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1 pag., Para la propagación comercial de una variedad de granado (Punica granatum) en el laboratorio de Invisa Biotecnología Vegetal partimos de un protocolo de micropropagación creado ad hoc por el Aula Dei, que nos marca las pautas para la iniciación, la multiplicación y el enraizamiento de este material vegetal. Una vez iniciados los trabajos y, cuando contamos con material vegetal suficiente, comienza una fase estratégica para mejorar el proceso, mediante la observación y el análisis y la puesta en marcha de distintos ensayos con el objetivo de adaptar de manera eficiente el protocolo a la cadena de producción, teniendo en cuenta el ahorro de costes, la operatividad y el tiempo de cultivo en el laboratorio, sin disminuir la calidad de la planta.

La angiografía por tomografía de coherencia óptica (OCT-A) es una técnica diagnóstica no invasiva, rápida y fácil de realizar. Su función es proporcionar imágenes en tres dimensiones de la circulación microvascular a nivel retiniano y también coroideo. Desde noviembre de 2018 hasta mayo de 2019 se han reclutado 67 pacientes sanos para este estudio transversal, de diferentes intervalos de edad : un grupo de 20-40 años, otro de 41-65 y el último de edad superior a 65 años. El objetivo del estudio era demostrar si cambios vasculares asociados a la edad, patologías propias de países desarrollados o la ingesta de ciertos medicamentos se veían reflejados a nivel retiniano. Se ha demostrado que sobre todo la dislipemia (DLP) y la hipertensión arterial (HTA) afectan a la circulación retiniana disminuyendo la densidad de flujo.

1 Pag., En este trabajo se aplica el sistema Plantform® a la micropropagación del patrón híbrido de pistacho UCB1 (Pistacia atlantica x P. integerrima) para su propagación masiva., Este trabajo ha sido financiado en parte por el proyecto INIA-FEDER RTA2014-00056-C02-02 y por el Gobierno de Aragón (Grupo A12_17R).

Hipótesis: El glaucoma primario de ángulo abierto es una patología que desde etapas tempranasaltera la función visual, produce un adelgazamiento de las capas internas de la retina enalgunas zonas del área macular, y de la capa de fibras nerviosas de la retina y lacoroides en el área peripapilar.La tesis está formada por 4 artículos, ya publicados:1. Evaluation of contrast sensitivity, chromatic vision, and reading ability in patientswith primary open angle glaucoma. Bambo MP, Ferrandez B, Güerri N, FuertesI, Cameo B, Polo V, Larrosa JM, Garcia-Martin E. Journal of Ophthalmology2016: 7074016. PMID: 27872754.2. Evaluation of the macular ganglion cell-inner plexiform layer and circumpapillaryretinal nerve fiber layer in early to severe stages of glaucoma: correlation withcentral visual function and visual field indexes. Bambo MP, Guerri N, FerrandezB, Cameo B, Fuertes I, Polo V, Garcia-Martin E. Ophthalmic Research 2017;57(4): 216-223. PMID: 28068662.3. Peripapillary choroidal thickness analysis using swept-source optical coherencetomography in glaucoma patients: A broader approach. Pablo LE, Cameo B,Bambo MP, Polo V, Larrosa JM, Fuertes MI, Güerri N, Ferrandez B, GarciaMartin E. Ophthalmic Research 2018; 59(1): 7-13. PMID 289424544. The use of zonal analysis of peripapillary choroidal thickness in primary openangle glaucoma. Pablo LE; Bambo MP; Cameo B; Ferrández B; Güerri N; PoloV; Larrosa JM; Moreno-Montañés J, Garcia-Martin E. Japanese Journal ofOphthalmology 2018; 62(1): 41-47. PMID:29022112Como conclusiones de la Tesis:-La sensibilidad al contraste es significativamente peor en pacientes con glaucomamoderado en comparación con los pacientes glaucomatosos en etapa temprana,especialmente en las frecuencias espaciales bajas, y mantiene una moderadacorrelación con los índices de campo visual. La visión cromática y la velocidad lectorano muestran diferencias significativas entre los pacientes con glaucoma primario deángulo abierto moderado e incipiente.-Las comparaciones del espesor de la capa de fibras nerviosas de la retina circumpapilary de las capas internas maculares (capa de células ganglionares + plexiforme interna)en sujetos con glaucoma en diferentes estadios de gravedad según la clasificación deHodapp, revelaron diferencias estadísticamente significativas entre pacientes condefectos leves y severos, excepto en el espesor macular central. Las correlaciones entrelos parámetros de OCT y las pruebas de función visual (agudeza visual e índicesperimétricos) fueron en general débiles.-El tejido coroideo peripapilar muestra en la población sana un patrón topográficoconcéntrico, siendo más gruesa conforme nos alejamos del disco óptico, y en la regiónsuperior, después temporal, nasal y por último en la región inferior (que corresponderíaa la zona más delgada de coroides peripapilar). Este patrón de coroides peripapilar essimilar en los pacientes con glaucoma primario de ángulo abierto, que ademáspresentan un adelgazamiento coroideo peripapilar en comparación con los sujetossanos, especialmente en las áreas más alejadas del disco óptico.-La tomografía de coherencia óptica de barrido swept-source permite medir de formaautomatizada el espesor coroideo peripapilar y detecta un adelgazamiento de esta capaen los pacientes con glaucoma primario de ángulo abierto en relación a los sujetos sanosde su misma edad y sexo, especialmente en las zonas central superior, nasal superiory nasal inferior. Los sectores superiores de la coroides peripapilar son más gruesos quelos inferiores, tanto en los sujetos sanos como en los pacientes con glaucoma.

