestamanhos. Os resultados mostram que, tanto variáveis locais das manchas, quanto fatores de grande escala, relacionados à distribuição espacial da planta hospedeira e dos insetos, são importantes na determinação da densidade local, da riqueza e da composição de espécies de insetos de capítulos nas manchas de Senecio brasiliensis Abstract: This thesis was divided in two chapters. In chapter I, I investigated the factors responsible for the variation of insects density per plant in Senecio brasiliensis populations. I also related the insects local density and its geographic distribution. In chapter 11,I ana1yzedthe factors responsible for the variation of insect richness per plantoI also investigatedthe effect of the distance among patches and the patches size on the similarity of the insects composition. The field work was carried out in two regions in Southem Brazil. I sampled four sites in the region named North (Minas Gerais state), and five in the region named South (São Paulo and Paraná states). In each locality I sampled a pair of patches (discrete populations) of Senecio brasiliensis, one large and one sma1l.In each patch I sampled 30 plants and ftom each one 30 flowerheads were dissected. Ten species of insects were obtained: eight endophagous, one galler and one predator species. The species belong to the families Cecidomyiidae, Agromyzidae (Diptera), Pyralidae, Tortricidae and Pterophoridae (Lepidoptera). I analyzed the variation of insect density and richness per plant in relation to region, locality, vegetation complexity surrounding the patch, patch size, plant density in the patches, and plant size. The two main factors explaining the insects density variability were the complexity of the vegetation surrounding the p~tches and loca1ity,which reflects characteristics of each area. The variables that estimate the plant resource concentration (patch size, plant density and plant size) did not interfere in most of the insect species densities, probably because of their generalist habit and the saturation on the reproductive capacity. OnlyMelanagromyza erechtitidis (Agromyzidae),the most specialist insect species, was significantly influencedby plants density and size. I detected a significant positive relationship between the average density of insects per plant, per patch and its geographic distribution (number of localities in whiçh they occurred) for each insect species. Both the complexity of vegetation surrounding the patches and locality also presented a significant effect on the insects richness per planto There !S a higher insect richness in plants surrounded by more complex vegetation. This result may be related to the generalist habit of these species. The loca1ityvariable reflects, for each arca, its particularities variations and colonization history. The variables reflecting resource concentration in the host plant (patch size,plant density and plant size) did not interfere with the insects richness per planto I found a significant effect of the distance among patches on their faunistic similarity, with more distant patches showing less similarity. Similar sized patches showed a higher faunistic similarity than different sized patches. The results show that both plants local characteristics and large scale factors related to the spatial distribution of the host plant and insects are important in determining the local density, richness and composition of insects inhabiting Senecio brasiliensis flowerheads Mestrado Mestre em Ecologia

Orientador: Eleonore Zulnara Freire Setz Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A fragmentação e a perda de hábitats são as principais ameaças à conservação da diversidade biológica, especialmente em países megadiversos, para onde as previsões apontam um grande número de extinções. A fauna de médio e grande porte, dada as suas inerentes necessidades de área e de recursos, torna-se particularmente vulnerável a estes eventos de extinção. No entanto, o grupo preenche uma importante parcela na dinâmica dos ecossistemas. Animais realizam importantes papéis, como por exemplo, a dispersão, a escarificação e a predação de sementes; a polinização, a herbivoria, a regulação de populações, dentre outros. Logo, o empobrecimento da fauna, em termos de sua riqueza e abundância, em uma floresta, desencadeia mudanças em sua estrutura e composição florística, podendo inclusive levar espécies vegetais ao desaparecimento. Inúmeros trabalhos no campo da Biologia da Conservação vêm sendo desenvolvidos com o objetivo de compreender como a fragmentação age sobre as espécies e os ecossistemas e como estes efeitos poderiam ser minimizados. No presente estudo, três situações em diferentes contextos envolvidos na conservação da fauna de médio e grande porte são abordadas: (1) a conservação desta parcela da comunidade em uma Área Protegida sob intenso uso humano, no caso, uma Terra Indígena; (2) as respostas desta comunidade frente a uma paisagem parcialmente construída em uma Floresta Nacional; e por fim, (3) a efetividade de diferentes modelos de Áreas Protegidas na conservação de mamíferos de médio e grande porte, tendo sempre como parâmetros, a riqueza e a abundância da comunidade. Como resultados, a Terra Indígena apresentou a riqueza e a abundância da fauna de médio e grande porte inferior à esperada. Na Floresta Nacional, possivelmente devido às características particulares da paisagem que proporcionam certo grau de heterogeneidade e existência de corredores, não foi possível detectar um uso diferencial da fauna entre os ecossistemas naturais e construídos. E todas as Áreas Protegidas, ainda que de diferentes modelos, apresentaram pelo menos um evento de extinção. As unidades sujeitas ao uso humano direto, a Terra Indígena e a Floresta Nacional, apresentaram 4/5 e 3/4 da riqueza de espécies esperada Abstract: Fragmentation and loss of habitats are the main threats to biological diversity conservation, especially in the "megadiverse¿ countries, where forecasts signal a great number of extinctions. Medium and large fauna, given their inherent needs in terms of area and resources, become particularly vulnerable to extinction events. However, the group is vital in the ecosystems¿ functionality. Animals play important roles in forests, for example, in dispersion, scarification and predation of seeds; pollination, herbivory, and population regulation, among others. Therefore the impoverishment of forest fauna, in terms of richness and abundance, triggers changes in its structure and flora composition, possibly even leading to the disappearance of plant species. Countless works in the field of conservation biology have been developed with the objective of understanding how fragmentation acts on the species and the ecosystems and how these effects could be minimized. The present study approaches three situations in different contexts, yet directly involved in the conservation of medium and large fauna, namely: (1) the conservation of this community in a Protected Area, but under intense use by humans, i.e. indigenous territory or land; (2) this community's in a landscape partially built in a National Forest; and, finally, (3) the effectiveness of different models of Protected Areas in the conservation of medium and large mammals, always maintaining as parameters the richness and abundance of the community. In the indigenous land, richness and abundance of the medium and large fauna were lower than expected. In the National Forest, due to the peculiar characteristics of the landscape, which provides a certain degree of heterogeneity and the existence of corridors, it was not possible to detect a diferential fauna use between the natural and constructed ecosystems. Furthermore, all the Protected Areas, although different models, presented at least one extinction event. The other two units, subject to direct human use, Indigenous Land and National Forest, presented 4/5 and 3/4 of the expected species richness Doutorado Ecologia Doutor em Ecologia

Orientador : Mundayatan Haridasan Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Compararam-se os teores de nutrientes nos solos e nas folhas de espécies arbóreas de duas matas mesófilas semidecíduas, no Município de Uberlândia, MG, a fim de determinar a influência da fertilidade do solo sobre a nutrição mineral dessas comunidades. Foi realizado um levantamento fitossociológico de espécies arbóreas (circunferência a altura do peito igualou maior do que 10 cm) , em 50 parcelas de 10 m x 10 m, em cada mata. Uma na Estação Ecológica do Panga e outra na Fazenda Experimental do Glória, ambas pertencendo à Universidade Federal de Uberlândia. Foram analisadas amostras de solo dos horizontes A~ e As, de cada parcela, quanto à textura, ao teor de matéria orgânica, ao pH e às disponibilidades de nutrientes. Foram analisadas amostras de folhas de todas as espécies arbóreas encontradas nas duas áreas para determinar as concentrações de N, P, K, Ca, Mg, Fe, Mn, Zn, Cu e Al. Solos e folhas foram coletados simultaneamente no final da estação chuvosa. Foram encontradas 151 espécies, 104 gêneros e 53 famílias nas duas matas. Na mata do Panga, foram encontradas 93 espécies, 73 gêneros e 42 famílias, com uma densidade de 2202 árvores ha-~ e área basal de 23,8 m2 ha-1. Na mata do Glória, levantaram-se 96 espécies, 78 gêneros e 44 famílias, com 1632 árvores e área basal de 28 m2 ha-1. Foram comuns às duas matas 38 espécies, 47 gêneros e 36 famílias. o índice de diversidade de Shannon para espécies foi de 3,7 na mata do Panga e 4,1, na do Glória. As cinco espécies mais importantes na mata do Panga foram: Lithraea molleoides, Chrysophyllum marginatum, Campomanesia velutina, Alibertia sessilis e Terminalia brasiliensis, representando 30% do total do índice de valor de importância (IVI). Ocotea corymbosa, Cryptocarya moscat, Machaerium villosum, Copaifera langsdorfii e Casearia grandiflora, as cinco espécies mais importantes da mata do Glória representaram apenas 20% do total de IVI. o solo sob a mata do Panga apresentou textura franco arenosa, enquanto o do Glória, argilosa. o pH do solo, a disponibilidade de Ca e de Mn , e a saturação de bases no horizonte AJ. foram maiores na mata do Panga do que na do Glória. o teor de matéria orgânica, a saturação de AI e a disponibilidadede Fe, Mn, Zn, Cu e AI foram maiores no solo do Glória. Os solos das duas áreas não apresentaram diferenças significativas nos teores de K e Mg, no horizonte AJ.. O único nutriente em que ocorreu uma inversão nas disponibilidades entre os horizontes AJ. e As, nos solos das duas matas, foi o Mn. O solo do Glória apresentou maiores teores de Mn no horizonte As do que o solo do Panga. As espécies exclusivas e de maior IVI do Panga tiveram maiores teores de Ca e de K, e menores de Mg do que as do Glória. Foram encontrados teores foliares de 15,7 a 59,5 mg/g de Ca em 42 espécies do Panga, enquanto a maioria das espécies da mata do Glória teve menos de 10,8 mg/g. As espécies comuns às duas matas mantiveram um melhor equilíbrio nas concentrações foliares de macronutrientes catiônicos. K. Ca e Mg, do que as espécies exclusivas e de maior IV!. Não foram observadas diferenças significativas entre as duas comunidades nas concentrações foliares de N e P. A relação P/N foi muito baixa na maioria das espécies nas duas matas, parecendo indicar que o P é, talvez, o macronutriente mais limitante nos solos dessas duas fitocenoses. Situadas em solo com pH mais elevado, as espécies exclusivas e de maior IVI do Panga, apresentaram menores teores de Mn do que as espécies da mata do Glória. Em comparação com outras fitocenoses de cerrado e cerradões brasileiros, encontrou-se um número maior de acumuladoras de Mn com concentrações foliares maiores que 300 mg/kg nas duas matas estudadas: 31 espécies no Glória e 11 no Panga. Ao contrário, encontrou-se um número menor de espécies acumuladoras de AI nas duas matas: 5 espécies no Panga e 7 no Glória Abstract: The soil availability and foliar concentrations of nutrients in the tree species of two mesophytic semideciduous forests in Triângulo Mineiro, Minas Gerais, were compared to determine the influence of soil fertility on the mineral nutrition of these two communities. Phytosociological surveys of tree especies (circunference at breast height greater than or egual to 10 cm) were carried out in fifty 10 m x 10 m plots in each forest, one at Estação Ecológica do Panga and the other at Fazenda Experimental do Glória, both properties belonging to the Universidade Federal de Uberlândia. Soil samples from the A1 and A3 horizons from each plot were analyzed to determine soil texture, pH, organic matter content and the availability of plant nutrients. Leaf samples from alI tree species in the two areas were analyzed to determine their concentrations of N, P, K, Ca, Mg, Fe, Mn, Zn, Cu and AI. The soil and leaf samples were collected at the end of the rainy season. A total of 151 species belonging to 104 genera and 53 families were present in the two forests. Ninety-three species belonging to 73 genera and 42 families, with a tree density of 2202 individual ha-1 and a basal area of 23.8 m2 h-1, were encountered in the forest community at Panga and ninety-six species belonging to 78 genera and 44 families, with a tree density of 1632 individuaIs ha-1 and a basal area of 28 m2 ha-1 , in the forest community at Glória. Thirty-eight species belonging to 47 genera and 36 familias were common to both communities. The Shannon diversity index for species was 3.7 at Panga and 4.1 at Glória. The five most important species at Panga were Lithraea molleoides, Chrysophyllum marginatum, Campomanesia velutina, Alibertia sessilis and Terminalia brasiliensis, accounting for 30% of the total of the importance value index. Ocotea corymboBa, Cryptocarya moschata ta, Machaerium villosum, Copaifera langsdorfii and Casearia grandiflora, the five most important species at Glória accounted for only 20% of the total of the importance value index. The soil at Panga was sandy loam and the soil at Glória was clayey. Soil pH, available Ca and Mn, and base saturation were higher in the A~ horizon at Panga than at Glória. Organic matter content, saturation of AI and availabiity of Fe, Zn, Cu and AI were higher at Glória. There was no significant difference between the two soils in the availability of K and Mg in the A1 horizon. The only inversion in these differences at lower depths occurred in Mn availability. The soil at Glória showed significantly higher concentrations of Mn in the As horizon than the soil at Panga. Species with the highest importance values at Panga and those exclusive to Panga had higher foliar concentrations of Ca and K and lower concentrations of Mg than those at Glória. The Ca concentrations in the 42 tree species at Panga varied from 15.7 to 59.5 mg/g while most of the species at Glória had concentrations lower than 10.8 mg/g. Species common to both areas showed a better equilibrium among the foliar concentrations of the major nutrient cations K, Ca and Mg, than the exclusive ones and those with the highest importance values. There were no significant differences between the two communities in the foliar concentrations of N and P. The P/N ratio was very low in most of the species in both areas, which indicates that P was probably the most limiting major nutrient in these two ecosystems. The species exclusive to Panga and those with highest importance values showed lower Mn concentrations than those at Glória, as would be expected from the higher pH of the soil at the former site. As compared to cerrado sensu stricto and cerradão commun ities of central Brazil, a larger number of manganese-accumulating species with foliar concentrations above 300 mg!kg (31 at Glória and 11 at Panga) was detected in the two areas. On the contrary, ony a few Al-accumulating species (five at Panga e 7 at Glória) were present in the two communities Doutorado Ecologia Doutor em Ciências

Orientador: Alexandra Christine Helena Frankland Sawaya Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: No Brasil, as espécies Mikania glomerata e Mikania laevigata, conhecidas popularmente como guaco, são muito utilizadas na forma de xarope devido ao seu efeito broncodilatador. A comercialização de medicamentos fitoterápicos no Brasil é regida por diversas legislações que primam pela qualidade destes, porém a qualidade da matéria-prima pode interferir de forma fundamental na segurança e eficácia do medicamento. Diante disso, este trabalho realizou um estudo de estabilidade do extrato hidroalcoólico das espécies citadas, conforme preconiza o "Guia para a realização de estudos de estabilidade de medicamentos" publicado pela ANVISA na RE 01, de 29 de julho de 2005. Folhas das duas espécies de Mikania foram secas em estufa a 40 °C e em liofilizador, foram preparados extratos hidroalcoólicos por maceração, que foram submetidos a estudo de estabilidade acelerado por 6 meses, e estudo de estabilidade de longa duração por 12 meses. As amostras ficaram armazenadas em diferentes temperaturas (22°C, 30°C e 40°C), com e sem incidência de luz, e a cada 3 meses foram analisadas por UHPLC-MS, para acompanhar seu perfil químico, quantificar a cumarina e ácido clorogênico. Em todas as condições do estudo, observou-se uma redução do teor do marcador químico desta espécie, a cumarina, maior que 5 %, sendo assim, não é possível atribuir o prazo de validade de 2 anos para extratos hidroalcoólicos desta espécie Abstract: In Brazil, the species Mikania glomerata and Mikania laevigata, known popularly as guaco, are widely used in syrup form due to its bronchodilator effect. The marketing of herbal medicines in Brazil is governed by various laws that guarantee the quality of these, but the quality of the raw material can interfere, fundamental safety and efficacy. Therefore, a stability study of the hydro alcoholic extract of the species mentioned was conducted as recommended by the "Guidelines for conducting stability studies of drugs" published by ANVISA in RE 01 of July 29, 2005. Leaves of both species of Mikania were dried in an oven at 40 ° C and by freeze drying, hydro alcoholic extracts prepared by maceration, which underwent accelerated stability study of 6 months, and long term stability study for 12 months. Samples were stored in different temperatures (22 ° C, 30 ° C and 40 ° C) with and without incident light, and every 3 months were analyzed by UHPLC-MS to monitor their chemical profile, quantifying coumarin and chlorogenic acid. At all conditions of the study, we observed a reduction of the content of the chemical marker of this species, coumarin, greater than 5%, so a shelf life of 2 years cannot be assigned to the hydro alcoholic extracts of these species Mestrado Fármacos, Medicamentos e Insumos para Saúde Mestra em Biociências e Tecnologia de Produtos Bioativos

Orientadores: Aureo Tatsumi Yamada, Wirla Maria da Silva Cunha Tamashiro Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Durante a gestação de roedores é observado, na região mesometria! de cada sítio de desenvolvimento embrionário, um acúmulo transitório de células linfocitárias da Hnhagem natural killer (NK). Estas células Natural Ki!ler de ambiente uterino (NK-u) apesar de expressarem antígenos de superfície semelhante as demais Nk, não desencadeiam a atividade cito!ítica como as Nk de sangue circulante. Este comportamento peculiar não foi ainda explicado o que vem dificultando a compreensão das possíveis participações destas células na imunoiogia da reprodução. A citoquímica de lectina OSA (Dofichos bíflorus aggfutin), tem sido utilizada para a marcação se!etiva das células NK-u de camundongos. Uma vez que esta lectina não reage com outros linfócitos, os glicoconjugados reativos a [ectina OBA, localizados na superfície das NK-u, poderiam ser moléculas especificas desta Hnhagem celular. Porém estes glicoconjugados não foram ainda isolados ou caracterizados. Neste trabalho, propôs-se a obtenção de anticorpos específicos para o reconhecimento de céiulas Nku de camundongos além de procurar identificar moléculas de expressão específica destas células. Para tanto as cé!ulas NK-u, isoladas de úteros de camundongos prenhes foram utilizadas como inócu!o antigênico em machos da mesma espécie. Apenas um dentre os seis camundongos imunizados produziu anticorpos que reagiram com as células NK_u, por meio de testes imunocitoquímícos. Do animal receptor que apresentou resposta imune, produzindo anticorpos reativos às células NK-u, foram obtidos os linfócitos espJênicos empregados na obtenção de hibridomas através da fusão com céluJas tumorais. Quatro hibridomas foram selecionados para a obtenção de líquido ascítico contendo anticorpos monoclonais. A especifiddade dos antícorpos obtidos foi avaliada por métodos imunocitoquímicos e imunoquímicos (westem b/otting). Entre os quatro clones selecionados (2C6.289, 2C6.2E4 2C4.1C10 e 2C4.5A10), dois apresentaram marcação tanto na superfície quanto no conteúdo citoplasmátíco das NK-u (2C4.1C10. 2C4.5A10), enquanto os outros dois marcaram apenas o conteúdo citoplasmático (2C6.2S9, 2C6.2E4). Pelos testes imunoquímícos realizados, os antícorpos produzidos pelos dones 2C4.1C10 e 2C4.5A 10 identificaram bandas de 52,0 KDa e 53,8 KOa e os anticorpos dos dones 2C6.289 e 2C6.2E4 identificaram uma banda de 41,4 KDa, que apresentam correspondência com bandas positivas à lectina DBA. o fato da imunização intraespécíe, com o uso de células NK-u inteiras ter resultado na produção de anticorpos contra estas células, toma-se a primeira evidência direta de que as células NK-u fazem parte de uma linhagem específica da gestação, as quais expressam moléculas exclusivas, reconhecidas como "non-self' pelos machos da mesma espécie. Dentre os c!ones de hibridomas produtores de anticorpos monoclonais aqueles que reconhecem estruturas de superfície das células NK-u podem ser utilizados como potenciais marca dores dessas células em camundongos, uma vez que reconhecem giicoconjugados também reativos à Jectina DBA, que seriam expressos exclusivamente por estas células Abstract: During the pregnancy in the rodents a transient accumulation of natural killer (NK) cells 1s seen In the uterus. These cells found in the uterine environment express the surface antigen common to drculating NK (cNK) cells, but they do not show some cytokine receptors and do not trigger the cytoJytíc activity during normal pregnancy. Such a peculiar behavior of uNK ceH has not beeo fuUy explained aod their role io the immunoiogy of reproduction 1s stH! unc!ear. It has been reported the use of OBA (Dofichos bifJorus) lectin cytochernistry for selective staining of mouse uNK cel!. Since thís lectin does not react with othar !ymphocytes, the g!ycoconjugates reactive to OBA iectin localized on uNK cel! surface could be specific mo!ecules of such a cal! lineage. However, the glycoconjugates reactive to OBA lectin have no! been isolated ar characterized yet. The present work was proposed to obtain antibodies specific agaínst mouse uNK cel! and iooking identify mo!ecules of specific expression for. In this aim, the whole uNK ce!ls isolated from pregnant mice uterus were used as antigen and male mice of sarne strain, as host. From the animal producing antibodies against mouse uNK cell were collected the spleen and further processed to isolate the Iymphoeytes dones producing the monoclonal antibody (mAb) and the hybridomas of four clones were producad the ascites. The specificities of antibodies were evaluated by immunocytochemistry and immunoblotting. Only one among six immunized miee produced antibody against mouse uNK eells evaluated by immunocytochemistry. Four dones showing two different JabeJing pattern by immunocytochemistry were chosen to obtain ascites. The two (2C6.2B9, 2C6.2E4) clones producing mAS against uNK ceU cytop!asm eontents showed one positive band (41,4 KDa) in the westem blot matched to the DBA lectin positive bands. The other two ciones (2C4.1C10 e 2C4.5A 10) producJng mAb reacting on ceil surface and cytoplasm contents showed two positive bands (52,0 KDa and 53,8 KDa) corresponding to OBA lectin positive bands. Therefore, the antibody production against uNK cells afier intra-specie inoculation is the first direct evidence showíng uNK cells as being a cel! !ineage specific of pregnancy, which express specific molecules recognízed as non-self by male of the sarne strains. Among the mAb obtained, those reactive to antigen localized on call surface could be used as specific ceH marker of uNK once recognize the same glycoconjugates reactive to DBA lectin tha! seems to be expressed only by this cell Mestrado Histologia Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Fernando Roberto Martins, Roque Cielo Filho Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O padrão de utilização de recursos e a teoria de nichos ecológicos constituem elementos importantes na compreensão de como comunidades ecológicas são estruturadas. A maneira como os recursos são partilhados entre as espécies é refletida na sua distribuição de abundância. Abundância e diversidade de espécie são resultantes de processos que determinam as comunidades. Um padrão frequentemente observado é a relação unimodal entre diversidade e produtividade. Processos competitivos são inferidos na determinação da diversidade ao longo do gradiente de produtividade. Devido à abundância das espécies serem resultantes de interações biológicas, os modelos de distribuição de abundância de espécies (DAE) permitem inferir na maneira como o espaço de nicho é partilhado. Utilizamos os modelos de DAE proposto por Tokeshi e índices de concentração de dominância e equabilidade para testar por meio de regressões como a riqueza, biomassa e equabilidade variam ao longo de um gradiente de estresse nutricional definido pela concentração de alumínio no solo. Verificamos um padrão linear negativo entre a riqueza e gradiente de estresse nutricional com fragmentos de floresta estacional semidecídua no extremo de menor estresse e cerradão no extremo oposto do gradiente. A biomassa apresentou um padrão em forma de "U" quando relacionado ao mesmo gradiente. Os índices e os modelos foram condizentes na verificação da concentração de dominância por poucas espécies nos extremos do gradiente, porém somente o índice Evar verificou a maior equabilidade nos valores intermediários do gradiente. Nossos resultados permitiram inferir que tal gradiente foi importante na determinação da riqueza e biomassa das comunidades. Os modelos e índices permitiram verificar o padrão de partilha de nicho, porém não foi possível afirmar o processo que resultou tal partilha Abstract: The resource utilization patterns and ecological niche theory are important in understand how communities are assembled. The way how resources are apportioned between species are showed in its abundance distribution. Abundance and diversity are outcome of process that structure communities. The pattern frequently found is a "hump-back" relationship between diversity and productivity. Competitive processes are inferred in determination of diversity along productivity gradient. Due to species abundance are outcome of biological interaction, models of species abundance distribution (SAD) allow us to infer how niche are apportioned. We use Tokeshi's SADs models and dominance and evenness index to test, using regression, how richness, biomass and evenness change along stress nutrition gradient defined by aluminium concentration in soil. We verified a negative linear pattern between richness and nutrition stress gradient with semideciduous forest fragment at extreme of lesser stress gradient and cerradão at opposite extreme gradient. The biomass showed a "U" shape pattern along the same gradient. The index and SADs models showed similar result measuring dominance of few species at extremes of gradient, however only Evar index measured more evenness between extremes of gradient. Our results allow inferring that such gradient war important to define community richness and biomass. The models and index allowed testing the patterns of niche apportionment, however its do not allowed us confirm the process of niche apportionment Mestrado Ecologia Mestre em Ecologia

Orientador : Maria Luiza Silveira Mello Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Alterações fenotípicas nucleares, encontradas nas células dos túbulos de Malpighi de T. infestans, após tratamento com metais poluentes, cobre e mercúrio, foram detectadas em preparados citológicos, obtidos a partir de dois procedimentos experimentais básicos: incubação dos órgãos em soluções contendo os íons metálicos ou injeção de soluções aquosas destes íons nos indivíduos, com posterior remoção dos túbulos. A análise destes preparados, revelou oito tipos nucleares distintos. Destes, principalmente 4 fenótipos ("descompactado", "homogêneo", "vacuolizado" e "picnótico") parecem estar relacionados com a ação tóxica dos metais pesados, enquanto que os de mais são também encontrados em túbulos de Malpighi de insetos sadios ou submetidos ao jejum prolongado ("stress" fisiológico). Ao mesmo tempo, a frequência percentual dos tipos núcleares considerados normais, decresce sensivelmente nos insetos tratados com os metais. Os fenótipos nucleares ocasionados pela ação de cobre e mercúrio, representariam alterações na fisiologia cromatínica e/ou refletiriam etapas de um processo de necrose celular. Neste trabalho, o tipo "vacuolizado" foi opadrão alterado mais frequente. Também buscou-se detectar alterações no funcionamento de alguns sistemas enzimáticos _omesmo material exposto aos metais, com procedimentos citoquímicos. Não foi observada ainibição enzimática esperada, nas ATPases por influência dos metais pesados, comprovando o comportamento destes como inibidores enzimáticos do tipo não-competitivo. Apenas o cobre aparentemente exerceu influência na reação, estimulando-a, possivelmente por ser cofator enzimático. A atividade enzimática das fosfatases ácidas também não foi inibida pelos metais poluentes, observando-se até, um aumento no teor e/ou disponibilidade delas no material tratado com o mercúrio. Nas SDH, a esperada inibição de sua ação enzimática, especialmente mercúrio também não foi constatada; novamente tendo sido pelo de monstrado o mportamento destes metais como inibidores enzi máticos do tipo não-competitivo. No entanto, houve altera ção na forma celular, evidenciada pela modificação do padrão preferencial da distribuição das mitocôndrias, por ação do cobre e do mercúrio Abstract: Changes in nuclear phenotypes were found in the Malpighian tubule cells of T. infestans after treatment with pollutant metaIs, (copper and mercury). They were detected in cytological preparations, obtained from incubation of the tubules in solutions containing the metallic ions or from injection of aqueous solutions of the metallic ions in the specimens, with further removal of the tubules. The morphological analysis of the cytological preparations, revealed eight distinct nuclear phenotypes. Specially four of them ("unpacked", "homogeneous", "vacuolated" and "pyknotic" types) appear to be related to the toxic action of the heavy metaIs. On the other hand, the other types were also found in Malpighian tubules of normally healthy insects and in Malpighian tubules of insects under starvation (a physiological stress). Furthermore, the relative frequency of the normal nuclear phenotypes decreases remarkably in the treated insects. The nuclear phenotypes promoted by the action of copper and mercury would represent physiological chromatinic changes and/or they would reflect steps in the process of cellular necrosis. The nuclear phenotype "vacuolated" was the most frequent changed patter found in this work. AIso changes in functioning of some enzymic systems were studied with cytochemical procedures in the same material exposed to the heavy metaIs. The enzymic inhibition expected for the ATPases by action of heavy metaIs was not demonstrated. This supports the hypothesis of copper and mercury ions functioning ,as non-competitive enzymic inhibitors. Only copper apparently stimulated the enzymic reaction, possibly because it is an enzymic cofactor. The enzymic activity of the acid phosphatases was not either inhibited by the pollutant metaIs. An increase in content and/or availability of these enzymes was even found in the mercury-treated material. The expected inhibition promoted by metaIs in the SDH system, specially mercury, was not either demonstrated. Again, the non-competitive enzymic inhibiting behavior was suggested for copper and mercury. However, some changes in the cell shapes as demonstrated by modified patterns of mitochondria distribution was promoted by the heavy metaIs in the Malpighian tubules of T. infestans Mestrado Biologia Celular Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Ivanhoe Rodrigues Baracho Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: No presente trabalho estudou-se os efeitos dos fungicidas Benlate, Demosan 65W e Dithane M22, em linhagens de fusarium moniliforme e F. moniliforme var. subglutinans. Organizou-se um grupo de seis tabelas que permitem determinar com facilidades e rapidez as doses letais 'DL IND. 50¿, 'DL IND. 70¿ e 'DL IND. 95¿ e seus respectivos intervalos de confiança. Seis conjuntos de dados de pesquisadores diferentes foram testados com essas tabelas e os resultados comparados com os obtidos por outros métodos de determinação de doses letais, tais como: próbite, lógite, Reed & muench, Thompson, Piedrabuena e de Baracho & Piedrabuena. Examinando-se os resultados de determinação dos níveis de resistência através da técnica de ¿inoculação por picada¿, para os três tóxicos ensaiados, observa-se que F. moniliforme var. subglutinans comporta-se de maneira diferente da de F. moniliforme. Com relação a Dithane M-22, os experimentos mostraram uma resposta atípica nas diferentes dosagens. Essas respostas atípicas talvez se relacionem com um possível efeito mutagênico do Dithane M-22. Quanto ao uso das tabelas aqui apresentadas, podemos concluir que, apesar das restrições discutidas no trabalho, sua aplicação a doses letais em microorganismos parece aceitável, não apenas pela simplificação e rapidez dos cálculos, mas também porque o grau de precisão parece ser compatível com a natureza destes tipos de experimentos em microrganismos Abstract: A study was carried out to analyse the effects of the three fungicides Benlate, Demosan 65W and Dithane M-22 in strains of Fusarium moniliforme and F. moniliforme var. subglutinans. A group of six tables was prepaired allowing rapid determination of the lethal doses 'LD IND. 50¿, 'LD IND. 70¿ and 'LD IND. 95¿ and their respective confidence intervals, with a minimum of time-consuming calculations. These were used on six sets of data from different authors and the results were compared with data of other methods of determining lethal doses such as: proibit, logit, Reed & Muench, Thompson, Piedrabuena and Barachos & Piedrabuena. The results of the resistance levels determined by measuring radial growth on PDA media for the three toxicants assyed, indicated that F. moniliforme behaves different by from F. moniliforme var. subglutinans. In relation to Dithane M-22, the experiments showed an atypical response to the different dosages. This response could be attributed to a possible mutagenic effect of Dithane M-22. from the proposed tables, it can be concluded that, in spite of some restrictions which are discussed in the paper, their application to lethal doses for microorganism seems acceptable, the simplification of the analysis, as well as the degrees of precision obtained appear to be compatible with the nature of this type of experiment in microorganisms Mestrado Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Gil Lucio Almeida Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A síndrome da dor fêmoro-patelar (SDFP) acomete uma em cada quatro pessoas da população em geral, e é composta por várias lesões que acometem a articulação fêmoro-patelar. O tratamento fisioterapêutico é fundamental na reabilitação dos portadores dessa síndrome, e que tem como uma de suas principais ferramentas o treinamento em cadeia cinética fechada. Dentre as várias formas de realizar esse treinamento, o agachamento é uma das mais utilizadas. Contudo, quando realizado o agachamento, a pessoa nem sempre tem o controle adequado da posição do tronco e dos membros, o que pode favorecer diferentes padrões cinemáticos, cinéticos e eletromiográficos. Portanto o presente estudo teve por objetivo identificar e descrever a estratégia cinética e eletromiográfica usada para realizar o agachamento nas fases ascendente e descendente em sujeitos saudáveis e portadores da SDFP, quando os movimentos são restritos no plano sagital, com padrão cinemático similar na maioria das articulações envolvidas. Oito sujeitos saudáveis e oito portadores da SDFP participaram deste estudo e realizaram o agachamento mantendo os braços flexionados à frente do corpo em duas distâncias, semi-agachamento (de 30º a 50º) e meio-agachamento (de 60º a 80º) na fase descendente. Para a fase ascendente eles realizaram a subida a partir do meio-agachamento. A atividade eletromiográfica dos músculos vasto medial oblíquo, vasto medial longo, reto femoral, vasto lateral, bíceps femoral, semitendinoso, gastrocnêmio lateral e tibial anterior foi registrada. A cinemática das articulações do membro inferior foi reconstruída utilizando-se um sistema óptico de análise de movimento. O centro de pressão (COP) foi obtido utilizando-se dados de uma plataforma de força, e os torques no tornozelo e joelho foram calculados por meio da dinâmica inversa. As tarefas foram eficazes em restringir o movimento no sentido céfalo-caudal em ambos os grupos. Também foi possível identificar e descrever uma estratégia clara para ambas as fases ascendente e descendente do agachamento. O músculo tibial anterior foi o responsável por iniciar o agachamento na fase descendente e se manteve coativado com o gastrocnêmio durante todo o movimento. O quadríceps foi o principal responsável em desacelerar o movimento e não houve grande atividade dos isquiotibiais. Comparado com o grupo controle, o grupo SDFP apresentou menor torque no joelho e menor atividade eletromiográfica do quadríceps, mas o torque no tornozelo e o deslocamento anterior do COP foram maiores durante as duas distâncias, na fase descendente do agachamento. Para a fase ascendente do agachamento, o grupo SDFP apresentou diferença na posição inicial, revelando uma estratégia protetora da articulação fêmoro-patelar. Antes de iniciar o movimento, houve forte ativação do quadríceps, isquiotibiais e gastrocnêmio para vencer a ação gravitacional em ambos os grupos. Comparado com o grupo controle, o grupo SDFP apresentou menor torque no joelho e menor atividade eletromiográfica do quadríceps, mas o torque no tornozelo e o deslocamento anterior do COP foram maiores. As fases de cada tarefa foram descritas e as implicações clínicas discutidas. Palavras chave: torque, centro de pressão, eletromiografia, patela, agachamento Abstract: The patellofemoral pain syndrome (PFPS) affects one in four people in the general population, and is composed of several lesions of the patellofemoral joint. The physical therapy is essential for the rehabilitation of the population with this syndrome, and one of its main tools is the training in closed kinetic chain. Among the several ways of performing that training, the squat is one of the most used. However, when performing it, a person does not always have a proper control of the position of the trunk and of the limbs, what can produce different kinematic, kinetic and electromyographic patterns. Therefore, the present study had as an objective identifying and describing the kinetic and electromyographic strategy used to perform the squat in the ascending and descending phases by people with and without PFPS, when the movements are restricted in the sagittal plane, with a similar kinematic pattern in most of the involved joints. Eight healthy subjects and eight with PFPS participated in this study and they performed the squat keeping the upper arm elevated at 90º at the shoulder joint, just in front of the body in two distances, semisquatting (30º to 50º) and half squatting (60º to 80º) in the descending phase. For the ascending phase they performed the ascent from the half squatting. The electromyographic activity of the vastus medialis oblique, vastus medialis longus, rectus femoris, vastus lateralis, biceps femoris, semitendineous, gastrocnemius lateralis and tibialis anterior muscles was registered. The joint kinematics of the inferior limbs was reconstructed using an optical system for movement analysis. The center of the pressure (COP) was obtained using data from a force plate and the joint torques in the ankle and knee were calculated using inverse dynamics. The tasks were effective in restricting the movement in the cefalo-caudal direction for both groups. Moreover, it was possible to identify and to describe a clear strategy for both the ascending and the descending phases of the squat. The anterior tibialis muscle was the responsible for beginning the squatting in the descending phase, and kept co-activated with the gastrocnemius during the whole movement. The quadriceps was mainly responsible for decelerating the movement and there was not great activity of the hamstrings. Compared to the control group, the PFPS group presented smaller knee torque and smaller quadriceps electromyographic activity, but the ankle torque and the COP displacement to the anterior direction were larger in the two distances, in the descending phase of the squatting. For the ascending phase of the squatting the PFPS group presented difference in the initial position, revealing a protecting strategy for the patellofemoral joint. Before beginning the movement, there was a strong activation of the quadriceps, hamstrings and gastrocnemius. This was necessary for the motor control system to generate the forces that overcome the inertia of the limb and resist the flexion force acting on the knee due to gravity in both groups. Compared to the control group, the PFPS group presented smaller torque in the knee and smaller electromyographic activity of the quadriceps, but the ankle torque and the COP displacement to the anterior direction were larger. The phases of each task were described and clinical implications were discussed. Key words: torque, center of the pressure, electromyographic activity, patella, squat Doutorado Fisiologia Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Christine Hackel Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A região de Passo Fundo no Planalto Médio do Rio Grande do Sul caracteriza-se pela produção de grãos (trigo, soja) e também hortigranjeiros. No combate as pragas destas culturas, os agricultores fazem uso de grandes quantidades de agroquímicos (fungicidas, inseticidas e herbicidas). Para testar a possível atividade genotóxica destes produtos, utilizou-se a técnica de micronúcleos, que consiste na identificação de pequenos núcleos visíveis em células binucleadas, resultantes da perda de parte ou de cromossomos inteiros pela célula, durante a divisão celular. Para a análise dos micronúcleos, foram coletados 2 mL de sangue periférico heparinizado de trinta trabalhadores expostos, relacionados diretamente com a aplicação e manuseio destes produtos e trinta indivíduos não expostos. Dados relativos ao hábito de fumar, consumo de bebida alcoólica, sexo, idade e tempo de exposição foram também identificados. Culturas de linfócitos de sangue periférico foram tratadas com citocalasina B por um período de 24 horas antes de completar o tempo total de cultura. Após a contagem de 1000 células binucleadas a freqüência de micronúcleos de ambos os grupos foi avaliada e aplicado o teste de "t" Student, indicando diferença altamente significativa entre expostos (14,4/1000) e não expostos (7,211000). Outros fatores relacionados com a instabilidade cromossômica como tabagismo, sexo, idade e tempo de exposição, não influenciaram de modo significativo em ambos os grupos. Finalmente, podemos concluir que o teste do micronúcleo mostrou-se eficiente como ensaio biológico para monitorar populações expostas a misturas de agroquímicos Abstract: Much of grain cultivation (wheat and soybean) in the Rio Grande do Sul state is carried out in the region of Passo Fundo. For crop pest control, great amounts of agrochemicals (fungicides, insecticides, herbicides ) are used. To evaluate the genotoxicity of these products, the micronucleus test was applied in the study of rural workers directly exposed to these chemicals. The micronuclei are small nuclei resulting from the loss of whole chromosomes or a centric fragments during cell division that can be identified in binucleated cells. Heparinized blood samples were drawn by venepuncture from 30 exposed workers and 30 non-exposed controls. To perform micronuclei analysis on Lymphocyte cultures , Cytochalasin B was added to block cytokines is after 44h incubation at 3-,0 C, resulting in t!1e formation of multinucleated cells. Data about smoking and drinking habits, sex, age and exposure duration were also identified. Micronuclei frequency was evaluated by counting 1000 binucleated cells in both groups. Statistical analysis showed significantly higher mean number levels of binucleated cells with micronuclei in exposed individuals (14,4/1000) than in controls (7,2/1000). Other factors related to chromosome instability, such as smoking habits, age and exposure duration, showed no effect on the frequency of micronuclei in both groups. Finally, we can conclude that the micronuclei test is an efficient biological assay for monitoring population exposure to mixtures of agrochemicals Mestrado Biologia Celular Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador : Sonia Machado de Campos Dietrich Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Hyptis brevipes Poit. (Labiatae) é uma planta anual, herbácea, invasora de lavouras perenes e encontrada da facilmente em lugares úmidos, como pastagens de várzea e beira de canais, lagoas e riachos. Os efeitos de tratamentos fotoperiódicos, aplicados ou não a temperaturas controladas, foram analisados no crescimento vegetativo, na floração e na variação dos teores de carboidratos de plantas originárias de sementes, coletadas na região de Campinas, SP. Quanto ao crescimento vegetativo, foi observado que, em fotoperiodos mais curtos,as plantas apresentaram maior crescimento em altura e maior número de nós, especialmente a '25 º'. O número de dias em que as plantas permaneceram em condições de dias curtos influenciou significativamente esses parâmetros de crescimento. Os ramos laterais localizados no '5 º e 6 º nós mostraram maior sensibilidade ao tratamento fotoperiódico e à temperatura do que os ramos situados abaixo e acima destes no eixo caulinar. Temperatura de 30 º reduziu fortemente a área foliar. A intercalação de dias longos numa série de dias curtos provocou diminuição na altura das plantas e no comprimento dos ramos laterais, sendo que essa inibição de crescimento foi aumentada à medida que mais dias longos foram inseridos. H. brevipes é uma especie quantitativa de dias curtos para floração, com fotoperiodo critico entre 12 e 13 horas Abstract: Not informed. Doutorado Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Maria Ligia Rodrigues Macedo Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Os inibidores de proteinases desempenham as mais variadas funções biológicas. Em plantas, eles podem estar envolvidos no mecanismo de defesa vegetal contra predadores e doenças. Devido à habilidade dessas moléculas protéicas bloquearem enzimas, os inibidores também podem ser usados como ferramentas no estudo de processos bioquímicos relacionados a patologias, tais como a inflamação, hemorragia e até mesmo o câncer. Neste trabalho, a caracterização físico-química e o estudo dos papéis biológicos de dois inibidores isolados e purificados de sementes de Dimorphandra mollis, DMTI (Mace do et ai., 2000) e DMTI-II (Mello et aI., 2001) foram realizadas com o objetivo de melhor conhecer essas moléculas. DMTI (20 kDa) e DMTI-II (23kDa) são inibidores de tripsina pertencentes à família de Kunitz. A estabilidade da atividade inibitória de DMTI e DMTI-II foi analisada e comparada. DMTI e DMTI-II perde, respectivamente, cerca de 20% e 40% da atividade quando incubados a 60 °e por 20 minutos. Entretanto, a atividade de ambos não foi afetada por diferentes condições de pH, concentrações crescentes dos agentes redutores DTT e uréia. No entanto, a atividade DMTI-II sofreu um descréscimo de 50% quando incubado com cloreto de guanidina. A diferença da estabilidade dos inibidores levou a investigação da estrutura protéica de ambos; DMTI e DMTI-II foram submetidos a análises de dicroísmo circular e calorimetria. A ação inseticida de DMTI-II e DMTI sobre os lepidópteros Anagasta kuehniella e Corcyra cephalonica, foram analisadas através de ensaios in vitro e in vivo. Tanto DMTI-II quanto DMTI, quando incorporados ao nível de 2% na dieta artificial dos insetos, não se mostraram agentes inseticidas potenciais contra essas duas espécies. Estes resultados não descartam a utilização dos inibi dores de D. mollis na biotecnologia vegetal contra outras espécies de insetos, apenas ajudam a esclarecer as características como agentes inseticidas biológicos. Quando estudado o envolvimento de DMTI-II e DMTI na resposta inflamatória utilizando o edema de pata em ratos como modelo experimental, os resultados mostraram que doses crescentes de DMTI-II geram uma curva dose-dependente sendo que a resposta máxima ocorre 30 minutos após a sua injeção subplantar, o que sugeriu a ação do inibidor na liberação de histamina e serotonina, que são responsáveis pelo aumento da penneabilidade vascular. A elucidação do mecanismo de ação de DMTI-Il foi estudada através da utilização de drogas antiinflamatórias, como a mepiramina e ciproheptadina; sendo esta última a que melhor inibiu a ação de DMTI-Il na indução do edema. Concomitantemente, a sua ação na liberação de bradicinina também pode estar ocorrendo, pois o pré-tratamento com o antagonista de receptores B 2, HOE 140, reduziu cerca de 79% do edema induzido por DMTI-II Abstract: Proteinase inhibitors have a wide range of biological functions. In plants, they¿re part of the defense mechanism against predators and diseases. As they can block enzymes, inhibitors are useful tools in the study of biochemical processes related to pathologies, such as inflammation, hemorrhage and even cancer. This paper aims at assessing the physical-chemical features and the biological functions of two inhibitors isolated and purified trom Dimorphandra mollis seeds, DMTI (Macedo et al., 2000) and DMTI-II (Mello et aI., 2001). DMTI (20 kDa) and DMTI-TI (23 kDa) are trypsin inhibitors ITom the Kunitz family. The stability of the inhibitory activity of DMTI and that ofDMTI-II were analyzed and compared to each other. DMTI and DMTI-II lost 20% and 40%, respectively, oftheir activities when incubated at 60°C for 20 minutes. However, neither inhibitory activity was sensitive to pH above the 2.0-10.0 range, reducing DTT agents and urea. On the other hand, DMTI-II activity was reduced by 50% when incubated with guanidine hydrochloride. The difference of stability between the inhibitors led to further investigation of their protein structure; DMTI and DMTI-II structures were analyzed by circular dichroism (CD) and differential scanning calorimetry (DSC). The effectiveness of DMTI-II and DMTI as insecticide in Lepidoptera insects, Anagasta kuehniella and Corcyra cephalonica, was analyzed in vitro and in vivo assays. Neither DMTI-II nor DMTI, when incorporated into artificial diet at 2%, were active as insecticide agents against these two species. Nevertheless, these results do not discard the use of inhibitors trom D. mollis in plant biotechnology against other species of insects; they just help us to understand how they work as biological agents. When studying DMTI and DMTI-II participation in inflammatory response in the rat paw edema experimental model, the results showed that increased doses of DMTI-II induced a dose dependent curve, and maximum response occurred 30 min after sub-plantar injection, which indicated that the inhibitor is active in the release of histamine and serotonin, which are responsible for the increase of vascular permeability. The elucidation of DMTI-II action mechanism was studied by using anti-inflammatory drugs, such as mepyramine and cyproheptadine, the latter the most effective against DMTI-II effects in edema induction. At the same time, it may also be active in bradykinin release as the pretreatment with B2 receptor antagonist HOE 140 reduced the DMTI-II induced edema by near1y 79% Doutorado Bioquímica Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Angelo Pires do Prado Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Entre os ectoparasitos dos animais bovinos, o carrapato ¿ Boophilus microplus (Acari: Ixodidae) - continua sendo uma das principais causas das perdas econômicas na pecuária do Estado de São Paulo. A situação atual do controle do carrapato caracteriza-se por uma crise na produção de novas moléculas de parasiticidas e o desenvolvimento acelerado da resistência dos parasitas aos produtos usados. O presente trabalho teve por objetivo verificar o perfil de sensibilidade do carrapato B. microplus nas fazendas localizadas em alguns municípios do Vale do Ribeira e no município de Pindamonhangaba e propor um sistema de tratamento carrapaticida com base na infestação de paternóginas. Foram realizados testes de larvas - LPT (larval packet test) adotado pela FAO - teste de imersão com a fêmea adulta e o levantamento sobre as práticas de controle adotadas nas duas regiões. Os resultados de resistência para as fazendas de Pindamonhangaba mostraram que, para cipermetrina 15,4% das fazendas foram classificadas como sensível; 7,7% com resistência nível I; 69,2% com resistência nível II e 7,7% com resistência nível III. Para a deltametrina 23% sensível; 38,5% com resistência nível II e 38,5% com resistência nível III. Para o organofosforado clorpirifós 54% mostraram-se sensível; 38,4% com resistência nível I e 7,6% com resistência nível II. A região do Vale do Ribeira apresenta uma média de eficácia inferior a 20% para os piretróides; eficácia entre 49% e 72% para as associações piretróides e organofosforados; 66,83% para o amitraz e acima de 90% para as associações entre os organosfosforados. Para o teste de larvas a cipermetrina apresentou uma porcentagem de 42,85% de amostras sensível; 14,3% com resistência nível I e 42,85% com resistência nível II. Deltametrina, 50% sensível; 25% com resistência nível II e 25% com resistência nível III. O organofosforado clorpirifós mostrou uma porcentagem de 50% de amostras sensível; 25% com resistência nível I e 25% com resistência nível II. Constatouse, para as duas regiões estudadas, a falta de conhecimento dos principais grupos químicos usados no controle dos carrapatos. O produto amitraz é o mais usado e a maioria das fazendas usam o método de pulverização na aplicação dos carrapaticidas. Experimento realizado no ano de 2001 a 2003 num sítio localizado no município de Ibiúna mostrou que a avaliação de infestação de paternóginas do carrapato B. microplus na área do úbere ou escroto e baixo períneo é um critério que pode ser empregado para se determinar a aplicação de carrapaticidas. Quando se realiza a aplicação de carrapaticidas nos animais infestados com bastante paternóginas diminui a infestação de larvas no campo. Testes de bioensaios, usando fêmeas adultas, realizados num intervalo de três meses, e teste de larvas no período de seis meses servem como orientação para o proprietário na avaliação da sensibilidade dos carrapatos aos produtos químicos Abstract: The cattle tick - Boophilus microplus (Acari: Ixodidae) ¿ is one of the principal causes of economic losses in the cattle farms in São Paulo state. The current situation of the tick control is characterized by a crisis in the production of new molecules with acaricidal properties and by an increasing in the parasites resistance to the products used to control them. The current study aimed to verifying the sensibility profile of tick B. microplus in farms located in the municipalities of Vale do Ribeira and in the region of Pindamonhangaba, and propose a tick control treatment system based on nymph infestation. The resistance diagnosis tests have been carried by the larval bioassay (Larval packet test), adult immersion test and the survey of the tick control practices applied in both regions. The results for the farms at Pindamonhangaba show that to Cypermethrin 15,4% of the farms were classified as sensible, 7,7% resistance level I, 69,2% resistance level II and 7,7% resistance level III. To deltamethrin 23% were considered sensible, 38,5% Resistance level II, and 38,5% resistance level III. To organophosphate chlorpyriphos 54% presented a sensible frame, 38,4% resistance level I and 7,6% resistance level II. The Vale do Ribeira region presents an average efficacy lower than 20% for all pyrethroids; efficacy between 49% and 72% to associations with pyrethroids and organophosphates; 66,83% to amitraz, and over 90% to organophosphates associations. For the larval test, the cypermethrin presented a percentage of 42,85% from samples sensible; 14,3% resistance level I and 42,85% resistance level II. Deltamethrin, 50% sensible; 25% resistance level II and 25% resistance level III. The organophosphate chlorpyriphos presented a percentage of 50% from samples sensible; 25% resistance level I and 25% resistance level II. It has been proved, that for both regions under this study, there is a lack of knowledge concerning the main chemical groups used in the tick control. The amitraz is the most used and most farms apply the pulverization method when performing the tick control. An experiment taken from 2001 to 2003 in a little farm located in the municipality of Ibiúna has shown the evaluation in the infestation of tick B. microplus in the udder area or escrotum and low perineum is a good criteria to be applied in order to determine the application of anti-ticks. When the application of anti-ticks is undertaken on infested animals full of pathenogens, the field larvae infestation is diminished. Bioassay, using engorged female ticks, undertaken at three months intervals and larval packet test undertaken at six months intervals serve as orientation for the owners for the evaluation of ticks¿ sensibility to the chemical products Doutorado Entomologia Doutor em Parasitologia