La Enfermedad de Alzheimer (EA) es una degeneración primaria, caracterizada por la afectación de las funciones cognitivas corticales, con un alto impacto a nivel funcional, un establecimiento lento y progresivo y por la aparición de depósitos de beta amiloide y los ovillos neurofibrilares. La retina es una proyección embrionaria del diencéfalo, y se consideran parte del sistema nervioso central. La degeneración producida en la retina y en el nervio óptico en la EA puede originarse por vía retrógrada desde la corteza visual o por vía directa desde la propia retina causada por los depósitos. Estos cambios anatómicos pueden ser detectados con técnicas de diagnóstico oftalmológicas que posibiliten el seguimiento de los cambios según progresa la neurodegeneración. Objetivos: Detectar los cambios que se producen en la retina, así como los cambios funcionales que se originan secundariamente, mediante pruebas psicofísicas oftalmológicas no invasivas y tomografía de coherencia óptica, en dos poblaciones de pacientes con EA, diferenciadas por el grado de evolución de la patología; comparando los resultados con una población control...

La reciente aplicación de las técnicas de análisis digital de imagen en oftalmología ha supuesto la aparición y desarrollo de parámetros que permiten una medición cuantitativa, objetiva y reproducible de la capa de fibras nerviosas de la retina (CFNR) y del nervio óptico. Entre estas técnicas de análisis por imagen destaca la Tomografía de coherencia óptica (OCT).Este nuevo instrumento diagnóstico ha permitido a algunos autores observar alteraciones en la CFNR de pacientes con diabetes mellitus (DM) incluso sin la existencia de retinopatía diabética (RD).Este hallazgo arroja un nuevo enfoque sobre la afectación ocular de la DM, que no se centra en las alteraciones vasculares de la retina sino en las alteraciones neurorretinianas. El objetivo de esta tesis es confirmar mediante técnicas de OCT que existe una alteración subclínica en la CFNR de los pacientes diabéticos, aunque no presenten RD.La metodología empleada en este trabajo analiza parámetros endocrinológicos, de función visual (agudeza visual, sensibilidad al contraste, campo visual, visión cromática) y estructurales de la retina (medidos mediante dos sistemas de OCT, Triton y Spectralis) en una muestra de 60 ojos de pacientes con DM tipo 2 sin RD y los compara con ojos de sujetos sanos de su misma edad y sexo.Como resultado principal, se objetivo un adelgazamiento de la CFNR tanto del área peripapilar como macular en el grupo de pacientes con DM2 respecto al grupo control. La calidad visual de los pacientes diabéticos se encontraba dentro de la normalidad, aunque algunos en algunos parámetros los resultados fueron ligeramente peores respecto al grupo control.