Orientador: Gil Lucio Almeida Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O objetivo deste estudo foi investigar as estratégias de ajustes posturais utilizadas durante o balanço em gangorra, assim como o efeito do. treino. Sujeitos. Seis indivíduos neUI'OIogicamente normais (NN) e seis portadores da síndrome de Down (SD) participaram deste estudo. Métodos. Os indivíduos foram treinados a ba_iÇar em uma gangorra e foram testados antes e após o treino em gangorras com nove índices de dificuldade diferentes. Os _ou1os das articulações do quadril, joelho e tornozelo, a atividade eletromiográfica de alguns músculos da perna e do tronco, e o deslocamento do centro de pressão foram registrados. Resultados. Os indivíduos NN mantiveram o equilíbrio na gangorra devido principalmente a movimentos da articulação do tornozelo, sendo estes movimentos correlacionados com o deslocamento do centro de pressão. Eles utilizaram um padrão alternado de atividade dos músculos gastrocnêmico medial e tibial anterior e foram capazes de modular a quantidade de oscilação postural baseado na demanda mecânica da tarefa. A ordem desta alternância muscular foi em direção oposta ao estiramento. Por exemplo, quando o tornozelo moveu em flexão dorsal, o músculo gastrocnêmico foi estirado, mas o tibial anterior foi o músculo ativado. O treino não afetou o balanço na gangorra. Os Indivíduos portadores da síndrome de Down demostraram uma dificuldade em correlacionar os movimentos das três articulações estudadas. com o deslocamento do centro de pressão. Ao contrário dos NN, os indivíduos SD não alternaram a atividade dos músculos agonistas e antagonistas responsáveis pelo movimento do tornozelo. Eles apresentaram um padrão de co-ativação generalizada mesmo para as condições mais estáveis, e foram incapazes de modular as respostas de acordo com a demanda mecânica da tarefa. O 1reino aumentou as possibilidades destes indivíduos balançarem na gangorra, mas não alterou a estratégia de manutenção do equníbrio. Conclusão e Discussão. Este estudo confirma a idéia de que o balanço na gangorra é possível principalmente devido a movimentos do tornozelo (Ivanenko et aL, 1997) e mostra o uso de uma estratégia semelhante a do pêndulo invertido. Primeiro, observamos que os indivíduos NN inibiram o músculo estirado devido talvez a uma projeção supra-segmentar. Segundo, o treino não afetou a estratégia de manutenção do equilíbrio. Terceiro, os indivíduos portadores da síndrome de Do-wn utilizaram um estratégia diferente da utilizada pelos NN, mas esta estratégia foi suficiente para garantir o balanço. Ao contrário do que tem sido mostrado na literatura (Almeida, et aI., 1994), eles não alcançaram um nível de performance motora semelhante ao nível dos indivíduos NN após o treino. Esta estratégia adotada pelos indivíduos portadores da síndrome de Down parece ser uma resposta adaptativa a possíveis déficits no sistema de controle postural. Sendo esta resposta uma adaptação deveria o fisioterapeuta intervir na tentativa de mudar esta estratégia? Nossos dados suportam a idéia de que a reabilitação deve enfatizar a função e não o modelo de movimento. No entanto, antes de embarcarmos em um novo tratamento, novos estudos são necessários para mostrar se estas respostas adaptativas podem ou não ser mudadas sem detrimento da função Abstract: The purpose of this study was to investigate the postural adjustments and the effects of practice during balance on seesaw. Subjects. Six individuals with Down syndrome and six neurological normal individuals (NN) took part of this study. Methods. The individuals were trained to balance on one seesaw and were tested before and after practice on nine different seesaws. We recorded the LED marks that were placed on the center or hip, knee and ankle joints and the EMG activities of the some leg and trunk muscles. Results. Neurological Normal individuals maintained balance mainly using ankle movements, and these movements were correlated with the displacement of the center of pressure. They demonstrated an alternated pattern of ankle agonist and antagonist muscles activities and were able to moduIate the amount of balance based on the mechanical dernand of each io, tenns or degree of stability. The order of this alternation was io the opposite direction of the stretched muscle. For cxample, when the. ankle was moved into dorsal fIexion the gastrocnemium was stretched but the anterior tibialis was activated. Training did not affect t.he balance on seesaw. Individuals with Down syndrome demonstrated a difficulty to corre1ate the joints movements with center of pressure displacement. Contrary to NN, the Down syndrome individuals did not alternated the EMG activities. They co-activated the agonist and antagonist ankle muscles even for easy conditions and were unable to modulated the answer with mechanical demand of the task. Training increased the ,possibilities of these individuals balance on seesaw, but clid not change their postural strategy. Conclusion and Discussion. This study confirm the idea that the balance on seesaw i8 achieved mainly by changing the ankle joint (Ivanenko et aL, 1997) and show that the NN individuals use a strategy similar to the inverted pendulum. First,. we observed that these individuals inhibited the stretching muscle using perhaps a suprao ó segmental projection. Second, the training did not affect the balance strategy for both groups. Third, too Down syndrome used a different strategy compared with normal individuals and their strategy was enough to assure balance. Contrary to the others studies (A1meida, et al., 1994) they- did not change their muscle and cinematic strategy of balance after training. it¿s seems that the strategy that they use is an adaptive response to deficits on postural control If this is an adaptive response the Physical Therapist should try changing these strategy? Our study supports the idea that the rehabilitation should emphasize the motor function and not the movement patter However, before embarking in a new therapeutic tractate; new studies are need to show if the adaptive response used by the individuals with Down syndrome balance on seesaw can be changed 'without any detriment of their ability to balance on seesaw Mestrado Fisiologia Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Jorg Kobarg Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A infecção crônica pelo vírus da hepatite B (HBV) é uma das causas do desenvolvimento do câncer de fígado. O genoma do HBV codifica a onco-proteína HBx, uma proteína multi-funcional de 17 kDa que possui 10 resíduos de cisteína, e que está relacionada com a indução do câncer de fígado em camundongos transgênicos para HBx. Apesar de não ter uma função definida, sabe-se que a proteína HBx é um potente trans-ativador transcricional, ativando a transcrição de muitos promotores virais e celulares através de interações proteína-proteína, uma vez que HBx não interage diretamente com o DNA de fita dupla. Desta forma, HBx pode afetar a replicação e proliferação virais, e interferir nos processos celulares de apoptose e carcinogênese. Neste trabalho, a proteína HBx foi expressa em E. coli, em fusão com a proteína GST ou com a cauda de poli-histidina, e utilizada em ensaios funcionais e estruturais. Através de ensaios de retardamento da mobilidade eletroforética e UV cross-linking, observou-se que a proteína HBx possui uma afinidade maior pelos oligonucleotídeos de RNA ricos em bases "A", "V" e "AV", com tamanho superior a 21-mer, e que os resíduos de cisteína não interferiram na ligação da HBx com o oligonucleotídeo de RNA AV-38. A ausência dos resíduos de eisteína da proteína HBx também não interferiu na ativação do promotor alvo para a proteína p53, em sistema de mono-híbrido em levedura, nem tampouco na interação in vitro da HBx com a proteína humana p53, o que foi confirmado através de um ensaio de co-precipitação. Em cultura de células HeLa, a proteína HBx causou um aumento do crescimento celular e uma leve uma estabilização dos mRNAs dos proto-oncogenes c-fos e c-myc, como mostraram os ensaios de cinética de degradação de mRNAs, e esta estabilização poderia contribuir para o fenótipo transformador da onco-proteína HBx. Os experimentos de dicroísmo circular e de fluorescência mostraram que a proteína HBx encontrava-se parcialmente estruturada em solução aquosa, mas apresentou uma tendência à estruturação sob determinadas condições experimentais, o que poderia ser uma conseqüência de uma provável flexibilidade conformacional inerente à proteína HBx. Vma estrutura flexível poderia explicar as interações observadas entre a HBx e uma variedade de proteínas celulares e ácidos nucléicos de fita simples, de modo que a proteína HBx poderia interferir nos processos de sinalização, transcrição, apoptose e nos mecanismos de reparo de DNA, que levariam ao desenvolvimento do câncer de fígado Abstract: Chronic infection of the hepatitis B virus (HBV) is one of the causes leading to liver cancer. The HBV genome encodes the 17 kDa onco-protein HBx, a multi-functional protein that contains 10 cysteine residues and is related to induce liver cancer in transgenic mice. The exact function of HBx is still unknown. However, it has been shown that HBx is a potent trans-activator, which activates transcription of many cellular and viral promoters indirecdy through protein-protein interactions, although it does not bind to double-stranded DNA direcdy. Besides, the HBx protein can affect viral replication and proliferation, and it interferes with cellular apoptosis and carcinogenesis. In this work, the recombinant HBx protein was expressed in E. coli as a GST or 6xHis fusion protein, and used in functional and structural assays. By Electrophoretic Mobility Shift Assay and UV cross-linking assays, it was observed that the HBx protein was able to bind to the "A", "V" and "AV" rich RNA oligonucleotides, and that the cysteine residues of the HBx protein were not required for its binding to the AV-rich RNA oligonucleotide (AV-38). The lack of cysteine residues in the HBx protein did not interfere with the pS3 promoter activation in the yeast one-hybrid system, or neither in the in vitro interaction through a co-precipitation assay of the HBx and human p53 protein. In HeLa cells, the HBx protein increased the cellular growth and caused a slight c-fos and c-myc mRNA stabilization. This mRNA stabilization could contribute for the transforming character of the onco-protein HBx. Both the circular dichroism and fluorescence spectroscopic assays had shown that the HBx protein was partially structured in aqueous solution, but the protein presented a propensity to gain secondary structure under specific experimental conditions. The HBx inherent conformational flexibility might explain its interaction with a wide array of cellular proteins and single-stranded nucleic acids, in a way that the HBx protein interferes with signaling cellular processes, modulates transcription, apoptosis and DNA repair, and contributes to the development of the liver cancer Doutorado Bioquímica Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Armando Freitas da Rocha Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Não informado Abstract: Not informed. Mestrado Fisiologia e Biofísica Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: William J. da Silva Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Um estudo comparativo envolvendo diferentes mutantes de endosperma de milho e seus correspondentes endospermas normais, foi realizado para analisar o efeito de genes do endosperma na patogenicidade do F. moniliformee. . Os mutantes estudados foram: Shrunken (sh), shrunken-2 (sh2), floury (fl) brittle (bt), brittle-2 (bt2) waxy (wx), dull (du), sugary (su),sugary-2 (su2), apaque-2 (o2) e amylose extender (ae). Os efeitos desses genes foram ava1iados em linhagens homozigotas, obtidas de várias popu1ações sintéticas de milho. Os genes mutantes de endosperma foram introduzidos nessas populações através de um esquema de retrocruzamento. Numa primeira fase analisou-se a ocorrência de variantes em diferentes culturas do fungo, isoladas de sementes de milho. Nesse estudo, com 197 culturas, ficou evidenciado que o patógeno ocorre na natureza sob a forma de tipos diferentes, onde predominou o tipo roxo com freqüência de 55%. É provável que esses tipos ocorram na natureza sob a forma de heterocários. Realizou-se um ensaio de campo com delineamento em blocos ao acaso com 4 repetições onde as onze linhagens portadoras dos genes mutantes de endosperma foram autofecundadas,e em seguida suas espigas inoculadas com F. moniliforme . As sementes colhidas nesse ensaio foram utilizadas para os estudos do presente trabalho Abstract: A comparative study involving 11 different endosperm mutants of maize and their correspondent normal counterparts was carried out to study the effect of endosperm mutant genes on pathogenicity of F. moniliforme. The following mutants were studied: Shrunken (sh), shrunken-2 (sh2), floury (fl), brittle (bt) brittle-2 (bt2), waxy (wx), dull (du), sugary (su), sugary-2 (su2), opaque-2 (o2) and amylose extender (ae). Those genes were introduced in several synthetic varieties through a backcross procedure and were studied in S5 inbred lines derived from them. In a preliminary step it was studied the presence of variants among cultures of F. moniliforme isolated from corn seeds. It was found that the pathogen occur in nature with different types being predominant the purple type. Apparently the types occur in nature by heterocaryosis. A randomized complete block experiment involving 11 inbred lines segregating only for the endosperm gene, with 5 replications, was planted at the experimental field. At flowering the 10 m long plots were selfed and the segregating ears were artificially inoculated with spores from a purple colony of F. moniliforme. The study of seed pathogenicity was carried out by the isolation of the fungus from 11 endosperm and their normal kernels of the segregating ears. Mutants and their normal kernels of the segregating ears. Two tests were made. One, with deep-freezing treatment at -19ºC and the other with intact seeds Doutorado Biologia Vegetal Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Marta Helena Krieger Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O óxido nítrico (NO) é um multifuncional agente biológico que nas últimas décadas tem sido alvo de uma infinidade de estudos e constitui hoje um dos mais importantes mediadores de processos intra e extracelulares. Diversos estudos demonstram sua capacidade de prevenção da ativação e adesão plaquetária ou leucocitária e inibição da proliferação e migração de células musculares lisas vasculares (VSMCs), entretanto, em condições de baixa disponibilidade do NO esses processos são prejudicados. Atualmente há o grande interesse no desenvolvimento de compostos capazes de liberar NO de forma modulada e estável, e, nesse sentido, os complexos nitrosilos de rutênio têm se destacado por suas características excepcionais. É amplamente reconhecido que a modulação fenotípica de VSMCs tem papel crítico na progressão de diversas doenças vasculares proeminentes. Sabe-se que o fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF-BB) é um dos principais estimulantes desse processo. Este estudo se propôs a caracterizar os efeitos inibitórios do complexo de rutênio trans-[Ru(NO)Cl(cyclam)](PF6)2, nomeado Ru(cyclam)NO, na modulação fenotípica, resposta proliferativa e migratória de VSMCs induzidas por PDGF-BB. VSMCs foram obtidas por técnica de cultura primária. A citotoxicidade do complexo, na faixa de concentração de 100 ?M a 1500 ?M, foi determinada em ensaios de redução do MTT e incorporação neutral red (NR), e comparadas a do nitroprussiato de sódio (SNP). A concentração 100 ?M foi definida para os demais protocolos experimentais. Western blotting, ensaios transwell e wound healing, e incorporação de timidina triciada foram utilizados para determinação da modulação fenotípica, migração e proliferação celular, respectivamente, e níveis de nitrato no meio foram determinados por quimiluminescência para avaliação do perfil de liberação de NO. O complexo demonstrou baixa citotoxicidade, mesmo na maior concentração e após 48 horas de exposição, reduzindo ao máximo em 30% a porcentagem de células viáveis em ambos os ensaios, demonstrando ser menos tóxico que o SNP. Níveis de nitrato no meio atigiram a concentração máxima após 30 minutos (11 ?M ± 4,8), de maneira mais lenta em relação ao SNP, cuja concentração máxima foi após 5 minutos (13 ?M ± 3,7). A proliferação das VSMCs induzida por PDGF-BB foi inibida, reduzindo à metade a radioatividade incorporada, bem como a expressão do marcador de proliferação PCNA. Observou-se redução de 45% na migração induzida por PDGF-BB nos ensaios transwell, e no wound-healing, embora qualitativo, a redução é notável. A modulação fenotípica da VSMC foi observada pela redução em 60% da expressão da proteína alfa-actina, característica do fenótipo maduro, e foi quase totalmente prevenida pelo tratamento com o complexo. Tal prevenção pode ser mediada pelo fator de transcrição ELK-1, que favorece a expressão de genes de diferenciação, e cuja fosforilação foi estimulada pelo PDGF-BB, porém inibida em quase 50% pelo pré-tratamento com Ru(cyclam)NO. As respostas observadas nos tratamentos com Ru(cyclam)NO foram promissoras, e, embora seu mecanismo de ação x ainda não esteja completamente esclarecido, este complexo demonstrou atividade biológica singular, e sua aplicação em condições clínicas onde há descontrole de processos de proliferação e migração de VSMCs, como a reestenose, apresenta-se como uma proposta interessante Abstract: Nitric oxide (NO) is a multifuctional biological agent that in the recent decades has been the subject of a plethora of studies and today is one of the most important intracellular and extracellular processes mediators. Several studies have demonstrated its ability to prevent leukocyte or platelet adhesion and activation, and inhibition of vascular smooth muscle cells (VSMCs) proliferation and migration. However, low availability of NO conditions determines impairement of these processes. There is a keen interest in the development of compounds capable of releasing NO modulated so stable, and the nitrosyl ruthenium complexes have gained prominence for its exceptional features. It is widely recognized that the phenotypic modulation of VSMCs, and its uncontrolled proliferation and migration, plays a critical role in the progression of several prominent vascular diseases. It is known that the platelet-derived growth factor (PDGF) is a primary stimulant of the process. This study aimed to determine the inhibitory effects of the ruthenium complex NO donor trans-[Ru(NO)Cl(cyclam)](PF6)2, named Ru(cyclam)NO, in the phenotypic switching, on migratory and proliferative responses of VSMCs induced by PDGF-BB, and its biological response. VSMCs were obtained from primary culture methodology. The complex cytotoxicity were determined by MTT reduction and incorporation of neutral red (NR) assays, in the range of concentration from 100 ?M to 1500 ?M, and compared to sodium nitroprusside (SNP). For the following experimental protocols the concentration of the 100 ?M was set. Western blotting, transwell and wound healing assays, and incorporation of tritiated thymidine were used for determination of phenotypic switching, cell migration and proliferation, respectively. Evaluation of the NO profile release was determined as nitrate levels in the culture medium by chemiluminescence. The complex Ru(cyclam)NO showed low cytotoxicity even at the highest concentration evaluated and after 48 hours of exposition, reducing only 30% the percentage of viable cells in both trials, showing be less toxic than the SNP. Medium nitrate levels exibhited the highest concentration after 30 min (11 ?M ± 4.8), slower when compared to SNP, which reached the maximum concentration after 5 minutes (13 ?M ± 3.7). The proliferation of VSMCs induced by PDGF-BB was inhibited by half of the radioactivity incorporated counting, as well as the reduction on the expression of the proliferation marker PCNA. Observed a reduction by 45% in the migration induced by PDGF-BB determined in transwell assays, and on the wound-healing, although a qualitative result, the reduction of migration induced by PDGF-BB. The 60% reduction by PDGF-BB treatment of the contractile protein expression ?-SMA, characteristic of mature phenotype, revealed the modulation of VSMCs phenotype, and it was almost completely prevented by treatment with the complex. Such prevention was associated with inhibition by almost 50% of phosphorylation of the transcription factor ELK-1 stimulated by PDGF-BB. The responses determined with complex treatments revealed promising for future development of cardiovascular devices. Although its xii mechanism of action is not completely understood, this complex showed singular biological activity, and its application in some clinical conditions where there is uncontrolled proliferation and migration of VSMCs presents as a substancial proposal Mestrado Fisiologia Mestra em Biologia Funcional e Molecular