17 Pags.- 11 Figs.- 2 Cuadrs., [ES] El cultivo del pistacho se enfrenta a problemas que limitan grandemente su expansión: la propagación de patrones heterogéneos mediante plantas de semillas que pueden escasear, o de variedades mediante injertos con un éxito irregular. El resultado es la falta de planta disponible y su encarecimiento. Las técnicas de micropropagación que desarrollamos en nuestro laboratorio de la Estación Experimental de Aula Dei contribuyen a paliar estos problemas con la producción de patrones clonales selectos, sanos y uniformes, que potencialmente pueden proporcionar una cantidad ilimitada de plantas por la multiplicación masiva. Además, con el cultivo in vitro de variedades podemos injertar directamente los ápices sobre patrones juveniles, permitiendo una producción más rápida de los plantones. La discusión de las ventajas y los inconvenientes justifica claramente la utilización de la micropropagación., [EN] Pistachio culture faces problems that greatly limit its expansion: the propagation of both heterogeneous rootstocks through seedlings that may be scarce, or of varieties through grafts with irregular success. The result is short plant availability and price raise. The micropropagation techniques that we develop in our laboratory at the Aula Dei Experimental Station contribute to alleviate these problems with the production of select, healthy and uniform clonal rootstocks, which can potentially provide an unlimited number of plants by massive multiplication. In addition, in vitro culture of varieties allow direct grafting of apices on juvenile rootstocks, and a faster production of pistachio plant trees. The discussion of the pros and cons clearly justifies the use of micropropagation., Este trabajo ha sido financiado parcialmente por el proyecto del Instituto Nacional de Investigación y Tecnología Agraria y Alimentaria‐FEDER RTA2014‐00056‐C02 y por el Gobierno de Aragón Grupo Consolidado A43.

Este trabajo se basa en el estudio de tomografía de coherencia óptica (OCT) del segmento anterior, para el análisis de uno de los parámetros utilizados para el diagnóstico de ojo seco acuodeficiente, la evaluación del volumen del menisco lagrimal y su modificación tras la instilación de un sustituto lagrimal en pacientes con ojos normales.

Se ha demostrado que la coroides está involucrada en la patogénesis de muchas enfermedades. Hasta el momento las mediciones de la coroides se hacían de forma manual. Swept Source OCT es el primer dispositivo que penetra lo suficiente en el ojo como para hacer medidas automatizadas de la coroides y permite una caracterización precisa cualitativa y cuantitativa de las capas coroideas individuales en ojos normales. El estudio demuestra que el espesor coroideo es muy variable y que existe un espesor máximo en la franja de edad comprendida entre 35-49 años, adelgazándose significativamente a partir de esa edad.

Objetivos: Realizar una valoración del deterioro y atrofia del epitelio pigmentario de la retina (EPR) mediante autofluorescencia (AF) y tomografía de coherencia óptica (OCT) en los pacientes diagnosticados de coroiditis serosa central (CSC) que han sido tratados con terapia fotodinámica (TFD). Evaluar si existe o no progresión de la atrofia del EPR y valorar la función visual en pacientes con coroiditis serosa central tratados con terapia fotodinámica utilizando la medición de la agudeza visual (AV) antes del tratamiento, al año del mismo y al final del estudio. Cuantificar el cambio en el espesor central foveal (CTF). Material y métodos: Se incluyeron 53 ojos de 45 pacientes que presentaban CSC crónica y a los que se les había aplicado TFD. En todos los pacientes se realizó medida de la AV y la realización de OCT y AF inicial, al año y al final. Resultados: El empleo de la TFD a dosis completa como tratamiento para la CSC crónica ha demostrado una alta eficacia en cuanto al aumento de la AV (en torno al 79,2%) y a la reabsorción de LSR completa (en torno al 81,1 % de los casos). En cuanto a los resultados de CFT medidos mediante OCT, han mostrado una considerable reducción entre la visita inicial y las visitas anual y final. Conclusiones: El empleo de terapia fotodinámica no ha demostrado causar atrofia en el epitelio pigmentario de la retina. Esto parece indicar que los cambios en el epitelio pigmentario de la retina se asocian con el curso prolongado de la enfermedad y la falta de curación. La función visual de los pacientes con coroiditis serosa central tratados con terapia fotodinámica muestra una mejoría significativa de la agudeza visual a lo largo del seguimiento y una disminución del espesor central foveal.