Orientador : Regina Celia Spadari-Bratfisch Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Considerando que tecidos isolados de ratos submetidos a estresse apresentam alterações de sensibilidade às catecolaminas, os objetivos deste trabalho foram verificar se tecidos isolados de cobaias submetidas aos mesmos protocolos experimentais também apresentam alterações similares, levando-se em conta que a proporção de subtipos de adrenoceptores difere entre átrios direitos das duas espécies. Nossos resultados mostraram que o estresse por natação ou por choque nas patas induziu alterações na sensibilidade aos efeitos cronotrópicos das catecolaminas, cujas características dependem da intensidade do agente estressor. Átrios direitos de cobaias e de ratos submetidos a estresse por natação apresentaram supersensibilidade à isoprenalina, o que poderia ser causado por redução na captação extraneuronal do agonista. No entanto, cobaias mostraram subsensibilidade à noradrenalina, após uma sessão de natação, o que só ocorre em ratos após a terceira sessão. Nós sugerimos que os mecanismos envolvidos neste processo poderiam ser similares àqueles descritos em ratos, ou seja, diminuição da resposta mediada por adrenoceptores do subtipo b1 e/ou aumento da eficiência da captação neuronal do agonista. Estresse por choques nas patas determinou alterações semelhantes em átrios direitos de ratos e de cobaias, com supersensibilidade à isoprenalina e subsensibilidade à noradrenalina, sugerindo dessensibilização dos adrenoceptores do subtipo b1, acompanhado de aumento da participação do subtipo b2 na resposta. A análise computacional dos dados e o uso de agonista seletivo para o subtipo b2 de adrenoceptores não confirmaram esta hipótese Abstract: Considering that isolated tissues of stressed rats show alterations on sensitivity to catecholamines, the objectives of this work was to verify whether isolated tissues from guinea-pigs submitted to the same experimental protocols also show similar alterations. Our results show that the swimming or footshock stress induce sensitivity alterations of the chronotropic response to catecholamines, which features depend on the intensity of the stressor agent. Right atria from guinea-pigs and rats submitted to swimming stress shows supersensitivity to isoproterenol, probably due to a reduction of the extraneuronal uptake of the agonist. However, atria from guinea pigs show subsensitivity to norepinephrine after one swimming session, whereas atria from rats only shows subsensitivity to noradrenaline after the third swimming session. We suggest that the mechanisms involved in this process could be similar to those described in rats, i.e., increase in the agonist neuronal uptake efficiency. Footshock stress induced similar alterations in rats and guinea-pigs right atria; supersensitivity to isoproterenol and subsensitivity to norepinephrine, suggesting b1-adrenoceptor desensitization and increase in the b2-adrenoceptor participation in the response. The analysis of data performed by Graph Pad Prism on the response to TA2005 did not confirm this hypothesis Mestrado Fisiologia Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Benedito de Oliveira Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: De paciente (JJO) da Faculdade de Medicina da Unicamp com quadro clínico característico de mieloma múltiplo foi obtido plasma com alta concentração de paraproteina M. A presença uma banda compacta indicativa de homogeneidade molecular característica de plasma patológico mielomatoso e de mobilidade eletroforetica tipo gamaglobulina lenta, foi detectada através de análise eletroforetica seguida de densitometria. O fracionamento do plasma JJO em DEAE celulose, levou a obtenção da fração A, cujo controle eletroforético evidenciou a purificação do componente M mielomatoso, livre de contaminações de outras proteinas plasmáticas. A fração A foi tipificada sorologicamente como uma imunoglobulina IgG do tipo IgGl com cadeias leves do isotipo lambda. O grau de pureza da proteina (JJO) (fração A) foi confirmado em eletroforese em gel de poliacrilamida na presença de SDS. A amostra, analisada na forma reduzida, mostrou a presença de bandas eletroforéticas com peso molecular em torno de 50000 e 25000 daltons em relação aos marcadores e que correspondem as cadeias pesada (H) e leve (L) respectivamente. A proteina M(JJO) foi caracterizada quimicamente como uma imunoglobulina IgGl com cadeias leves do isotipo lambda,através de autoradiografia da eletroforese em pH 3.5 do digesto péptico-tríptico da proteina JJO,reduzida e carboximetilada.Deste tratamento químico foram obtidas as bandas radioativas Jl, J2 e J3 de mobilidade eletroforética dos peptideos H-L, H-H e L respectivamente, e que caracterizam o padrão IgGl lambda Abstract: Plasma from a patient (JJO) with multiple myeloma showing high levels of M paraprotein was obtained from the faculdade de Medicina, Universidade Estadual de Campinas.The results of electrophoretic analysis followed by densitometry showed a compact band indicative of molecular homogeneity characteristic of patient presenting monoclonal gamopathy. Fraction A containing myeloma protein was isolated from the pathologyc serum JJO by ion exchange chomatografy in DEAE celulose. Electrophoretic control of this fraction indicates the purification of the M component, without contamination with other plasma proteins. Fraction A was typed serologicaly as an IgGl immunoglobulin with lambda light chains. The purity of JJO protein (fraction A) was confirmed in SDS-polyacrylamide gel electroforesis. The reduced JJO protein showed two bands of 50 and 25K corresponding to heavy and light chains respectively. The M (JJO) paraprotein in was chemically typed as an IgGl protein with lambda light chains by autoradiography of high voltage electrophoresis of a pepsin-trypsin digests of myeloma protein partially reduced and alkylated with iodoacetate-C14. This material produces a consistent autoradiographic pattern. Which shows radioactives bands Jl, J2 andJ3 of electrophoretic mobility characteristic the H-L, H-H and L. peptides respectively Doutorado Biologia Celular Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Angelo Luis Cortelazzo Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: No presente trabalho, foram utilizadas sementes de Eugenia uniflora (pitanga) e Campomanesia xanthocarpa (guabiroba), coletadas em matas nativas do município de Carazinho - RS, e armazenadas em vidros a 4°C. As sementes quiescentes foram colocadas para germinar e caracterizadas citoquímica e bioquimicamente quanto as suas principais reservas. A cada quinze dias foram realizados novos testes de germinação, com respectivo processamento do material para análises microscópicas e dosagens das reservas. Sementes de E. uniflora permaneceram viáveis durante todo o período analisado (105 dias), mantendo índices de germinação superiores a 70%. C. xanthocarpa apresentou-se viável apenas nos primeiros quinze dias, indicando característica fortemente recalcitrante. As duas espécies apresentaram-se com mais de 40% de umidade em seus frutos maduros. Para a pitanga elas têm massa 3 vezes maior do que para guabiroba e tem como principal reserva o amido (36%), seguido de proteínas (20%). Nesta última ocorre praticamente o inverso, com proteínas representando mais de 37% da matéria seca e quantidades consideráveis de carboidratos (18%). Os resultados indicaram ainda um elevado teor lipídico nas sementes de guabiroba. Em nível celular, as principais alterações observadas em guabiroba durante a perda de viabilidade foram devidas à fusão do material protéico e aumento do poder redutor do material fenólico presente nas células cotiledonares. Em pitanga, apesar de não ter havido perda de viabilidade, observou-se uma diminuição significativa dos grãos de amido e maior reatividade do material protéico ao longo do tempo de estocagem decorrente de um aumento na disponibilidade de radicais amina. Verificou-se ainda um aumento significativo no conteúdo de açúcares livres e solúveis, provavelmente decorrente da hidrólise do amido presente nas células das sementes de pitanga. Em termos comparativos, além das características apontadas, foi observada uma maior disponibilidade de material péctico nas paredes celulares das sementes de guabiroba Abstract: Seeds of Eugenia uniflora (pitanga) and Campomanesia xanthocarpa (guabiroba) were colected in native forest of district Carazinho - RS, and stored in glass at 4°C. Germination tests of quiescent seeds were carried out every 15 days. The viability of E. uniflora continued for the investigation period of 105 days, with germination index above 70%, while in C. xanthocarpa the viability was 15 days, characteristic of recalcitrant seeds. Moisture content of seeds was mainteinad around 40% in mature fruits. The main storage component of pitanga is starch (36%). Another important reserve is protein (20%), while guabiroba presents more than 37% of their fresh weight in proteins and considerable quantity of carbohydrates (18%). These seeds contain high lipid content. The cellular alterations of guabiroba during the loss of viability were the fusion of protein material and increase the reductibility of phenolic material present in cotyledon cells. Pitanga with continued viability, showed a significant reduction of starch grains and increase of protein reativity during storage.An increase in free and soluble sugar was detected, as a result of the starch hydrolysis of pitanga cells. Wall cells of guabiroba seeds showed more disponibility of pectic material in pitanga Mestrado Biologia Celular Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Jancarlo Ferreira Gomes, Alexandre Xavier Falcão Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: As parasitoses intestinais são altamente prevalentes no mundo, estando entre as maiores causadoras de doenças e óbitos em seres humanos. Atualmente, o diagnóstico laboratorial destas parasitoses é realizado por meio de procedimentos técnicos manuais, desenvolvidos na sua grande maioria há décadas, o que justifica a aplicabilidade de técnicas mais sensíveis e práticas para esta finalidade, visando obter resultados eficientes, especialmente em programas governamentais direcionados à Saúde Pública. Sendo assim, o objetivo do projeto foi de avaliar e validar uma nova técnica parasitológica, denominada TF-Test Modified, em comparação com três técnicas parasitológicas convencionais consagradas pela literatura: TF-Test Conventional; Rugai, Mattos e Brisola; e Kato-Katz/Helm-Test. As etapas do trabalho consistiram em realizar coleta de material fecal de 457 indivíduos localizados em regiões endêmicas para parasitoses no município de Campinas, SP; no processamento laboratorial de 1.828 exames; no diagnóstico de 14 espécies parasitárias; e na análise estatística qualitativa de resultados de maneira abrangente. Dentre as espécies parasitárias encontradas, helmintos e protozoários intestinais foram detectados em 42,23% de indivíduos pela técnica de TF-Test Modified, ante 36,76% por TF-Test Conventional, 5,03% por Kato-Katz/Helm-Test, e 4,16% por Rugai, Mattos e Brisola. Destes casos, 54,40% de infecção simples dos indivíduos demonstrou serem portadores de monoparasitismo. A nova técnica parasitológica de TF-Test Modified, quando comparada com as demais técnicas, apresentou alto valor de infecção, como exemplo para dupla, tripla e múltipla, de maneira a perfazer um total de 98,37% de infecções. Ademais, a nova técnica apresentou índice Kappa com grau de concordância Quase Perfeito em todos os parâmetros avaliados com estimativa de 95% (P