Trabajo presentado en la XII Reunión Nacional de la Sociedad Española de Cultivo in vitro de Tejidos Vegetales, celebrada en Madrid (España), del 13 al 15 de septiembre de 2017, La demanda de plantones de pistacho, superior a la oferta del mercado, causa un freno a la expansión de este cultivo en España. La propagación del pistacho se realiza tradicionalmente mediante el injerto de plantas de diversas especies de Pistacia, utilizadas como patrones y provenientes de semilla. La aplicación de las técnicas de cultivo in vitro a estas especies de Pistacia permitiría la propagación clonal y masiva de estos patrones, así como la obtención de plantas durante todo el año incrementando de esta forma la oferta de planta de pistacho en el mercado. En la Estación Experimental de Aula Dei se están desarrollando con éxito técnicas de micropropagación de distintos patrones de pistachero: UCB1 (Pistacia atlantica x P. integerrima) (2 clones), P. atlantica (3 clones) y P.integerrima (1 clon) de distintos orígenes. El establecimiento de material se ha realizado tanto a partir de árboles creciendo en campo como de semillas y en esta fase tanto el control de las contaminaciones como principalmente de los exudados, mediante el uso de antioxidantes, ha resultado definitiva para la obtención de material creciendo in vitro Una vez se establecieron brotes de las tres especies estudiadas, se procedió a la multiplicación de los explantos. Cuatro medios fueron evaluados tanto con respecto a la tasa de multiplicación como a la presencia de brotes necrosados, uno de los factores críticos en la micropropagación de pistacho. Con los medios estudiados, se han logrado tasas de multiplicación variables entre 1,5 y 3 mostrando no solo diferencias entre los medios de cultivo sino también entre clones. La presencia de brotes necrosados fue muy variable, siendo un factor a tener en cuenta, sin embargo, se han logrado porcentajes mínimos de incidencia de necrosis (5%) dependiendo de los medios de cultivo y el clon. El enraizamiento in vitro ha alcanzado niveles cercanos al 100% una vez desarrollado el medio adecuado y posteriormente se ha procedido a la aclimatación y endurecimiento de la planta tras su trasplante a un sustrato adecuado bajo condiciones ambientales controladas Mediante el desarrollo de protocolos adaptados para los distintos clones se ha conseguido una propagación masiva de distintos patrones de Pistacia.

Trabajo presentado en la XII Reunión Nacional de la Sociedad Española de Cultivo in vitro de Tejidos Vegetales, celebrada en Madrid (España), del 13 al 15 de septiembre de 2017, El desarrollo de protocolos de cultivo in vitro para especies del género Pistacia ha permitido implantar otras estrategias de propagación y conservación de germoplasma de estas especies. Entre estas estrategias la conservación a medio plazo en condiciones de crecimiento ralentizado permite disminuir los intervalos entre subcultivos de manera que facilite tanto la conservación como la disponibilidad de material en el laboratorio. - Para la conservación y recuperación de distintos clones de pistacho se ha utilizado el protocolo de conservación a baja temperatura y en condiciones de crecimiento ralentizado puesto a punto para una amplia variedad de especies frutales (Arbeloa et al., 2017) - 10 clones de pistacho de 4 especies diferentes (P. vera, P. atlantica, P. terebinthus y P. atlantica x davidiana) se testaron para su conservación. Los cultivos se mantienen en nevera a 3-4º de temperatura en oscuridad en dos medios de cultivo diferentes, basados en la diminución de sales minerales o contenido en azucares, durante 7 meses. En este periodo se controló el estado de las plantas cada 4 semanas. La recuperación se realiza en el medio de cultivo de multiplicación, adecuado para cada clon y se evalúa el porcentaje de clones recuperados, así como el tiempo necesario para su recuperación posterior. - La adecuación de este protocolo para el pistacho nos permitirá conservar el material durante largos periodos de tiempo sin necesidad de subcultivo

Resumen del trabajo presentado a la XVI International Clay Conference (ICC), celebrada en Granada (España) del 17 al 21 de julio de 2017., Intravitreal injection is considered an effective approach for treatment of posterior segment ocular diseases, as it delivers the therapeutic agent directly into the eye, but it presents some potential risks associated to the need for repeated injections. Alternative drug delivery systems are being developed to overcome this kind of limitations by reducing the frequency of injections, for example using biodegradable polymeric implants for slow release of dexamethasone (an anti-inflammatory steroid), but this methodology requires a surgical intervention to implant the material. Clays have been recently envisaged as carriers for drug delivery, but they had never been used for ophthalmic treatment. Laponite (LAP) is a white synthetic smectite clay, able to form transparent colloidal dispersions in water. We have demonstrated that dexamethasone (DEX), in spite of being a neutral molecule, is retained on laponite through weak interactions, mainly hydrogen bonds, as shown by solid state NMR. In vitro studies have shown that dexamethasone is released below its solubility in saline solution or in a model of vitreous humor, under equilibrium conditions. The in vivo ocular biocompatibility of laponite has been assessed by eye examination (slit lamp and indirect ophthalmoscopy) after intravitreal administration to rabbits. The clay did not elicit any inflammatory response even if the clay could be observed floating into the vitreous body as a transparent gel from day 1 through week 14 postadministration. The small amount of eyes with cataract were probably due to a traumatic effect associated with the injection technique because the histological examination did not show any change in eye's lens structure. Thus, laponite could be considered as a vehicle for potential clinical use in ocular drug administration due to its proved ocular biocompatibility and its transparency in the gel state. Moreover, Mg content in vitreous humor showed a decrease along the 14 weeks. About 33% of total initial LAP-dose administered could be detected in vitreous humor for up to 14 weeks postadministration, indicating some kind of degradation and/or elimination of the clay through an unknown mechanism. Intravitreal injections of 100 μL dexamethasone/laponite dispersion (10 mg solid/mL, 1:10 DEX/LAP w/w) were performed in albino rabbits (New Zealand) and DEX concentrations in vitreous humor were monitored over 24 weeks. Vitreous dexamethasone levels remained relatively stable from 7th day postadministration, and showed an elimination rate significantly lower than that found after intravitreal injection of dexamethasone in solution (1 mg/mL) (CL= 0.49 vs 315.29 g/day). The administration of DEX loading to laponite can lengthen the half-life of the drug (T½-el= 132.75 vs 0.13 days) and enhance its clinical uses.

El tema principal de las cuatro publicaciones internacionales que componen esta tesis doctoral, se basa en el estudio de los parámetros estructurales (espesor macular, capa de fibra nerviosa de la retina [CFNR] y capa de células ganglionares [CCG]) y de los parámetros funcionales (agudeza visual [AV], sensibilidad al contraste [SC] y percepción del color) de la retina y del nervio óptico, en pacientes con enfermedades neurodegenerativas (Alzheimer [EA], Parkinson [EP] y Esclerosis Múltiple [EM]).Estas tres enfermedades neurodegenerativas se caracterizan por una muerte neuronal (secundaria a depósitos amiloides en la EA, por alteración de los circuitos dopaminérgicos en la EP o inmunomediada en la EM), cuyos síntomas clínicos y discapacidad funcional son consecuencia de este daño o pérdida neuronal. La retina es una parte del sistema nervioso central, fácilmente accesible para el examen clínico. La CFNR comprende principalmente axones no mielinizados de las células ganglionares de la retina, por lo que las mediciones del espesor de las diferentes capas retinianas, pueden proporcionan una evaluación relativamente directa de los axones y/o del daño neuronal.Amplias evidencias científicas ya han demostrado un adelgazamiento de la retina (macular y de la CFNR), en la EA, EP y EM, examinado con la tecnología de tomografía de coherencia óptica (OCT). Este adelgazamiento de la retina se ha correlacionado con la progresión y el empeoramiento de la calidad de vida. Recientemente, los nuevos softwares de los OCT nos permiten medir específicamente la capa de células ganglionares (CCG), donde se localizan las células parvocelulares, magnocelulares y koniocelulares. Estas células especializadas son las responsables de identificar el color y el contraste espacial en diferentes frecuencias: por lo tanto, la pérdida general de estas células de la retina es probable que sea un importante mecanismo contributivo para la discapacidad visual.La visión constituye uno de los sentidos con mayor impacto en la calidad de vida de las personas. La evaluación de la función visual mediante los test de agudeza visual (test ETDRS 100%, 2,5%, 1,25%), sensibilidad al contraste (test CSV 1000-E y test de Pelli-Robson) y percepción de la visión cromática (tests Farnsworth-Munsell D15 y L’Anthony D15) nos pueden ayudar a conocer mejor la discapacidad visual de pacientes afectos de EA, EP y EM. Ya se tiene constancia de que dichas enfermedades causan alteraciones en la función visual; como puede ser la dificultad para el reconocimiento de caras, la lectura y/o conducción, relacionadas éstas con la sensibilidad al contraste; así como alteraciones adquiridas de la visión cromática por patología macular o del nervio óptico, como ocurre en las neuritis ópticas de la EM. Estas alteraciones fueron al principio atribuidas a causas corticales, pero recientemente también se han sugerido alteraciones en la vía visual anterior por disminución del espesor retiniano debido a una muerte neuronal secundaria a depósito amiloide en la EA o de α-sinucleína en la EP. Esta muerte de células ganglionares se postula como la responsable de las alteraciones en la sensibilidad al contraste y color desde las etapas más precoces, incluso antes de la detección de la alteración de la CFNR del nervio óptico y sobre todo de la clásica palidez papilar.Los artículos publicados en esta tesis doctoral demuestran que en los pacientes con dichas enfermedades neurodegenerativas (EA, EP y EM) los parámetros de la función visual se encuentran alterados y se correlacionan, incluso en las primeras etapas, con parámetros estructurales disminuidos. Estos resultados nos permiten concluir que el análisis de la función visual, podría considerarse como un posible biomarcador para la EA, la EP y la EM.