Orientador : Marcia Regina Braga Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Mestrado

Orientador: Celso Eduardo Benedetti Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A forma mais agressiva de cancro cítrico, cancrose A, é causada pela bactéria Xanthomonas axonopodis pv citri (Xac), que ataca qualquer variedade ou espécie de citros. Além de Xac, Xanthomonas axonopodis pv aurantifolii (Xaa) causa um tipo mais leve da doença, cancrose C, restrita ao limão Galego (Citrus aurantifolii). Na laranja Pêra (Citrus sinensis), Xaa provoca uma resposta de defesa que impede o desenvolvimento dos sintomas do cancro incluindo a ruptura da epiderme que é fundamental à disseminação da bactéria. Neste trabalho, abordamos a patogenicidade diferencial entre Xac e Xaa na laranja Pêra para estudar a expressão gênica na planta associada ao desenvolvimento dos sintomas (hipertrofia e hiperplasia celular) e à resposta de defesa. O projeto apresenta a identificação e caracterização de genes expressos diferencialmente em resposta à infecção por Xac e Xaa responsáveis pelo cancro cítrico. A partir de três estratégias independentes (Display diferencial de PCR, Hibridação subtrativa suprimida e micro arranjos de DNA) detalhou-se o perfil transcricional de folhas de laranja infiltradas com Xaa, Xac ou água como controle. Mais de 120 genes candidatos foram validados através de PCR quantitativo em tempo real ou hibridação Northern. Os genes diferencialmente expressos a 6 ou 48 hs após da infecção (hai) aparecem agrupados em categorias funcionais como: remodelamento de parede celular, divisão e expansão celular, tráfego de vesículas, resposta de defesa, metabolismo de nitrogênio e carbono e sinalização de hormônios como auxina, giberelina e etileno. Inicialmente, tanto Xaa quanto Xac induzem respostas de defesa associadas com ataque de patógenos incluindo a produção de espécies reativas de oxigênio e lignificação da parede celular. Notavelmente, a mudança no perfil transcricional mostra que Xac suprime as defesas da planta entre 6 e 48 hai, ao mesmo tempo em que induz genes relacionados com o metabolismo da parede celular, divisão celular e trafego de vesículas, entre outros. A conseqüência dessa manipulação transcricional no hospedeiro por parte de Xac dá origem à um estado fisiológico típico de expansão celular (hipertrofia). O inibidor de trafego de vesículas, Brefeldina A, atrasou o desenvolvimento dos sintomas do cancro, indicando que essa atividade está mais relacionada com hipertrofia celular do que com respostas de defesa. No perfil transcricional de folhas infectadas com Xaa destaca-se a ativação de uma via de sinalização por proteína quinase ativada por patógeno, envolvendo também fatores de transcrição do tipo WRKY, assim como elementos de resposta a etileno. Tanto Xac quanto Xaa parecem modular a transcrição de genes relacionados com sinalização e transporte de auxinas e biosíntese de giberelina. O tratamento de folhas de laranja com, ácido naftalenoacético (NAA) e ácido giberélico (GA3) demonstrou que esses hormônios induzem a expressão de genes de remodelamento de parede celular, biosíntese de giberelina e sinalização de auxina. Além disso, o inibidor de biosíntese de giberelina (Chlorocoline Chloride) diminuiu significativamente a expressão de genes induzidos por NAA sugerindo que exista uma regulação cruzada entre auxina e giberelina que controla a expressão de genes relacionados com divisão e expansão celular em citros. Finalmente, duas regiões promotoras de genes que codificam proteínas relacionadas com patogenicidade (PR-1 e PR-5) foram isoladas e caracterizadas. Esses genes são fortemente induzidos por Xaa e Xac em 6 e 48 hai. Substancialmente, existem elementos similares com o "upa box" nas regiões promotoras de PR-1 e PR-5. Mediante experimentos de Electrophoretic Mobility Shift Assays (EMSA) demonstrou-se que a proteína PthA4 de Xanthomonas é capaz de ligar-se no "upa box" presente nos promotores de PR-1 e PR-5. Tanto o promotor de PR-1 quanto o de PR-5 dirigem a expressão transitória do gene repórter uidA em N. benthamiana mediante Agro infiltração. Abstract: The most aggressive form of the citrus canker disease is caused by the bacteria Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac), which can infect all commercial varieties or species of citrus. In addition to Xac, Xanthomonas axonopodis pv. aurantifolii (Xaa) causes a weaker form of the disease, known as cancrose C, which is restricted to Mexican Lime (Citrus aurantifolii). In sweet orange (Citrus sinensis), Xaa triggers a defense response that halts the canker-symptoms development including the epidermal rupture, which is essential for bacterial dissemination. In this work, we approached the differential pathogenicity existing between Xac and Xaa in order to survey the host gene expression associated with symptoms development (cellular hypertrophy and hyperplasia) and defense response in sweet orange. The project presents the identification and initial characterization of differentially expressed genes in response to the infection with the citrus canker pathogens, Xac and Xaa. Three independent strategies were conducted in order to have a detailed transcriptional profiling of orange leaves infected with Xaa, Xac or water as mock control (Differential Display PCR, Suppression Subtractive Hybridization and GeneChip Microarrays). More than 120 candidate genes were validated through quantitative real time PCR or Northern blot. The differentially expressed genes at 6 or 48 hours after infection (hai) were grouped into functional categories: cell-wall remodeling, cell division and expansion, vesicle trafficking, carbon and nitrogen metabolism or hormone signaling, auxin, gibberellin and ethylene. Initially, both Xaa and Xac elicit a defense response associated with pathogen attack that includes the production of reactive oxygen species (ROS) and cell-wall lignification. Notably, the changes in the transcriptional profiles show that Xac suppresses the plant defenses between 6 and 48 hai and at the same time it induces genes related to the cell-wall metabolism, cell division and vesicle trafficking among others. The consequence of this host manipulation by Xac originates a physiological state very similar to that of cell expansion (hypertrophy). The vesicle trafficking inhibitor, Brefeldin A, delayed the development of canker symptoms indicating that this activity is more related to the cellular enlargement than to the defense responses. The transcriptional profile of Xaa-infiltrated leaves highlights the activation of amitogen-activated protein kinase (MAPK) signaling pathway related to pathogen attack with the involvement of other components of defense responses like WRKY-transcriptional factors and ethylene-response elements. Both Xac and Xaa appear to modulate the transcription of genes related to auxin signaling and transport and gibberellin biosynthesis. Treatments of orange leaves with 1- naphthylphthalamic acid (NAA) . Resumo: A forma mais agressiva de cancro cítrico, cancrose A, é causada pela bactéria Xanthomonas axonopodis pv citri (Xac), que ataca qualquer variedade ou espécie de citros. Além de Xac, Xanthomonas axonopodis pv aurantifolii (Xaa) causa um tipo mais leve da doença, cancrose C, restrita ao limão Galego (Citrus aurantifolii). Na laranja Pêra (Citrus sinensis), Xaa provoca uma resposta de defesa que impede o desenvolvimento dos sintomas do cancro incluindo a ruptura da epiderme que é fundamental à disseminação da bactéria. Neste trabalho, abordamos a patogenicidade diferencial entre Xac e Xaa na laranja Pêra para estudar a expressão gênica na planta associada ao desenvolvimento dos sintomas (hipertrofia e hiperplasia celular) e à resposta de defesa. O projeto apresenta a identificação e caracterização de genes expressos diferencialmente em resposta à infecção por Xac e Xaa responsáveis pelo cancro cítrico. A partir de três estratégias independentes (Display diferencial de PCR, Hibridação subtrativa suprimida e micro arranjos de DNA) detalhou-se o perfil transcricional de folhas de laranja infiltradas com Xaa, Xac ou água como controle. Mais de 120 genes candidatos foram validados através de PCR quantitativo em tempo real ou hibridação Northern. Os genes diferencialmente expressos a 6 ou 48 hs após da infecção (hai) aparecem agrupados em categorias funcionais como: remodelamento de parede celular, divisão e expansão celular, tráfego de vesículas, resposta de defesa, metabolismo de nitrogênio e carbono e sinalização de hormônios como auxina, giberelina e etileno. Inicialmente, tanto Xaa quanto Xac induzem respostas de defesa associadas com ataque de patógenos incluindo a produção de espécies reativas de oxigênio e lignificação da parede celular. Notavelmente, a mudança no perfil transcricional mostra que Xac suprime as defesas da planta entre 6 e 48 hai, ao mesmo tempo em que induz genes relacionados com o metabolismo da parede celular, divisão celular e trafego de vesículas, entre outros. A conseqüência dessa manipulação transcricional no hospedeiro por parte de Xac dá origem à um estado fisiológico típico de^expansão celular (hipertrofia). O inibidor de trafego de vesículas, Brefeldina A, atrasou o desenvolvimento dos sintomas do cancro, indicando que essa atividade está mais relacionada com hipertrofia celular do que com respostas de defesa.No perfil transcricional de folhas infectadas com Xaa destaca-se a ativação de uma via de sinalização por proteína quinase ativada por patógeno, envolvendo também fatores de transcrição do tipo WRKY, assim como elementos de resposta a etileno. Tanto Xac quanto Xaa parecem modular a transcrição de genes relacionados com sinalização e transporte de auxinas e biosíntese de giberelina. O tratamento de folhas de laranja com, ácido naftalenoacético (NAA) e ácido giberélico (GA3) demonstrou que esses hormônios induzem a expressão de genes de remodelamento de parede celular, biosíntese de giberelina e sinalização de auxína. Além disso, o inibidor de biosíntese de giberelina (Chlorocoline Chloridè) diminuiu significativamente a expressão de genes induzidos por NAA sugerindo que exista uma regulação cruzada entre auxina e giberelina que controla a expressão de genes relacionados com divisão e expansão celular em citros. Finalmente, duas regiões promotoras de genes que codificam proteínas relacionadas com patogenicidade (PR-1 e PR-5) foram isoladas e caracterizadas. Esses genes são fortemente induzidos por Xaa e Xac em 6 e 48 hai. Substancialmente, existem elementos similares com o "upa box" nas regiões promotoras de PR-1 e PR-5. Mediante experimentos de Electrophoretic Mobility Shift Assays (EMSA) demonstrou-se que a proteína PthA4 de Xanthomonas é capaz de ligar-se no "upa box" presente nos promotores de PR-1 e PR-5. Tanto o promotor de PR-1 quanto o de PR-5 dirigem a expressão transitória do gene repórter uidA em N. benthamiana mediante Agro infiltração Abstract: The most aggressive form of the citrus canker disease is caused by the bacteria Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac), which can infect all commercial varieties or species of citrus. In addition to Xac,Xanlhomonas axonopodis pv. aurantifolii (Xaa) causes a weaker form of the disease, known as cancrose C, which is restricted to Mexican Lime {Citrus aurantifolii). In sweet orange {Citrus sinensis), Xaa triggers a defense response that halts the canker-symptoms development including the epidermal rupture, which is essential for bacterial dissemination. In this work, we approached the differential pathogenicity existing between Xac and Xaa in order to survey the host gene expression associated with symptoms development (cellular hypertrophy and hyperplasia) and defense response in sweet orange. The project presents the identification and initial characterization of differentially expressed genes in response to the infection with the citrus canker pathogens, Xac and Xaa. Three independent strategies were conducted in order to have a detailed transcriptional profiling of orange leaves infected with Xaa, Xac or water as mock control (Differential Display PCR, Suppression Subtractive Hybridization and GeneChip Microarrays). More than 120 candidate genes were validated through quantitative real time PCR or Northern blot. The differentially expressed genes at 6 or 48 hours after infection (hai) were grouped into functional categories: cell-wall remodeling, cell division and expansion, vesicle trafficking, carbon and nitrogen metabolism or hormone signaling, auxin, gibberellin and ethylene. Initially, both Xaa and Xac elicit a defense response associated with pathogen attack that includes the production of reactive oxygen species (ROS) and cell-wall lignification. T Notably, the changes in the transcriptional profiles show that Xac suppresses the plant defenses between 6 and 48 hai and at the same time it induces genes related to the cell-wall metabolism, cell division and vesicle trafficking among others. The consequence of this host manipulation by Xac originates a physiological state very similar to that of cell expansion (hypertrophy). The vesicle trafficking inhibitor, Brefeldin A, delayed the development of canker symptoms indicating that this activity is more related to the cellular enlargement than to the defense responses. The transcriptional profile of Xaa-infiltrated leaves highlights the activation of a mitogen-activated protein kinase (MAPK) signaling pathway related to pathogen attack with the involvement of other components of defense responses like WRKY-transcriptional factors and ethylene-response elements. Both Xac and Xaa appear to modulate the transcription of genes related to auxin signaling and transport and gibberellin biosynthesis. Treatments of orange leaves with 1-naphthylphihalamic acid (NAA) e Gihherellic Acid (GKi) demonstrated that these hormones induce the expression of genes related to cell-wall remodeling, gibberellin biosynthesis and auxin signaling. Moreover, the gibberellin-biosynthesis inhibitor (Chlorocoline Chloride) decreased significantly the expression of auxin-induced genes suggesting a cross-talk regulation between auxin and gibberellin controlling the expression of citrus genes associated with cell division and expansion. Finally, two promoter regions of the pathogenesis related (PR) genes, PR-I and PR-5.2, were isolated and characterized. These genes are strongly up-regulated by Xaa and Xac at 6 or 48 hai. Substantially, there are "upd" box-like motifs in the promoter regions of both PR-I and PR-5.2. By means of Electrophoretic Mobility Shift Assays (EMSA) we have demonstrated that PthA4 from Xac is capable of binding the "upd" box-like regions found in PR-1 e PR-5 promoters. Furthermore, both of the isolated promoters (PR-1 and PR-5) address the transient expression of the reporter gene uidA in JV. bethamiana leaves through agro infiltration Doutorado Genética Vegetal e Melhoramento Doutor em Genética e Biologia Molecular

Orientador : William Jose da Silva Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Oito linhagens de milho, quatro tolerantes e quatro sensíveis ao alumínio, previamente selecionadas em solução nutritiva, foram utilizadas para o desenvolvimento de uma técnica para o desenvolvimento de uma técnica de cultura em areia, para discriminar genótipos que conferem tolerância de milho ao alumínio. O método foi estabelecido através da análise do crescimento da radícula, de plântulas cultivadas em potes plásticos contendo areia lavada de rio, irrigados com solução de 0 (zero), 15, 30, 45, 60, 75 ppm de Al. Os valores de pH obtidos com esses tratamentos foram 5,90, 5,65, 5,42, 4,97, e 4,80, respectivamente. Sete dias após o plantio, as plântulas foram coletadas e a toxidade do alumínio. Foi avaliada pelo comprimento da radícula. Os resultados indicam que o tratamento com solução de 45 ppm de alumínio, já foi suficiente para discriminar genótipos tolerantes dos sensíveis. Contudo, e sugerida a concentração de 75 ppm de Al, visto que as reduções no comprimento da radícula das plântulas sensíveis, causadas nesse tratamento, são significativamente maiores que aquelas observadas no tratamento com 45 ppm. Essa elevação no teor de alumínio da solução teste, entretanto, não provocou qualque redução no comprimento das radículas das plântulas tolerantes ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: Four alumínum ' tolerant and four aluminum ' sensitive maize inbred lines, previously selected in nutrient solution, were used as testers for the development of a sand culture technique , to screen Al ' tolerant genotypes. The method was adjusted through the study of seedling root growth in plastic pots with river sand irrigated with solution of 0 (Zero), 15, 30, 45, 60, and 75 ppm of Al. The correspondent pH values were respectively, 5,90, 5,65, 5,42, 5,05, 4,97 and 4,80. Aliminum toxicity was evaluated through its effects on radicle length, seven days after planting. Data indicated on radicle length, seven days after planting. Data indicated that the solution of 45 ppm of Al, is already sufficient to discriminate tolerant from sensitive genotypes in sand culture. It is suggested, however, that the screening be done with a 75 ppm solution of Al, since root length reductions of sensitive plants, were significantly higher than the ones found at 45 ppm. This increase in aluminium, however, did not cause any significant reduction in radicle length of tolerant plants. Sixty six inbred lines were screened using sand culture and 75 ppm solution of Al. The were screened using sand culture and 75 ppm solution of Al. The effect of Al was studied in seedling characteristics as radicle length., root dry weight, top dry weight, number of seminal roots and endosperm dry weight ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations Mestrado Mestre em Ciências Biológicas

Orientador : Luiz Augusto Magalhães Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: É escasso o conhecimento sobre a interação da esquistossomose com a subnutrição e a resposta imunológica. Decidimos avaliar alguns parâmetros desta interação no campo experimental, utilizando camundongos convencionais da raça C3H/HeJ infectados com 100 cercárias de linhagem BH do Schistosoma mansani. Os grupos experimentais receberam a dieta ad libitum e ficaram assim constituídos: animais tratados com dieta normoprotéica (20%) sem infecção; animais tratados com dieta normoprotéica (20%) infectados; animais tratados com dieta hipoprotéica (4%) sem infecção; animais tratados com dieta hipoprotéica (4%) infectados. Fundamentados nos diferentes tempos de infecção ou na idade dos camundongos, constituímos grupos de animais sensibilizados com hemácias de carneiro ou sensibilizados com 2-4-dinitroclorobenzeno (DNCB). Foram constituídos também grupos controles compatíveis. Os parâmetros selecionados para estudo foram: penetração de cercárias; comprimento dos esquistossomos na oitava semana de infecção; número de vermes machos, fêmeos e esquistossômulos recuperados do plexo portahepático; sobrevivência dos esquistossomos; número e tamanho de granulomas hepáticos; Distribuição de granulomas por área de corte histológico hepático; hepato-esplenomegalia; mortalidade do hospedeiro; quantificação de células do baço; capacidade funcional de células esplênicas formarem rosetas na resposta primária a hemácias de carneiro; capacidade funcional da células esplênicas formarem placas hemolíticas (lgM) na resposta primária a hemácias de carneiro; reposta de hipersensibilidade retardada frente a DNCB. Os resultados obtidos foram estatisticamente analisados pelo modelo linear multiplicativo (GLM) e os cálculos executados em computador VAX 11/780 com o "Statistical Analysis System" - SAS... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: Not informed. Doutorado Doutor em Parasitologia

Orientadores: Celso Eduardo Benedetti, Paulo Arruda Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Mestrado