Objetivos: Valorar la pérdida del espesor macular y de la capa de fibras nerviosas de la retina (CFNR) en pacientes con factores mayores de riesgo cardiovascular. Evaluar los efectos del tabaquismo en la mácula y en el espesor en la CFNR. Material y métodos: Se incluyeron 303 ojos de 152 hombres sanos seleccionados del Aragon Workers’ Health Study (AWHS). Se descartó patología ocular previa al estudio mediante una exploración oftalmológica completa, que incluyó una valoración de la agudeza visual (AV), de la presión intraocular (PIO), del polo anterior (PA) con lámpara de hendidura y del fondo de ojo (FO). Además, se analizó el espesor de la mácula y de la CFNR en todos los pacientes mediante tomografía de coherencia óptica (OCT). Resultados: No se encontraron diferencias estadísticamente significativas en el espesor de la mácula ni de la CFNR entre los sujetos con factores de riesgo cardiovascular y los sujetos sin factores de riesgo. Tampoco se encontraron diferencias significativas entre los sujetos sin evidencia de ateromatosis en las ecografías arteriales y los sujetos con al menos una placa de ateroma en alguna ecografía arterial. Sin embargo, sí que se obtuvieron diferencias estadísticamente significativas (t de Student, p ≤ 0,05) al analizar los efectos unilaterales en el ojo en función de la lateralidad de las placas de ateroma. En la exploración del ojo izquierdo se encontró una reducción significativa en el espesor macular central (266,49±19,18 vs 276,89±23,66 μm; p=0,016), en el cuadrante superior de la CFNR (116,21±15,23 vs 124,89±15,23 μm; p=0,007) y en el sector horario 11 (73,18±12,13 vs 79,07± 10,72 μm; p=0,020) en aquellos sujetos con placas de ateroma en la carótida izquierda, comparados con los sujetos sin placas. Estos hallazgos fueron similares repitiendo el análisis para cualquier placa de ateroma de localización izquierda y para los territorios del lado derecho y el ojo derecho. También se observó un adelgazamiento significativo en los fumadores en el espesor macular central (263,82±21,09 μm vs 269,78±23,16 μm; p=0,034), en el cuadrante nasal de la CFNR (69,77±12,16 vs 74,31±13,79 μm; p=0,006) y en los sectores 3 (84,98±17,77 vs 91,17±21,88 μm; p=0,016), y 5 en punto de la CFNR (66,38±13,62 vs 71,28±15,48 μm; p=0,009). Conclusiones: La presencia de factores de riesgo cardiovascular no altera el espesor de la mácula ni de la CFNR. El hallazgo de ateromatosis subclínica se correlaciona con una disminución del espesor macular y del cuadrante superior de la CFNR en el ojo homolateral. El hábito tabáquico disminuye el espesor macular central y del cuadrante nasal de la CFNR. Estos hallazgos apoyan todavía más el uso del análisis por OCT de la CFNR para predecir otras enfermedades que afectan a cuadrantes diferentes de la CFNR.

Trabajo presentado en la XII Reunión Nacional de la Sociedad Española de Cultivo in vitro de Tejidos Vegetales, celebrada en Madrid (España), del 13 al 15 de septiembre de 2017

El mantenimiento de una correcta homeostasis iónica es crucial para la adaptación de las plantas a un ambiente salino. Las proteínas de la denominada ruta SOS de plantas (SOS1/SOS2/SOS3) desarrollan un papel esencial en este proceso. Inicialmente se propuso un modelo sencillo que sugiere que el sensor CBL4(SOS3) responde a la señal de Ca2+ producida por el estrés salino interaccionando con la proteín quinasa CIPK24(SOS2) liberándola de su estado basal de autoinhibición para permitir que fosforile y active al antiportador Na+/H+ SOS1 de la membrana plasmática (Halfter et al., 2000; Guo et al., 2001; Guo et al., 2004; Qiu et al., 2002; Quintero et al., 2002). No obstante, hay evidencias que indican que el funcionamiento de esta ruta debe ser más complejo. De hecho, en esta Tesis se ha determinado la existencia de una interacción adicional no conocida entre las proteínas SOS1 y SOS3, identificándose además el sitio de unión entre ambas. La región de SOS1 implicada en la interacción con SOS3, está comprendida entre los aminoácidos 460 y 482 de SOS1, en el comienzo de la región citosólica del extremo C-terminal. En condiciones de estrés salino, la interacción SOS1/SOS3 es necesaria para mantener los niveles del antiportador SOS1 en la membrana plasmática. Debido a la importancia de la proteína SOS3 en la ruta SOS junto con el hallazgo de la interacción directa SOS1/SOS3, se ha profundizado en el conocimiento de las características funcionales y estructurales de SOS3. La proteína SOS3 posee una secuencia consenso para la miristoilación de su extremo N-terminal (MGCSVSKKKKK) (Liu y Zhu, 1998) y un residuo de cisteína adyacente que podría ser un candidato para la palmitoilación. La acilación (miristoilación y/o palmitoilación) es una modificación lipídica que por lo general facilita la asociación de las proteínas con las membranas celulares y favorece que ejerzan su función en compartimentos celulares específicos. Junto con la acilación, las proteínas CBL son modificadas por fosforilación. Se ha demostrado, que existe un residuo de serina localizado muy cerca del extremo C-terminal que es fosforilado por las proteín quinasas CIPK, con las que interactúan (Lin et al., 2009; Du et al., 2011; Hashimoto et al., 2012). Además, SOS3 posee una secuencia de polilisinas que puede favorecer la asociación de esta proteína con la membrana plasmática. En esta Tesis, se ha analizado exhaustivamente el efecto que tienen las acilaciones, el dominio polibásico y las fosforilaciones sobre la función y localización de SOS3, y en consecuencia, cómo repercuten en la activación de la ruta SOS. La fosforilación de la serina 205 de SOS3 por SOS2 no tiene ningún efecto medible sobre la regulación y activación del antiportador SOS1 en los ensayos realizados. La miristoilación de SOS3 en la glicina 2 es necesaria para el anclaje a la membrana plasmática del complejo SOS2/SOS3, donde fosforila y activa al transportador SOS1, lo que explica la importancia de la miristoilación en su función. El dominio polibásico del N-terminal de SOS3 es esencial para la interacción directa con SOS1 y para mantener al transportador en la membrana plasmática en condiciones de estrés salino. Por su parte, la palmitoilación de la cisteína 3 de SOS3 contribuye a la activación de la ruta SOS pero no es esencial. Sin embargo, es un proceso básico para su importación al núcleo. Además, se han identificado en la secuencia de SOS3 dos señales de exportación nuclear (NES), aunque hasta la fecha no se ha obtenido un resultado concluyente de la funcionalidad de estos dominios.

La cirugía de estrabismo actúa sobre uno o varios músculos extra-oculares buscando el alineamiento de los ejes visuales e intentando resolver la diplopía. Tras la intervención, se recomienda realizar una serie de movimientos determinados con el fin de incrementar la fuerza de los músculos y afianzar la posición de orto-tropia. El trabajo tiene objetivo definir unos ejercicios específicos para cada grupo muscular según la intervención realizada, realizar un seguimiento de la evolución de la rehabilitación y analizar si el plan de terapia ofrece mejores resultados visuales que los consejos que se emplean generalmente. Para ello se lleva a cabo un plan de entrenamiento en cada paciente seleccionado en un periodo de dos meses, y se compara y analiza la recuperación con un grupo sin plan de entrenamiento.