Orientador: Regina Maura Bueno Franco Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Entre muitas doenças de veiculação hídrica, a criptosporidiose e a giardiose são de particular interesse para a Saúde Pública, porque oocistos de Cryptosporidium spp e cistos de Giardia spp. podem persistir por longos períodos no ambiente, sendo que estes dois protozoários patogênicos têm sido implicados como a causa de muitos surtos epidêmicos de gastroenterites nos últimos 25 anos.Em muitos desses surtos, o esgoto doméstico foi incriminado como a fonte de contaminação do manancial; os variados métodos de tratamento de esgoto não removem totalmente agentes patogênicos, evidenciando a necessidade de desinfecçãodo esgoto tratado antes do seu lançamento no corpo hídrico. Uma forma de tratamento de esgoto amplamente utilizada é o processo por Iodos ativados, onde a degradação da matéria orgânica é realizada por bactérias aeróbicas.Em função da resistência de Cryptosporidium spp e Giardia spp. Ao processode desinfecção por cloração, a radiação por luz ultravioleta (UV) têm sidoavaliada como um processo alternativo. Para avaliar a eficiência de remoção de oocistose cistos pelo processo de Iodo ativado e de um reator de luz UV em inativaroocistos e cistos em uma Estação de Tratamento de Esgoto (ETE) da cidadede Campinas, 3 tipos de amostras foram selecionados para o estudo: I) afluente (n=53), iii) efluente desinfetado por luz UV (n=38) e, iii) efluente sem desinfecção por luz UV (n=53). As amostras de afluente foram concentradas por centrífugo-concentraçãoe as amostras de efluente (desinfetadas ou não por luz UV) foram processadas por filtração em membrana de éster de celulose) e, a visualizaçãodos protozoários, feita pela reação de imunofluorescência direta, com anticorposmonoclonais. A avaliação do processo de desinfecção por luz UV foi realizada com experimento de infectividade animal, inoculando-se 14/ cistos camundongos da linhagem BALB!c nude. Cistos de Giardia spp foram mais freqüentes e em maior densidade nos três tipos de amostras. Oocistos de Cryptosporidiumspp. foram observados somente em 2 amostras de afluente e em apenas uma amostra de efluente desinfetado por luz UV. O tratamento de esgoto pelo processo de Iodo ativado reduziu 98,9 % dos cistos e 99,7 % dos oocistos. A administração intragástrica de cistos de Giardia spp. desinfetados ou não por luz UV em camundongos, resultou na liberação de cistos de Giardia spp., nas fezes e trofozoítos foram observados nas lâminas confeccionadas por aposição do intestino. Estes resultados indicam que a desinfecção por luz UV não foi completamente eficiente na inativação dos cistos de Giardia spp, no caso da ETE estudada Abstract: Among many water-borne diseases the cryptosporidiosis and giardiosis are of particular public health interest, because Cryptosporidium spp. oocysts and Giardia spp. cysts can persist for long periods in the environment, and both pathogenic protozoa have been implicated as the cause of many outbreaks of gastroenteritisin the last 25 years. In many of those outbreaks, the domestic sewer was incriminated as to source of contamination of the spring; they varied treatment sewage approaches do not remove entirely agent's pathogens, showing up the need of disinfection of the treated effluent before of their launching in the water body.A form of address of sewer broadly utilized is the trial by activated sludge whichway the degradation of the organic matter is carried out by aerobic bacteria and, in function of the resistance of Cryptosporidium spp and Giardia spp. to the chlorinedisinfection, the ultraviolet light (UV) has been evaluated like an alternative trial of disinfection. In order to evaluate the efficiency of cysts and oocysts removal by the activated sludge process, and by a UV reactor in inactivating cysts and oocystsin one Wastewater Treatment Plant (Wl/VTP)in Campinas, three sampling points were selected for study: i) influent (n=53),iii) treated effluent with UV disinfection (n=38) and iii) treated effluent without UV disinfection (n=53). The influent samples were concentrated by centrifugation and effluent samples (disinfectedwith UV light or not) were processed by cellulose esters membrane filtration, and protozoan visualization was analyzed by fluorescent monoclonal antibodytests. The investigation of disinfection potential by UV light was made with infectivityassay. Each mice of linage BALB/c nude were intragastrically inoculated a mean dosage 14 cysts. Giardia spp cysts prevailed with higher density in the three different sample types. Cryptosporidium spp. oocysts were observed in only 2 samples of influent and in just one sample of treated sewage with UV disinfection.The treatment by the activated sludge process promoted a reduction of 98.9% of cysts and 99.7 % of oocysts. Gastric intubation of Giardia spp. Cysts disinfected ar not by UV light to mice resulted in cysts released in feces and trophozoiteswere also observed toa in intestinal scrapings. The findings of this study indicate that disinfection by UV light was not completely efficient regarding the inactivationof Giardia spp cysts in the case of the Doutorado Doutor em Parasitologia

Orientador : Lucila Costallat Ricci Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Cepas de Escherichia coZi podem apresentar mecanismos e fatores de virulência diversos podendo causar no homem, principalmente, infecções intestinais. Desta forma, tendo-se como base os dados clínicos, expressão de mecanismos e de fatores de virulência, dados epidemiológicos, sorotipagem e análises moleculares, dentre outros, as cepas de E. coZi diarreiogênicas humanas podem ser classificadas em pelo menos sete grupos de enteropatogenicidade. Com relação ao grupo diarreiogênico representado pela E. coZi enterotoxigênica (ETEC), a identificação destes patógenos incluem a pesquisa das enterotoxinas STa e/ou LT e a expressão de fatores de colonização (FC). Estes últimos, também denominados de adesinas, permitem a colonização da bactéria à mucosa do intestino delgado, podendo variar morfológica e antigenicamente. Vários FC já foram identificados e caracterizados em cepas ETEC isoladas de diferentes regiões geográficas. Em trabalhos anteriores, a runbria PCF02 foi identificada, caracterizada e purificada a partir de 2 cepas ETEC LT+ pertencentes ao sorogrupo 02, isoladas no nosso meio. Na seqüência dos trabalhos, a partir da fimbria purificada, 9 hibridomas secretores de anticorpos monoclonais reativos com PCF02 foram obtidos, seus isotipos determinados e soluções ascíticas dos mesmos preparadas e tituladas em provas de Western blotting e ELISA. Após a padronização da prova de Inibição do ELISA, desenvolvida com MAbs dos isotipos IgA (4) e IgG2b (5) e pools dos mesmos, mais 5 amostras diarreiogênicas de E. coZi foram identificadas como sendo PCFO2+. Possível homologia (analogia) de epítopos com CFAIII foi verificada com estes MAbs, através de observações em imunomicroscopia. Neste trabalho, dando continuidade aos estudos relacionados ao PCFO2, procurou-se inicialmente reavaliar-se a metodologia de purificação e comprovar-se a Prova de Inibição do ELISA padronizada para a identificação desta fimbria, além de verificar-se possíveis homologias de epítopos entre PCF02 e outros FC, descritos como os mais freqüentemente identificados em cepas ETEC isoladas de fezes humanas. Com base nos resultados obtidos, comprovou-se que MAbs do isotipo IgA reconhecem epítopos distintos dos MAbs IgG2b, uma vez que estes últimos são capazes de reagirem com uma segunda subunidade de 15 kDa de PCF02, em provas de Westem blotting. Esta nova subunidade desta fímbria talvez deva corresponder ao "tip" da mesma. Pelos experimentos desenvolvidos verificou-se que apenas as amostras 312-2 e 312-3, dentre as cinco cepas identificadas inicialmente como PCF02+, expressavam realmente esta fímbria apresentando, também, a fração de 15kDa. Quanto às amostras D242 e D243, estas demonstraram pertencer ao complexo CF AIIV expressando CS5 e CS6 sendo que esta última subunidade apresenta epítopos idênticos aos expressos em PCF02. Quanto às amostras pertencentes ao sorogrupo 02, nenhuma reação inespecífica foi verificada. Portanto, a Prova de Inibição do ELISA desenvolvida com MAbs do isotipo IgG2b demonstrou ser adequada não só para a identificação das duas subunidades de PCF02 expressas em cepas ETEC, como também de amostras ETEC do complexo CF AIIV, que sempre expressam a subunidade CS6 Abstract: Some strains of Escherichia coZi may expresses differents mechanisms and virulences factors representing one of several highly adapted clones wich together have evolved the ability to cause a broad spectrum of human and animal diseases. With respect to enteric diarrheal diseases caused by E. coZi strains, seven categories of diarrheagenic E. coZi isolated from human stool cultures have been classified, based on clinical observations, mechanisms, virulence factors, epidemiologic studies, serotypes and molecular analysis. The group represented by enterotoxigenic E. coZi (ETEC) is identified by ST and or L T enterotoxins production and expression of colonization factors (CF). These adhesins allow bacteria colonization on the surface of the small bowel mucosa. Detection of CF in alI ETEC strains identified in the differents geographic regions of the world is impractical because of their great number and heterogeneity. Previous studies, a new putative colonization factor (PCF) was characterized in isolates of ETEC from human diarrheical stools at Ouro Preto (MG) Brazil, expressing just L T and belonging to sorogroup 02. This fimbriae was named PCF02, and with this purified antigen nine hybridomas secreting MAbs (monoclonal antibodies) against PCF02 were produced. For standardization of Inhibition ELISA Test to identify PCF02 in enterotoxigenics strains pools of these MAbs, belonging to isotypes 19A (4) and IgG2b (5), were tested using this immune reaction. After testes new five ETEC strains presented positive results to PCF02, alI belonging to serogroup 02. The aim of this study included improvement of the purification methods of this fimbriae and evidences confirming sensibility and specificity of Inhibition ELISA Test in PCF02 identification. The objectives propossed also included study of possible epitopes similarity between this fimbriae and the most frequently CF reported in epidemiological studies. Ours results confumed that Mabs belonging to 19A and IgG2b isotypes reacted with differents epitopes of PCFO2. With respect to IgG2b a new subunit or adhesin presenting about 15 kDa was identified in Westem blotting reactions in semi-purified proteic extraction of PCFO2 strain. Regarding to Inhibition ELISA Test developed with MAbs belonging to both isotypes datas confirmed expression of PCFO2 just by 312-2 and 312-3 isolates. Antigenic similarities was demonstrated between CS6 belonging to CF AIIV complex and PCFO2. Results demonstrated that D242 and D243 expresse CS5 and CS6. We conclude that the Inhibition ELISA Test developed with MAbs of isotype IgG2b were able to identify not just ETEC strains expressing PCFO2 but also expressing CS6, representing an important tool for the identification of these adhesins Mestrado Microbiologia Mestre em Genética e Biologia Molecular

Orientador : Benedicto de Campos Vidal Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: No presente trabalho, foram realizados vários métodos topoquímicos e bioquímicos de análise, com o intuito de caracterizar as sementes quiescentes e folhas cotiledonares de Canavalia ensiformis e C. gladiata. A principal reserva dessas sementes é o amido, que representa mais de 50% do peso seco das sementes. Outra reserva expressiva é,o material protéico, que atinge 27-30% do peso seco em C. ensiformis e 37-44% em C. gladiata. As sementes possuem pouco lipídio e destas substâncias destaca-se um conteúdo elevado de ácido esteárico. Os perfis eletroforéticos das duas espécies revelam uma grande semelhança do material protéico, com predominância de canavalina e concanavalina A, presentes nas sub-frações de vicilinas. Os extratos protéicos totais e as vicilinas, apresentam poder hemaglutinante, enquanto que nas leguminas e albuminas isso não ocorre. Esse poder só se manifesta nos testes "in vitro", pois "in situ" a ConA está agregada a outras proteínas dos corpos protéicos e/ou apresenta-se dissociada. As paredes celulares dos cotilédones apresentam grandes plasmodesmos, que poderiam contribuir para o transporte das reservas de célula a célula no decorrer da germinação. As folhas cotiledonares de C. ensiformis sofrem excisão no 21º dia de germinação, enquanto que as de C. gladiata, apenas no 28%, quando a planta já se encontra com mais de 1,7 m de altura.... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: The present research was carried out using various topochemical and histochemical methods of analysis, wlth the lntentlon of characterizing quiescent seeds and cotyIedons Canavalia ensiformis and C. gladiata. The principal stored material in these seeds is starch, which represents over 50% of their dry weight. Another important reserve is protein, which represents up to 27-30% of the dry weight of C. ensiformis and 37-44% of C. gladiata. The seeds contain very little lipid which consists mostly of stearic acid. The electrophoretic profiles of the two species are very similar, with predominance of canavalin and concanavalin A, present in the vicilin fractions. The total protein extracts and the vicilin are hemaglutinating, whiIe the legumins and albumins do not have this characteristic. .This hemaglutinating ability can only be verified "in vitro" since "In situ" the concanavalin A is elther associated with other proteins, and/or occurs dissociated. The cell walls of the cotyledons have large plasmodesms, which may contribute to the transport of reserve material from cell to cell durlng germlnation. The cotyledons of C. ensiformis falI on the 21 day of germlnation, while those of C. gladiata falI only on the 28 day when the plant has attained a helght of 1.7 m.... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations Doutorado Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Hermogenes de Freitas Leitão Filho Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A florística e a estrutura fitossociológica de uma área de cerrado da Estação Experimental de Luís Antônio (¿20 GRAUS¿40¿S e ¿47 GRAUS¿49¿ WG) foram estudadas através de coletas botânicas e do levantamento dos indivíduos com diâmetro ao nível do solo igual ou superior a 3 cm, utilizando 25 parcelas de 10 x 25 m, distribuídas sistematicamente. O método adotado foi eficiente, embora deixasse de registrar muitas espécies. O clima foi classificado como tropical quente e úmido, com estações chuvosa e seca alternadas. O balanço hídrico de THORNTHWAITE & MATHER (1955) revelou um défice de 56 mm, para 300 mm de armazenamento de água no solo, de abril a setembro. Verificou-se que o local estudado possui um clima mais ameno do que o da área nuclear de cerrado do Brasil Central. Observou-se o efeito da geada na vegetação, podendo atuar como fator limitante de ocorrência de algumas espécies em regiões mais frias. Classificou-se o solo como Latossolo Vermelho-Amarelo fase arenosa, distrófico, fortemente ácido e álico, tendo como fatores limitantes de cultivo a classificação Ssdeahk ¿ arenoso, seco, baixa capacidade de troca catiônica, saturação tóxica por 'AL POT 3+¿, acidez excessiva e deficiência de 'K POT. +¿. Os solos de Luís Antônio mostraram-se com maiores limitações de fertilidade que os do Triângulo Mineiro... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: The floristics and phytosociological structure of a cerrado área the ¿Estação Experimental de Luís Antônio¿ (¿21 GRAUS¿40¿S and ¿47 GRAUS¿49¿ WG) were studied using general botanical collections and a survey of all the individuals with a diameter at soil level equal to, or greater than, 3 cm in 25 regularly distributed 10 x 25 mm plots. The method used appeared to sample the vegetation efficiently, but a number of species were not included in the sample plots. The climate was classified as being ¿Central Brazilian Tropical, hot and humid, with alternating rainy and dry seasons¿, according to NIMER¿S (1979) classification. The average water balance following THORNTHWAITE & MATHER¿S (1955) method showed a deficit of 56 mm, with storage of 300 mm in the soil from April to September. The climate in the area studied was shown to be less severe than of the typical ¿cerrado¿ areas of Central Brazil. The effects of frosts on the vegetation were observed, and these may act as a limiting factor for the occurrence of some species in colder areas. The soil was a distrophic, strongly acid sandy phase Red-Yellow Latosol, with an Ssdeahk classification with regard to limiting factors for cultivation. This indicates a sandy, dry soil with a low cation exchange capacity, toxic saturation of aluminium, excessive acidity and Potassium deficiency... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations Mestrado Biologia Vegetal Mestre em Ciências Biológicas

Orientador : Rosely Rocha Sharif Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O cerrado é um dos mais ricos e extensos ecossistemas brasileiros apresentando uma fisionomia bastante característica. Entretanto, a ocupação da área central do país para expandir a produção o agrícola é responsável pela devastação das áreas de cerrado. Poucos são os estudos sobre essa formação vegetal com relação aos mecanismos utilizados para a sobrevivência das espécies ai existente. A flora nativa dos cerrados está adaptada a solos pobres e, tanto quanto se perceba, não apresenta sinais de deficiência nutricional. As médias de temperatura não variam muito no decorrer do ano, mas a distribuição o das chuvas apresenta uma variação, sendo acentuada nos meses de novembro a março e com um período de seca entre maio e setembro. Esse período de seca corresponde também há dias mais curtos; o período de chuvas corresponde a dias mais longos.Neste trabalho, teve-se por objetivo estudar um pouco o desenvolvimento de uma espécie do cerrado, Vernonia oxylepis,analisando o crescimento vegetativo, floração e desenvolvimento da parte subterrânea em relação a alguns fatores ambientais e hormonais. As plantas desta espécie mostraram-se independentes do fotoperiodo para a floração, entretanto, diferentes fotoperiodos afetaram o crescimento das plantas e certos aspectos da floração. Em 8 horas diárias de luz, as plantas apresentaram menor altura e uma ramificação mais intensa. Por outro lado, em fotoperiodo de 18 horas, as plantas mostraram maior alongamento do eixo principal, continuando a crescer em altura e a produzir botões florais por mais tempo em relação aos outros fotoperiodos de 8 horas e natural. Assim, em fotoperiodo longo, as plantas apresentaram maior número de capítulos.Esse padrão de crescimento das plantas de Vernonia oxylepis em fotoperiodo mais longo parece ser diferente do alongamento do eixo causado por um aumento nos níveis de giberelina.O tratamento das plantas com ácido giberélico levou a um maior alongamento do eixo principal, mas esse alongamento se estabilizou ao mesmo tempo que nas plantas controle e não foi acompanhado por maior produção de capítulos.Outro importante fator ambiental estudado foi a disponibilidade de água. Verificou-se que praticamente n~o ocorreram diferenças no crescimento das plantas quando a irrigação foi feita duas vezes por semana ou diariamente. As plantas se desenvolvem muito bem mesmo que fiquem alguns dias sem receber água. Entretanto, uma redução maior na periodicidade de irrigação, com as plantas recebendo água somente uma vez por semana, mostrou uma diminuição no crescimento das plantas: menor altura e redução no número de folhas, no peso seco da parte aérea e número de capítulos produzidos. Quando se observa o crescimento em relação ao aumento de matéria seca da parte aérea e subterrânea, é interessante notar que plantas crescidas em substratos com deficiência nutricional, principalmente com diminuição da concentração de nitrogênio, apresentam maior relação peso seco da raiz/peso seco da parte aérea, parecendo ser uma resposta fenotipica, mantendo reservas nutricionaispara sobreviver à baixa disponibilidade de nutrientes no solo. A remoção da parte aérea estimulou o brotamento das plantas. Não houve diferença na brotação quando as plantas,foram mantidas em diferentes fotoperiodos. Entretanto,em fotoperiodos de 8 horas, observou-se uma tendência a maior produção de ramos, ap6s a poda, em plantas que receberam maior quantidade de água. Assim, no cerrado, no inverno, a pequena quantidade de água associada a um fotoperiodo menor podem estar inibindo um brotamento mais intenso das plantas. As plantas de Vernonia oxylepis foram encontradas em floração no cerrado, em regiões que haviam sido queimadas,ap6s um período mais seco. Estudou-se o efeito do etileno no crescimento dessa espécie e foi observada que a aplicação de CEPA numa concentração de 10-3 M teve um efeito inibidor no crescimento inicial das plantas, com menor altura, além de menor número de capítulos e porcentagem de plantas floridas. Entretanto, ap6s cerca de 3 meses do inicio do tratamento ou na concentração de 10-4 M, não foram observadas diferenças entre as plantas controle e aquelas tratadas com CEPA. As aplicações de ácido abscisico (ABA) praticamente não alteraram o crescimento das plantas em relação o à altura, numero de folhas, ramificação ou número de capítulos produzidos.Houve apenas um pequeno atraso na antese das flores com aplicação de ABA 10-3 M.Foi feito um acompanhamento do crescimento das plantas em relação ao aumento de matéria seca da parte aérea e subterrânea, durante o primeiro ciclo de desenvolvimento, desde o plantio até a senescéncia da parte aérea e o brotamento de novos ramos. Observou-se que à parte espessada da raiz tem provavelmente uma função de acumular reservas principalmente para a fase de brotamento de novos ramos, após a senescéncia da parte aérea. Acredita-se que a principal reserva acumulada nas raízes desta espécie está sob a forma de polímeros de frutose. Neste trabalho, o acúmulo de frutanos foi observado em plantas crescidas em diferentes fotoperiodos e diferentes níveis de hidratação o do solo. E um aspecto que necessita de uma análise mais elaborada, mas os resultados obtidos indicam que Vernonia oxylepis pode ser um bom material para o estudo dessa categoria de carboidratos de reserva Doutorado Doutor em Ciências

Orientador: Fernanda Ramos Gadelha Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Em resposta a invasão pelo Trypanosoma cruzi (T.cruzi) a célula libera uma série de espécies reativas de oxigênio e ao mesmo tempo ocorre um aumento de concentração de cálcio no citosol indispensável para a penetração do parasita. O T.cruzi apresenta uma capacidade limitada em lidar com o estresse oxidativo, levando esta área a ser de grande interesse para a terapêutica. A triparedoxina peroxidase (TXNPx) é uma enzima antioxidante que participa de uma cascata enzimática para a detoxificação de hidroperóxidos descrita em T.cruzi que oferece novas opções para o desenvolvimento de agentes tripanossomicidas mais específicos. Duas cepas com diferentes resistências ao estresse oxidativo gerado pelo peróxido de hidrogênio foram utilizadas nesse trabalho. A cepa Tulahuen 2 apresenta menor tempo de geração e uma maior resistência ao estresse oxidativo, além de um maior índice de crescimento e concentração de TXNPx em relação a cepa Y. Correlacionando o número de células com o conteúdo protéico total, a cepa Tulahuen 2 apresenta uma relação maior do que a outra cepa estudada. Durante a fase lag, em ambas as cepas, ocorre um aumento da expressão da TXNPx. Nas condições testadas, as duas cepas metabolizaram o H2O2 na mesma velocidade. Baixas concentrações de H2O2, levaram a um estímulo da proliferação celular (cepa Y) dando suporte a idéia que este agente pode agir como segundo mensageiro. Essas células são capazes de se adaptar ao estresse oxidativo quando tratadas inicialmente com uma concentração citotóxica e depois desafiadas com uma dose citostática. Esta adaptação é temporária, induzindo a resistência até l h 30min após o pré- tratamento. A triparedoxina peroxidase está envolvida na adaptação ao estresse oxidativo de células epimastigotas de T. cruzi uma vez que tratando-se as células com baixas e altas concentrações de H2O2 observa-se um aumento da expressão desta proteína Abstract: In response to invasion by T. cruzi, cells generate reactive oxygen species (ROS), occurring at the same time an increase in cytosolic calcium concentration that is essential for invasion. T. cruzi has a limited capacity to deal with oxidative stress, being this area of great interest for therapeutics. Typaredoxin peroxidase (TXNPx) is an antioxidant protein that participates in an enzymatic cascade for hydroperoxide detoxyfication in T. cruzi offering new options for the development of more specific drugs. Two T. cruzi strains with different resistance to the oxidative stress generated by H2O2, were used in this study. Tulahuen 2 strain has a smaller doubling time and a higher growth index, tryparedoxin peroxidase expression and resistance to oxidative stress. The correlation between cell number and total protein content was also higher in this strain. During the lag phase, for both strains, there is a higher expression of TXNPx. In the conditions used, both strains metabolized H2O2 at the same rate. Low concentrations of H2O2 were able to stimulate cell growth in T. cruzi (Y strain) giving support to the idea that it can act as a second messenger. These cells were also able to adapt to oxidative stress when treated with atoxic H2O2 concentrations and then challenged with citostatic concentrations. This adaptation is transient inducing resistance to challenging for a maximum of 1 h 30 min. Tryparedoxin peroxidase is involved in the adaptation of T. cruzi (Y strain) to oxidative stress since treatment with lower and higher H2O2 doses induced an increase in its expression Mestrado Bioquímica Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Hernandes Faustino de Carvalho Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Os avanços tecnológicos dos últimos anos exigem novas posturas nos ambientes de ensino de modo a diminuir as distâncias entre o cotidiano dos estudantes e o dia-a-dia na sala de aula. O presente projeto teve por objetivo o desenvolvimento de uma interface adaptativa (IA), de modo a atender essa necessidade presente, estimulando os alunos ao estudo e facilitando o processo de ensino aprendizagem. O espaço virtual desenvolvido neste caso foi um site . Foram construídas três abas destinadas a três grupos de usuário: Básico (Ensino Fundamental), Médio (Ensino Médio) e Avançado (Ensino Superior). Todas as abas da IA tratam do tema "proliferação celular", no entanto, foram utilizados recursos e linguagem adaptados a cada nível. Para avaliação do recurso, o site foi aplicado para estudantes do ensino fundamental de escolas adventistas (4 classes - 117 alunos), do ensino médio do Colégio COTUCA (4 classes - 131 alunos) e do ensino superior para o curso de Ciências Biológicas da Unicamp (2 classes - 95 alunos). Todos os grupos foram divididos randomicamente em: experimental (recebe a aula com a IA) e controle (aula convencional sobre o mesmo assunto). Vale ressaltar que os estudantes do grupo controle também tiveram aula com a IA, após a avaliação da mesma. Antes da aplicação da IA, os estudantes responderam a um pré-teste para verificar os conhecimentos prévios e analisar a homogeneidade entre as turmas. Após a aplicação da aula com e sem a interface, todos os estudantes responderam a um pós-teste e construíram um mapa conceitual. Além destes instrumentos, as avaliações formais da disciplina também foram utilizadas para verificar a eficácia da IA. Entrevistas foram realizadas com os estudantes e uma carta avaliativa solicitada aos professores. Aplicando ANOVA (one way) aos resultados dos pré-testes, foi possível verificar que não houve diferença significativa entre as turmas do ensino médio (p=0.49), do ensino fundamental (p=0.92) e do ensino superior (p=0.09). Quando comparados os pós-testes, percebeu-se diferença significativa entre os grupos controle e experimental de todos os níveis (p. Three tabs were built for three user groups: Basic (Elementary School), Medium (High School) and Advanced (College). All AI tabs had the same subject, cell proliferation. However, adapted resources and language were used for each model. For evaluation of the resource developed, the site was used with elementary school students from Adventist Schools (4 classes - 117 students), high school students from COTUCA school (4 classes - 131 students) and Higher Education students of the Biological Sciences course from Unicamp (2 classes - 95 students). All groups were randomly divided into experimental (receiving class with AI) and control groups (conventional lecture of the same subject). It is important to stress that students in the control group also had class with the AI, but only after the evaluation. Before the implementation of the AI, students answered a pre-test to verify the previous knowledge and examine whether there were differences between the groups. After applying the lesson, with and without the interface, all students answered a post-test and built a conceptual map. In addition to these instruments, formal evaluations of the course were also used to verify the effectiveness of the AI. Interviews were conducted with students and an evaluation letter was requested to the teachers. Applying ANOVA (one way) to the results of the pre-tests, we found that there was no significant difference between the high school (p = 0.49), the basic education (p = 0.92) and the college groups (p = 0.09). Comparing the post-test results, we noticed a significant difference between the control and experimental groups at all levels (p

Orientadores : Vera Nisaka Solferini, João Semir Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Mestrado

Orientador: Jose Roberto Trigo Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Os imaturos de lepidópteros estão sujeitos a altas taxas de mortalidade no ambiente natural. Uma das formas de defesa mais utilizadas e estudadas é a defesa química, envolvendo, por exemplo, substâncias tóxicas ou impalatáveis. Estas substâncias podem ser adquiridas pelos lepidópteros de suas fontes alimentares ou biosintetisadas de novo. Através de um acompanhamento dos imaturos de Mechanitis po/ymnia no campo observou-se que larvas apresentam as taxas mais altas de sobrevivência quando comparadas a ovos e pupas. A sobrevivência de ovos a adultos de Mechanitis po/ymnia em So/anum tabacifolium (área urbana) foi maior do que em So/anum mauritianum e So/anum concinnum (ambos floresta secundária). Experimentos realizados em laboratório com a formiga predadora generalista Camponotus crassus confirmaram a capacidade de defesa de larvas de Mechanitis po/ymnia contra predadores. Além disto verificou se que o tipo de defesa envolvida seria provavelmente defesa química e que as substâncias de defesa estariam localizadas na superfície das larvas já que a rejeição pelas formigas se dava após breve contato inicial. Uma classe de substâncias possivelmente responsáveis pela defesa seriam os lipídios cuticulares (LCs). Lipídios cuticulares de insetos e plantas terrestres tem como principal função, proteção contra dessecação. Por se localizarem na superfície externa do corpo, podem estar envolvidos em mecanismos de comunicação química tanto inter, quanto intraespecífica. Desta forma, investigou-se o papel de lipídios cuticulares na defesa de larvas de Mechanitis po/ymnia contra a formiga predadora generalista Camponotus crassus. Verificou-se que o padrão químico de LCs de larvas de Mechanitis po/ymnia e de folhas de So/anum tabacifolium é muito semelhante, ao contrário de outros Ithomiinae e suas plantas hospedeiras. Camponotus crassus não predou larvas vivas ou mortas de Mechanitis po/ymnia em bioensaios em laboratório, porém predou larvas vivas de outros Ithomiinae. Formulou-se a hipótese de que as formigas não reconheceram as larvas de Mechanitis po/ymnia como presa devido à sua incapacidade de diferenciar as larvas das folhas de So/anum tabacifolium, causada pela similaridade do padrão químico dos LCs. Quando larvas de Mechanitis po/ymnia foram colocadas em uma situação de baixa similaridade com a folha em que elas se encontravam, elas passaram a ser predadas por Camponotus crassus. Larvas palatáveis de Spodoptera frugiperda foram utilizadas em bioensaios de dupla escolha para comprovar o papel dos LCs nesta defesa química. Dois bioensaios foram realizados: 1. A larva experimental se encontrava em situação de alta similaridade e foi menos visitada pelas formigas; 2. A larva experimental estava em situação de baixa similaridade e foi visitada de forma igual à larva controle. Isto demonstrou que um padrão químico de LCs semelhante ao de uma folha pode ser uma defesa eficiente contra predadores quimicamente orientados como Camponotus crassus. Do ponto de vista da formiga a larva estaria quimicamente camuflada na folha de sua planta hospedeira Abstract: Immature Lepidoptera are subject to high mortality rates in the natural environment. Chemical defences are one of the best studied and known mechanisms of defence employed by butlerflies. In the field, it was observed that larval survivorship is higher than the survivorship of eggs or pupae. The survivorship of Mechanitis po/ymnia from eggs to imagoes on So/anum tabacifolium (urban area) was higher than on So/anum mauritianum or So/anum concinnum (both in a secondary forest). Laboratory experiments assured the defence capability of Mechanitis po/ymnia against generalist predators like Camponotus crassus. It was also observed that the chemistry of defence was located on the surface of the caterpillars because the ants rejected them after a short contact. Because they are located on the external surface of the body, cuticular lipids (CLs) may be involved in chemical communication, both inter and intraspecific. It was verified that the CL profile of Mechanitis po/ymnia larvae and So/anum tabacifolium leaves is almost identical unlike for other Ithomiinae examined. Uve larvae of Mechanitis po/ymnia were not killed by Camponotus crassus which also did not eat dead larvae. On the other hand other Ithomiinae larvae were killed and preyed upon by Camponotus crassus. Two other experiments showed that the similarity between the chemical profiles of CLs of Mechanitis po/ymnia and So/anum tabacifolium was the responsible for the defence against Camponotus crassus. The larvae would be chemically camouflaged on the leaves for an approaching ant that would not be able to distinguish the larvae from the leaf Mestrado Mestre em Ecologia

Orientadores : Dora Maria Grassi-Kassisse, Regina Celia Spadari-Bratfisch Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Mestrado

Orientador: Alexandre Leite Rodrigues de Oliveira Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Estudos recentes mostram resultados promissores no tratamento de lesões ao sistema nervoso (SN) através do implante de células-tronco, atribuindo essa melhora funcional à produção de fatores tróficos pelas células. Neste trabalho, o efeito neuroprotetor e neurorregenerativo de células-tronco mesenquimais (CTM) de ratos Lewis-EGFP foi investigado após o esmagamento das raízes motoras L4, L5 e L6. Cinco ratas fêmeas Lewis foram utilizadas em cada um dos seguintes grupos: G1 - esmagamento de raízes motoras; G2 - esmagamento de raízes motoras e injeção de DMEM (Meio de Eagle modificado pela Dubelco) na interface da substância branca e cinzenta (funículo lateral); G3 - esmagamento de raízes motoras e injeção de CTM (funículo lateral). Após 4 semanas, a sobrevivência neuronal foi estudada por coloração de Nissl, onde se observou, a partir da contagem neuronal, aumento da sobrevivência no grupo tratado com CTM. A técnica de imunoistoquímica foi utilizada para avaliar a expressão de sinaptofisina, sinapsina, VGLUT1 (Transportador vesicular de glutamato-1) e GAD65 (Glutamato descarboxilase 65KDa). A expressão de sinaptofisina e sinapsina na superfície dos motoneurônios lesionados mostrou uma menor redução de inputs em animais tratados com CTM, sugerindo uma possível redução no processo de eliminação sináptica. Para detectar possíveis mudanças no equilíbrio de inputs excitatórios / inibitórios em aposição ao corpo dos neurônios motores, os anticorpos VGLUT1 (marcador de terminais glutamatérgicos) e GAD 65 (marcador de terminais GABAérgicos) foram utilizados. A redução dos terminais glutamatérgicos foi semelhante em todos os grupos. Enquanto a redução de terminais GABAérgicos ocorreu em maior proporção em G1 e G2, em relação ao grupo tratado com CTM. Os dados indicam que CTM podem proteger os neurônios contra a excitotoxicidade, resultando em menor perda de células. Com sobrevida de 12 semanas após a lesão, a regeneração nervosa foi avaliada através da análise morfológica do nervo isquiático (área do nervo, número e morfometria de fibras mielínicas) e da recuperação da função motora (walking track test). O grupo tratado com DMEM apresentou nervo com menor área e menor número de fibras mielínicas do que o tratado com CTM, porém, o grupo tratado com células obteve resultados semelhantes ao grupo que sofreu apenas esmagamento. A morfometria revelou fibras com menor mielinização nos três grupos lesionados, em comparação ao nervo contralateral à lesão, porém, para os lados ipsilaterais não houve diferença entre os tratamentos. A função motora apresentou-se melhor no grupo tratado com CTM, quando comparada com o tratado com DMEM, mas não em relação ao grupo que sofreu apenas esmagamento. O efeito das CTM na função motora foi agudo, mostrando eficiência de 4 a 6 semanas após a lesão. Assim, as CTM mostraram efeito neuroprotetor e contribuíram para a regeneração, porém a forma de administração dessas células, através de injeção diretamente na medula, apesar de resultar num maior número de células enxertadas, contribuindo com a sobrevivência dos neurônios, mostrou-se um problema quando avaliada a regeneração e função motora dos animais, indicando a necessidade de desenvolvimento de outras formas de administração Abstract: Recent studies have shown promising results in the treatment of nervous system injuries through stem cells implantation, attributing this functional improvement to the production of trophic factors by these cells. In this study, the neuroprotective and neurorregenerative effects of mesenchymal stem cells (MSC) from Lewis-EGFP mice was investigated after crushing the motor roots L4, L5 and L6. Five female rats Lewis were used in each of the following groups: G1 - motor roots crushing; G2 - motor roots crushing and DMEM (Dulbeco's Modified Eagle Medium) injection in the white/gray matter interface; G3 - motor roots crushing and MSC injection in the white/gray matter interface. At 4 weeks after injury, neuronal survival was evaluated by Nissl staining, and revealed, by the neuronal count, increased survival in the group treated with MSC. The technique of immunohistochemistry was used to evaluate the expression of synaptophysin, synapsin, VGLUT1 (Vesicular Glutamate Transporter-1) and GAD65 (Glutamate decarboxylase 65). The expression of synaptophysin and synapsin on the surface of lesioned motoneurons, showed a smaller decrease of inputs in animals treated with MSC, suggesting a possible reduction in synaptic elimination process. To detect possible changes in the balance of excitatory / inhibitory inputs reaching the cell body of the motoneurons, antibodies for VGLUT1 (marker of glutamatergic terminals) and GAD 65 (marker of GABAergic terminals) were used. The reduction of glutamatergic terminals was similar in all groups. While the reduction of GABAergic terminals was in greater extent in G1 and G2 with respect to the group treated with MSC. The data indicate that MSC can protect neurons against excitotoxicity, resulting in decreased cell loss. With survival of 12 weeks after the injury, nerve regeneration was assessed by morphological analysis of the sciatic nerve (nerve size, number and morphology of myelinated fibers) and motor function recovery (walking track test). The group treated with DMEM showed nerve with smaller area and fewer myelinated fibers than treated with MSC, however, the group treated with cells was not better than the group that only suffered crushing. Morphometry revealed fibers with less myelination in the three injured groups, compared to the contralateral side, but there was no difference between treatments. Motor function appeared better in MSC-treated group in comparison to the DMEM-treated, but not in relation to the group which only suffered crushing. The effect of MSC in motor function was acute, demonstrating efficiency between 4 to 6 weeks after injury. Thus, the MSC shown to be neuroprotective and contributed to regeneration, but the form of administration of such cells, by direct injection into spinal cord, has to be improved or substituted by another method Mestrado Biologia Celular Mestra em Biologia Celular e Estrutural

Orientador : Paulo Arruda Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Neste trabalho, foram determinadas algumas características da enzima lisina-cetoglutarato redutase (EC1.5.1.8) de endospermas normais e opaco-2 da linhagem homozigota de milho - L 1038. A exemplo do que ocorre em mamíferos, esta enzima deve participar do primeiro passo do catabolismo de lisina e catalisa a reação:Lisina + alfa-cetoglucarato + NADPH -> sacaropina + NADP+Durante o desenvolvimento do endosperma, a atividade de LKR mostrou variações significativas em ambos os genótipos, as quais, parecem ser coincidentes com a sua síntese, sendo que, ela aumentou logo no início do desenvolvimento da semente, encontrou um pico aos 20-25 dias após a polinização e decresceu, em seguida, em direção à maturidade da semente. O padrão de atividade, no endosperma opaco-2, é drasticamente diminuído em relação ao normal, chegando a ser três vezes menor que este nos estágios intermediários do desenvolvimento do endosperma. Ao mesmo tempo, quando extratos de endospermas normais e mutantes opaco-2 foram submetidos à eletroforese em géis de poliacrilamida (sob condições não-denaturantes), e a seguir, a atividade de LKR foi revelada em gel, uma banda correspondente à atividade da enzima, foi possível de ser visualizada somente no material normal. Estes resultados indicam que a enzima LKR está sob controle do gene opaco-2.Cerca de 3.000 endospermas da versão normal, no período de maior atividade de LKR, foram utilizados para a purificação da enzima através de uma seqüência de passos de fracionamento em sulfato de amônio, ultracentrifugação e cromatografias de troca iônica e afinidade. A preparação mais pura obtida da cromatografia de afinidade foi enriquecida 275 vezes e tinha uma atividade específica de "414 nmoles de NADPH.min-1.mg de proteína-1. A enzima deve ser uma monômero de Mr 130.000 a 160.000, conforme determinado por filtração em gel Sephadex G-200, ultracentrifugação em gradientes de sacarose e eletroforese em géis de poliacrilamida. A banda mais intensa de Mr 134.000, proveniente da eletroforese sob condições denaturantes da enzima purificada, foi utilizada para a preparação de anticorpos policlonais, em coelhos New Zealand. Os experimentos de " Western blot, utilizando-se estes anticorpos, foram realizados com os extratos provenientes dos diferentes passos da purificação da enzima, resolvidos por eletroforese em gel de poliacrilamida (sob condições denaturantes). Os resultados demonstraram o reconhecimento, por parte destes anticorpos, de uma única banda de Mr 130.000 nos extratos purificados. Entretanto, nos extratos da centrifugação a 3.000 X g ou a 22.000 X g e naqueles fracionados com sulfato de amônio, além desta banda, uma segunda banda de menor peso molecular (Mr = 80.000), foi também reconhecida por estes anticorpos. A origem desta banda, até o momento nos é desconhecida, desde que todos os resultados obtidos, neste trabalho, indicam a existência de uma única forma da enzima na fração solúvel de endospermas normais e mutantes opaco-2. A enzima de milho tem propriedades bastante similares às enzimas de fígado e placenta humanos, tais como: requerimento pelo cofator NADPH, pH ótimo, termoestabilidade e inibição pelo produto ¿ sacaropina. A cinética da enzima mostrou ser bastante complexa para ambos substratos. Os valores de Km encontrados para lisina foram de 8,7 e 4,1mM, respectivamente para as versões normal e opaco-2 Abstract: Lysine-ketoglutarate reductase (LKR, EC 1.5.1.8) was investigated in endosperms of homozygous normal and opaque-2 versions of L1038 maize inbred line. The enzyme catalyses the following reaction: Lysine + a-ketoglutarate + NADPH -> saccharopine + NADP+The enzyme activity in both genotypes increased with the onset of seed development, reached a peak around 20 days after pollination and then decreased towards seed maturity. The enzyme activity of opaque-2 endosperm was 2-3 times lower than the normal endosperm. Extracts from normal and opaque-2 endosperms were resolved by polyacrilamide gel electrophoresis and developed for LKR activity. A band corresponding to the enzyme activity was detected only in the normal extract. These results suggest that LKR is under control of opaque-2 gene. Three thousand endosperms of the normal version of L1038 taken at the period of highest enzyme activity were used for the purification of LKR trough a sequence of steps including ammonium sulfate fractionation, ultracentrifugation, and ion-exchange and affinity chromatography. The purest preparation obtained after affinity chromatography was 275 fold enriched and had a specific activity of 414 nmol.min-1.mg protein-1. The molecular weight of the enzyme as determined by gel filtration, gradient centrifugation and gel eletropheresis was in the range of 130.000 to 160.000. Polyclonal antibodies against the purified enzyme were raised in rabbits. Western blot analysis using anti-LKR antibodies was carried out with extracts of different purification steps resolved by sodium dodecil sulfate polyacrilamide gel eletrophoresis. A single immunoprecipitated band of 130.000 was observed in the purified extract. In crude and ammonium sulphate fractionated extracts an additional band of 80.000 cross-reacted with the anti-LKR antibodies. The origin of this band is unknown, since all other data demonstrated a unique form of LKR both in normal and opaque-2 endosperms.The maize enzyme was very similar to that found in human tissues in several aspects, including specificity for NADPH, pH optimum, thermal stability, and product inhibition. Kinetic studies with lysine and alfa-ketoglutarate revealed complex Km for both substrates. The Km for lysine was 8,7 and 4,1 mM, respectively for normal and opaque-2 materials Doutorado Doutor em Ciências

Orientadores: Gilberto D'Assunção Fernandes Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Alguns trabalhos relataram a participação de estruturas límbicas na modulação da resposta imune. Com relação aos núcleos septais, a lesão ampla desta área alterou a resposta humoral de ratos imunizados com hemácias de carneiro, enquanto a lesão septal medial inibiu a resposta mitogênica in vitro de linfócitos T. Neste trabalho, investigou-se a influência da área septal do cérebro sobre as freqüências de linfócitos T CD4+ e T CD8+ no baço de ratos durante o desenvolvimento tumora!. Para isso, ratos com a área septal do cérebro lesada através de cirurgia estereotáxica (LW) e ratos controles (cirurgia simulada, SW) foram comparados após receberem uma inoculação subcutânea (sc) do tumor de Walker 256 Ar (variante celular com elevado índice de regressão, obtida a partir das células tumorais de Walker 256 A). A possibilidade da atividade adrenocortical mediar os efeitos septais foi verificada pela dosagem de corticosterona sérica. Também foi investigada a influência da lesão septal sobre os efeitos sistêmicos tais como, anorexia, ganho de peso corpóreo, retenção renal de sódio e água induzidos pelo tumor (modelo de inoculação multifocal com células tumorais de Walker 256 A ), visto a possibilidade de variações destes parâmetros fisiológicos servirem como uma indicação indireta da atividade imunológica. Com relação aos efeitos sistêmicos tumorais foi observado que a lesão septal causou uma redução temporária na retenção de sódio e água induzida pelo tumor, possivelmente como conseqüência da inibição da liberação do hormônio antidiurético. Duas semanas após a inoculação do tumor de Walker 256 Ar foram identificadas regressões tumorais em 46,2 % do grupo SW e 57,1 % do grupo LW. Tanto no grupo SW como no LWo percentual de linfócitos T CD4+ nos ratos cujos tumores não regrediram (SW = 19,5 ::t 1,4 %; L W = 23,8 ::t 1,6 %) foi significativamente menor que naqueles com regressão tumoral (SW = 29,3 ::t 2,4 %; LW = 31,4::t 1,6 %). Como conseqüência a relação CD4+/CDS+ também foi significativamente menor nos ratos cujos tumores não regrediram (SW = 0,91 ::t 0,07; LW = 1,20 ::t 0,07) que naqueles com regressão tumoral (SW = 1,45 ::t 0,1; L W = 1,59 ::t 0,1). Concluiu-se que as variações nas freqüências de linfócitos T, bem como na relação CD4+/CDS+ estiveram associadas ao desenvolvimento tumoral e não foram afetadas pela lesão ampla da área septal. Através de um experimento com ratos adrenalectomizados foi observado que o crescimento contínuo ou a regressão dos tumores, bem como a resposta imune celular associada a estes eventos, não foram influenciados pela atividade adrenocortical Abstract: Some studies have shown the influence of limbie-hypothalamie areas on the immune response modulation. Concerning the septal nueleus, the whole lesion of this limbie area impaired the humoral immune response of rats immunized with sheep red blood eells, while lesions of the medial septal nueleus produced a long lasting inhibition of T Iymphoeyt proliferation induced by mitogens. The proposal of the present study was to investigate the influenee of septal area lesion on frequeneies of splenie T CD4+ and T CDS+ Iymphoeytes, during tumor development. Therefor, septal-Iesioned rats (LW), obtained through stereotaxie surgery, were compared with sham-operated rats (SW), afier one subeutaneous (se) inoculation of Walker 256 Ar tumor cells (a cell variant obtained from Walker 256 A tumor, distinguished by presenting a high regression ineidence). The adrenocortical aetivity in the mediation of septal lesion effects was evaluated by assessing serum corticosterone. The influenee of septal lesion on systemie effeets induced by the tumor, like body weight gain and, sodium and water renal retention was also investigated (by using the multifocal se inoeulation model of Walker 256 A cells). It was suggested that ehanges in these parameters would help as an indireet indication of the immunological function alterations. Conceming the systemie effects, sodium and fluid retention induced by the Walker 256 A tumor was temporarily reduced in animais with septal area lesions. This effect was possibly a result of an inhibition of antidiuretie hormone release. By using the Walker 256 Ar tumor cells, it was observed tumor regressions in 46.2 % of the SW group and 57.1 % of the LW group two weeks afier se inoculation. In both groups SW and LW, the frequency of splenic T CD4+ Iymphocytes was significantly reduced in rats which tumors did not regress (SW = 19.5:t 1.4 %; LW = 23.8:t 1.6 %) compared with rats with tumor regression (SW = 29.3:t 2.4 %; LW = 31.4 :t 1.6 %). As a consequence, the CD4+/CD8+ ratio was also significantly reduced in rats without tumor regression (SW = 0.91 :I:: 0.07; LW = 1.20 :t 0.07) in relation to those with tumor regression (SW = 1.45 :I:: 0.1; LW = 1,59 :t 0.1 %). Therefore, septal area lesion did not affect the frequencies of T Iymphocytes. Nevertheless, the alterations observed in the frequencies of T Iymphocytes, as well as in CD4+/CD8+ ratio were associated with tumor development (continuous growth or regression). It was also observed that tumor continuous growth or tumor regression, as well as the immune response associated with these events were not affected by adrenocortical activity Doutorado Fisiologia Doutor em Ciências Biológicas

Orientadores: Antonio Carlos Boschero, Helena Coutinho Franco de Oliveira Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Neste trabalho, estudamos a homeostasia da glicose e a secreção de insulina em camundongos transgênicos que superexpressam a apolipoproteína CIII humana ( apo cm tg). Esses animais possuem altos níveis de ácidos graxos livres (AGL), de colesterol e de triglicérides plasmáticos em relação aos controles. Peso corporal, concentração de glicose e insulina plasmáticas, taxa de desaparecimento da glicose, após sobrecarga de insulina (Kitt), e área sob a curva glicêmica, após o Teste de Tolerância à Glicose (GTT), não diferiram entre os grupos transgênicos e controles. Contudo, animais transgênicos, que tiveram aumento adicional de AGL plasmático induzido pelo tratamento com heparina, apresentaram menor Kitt durante o Teste de Tolerância à Insulina (ITT) e maior área sob a curva glicêmica durante o GTT, quando comparados aos controles. A secreção de insulina por ilhotas isoladas de animais transgênicos e controles, expostas a concentrações basais ou estimulatórias de glicose, foi semelhante. Contudo, a secreção de insulina por ilhotas isoladas de animais transgênicos tratados com heparina, incubadas durante lSmin em presença de baixas ou altas concentrações de glicose, foi menor que em ilhotas de controles heparinizados. Após 60min de incubação, a redução da secreção da insulina das ilhotas dos transgênicos heparinizados só foi observada em presença de altas concentrações de glicose. Concluindo, a hipertrigliceridemia, per se, mesmo com moderado aumento da concentração de AGL plasmático, não modifica a homeostasia da glicose nos camundongos transgênicos para apolipoproteína CIn humana. No entanto, incremento adicional da concentração de AGL plasmático por administração de heparina, que, sabidamente, aumenta a atividade da lipoproteína lipase, alterou a homeostasia da glicose nos transgênicos. Esse efeito parece ser decorrente de uma redução na secreção de insulina, associada a um aumento de resistência periférica ao hormônio Abstract: Glucose homeostasis and insulin secretion in transgenic mice overexpressing the human apolipoprotein CIII gene (apo cm tg) were studied. These mice have elevated plasma levels of triglycerides, ITee fatty acids (FF A) and cholesterol compared with control mice. The body weights, plasma glucose, and insulin levels, glucose disappearance rates and areas under the intraperitoneal Glucose Tolerance Test (ipGTT) curve for adult (4-8 month old) and aged (20-24 month old) apo cm tg mice were not different ITom those of control animals. However, an additional elevation of plasma FF A by treatment with heparin for 2-4 h impaired the ipGTT responses in transgenic mice compared to saline-treated mice (areas under the ipGTT curves; 18.7 :i: 1.0 mmol/L.120 min and 13.6 :i: 1.2 mmol/L.120 min for heparin- and saline-treated transgenic mice, respectively; n = 10 each; p < 0.01). The glucose disappearance rate in heparin-treated transgenic mice (2.88 :i: 0.49 %/min; n=ll) was slightly lower than in heparin-treated controls (4.12 :i: 0.46 %/min; n =10 ; P < 0.05). Glucose (22.2 mmol/L) stimulated insulin secretion in isolated islets to the same extent in saline-treated control and apo CIII tg mice. In islets ftom heparin-treated apo CIII tg mice, the insulin secretion at 2.8 and 22.2 mmol glucoseiL was lower than in heparin treated control mice. In conclusion, hypertriglyceridemia per se or a mild elevation in FF A did not affect insulin secretion or insulin resistance in adult or aged apo cm tg mice. Nonetheless, an additional elevation of FF A induced by heparin in hypertriglyceridemic mice impaired the ipGTT by reducing insulin secretion, and was probably associated with a marginal increase in insulin resistance Mestrado Fisiologia Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Louis Bernard Klaczko Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Elementos genéticos egoístas são partículas herdáveis de etiologia e mecanismos de ação variados, mas com a caracterítica em comum de modificar a segregação mendeliana dos alelos em favor próprio, aumentando a própria freqüência. Elementos citoplásmaticos egoístas são um caso especial de elementos genéticos egoístas, como são herdados apenas pelo citoplasma materno, eles sofrem seleção para causar desvios na proporção sexual, em favor de um excesso de fêmeas. A proporção sexual nas progênies de organismos que se reproduzem sexualmente é, em geral, 1.___.__)LVKHU________SURS{V_D_SULPHLUD_H[SOLFDoão baseada em seleção natural para esta proporção. O princípio de Fisher prediz que o sexo mais raro tem maior valor adaptativo, pois sua contribuição média por indivíduo é maior. Assim, a seleção favorecerá alelos que aumentem a freqüência do sexo raro nas progênies. Quando a proporção chegar a 1.___.__indivíduos dos dois sexos terão o mesmo valor adaptativo. Parasitas reprodutivos, endosimbiontes herdados maternalmete, representam a maior parte dos elementos citoplasmáticos egoístas, e uma das causas mais comuns de desvios à proporção de 1.___.__ Agentes androcidas, endossimbiontes que matam os embriões machos, são um destes parasitas reprodutivos. Como conseqüência, a proporção sexual da prole das fêmeas infectadas afasta-se de 1.___.__apresentando excesso ou totalidade de fêmeas. Agentes androcidas foram encontrados em mais de 40 espécies de 6 ordens de insetos. Várions táxons de bactérias já foram associados com o fenótipo, e a filogenia dos parasitas e hospedeiros não é congruente, indicando transmissão horizontal freqüente. Neste trabalho, estudamos o agente androcida de Drosophila melanogaster, descrito recentemente. Sistemática molecular mostrou que trata-se de uma bactéria do gêneroSpiroplasma, muito próxima ao agente androcida encontrado em D. nebulosa. As seqüências comparadas (3000 pares de base, representando seqüências parciais de 3 genes) são idênticas, portanto, as duas bactérias têm um ancestral comum muito recente. De fato, possivelmente as duas espécies de Drosophila só entraram em contato há 4 ou 5 séculos, com a expansão mundial de D. melanogaster, e a transmissão do Spiroplasma de D. nebulosa para D. melanogaster deve ter ocorrido depois disso. Em uma coleta em Recife, foi encontrado que 2,3% das fêmeas estavam infectadas com Spiroplasma; outro parasita reprodutivo, a bactéria Wolbachia (que causa incompatibilidade citoplasmática) infectava 96% das fêmeas. Além disso, as duas bactérias co-infectavam os mesmos indivíduos, uma observação até agora incomum para parasitas reprodutivos com fenótipos diferentes. Como parasitas reprodutivos tem transmissão exclusivamente materna, seu valor adaptativo é altamente correlacionado com o das fêmeas hospedeiras. Desta forma, espera-se que parasitas reprodutivos não tenham efeitos deletérios no valor adaptativo das fêmeas hospedeiras, ou até que sejam benéficos. Por outro lado, a eficiência de transmissão ou a intensidade do fenótipo de manipulação reprodutiva podem estar positivamente correlacionados com a densidade de bactérias no hospedeiro, de forma que parasitas mais eficientes causem efeitos deletérios no valor adaptativo da fêmea. Para verificar se existem efeitos de Spiroplasma e Wolbachia no valor adaptativo de fêmeas, medimos a viabilidade larval e a fecundidade de fêmeas adultas, comparando com a de fêmeas não-infectadas. Nenhuma das duas características parece ser afetada por Spiroplasma ou Wolbachia, nem por infecção com as duas bactérias simultaneamente. Finalmente, foi verificado que temperaturas baixas (em torno de 16,5°C) interrompem a transmissão do agente androcida para a progênie das moscas infectadas Abstract: Selfish genetic elements are inheritable particles with diverse ethiology and mechanisms, but sharing the fact that they modify the Mendelian segregation for their own benefit, thus increasing their own frequency. Selfish cytoplasmic elements are a special instance of selfish genetic elements, as they are inherited only by maternal cytoplasm, they suffer strong selection to alter the sexual proportion, in direction to an excess of females. The usual sexual proportion in sexually reproducing organisms is 1.___.__)LVKHU________ was the first to propose an explanation based on the natural selection for this proportion. Fisher¿s principle predicts that, if one of the sexes is rarer, it will have higher fitness, because its individual average contribution will be larger. Thereafter, selection will favour alleles that increase the frequencies of the rarer sex in broods. When the proportion reaches 1.___.__both sexes will have the same fitness. Reproductive parasites, maternally inherited endosymbionts, are the majority of selfish cytoplasmic elements, and one of the most common causes of departures from the 1.___._sexual proportion. Male killers, endosymbionts that kill male embryos, are one of these reproductive parasites. Consequently, the sexual proportion of infected females deviates from 1.___.__towards an excess or totality of females. Male killers have been found in more than 40 species of 6 insect orders. Several bacterial taxa have been associated with male-killing phenotype, and the phylogeny of parasites ad hosts is not congruent, indicating frequent horizontal transmission. In this work, we studied the recently described male killer agent found in Drosophila melanogaster. Molecular systematics showed that this agent is a Spiroplasma bacterium, closely related to the D. nebulosa male-killer. The compared sequences (3000 base pairs, partial sequence from 3 genes) are identical, thus both bacteria share a very recent common ancestral. Indeed, only since D. melanogaster worldwide expansion, 4 or 5 centuries ago, both Drosophila species overlap in their distribution, and the Spiroplasma transmission from D. nebulosa to D. melanogaster probably occurred after this. In one collection in Recife, Spiroplasma has been found infecting 2.3% of all females, another reproductive parasite, the bacterium Wolbachia (which causes cytoplasmic incompatibility) infected 96% of all females. Wolbachia was also found co-infecting flies alongside with Spiroplasma, a rather uncommon observation for reproductive parasites with different phenotypes. As reproductive parasites have exclusively maternal transmission, their fitness is highly correlated with its female host fitness. Consequently, it is expected that reproductive parasites do not pose deleterious fitness effects to their female hosts, or even be beneficial. However, transmission efficiency or the intensity of the reproductive manipulation phenotype could be positively correlated to the bacterial load on the host, in a way that more efficient parasites will have a deleterious fitness effect on females. In order to verify if Spiroplasma and Wolbachia have any kind of fitness effects on female hosts, we assessed larval viability and fecundity of adult females, in relation to uninfected females. Both characteristics showed signs of being affected by Spiroplasma or Wolbachia, nor by double-infection with both bacteria. Finally, low temperature (approximately 16.5°C) interrupts transmission of the male killing agent to the progeny of infected females Doutorado Genética Animal e Evolução Doutor em Genética e Biologia Molecular

Orientador : Graziela Maciel Barroso Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Expõe-se neste trabalho um estudo taxonômico das espécies brasileiras do gênero Aspilia Th. (Compositae-Heliantheae). Os taxa, com suas respectivas distribuições geográficas, são descritos, discutidos e ilustrados.Elaborou-se relação de material examinado e uma chave dicotômica com a finalidade de identificar as espécies brasileiras, muitas das quais apresentam grande afinidade entre si. Com base no estudo de cerca de 1.200 exsicatas, provenientes de 22 herbários nacionais e 16 herbários do exterior, 61 espécies são reconhecidas, das quais 19 são novas. O gênero é mantido na tribo Heliantheae s.l., subtribo Ecliptinae. O gênero Aspilia, além de outras características de menor expressão, pode ser distinguido de outros da tribo por apresentar flores do raio liguladas e neutras, com duas a três nervuras conspícuas e aquênio do disco, levemente comprimido, com cicatriz na base. O gênero com cerca de 155 nomes é encontrado na África, Madagascar e no continenete americano desde o México até à Argentina. - No Brasil, a maioria das espécies se encontra em ambiente rupestre, cerrado, mata de galeria e restinga, principalmente nos Estados de Minas Gerais, Goiás, Bahia, Mato Grosso e Mato Grosso do Sul Abstract: The present paper present a taxonomic study of the Brazilian species of the genus Aspilia Thou. (Compositae-Heliantheae). AlI taxa involved, and their geografical distribution, are described, discussed, and illustrated. The material examined is listed, and a dichotomus key for the identification of the Brazilian species of Aspilia, is presented. About 1200 exsiccatae, from 22 Brazilian and 16 foreign herbaria, were studied, 61 species are recognized, 19 of which are new to science. The genus is maintained in the tribe Heliantheae. The genus Aspilia can be distinguished from other genera of Heliantheae in having ligulate and neuter radial flowers with two or three conspicuous veins, and central achenium slightly compressed, with a scar at its base, from the carpophore. The genus, with about 155 recognise species, occurs in Afr ica, Madagascar, and Tropical. America from Mexico to Argentina. In Brazil, most species are found in "ambientes rupestres", in "cerrados", in gallery forests, and in "restinga", mainly in the states of Minas Gerais, Goiás, Bahia, Mato Grosso, and Mato Grosso do Sul Doutorado Biologia Vegetal Doutor em Ciências Biológicas